Made available in DSpace on 2014-12-17T14:10:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MarcosPGP_DISSERT_1-46.pdf: 4525391 bytes, checksum: cc4ce7722ce2492ebd954c9d1dfad7a8 (MD5) Previous issue date: 2010-04-28 / Sandflies stand out as important vectors of leishmaniasis. The females need to ingest blood meals, enabling them to transmit protozoa of the genus Leishmania, which may give rise to visceral leishmaniasis (VL) or American tegumentary leishmaniasis (ATL), in addition to transmitting other parasites. Leishmaniasis are important infirmities, distributed worldwide, whose infection results from the interaction of reservoir animals, the vector insect, parasitic protozoa and the healthy host. In the state of Rio Grande do Norte (RN), Brazil, these insects are important transmitters of VL, which usually presents in the most serious form. It occurs mainly in metropolitan areas, with the dog as its main reservoir and Lutzomyia longipalpis as the vector. ATL is most present in the highland areas of the state. In addition to hematophagia, engaged in by the females, both sexes need to ingest carbohydrates, which are essential to the sand flies energy requirements and may interfere in the development of Leishmania. The aim of this study was to determine the occurrence and abundance of sand flies in different environments on the farm belonging to the Empresa de Pesquisas Agropecu?rias do RN (Institute of Agricultural Research of RN), in the municipality of Parnamirim, in order to relate this occurrence with climatological and biological references and eating habits. Three consecutive monthly collections were carried out with CDC traps in a fragment of the Atlantic Forest, in a residence, on a goat breeding farm and on cashew, dwarf and giant coconut, mango, banana, eucalyptus, acacia and bean plantations. A total of 1241 sandflies from eight species (Lutzomyia evandroi, Lutzomyia longipalpis, Lutzomyia shannoni, Lutzomyia sordellii Lutzomyia walkeri, Lutzomyia wellcomei, Lutzomyia whitmani, and Lutzomyia intermedia) were collected, most in the forest environment. L. longipalpis, the main VL transmitter, was confirmed as a species adapted to anthropic environments, whereas others such as L. wellcomei, the vector of ATL, occurred predominantly in forests. Carbohydrate characterization of the sand flies and plants of the region demonstrated that a number of exotic plants such as hay and eucalyptus may play some role in the adaptation of these species to modified environments. Breeding in laboratory showed a mean biological cycle of 53.5 days from egg to adulthood for L. shannoni and the possibility of diapause behavior in L. wellcomei. This study serves as a source of information that may contribute to the epidemiological vigilance of tegumentary and visceral leishmaniasis in the state, given that it analyzes the bioecology of transmitting species, as well as their potential to adapt to new environments / Os flebotom?neos se destacam como importantes transmissores das leishmanioses. As f?meas necessitam realizar repasto sangu?neo, o que as possibilita veicular protozo?rios do g?nero Leishmania, que podem originar a leishmaniose visceral (LV) ou a leishmaniose tegumentar americana (LTA), al?m de transmitirem outros parasitos. As leishmanioses s?o enfermidades de ampla import?ncia e distribui??o mundial, cuja infec??o ? conseq?ente da intera??o dos animais reservat?rios com o inseto vetor, o protozo?rio parasito e o hospedeiro sadio. No Rio Grande do Norte (RN) esses insetos s?o importantes transmissores da LV, que geralmente se apresenta de forma mais grave e ocorre principalmente na regi?o metropolitana, tendo o c?o como principal reservat?rio, e Lutzomyia longipalpis como vetor. A LTA est? mais presente nas ?reas serranas do estado. Al?m da hematofagia, exercida pelas f?meas, ambos os sexos necessitam ingerir carboidratos, que s?o essenciais para as necessidades energ?ticas dos flebotom?neos e podem interferir no desenvolvimento da Leishmania. O objetivo desse estudo foi levantar a ocorr?ncia e abund?ncia de flebotom?neos nos diversos ambientes da fazenda da Empresa de Pesquisas Agropecu?rias do RN, no Munic?pio de Parnamirim, buscando relacionar essa ocorr?ncia com referenciais climatol?gicos, biol?gicos e h?bitos alimentares. Foram realizadas 03 coletas consecutivas mensais com armadilhas CDC em um fragmento de Mata Atl?ntica, em uma resid?ncia, e em planta??es de cajueiro, de coqueiro an?o e gigante, de mangueira, de bananeira, de eucalipto, ac?cia, feij?o e em cria??o de caprinos. Foram coletados 1241 flebotom?neos de oito esp?cies, Lutzomyia evandroi, Lutzomyia longipalpis, Lutzomyia shannoni, Lutzomyia sordellii Lutzomyia walkeri, Lutzomyia wellcomei, Lutzomyia whitmani, e Lutzomyia intermedia, sendo a maioria destes no ambiente de mata. L. longipalpis, principal esp?cie transmissora de LV, se confirmou como esp?cie adaptada a ambientes antr?picos, enquanto outras como L. wellcomei, vetora de LTA, se mostrou predominantemente silvestre. Foi feita caracteriza??o de carboidratos em flebotom?neos e vegetais da regi?o, visando relacion?-los, o que demonstrou que algumas plantas ex?ticas como capim e eucalipto podem ter algum papel no processo de adapta??o dessas esp?cies a ambientes modificados. Atrav?s da cria??o em laborat?rio, observou-se para L. shannoni ciclo biol?gico m?dio de 53,5 dias de ovo a adulto e ainda a possibilidade de diapausa em L. wellcomei. Esse estudo constitui uma fonte de informa??es que poder? contribuir com a vigil?ncia epidemiol?gica das leishmanioses tegumentar e visceral no Estado, uma vez que analisa a bioecologia das esp?cies transmissoras, assim como seu potencial de adapta??o a novos ambientes

