CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / As serpentes do gÃnero Bothrops sÃo responsÃveis pela maior parte dos acidentes ofÃdicos ocorridos no Brasil, representando um sÃrio problema de saÃde pÃblica pela freqÃÃncia com que ocorrem e pela morbidade e mortalidade que ocasionam. Envenenamento por serpente Bothrops atrox conduz à alteraÃÃo sistÃmica que à responsÃvel pela causa preliminar de morte apÃs acidente ofÃdico. Esse trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos farmacolÃgicos do veneno bruto da serpente Bothrops atrox (VBA) na perspectiva de elucidaÃÃo dos mecanismos fisiopatolÃgicos causados aos tecidos. Primeiramente, avaliou-se as aÃÃes do VBA no sistema de perfusÃo renal, no qual o ÃrgÃo era exposto à peÃonha de B. atrox para se avaliar as possÃveis alteraÃÃes dos parÃmetros renais. ApÃs a perfusÃo renal, os rins foram submetidos à anÃlise histolÃgica. Os parÃmetros foram analisados pelo ANOVA e Student t-test, com p<0,005. Os resultados encontrados demonstraram que VBA promoveu diminuiÃÃo significativa na pressÃo de perfusÃo (PP) e na resistÃncia vascular renal (RVR). O fluxo urinÃrio (FU) e o ritmo de filtraÃÃo glomerular (RFG) aumentaram significativamente. Foi observado aumento e diminuiÃÃo do percentual de transporte de cloreto e sÃdio, respectivamente. As alteraÃÃes histolÃgicas dos rins perfundidos foram discretas, indicando presenÃa de material proteinÃceo nos glomÃrulos e tÃbulos. Realizou-se uma investigaÃÃo da participaÃÃo do Ãxido nÃtrico (NO) nos efeitos sistÃmicos causados por VBA, em um experimento in vivo. Houve um aumento na produÃÃo de nitrito no sangue dos animais tratados com VBA. Efetuou-se o bloqueio farmacolÃgico com L-NAME e o aumento na produÃÃo de nitrito foi abolida. AtravÃs desses resultados conclui-se que o VBA causa alteraÃÃo nos parÃmetros renais e induz aumento na produÃÃo de Ãxido. / Snakes of the genera Bothrops are the most responsible for ophidian accidents occurred in Brazil, representing a serious public health problem due to their frequency, morbity and mortality rates. Envenomation caused by the species Bothrops atrox leads to systemic complication, which is responsible for the preliminary cause of death after ophidian accident. The aim of this work was to evaluate the pharmacological effects of the crude venom of Bothrops atrox (VBA), in perspective of elucidating the physiopathological mechanisms occurred in the tissues. First of all, the actions of VBA were evaluated in the renal perfusion system, in which the organ was exposed to the venom of B. atrox to evaluate possible renal parameters alterations. After the renal perfusion, the kidneys were submitted to histological analysis. The parameters were analyzed by ANOVA and Student t-test, with p<0,005. The results showed that VBA decreased the perfusion pressure (PP) and renal vascular resistance (RVR) significantly as in contrast with the urinary flow (UF) and glomerular filtration rate (GFR) which had a significant increase. It was observed both increase and reduction of the percentage of chloride and sodium transport, respectively. The histological alterations of the perfused kidneys were discrete, indicating the presence of proteinaceous substance in the glomeruli and tubules. An investigation was made - in an in vivo experiment - into the participation of nitric oxide (NO) in the systemic effects induced by VBA. There was an increase of the nitrite production in the blood of animals that received the VBA treatment. Pharmacological blockade with L-NAME was carried out and the increase of the nitrite production was nullified. Due to these results, we conclude that VBA causes alterations on renal parameters and it induces increase of the oxide production.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Lectinas sÃo (glico)proteÃnas que podem reconhecer e se ligar reversivelmente a carboidratos ou a outras substÃncias derivadas de aÃÃcares. SÃo encontradas nos reinos vegetal e animal. Hypnea cervicornis à uma espÃcie de alga marinha vermelha encontrada no nordeste do Brasil da qual foi isolada a lectina H. cervicornis aglutinina (HCA), um polipeptideo que contÃm 90 resÃduos de aminoÃcidos (9193 Da) que se ligam especificamente a glicoproteÃnas do tipo mucina. O objetivo do presente trabalho foi estudar as atividades antiinflamatÃria e antinociceptiva, ainda nÃo exploradas, da HCA. Foram utilizados camundongos Swiss albinos (20-35g) ou ratos Wistar (150-250g). Para o estudo da atividade antiinflamatÃria da HCA, os ratos foram injetados e.v. somente com a lectina nas doses de 10-2; 10-1; 1 e 10 mg/Kg (peritonite) ou a dose de 1 mg/Kg em associaÃÃo com 5 mg/mL de mucina (1 mg/Kg). ApÃs esse procedimento, os animais foram avaliados nos modelo de peritonite induzida Cg (quimiotÃtico direto) ou por fMLP (quimiotÃtico indireto). HCA (10-1; 1 e 10 mg/Kg) inibiu a peritonite induzida por Cg e por fMLP. Observamos que na peritonite induzida por Cg: A administraÃÃo conjunta de HCA (1 mg/Kg) com mucina inibiu sua atividade antiinflamatÃria (p<0,05), sugerindo participaÃÃo do sÃtio lectÃnico nesta atividade; o aquecimento de HCA a 100oC, por 10 minutos, inibiu seu efeito antiinflamatÃrio, indicando a importÃncia de sua estrutura; a microscopia intravital mostrou que a HCA (10 mg/Kg) reduziu o rolamento e adesÃo de leucÃcitos; a lectina induziu a produÃÃo de Ãxido nÃtrico (NO, reaÃÃo de Griess) no soro; Aminoguanidina e L-Nitro-Arginina inibiram a atividade da HCA; HCA nÃo reduziu as concentraÃÃes de citocinas TNF-&#945; e IL-1 no peritÃnio. A pressÃo arterial e o leucograma dos animais nÃo foram alterados pela administraÃÃo de HCA. A lectina nÃo age diretamente sobre neutrÃfilos, pois nÃo inibiu a quimiotaxia in vitro induzida por agente quimiotÃtico (MIP-2). No edema de pata induzido por Dextrana ou Cg, HCA (1 mg/Kg) inibiu significativamente (p<0,05) apenas o edema de pata induzido por Cg. O efeito antiedematogÃnico da HCA foi prevenido pela administraÃÃo conjunta com mucina. HCA reduziu as contorÃÃes induzidas por Ãcido acÃtico e seu efeito antinociceptivo foi prevenido pela administraÃÃo conjunta com mucina. HCA diminuiu somente a segunda fase do teste da formalina. No teste da placa quente, HCA nÃo apresentou efeito. A lectina tambÃm nÃo alterou a atividade locomotora. A toxicidade sub-crÃnica foi avaliada pelo tratamento de ratos com HCA (1mg/kg), durante sete dias consecutivos, atravÃs de vÃrios parÃmetros: funÃÃes do rim (peso Ãmido, dosagem de creatinina e urÃia) e do fÃgado (peso Ãmido, avaliaÃÃo da cinÃtica da aspartato amino transaminase e alanina amino transaminase), coraÃÃo (peso Ãmido), estÃmago (peso Ãmido e avaliaÃÃo visual de possÃveis lesÃes), variaÃÃo de massa corporal dos animais