As espécies da família Brassicaceae são amplamente utilizadas na medicina popular para diversos fins terapêuticos. Pesquisas têm demonstrado que o rabanete (Raphanus sativus L.) contém muitas classes de fitoquímicos biologicamente ativos com propriedades anti-inflamatória, antimicrobiana, antioxidante e antimutagênica. Neste contexto, este estudo teve por objetivos: fornecer parâmetros de qualidade para a droga vegetal; realizar as análises químicas e avaliar as atividades antimicrobiana, leishmanicida e citotóxica do extrato seco e das frações das folhas de Raphanus sativus var. oleiferus Metzg. Inicialmente, realizou-se a triagem fitoquímica preliminar, por meio de testes qualitativos e Cromatografia em Camada Delgada no extrato seco, que permitiram a detecção de compostos como: flavonoides, taninos e terpenos. Posteriormente, o extrato seco e as frações foram analisados em espectrômetro de massas, o que possibilitou a identificação de alguns constituintes químicos, baseando-se na massa molecular e nos mecanismos de fragmentação das moléculas. As análises químicas quantitativas demonstraram que os teores de fenóis nas frações foram superiores à concentração obtida no extrato seco, sendo que os fenóis ficaram mais concentrados na fração butanólica (121,27 mg EAG/g). Os teores de flavonoides nas frações, exceto na fração aquosa, também foram superiores ao obtido no extrato seco, sendo que os flavonoides ficaram mais concentrados na fração acetato de etila (98,02 mg EQ/g). Nas avaliações da atividade antioxidante in vitro, observou-se que a atividade antirradicalar e o poder redutor das frações demonstraram resultados mais significativos em relação ao extrato seco, sendo que a fração acetato de etila apresentou os melhores resultados em ambos os experimentos, com porcentagem de sequestro de radicais DPPH de 83,45% e com porcentagem de redução de íons férrico de 11,34%. A análise da atividade antimicrobiana revelou que o extrato seco teve maior média de halos de inibição frente ao Bacillus subtilis (18,67 mm), sendo considerada uma média estatísticamente superior as produzidas pelas frações (p<0,05). Entretanto, os menores valores da concentração inibitória mínima (CIM) foram obtidos para Micrococcus luteus, sendo que a fração acetato de etila demonstrou menor concentração inibitória mínima (0,1 mg/mL) para esse micro-organismo, sendo considerada a fração mais ativa (80%). A bactéria Micrococcus luteus foi inibida por 50% das frações testadas com concentração inibitória mínima inferior ou igual a 1 mg/mL. O extrato seco e as frações não demonstraram atividade contra as bactérias Gram-negativas, as micobactérias e os fungos, e também não foram ativos contra os parasitos de Leishmania amazonensis. Os estudos demonstraram uma moderada correlação entre os mais baixos valores da CIM e as maiores quantidades de fenóis e de flavonoides, sugerindo que a atividade antimicrobiana não está relacionada somente com esses compostos, porém houve uma forte correlação entre os melhores valores da atividade antioxidante in vitro (pelo método do radical DPPH e pelo método do poder redutor) e as maiores quantidades de fenóis e de flavonoides no extrato e frações avaliados, sugerindo que os compostos fenólicos, especialmente os flavonoides, sejam os principais responsáveis pela atividade antioxidante in vitro da espécie vegetal em estudo. / The species of the Brassicaceae family are widely used in folk medicine for various therapeutic purposes. Research has shown that the radish (Raphanus sativus L.) contains many classes of biologically active phytochemicals with anti-inflammatory, antimicrobial, antioxidant and antimutagenic properties. In this context, this study aimed: to provide the quality parameters for plant drug; perform chemical analyzes and evaluate antimicrobial, antileishmanial and cytotoxic dry extract and fractions from the leaves of Raphanus sativus var. oleiferus Metzg. Initially, there was the preliminary phytochemical screening using qualitative tests and Thin Layer Chromatography in dry extract, which allowed the detection of compounds such as flavonoids, tannins and terpenes. Subsequently, the dry extract and fractions were analyzed in a mass spectrometer, which allowed the identification of some chemical constituents, based on the molecular mass and fragmentation mechanisms of molecules. Quantitative chemical analysis showed that the levels of phenolics in the fractions obtained were higher than the concentration in dry extract, and phenols were more concentrated in the butanol fraction (121,27 mg GAE/g). The content of flavonoids in the fractions, except the aqueous fraction, were also higher than those reported in dry extract, and flavonoids were more concentrated in the ethyl acetate fraction (98,02 mg EQ/g). The evaluation of the antioxidant activity in vitro, it was observed that the antiradical activity and reducing power of the fractions showed most significant results on the dry extract, and the ethyl acetate fraction showed the best results in both experiments, with percentage of sequestration DPPH radical of 83,45% and a percentage reduction of ferric ions 11,34%. The analysis of antimicrobial activity revealed that the dry extract had higher mean inhibition zones against Bacillus subtilis (18,67 mm) and is considered a statistically higher mean those produced by the fractions (p<0,05). The lowest values of minimum inhibitory concentration (MIC) were obtained for Micrococcus luteus, and the ethyl acetate fraction showed lowest minimum inhibitory concentration (0,1 mg/mL) for this micro-organism, is considered the most active fraction (80%). The bacterium Micrococcus luteus was inhibited by 50% of the tested fractions with lower or equal minimum 1 mg/mL inhibitory concentration. The dry extract and fractions do not show activity against Gram-negative bacteria, mycobacteria and fungi, and also were not active against the parasite Leishmania amazonensis. The studies showed a moderate correlation between the lowest MIC values and the highest amounts of phenolics and flavonoids, suggesting that the antimicrobial activity is not related only to these compounds, however there was a strong correlation between the best values antioxidant activity in vitro (by the method DPPH radical and by the method of reducing power) and higher amounts of phenolics and flavonoids in the extract and fractions evaluated, suggesting that phenolic compounds, especially flavonoids, are mainly responsible for the antioxidant activity in vitro plant species under study.

