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Avaliação do lactato sérico, da saturação venosa central de oxigênio e da diferença venosa-arterial de dióxido de carbono na predição da mortalidade em pacientes vítimas da síndrome pós-parada cardiorrespiratória

Riveiro, Diego Fontoura Mendes January 2014 (has links)
Introdução: Os marcadores de hipoperfusão e disóxia tecidual predizem a mortalidade em pacientes sépticos, traumatizados e queimados. O presente estudo avaliou a capacidade do lactado sérico, da saturação venosa central (ScvO2) e da diferença venosa-arterial de dióxido de carbono (GapCO2) na predição da mortalidade da síndrome pós-parada cardiorrespiratória (pós-PCR). Método: Estudo observacional prospectivo. Avaliação seriada do lactato, da depuração do lactato (Clac), do GapCO2 e da ScvO2 nas primeiras 72hs pós-PCR. Considerando o nível de significância estatística um p-valor < 0,05, bicaudal, com intervalo de confiança de 95% estimando um poder de 80%. Resultados: Foram alocados 54 pacientes, média de idade 63,4+14,9 anos dos quais 61,1% eram homens. A PCR foi intra-hospitalar em 94,4% e extra-hospitalar em 5,6% dos casos. PCR por ritmo não-chocável ocorreu em 68,5% dos eventos. No geral a mediana de tempo de retorno à circulação espontânea foi de 8,5 [5-15] minutos. SAPS3 82+16,5 com mortalidade de 75,9% em 28 dias. Entre os marcadores utilizados apenas o lactato, a partir da 6ª hora, e o Clac, em 6, 12 e 24hs, foram associados à mortalidade em 28 dias produzindo uma área sobre a curva ROC de 0,797 (lactato 6ª hora) e 0,717 (Clac 6hs). Em relação à mortalidade em 24 e 72hs, novamente, apenas o lactato e o Clac foram associados ao desfecho. Conclusão: O lactato sérico e o Clac foram superiores à ScvO2 e ao GapCO2 na predição da mortalidade da síndrome pós-PCR.
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Avaliação do lactato sérico, da saturação venosa central de oxigênio e da diferença venosa-arterial de dióxido de carbono na predição da mortalidade em pacientes vítimas da síndrome pós-parada cardiorrespiratória

Riveiro, Diego Fontoura Mendes January 2014 (has links)
Introdução: Os marcadores de hipoperfusão e disóxia tecidual predizem a mortalidade em pacientes sépticos, traumatizados e queimados. O presente estudo avaliou a capacidade do lactado sérico, da saturação venosa central (ScvO2) e da diferença venosa-arterial de dióxido de carbono (GapCO2) na predição da mortalidade da síndrome pós-parada cardiorrespiratória (pós-PCR). Método: Estudo observacional prospectivo. Avaliação seriada do lactato, da depuração do lactato (Clac), do GapCO2 e da ScvO2 nas primeiras 72hs pós-PCR. Considerando o nível de significância estatística um p-valor < 0,05, bicaudal, com intervalo de confiança de 95% estimando um poder de 80%. Resultados: Foram alocados 54 pacientes, média de idade 63,4+14,9 anos dos quais 61,1% eram homens. A PCR foi intra-hospitalar em 94,4% e extra-hospitalar em 5,6% dos casos. PCR por ritmo não-chocável ocorreu em 68,5% dos eventos. No geral a mediana de tempo de retorno à circulação espontânea foi de 8,5 [5-15] minutos. SAPS3 82+16,5 com mortalidade de 75,9% em 28 dias. Entre os marcadores utilizados apenas o lactato, a partir da 6ª hora, e o Clac, em 6, 12 e 24hs, foram associados à mortalidade em 28 dias produzindo uma área sobre a curva ROC de 0,797 (lactato 6ª hora) e 0,717 (Clac 6hs). Em relação à mortalidade em 24 e 72hs, novamente, apenas o lactato e o Clac foram associados ao desfecho. Conclusão: O lactato sérico e o Clac foram superiores à ScvO2 e ao GapCO2 na predição da mortalidade da síndrome pós-PCR.