tratados e leucograma. Os resultados obtidos nÃo mostraram qualquer alteraÃÃo dos parÃmetros avaliados, demonstrando que a HCA nÃo apresenta nenhuma toxicidade nos animais. Em conjunto, esses dados revelam que a HCA apresenta atividade antiinflamatÃria e antinociceptiva que supostamente podem ser explicadas por bloqueio direto competitivo com carboidratos ligantes de selectinas e/ou indireto, via produÃÃo de NO, que diminuem o rolamento e adesÃo de leucÃcitos sobre o endotÃlio. / Lectins are (glyco)proteins that can recognize and reversibly bind to carbohydrates or other substances derived from sugars. They are found throughout animal and vegetal kingdoms. Hypnea cervicornis is a species of marine red algae found in Northeast of Brazil from which was isolated the lectin Hypnea cervicornis aglutinin (HCA), a polypeptide containing 90 amino acid residues (9193 Da) that binds especifically to mucin-type glycoprotein. The objective of this work was to study the anti-inflammatory and anti-nociceptive activities of HCA not yet known. Albine Swiss mice (20-35g) and Wistar rats (150-250g) were used. For the study of HCA anti-inflammatory activity, the rats were injected (i.v.) with lectin alone in the doses of 10-2; 10-1; 1 e 10 mg/Kg (peritonitis) or a dose of 1 mg/Kg associated to 5 mg/mL of mucin (1 mg/Kg). Following this procedure, the animals were evaluated in the peritonitis model induced by Cg (direct neutrophil chemoatractant) or by fMLP (indirect neutrophil chemoatractant). HCA (10-1; 1 and 10 mg/Kg) inhibited Cg- and fMLP-induced peritonitis. In Cg-induced peritonitis it was observed that: the administration of HCA (1mg/Kg) in association with mucin inhibited its anti-inflammatory activity (p<0.05), suggesting the participation of the lectin site on this mechanism; heating HCA at 100oC, for 10 minutes, inhibited its anti-inflammatory effect, indicating the importance of its structure for that mechanism; the intravital microscopy showed that HCA reduced the rolling and adhesion of the leucocytes; the lectin induced the production of nitric oxide (NO Griess reaction) in serum; aminoguanidine and L-Nitro-arginin inhibited the HCA activity; HCA did not reduce the concentrations of TNF-&#945; and IL-1 in the peritoneum. The arterial pressure and the leukogram of the animals were not altered by the administration of HCA. The lectin does not act directly on neutrophils because it did not inhibit the in vitro chemotaxis induced by MIP-2, a chemotactic agent. In the carragenan (Cg)- or dextran-induced paw edema, HCA (1 mg/Kg) inhibited significantly (p<0.05) only the Cg-induced paw edema. The antiedematogenic effect of HCA was prevented when it was administered in association with mucin. HCA reduced the writhes induced by acetic acid and its antinociceptive effect was prevented by the association with mucin. HCA only decreased the second phase of formalin test. In the hot plate, HCA did not show any effects. The lectin did not alter the motor coordination. The HCA subcronic toxicity was evaluated treating rats with a dose of 1mg/Kg during seven days and analys of several parameters: kidney functions (wet weight, creatinin and urea serum concentrations), liver functions (wet weight, kinetic of serum aspartate aminotransferase and alanine aminotransferase), heart (wet weight) stomach (wet weight and visual evaluation of possible lesions), variation of body weight of treated animals and leukogram. The results showed no alterations of the evaluated parameters suggesting that HCA seems to be well tolerated by animals. The results taken together reveal that HCA presents anti-inflammatory and nociceptive activities which could be explained by direct competitive blockage with a common selectin carbohydrate ligand and/or indirectly, via NO production, which decrease of rolling and adhesion of leukocytes to endothelium.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Periodontitis, a relevant cause of teeth loss in adults, is a chronic inflammatory disease characterized by alveolar bone resorption and collagen fibers and cementum destruction. S-nitrosogluthathione (GSNO) is considered to be an NO donor and to act as a reservoir of NO in vivo. The objective of this study was to investigate the effect of GSNO in experimental periodontal disease (EPD). EPD was induced by a nylon thread ligature surgically placed around the cervix of the second left maxillary molars of female Wistar rats. Animals were treated with 50&#956;L GSNO (0,5, 2 or 10 mmol L-1), PVP or saline subgingivally 30 minutes before periodontits induction and daily until sacrifice on 11th day. The parameters analysed were alveolar bone loss (ABL), bone alkaline phosphatase, myeloperoxidase (MPO), cytokines levels (IL-1&#946; and TNF-&#945;), malondialdeyhyde (MDA), reduced glutathione (GSH) content, nitrite/nitrate levels, and immunohistochemistry for metalloproteinase (MMP-1/8), inducible nitric oxide syntase (iNOS) and nuclear factor-&#954;B (NF&#954;B). In order to confirm the anti-inflammatory and antioxidant effect of GSNO was used the peritonitis and paw edema models. Peritonitis was induced by injection of 1 mL carrageenan (500 &#956;L/cavity) or saline ip in naÃve rats or in rats that received saline, PVP or GSNO (0,5, 2 or 10 mmol L-1, ip) 1 hour prior to the carrageenan. After 4 hours, the animals were sacrificed for collection of the fluid peritoneal. Paw edema was induced by subplantar injection of carrageenan (500 &#61549;g/paw). Saline, PVP or GSNO (0,5, 2 or 10 mmol L-1, ip) were administered 1 hour before the inflammatory stimuli into the left hind paw. The animals were sacrificed 4 hours after the ip injection of carrageenan. The parameters analysed were volume of paw edema, migration of leukocytes for cavity peritoneal, MPO, cytokines (IL-1&#946; and TNF-&#945;), GSH and MDA. The GSNO in the concentrations of 0,5 and 2 mmol L-1 reduced ABL, MPO, inflammatory cytokines (IL-1&#946; and TNF â&#945;), nitrite/nitrate, and it increased GSH. GSNO 0,5 and 2 mmol L-1 also decreased the demarcation to MMP-1/-8, NOSi and NF -&#954;B. However, just GSNO 2 mmol L-1 reduced MDA. Results similar were found in the peritonitis and in the paw edema, added to the fact that GSNO 0,5 and 2 mmol L-1 decreased the volume of the paw edema and the migration of leukocytes and neutrophils to the cavity peritoneal. These results show that GSNO has a protective effect on the experimental periodontal disease, peritonitis and paw edema by reducing inflammation and oxidative stress. / A periodontite, importante causa de perda dentÃria em adultos, à uma doenÃa inflamatÃria crÃnica caracterizada pela reabsorÃÃo do osso alveolar e das fibras colÃgenas, bem como destruiÃÃo do cemento. O