A esquistossomose é uma doença parasitária crônica causada por parasitos do gênero Schistosoma e apresenta um significativo impacto social e econômico. Atualmente, o praziquantel (PZQ) é o medicamento utilizado para o tratamento da doença, indicado pela Organização Mundial da Saúde. No entanto, a dependência de um único fármaco é preocupante, pois com reinfecções constantes e repetição de tratamento pode ocorrer a seleção de cepas resistentes. Sendo assim, a busca por novas substâncias com atividade esquistossomicida é essencial. O gênero Senna é alvo de muitos estudos devido ao reconhecimento de sua grande diversidade biológica e propriedades farmacológicas. No presente trabalho foi avaliada a atividade esquistossomicida in vitro do extrato etanólico (EEt), frações do extrato (FAE e FDm), e de alcaloides majoritários obtidos das flores de Senna spectabilis. Dos alcaloides piperidínicos também foi avaliada a atividade cercaricida e seu efeito em interação com PZQ. Os vermes adultos de S. mansoni foram expostos a diferentes concentrações do EEt, FAE e FDm, e mistura de substância cassina/ espectalina para avaliação de viabilidade dos parasitos e cálculo de concentração inibitória de 50%. Foi avaliada a atividade excretora e lesões de tegumento dos vermes adultos de S. mansoni expostos à mistura de alcaloides cassina/espectalina por meio de marcação com sondas fluorescentes. A viabilidade celular foi avaliada utilizando células mononucleares do sangue periférico humano (PBMC) por ensaio de redução de MTT. O extrato etanólico e a fração acetato de etila de S. spectabilis, em concentrações elevadas provocam diminuição da ovoposição, paralisação de sistema excretor e lesões de tegumento. A fração diclorometano exerce atividade significativa quando comparada ao controle, visto que tal atividade é resultado da maior concentração de alcaloides nesta fração. A mistura (cassina/ espectalina) causou paralisia total dos vermes adultos de S. mansoni além de inibir a atividade excretora e provocar lesões de tegumento consideráveis no parasito na concentração de 50,0 µg/mL. Em relação à atividade cercaricida, os alcaloides supracitados provocaram paralisação e perda de cauda a partir da concentração de 50,0 µg/mL, e exibiram resultados relevantes em sinergismo com PZQ. A mistura de alcaloides também exibiu baixo valor de DL50 34,7 µg/mL; e apresentou potencial citotóxico moderado CC50 132,1 µg/mL. Estes resultados são promissores quanto à atividade esquistossomicida, portanto requerem estudos mais aprofundados. / Schistosomiasis is a chronic parasitic disease caused by parasites of the genus Schistosoma and presents a significant social and economic impact. Currently, praziquantel (PZQ) is the drug used for the treatment of the disease, indicated by the World Health Organization. However, the dependence on a single drug is concerning, since with constant reinfections and retreatment the emergence of resistant strains can occur. Therefore, the search for new compounds with schistosomicidal activity is essential. The genus Senna is the subject of many studies due to the recognition of its great biological diversity and pharmacological properties. In the present study, in vitro schistosomicidal activity was evaluated of the ethanolic extract, fractions from the extract and majoritarian alkaloids obtained from Senna spectabilis flowers. From the last two compounds, the cercaricidal activity and its effect in interaction with PZQ were also evaluated. The adult worms of S. mansoni were exposed to different concentrations of ethanolic extract (EEt), ethyl acetate (FAE) and dichloromethane (FDm) fractions, and mixtures of compounds cassina/espectalina for the assessment of parasites viability and calculation of the inhibitory concentration of 50%. The excretory activity and tegument lesions of adult worms of S. mansoni exposed to the mixture of alkaloids cassina/espectalina were evaluated through staining with fluorescent probes. Cell viability was assessed using human peripheral blood mononuclear cells (PBMC) by MTT reduction assay. The (EEt) and (FAE) of S. spectabilis, in high concentrations, cause decrease in oviposition, excretory system shutdown and tegument lesions. FDm fraction has significant activity when compared to the control, as this activity is result of higher concentration of alkaloids in this fraction. The mixture (cassina/espectalina) caused complete paralysis of adult worms of S. mansoni, in addition to inhibit the excretory activity and lead to considerable tegument lesions in the concentration of 50.0µg/mL. Regarding cercaricidal activity, the above-mentioned alkaloids caused paralysis and tail loss starting at a concentration of 50.0 µg/mL, and relevant results were obtained in the synergism with PZQ. The alkaloids mixture also showed low DL50 value 34.7µg/mL; and presented potential moderate cytotoxic CC50 132.1µg/mL. These results are promising regarding the schistosomicidal activity, therefore require further study. / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais - FAPEMIG

Os parabenos são conservantes largamente utilizados na indústria cosmética, em produtos farmacêuticos e como aditivos alimentares. Têm uma longa história de utilização, uma vez que são economicamente muito rentáveis e pensa-se que são relativamente atóxicos para o homem. No entanto, recentes estudos apontam que os parabenos podem ter atividade estrogênica. O batom é um cosmético amplamente utilizado pelas mulheres e os componentes dele podem ser absorvidos tanto pela mucosa oral, quanto pelo trato digestório. A Cosmetotoxicologia é uma nova especialidade, dentro da Toxicologia, que surgiu graças às demandas do setor produtivo e do regulatório, e visa contribuir para a obtenção e/ou liberação para a população de produtos seguros e normatizados. Nesse contexto, é crescente a demanda para o desenvolvimento de métodos analíticos capazes de quantificar os parabenos nos cosméticos com confiabilidade, para fins de fiscalização e controle de qualidade. Além disso, como não são conhecidos os dados cinéticos dessas substâncias, faz-se necessário também desenvolver métodos para quantificar esses analitos em matrizes biológicas. Desse modo esse trabalho propõe, pela primeira vez, estudar a correlação entre o uso do batom e a concentração de parabenos no soro de mulheres que fazem uso desse cosmético labial. As metodologias de análise de parabenos tanto em batom quanto em sangue foram desenvolvidas e validadas seguindo protocolos de validação e os resultados foram satisfatórios para todos os parâmetros avaliados, tais como seletividade, detectabilidade, linearidade, precisão e exatidão. Foram analisadas amostras de 18 voluntárias em 3 fases, nas quais, em uma delas, as mulheres usaram batom contendo uma concentração conhecida de parabenos. Após tratamento estatístico dos dados, com aplicação de testes não-paramétricos, foi possível concluir que há absorção de parabenos por meio do uso de batom, uma vez que foi demonstrada diferença estatisticamente significativa (p < 0,05, no teste de Friedman) entre as concentrações de parabenos no soro de mulheres que utilizaram batom, contendo essas substâncias, em relação ao não uso do cosmético labial, e