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:13:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 IraciDL_Dissert.pdf: 1259983 bytes, checksum: 9fb9c026a74636e1c8e0d88ea967084d (MD5) Previous issue date: 2009-08-07 / Visceral leishmaniasis h?s adapted in the past 20 years to periurban and urban areas, and in Natal, Rio Grande do Norte, it became endemic. Thid study aimed to evaluate the environmental and social aspectsof Leishmania chagasi infection and its epidemiologic transmission chain in an urban, periurban and rural area of Parnamirim-RN. A study with three sections was conducted: Section 1: Sectional study of the human and canine infection by L. chagasi and its environmental and social determinants. Section 2: Observational longitudinal cohort to evaluate the dynamics of the canine infection. Section 3: Longitudinal study to evaluate the behavior of Lu. Longipalpis vector and the seasonal factors related to its dynamics. To include in the study the hauses were randomly selected and georreferenciated. Montenegro skin test was done in the human population and blood samples were collected for anti-Leishmania antibody detection. The canine population was examinated for L. chagasi infection by RIFI, ELISA and ELISA for rK39. An entomologic surveillance was monthly done with CDC light trapsin 10 houses of each locality. Quantitative and qualitative analyses was done using STATISC 6.0. Probality and prediction maps were done using ArcGis 9.0 model. In the human population L. chagasi infection was associated with the area of the hause, age, sex, population densyti, vegetation, kind of the floor of thr hause, water and resides destiny. In the canine population L. chagasi infection was associated with the breed, size, time of living in the hause, presence of dogs in the neighborhood, presence of horses and donkeys in the neighborhood, vegetation, kind of the floor and walls of the hause. The human infection was associated with canine infction only when analyzed taking into account the locality. In the prospective study, serum conversion and antibody lost observed in 30,8% and 22% of the animals examined, respectively. The human infection rate by L. chagasi was 24,6%, by the presence of anti-Leishmania antibody and 38,6% by the Montenegro skin test. The canine infection rate 32,5% by the presence of anti-Leishmania antibody. The vector Lu longipalpis showed an atypical behavior. These results indicate that environmental and social factors are important variables associated with L. chagasi infection in humans and canines, with punctual association of thr last two. Control measures of the infection on the studied points are necessary, in the aim to reduce the endemic focus of the disease in the study area. This research was carried out in a multidisciplinary involving the categories of: doctor, biologist, veterinarian, statistical, pharmaceutical and biochemical / A leishmaniose visceral ? uma doen?a que nos ?ltimos 20 anos adaptou-se ?s ?reas periurbanas e urbanas, tornando-se end?mica na regi?o metropolitana de Natal, Rio Grande do Norte. Este estudo teve como objetivo avaliar os aspectos ambientais, sociais e a cadeia epidemiol?gica de transmiss?o por Leishmania chagasi em ?rea urbana, periurbana e rural do Munic?pio de Parnamirim-RN. Realizou-se um estudo com tr?s subestudos: Subestudo 1: Estudo Transversal da infec??o humana e seus determinantes socioambientais no ano de 2005. Subestudo 2: Estudo observacional longitudinal com coorte fixa para avaliar a din?mica da infec??o canina por L. chagasi no per?odo de 2005/2006. Subestudo 3: Estudo longitudinal para avaliar a fauna de flebotom?neos e a densidade de L. longipalpis associando aos fatores clim?ticos. Para inclus?o no estudo, os im?veis foram selecionados aleatoriamente e georreferenciados. Na popula??o humana desses im?veis, foi realizado teste de Montenegro e coleta de sangue para detec??o de anticorpos antileishmania. A popula??o canina foi examinada quanto ? infec??o por L. chagasi pelo m?todo de RIFI, ELISA EB e ELISA para rK39. Foi realizado monitoramento entomol?gico mensal com armadilhas CDC em 10 im?veis de cada localidade. Foi realizado an?lise quantitativa e qualitativa atrav?s do STATISC 6.0 e constru??o de mapas de predi??o e probabilidade atrav?s do modelo do ArcGis 9.0. Foi encontrada associa??o da infec??o humana por L. chagasi com a ?rea de resid?ncia, idade, sexo, densidade populacional, vegeta??o, tipo de piso do im?vel e destino de ?gua e dejetos. Na popula??o canina, foi observada associa??o da infec??o por L. chagasi quanto ? ra?a, ao porte, sintomas, tempo de moradia no im?vel, presen?a de c?es na vizinhan?a, presen?a de cavalos e jumentos na vizinhan?a, tipo de vegeta??o da ?rea. A infec??o humana estava relacionada com a infec??o canina apenas quando analisada considerando-se a localidade. No estudo prospectivo, foi observada soroconvers?o e perda de anticorpos em 30,8% e 22% dos animais examinados, respectivamente. A taxa de infec??o humana por Leishmania chagasi foi de 24,6%, quando avaliada pela presen?a de anticorpos antileishmania e de 38,6% quando avaliada pelo teste de Montenegro. A taxa de infec??o canina foi 32,5% quando avaliada pela presen?a de anticorpos antileishmania. O vetor Lu. longipalpis apresentou um comportamento at?pico. Os resultados indicam que fatores ambientais e sociais s?o importantes vari?veis associadas ? infec??o por L. chagasi em humanos e caninos, sendo as ?ltimas pontualmente associadas. Desta forma, s?o necess?rias medidas de controle da infec??o que enfoquem os pontos estudados, visando a n?o manuten??o da endemicidade na ?rea estudada. Esta pesquisa foi realizada de forma multidisciplinar envolvendo as categorias de: m?dico, bi?logo, veterin?rio, estat?stico, nutricionista e farmac?utico bioqu?mico

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Nas Américas, a leishmaniose visceral (LV) experimenta um processo de urbanização e o cão doméstico é considerado o principal reservatório da doença neste cenário, embora seu papel no ciclo de transmissão não esteja totalmente explicado. Este estudo teve como objetivo investigar, por meio da análise de dados espaciais e imagens de sensoriamento remoto, a relação de fatores ambientais com a ocorrência de infecção canina por Leishmania chagasi e sua correlação espacial com a doença humana na cidade de Teresina (Piauí - Brasil), onde foi relatada a primeira epidemia urbana de LV no Brasil. Os resultados são apresentados na forma de dois manuscritos, nos quais são utilizados dados georreferenciados obtidos por meio de um inquérito sorológico canino realizado durante o ano de 2011, em diferentes bairros com transmissão moderada ou intensa. No primeiro, a regressão logística multinível foi utilizada para correlacionar a prevalência da infecção canina com variáveis ambientais de quadrículas de 900m2 (30mx30m) onde os domicílios estavam localizados, ajustando para as características individuais dos cães (sexo, idade e raça) e da residência. Participaram desta análise 717 cães distribuídos em 494 domicílios e 396 quadrículas. Um percentual >16,5% da área da quadrícula coberta por pavimentação clara (ruas de terra ou asfalto antigo) foi a única variável ambiental associada com a infecção canina por L. chagasi (Odds ratio [OR] = 2,00, intervalo de 95% de confiança [IC95%]: 1,22 - 3,26). Estas áreas provavelmente correspondem àquelas mais pobres e com pior infraestrutura urbana, sugerindo a ocorrência de um padrão de transmissão intra-urbano similar aos padrões rurais e peri-urbanos da LV. No segundo manuscrito, a partir da análise hierárquica do vizinho mais próximo foi verificada a presença de sete clusters de maior concentração de cães soropositivos em relação aos soro negativos em áreas menos urbanizadas e com vegetação pouco densa. Participaram desta análise 322 cães distribuídos em cinco bairros. A relação espacial entre os caninos soropositivos e os casos humanos foi investigada através do método da distância média entre os pontos e analisada por meio do teste t. Foi encontrada uma maior proximidade de casos humanos em relação a cães soropositivos quando comparada à distância em relação aos soro negativos, sugerindo a existência de uma relação espacial entre a LV humana e a soropositividade canina. Os resultados contribuem para uma maior compreensão sobre a dinâmica da doença em meio urbano além de fornecer informações úteis para a prevenção e controle da LV em seres humanos. / In the Americas, visceral leishmaniasis (VL) undergoes an active process of urbanization and the domestic dog is considered to be the main reservoir of the disease in this scenario, although its role in the transmission cycle is not fully explained. This study aimed to investigate, by spatial data analysis and remote sensing images, the association between environmental factors with the occurrence of canine infection by Leishmania chagasi and their spatial correlation with the human disease in the city of Teresina (Piauí-Brazil), where first urban epidemic of LV in Brazil was reported. The results are presented in the form of two manuscripts, which used georeferenced data obtained through a serological canine survey carried out during 2011 canine, in localities with moderate or severe transmission. In the first manuscript, the multilevel logistic regression approach was used to correlate the prevalence of canine infection with the environmental variables of grids with 900m2 (30mx30m) where the residence was located, adjusting to the dogs' individual characteristics (gender, age and race) and characteristics of the residences. The environmental analysis was performed with 717 dogs distributed in 494 households and 396 grids. The percentage of the area of grid covered by clear pavement (bare soil or old asphalted streets) >16.5% was the only environmental variable associated with canine infection by L. chagasi (Odds ratio [OR] = 2.00, 95% confidence interval [95% CI]: 1.22 - 3.26). These probably correspond to impoverished areas with inadequate infrastructure suggesting the occurrence of an urban cycle similar to those observed in rural and periurban areas. In the second manuscript, by the hierarchical analysis of nearest neighbor, were checked seven clusters of highest concentration of seropositve dogs in relation to seronegative in less urbanized areas with sparse vegetation. This analysis was performed with 322 dogs distributed in five boroughs. The spatial relationship between seropositive dogs and human cases was investigated by the method of average distance between points and was analyzed by t-test. The human cases were closer to the seropositive dogs when compared to the distance from the seronegative ones, suggesting the existence of a spatial relationship between the human LV and canine infection. The results contribute to a greater understanding of the dynamics of urban disease and also provide useful information for the prevention and control of visceral leishmaniasis in humans.

A leishmaniose tegumentar (LT) é uma zoonose causada por protozoário do gênero Leishmania e transmitida pela picada de diferentes espécies de flebotomíneos infectados. Pode acometer o ser humano no momento em que este participa acidentalmente do ciclo silvestre de manutenção da doença, por meio de atividades que necessitem de sua entrada no ambiente de mata ou mesmo devido a existência de moradias próximas a borda da floresta ou até mesmo no interior da mesma. Atualmente há cada vez mais evidências da transmissão por consequência das modificações no ambiente causadas pelo ser humano, levando à migração de algumas espécies de Leishmania e de seus vetores para as imediações dos domicílios. A LT tem como principal agente etiológico a Leishmania (Viannia) braziliensis na Amazônia brasileira e esta é responsável por uma forma extremamente grave de leishmaniose anérgica. Este parasito caracteriza-se por apresentar espectro de manifestações clínicas e imunológicas que variam do pólo anérgico ao polo hiperérgico. O presente estudo faz-se necessário para avaliar: a adaptabilidade de populações humanas residentes em áreas endêmicas de LT; como elas procuram se ajustar ao ambiente no qual vivem; como a evolução destas populações humanas pode se refletir nos seus sistemas imunológicos e, consequentemente, nas formas, mais ou menos graves, de apresentação da LT em área hiperendêmica. Foram identificados 17647 flebotomíneos, sendo esses classificados em 86 espécies. Dessas, 14 espécies atendem a classificação de vetores de Leishmania sp. e outras 7 espécies são apontadas como potenciais vetores de Leishmania sp. O presente estudo comprova a existência da espécie Lutzomyia longipalpis, espécie vetor da leishmaniose visceral (LV), patologia na qual pode evoluir ao quadro de óbito senão ocorrer o devido tratamento. Este é o primeiro registro da espécie no estado do Acre e na porção sul-ocidental da Amazônia, e corrobora os atuais estudos que apontam a expansão territorial da ocorrência da LV no Brasil e com a hipótese de expansão até áreas Andinas. / Cutaneous leishmaniasis (CL) is a zoonosis caused by a protozoan of the genus Leishmania and transmitted by the bite of different species of infected sand flies. It may affect the human being at the time when it accidentally enters the wild cycle of the maintenance of the disease, through activities requiring its entry into the forest environment or even due to the existence of households near the edge of the forests or even within the same. Currently there is increasingly evidence of transmission due to changes in the environment caused by the human being, leading to the migration of some species of Leishmania and its vectors to the immediate vicinity of households. The CL has as the main agent etiological the Leishmania (Viannia) braziliensis in the Brazilian Amazon and this is responsible for an extremely serious form of leishmaniasis anergic. This parasite is characterized by presenting a spectrum of clinical and immunological manifestations ranging from the pole anergic to the pole hyperergic. The present study is necessary to evaluate: the adaptability of human populations resident in the endemic areas of CL; how they seek to adjust to the environment in which they live; how the evolution of these human populations can reflect on their immune systems and, consequently, in the more or less severe forms of presentation of the CL in hyperendemic area. 17647 phlebotomines were identified, being classified in 86 species. Among them, 14 species meet the classification of vectors of Leishmania sp. and 7 other species are pointed out as potential vectors of Leishmania sp. The present study proves the existence of the species Lutzomyia longipalpis, vector species of visceral leishmaniasis (VL), pathology in which it may evolve into the death frame, but due treatment. This is the first record of the species in the state of Acre and in the western portion of the Amazon, and corroborates the current studies that point the territorial expansion of the occurrence of LV in Brazil and with the chance of expansion to Andean areas.

Orientador: Silmara Marques Allegretti / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-17T21:52:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Barichello_FabianaFarinelloGrecco_M.pdf: 2472984 bytes, checksum: 2d89f144c96b66ee33bfdbb3f77ce1ee (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A Leishmaniose Visceral Canina, doença grave e fatal, tem o cão como o principal reservatório do seu agente etiológico no meio urbano. Devido ao alto parasitismo cutâneo nestes animais, da quantidade de cães infectados, e do próximo convívio com o homem, as ações desenvolvidas pelo Programa Brasileiro de Controle da Leishmaniose Visceral são centradas no reservatório canino, através da identificação e eutanásia dos animais soropositivos. Sendo assim, a adoção de ações profiláticas, com a utilização de vacinas nos cães, constituiria uma importante ferramenta para a diminuição da doença nestes animais, e consequentemente, da infecção do vetor e da transmissão do agente. Além disso, a adoção de medidas profiláticas, como o uso de coleiras impregnadas com deltametrina, repelentes de uso tópico e vacinas, são as únicas alternativas disponíveis atualmente para os cães, pois no Brasil, o tratamento de cães está proibido desde a publicação da Portaria Interministerial nº 1.426, de 11 de julho de 2008. Apesar de disponível desde 2004, a vacina Leishmune® ainda não é amplamente utilizada no Brasil, principalmente devido à possibilidade dos cães vacinados apresentarem sorologia positiva em inquéritos epidemiológicos, não sendo possível diferenciá-los dos infectados. Este trabalho foi realizado com o objetivo de avaliar o perfil sorológico de cães vacinados e saudáveis que residem em áreas endêmicas, e de cães naturalmente infectados por Leishmania infantum/ chagasi, e avaliar a possibilidade de diferenciação sorológica a partir dos métodos utilizados atualmente nos inquéritos epidemiológicos oficiais e nos laboratórios de diagnóstico particulares: ELISA e RIFI com antígenos L. major-like, produzidos pelo Laboratório Bio-Manguinhos e ELISA S7, produzido pelo Laboratório Biogene. Todos os soros de cães foram testados nos três métodos, e os resultados demonstraram que nenhum cão vacinado apresentou resultado positivo em mais de um teste. Apenas um cão vacinado (1/39) apresentou resultado de 1:40 na RIFI, e quatro cães (4/39) apresentaram resultado positivo no ELISA L. major-like. Nenhum soro de cão vacinado apresentou resultado positivo no ELISA S7. O único resultado positivo na RIFI foi negativo nos outros dois métodos, e os quatro soros positivos no ELISA L. major-like foram negativos tanto na RIFI quanto no ELISA S7. Estes resultados sugerem reações falso-positivas, e demonstram que, de acordo com o Manual de Vigilância Epidemiológica, se os soros de cães vacinados forem testados em dois métodos (ELISA e RIFI), a possibilidade de um cão vacinado apresentar resultado positivo será remota. Desta maneira, a vacinação da população canina não dificultaria as ações atualmente empregadas para o controle da Leishmaniose Visceral, mas poderia, no futuro, ser somada as medidas já adotadas, evitando assim a eutanásia de cães / Abstract: Canine Visceral Leishmaniasis, serious and fatal disease, has the dog as main reservoir of the agent Leishmania infantum in urban environment. The control actions developed by the Brazilian Program of Visceral Leishmaniasis Control are focused on the canine reservoir through identification and euthanasia of seropositive animals, due to high cutaneous parasitism in these animals, the amount of infected dogs and the closeness to the human being. Therefore, the adoption of prophylactic measures like dog vaccination would be an important tool to reduce the number of infected dogs and consequently the vector infection and the disease transmission. Besides that, the adoption of prophylactic measures in these animals, like the usage of deltametrin embedded collars, topic usage repellent and vaccines are the only available alternatives for these animals, since dogs treatment has been forbidden by law in Brazil since 2008. Although it has been available since 2004, the Leishmune® vaccine is not widely used in Brazil yet, especially due to the possibility of vaccinated dogs showing positive serology, being impossible to differentiate them from infected dogs. The objective of this work was to evaluate the serologic profile of healthy and vaccinated dogs who live in endemic areas and of naturally infected dogs with Leishmania Infantum/ chagasi, and also evaluate the possibility of serologic differentiation using the same methods nowadays adopted by official epidemiological surveys and in private diagnosis laboratories: ELISA and IFA with L. major-like antigens, produced by Bio-Manguinhos Laboratory and ELISA S7, produced by Biogene Laboratory. All the dogs sera were tested in the three methods, and the results showed that no vaccinated dog presented a positive result in more than one test. Only a vaccinated dog (1/39), presented 1:40 in IFA, and 4 dogs (4/39) presented a ELISA L. major-like positive result. No vaccinated dog sera presented positive result in ELISA S7. The only IFA positive result was negative in the other two methods and the four positive sera in ELISA L. major-like were negative either in IFA, as in ELISA S7. These results suggest false positive reactions and demonstrate that according to the Epidemiological Surveillance Manual, if the vaccinated dogs sera are tested in two methods (ELISA and IFA), the possibility of a vaccinated dog to present a positive result is remote. Thus, the vaccination of a big quantity of dogs would not disturb the presently adopted actions for Visceral Leishmaniasis control, but could in the future be added to the already adopted measures, therefore avoiding the dog's euthanasia / Mestrado / Parasitologia / Mestre em Parasitologia