S-nitrosoglutationa (GSNO) à considerado um doador de NO e atua como reservatÃrio de NO in vivo. O objetivo do presente estudo foi investigar o efeito do GSNO na doenÃa periodontal experimental (DPE). A DPE foi induzida passando-se um fio de nÃilon 3.0 em torno do segundo molar superior esquerdo de ratos Wistar fÃmeas. Os animais foram tratados com 50 &#956;l GSNO (0,5, 2 e 10 mmol L-1), PVP (polivinil pirrolidona, diluente do GSNO) ou salina subgengivalmente 30 minutos antes da induÃÃo da periodontite e diariamente atà o dia do sacrifÃcio no 11 dia. Foram analisados os seguintes parÃmetros: Ãndice de perda Ãssea (IPO), fosfatase alcalina Ãssea (FAO), mieloperoxidase (MPO), dosagem de citocinas (IL-1&#946; e TNF-&#945;), malondialdeÃdo (MDA), glutationa reduzida (GSH), conteÃdo de nitrito/nitrato (NOx) e imunohistoquÃmica para metaloproteinase-1/-8 (MMP-1/-8), Ãxido nÃtrico sintase induzida (NOSi) e fator de transcriÃÃo nuclear-&#954;B (NF-&#954;B). A fim de confirmar o efeito antiinflamatÃrio e antioxidante do GSNO foram utilizados os modelos de peritonite e edema de pata. A peritonite foi induzida atravÃs da injeÃÃo de 1mL de carragenina ou salina (500 &#956;L) na cavidade peritoneal 1 hora apÃs a administraÃÃo intraperitoneal (i.p.) de salina, PVP ou GSNO (0,5, 2 ou 10 mmol L-1). ApÃs 4 horas, os animais foram sacrificados para coleta do fluido peritoneal. Para o edema de pata, salina, PVP ou GSNO (0,5, 2 ou 10 mmol L-1, i.p.) foram administrados uma hora antes da injeÃÃo de 0,1 mL de carragenina (500&#956;g/pata) ou salina por via subplantar (sp) na pata traseira esquerda de cada rata. O sacrifÃcio dos animais ocorreu 4 horas apÃs a injeÃÃo do estÃmulo inflamatÃrio. Os seguintes parÃmetros foram analisados: volume do edema da pata, migraÃÃo de leucÃcitos para cavidade peritoneal, MPO, IL-1&#946;, TNF-&#945;, GSH e MDA. O GSNO nas concentraÃÃes de 0,5 e 2 mmol L-1 reduziu o IPO, MPO, citocinas prÃ-inflamatÃrias IL-1&#946; and TNF-&#945;, nitrito/nitrato, e aumentou GSH. O GSNO nas concentraÃÃes de 0,5 e 2 mmol L-1 tambÃm diminuÃram a imunomarcaÃÃo para MMP-1/-8, NOSi e NF-&#954;B. Contudo, apenas GSNO 2 mmol L-1 diminuiu MDA. Resultados semelhantes foram encontrados na peritonite e no edema de pata, acrescido de que o GSNO 0,5 e 2 mmol L-1 diminuiu tanto o volume do edema de pata como a migraÃÃo de leucÃcitos e neutrÃfilos para a cavidade peritoneal. Esses resultados mostram que o GSNO possui efeito protetor na doenÃa periodontal experimental, no edema de pata e na peritonite atravÃs da reduÃÃo da inflamaÃÃo e do estresse oxidativo.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Lectinas podem ser definidas como proteÃnas de origem nÃo imune que possuem pelo menos um domÃnio nÃo catalÃtico que se liga reversivelmente de maneira especÃfica a mono ou oligossacarÃdeos. Dentre as lectinas de origem vegetal, as lectinas de leguminosas sÃo as mais estudas, em especial as lectinas pertencentes subtribo Diocleinae. As lectinas da subtribo Diocleinae apresentam um alto grau de similaridade em sua seqÃÃncia primÃria e estrutura tridimensional, mas apresentam diferentes intensidades em suas atividades biolÃgicas em que sÃo aplicadas, como a induÃÃo da produÃÃo de Ãxido nÃtrico. A estrutura da recÃm cristalizada lectina de Canavalia brasiliensis (ConBr) objetiva esclarecer como essas variaÃÃes ocorrem baseado na geometria dos resÃduos que compÃe o domÃnio de reconhecimento à carboidrato (DRC). A lectina de Canavalia brasiliensis foi purificada e cristalizada pelo mÃtodo de difusÃo de vapor a 293 K. Cristais adequados foram obtidos na condiÃÃo contendo 200 mM de cloreto de sÃdio, 100 mM de hepes pH 8.5 e 1.8 M e sulfato de amÃnio. O cristais apresentam um grupo espacial ortorrÃmbico I222, a cela unitÃria tem dimensÃes de a=68.3 Ã, b=73.0 Ã, c=99.5 à e Ãngulos de &#945; = &#946; = &#947; = 90Â, sendo observado um monÃmero na unidade assimÃtrica e um conteÃdo de 49.5 % de solvente. O refinamento satisfatÃrio apresentou um âRfactorâ e âRfreeâ de respectivamente 20.4% e 25.3%. Foram determinados parÃmetros no potencial de atividade biolÃgica registrada na literatura, onde a lectina de Canavalia maritima (ConM) tem alto potencial de induÃÃo a produÃÃo de Ãxido nÃtrico comparado com a lectina de Canavalia ensiformis (ConA) que tem um baixo potencial de induÃÃo. DiferenÃas significativas foram encontradas entre coordenadas dos resÃduos que compÃe o DRC de lectinas da subtribo Diocleinae, e comparando esses dados com os potenciais de atividade biolÃgica foi estipulado um padrÃo distinto de distancias para lectinas com alto e baixo potencial de induÃÃo. A lectina de Canavalia brasiliensis (ConBr) apresenta um padrÃo de distancias de uma Ãtima indutora de Ãxido nÃtrico como ConM, porÃm apresenta uma atividade inferior que ConA. As distancias da DRC explicam a diferenÃa na atividade, mas a ConBr se mostra um caso excepcional, onde uma avaliaÃÃo do volume do sÃtio mostra um sÃtio extremamente reduzido, o que explica sua discrepÃncia na atividade biolÃgica. / Lectins may be defined as proteins of nonimmune origin that have at least one non-catalytic domain that reversibly binds specifically to mono or oligosaccharides. Among plant lectins, legume lectins are the most studied, in particular those lectins belonging to subtribe Diocleinae. The lectins from subtribe Diocleinae show a high degree of similarity in their primary sequence and three-dimensional structure but have different intensities in their biological activities in which they are applied, such as induction of nitric oxide production. The structure of the newly crystallized lectin from Canavalia brasiliensis (ConBr) aims to clarify how these variations are based on the geometry of the residues that comprise the carbohydrate recognition domain (CRD). The lectin from Canavalia brasiliensis was purified and crystallized by vapor diffusion method at 293 K. Suitable crystals were obtained under the condition containing 200 mM sodium chloride, 100 mM HEPES pH 8.5 and 1.8 M ammonium sulfate. The crystals have a space group orthorhombic I222, the unit cell has dimensions a = 68.3 Ã, b = 73.0 Ã, c = 99.5 à and angles &#945; = &#946; = &#947; = 90  been observed a monomer in the asymmetric unit with a content of 49.5% solvent. The refinement showed a satisfactory "Rfactor" and "Rfree" of respectively 20.4% and 25.3%. Parameters were determined in the potential of biological activity reported in literature, where the lectin from Canavalia maritima (ConM) has high potential for inducing nitric oxide production compared with the lectin from Canavalia ensiformis (ConA), which has a low potential for induction. Significant differences were found between coordinates of the residues that comprise the CRD of lectins from the subtribe Diocleinae, and comparing these data with potential biological activity was provided a distinct pattern of distances to lectins with high and low potential for induction. The lectin from Canavalia brasiliensis (ConBr) shows a pattern of distances for a great inducer of nitric oxide as ConM, but shows a lower activity than ConA. The distances of CRD explain the difference in activity, but ConBr shown an exceptional case where an assessment of the volume of the site shows a very small site, which explains their discrepancy in biological activity.