foi demonstrada forte correlação (coeficiente de Spearman com r= 0,7205) entre a quantidade usada desse batom e a concentração de parabenos no soro. / Parabens preservatives are widely used in the cosmetic, pharmaceuticals and food industry as additives. They have a long history of use since they are economically very advantageous and it is thought that they are relatively nontoxic to humans. However, recent studies indicate that parabens may have estrogenic activity. Lipstick is a cosmetic widely used by women and the components of it can be absorbed by both the oral mucosa, as the digestive tract. The Cosmetotoxicology is a new specialty within the Toxicology, which came about thanks to the demands of the productive and the regulatory sector, and aims to obtain and release of safe and standardized products to the public. In this context, there is a growing demand for the development of analytical methods to quantify parabens in cosmetics with reliably for inspection and quality control. Furthermore, since the kinetic data of these substances are not known, is also necessary to develop methods to quantify these analytes in biological matrices. Thus this paper proposes, for the first time a correlation between the use of lipstick and the amount of parabens in women who make use of this cosmetic. Methodologies of parabens analysis both in lipstick and in blood were developed and validated following validation protocols and the results were satisfactory for all parameters such as selectivity, detectability, linearity, precision and accuracy. Samples of 18 volunteers were analyzed in three stages, which in one of these stages, they made use of lipstick with parabens in a known concentration. After statistical processing of data, using a non-parametric tests, it was concluded that there is absorption of parabens through the use of lipstick, as was demonstrated statistically significant difference (p <0.05, the Friedman test) between the concentrations of parabens in the serum of women who used lipstick containing these substances, in relation to the non-use of cosmetic lip and was demonstrated strong correlation (Spearman coefficient r = 0.7205) between the used amount of lipstick and the concentration of parabens in serum. / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq

Os praguicidas são uma importante ferramenta na agricultura devido ao seu potencial em prevenir e controlar o crescimento de organismos prejudiciais à lavoura, resultando em um maior rendimento e melhoria da qualidade das plantações. Os fungicidas triazólicos representam uma das classes de praguicida mais empregada na agricultura de frutas, vegetais e grãos, devido ao seu excelente poder protetor, erradicante e curativo contra um amplo espectro de doenças agrícolas. Entretanto, a habilidade desses compostos de alterar a biossíntese de hormônios esteroidais pode resultar em complicações endócrinas para mamíferos, além de alterações nos níveis de colesterol e triglicerídeos e ainda em hepatotoxicidade, fazendo-se necessário o desenvolvimento de técnicas analíticas de preparo de amostras apropriadas para a extração e pré-concentração desses praguicidas nos recursos hídricos e em alimentos. Dentre as técnicas de análise de amostras ambientais, podemos destacar a extração em fase sólida em disco, que permite o emprego de alto volume de amostra e alto poder de pré-concentração dos analitos. Ainda sobre o preparo de amostras, destaca-se o surgimento dos nanotubos de carbono (CNT), um material recentemente empregado como fase extratora com alta capacidade sortiva, elevada área superficial e elevado volume interno, estabilidade e resistência mecânica, química e térmica. Desse modo, este trabalho propõe, pela primeira, vez o emprego de membrana de extração impregnada com CNT para a finalidade de extração de toxicantes orgânicos em amostras ambientais. A metodologia desenvolvida foi validada, seguindo protocolos internacionais de validação e foram obtidos limites de quantificação inferiores aos preconizados por legislações específicas – LIQ entre 0,1 e 0,5 ng.L-¹, em uma faixa analítica entre 50 e 100 a 10.000 ng.L-¹, com R² superior a 0,99. / The praguicides are an important tool in agriculture due its potential to prevent and control the growth of harmful organisms to crops, resulting in higher yields and improved quality of crops. The triazol fungicides represent one of pesticide classes mostly employed in agriculture of fruits, vegetables and grains, due to their excellent protective, eradicating and curative power against a broad spectrum of agricultural diseases. However, their ability to change steroid hormone biosynthesis may result in endocrine complications for mammals, as well as changes in cholesterol and triglyceride levels and hepatotoxicity, making necessary the development of analytical techniques for the extraction and pre-concentration of these pesticides on water resources and food. Among the analysis of environmental samples techniques highlight the disk solid phase extraction which allows the use of high sample volume and high pre-concentration power. Still on sample preparation carbon nanotubes (CNT) has been often used as solid extraction phase due to its high sorption capacity, high surface area, high internal volume and mechanical, chemical and thermal strength. Thus, this project proposed for the first time the use of extraction membrane impregnated with CNT for the extraction of organic toxicants in environmental samples. The developed methodology was validated following international validation protocols and quantification limits lower than the recommended by specific legislation were obatined – the limits of quantification were between 0,1 and 0,5 ng.L-¹ – and the analytical range were between 50 and 100 to 10.000 ng.L-¹, with linear coefficient correlation higher than 0,99. / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq

A busca de novos princípios ativos de microrganismos é uma das áreas em que mais se investe nos países desenvolvidos. Entre estes microrganismos, os fungos têm grande destaque por sua produção de diversos metabólitos de interesse farmacológico. Endófitos são todos os microrganismos, cultiváveis ou não, que habitam o interior dos tecidos vegetais, sem causar danos ao hospedeiro e sem desenvolver estruturas externas, excluindo, dessa forma, bactérias noduladoras e micorrizas. Considerando a importância da cultura do café no estado de Minas Gerais, pesquisas com fungos endófitos de café, permitem a ampliação do conhecimento da diversidade desses fungos. Neste estudo, um total de 22 fungos endófitos isolados de café (Coffea arabica L.) foi cultivado in vitro. O screening foi conduzido usando o método de difusão em agar contra bactérias Gram-positivas, Gram-negativas e leveduras. O isolado mais efetivo contra todos os microrganismos testados foi a linhagem Alternaria alternata e posteriormente, seu extrato bruto foi analisado. A concentração de fenólicos totais do extrato bruto do endófito foi de 3,44 μgEAG/mg de extrato. Para os testes de atividade antimicrobiana, a concentração inibitória mínima (CIM) e concentração bactericida e fungicida mínima (CBFM) conta Staphylococcus aureus, Escherichia coli e