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Desenvolvimento e caracterização de dispositivo de PLLA/Trietil-Citrato associado à derme suína acelular para reparação de lesões cutâneas / Development and characterization of PLLA/Triethyl citrate device associated to acellular dermal matrix to repair cutanous wounds

Cherutti, Giselle 20 August 2018 (has links)
Orientador: Eliana Aparecida de Rezende Duek / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Mecânica / Made available in DSpace on 2018-08-20T13:28:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cherutti_Giselle_M.pdf: 10018129 bytes, checksum: f1dee789d5fd5395442f06833f2c1fa7 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Um dos desafios da Engenharia Tecidual é o de promover um melhor funcionamento de órgãos e tecidos danificados por doenças ou traumas. Com o objetivo de desenvolver um dispositivo bifásico para futura regeneração dérmica e aplicação na Engenharia Tecidual e Medicina Regenerativa, cultivou-se células fibroblásticas da linhagem VERO sobre uma matriz dérmica suína acelular associada a um polímero biorreabsorvível, poli (L-ácido láctico) (PLLA), com adição de um plastificante, o trietil citrato de sódio (TCS). Para a realização da pesquisa, membranas PLLA-TCS e PLLA puro foram preparadas e caracterizadas através de Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV), Ensaio Dinâmico Mecânico pelo Módulo de Tração, Espectroscopia na região do Infravermelho com Transformada de Fourier (FTIR), Ressonância Magnética Nuclear (RMN 13C e 1H), Ângulo de Contato e Calorimetria Exploratória Diferencial (DSC). Os resultados mostraram que as membranas de PLLA- TCS, tornaram-se porosas e mais hidrofílicas em relação as membranas de PLLA puro, o que aumentou sua interação com as células fibroblásticas. Após a associação das membranas de PLLA-TCS à derme suína, as amostras foram analisadas por meio de Técnicas Histológicas e Microscopia Confocal para avaliar a presença de fibras colágenas e sua organização no arcabouço. Em seguida realizou-se cultura de células fibroblásticas sobre o dispositivo bifásico após 24 horas e 2 dias de cultivo para ensaios de Viabilidade Celular, e posteriormente Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV). Os resultados obtidos pelos ensaios mecânicos e biológicos comprovaram que o material apresentou interação suporte-célula, principalmente devido a sua porosidade e afinidade celular apresentada pela composição estrutural da matriz dérmica, sendo atóxico às células VERO. O material atuou como substrato celular, sendo que a proliferação das células VERO foi maior em comparação com a placa de cultivo (controle), havendo infiltração celular. Concluí-se assim, que o dispositivo estudado apresenta potencial para ser utilizado como um substituto dérmico para implantes em áreas de queimaduras extensas, por ser altamente poroso, promovendo assim, maior migração, adesão e crescimento celular ao mesmo tempo em que o dispositivo é degradado pelo organismo. A capacidade de deformação apresentada pelo futuro substituto dérmico também auxilia em sua implantação, por facilitar o procedimento cirúrgico, que muitas vezes necessita distender um pouco o material para o total recobrimento da lesão; ou as movimentações naturais da pele após o implante. Além disso, o dispositivo minimiza as chances de contração do enxerto, por ser constituído por um componente dérmico / Abstract: One of the challenges of the Tissue Engineering is to promote a better functioning of organs and tissues damaged by diseases or traumas. With target for developing a biphasic device for future regeneration and dermal application in Tissue Engineering and Regenerative Medicine, fibroblasts from VERO cell line were cultivated on a porcine acellular dermal matrix associated to a bioresorbable polymer (PLLA) with the addition of a plasticizer (TCS). For this present study, PLLA-TCS membranes and pure PLLA were prepared and analyzed by means of characterization tests such as Scanning Electron Microscopy (SEM), Dynamical Mechanical Analysis (DMA), Spectroscopy of the Fourier Transform Infrared, Nuclear Magnetic Ressonance (NMR 13C e 1H), Contact Angle and Differential Scanning Calorimetry (DSC). The results showed that the PLLA-TCS, became porous and more hydrophilic compared to pure PLLA, which increased its interaction with the fibroblast cells. After the association of the PLLA-TCS to the porcine dermal matrix, the samples were analyzed by Histological