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Neste trabalho à apresentada a sÃntese, caracterizaÃÃo e o estudo da liberaÃÃo fotoquÃmica de Ãxido nÃtrico pelos nitrosilo complexos trans-[Fe(cyclam)(NO+)Cl]Cl2 e trans-[Ru(NH3)4L(NO)]Cl3, onde L=Imidazol, Benzoimidazol, CafeÃna e Teofileno, bem como pelo novo composto [cyclam(NO)4]. AtravÃs de uma nova rota sintÃtica, obteve-se o composto trans-[Fe(cyclam)(NO+)Cl]Cl2, o qual apresenta o ligante Ãxido nÃtrico coordenado ao Ãtomo de ferro na sua forma linear (NO+), &#957;NO=1888 cm-1, com um Ãngulo de ligaÃÃo Fe-NO igual a 177,40. O estudo do comportamento fotoquÃmico deste nitrosilo complexo evidenciou a liberaÃÃo de Ãxido nÃtrico e formaÃÃo do aqua complexo de FeIII quando o composto à irradiado em meio aquoso pH=3,4, com luz de &#955;irradiaÃÃo=310 nm. Entretanto, quando o mesmo à irradiado em meio aquoso pH=7,04, observa-se ocorrer apenas a reaÃÃo de fotorreduÃÃo do Ãxido nÃtrico com &#966;=0,4Â0,05 mol/einstein, gerando a espÃcie trans-[Fe(cyclam)(NO0)Cl]+. O composto [cyclam(NO)4] foi obtido atravÃs da reaÃÃo de nitrosilaÃÃo do macrocÃclico cyclam. A troca dos hidrogÃnios do cyclam por molÃculas de NO, foi evidenciada pela anÃlise do espectro vibracional na regiÃo do IV do composto [cyclam(NO)4], o qual apresenta duas bandas caracterÃsticas em 1454 e 1139 cm-1, atribuÃdas a &#957;NO e &#957;NN, respectivamente. ApÃs fotÃlise com luz branca, observa-se a diminuiÃÃo da intensidade destas bandas e o aparecimento de uma nova absorÃÃo em 2228 cm-1 atribuÃda a &#957;NO+, indicando que o composto comporta-se como um doador de Ãxido nÃtrico nestas condiÃÃes, atravÃs da clivagem heterolÃtica da ligaÃÃo N-NO. Os compostos do tipo trans-[Ru(NH3)4L(NO)]Cl3, onde L=Imidazol, Benzoimidazol, CafeÃna e Teofileno, coordenados atravÃs do Ãtomo de carbono do anel imidazÃlico, foram sintetizados de acordo com a literatura e caracterizados por ressonÃncia magnÃtica nuclear e espectroscopia vibracional na regiÃo do infravermelho. Estudos mostraram que a irradiaÃÃo desses compostos com luz de &#955;irradiaÃÃo=330, 410 e 440 nm para L= Imidazol, CafeÃna e Teofileno e &#955;irradiaÃÃo=330 nm para L=Benzoimidazol em meio de NaCl 1 mol.L-1, leva exclusivamente à formaÃÃo do Ãon complexo trans-[Ru(NH3)4L(Cl)]2+ apÃs liberaÃÃo do ligante NO0. Os valores de &#966;NO para tal fotorreaÃÃo sÃo dependentes / In the present work, a new route was developed for preparing the compound trans-[Fe(cyclam)(NO+)Cl]Cl2, where the nitric oxide is bonding of the iron in the form linear (NO+) with a bond angle Fe-NO at 177,40. The complex was characterized by uv-visible, infrared and electronic paramagnetic resonances spectroscopies, electrochemical techniques and crystal structure determination were undertaken. The study of the photochemical behavior this nitrosyl complex showed the nitric oxide release and appearance of trans-[Fe(cyclam)(H2O)2]3+ species where the compound is irradiated in the &#955;irr=330 nm in aqueous solution pH=3,4. However, when the compound was irradiated in aqueous solution pH=7,04, was observed the reaction of photoreduction and the production of specie trans-[Fe(cyclam)(NO0)Cl]+ (&#966;=0,4Â0,05 mol/einstein). The study of the photochemical behavior of the trans-[Ru(NH3)4L(NO)]Cl3 complexes, where L=ImK2, BzImK2, Caf and Teo showed the nitric oxide production and appearance of trans-[Ru(NH3)4L(Cl)]2+ species, as product of the photolysis in KCl aqueous solution, in the 330-440 nm region when L= ImK2, Caf and Teo and in the &#955;irr=330 nm when L=BzImK2 . The quantum yields (&#966;NO) for this reaction is sensitive to the nature of L, &#955;irr and pH. The lowest quantum yields are found for L=BzImK2 (&#966;NO=0,005Â0,0005 mol/einstein) and the higher was observed for the L=Teo (0,68Â0,05 mol/einstein). The absence of observable photochemical reaction when these complexes were irradiated on 410-440nm is explained on basis of the changes in character of the lowest energy MLCT band on function of the ligand L. The incorporation of NO in the composition of many molecules is of interest to study the chemical and enzymatic mechanisms of NO release and the pharmacological aspects and biomedical applications of these compounds. Assuming that the N-nitroso compounds belong to a class of NO donors by transferring nitrosyl homolytically or heterolytically to another species, we have performed the nitrosilation reaction of the cyclam species aiming to study the reactivity of a new N-nitrosamine system toward the release of nitric oxide species. The infrared spectrum of [cyclam(NO)4] displays two characteristic bands at 1454 and 1139 cm-1 assigned to the &#957;NO and &#957;NN modes, respectively. The peaks of &#957;N-H observed in the range 3400-3190 cm-1 in the spectrum of thecyclam starting material disappear in the spectrum of [cyclam(NO)4]. Upon white light photolysis of the compound dispersed in KBr, is observed the decrease of the &#957;NO and &#957;NN and of the appearance of a new band at 2228 cm-1, assigned to the &#957;NO+ stretching mode. This indicates that the [cyclam(NO)4] compound under this photolysis conditions behaves as a nitrosyl donor through an heterolytic cleavage of N-NO bond.