Candida albicans foram determinadas. Os valores de CIM variaram entre 50-100 μg/mL para S. aureus e 400-800 μg/mL para E. coli. O extrato não apresentou atividade nas concentrações testadas para C. albicans. Além destes testes, foi avaliada a atividade antioxidante pela capacidade sequestrante de radicais DPPH e pela oxidação do sistema β-caroteno/ácido linoleico, as quais não apresentaram resultados significativos. A atividade antitumoral foi avaliada pelo teste do MTT. À diluição de 400 μg/mL, o extrato apresentou atividade de aproximadamente 50% sobre células HeLa in vitro. Esses resultados demonstram que fungos endófitos podem ser uma promissora fonte de compostos antimicrobianos necessitando de estudos posteriores. / The search for new active components of microorganisms is one of the areas of greatest investment in developed countries. Among these microorganisms, fungi are distinguished by their ability to produce diverse metabolites for pharmacological purposes. Endophytes are all microorganisms, cultivated or not, that live inside plant tissue, without causing harm to the host and without developing external structures, excluding nodule bacteria and mycorrhiza. Considering the importance of coffee production in the state of Minas Gerais, studies of endophytic fungi in coffee allow for greater understanding of the diversity of these fungi. In this study, a total of 22 endophytic fungi isolated from coffee (Coffea arabica L.) were cultivated in vitro. The screening was conducted using the agar diffusion method against Gram-positive and Gram-negative bacteria and yeast. The most effective isolated fungus among all of the tested microorganisms was the lineage Alternaria alternata, and subsequently, its extract was assayed. The total phenolic content was 3.44 μgGAE/mg of the crude extract. For the antimicrobial activity assays, the minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal and fungicidal concentration (MBFC) against Staphylococcus aureus, Escherichia coli and Candida albicans were determined. The ranges of MIC values were 50-100 μg/mL for S. aureus and 800-1000 μg/mL for E. coli. The crude extract did not show activity in the tested concentrations for C. albicans. Through these tests, the antioxidant activity of the fungus was assayed through its ability to scavenge DPPH radicals and through β-carotene/linoleic acid system oxidation, both of which were not significant. Antitumour activity was studied by the MTT assay. At a dilution of 400 μg/mL, the extract displayed a cytotoxic activity of approximately 50% towards HeLa cells in vitro. These results indicate that endophytic fungi could be a promising source of antimicrobial compounds and are worthy of further study.

A criptococose é infecção fúngica oportunista causada pelo Cryptococcus neoformans com alta incidência em indivíduos imunodebilitados, principalmente entre pacientes com Aids, sendo o número de casos registrados da doença no Brasil, 474.279, de 1980 a junho de 2007. Para melhor compreensão do agente etiológico, da criptococose e dos fatores associados à virulência são necessários estudos adicionais sobre a patogênese deste microrganismo. Dentre os fatores relacionados à virulência, a melanina é um dos principais e sua síntese ocorre por ação da lacase. Assim sendo, foram realizados estudos para avaliar a produção do pigmento entre amostras clínicas e ambientais de C. neoformans sob diferentes condições de pH (5, 6 e 7) e temperatura (25 °C, 30 °C e 35°C). A relação do pigmento com o perfil de sensibilidade aos antifúngicos fluconazol e anfotericina B também foi avaliada. Os resultados mostraram que não houve comportamento uniforme de melanização entre as amostras. As maiores alterações de pigmentação e crescimento das leveduras foram observadas nos meios de cultura com pH 7 incubados a 35 °C. A técnica de eletroforese em gel PAGE nãodesnaturante mostrou-se uma ferramenta útil na análise da lacase produzida pelas amostras de C. neoformans com posterior quantificação de melanina por densitometria das bandas após reação com o substrato L-dopa. As amostras ambientais apresentaram os maiores valores de intensidade de melanina e ampla faixa de variação. Mais da metade das amostras clínicas (56,2 %) apresentaram as menores intensidades de melanina. A amostra clínica ICB 88 revelou duas bandas de melanina no gel indicando a presença de duas isoformas da lacase. Os testes de sensibilidade aos antifúngicos fluconazol e anfotericina B, através das metodologias de difusão em agar por disco e fita (E-test®), mostraram que a leitura após 72 h de incubação pode levar a erro na classificação quanto ao perfil de sensibilidade, tanto nos testes com ou sem adição de melanina. Adição de melanina pareceu não interferir nos resultados frente ao fluconazol nas metodologias de difusão em agar a partir de disco e fita (E-test®). Para anfotericina B houve aumento de CIMs para 90,9 % das amostras, sendo 45,4 % superior a 2 diluições com adição de melanina nos testes de sensibilidade na metodologia de difusão em agar a partir de fita (E-test®). / Cryptococcosis is an opportunistic fungal infection caused by Cryptococcus neoformans that has presented increased incidence with the great number of immunocompromised patients, mainly AIDS ones, being 474.273, the number of cases registered in Brazil since 1980 to june 2007. Additional studies about microorganism’s pathogenesis is necessary for better comprehension about the aethyological agent, criptococosis and associated factors to virulence. Among virulence’s factors, melanin is one of the mainly and its synthesis occurs by laccases action. So, some studies were performed to evaluate the melanin pigment’s production between clinical and environmental strains of C. neoformans under different conditions of pH (5, 6 and 7) and temperatures (25 °C, 30 °C and 35 °C). The pigment and susceptibility to fluconazole and amphotericin B relation’s was also evaluated. The results showed that there wasn’t comparable behaviour of melanization among the strains. The higher alterations on yeast’s pigmentation and growth were noted under pH 7 and at 35 °C. The electrophoresis technique on non-denaturant PAGE gel showed to be an useful tool to the analysis of laccase produced by C. neoformans strains and posterior quantification of melanin by spot’s densitometry after reaction with L-dopa substrate. The environmental strains showed the higher values of melanin intensities and large variation range. Over than a half of clinical strains (56.2 %) showed the lower melanin’s intensities. The clinical strain, ICB 88 revealed two melanin spots on gel indicating the presence of two laccase isoforms. The susceptibility antifungal tests with fluconazole and amphotericin B through disk diffusion and E-test® methods showed that reading after 72 hours can induce to mistakes on the susceptibility profile of strains, either in presence or absence of melanin. Addition of melanin on medium surface appears not change the results of susceptibility to fluconazole in disk diffusion and E-test®, but to amphotericin B was observed increase of MICs to 90.9 % of strains, been 45.4 % upper to 2 dilutions after addition of melanin in Etest ® methodology.