Techniques and Confocal Microscopy to evaluate the presence of collagen fibers and their organization within scaffold. Afterwards, a culture of fibroblasts cell on the biphasic device was performed after 2 days and 24 hours of cultivation the Cellular Viability test was done and posteriorly Scanning Electron Microscopy (SEM). The results of the biphasic device in relation to mechanical and biological tests showed the cell-support interaction, through the analysis of viability, cell morphology and structural organization of collagen fibers and polymer structure, are nontoxic to VERO cells. The material behaves as a cell substrate where proliferation of VERO cells and their infiltration was higher compared to the cell culture plate. It can therefore be concluded that the studied device has the potential to be used as a substitute for dermal implants in areas of extensive burns, for being highly porous, thus promoting increased migration, adhesion and cell growth while the device is degraded by the body. The device deformation capacity also helps in the substitute implantation for facilitating the surgical procedure which often need to stretch the material for coverage of the injury completely or natural movements of the skin after implantation. Furthermore, the device minimizes the chances of skin graft contraction as the gadget consists of a dermal component / Mestrado / Materiais e Processos de Fabricação / Mestre em Engenharia Mecânica
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Avaliação comparativa de diferentes aditivos na prevenção da acidose láctica ruminal em bovinos de corte / Comparative evaluation of different additives in the prevention of rumen lactic acidosis in beef cattle

Oliveira, Francisco Leonardo Costa de 26 April 2018 (has links)
Objetivou-se compreender melhor o modelo de indução de acidose láctica ruminal (ALR) com sacarose destacando-se aspectos básicos da fermentação ruminal e suas consequências, assim como avaliação comparativa da eficácia de dois aditivos (Virginiamicina VM e Monensina MON), associados ou não, na prevenção desta enfermidade em bovinos adultos de corte. Para tal, foram utilizados 30 fêmeas da raça Nelore, providas de cânula ruminal, com cerca de 413 kg de peso corpóreo. Os animais foram mantidos em baias individuais e alimentados com dieta basal composta de 75% de feno de capim de coast-cross e de 25% de ração concentrada comercial, por 30 dias antes da indução de ALR. Durante esse período os bovinos foram distribuídos em cinco grupos iguais de seis animais cada, assim constituídos: controle (CON); MON 30 ppm; VM 25 ppm; VM 34 ppm e MON 30 ppm + VM 25 ppm. Os aditivos foram administrados numa mistura de 500 g fubá, antes do oferecimento do alimento. Em seguida, foi realizada indução individual de ALR com uso de sacarose de acordo com peso metabólico corrigido, administrada pela cânula ruminal. Foram obtidas amostras de conteúdo ruminal, sangue, urina e fezes, assim como realizado exame físico nos seguintes momentos: zero (basal) e após três, seis, 12 e 18 horas da indução. Foi realizada análise de variância (Teste F) dos dados que obedeceram à distribuição paramétrica, e utilizado o comando Proc mix para medidas repetidas no tempo de duas vias considerando os fatores tratamento, tempo e interação entre tratamento e tempo. Alguns dados foram submetidos ao teste T de Student. Os dados que não obedeceram a distribuição paramétrica foram avaliados pelos testes de Kruskal-Wallis e qui-quadrado. Para o estudo da relação entre duas variáveis foi determinado os índices de correlação e determinação. Ocorreu acidose ruminal intensa, por grande produção inicial de ácidos graxos de cadeia curta (AGCC), seguido de ácido láctico, com predomínio do isômero L sobre o D, os quais com a glicose gerada na fermentação provocaram aumento de osmolaridade nesse conteúdo. A acidose sistêmica foi de grau moderado em pequena parte dos bovinos, com presença de desidratação num expressivo número de animais. Boa parte dos bovinos tratados (n =15) apresentavam depressão nervosa e desidratação. Ocorreu pontualmente um quadro de hipertermia no auge da fermentação ruminal. Os melhores resultados preventivos da ALR foram obtidos com a associação VM + MON, a qual postergou a produção de ácido láctico, quer seja pela menor produção deste, como pela conversão de ácido láctico L em ácidos acético e propiônico. Ao término do experimento essa associação promoveu maior pH e menor acúmulo de ácido láctico