Orientadores: Angelo Pires do Prado, Claudio Casanova / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-15T21:39:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CollaJacques_FernandaElisa_M.pdf: 1220366 bytes, checksum: 236fda152f5e60fc1f34a2bb1295ad2f (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Desde 2004, a transmissão canina de leishmaniose visceral americana (LVA) tem sido registrada na área urbana de Espírito Santo do Pinhal, e no decorrer da última década, casos humanos esporádicos de leishmaniose tegumentar americana (LTA) ocorreram na sua área rural. Este estudo visou ampliar o conhecimento a respeito dos flebotomíneos e a sua ecologia populacional nos ambientes rural, periurbano e urbano desse município. As coletas foram feitas semanalmente, durante um período de 15 meses, com armadilhas luminosas automáticas tipo CDC no peridomicílio de 18 imóveis. Um total de 5.562 flebotomíneos foi coletado, divididos em 17 espécies. As espécies mais freqüentes foram Nyssomyia whitmani (43,5%) e Pintomyia pessoai (28,7%) na área rural, Lutzomyia. longipalpis (52,2%) e NY.whitmani (36,2%) na área periurbana, e Lu. longipalpis (73,0%) na área urbana. As espécies mais abundante, segundo o índice de abundância de espécie padronizado foram, em ordem decrescente, NY.whitmani, Lu. Longipalpis e Evandromyia lenti. A maior riqueza de espécies foi encontrada na área rural, bem como o maior índice de diversidade. O índice de dimilaridade de Sorensen mostrou que as áreas rural e periurbana são as mais similares. Lu. longipaldis foi encontrado em todas as áreas do município durante o período de coleta, e a alta abundância foi encontrada nos períodos posteriores às chuvas. Este fato, somado a presença de cães infectados com Leishmania infantum chagasi na área urbana, representa um risco para o estabelecimento dessa doença na região. A elevada abundância de NY. Whitmani e de PI. Pessoai na área rural e periurbana indicam a possibilidade de ocorrência de novos casos de leishmaniose tegumentar americana e a sua expansão para a área de Espírito Santo do Pinhal / Abstract: Since 2004 there hás been canine transmission of American visceral leishmaniasis (AVL) in the urban area of Espírito Santo do Pinhal and, over the last decade, sporadic human cases of American cutaneous leishmaniasis (ACL) have been recorded in the rural area. This study aime to increase the knowledge of the sand fly communityand its populational ecology in the rural, urban and periurban areas of this municipality. The captures were carried out weekly, over a period of 15 months, with automatic light traps in the surrondingd of 18 proprieties. A total of 5.562 sandflies were colleted, comprised of 17 species. The most abundance species were Nyssomyia whitmani (43,5%) and Pintomyia pessoai (28,7%) in the rural area, Lutzomyia. longipalpis (52,2%) and NY.whitmani (36,2%) in the periurban area, and Lu. longipalpis (73,0%) in the urban area. The highest species richness was found in the rural area, along with the greatest index species diversity. The similarity index, used to compare the different areas, showed that rural and periurban areas were most alike. Lu. Longipaldis was found in all areas of the district during the collection period, and high abundance was usually found after a heavy rain period. This, plus the presence of dogs infected with Leishmania infantum chagasi in the urban area, presents a risk of the establishment of the AVL in the region. The high abundance of Ny. Whitmani and Pi. Pessoai in the rural and periurban areas indicate the possibility of new cases of ACL occurring, and spreading to the periurban area of Espírito Santo do Pinhal / Mestrado / Parasitologia / Mestre em Parasitologia

Introdução: ao longo da história da leishmaniose tegumentar (LT), o comprometimento do tecido ósseo foi pouco estudado, principalmente na forma clínica difusa (LCD). Os estudos que abordaram o tema concentraram-se nas observações clínicas, estudos radiográficos e na visão paleopatológica, numa tentativa de explicar as lesões ósseas que alguns indivíduos com LT apresentavam. A literatura sobre infecção óssea cita como agente causador de osteomielite no homem, principalmente, bactérias e fungos. Objetivo: estudar as alterações ósseas na leishmaniose cutânea difusa (LCD), através da cintilografia óssea trifásica, radiografias e histopatológico. Métodos: o presente estudo analisa a associação entre a Leishmania (Leishmania) amazonensis e as alterações ósseas em oito pacientes com LCD, procedentes de diversos pólos de produção da doença (LT) no Estado do Maranhão. Foram realizados, nesta investigação, dois estudos: observacional em humanos, utilizando exames de imagens (cintilografia óssea trifásica e radiografias) e histopatológico do tecido ósseo (Hematoxilina- Eosina, Imunohistoquímica, Ziehl-Neelsen e Gomori-Grocott); e um estudo experimental de infecção óssea crônica produzida pela Leishmania, em camundongos BALB/c, através do histopatológico (Hematoxilina-Eosina). Resultados: a análise clínica mostrou a presença de deformidades nas extremidades distais dos membros superiores e inferiores em 50% dos casos, com limitação funcional associadas às lesões cutâneas. Nos estudos de imagens, a cintilografia mostrou hipercaptação na fase tardia em várias áreas de uma mesma região, caracterizando processos inflamatórios múltiplos no tecido ósseo em todos os pacientes. A radiografia demonstrou características de reabsorção óssea parcial das falanges distais dos dedos das mãos e pés, bilateral em seis pacientes. Revelou, também, lesões líticas nas falanges proximais das mãos em dois pacientes. O exame histopatológico demonstrou a presença de um quadro de osteomielite crônica em quatro pacientes, sendo detectado a Leishmania. Foi realizada pesquisa para micobactérias e fungos no tecido ósseo, que foram negativas. O modelo experimental caracterizou um quadro de infecção óssea crônica, demonstrando o comprometimento do tecido cartilaginoso secundariamente. Conclusões: todos os pacientes apresentaram algum tipo de comprometimento ósseo. As deformidades localizaram-se nas extremidades distais em seis pacientes. A cintilografia óssea e a radiografia foram importantes na localização e no seguimento das lesões ósseas. Através do exame histopatológico ficou evidente a relação entre a L.(L.) amazonensis e infecção óssea, caracterizando um quadro de osteomielite crônica. Portanto, fica a proposta de modificação da classificação etiológica da osteomiielite crônica, incluindo o protozoário, Leishmania (L) amazonensis , como agente causador / Introduction: Since the early history of Cutaneous Leishmaniasis (CL), there are few studies on the bone involvement in CL, mainly related to the Cutaneous Diffuse Leishmaniasis (CDL). The studies were mainly related to the clinical observation, radiographical aspects and the paleopathological view, on the attempt to explain the bone lesions found in some individuals with CL. The literature on bone infection reports the bacteria and fungi as agents of osteomyelitis in man. Objective: to study the bone changes in Cutaneous Diffuse Leishmaniasis (CDL), through the scintilography, radiography and histopatological aspects. Methods: the study analyzed the association of the Leishmania (Leishmania) amazonensis and the bone changes in eight patients with CDL, from eight endemic poles of the disease in the State of Maranhão. Two studies were carried out: human observations using images exams such as scintilography, radiography and histopathology of the bone tissue using the Hematoxilin - Eosine, Ziehl Neelsen and the Gomori-Grocott stain and also by immunohistochemistry. An experimental study of chronic bone infection induced by the Leishmania in BALB/c mice, were carried out analyzed through the histopathology (Hematoxylin-Eosin). Results: the clinical analysis showed deformity in the upper and inferior extremities in 50% of the cases, with functional limitation. On the studies of images, the scintilography showed hipercaptation on the late phase, in different areas of the same region, characterizing multiples inflammation in the bone of all patients. The radiography demonstrated characteristics of bone partial reabsortion of the feet and hands, bilateral in six patients. Lithic changes were also detected in fingers, of two patients. The histopathology showed chronic osteomyelitis in four patients, with detection of the Leishmania ( L.) amazonensis parasite. The research for mycobacteria and fungi in the bone tissue were negatives. The experimental model showed chronic infection of the bone tissue, demonstrating that the cartilage was secondarily involved. Conclusion: all patients presented some type of bone changes. The deformities were located in the extremities in six patients. The scintilography of the bone and radiography were important for localization and follow up of the bone lesions. The histopathological exams showed the relationship between Leishmania (L) amazonensis and bone infection, characterizing chronic osteomyetitis. We proposed that the Leishmania (L) amazonensis should be included as agent of chronic osteomyelitis

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The mechanisms for the development of mucosal leishmaniasis are poorly known, but it is possible that proteins associated with virulence of the parasite, such as META2 LRR17 and/or related with the induction of a strong immune response, such as STI and TSA, participate in the pathogenesis disease, causing the appearance of metastases in the mucosa. Objective: To evaluate the expression of proteins META2, LRR17, STI1 and TSA in promastigotes and amastigotes of Leishmania (Viannia) braziliensis derived from cutaneous or mucosal lesions. Methods: It was used three isolates from cutaneous lesions of patients (JCJ8c, and RPL5c SMB7c) and three isolates from mucosal lesions (ASL9m, and JBC8m PPS6m). Amastigotes of the isolates were obtained after inoculation of biopsies in mice knockout in interferon gamma and promastigotes in logarithmic or stationary phase obtained in culture in Grace's medium. The kinetics of growth in culture of isolates was performed by counting daily over ten days in the flow cytometer. The expression of proteins of each isolate was assessed by immunoblotting technique and by flow cytometry, the latter being used only to evaluate the expression of proteins whose expression was significant difference between isolates from cutaneous or mucosal lesions. Results: Promastigotes in stationary phase of the isolates SMB7c and JBC8m were the most expressed the protein META2. The greatest expression of this protein in parasites coincided with more severe lesions, since despite of isolated SMB7c being of cutaneous origin, the patient also presented mucosal lesion, and in the isolated JBC8m the patient presented return of lesions. Proteins LRR17 and STI1 were not expressed in significant amount in both promastigotes and amastigotes of different isolates. TSA protein was expressed at higher levels in promastigotes stationary phase and amastigotes of the xi isolates from patients with mucosal lesions, and this difference was also observed in flow cytometric analysis. Conclusion: The results suggest an association of META2 protein, which is related to the virulence of the parasite, with the generation of more severe lesions in the mucosal, since the highest expression of the protein was isolate from patients with mucocutaneous lesions and patients whose treatment was not effective. TSA, which is associated with antigenicity and virulence of the parasite was also expressed in greater amount in isolates from patients with mucosal lesions. The hypothesis is that, despite TSA protein to induce a protective immune response could be conferring protection in the Leishmania after entering the phagolysosomes by being an antioxidant protein. This protection favored the persistence of parasites and later generation of mucosal lesions. / Introdução: A Leishmania (Viannia) braziliensis é o agente etiológico mais frequente da leishmaniose tegumentar no Brasil. Cerca de 1 a 10% dos pacientes infectados com essa espécie de parasito desenvolvem a leishmaniose mucosa, cujas lesões são progressivas, destrutivas e caracteriza-se por uma forte resposta imune específica. Os mecanismos para o desenvolvimento da leishmaniose mucosa são pouco conhecidos, porém é possível que proteínas associadas à virulência do parasito, como a META2 e o LRR17 e /ou relacionadas com a indução de uma forte resposta imune, como a STI e a TSA, participem da patogênese da doença, ocasionando o aparecimento de metástase na mucosa. Objetivo: Avaliar a expressão das proteínas META2, LRR17, STI1 e TSA em formas promastigotas e amastigotas de Leishmania (Viannia) braziliensis oriundas de lesões cutâneas ou mucosas. Métodos: Foram utilizados três isolados oriundos de lesões cutâneas de pacientes (JCJ8c, RPL5c e SMB7c) e três isolados oriundos de lesões mucosas (ASL9m, JBC8m e PPS6m). Formas amastigotas dos isolados foram obtidas após o inóculo das biópsias em camundongos deficientes em interferon gama e as formas promastigotas em fase estacionária ou logarítmicas obtidas em cultura em meio de Grace. A cinética do crescimento dos isolados em cultura foi realizada através de contagem diária durante dez dias em citômetro de fluxo. A expressão das proteínas de cada isolado foi avaliada através da técnica de immunoblotting e por citometria de fluxo, sendo esta última utilizada somente para avaliar a expressão de proteínas cuja diferença na expressão foi significante entre os isolados de lesões cutâneas ou mucosas. Resultados: Promastigotas em fase estacionária dos isolados SMB7c e JBC8m foram as que mais expressaram a proteína META2. A maior expressão desta proteína nos parasitos coincidiu com lesões mais graves, visto que o isolado SMB7c apesar de ser de origem cutânea, o paciente apresentou também lesão na mucosa e no isolado JBC8m o paciente teve o retorno das lesões. As proteínas LRR17 e STI1 não foram expressas em quantidades significativamente diferentes tanto em promastigotas quanto em amastigotas dos diferentes isolados. A proteína TSA foi expressa em maior quantidade nas formas promastigotas em fase estacionária e em amastigotas dos isolados oriundos de pacientes com lesão mucosa, sendo que essa diferença também foi observada na análise citométrica. Conclusão: Os resultados sugerem uma associação da proteína META2, que está relacionada com a virulência do parasito, com a geração de lesões mais graves nas mucosas, visto que a maior expressão da proteína foi em isolados de pacientes com lesão mucocutânea e de pacientes que o tratamento não foi eficaz. A TSA, que está associada à antigenicidade e também virulência do parasito foi mais expressa em isolados oriundos de pacientes com lesão mucosa. A hipótese é que, a proteína TSA apesar de induzir uma resposta imune protetora, estaria conferindo proteção da leishmânia após a entrada no fagolisossomo por ser uma proteína antioxidante. Esta proteção favorecia a persistência dos parasitos e mais tarde a geração de lesões na mucosa.

Visceral leishmaniasis is a severe systemic illness and early case management is important for the avoidance complications and control of the disease. Improving health workers’ knowledge on leishmaniasis is essential in improving the control programme. A quantitative, retrospective study of patient records and descriptive, explorative study of health care professionals’ knowledge on leishmaniasis were conducted. Data was collected from patient records (n=299) using a structured audit tool and from health care professionals (n=55) by means of a structured questionnaire. The study findings highlight that the commonest clinical manifestations of visceral leishmaniasis are fever and splenomegaly. Severe malnutrition and HIV co-infection contribute to mortality. The findings indicate the need for training to improve health care professionals’ awareness of visceral leishmaniasis. Leishmaniasis disease surveillance and support by the regional and district heath offices should be improved / Health Studies / M.A. Public Health (MPH)

Plasmid DNA (pVAX1-NH36) was encapsulated in nanoparticles of poly-dL-lactic-coglycolic ( PLGA) functionalized with polyethylene glycol ( PEG) and folic acid (PLGA-PEG-FA) without losing integrity. PLGA-PEG-FA nanoparticles loaded with pVAX1-NH36 (pDNA-NPs) were prepared by using a double emulsification-solvent evaporation technique. PLGA-PEG-FA synthesis was verified by FT-IR and spectrophotometry methods. pVAX1-NH36 was replicated in Escherichia coli (E. coli) cell cultures. Atomic force microscopy (AFM) analysis confirmed pDNA-NPs size with an average diameter of 177-229 nm, depending on pVAX1-NH36 loading and zeta potentials were below 24 mV for all preparations. In vitro release studies confirmed a multiphase release profile for the duration of more than 30-days. Plasmid release kinetics were analyzed with a release model that considered simultaneous contributions of initial burst and degradation-relaxation of nanoparticles. Fitting of release model against experimental data presented excellent correlation. This mathematical analysis presents a novel approach to describe and predict the release of plasmid DNA from biodegradable nanoparticles.