A leishmaniose tegumentar americana (LTA), uma das formas clínicas das leishmanioses, está em expansão no Brasil e representa importante causa de morbidade para populações residentes em áreas endêmicas. Avaliações do perfil epidemiológico, dos serviços de diagnóstico e tratamento são necessárias para o estabelecimento de estratégias de controle da doença, assim como o emprego de novas ferramentas laboratoriais, como a PCR. Neste trabalho foram avaliados os aspectos epidemiológicos, de diagnóstico e tratamento de pacientes com LTA de diferentes regiões de Minas Gerais, além do uso de diferentes técnicas de extração de DNA e de iniciadores na PCR para a identificação e diferenciação do agente etiológico. Adicionalmente, foi comparada a positividade dos iniciadores dirigidos para a região conservada (150/152) e variável (13Y/13Z) do minicírculo do kDNA de Leishmania em amostras biológicas de pacientes sugestivos para LTA. Foi realizado levantamento epidemiológico, de diagnóstico e tratamento de 824 pacientes portadores de LTA, sendo 261 da região sul e sudoeste do estado de Minas Gerais (SSMG) e 563 do Vale do Rio Doce (VRD). Os dados foram obtidos através das fichas de notificação das Gerências Regionais de Saúde (GRS) do SSMG e do ambulatório de Leishmanioses “Dr. Paulo Araújo Magalhães” de Caratinga (VRD) entre 2002 e 2006. Trinta e nove pacientes com lesões sugestivas para LTA, provenientes destas regiões foram submetidos a exames laboratoriais, além da PCR. As amostras de DNA foram extraídas por aquecimento, pela técnica do fenol/clorofórmio, proteinase K e kit Wizard, e posteriormente usadas na PCR e PCR-RFLP. No período analisado, foi observada diminuição de 59,7% dos casos de LTA no SSMG e de até 25,7% no VRD. A forma clínica cutânea foi a predominante, com 91,9 e 93,6% no SSMG e VRD respectivamente. No SSMG, a maioria dos pacientes (51,7%) tem residência urbana, enquanto que no VRD a rural foi predominante (95,7%). No SSMG houve positividade em 55,6, 10,7 e 19,5% dos casos de LTA no Teste de Montenegro (TM), nos exames parasitológico e histopatológico, respectivamente. No VRD a positividade dos casos de LTA foi de 84,0 no TM e 73,0% no exame parasitológico. A alta por cura com a medicação empregada variou de 71,8 a 92,0% no SSMG e chegou a 78,0% no VRD. Dos 39 pacientes sugestivos, 32 foram confirmados para LTA. As extrações permitiram observar que mesmo a partir de DNA total degradado foi possível detectar kDNA de Leishmania. Nas amostras sugestivas, a positividade com 13Y/13Z e 150/152 foi de 56,4 e 76,9% respectivamente. Nos pacientes confirmados para LTA, a positividade com 13Y/13Z foi de 68,7% e com 150/152 foi de 93,7%. O emprego dos iniciadores 150/152 foi mais viável, o que não descarta o uso de 13Y/13Z, dada a expressiva positividade alcançada em amostras que requerem extração simplificada de DNA e com baixo custo. A PCR-RFLP possibilitou a identificação de L. (V.) braziliensis nas amostras biológicas dos pacientes com LTA. Os dados do presente trabalho também reforçam a necessidade de ações que estabeleçam um centro de referência no diagnóstico e tratamento da LTA no SSMG. / The american tegumentary leishmaniasis, (ATL), one of clinic forms of leishmaniasis, is in expansion in Brazil and represent important cause of morbidity for populations who live in endemic areas. Profile epidemiological studies, health services and treatment are needs to establish strategies of disease control, as well as to employ new tools laboratorials, like PCR ones. This research evaluated the epidemiological aspects, diagnoses and treatment from patients with ATL from different regions Minas Gerais, beyond to use varied extraction techniques DNA and different primers in PCR to make possible the identification and differentiation of the etiological agents. Additionally, it compared the positivity of the primers addressed to the conserved (150/152) and variable (13Y/13Z) region of the Leishmania kDNA minicircle in biological samples of patients suggestive to ATL. It was to carried out epidemiological studies, diagnoses and treatment of 824 patients with ATL, being 261 from Southern and Southwestern regions of Minas Gerais state (SSMG) and 563 from river Doce valley (VRD). The data were obtained from notification files Regional Health Authorities – RHA of SSMG and from Leishmaniasis ambulatory “Dr. Paulo Araújo Magalhães” at Caratinga city (VRD) between 2002 and 2006. Thirty nine patients from these regions and with suggestive ATL lesions were submitted to laboratorial exams, beyond of the PCR. The DNA samples extracted by heating, phenol/ chloroform technique, proteinase K and by Wizard kit, and later used in the PCR and PCR-RFLP. In the period analyzed, it was observed decrease of 59.7% of ATL cases in SSMG and of up to 25.7% in VRD. The cutaneous clinic form was predominant with 91.9 and 93.6% in SSMG and VRD respectively. The greatest part of the patients from SSMG has urban residence (51.7%) while in VRD the rural was predominant (95.7%). In the SSMG there was positivity in 55.6, 10.7 and 19.5% of ATL cases in the Montenegro test (MT), parasitological and histopatological exams, respectively. In the VRD the positivity was 84.0 in the MT and 73.0% in the parasitological exam. Discharge from the treatment due to cure varied of 71.8 to 92.0% in the SSMG and reached 78.0% in VRD. From the 39 suggestive patients, 32 were confirmed to ATL. The DNA extractions allowed observing that even starting from total degraded DNA was possible to detect kDNA of Leishmania. In the suggestive samples, the positivity of DNA with 13Y/13Z and 150/152 was about 56.4 and 76.9% respectively. In the confirmed patients to ATL, the positivity to 13Y/13Z was about 68.7% and to 150/152 was of 93.7%. The employment of the primers 150/152 was viable, what doesn't discard the use of 13Y/13Z, given the expressive positivity reached in samples that request simplified extraction of DNA and with low cost. PCR-RFLP made possible the identification of L. (V.) braziliensis in the patients' biological samples with LTA. The data of the present work they also reinforce the need of actions that establish a reference center in the diagnosis and treatment of LTA in SSMG. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Nos últimos anos o aumento na incidência de candidose superficial e invasiva causada por espécies emergentes resistentes tem sido atribuído a disseminação do uso de antibióticos e agentes imunossupressores. O aumento de Candida não-albicans deve-se ao incremento de pacientes imunodeprimidos, neutropênicos, recém nascidos de baixo peso, procedimentos invasivos e iatrogenia. Todos esses fatores permitem que agentes pouco virulentos, causem doenças. Vários estudos bioquímicos e moleculares foram realizados no sentido de elucidar as causas da resistência a antifúngicos em leveduras. Os objetivos do presente estudo foram: estudar leveduras do gênero Candida isoladas da cavidade bucal de pacientes com e sem HIV; comparação de métodos de identificação dos isolados; determinar o perfil de sensibilidade aos antifúngicos anfotericina B e fluconazol pelas metodologias de microdiluição CLSI, AFSTEUCAST e difusão em agar Etest e obter amostras heterorresistentes à anfotericina B e ao fluconazol por indução e seleção. Foram identificados 22 isolados de C. albicans, 3 de C. tropicalis, 3 de C. parapsilosis e 2 de C. glabrata segundo o método clássico. A identificação por métodos morfológicos e bioquímicos foi 100% concordante com o método molecular (PCR), tanto pela amplificação dos primers espécies-específicos (C. albicans e C. dubliniensis) quanto pela comparação do tamanho do fragmento amplificado pelos primers da região ITS2. A correlação entre a metodologia Etest e os dois métodos de microdiluição foi alta. Todas as amostras selvagens foram sensíveis a anfotericina B (CIM£2,0μg/mL) e apenas um isolado (3,33%) de C. tropicalis foi resistente ao fluconazol (CIM³64,0μg/mL por CLSI e CIM³64,0μg/mL por AFST-EUCAST). Foram selecionadas amostras heteroresistentes através da pressão seletiva utilizando meio adicionado de fluconazol (8μg/mL) e em seguida com anfotericina B (1,0μg/mL). A pressão seletiva também foi feita iniciando-se com anfotericina B e em seguida fluconazol. Paralelamente, as amostras selvagens foram submetidas à indução de resistência através do cultivo primeiro em concentrações crescentes de fluconazol (16,0; 32,0; 64,0; 128 e 256mg/mL) e em seguida com anfotericina B (0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5 e 3,0mg/mL). Os testes também foram feitos invertendo-se os antifúngicos, iniciando com anfotericina B e depois fluconazol. Foram obtidas três amostras heterorresistentes a fluconazol, das quais duas foram por indução (C. glabrata e C. tropicalis) e uma por seleção (C. tropicalis.). Ambas amostras de C. tropicalis foram originadas de um mesmo isolado selvagem. Nenhuma amostra mudou seu perfil de sensibilidade para anfotericina B, apesar de alguns isolados apresentarem capacidade de crescimento em várias concentrações deste antifúngico (1,0 a 3,0μg/mL). Após cultivos sucessivos em meio livre de droga, somente a cepa obtida por seleção manteve seu fenótipo de resistência. As cepas selvagens e suas mutantes apresentaram o mesmo perfil quando comparadas pela amplificação da região ITS2. Conclui-se que, embora a maior parte das espécies estudadas seja C. albicans (73,33%) todas as amostras heteroresistentes ao fluconazol obtidas foram Candida nãoalbicans (10%). As duas cepas mutantes obtidas pelo mesmo isolado inicial possuem, possivelmente, mecanismos múltiplos e distintos de resistência que, associado ao isolado, conferem resistência e/ou adaptabilidade à levedura frente ao antifúngico. / In the last years the increase in the incidence of superficial and invasive candidosis caused by resistant species has been attributed to the use of antibiotics and immunosuppression drugs. The increase do Candida non-albicans isolate due to the increment of patient immunocompromised, immunodeficiency virus infection, neutropenic, newly born of low weight, procedures invasives and iatrogenic. All those factors allow that agents a little virulent, caused diseases. Several biochemical and molecular studies have been accomplished for elucidating the causes of resistance in yeasts. The aims of the present research were: to study yeasts of the gender Candida isolated of the buccal cavity patients with and without HIV; comparison of methods of identification of isolates ; to determine the sensibility profile to the amphotericin B and fluconazole antifungals by microdilution methodologies CLSI, AFST-EUCAST and Etest difusion agar and acquisition of heteroresistent samples to amphotericin B and to fluconazole by induction and selection experiments. Were identifications 22 C. albicans, 3 C. tropicalis, 3 C. parapsilosis and 2 C. glabrata through the classic methods. The identification by morphologic and biochemisth was 100% agreement with the results obtained by the molecular method (PCR), them by the amplification of the species with specific primers (C. albicans and C. dubliniensis) as for the comparison of the size of the fragment amplified by the primers of region ITS2. The correlation among the methodology Etest and the two microdilution methods (CLSI and AFST-EUCAST) was higth. All samples wilds were suscetibility to amphotericin B (CIM£2,0μg/mL) and just one isolate (3,33%) of C. tropicalis was resistent to fluconazole (CIM³64,0μg/mL por CLSI e CIM³ 64,0μg/mL por