L, assim como viabilizou que um menor número de animais necessitassem ser tratados, em relação ao grupo controle. As duas diferentes doses de VM tiveram resultados intermediários, seguidos da MON, a qual não se recomenda como único aditivo com fins de prevenção da ALR. / The objective was to better understand the induction model of rumen lactic acidosis (RLA) with sucrose, highlighting the basic aspects of ruminal fermentation and its consequences, as well as comparative evaluation of the efficacy of two additives (Virginiamycin VM and Monensin MON), associated or not, in the prevention of acidosis in adult beef cattle. For this purpose, 30 Nellore ruminally-cannulated females were used, with average body weight of about 413 kg. The animals were kept in individual stalls and fed a basal diet composed of 75% coast-cross grass hay and 25% commercial concentrated feed for 30 days prior to RLA induction. During this period the cattle were distributed into five equal groups of six animals each, as follows: control (CON); MON 30 ppm; VM 25 ppm; VM 34 ppm and MON 30 ppm + VM 25 ppm. The additives were provided in a 500 g corn meal before the feed was offered. Subsequently, individual RLA induction with sucrose was performed according to corrected metabolic weight, via ruminal cannula. Samples of rumen contents, blood, urine and feces were collected, and physical examination at: zero (baseline) and after three, six, 12 and 18 h after induction. Variance analysis (Test F) of the data that obeyed the parametric distribution was performed, and the Proc mix command was used for repeated measurements in two-way time considering the factors treatment, time and interaction between treatment and time. Some data were submitted to Student\'s t-test. The data that did not obey the parametric distribution were evaluated by the Kruskal-Wallis and chi-square tests. The correlation and determination indices were determined for the study of the relationship between two variables.. A severe ruminal acidosis occurred due to the large initial production of short chain fatty acids (SCFA), followed by lactic acid, with predominance of the L over D-isomer, which with the glucose generated in the fermentation caused an increase in osmolarity in this content. Systemic acidosis was moderate in a small number of cattle, with dehydration in an expressive number of animals. Most treated cattle (n =15) presented nervous depression and dehydration. A temporary hyperthermia occurred at the peak of ruminal fermentation. The best results of RLA prevention were obtained from VM + MON association, which postponed the lactic acid production, either by its lower production, or by the conversion of L-lactic acid in in acetic and propionic acids. At the end of the experiment, this association promoted greater pH and lower L-lactic acid accumulation, and a smaller number of animals needed to be treated, compared to the control group. The two different doses of VM had intermediate results, followed by MON, which is not recommended as a single additive for the RLA prevention.
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Efeito do exercicio relativo aos limiares de lactato sobre a excrecao urinaria de albumina no diabete melito insulino-dependente

Bertoluci, Marcello Casaccia January 1990 (has links)
Este trabalho ob.jetiva estudar a excreçào de albumina urinária em resposta ao exercicio em pacientes com diabete mêlito insulina- dependente com excrecão basal normal (<15 ug/minl obtidas em 3 c o letas no período noturno. Devido a variacôes da capacidade fisica individual. procura-se adaptar as cargas de esforço empregadas, relacionando-as com os limiares de lactato (1 e 2), obtidos através da execucão inicial de um teste de esforco, em cicloergbmetro , com determinacões da concentração de lactato em repouso e à cada mudanca de ca.rga, até a exaustão. O primeiro limiar ( 11) é definido como a carga ( em Watts )correspondente ao momento em gue a concentração de lactato sanguíneo supera os valores de repouso -1 (2,0 rnMol . l ) e ocorre um aumento correspondente do volume expirado por minuto. O segundo limiar (12) é definido como a carga correspondente ao momento em que a velocidade de aumento da c oncentração de lactato se torna ainda maior (expressa através de uma guebra na curva da concentração de lactato eru fun<;·ão do tempo de teste ) e é acompanhadada por um aumento do volume de ar expirado por minuto. São estudados 10 pacientes masculinos com diabete mélito insulinodependente, sem evidências de nefropatia 7 incipiente. neuropatia autônoma, hipertensão arterial. insuficiência cardiaca ou infeccão urinária e 10 individuas controles do mesmo sexo e idade. Após determinados os limiares 1 e 2. os mesmos sgo submetidos a três testes de 20 minutos de duracão: a. um teste sub-máximo com carga correspondente à 90~/, do limiar 1. b. um teste submáximo com carga correspondente à 90% do limiar 2 e c. um teste máximo adaptado. Nestes testes coleta-se amostras de urina para a dosagem de albumina antes, imediatamente após e 60 minutos após o final do exercicio. O fluxo urinário era mantido constante atê o inicio através de hidratacão com 250 ml de água a cada 20 minutos. Os grupos são semelhantes com rela9ão à idade, peso, altura. indice de massa corporal. creatinina sêrica, excrer.;ão basal de albumina e capacidade fisica máxima. A média das cargas utilizadas nos 3 testes são semelhantes. embora apresentem razoável variabilidade . Os resultados mostram gue ocorre aumento significativamente maior da excrecáo de albumina em relação ao grupo controle somente no teste máximo adaptado (diferenca entre o repouso e o perlodo pós-exercicio em ug/min): 70,2 (19,3) para os controles e 150.4 (30,5) para os pacientes com diabete mélito média (erro-padrão). p<0.05. ). No teste submáximo a 90% do limiar 2. ocorre aumento significativo de excreQão de albumina em relação ao repouso em ambos grupos, mas não há diferença significativa entre os mesmos. No teste submáximo a 90% do limiar 1 não ocorre aumento da excreção de albumina em nenhum dos grupos em resposta ao exercício . Estes resultados sugerem a existência de maior· permissividade glomerular à passagem de albumina em pacientes com diabete rnélito sem microalbuminúria, apenas guando estes efetuam um exercicio extenuante. Este fenômeno pode ser devido a um maior aumento da pressão intraglomerular no grupo diabético em resposta ao exerc1cio. comparativamente aos controles, ou a alterações estruturais precoces da membrana glomer ular. cuja alteracão funcional só é evidenciada no esforço intenso. Sugerimos a utilização do teste máximo. em substituição aos testes submáximos anter1ormente propostos, como meio auxiliar na investigação de possíveis alterações hemodinámicas renais e na potencial detecção de futuros casos de nefropatia diabética.
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Alterações metabólicas no líquor de pacientes com traumatismo cranioencefálico grave

Modkovski, Rafael January 2013 (has links)
Resumo não disponível
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Desarrollo de bionanocompuestos en base a poli(ácido láctico) y plastificantes de alta compatibilidad para el envasado de alimentos

Burgos, Nuria 26 April 2013 (has links)
No description available.
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Alterações metabólicas no líquor de pacientes com traumatismo cranioencefálico grave

Modkovski, Rafael January 2013 (has links)
Resumo não disponível
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Alterações metabólicas no líquor de pacientes com traumatismo cranioencefálico grave

Modkovski, Rafael January 2013 (has links)
Resumo não disponível
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Characterization of bacteriocinogenic Enterococcus hirae and Pediococcus pentosaceus isolated from artisanal cheese and their bacteriocins / Caracterização dos isolados bacteriocinogênicos Enterococcus hirae e Pediococcus pentosaceus obtidos de queijo artesanal e suas bacteriocinas

Cavicchioli, Valéria Quintana 26 July 2018 (has links)
Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2018-09-21T15:03:52Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1299382 bytes, checksum: 25fc4d8303ddcd9bca8411b22d10cc7b (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-21T15:03:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1299382 bytes, checksum: 25fc4d8303ddcd9bca8411b22d10cc7b (MD5) Previous issue date: 2018-07-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Os produtos lácteos possuem uma microbiota autóctone bastante diversificada, na qual o grupo das Bactérias Ácido Lácticas (BAL) é de notável relevância devido às suas características benéficas, tecnológicas e bioconservantes, atraindo o interesse para sua utilização em diversos segmentos biotecnológicos, em especial na indústria de alimentos. O objetivo deste trabalho foi isolar e identificar BAL bacteriocinogênicas de queijos artesanais, caracterizando aspectos ligados à produção e purificação das bacteriocinas, inocuidade, potencial benéfico dos isolados e propriedades inibitórias contra Listeria spp. As cepas bacteriocinogênicas Enterococcus hirae ST57ACC e Pediococcus pentosaceus ST65ACC foram isoladas a partir da técnica de tripla camada e identificadas por metodologias fenotípicas e moleculares. As bacteriocinas produzidas por E. hirae ST57ACC e P. pentosaceus ST65ACC demostraram estabilidade em ampla faixa de pH e temperatura, e foram inativadas após tratamento com enzimas proteolíticas, comprovando sua natureza proteica. Tratamentos com EDTA, SDS, NaCl e Tween 80 não afetaram a atividade das bacteriocinas. Os sobrenadantes de ambos os isolados foram capazes de inibir Listeria innocua e diversas cepas de L. monocytogenes pertencentes à diferentes sorogrupos e obtidas de fontes distintas, inibindo completamente o desenvolvimento de L. monocytogenes após 12 h. Em co-culturas das cepas bacteriocinogênicas com a cepa indicadora L. monocytogenes 422 em leite desnatado, observou-se que E. hirae ST57ACC foi capaz de controlar a multiplicação do patógeno após 48 h. E. hirae ST57ACC e P. pentosaceus não apresentaram resultados positivos para 25 genes relacionados a bacteriocinas conhecidas, indicando que podem produzir novas bacteriocinas. As cepas de E. hirae ST57ACC e P. pentosaceus ST65ACC foram também avaliadas quanto ao seu potencial benéfico e segurança: ambos os isolados permaneceram viáveis após tratamento em condições gastrointestinais simuladas, exibindo altos níveis de auto e co-agregação com L. monocytogenes e níveis variados de hidrofobicidade, demonstrando que E. hirae ST57ACC e P. pentosaceus ST65ACC podem prevenir potencialmente o estabelecimento de infecções pelo patógeno. Por meio da metodologia de agar-spot, avaliou-se a possibilidade de interferência de 33 medicamentos comerciais, de diferentes grupos sobre a multiplicação de E. hirae ST57ACC e P. pentosaceus ST65ACC, revelando que apenas antiinflamatórios e medicamentos contendo loratadina e cloridrato de propranolol apresentaram atividade inibitória sobre as cepas. Testes fenotípicos para determinação da susceptibilidade antimicrobiana demonstraram que E. hirae ST57ACC e P. pentosaceus ST65ACC foram resistentes à vancomicina, oxacilina e sulfa/trimetoprim dentre os 11 antibióticos testados pelo método de disco difusão. Com relação à PCR, poucos genes relacionados à resistência a antibióticos foi foram identificados. Nenhum dos isolados amplificou genes de produção de aminas biogênicas e nem apresentou produção das mesmas. A expressão de diferentes elementos do sistema de transporte ABC e metabolismo de açúcares foi identificada para ambos os isolados. Variações na proporção de inóculo não influenciaram a taxa de multiplicação de E. hirae ST57ACC nem de P. pentosaceus ST65ACC, no entanto, a produção de bacteriocinas foi detectada apenas 9 horas após a inoculação das cepas, quando inoculadas nas proporções de 5% e 10%. Adicionalmente, verificou-se que a densidade celular das cepas bacteriocinogênicas esteve correlacionada à produção de bacteriocinas em sistemas de fermentação tradicional e fermentação com controle de pH a 5,5 e agitação. E. hirae ST57ACC e P. pentosaceus ST65ACC foram capazes de se multiplicar e produzir bacteriocinas na presença de xilo-oligossacarídeos após 6 horas de incubação, porém em níveis reduzidos quando comparados ao cultivo em meio MRS. Por fim, as bacteriocinas produzidas por E. hirae ST57ACC e P. pentosaceus ST65ACC foram purificadas a partir de diferentes metodologias. A bacteriocina produzida por P. pentosaceus ST65ACC foi purificada em duas etapas, com rendimento final de 101,33 revelando- se um peptídeo com massa molecular de 3,5 a 8,5 kDa, determinado por SDS-PAGE. Em contrapartida, um protocolo de três etapas foi empregado na purificação da bacteriocina produzida por E. hirae ST57ACC, com rendimento final de 3,05. Adicionalmente, uma fração semi-purificada foi testada com a linhagem celular HT- 29, demonstrando que a bacteriocina não apresenta efeitos citotóxicos contra células humanas, sendo considerada segura neste aspecto. Os dados obtidos neste trabalho indicam que os isolados E. hirae ST57ACC e P. pentosaceus ST57ACC podem ser considerados importantes ferramentas biotecnológicas na produção de bacteriocinas de interesse ao controle de L. monocytogenes e na biopreservação de alimentos. / Dairy products present a rich and diverse autochthonous microbiota, in which