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / IntroduÃÃo: O cloridrato de irinotecano (CPT-11) à um inibidor da topoisomerase I, clinicamente efetivo no tratamento de vÃrios tipos de cÃncer. Apesar da mucosite intestinal (MI) acompanhada de severa diarrÃia ser o efeito colateral mais limitante do uso terapÃutico do CPT-11, os exatos mecanismos que levam a estes efeitos nÃo sÃo estabelecidos. Objetivo: avaliar o envolvimento de mediadores inflamatÃrios (citocinas, Ãxido nÃtrico â NO e prostaglandinas â PGs) na patogÃnese dos eventos que acompanham a MI induzida pelo CPT-11; e estudar o efeito de inibidores da sÃntese e liberaÃÃo de citocinas, como pentoxifilina (PTX) e talidomida (TLD), e de um inibidor seletivo da ciclooxigenase-2 (COX-2), o celecoxibe (CLX), na lesÃo intestinal induzida pelo CPT-11. Material e MÃtodos: camundongos Swiss, machos, foram tratados durante quatro dias consecutivos com CPT-11 (50, 75 e 100 mg/kg, i.p.) ou veÃculo (0,5 mL, i.p.), a fim de se obter a melhor dose capaz de induzir injÃrias consistentes com o mÃnimo de letalidade. Os animais foram tratados com PTX (1,7, 5 e 15 mg/kg, s.c.), TLD (15, 30, 60 mg/kg, s.c), CLX (3, 10, 30 mg/kg, gavagem) ou veÃculo (0,5 mL, s.c. ou gavagem), um dia antes da primeira administraÃÃo do CPT-11 (75 mg/kg), e diariamente, atà o sacrifÃcio, no quinto ou sÃtimo dia. Os seguintes parÃmetros foram avaliados: diarrÃia, variaÃÃo de massa corpÃrea, leucograma, sobrevida, anÃlise histopatolÃgica, atividade de mieloperoxidase (MPO), dosagem de citocinas (TNF-&#945;, IL-1&#946; e KC) por ELISA e imunohistoquÃmica para TNF-&#945;, IL-1&#946;, iNOS e COX-2 nas mucosas duodenais. Resultados: CPT-11 induziu diarrÃia significante, acompanhada de perda acentuada de massa corpÃrea, leucopenia e reduÃÃo da sobrevida. As alteraÃÃes histopatolÃgicas intestinais induzidas pelo CPT-11 caracterizaram-se pela presenÃa de infiltrado inflamatÃrio nas cÃlulas da lÃmina prÃpria, perda da arquitetura das criptas e achatamento dos vilos. Observou-se ainda, aumento intestinal na atividade de MPO e dos nÃveis de TNF-&#945;, IL-1&#946; e KC, alÃm do aumento significativo na marcaÃÃo imunohistoquÃmica para TNF-&#945;, IL-1&#946;, iNOS e COX-2. O tratamento com PTX inibiu a diarrÃia tardia, reduziu as alteraÃÃes histopatolÃgicas, a atividade de MPO, e os nÃveis de TNF-&#945;, IL-1&#946; e KC, assim como a marcaÃÃo imunohistoquÃmica para TNF-&#945;, IL-1&#946; e iNOS na mucosa duodenal, entretanto, nÃo preveniu significativamente a perda de massa corpÃrea, a leucopenia e tampouco a mortalidade dos animais. O tratamento com TLD reduziu as lesÃes histopatolÃgicas induzidas pelo CPT-11 na mucosa intestinal, os nÃveis intestinais de MPO e TNF-&#945;, bem como a marcaÃÃo imunohistoquÃmica de TNF-&#945;, mas nÃo foi capaz de prevenir a diarrÃia, a perda de massa corpÃrea, a leucopenia e a sobrevida. O tratamento com CLX nÃo foi capaz de reduzir os parÃmetros inflamatÃrios e sistÃmicos observados nos animais tratados com CPT-11. ConclusÃo: Estes resultados sugerem o envolvimento de TNF-&#945;, IL-1&#946;, KC, NO e PGs na patogÃnese da MI induzida pelo CPT-11. PTX e TLD preveniram significativamente as alteraÃÃes histolÃgicas e inflamatÃrias induzidas pelo CPT-11, entretanto, somente PTX foi capaz de inibir o curso da diarrÃia / Introduction: Irinotecan (CPT-11) is an inhibitor of DNA topoisomerase I and clinically effective against several cancers. A major toxic effect of CPT-11 is delayed diarrhea; however, the exact mechanism by which the drug induces diarrhea has not been established. Purpose: The aim of the present study was to elucidate the involvement of cytokines (TNF-&#945;, IL-1&#946; and KC), nitric oxide (NO) and prostaglandins (PGs) in the pathogenesis of CPT-11-induced mucositis and the effects of the cytokine production inhibitors, pentoxifylline (PTX) and thalidomide (TLD), as well as the effects of the selective cyclooxygenase (COX-2) inhibitor, celecoxib (CLX), in the CPT-11 induced intestinal mucositis, in mice. Materials and methods: the animals were treated with CPT-11 (50, 75 or 100 mg/kg, i.p.) or vehicle (0,5 ml, i.p.) daily for four days, in order to investigate the best dose able to induce intestinal mucositis without important mortality. In another set of experiments, the animals received PTX (1.7, 5, 15 mg/kg, s.c.), TLD (15, 30, 60 mg/kg, s.c.), CLX (3, 10, 30 mg/kg, oral gavage) or vehicle (0,5 ml, s.c. or oral gavage) one day before the 1st administration of CPT-11 (75 mg/kg; i.p.) and daily until the sacrifice, on the 5th or 7th day. The systemic parameters evaluated were: diarrhea, body mass variation, survival curve and leucogram. In addition, it was also performed histological analysis, myeloperoxidase (MPO) activity assay, duodenum levels of TNF-&#945;, IL-1&#946; and KC by ELISA and immunohistochemistry for TNF-&#945;, IL-1&#946;, iNOS and COX-2 in the duodenal segments. Results: CPT-11 induced an important diarrhea, weight loss, leucopenia and mortality increase. It was also observed histopathological changes, such as shortened villi, loss of the crypt architecture and inflammatory cells infiltration, observed in the lamina propria, as well as, an increase in MPO activity, TNF-&#945;, IL-1&#946; and KC tissue levels and a marked immuno-staining for TNF-&#945;, IL-1&#946;, iNOS and COX-2. The treatment with PTX inhibited the delayed diarrhea and reduced the following parameters: histopathological alterations, MPO activity, tissue levels of TNF-&#945;, IL-1&#946; and KC, and the immuno-staining for TNF-&#945;, IL-1&#946; and iNOS, however, did not prevent leucopenia, weight loss and mortality. TLD significantly reduced all the inflammatory parameters evaluated, but was not able to prevent diarrhea, leucopenia, weight loss and mortality. On the other hand, CLX did not inhibit the inflammatory nor the systemic alterations induced by CPT-11. Conclusion: These results suggest an important role of TNF-&#945;, IL-1&#946;, KC, NO and PGs in the pathogenesis of intestinal mucositis induced by CPT-11. PTX and TLD showed a protector effect in intestinal structures, however, only PTX reduced the severity of CPT-11-induced diarrhea

CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Neste estudo pretendeu-se avaliar a aclimataÃÃo de plantas de milho (Zea mays) à salinidade, apÃs serem prÃ-tratadas com nitroprussiato de sÃdio (NPS, composto capaz de liberar Ãxido nÃtrico). A concentraÃÃo de NPS utilizada foi definida em um primeiro experimento, no qual plantas de milho (variedade BR 5011) foram cultivadas por dois dias em soluÃÃo nutritiva de Hoagland acrescida de NPS nas concentraÃÃes de 0 (plantas nÃo prÃ-tratadas), 50, 75, 100 ou 200 ÂM, e submetidas depois à salinidade (NaCl a 0 ou 80 mM). Decorridos sete dias, as plantas prÃ-tratadas com NPS a 75 ÂM foram as que apresentaram melhor desempenho em condiÃÃes salinas, tendo em vista que elas apresentaram um crescimento maior, uma menor peroxidaÃÃo de lipÃdios nas folhas, um teor de K+ aumentado na planta e um menor teor de Na+ na parte aÃrea, em comparaÃÃo Ãs demais plantas nas condiÃÃes salinas. Com base nisso, foi realizado um segundo experimento, no qual a aclimataÃÃo de plantas de milho, mediada pelo prÃ-tratamento com NPS a 75 ÂM, foi avaliada apÃs 7 e 14 dias de estresse (NaCl a 80 mM). O prÃ-tratamento das plantas com NPS resultou em uma Ãrea foliar aumentada e em maior crescimento em condiÃÃes salinas, em comparaÃÃo Ãs plantas nÃo prÃ-tratadas, mas isso foi observado apenas aos 7 dias de estresse. Apesar de o estresse salino ter reduzido a condutÃncia estomÃtica das plantas nos dois tempos avaliados, houve aumento da fotossÃntese lÃquida e da transpiraÃÃo quando se prÃ-tratou as plantas com NPS. De modo geral, o estresse salino reduziu os teores de macronutrientes nas plantas de milho, em ambos os tempos de estresse, mas isso foi menos evidente naquelas que haviam sido prÃ-tratadas com NPS, especialmente aos 7 dias de estresse. Os danos oxidativos nas folhas e nas raÃzes das plantas de milho foram parcialmente atenuados pelo prÃ-tratamento com NPS. Nas condiÃÃes salinas, os teores de ascorbato e glutationa foram geralmente maiores nas plantas prÃ-tratadas com NPS do que nas nÃo prÃ-tratadas. De modo geral, a atividade das enzimas dismutase do superÃxido, catalase e peroxidase do ascorbato nas folhas e nas raÃzes de milho foi reduzida pelo prÃ-tratamento com NPS, e isso tambÃm dependeu do tempo de estresse a que as plantas foram submetidas. No entanto, houve pouca correlaÃÃo entre o prÃ-tratamento com NPS e a induÃÃo do sistema antioxidativo. A espectrometria de massas acoplada a cromatografia lÃquida permitiu a identificaÃÃo de diversas proteÃnas nos tecidos foliares e radiculares, entre as quais, proteÃnas envolvidas com a fotossÃntese e com o metabolismo oxidativo, e, de maneira geral, a expressÃo delas foi influenciada pelas condiÃÃes a que as plantas estiveram sujeitas. O prÃ-tratamento com NPS induz alteraÃÃes importantes nas plantas de milho, mais relacionadas à homeostase iÃnica que à defesa oxidativa, que nÃo perduram ao longo do desenvolvimento da planta. / This study was intended to evaluate the acclimation of maize (Zea mays) plants to salt stress, after pretreatment with sodium nitroprusside (SNP, a NO donor compound). The SNP concentration used was defined in an initial experiment, in which maize plants (variety BR 5011) were cultivated for two days in Hoagland solution plus NPS at 0 (not pretreated plants), 50, 75, 100 or 200 mM and then subjected to salt stress (NaCl at 0 or 80 mM). After seven days, the plants pretreated with NPS at 75 &#956;M showed the best performance in saline conditions, considering that they had a higher growth, a lower lipid peroxidation in leaves, an increased K+ content and a lower Na+ content in shoots compared to other plants in saline conditions. Based on this, it was performed a second experiment, in which the maize acclimation mediated by the pretreatment with 75 &#956;M SNP was evaluated after 7 and 14 days of stress salt (80 mM NaCl). The SNP-pretreatment resulted in an increased leaf area and a fastest growing in saline conditions as compared to non-pretreated plants, but this difference was observed only after 7 days of stress. Although salt stress have reduced stomatal conductance in both time periods, there was an increase in the net photosynthesis and transpiration when plants were pretreated with NPS. In general, the salt stress reduced the macronutrient content in plants, in both times of stress, but this was less evident in those who had been pretreated with NPS, especially after 7 days of stress. Oxidative damages in leaves and roots of maize plants have been partially mitigated by pretreatment with SNP. In saline conditions, the contents of ascorbate and glutathione were generally highest in plants pretreated with NPS than in non-pretreated. In general, the activity of superoxide dismutase, catalase and ascorbate peroxidase in leaves and roots of maize was reduced by pretreatment with SNP, and it also depended on the time of stress to which the plants were subjected. However, there was little correlation between pretreatment with SNP and induction of antioxidant system. The mass spectrometry-coupled liquid chromatography allowed the identification of several proteins in leaf and root tissues, including proteins involved in photosynthesis and oxidative metabolism and, in general, their expression was influenced by the conditions that plants were subjected. The pretreatment with SNP induced important changes in corn plants more closely related to the oxidative homeostasis that protection, which does not persist throughout plant development.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Temproromandibular disfunction (TMD) is related to a masticatory system disfunction which can include the temporomandibular joint (TMJ), the masticatory muscles and/or other related structures. TMJ inflammatory disorders are one of the major pathology of TMD afecting a great number of patients. Although TMJÂs inflammation and pain are important cinical entities, their mechanisms are poorly understood. The purpose of the study is to propose an experimetnal model of TMJÂs arthritis to study its patophysiological mechanisms and inflammatory mediators such as nitric oxide (NO). Female Wistar rats (160-220 g) were used to the study. To induct TMJÂs arthritis, zymosan 40 microL (Zy: 0,25; 0,5; 1 ou 2 mg) was injected into left TMJ. The animals were sacrified in times 3 h, 6 h, 1, 2, 3, 5, 7, 10 e 21 days. Nitric oxide syntase inhibitors L-NAME (10, 30 e 100 mg/kg i.p.) or 1400W (0,5 e 1 mg/kg s.c.) were administered 30 min before TMJÂs arthritis induction. Leucocyte influx count in the sinovial fluid, vascular permability study using Evans blue dye extravasation, myeloperoxidase assay (MPO), NO production determination using Griess reaction, histopatological analyisis and imunohystochemical for induced NO synthase (iNOS) were utilized as parameters of this sutudy. It was observed that Zy (2 mg) induced significantly increase in leucocyte influx count (p<0,05), Evans blue dyeÂs extravasation (p<0,05), myeloperoxidase activity (p<0,05) and NO dosage (p<0,05) compared with control group 6 h after TMJ arthritis induction. Histopatological analysis of TMJ of Zy injected animals showed inflammatory cell infiltration in synovial membrane (SM), in conective periarticular tissue, in squeletic muscle tissue and thickness of SM in 6 h after TMJ arthritis. On the 10th day after TMJ arthritis, the TMJ remain showing leucocyte infiltration to synovial membrane (SM), to conective periarticular tissue, to squeletic muscle tissue and thickness of SM, as well as fibrosis of SM and articular disc. On the 21st d after TMJ arthritis, it was observed cell influx only to SM, showing, however, thickness of SM and the major fibrosis of SM, articular cartilage, conective periarticular tissue and articular disc. TMJÂs imunohistochemistry reaction for iNOS showed increase iNOSÂs expression in animals with TMJÂs arthritis compared to the control group. L-NAME 100 mg/kg and 1400W 1 mg/kg reduced the increase in leucocyte count in the synovial fluid, the Evans blue dye extravasation, the histopatological alterations, and reduced the iNOS expression after imunohistochemistry reaction for iNOS 6 h after TMJ arthritis. These results sugest that this experimental model can be used to study TMJ arthritis, and that NO can participate in the physiopathological mechanisms of TMD. / DisfunÃÃo temporomandibular (DTM) à um distÃrbio relacionado à funÃÃo do sistema mastigatÃrio que acomete as articulaÃÃes temporomandibulares (ATM), os mÃsculos mastigatÃrios e/ou estruturas associadas. As desordens inflamatÃrias na ATM classificam-se como uma das quatro classes de DTM, estando presente em um grande nÃmero de pacientes. Embora a inflamaÃÃo e a dor nas estruturas articulares sejam entidades clÃnicas importantes, seus mecanismos sÃo pouco compreendidos. Objetivamos montar modelo experimental de artrite na ATM para estudar a fisiopatologia da doenÃa e a participaÃÃo de mediadores inflamatÃrios como Ãxido nÃtrico (NO). Foram utilizados ratos Wistar fÃmeas (160-220 g) nos quais se injetou 40 microlitros de zymosan (Zy: 0,25; 0,5; 1 ou 2 mg) na ATM esquerda dos animais para induÃÃo de artrite. Esses animais foram sacrificados nos tempos de 3 h, 6 h, 1, 2, 3, 5, 7, 10 e 21 dias. Utilizaram-se inibidores da sÃntese de Ãxido nÃtrico L-NAME (10, 30 e 100 mg/kg i.p.) ou 1400W (0,5 e 1 mg/kg s.c.) os quais foram injetados 30 min antes da induÃÃo da artrite. ParÃmetros de contagem do influxo celular no lÃquido sinovial, estudo da permeabilidade vascular pelo extravasamento de azul de Evans, estudo do ensaio de mieloperoxidase (MPO), determinaÃÃo da produÃÃo de Ãxido nÃtrico atravÃs da dosagem de nitrito pelo mÃtodo de Griess, anÃlise histopatolÃgica e imunohistoquÃmica para NO sintase induzida (NOSi) foram avaliados. Observamos que Zy (2 mg) induziu aumento significativo do influxo celular no lÃquido sinovial (p<0,05), do extravasamento de azul de Evans (p<0,05), da atividade de mieloperoxidase (p<0,05) e da dosagem de nitrito/nitrato (p<0,05) na 6 h apÃs induÃÃo da artrite em relaÃÃo ao grupo controle. A anÃlise histopatolÃgica mostrou que Zy (2 mg) induziu, de forma significativa, infiltrado celular na membrana sinovial, no tecido conjuntivo periarticular, no tecido muscular esquelÃtico e espessamento da MS na 6 h apÃs induÃÃo da artrite. No 10 d apÃs induÃÃo da artrite, continua a apresentar infiltrado celular na MS, no tecido conjuntivo periarticular, no tecido muscular esquelÃtico e espessamento da MS, assim como passa a apresentar fibrose da MS e do disco articular. No 21 dia apÃs induÃÃo da artrite, foram observados infiltrado celular apenas na MS, com espessamento da mesma, e aumento da fibrose da membrana sinovial, da cartilagem articular, do tecido periarticular e do disco articular, significativamente diferentes em relaÃÃo ao grupo controle. à anÃlise da reaÃÃo de imunohistoquÃmica para NOSi, observou-se aumento da expressÃo de NOSi no animais com Zy (2 mg). Tanto L-NAME 100 mg/kg quanto 1400W 1 mg/kg (p<0,05) foram capazes de reverter o aumento do influxo celular no lÃquido sinovial da ATM (p<0,05), o extravasamento plasmÃtico (p<0,05), as alteraÃÃes histopatolÃgicas e a expressÃo de NOSi pelo estudo da reaÃÃo de imunohistoquÃmica para NOSi observadas na 6 h apÃs induÃÃo da artrite. Esses resultados sugerem que o modelo experimental proposto se presta ao estudo da artrite na ATM, e que NO participa na fisiopatologia do processo inflamatÃrio da DTM.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / IntroduÃÃo:O prÃ-condicionamento isquÃmico (PCI) vem sendo considerado como um potente mecanismo endÃgeno capaz de inibir a resposta inflamatÃria. A migraÃÃo de neutrÃfilos (mn) à um evento central no desenvolvimento da reaÃÃo inflamatÃria. Nosso grupo tem demonstrado que o PCI inibe a mn em modelos experimentais, entretanto os mecanismos e mediadores envolvidos ainda nÃo sÃo conhecidos.Objetivo:Estudar a participaÃÃo dos mediadores Ãxido nÃtrico e MonÃxido de carbono, proteÃnas de adesÃo (ICAM-1 e &#946;2-integrina) e da expressÃo de CXCR2 no efeito inibitÃrio do PCI a distÃncia sobre a mn. MÃtodos:O modelo de PCI a distÃncia foi realizado com um torniquete no membro posterior direito de camundongos durante 10 minutos seguidos de 30 de reperfusÃo. ParticipaÃÃo do NO e CO foi investigada atravÃs de inibidores de iNOS (1400 W, 3 mg/kg ou Aminoguanidina (Amg), 50 mg/kg) e HO-1 (ZnPPIX, 10 mg/kg) como prÃ-tratamento de 30 min. Posteriormente, induziu-se peritonite comCarragenina(Cg) (500 mg /cav). Quatro horas apÃs, a cavidade peritoneal (cp) era lavada e leucÃcitos eram contados. ApÃs aquele mesmo procedimento, os animais foram submetidos a microscopia intravital (miv) para avaliar os efeitos do NO e CO nas vÃnulas mesentÃricas de 3 ordem.NeutrÃfilos de animais prÃ-condicionados e prÃ-tratados ou nÃo, foram utilizados para o ensaio de quimiotaxiain vitro, usandocomo estÃmulo a quimiocina KC(30ng/ml). AexpressÃo de CXCR2 e GRK2 dos neutrÃfilos foi determinada por citometria de fluxo e imunofluorescÃncia, respectivamente.AsparticipaÃÃes de ICAM-1/CD54 e &#946;2-integrina/CD11b foram investigadas em camundongos nocautes para os genes dessas molÃculas. A mn nesses animais foi avaliada segundo protocolo jà descrito pelo lavado peritonela.Na investigaÃÃo do papel do NO e CO na modulaÃÃo da proteÃna de adesÃo celular (&#946;2-integrina), utilizou-se inibidores da iNOS (1400W, 3 mg/kg ou Amg, 50 mg/kg, sc), HO-1 (ZnPPIX, 10 mg/kg, sc) eGuanilato Ciclase (ODQ (5 Âmol/kg, ip)) em prÃ-tratamento de 30 min antes do PCI. ApÃs peritonite, o sangue foi colhido e a expressÃo de CD11bem neutrÃfilos foi determinada por citometria de fluxo. Para anÃlise estatÃstica, utilizou-se ANOVA/Bonferroni. P<0,05 foi aceito. Resultados:Os inibidores de CO e NO preveniram o efeito inibitÃrio do PCIsobre a mn (p <0,05). AlÃm disso, os neutrÃfilos de animais prÃ-condicionados apresentaram reduÃÃo de quimiotaxia (p <0,05),achado que se correlacionou com a diminuiÃÃo da expressÃode CXCR2 na membrana dos neutrÃfilos (p <0,05) e comaumento da expressÃo de GRK2. NÃo houve alteraÃÃo da quimiotaxia, nem da expressÃo de GRK2 quando os neutrÃfilos foram obtidos a partir de animais prÃ-condicionados e prÃ-tratados com inibidores de de CO, NO e GCs. Os animais prÃ-condicionados apresentaram reduÃÃo nos neutrÃfilos circulantes e da aderÃnciana miv, as quais foram prevenidas pelo prÃ-tratamento com os inibidores (p <0,05). O efeito inibitÃrio do PCI persistiu em animais nocautes para &#946;2-integrina, o que nÃo se observou nos animais nocautes para ICAM-1. AlÃm disso, os neutrÃfilos de animais prÃ-condicionados apresentaram reduÃÃo significativa na expressÃo de CD11b, que foi prevenida nos animais prÃ-tratados com os inibidores de iNOS, HO-1 e GCs.ConclusÃes: Os resultados sugerem que o NO e CO atuam no efeito inibitÃrio do PCI via iNOS e HO-1 em sitio distante, modulando ICAM-1, &#946;2-integrina e CXCR2 via GRK2. / Introduction: Ischemic preconditioning (IPC) has been considered as a potent endogenous mechanism capable of inhibiting the inflammatory response. The migration of neutrophils (mn) is a central event in the development of inflammation. Our group has demonstrated that PCI inhibits mn in experimental models, however the mechanisms and mediators involved are not yet known. Aim: To study the involvement of mediators nitric oxide and carbon monoxide, adhesion proteins (ICAM-1 and &#946;2-integrin) and expression of CXCR2 in the inhibitory effect of PCI on the distance min. Methods: The model of distance PCI was performed with a tourniquet in the right hind limb of mice for 10 minutes followed by 30 reperfusion. Involvement of NO and CO was investigated using inhibitors of iNOS (1400 W, 3 mg/kg or aminoguanidine (Amg), 50 mg/kg) and HO-1 (ZnPPIX, 10 mg/kg) as pretreatment 30 min. Later, peritonitis was induced by carrageenan (Cg) (500 mg/cav). Four hours later the peritoneal cavity (pc) was washed and leukocytes were counted. After that same procedure, the animals were subjected to intravital microscopy (IVM) to evaluate the effects of NO and CO in the mesenteric venules of 3rd order. Neutrophils from animals preconditioned and pre-treated or untreated, were used for testing chemotaxis in vitro, using the stimulus to chemokine KC (30ng/ml). The expression of GRK2 and CXCR2 in neutrophils was determined by flow cytometry and immunohistochemistry, respectively. The stakes and ICAM-1/CD54 &#946;2-integrina/CD11b been investigated in knockout mice for genes of these molecules. The mn in these animals was evaluated according to protocol previously described by washed peritonela. In the investigation of the role of NO and CO in the modulation of cell adhesion protein (&#946;2-integrin), we used iNOS inhibitor (1400W, 3 mg/kg or Amg, 50 mg/kg, sc), HO-1 (ZnPPIX, 10 mg/kg, sc) and guanylate cyclase (ODQ (5 Âmol/kg, ip)) in pre-treatment 30 min before PCI. After peritonitis, blood was collected and the expression of CD11b on neutrophils was determined by flow cytometry. For statistical analysis, we used ANOVA/Bonferroni. P<0,05 was accepted. Results: The CO and NO inhibitors prevented the inhibitory effect of PCI on mn (P<0,05). Moreover, neutrophils from animals preconditioned showed reduced chemotaxis (p<0,05), a finding that correlated with decreased expression of CXCR2 in the membrane of neutrophils (p<0,05) and increased expression of GRK2. There was no change in chemotaxis or the expression of GRK2 when neutrophils were obtained from animals pre-conditioned and pretreated with inhibitors of CO, NO and sGC. Preconditioned animals showed a reduction in circulating neutrophils and the grip on IVM, which were prevented by pretreatment with inhibitors (P<0,05). The inhibitory effect of PCI was shown in knockout animals for &#946;2-integrin, which was not observed in the knockout animals to ICAM-1. Moreover, neutrophils from animals preconditioned showed a significant reduction in the expression of CD11b, which was prevented in animals pretreated with inhibitors of iNOS, HO-1 and GCs. Conclusions: The results suggest that NO and CO act in the inhibitory effect of PCI via iNOS and HO-1 in place apart by modulating ICAM-1, &#946;2-integrin and CXCR2 via GRK2.

FundaÃÃo de Amparo à Pesquisa do Estado do Cearà / Maytenus rigida Mart. (Celastraceae) pupularly known as âbom-homemâ, âbom-nomeâ, âCabelo de Negroâ, âCasca-grossaâ, ChapÃu de couroâ or âpau-de-colherâ is a native species in the northeast region of Brazil, used in folk medicine in the tratament of inflammatory diseases, gastrointestinal disorders such diarrhea, dysentery and ulcers, kidney problems, hypertension, impotence and rheumatism. The aim of this work was to demonstrate the possible mechanism (s) of action underlying the gastroprotective effect of aqueous extract (AE) of Maytenus rigida in Swiss mice, in the gastric injury model induced by absolute ethanol. Fasted mice received AE (100, 200 or 400 mg/Kg, p.o.) 1h prior to oral administration of absolute ethanol (0,2 mL/animal). Groups treated with saline and ranitidine were used as controls. The stomachs were macroscopically and microscopically examined. Additionally, different pharmacologixal tools (naloxone, morphine, misoprostol, indomethacin, L-NAME, L-arginine, clonidine or yohimbine) were used in different tests, trying to clarify the possible mechanism (s) of action of AE. The macro and microscopic gastroprotective effect of AE was compared to that showed by ranitidine, on ethanol-induced model (p<0.05); the use of pharmacological tools revealed that the protective effect of AE involves the activation of &#945;-2-adrenergic receptors, opioid receptor and nitric oxide, but do not depends on prostaglandins. The EA has a gastroprotective effects, supporting its traditional use. Its effect is multifactorial, involving the participation of &#945;-2-adrenergic receptors, nitric oxide release and activation of opioids receptors. / Maytenus rigida Mart., (Celastraceae) popularmente conhecida como âbom-homemâ, âbom-nomeâ, âcabelo de negroâ, âcasca-grossaâ, âchapÃu de couroâ ou âpau-de-colherâ à uma espÃcie nativa do nordeste brasileiro, utilizada na medicina popular no tratamento das doenÃas inflamatÃrias, desordens gastrointestinais como diarreia, disenteria e Ãlceras, problemas renais, hipertensÃo, impotÃncia sexual e reumatismo. O objetivo deste trabalho foi evidenciar o(s) possÃvel(is) mecanismo(s) de aÃÃo subjaentes ao efeito gastroprotetor do extrato aquoso (EA) de Maytenus rigida em camundongos suÃÃos, no modelo de lesÃo gÃstrica induzida por etanol absoluto. Camundongos em jejum receberam EA (100, 200 ou 400 mg/Kg, p.o.) 1 h antes da administraÃÃo oral de etanol absoluto (0,2ml/animal). Grupos tratados com salina e ranitidina foram utilizados como controles. Os estÃmagos foram analisados macro e microscopicamente. Adicionalmente, foram utilizadas diferentes ferramentas farmacolÃgicas (naloxona, morfina, misoprostol, indometacina, L-NAME, L-arginina, clonidina ou ioimbina) em diferentes ensaios, para tentar esclarecer o(s) possÃvel(is) mecanismo(s) de aÃÃo do EA. O efeito gastroprotetor macro e microscÃpico do EA foi comparado ao exercido pela ranitidina no modelo etanol-induzido (p < 0,05); a utilizaÃÃo de ferramentas farmacolÃgicas revelou que o efeito protetor do EA envolve a ativaÃÃo de receptores &#945;2-adrenÃrgicos, receptores opioides, Ãxido nÃtrico, mas nÃo depende de prostaglandinas. O EA possui efeito gastroprotetor, corroborando com seu uso tradicional. Seu efeito à multifatorial, envolvendo a participaÃÃo de receptores &#945;2-adrenÃrgicos, liberaÃÃo de Ãxido nÃtrico, e ativaÃÃo de receptores opioides.