AFST-EUCAST). Resistant strains were obtained by selective pressure using a medium amended with Fluconazole (8 μg/mL) and after that a medium with Amphothericin B (1.0 μg/mL). The selective pressure was also performed using Amphothericin B at first followed by Fluconazole. Similarly, wild samples were submitted to the induction of resistance by culturing in increasing concentrations of Fluconazole (16.0; 32.0; 64.0; 128 e 256mg/mL) followed by culturing in increasing concentrations of Amphotericin B (0.5; 1.0; 1.5; 2.0; 2.5 e 3.0mg/mL) and, after that, inverting the antifungal agents: Amphotericin B at first, followed by Fluconazole. Three samples heteroresistant to Fluconazole were obtained, two of which obtained by induction (C. glabrata and C. tropicalis) and one by selection (C. tropicalis.). Both C. tropicalis samples were originated from te same wild strain.None sample chamged its susceptibility profile to amphotericin B, in spite of some isolates that presented capacity of growth in several concentrations of this antifungals (1,0 a 3,0μg/mL). After successive cultivations in medium free of drugs, only the sample obtained by selection maintained your resistance phenotype. The wild samples and their mutants presented the same profile when compared by the amplification of the region ITS2. In conclusion, although most of the studied species were C. albicans (73,33%), all the fluconazol-heteroresistant samples obtained were Candida no-albicans (10%). The two mutant samples obtained from the same initial isolate possibly possess multiple and different mechanisms of resistance that, associated to the isolate, confer resistance and/or adaptability to the yeast in front to antifungal. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

A hérnia incisional (HI) é uma das complicações tardias das laparotomias, podendo acometer até 20% dos pacientes operados. A utilização de próteses representou um avanço sem precedentes no reparo da HI. Contudo, não há ainda tratamento ideal para o reparo e prevenção desse mal. A membrana de látex da seringueira demonstrou atividade cicatrizante e angiogênica em estudos in vitro e in vivo. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da membrana de látex sobre o reparo da parede abdominal lesada de ratos. Foram utilizados ratos machos Wistar com peso de 340 ± 20 g, nos quais foi induzido um defeito na parede abdominal de 1 x 2 cm, tendo a linha alba ao centro. Os animais foram divididos em dois grupos experimentais: Controle (sem reparo) e Látex (reparo com a membrana) e submetidos à eutanásia aos 3, 5, 7 e 28 dias após a indução do defeito. Os fragmentos da parede abdominal foram retirados, divididos em duas partes e utilizados para análise histológica e bioquímica. A análise histológica revelou que o látex induziu a proliferação de vasos sangüíneos, o aumento de fibras musculares novas e a regeneração tecidual. Observou-se ainda o aumento da densidade de fibroblastos e deposição de colágeno, o que é importante para determinar o aumento da resistência a forças tensoras no tecido cicatricial, evitando a deiscência da ferida e a instalação da HI. Houve aumento gradual de deposição e organização das fibras colágenas durante o período de estudo. O látex induziu ainda a expressão dos fatores de crescimento celular, FGF-2 e TGFb; a diminuição da expressão de IGF e PDGF e não alterou a expressão de TGFa. A regeneração tecidual requer a influência de fatores de crescimento celular e uma seqüência de eventos celulares, que resultam na regulação celular, com proliferação, sobrevivência e diferenciação. Assim, a modulação de fatores de crescimento pela membrana de látex, parece ter contribuído positivamente para a regeneração do defeito da parede abdominal. Conclui-se que a membrana de látex da seringueira, quando usada para reconstrução da parede abdominal de ratos, permite a regeneração tecidual, a formação de tecido conjuntivo fibroso de reparação, podendo ser utilizada efetivamente na hernioplastia. / The incisional hernia (IH) formation is one complication after abdominal surgery, affecting up to 20% of the reoperated patients. The use of prosthesis increased the repair of IH, however there is not yet an ideal treatment to repair or prevent the IH. The latex membrane from rubber tree has demonstrated to be cicatrizing and angiogenic, both in in vitro and in vivo studies. The aim of this work was to evaluate the effect of the latex membrane on the repair of the injuried abdominal wall of rats. Male Wistar rats with 340 ± 20 g were used and it was induced an abdominal wall defect with 1 x 2 cm and the alba line at the centre. The animals were divided into two experimental groups: Control (without repair) and Latex (with membrane repair) and were euthanized at 3, 5, 7 e 28 days after the defect induction. The abdominal wall fragments were removed, divided into two parts and used for histological and biochemical analysis. The histological analysis revealed that the latex membrane induced blood vessels proliferation, new muscle fiber formation and tissue regeneration. It was also observed a fibroblast density and collagen deposition increasing that is important to increase the resistance to tension forces and prevent the incision dehisce and IH formation. There was also a gradual increasing on the deposition and organization of collagen fibers during the experiment. The latex membrane induced the expression of cellular growth factors, FGF-2 and TGFb; decreased the expression of IGF and PDGF and did not alter the TGFa expression. Tissue regeneration requires the influence of growth factors in a sequence of cellular events that results on the cell regulation, proliferation, surviving and differentiation. The modulation of growth factor by the latex membrane may have contributed positively to the abdominal wall defect regeneration. It can be concluded that the latex membrane from rubber tree, when used to reconstruct the rat abdominal wall, allows tissue regeneration, fiber connective tissue formation and may be used effectively in hernioplasty. / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais - FAPEMIG