Lactic Acid Bacteria (LAB) are relevant, due to their beneficial, technological and biopreservative features, attracting the interest for their biotechnological application, in food industry, pharmaceutic area and human and veterinary medicine fields. The aim of this study was to isolate and to identify bacteriocinogenic LAB from artisanal cheeses, characterizing some aspects linked to bacteriocin production and purification, safety and beneficial potential of the isolates, as well as their inhibitory properties against Listeria spp. Bacteriocinogenic strains Enterococcus hirae ST57ACC and Pediococcus pentosaceus ST65ACC were isolated by using the triple- layer technique and identified by phenotypical and molecular methods. Bacteriocins produced by E. hirae ST57ACC and P. pentosaceus ST65ACC were stable in a wide range of pH and temperature, losing their activity after treatment with proteolytic enzymes, confirming their proteinaceous nature. Treatments with EDTA, SDS, NaCl and Tween 80 did not affect bacteriocin activity. Cell-free supernatants from both isolates were able to inhibit Listeria innocua and several L. monocytogenes strains, from different serogroups obtained from diverse sources, eliminating L. monocytogenes after 12 h. In co-culture experiments conducted in skimmed milk with the bacteriocinogenic isolates and the target strain L. monocytogenes 422, E. hirae ST57ACC controlled the target strain growth after 48 h. E. hirae ST57ACC and P. pentosaceus ST65ACC did not present positive results for 25 known bacteriocin related genes, indicating that they might express new bacteriocins. E. hirae ST57ACC e P. pentosaceus ST65ACC were also evaluated for their beneficial and safety features: both isolates remained viable after treatment replicating gastrointestinal conditions, showing high levels of auto and co-aggregation with L. monocytogenes and diverse levels of hydrophobicity, demonstrating that E. hirae ST57ACC and P. pentosaceus ST65ACC might prevent the establishment of infections caused by this pathogen. Interference of 33 commercial drugs from different groups on growth of E. hirae ST57ACC and P. pentosaceus ST65ACC was tested by agar-spot method, revealing that only anti-inflammatories and drugs containing loratadine and propranolol hydrochloride influenced the growth of bacteriocinogenic strains. Phenotypical tests employed to determine antibiotic susceptibility have shown that E. hirae ST57ACC and P. pentosaceus ST65ACC were resistant to vancomycin, oxacillin and sulfa/trimethoprim out of 11 antibiotics tested by disk-diffusion test, nonetheless low number of antibiotic resistance genes was observed by PCR analysis. None of the isolates amplified biogenic amines encoding genes neither presented phenotypical evidence of their production. Expression of different ABC transporters linked to bacteriocin export and sugar metabolism was detected, for both isolates. Changes in inoculum size did not influenced the growth of E. hirae ST57ACC and P. pentosaceus ST65ACC; however, bacteriocin production was affected, and bacteriocins were detected only after 9 h with inoculation at 5% and 10% of bacteriocinogenic strains. Additionally, it was observed that cell density of both bacteriocinogenic strains was linked to bacteriocin production in traditional and pH at 5.5 and agitation controlled fermentation continuous. E. hirae ST57ACC and P. pentosaceus ST65ACC were capable to grow and produce bacteriocins in the presence of xylo-oligossacharides after 6 h of incubation, but in lower levels than those obtained with cultivation in MRS broth. Finally, E. hirae ST57ACC and P. pentosaceus ST65ACC were purified from different methods. The bacteriocin produced by P. pentosaceus ST65ACC was purified in two-steps, with final yield of 101.33, recognized as a 3.5 to 8.5 kDa peptide, determined by Tricine-SDS-PAGE. In contrast, a three-step-protocol was used to purify the bacteriocin produced by E. hirae ST57ACC, with final yield of 3.05. Moreover, a semi-purified fraction of E. hirae ST57ACC bacteriocin was tested in HT-29 cell-line, demonstrating no-cytotoxic effects in human cells, which means the bacteriocin can be considered safe in this aspect. Obtained data from this study indicate that E. hirae ST57ACC and P. pentosaceus ST57ACC may be considered as important biotechnological tools for bacteriocin production to control L. monocytogenes and as biopreservatives in food.

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