O tolueno (TOL) é um hidrocarboneto aromático amplamente utilizado em colas, tintas, detergentes, corantes, gasolina, solventes para tintas e produtos farmacêuticos. A exposição ao TOL pode ocorrer através da via inalatória e dérmica, no local de trabalho ou como droga de abuso. A literatura tem relatado a influência de alguns fármacos, como o etanol e o fenobarbital, na cinética de biotransformação do TOL devido interações no citocromo P450 (CYP). Os benzodiazepínicos (BZD) são fármacos amplamente utilizados na prática clínica e não há, até o presente momento, informações sobre a sua influência na eliminação de solventes orgânicos voláteis (SOV), utilizados no ambiente laboral. Dessa maneira, neste trabalho investigamos a influência do diazepam (DZP) na excreção do TOL pela determinação de seus produtos de biotransformação na urina, ácido hipúrico (AH) e orto-cresol (o-C). Para tal avaliação, ratos machos Wistar (n = 5, por grupo), de 250 ± 10 g, foram expostos ao solvente na concentração de 20 ppm em uma câmara de exposição do tipo nose only exposure system (6h/dia, 5 dias/semana, durante 6 semanas) com simultânea administração de DZP (10 mg Kg-1/dia) (GTOL/DZP). Animais submetidos às mesmas condições, porém sem receber DZP (GTOL), assim como um grupo de animais expostos ao ar atmosférico e tratados com DZP (10 mg Kg-¹/dia) (GDZP), também foram avaliados. O grupo controle (CTRL) foi submetido apenas à exposição ao ar atmosférico. A urina excretada durante as 16 h que sucederam a última exposição foi coletada e armazenada até o momento das análises. Os níveis de o-C urinário foram determinados pela técnica de extração líquido-líquido (ELL), seguida pela separação e detecção no cromatógrafo gasoso acoplado ao espectrômetro de massas (GC-EM), enquanto que através de uma diluição em água ultrapurificada (1:10, v/v) da urina coletada, AH e creatinina (CR) puderam ser determinados por cromatografia líquida de alta eficiência acoplada ao detector de arranjo de diodos (CLAE-DAD). A coleta de sangue ocorreu após 16 h da última administração de DZP. As concentrações plasmáticas de DZP e seu metabolito, nordiazepam (NOR), foram analisadas por CLAE-DAD com prévio preparo de amostras pela ELL. Todas as metodologias analíticas utilizadas no presente estudo foram satisfatoriamente validadas (r² > 0,99; precisão e exatidão com coeficiente de variação e erro relativo, respectivamente, inferiores a 15%). Após avaliações estatísticas dos dados foi possível observar que o DZP exerce influência sobre a excreção do o-C no grupo GTOL/DZP (teste de Mann-Whitney, p < 0,05), comparado ao grupo GTOL. Os resultados obtidos permitem concluir que o uso de DZP pode influenciar na excreção do TOL através do o-C urinário, sendo esta informação relevante no monitoramento biológico desse solvente. / Toluene (TOL) is an aromatic hydrocarbon widely used in glues, paints, detergents, dyes, gasoline, thinners and pharmaceuticals. Human exposure to TOL occurs through inhalation or skin contact, in the workplace, or as a drug of abuse. It has been reported that some drugs, such as ethanol and phenobarbital, can influence the kinetics of TOL metabolism due the interactions on cytochrome P450 (CYP) isozymes. Benzodiazepines (BZD) are drugs widely used and there is no information on the influence of this class of drugs on the eliminations of volatile organic solvents (VOS) in the labor environment. So, in the present study, we investigated the influence of diazepam (DZP) on the excretion of TOL by determination of their metabolites, hippuric acid (HA) and ortho-cresol (o-C). Male Wistar rats (n = 5 per group), 250 ± 10 g, were exposed to TOL at a concentration of 20 ppm in a nose-only exposure chamber (6h/day, 5 day/week, for 6 weeks) with simultaneous administration of DZP (10 mg Kg-1/day) (GTOL/DZP). A group treated under the same condition, but without DZP (GTOL), and a group exposed to air and treated with DZP (10 mg Kg-¹/day) (GDZP) were executed. The control group (CTRL) was exposed to air only. The urine excreted during the 16 h after the last exposure was collected and stored until the analysis. The urinary o-C levels were determined by liquid-liquid extraction (LLE), followed by separation and detection in a gas chromatography coupled to mass spectrometer (GC-MS), while, with a simple dilution of the collected urine in ultrapure water (1:10, v/v), HA and creatinine (CR) could be determined by high-performance liquid chromatography coupled to the photodiode array detector (HPLC-DAD). Blood collection occurred after 16 hours of the last administration of DZP. The plasma concentrations of DZP and its metabolite, nordiazepam (NOR), were analyzed by HPLC-DAD with prior sample preparation by LLE. All analytical methods used in this study were satisfactorily validated (r¹ > 0.99; accuracy and precision with relative standard deviation and relative error, respectively, less than 15%). After statistical processing of data it was possible to observe that there is influence of DZP on the excretion of o-C (p < 0.05, Mann-Whitney test) on the GTOL/DZP group, when compared to the GTOL group. The results permitted to conclude that the use of DZP seems to influence the excretion of TOL through the urinary o-C and this is a relevant information to be used in the biological monitoring of this solvent. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES