Orientador: Chung Man Chin / Coorientadora: Lídia Moreira Lima / Banca: Wagner Vilegas / Banca: Leoberto Costa Tavares / Resumo: A anemia falciforme é uma anemia hemolítica hereditária crônica devida à herança de um gene para a hemoglobina S, de cada um dos progenitores, e caracteriza-se pela presença de glóbulos vermelhos que, quando privados de oxigênio, tomam a forma de foice. Tem sido relatado que pacientes com anemia falciforme apresentam aumento dos níveis circulantes de citocinas, incluindo fator de necrose tumoral-α (TNF-α). A hidroxiuréia (HU), fármaco citotóxico, é a estratégia terapêutica disponível para o tratamento, e atua como fonte de óxido nítrico beneficiando pacientes por aumentar os níveis de hemoglobina fetal (Hb F), uma hemoglobina geneticamente distinta que evita a polimerização de hemoglobina falciforme desoxigenada. Nesse contexto, dentro de uma linha de pesquisa que visa o planejamento, síntese e avaliação farmacológica de novos candidatos à protótipos de fármacos foram sintetizados uma série de compostos híbridos com propriedades inibidoras de TNF-α e doadoras de óxido nítrico, a fim de explorar eventual sinergismo de ação benéfico ao tratamento da anemia falaciforme.Foram sintetizados seis compostos, dos quais cinco, são derivados nitratos e um sulfonamídico. Os compostos: (1,3-dioxo-1,3-diidro-2H-isoindol-2-il)metil nitrato (composto I); (1,3-dioxo-1,3-diidro-2H-isoindol-2-il)etil nitrato (composto II);3-(1,3-dioxo-1,3-diidro-2H-isoindol-2-il)benzil nitrato (composto III);4-(1,3-dioxo-1,3-diidro-2H-isoindol-2-il)-N-hidroxibenzenosulfonamida (composto IV); 4-(1,3-dioxo-1,3-diidro-2H-isoindol-2-il)benzil nitrato (composto V); 2-[4-(1,3-dioxo-1,3-diidro-2H-isoindol-2-il)fenil]etil nitrato (composto VI), foram obtidos utilizando metodologia sintética linear, e obtidos com ótimos rendimentos globais. Todos os compostos apresentam atividade antinflamatória em edema de orelha de camundongo, e propriedades de inibição da infiltração leucocitária. Os compostos arílicos III, IV e V apresentam menor ... / Abstract: The sickle cell disease is a chronicle hereditary hemolitic anemia due to the inheritance of each one of the ancestors, to a gene for the hemoglobina S. It is characterized for the red globule presence that, when private of oxygen, they take the form of a scythe. It has been reported that patient with sickle cell disease present increase the circulating levels of cytokines, including TNF-alpha. The hydroxyurea (HU), a cytotoxic drug, is the mainly available therapeutical strategy for the treatment which acts as nitric oxide source benefiting patient for increasing the levels of fetal hemoglobin (HbF), a kind of hemoglobin that decrease the polimerizaron of hemoglobin S in deoxy state. In this context, inside of a research program that aims at the designing, synthesis and pharmacological evaluation of new drug candidates we synthetized a hybrid compounds series with properties of TNF-alpha inhibition and nitric oxide donors, acting by a sinergic effect that may improve the life quality of sickle cells patients. We had sinthetized six compounds: five nitrates and one sulfonamidic.The compounds : 1,3-dioxo-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)methyl nitrate (compound I); (1,3-dioxo-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)ethyl nitrate (compound II); 3-(1,3-dioxo-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)benzyl nitrate (compound III); 4-(1,3-dioxo-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)-N-hydroxybenzenesulfonamide (compound IV); 4-(1,3-dioxo-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)benzyl nitrate (compound V); 2-[4-(1,3-dioxo-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)phenyl]ethyl nitrate (compound VI), had been synthetized using linear synthetic methodology, with good global yields. All compounds had presented antiinflamatory activity, and white blood cells infiltration inhibition properties. Aryl compounds III, IV and V had presented minor mutagenic effect when comparative to compounds I, II and VI. Compounds IV and VI, showed activity in the assay with erythroid progenitor K562 cells, increasing the genic expr / Mestre

Orientador: Jean Leandro dos Santos / Banca: Carlota de Oliveira Rangel Yagui / Banca: Flávio da Silva Emery / Resumo: A Anemia Falciforme (A.F.) é uma doença hematológica genética na qual ocorre mutação no gene da β-hemoglobina. Essa mutação promove polimerização das moléculas de hemoglobina, promovendo alterações (afoiçamento) da estrutura física dos eritrócitos e aumento da adesão das células sanguíneas no vaso contribuindo para o aumento do processo vaso-oclusivo, principal característica da doença. A doença promove um processo inflamatório crônico e há aumento de diversas citocinas pró-inflamatórias, a exemplo do TNF-α, sendo este, portanto um importante alvo para intervenção terapêutica. A hidroxiuréia (HU) é o único fármaco disponível para o tratamento e seus efeitos benéficos estão associados à capacidade de biotransformação da mesma em óxido nítrico. Entretando, a mielotoxicidade e demais efeitos deletérios da HU, torna importante a introdução de novos fármacos que agregue os efeitos benéficos da mesma sem sua potencial toxicidade. O NO desempenha efeitos benéficos tais como: vasodilatação, inibição da agregação plaquetária e produção de hemoglobina fetal (HbF), esta última tem função de diminuir a polimerização da hemoglobina. Nesse contexto, em continuidade com uma linha de pesquisa que visa o planejamento, síntese e avaliação farmacológica de novos protótipos candidatos a fármacos para tratamento das complicações da anemia falciforme, foi sintetizada uma nova série de quatro compostos híbridos inéditos (I-IV) contendo a subunidade ftalimídica (inibidora de TNF-α) e o núcleo furoxânico (doador de NO) espaçados pela subunidade N-acilidrazona. Todos os compostos apresentaram-se como doadores de NO. Os compostos I a IV mostraram-se inibidores de TNF-, sendo o composto IV o mais promissor, inibindo em torno de 65% em concentrações menores que os demais. No ensaio de agregação plaquetária induzida por ADP, os compostos III e IV foram capazes de inibir sigficativamente a ... / Abstract: Sickle Cell Anemia is a genetic blood disease in which there is a mutation in the β-hemoglobin gene. This mutation promotes polymerization of hemoglobin molecules that change the structure of the erythrocyte cytoskeleton promoting sickling of the cell. Moreover, there is increased adhesion of blood cells in the vessel contributing to the increasement of the vaso-occlusive process, the main characteristic of the disease. It is further known that the chronic inflammation associated with the disease contributes to a number of complications and among the process responsible for this proinflammatory cytokine is TNF-α, which is an important target for therapeutic intervention. Hydroxyurea (HU) is the only available drug for treatment and its beneficial effects are associated with the same capacity biotransformation of nitric oxide. The NO plays beneficial effects such as vasodilation, inhibition of platelet aggregation and production of fetal hemoglobin (Hb F), latter has the function of decreasing polymerization of hemoglobin. In this context, continuing the research line that aims at planning , synthesis and pharmacological evaluation of new prototypes drug candidates for the treatment of sickle cell anemia complications, in this work have synthesized a series of four new hybrid compounds ( I- IV) containing the phtalimide (TNF-alfa inhibitory subunit) and furoxan subunits ( nitric oxide donors) according to structural design. The compounds were presented as NO donors. Compounds I-IV were shown to be inhibitors of TNF-α in the immunoassay of this cytokine assay and the compound IV is the most promising inhibiting between 65% in smaller concentrations than the other. In the assay of ADP-induced platelet aggregation, compounds III and IV were able to inhibit platelet aggregation sigficantily. In addition, the compound I after 72 hours was able to increase the gene expression of gamma globin approximately two times the control, at a ... / Mestre

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Humanas, Departamento de Serviço Social, Programa de Pós-Graduação em Política Social, 2014 / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2014-10-14T16:51:51Z No. of bitstreams: 1 2014_AnaCarolinadeOliveiraPinho.pdf: 4434015 bytes, checksum: 9875680269369869862f400d9075d194 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-10-15T13:32:25Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_AnaCarolinadeOliveiraPinho.pdf: 4434015 bytes, checksum: 9875680269369869862f400d9075d194 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-10-15T13:32:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_AnaCarolinadeOliveiraPinho.pdf: 4434015 bytes, checksum: 9875680269369869862f400d9075d194 (MD5) / A anemia falciforme (AF) está entre as doenças genéticas de maior prevalência no Brasil e tem sido objeto de atenção destacada das equipes de profissionais de saúde. Devido sua prevalência, morbidade e alto índice de mortalidade, o governo brasileiro vem criando programas que possibilitam o diagnóstico e tratamento precoce, como é o caso do Programa de Triagem Neonatal (PNTN) criado em 2001. Este programa realiza não somente a testagem para doenças congênitas (dentre elas, a AF), mas também presta atendimento contínuo e integral às crianças triadas e seus familiares. Para consolidar este acompanhamento, realiza-se a orientação genética: momento que consiste em repassar informações genéticas sobre a doença, tratamentos e probabilidades reprodutivas, dando a pessoa com AF e seus familiares a possibilidade de escolher sobre os cuidados adotados, a reprodução e outros aspectos relativos à própria vida. O objetivo desta dissertação é entender o momento da orientação genética concedida por profissionais de saúde que compõe a equipe multidisciplinar da triagem neonatal em AF. O serviço de referência estudado localiza-se na região Centro-oeste do Brasil e a escolha se justifica por cumprir todos os requisitos para atendimento descritos no PNTN e, portanto, representa a política de triagem neonatal e orientação genética presente no país. As técnicas de coleta de dados utilizadas foram a observação direta e a entrevista semi-estruturada. Todos os profissionais entrevistados foram convidados a participar e receberam um Termo de Consentimento Livre e Esclarecido. Os familiares das crianças triadas também foram informados sobre a observação do atendimento. Como principais constatações ressaltam-se: a necessidade de articulação entre as políticas sociais para que se atinja o atendimento integral, dentre as quais as políticas da assistência social; a importância da disseminação de informações sobre a doença, das reuniões internas da equipe multidisciplinar que lida com a triagem neonatal, da capacitação e engajamento profissional e da constante luta por mais direitos sociais para as pessoas com AF. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The Sickle Cell Anemia (SCA) is one of the genetic sicknesses with the largest prevalence in Brazil and has been subject of attention to the health professionals. Due to its prevalence, morbidity has a high death index, so the Brazilian government has created programs that facilitate the early diagnoses and treatment, just like the Neonatal Triage Program (PNTN) created in 2001. This program not only does testing for congenital diseases (one of them being SCA), but also gives continuous treatment to the children that have gone though triage and their families. To consolidate this treatment, a genetic guidance is done: moment when all the genetic information about the disease is passed along, treatments and possibilities of reproduction, given to the person with SCA and relatives the possibility of choosing about adopted safe measures, the reproduction and other aspects related to life. In this study, we have tried to understand the moment where health professionals, who make up the multidisciplinary neonatal triage, team in SCA, gives genetic guidance. The referenced studied service is located in Central-West Region of Brazil and it was chosen because it covers all the requirement treatment described in PNTN and, hereby, it represents the political neonatal triage and orientation currently present in Brazil. The technics of collected data used were direct observation and semi-structure interviews. All interviewed professional were invited to participate and received an Informational Consent Term. The family members of the children triaged were also informed about the observation of the service. The major results that stand out were the need of articulation in social politics so it can reach continuous service. Along with it, the importance of the dissemination of information about the disease, internal meetings of the multidisciplinary team that works with the neonatal triage, and gives strategic information and professional engagement and fights for more social rights for people with SCA.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2008. / Submitted by Suelen Silva dos Santos (suelenunb@yahoo.com.br) on 2009-10-06T18:20:05Z No. of bitstreams: 1 2008_SueliDaRochaFalcao.BAK.pdf: 769822 bytes, checksum: a1ba6c339c1420e9db7e1f8db27f9af1 (MD5) / Approved for entry into archive by Luanna Maia(luanna@bce.unb.br) on 2009-10-08T12:51:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_SueliDaRochaFalcao.BAK.pdf: 769822 bytes, checksum: a1ba6c339c1420e9db7e1f8db27f9af1 (MD5) / Made available in DSpace on 2009-10-08T12:51:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_SueliDaRochaFalcao.BAK.pdf: 769822 bytes, checksum: a1ba6c339c1420e9db7e1f8db27f9af1 (MD5) Previous issue date: 2008 / O estudo teve como objetivo analisar o funcionamento do sistema nervoso autônomo, através da variabilidade da freqüência cardíaca (VFC), durante o sono em crianças e adolescentes portadores de anemia falciforme (AF). Quarenta e quatro pacientes, com idade média de 13.7 anos foram submetidos à polissonografia e monitorização cardíaca pelo sistema holter para avaliação da VFC durante a noite. Ambos os equipamentos foram sincronizados, para permitir análise simultânea. A potência espectral total, os componentes de baixa freqüência (BF), alta freqüência (AF) e a relação BF/AF, BF e AF normalizada foram analisados durante a vigília, fase 4 do sono e REM. Níveis de saturação de O2 e hemoglobina foram analisados e correlacionados com a VFC. Ocorreu uma variação na potência espectral total (Ptotal) em relação aos estágios do sono, sendo que na fase REM o valor foi significantemente mais elevado que na fase 4 do sono (p=0,005) o que vem em concordância com dados da literatura para indivíduos normais. O componente AF(nu) no estágio 4 apresentou um significante aumento quando comparado a vigília (p=0,019), correspondendo a aumento da atividade simpática, o que é encontrado em indivíduos normais . A relação AF/BF não alcançou níveis de significância estatística entre os estágios do sono, mas manteve-se elevada em todos os estágios. Com o objetivo de enriquecer o estudo, comparamos nossos resultados com os valores encontrados pelo Dr Finley em indivíduos normais (sob autorização prévia) e observamos uma redução significativa no estágio REM do sono, que pode caracterizar diminuição da atividade simpática. Os componentes AF e BF atingiram seus valores mais elevados no estágio REM, e BF(nu) manteve-se elevado em todos os estágios do sono, porém sem significado estatístico. Baixos níveis de saturação de oxigênio estiveram presentes durante todos os estágios do sono (média acordado- 87.76, estágio 4- 86.52, REM- 87.85), sem apresentar significância estatística entre os estágios do sono e a VFC. Os indivíduos portadores de AF não apresentaram as variações na análise espectral que habitualmente ocorre, nos diferentes estágios do sono, com os indivíduos normais. O predomínio da atividade simpática em todos os estágios do sono e a redução desses valores no estágio REM sugere perda da capacidade de regulação autonômica do coração com comprometimento do ritmo circadiano. _____________________________________________________________________________________ SUMMARY / Objectives – To analyze the autonomic nervous system behavior, through HRV, during sleep, in children and adolescents with sickle cell disease (SCD). Methods - Forty four SCD patients, mean age 13.7 were submitted to polysomnography and Holter monitoring to assess HRV during the night. Both equipments were synchronized, to allow for simultaneous analyzes. The total spectrum power, low frequency (LF), high frequency (HF) component and LF/HF ratio, LF, HF normalized units were evaluated wakefulness, stage 4 and REM sleep. Oxygen saturation and hemoglobin level were check out and correlated with the HRV. Result – The individual sleep stages differed in total spectrum power. Its values were significantly higher in the REM stage than in stage 4 (p=0,005).There was a significant increase in HF (nu) at stage 4 when compared to wakefulness (p=0,019). The LF/HF ratio did not reach statistical significance between stages of sleep, but there was an uncommon decrease at the REM stage. The LF and HF components reached their highest values at REM stage, and LF (nu) was kept elevated in all stages of sleep, but without statistic significance. Low level of oxygen saturation was present in all sleep stages (mean at wakefulness-87.76, stage 2- 87.41, stage4 - 86.52, REM - 87.85), without significance between stages of sleep and HRV. Conclusion – SCD patient shown predominance of sympathetic activity in all stages of sleep, and loss of regulation capacity of the autonomic nervous system. The shift in xiv spectral analyze, which occurs at different sleep stages in health subjects, did not occur in patient with SCD.

Submitted by Daniella Sodre (daniella.sodre@ufpe.br) on 2015-04-15T14:50:01Z No. of bitstreams: 2 Dissertação RAFAEL RAMOS DA SILVA.pdf: 4228890 bytes, checksum: 2deabaf8e128457a177c31297e46db51 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-15T14:50:01Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação RAFAEL RAMOS DA SILVA.pdf: 4228890 bytes, checksum: 2deabaf8e128457a177c31297e46db51 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2013-02-28 / FACEPE / As úlceras de membros inferiores (UMIs) representam uma das causas principais de morbidade na anemia falciforme (AF). Esta manifestação tem sido relacionada a hemólise, predisposição e inflamação que acarretam a secreção de citocinas. Neste contexto, nosso estudo objetivou avaliar citocinas relacionadas a via Th17 (IL-6, IL-17A, IL-22 e IL-23) no soro e em sobrenadantes de cultura de células mononucleares periféricas com e sem estimulação linfoproliferativa (anti-human CD3 e anti-human CD-28). Os níveis das citocinas também foram correlacionados aos parâmetros clínicos, hematológicos e bioquímicos nos pacientes AF com e sem histórico de UMIs (AFUMI e AFSU) bem como controles sadios. Nos pacientes SCALU, os altos níveis de IL-17A foram associados a ausência da síndrome torácica aguda (STA, p=0.0328). Os outros parâmetros clínicos analisados (osteonecrose, priapismo, esplenectomia e histórico de transfusão de sangue) não foram significantemente relacionados com outros níveis de citocinas. Nos pacientes AFUMI foi observado que os níveis aumentados de IL-17A foram associados aos altos níveis de LDH (p = 0.0130), o mesmo padrão de associação foi encontrado na IL-6 (0.0160) e IL-22 (p=0.0165) no mesmo grupo. Interessantemente, não encontramos correlações estatísticas no grupo AFSU. Os outros parâmetros hematológicos (hemoglobina, contagem de leucócitos e reticulócitos) e bilirrubina indireta não mostraram nenhuma correlação com as citocinas analisadas. Então, pela primeira vez, mostramos que a IL-17A presente nos pacientes AFUMI pode exercer um papel preventivo no desenvolvimento da STA. Além do mais, IL-6, IL-17A e IL-22 acompanharam os níveis de LDH apenas nos pacientes AFUMI sugerindo como marcadores adicionais a hemólise ou estar relacionados com a resposta imune contra patógenos extracelulares.

Submitted by Leonardo Freitas (leonardo.hfreitas@ufpe.br) on 2015-04-17T15:23:29Z No. of bitstreams: 2 Dissertacao Vaderez Ribeiro.pdf: 784971 bytes, checksum: fb76ec77c43619654e2302797b96ef4b (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-17T15:23:29Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertacao Vaderez Ribeiro.pdf: 784971 bytes, checksum: fb76ec77c43619654e2302797b96ef4b (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2012-02-29 / A anemia falciforme determinada pela presença da hemoglobina S em homozigose é a doença falciforme de maior significado clínico, considerada problema de saúde pública no Brasil. Desenvolver a filosofia do autocuidado para mudar a história natural da doença faz parte das ações da Política Nacional de Atenção Integral às Pessoas com Doença Falciforme. A identificação da demanda de autocuidado de adolescentes com anemia falciforme poderá subsidiar os enfermeiros no planejamento de ações educativas visando à melhoria da qualidade de vida desses pacientes. Assim, esta dissertação “Autocuidado de adolescentes com anemia falciforme baseado na Teoria de Orem, foi estruturada em um capítulo de revisão e dois artigos originais. O capítulo de revisão aborda os aspectos fisiopatológicos e políticos da anemia falciforme, o adolescente com doença crônica e a Teoria Geral de Enfermagem de Orem. O primeiro artigo “Autocuidado de adolescentes com anemia falciforme: conhecimentos e vivências” teve como objetivo desvelar a percepção, o conhecimento e as atitudes de adolescentes com anemia falciforme sobre o autocuidado. Foi realizado um estudo descritivo, exploratório, qualitativo. Os dados foram coletados de abril a agosto de 2011 no Hospital de Hematologia da Fundação Hemope, através de entrevista semi-estruturada com três perguntas norteadoras: Para você o que é se cuidar? O que uma pessoa da sua idade deve fazer para se cuidar? E você o que faz? A amostra foi do tipo intencional, baseada nos critérios de saturação dos discursos resultando em 11 adolescentes, com idades entre 10 e 19 anos, de ambos os sexos, freqüentadores regulares do ambulatório. Na análise dos dados utilizou-se a modalidade temática de Bardin. Dessa análise emergiram quatro categorias: responsabilidade e compromisso com o cuidado; a prática de hábitos saudáveis como forma de cuidado; o cuidado e o medo das complicações da doença; o autocuidado como fator limitante do convívio social. Os adolescentes com anemia falciforme praticam ações de autocuidado, porém estas parecem estar permeadas mais pela insegurança e medo do que pela internalização do conhecimento sobre autocuidado. Cabe ao enfermeiro incorporar ações educativas que favoreçam a construção compartilhada desses conhecimentos e contribuam na autonomia para o cuidado. O segundo artigo “Déficits de autocuidado de adolescentes com anemia falciforme” estudo qualitativo, com objetivo de caracterizar as necessidades de autocuidado dos adolescentes com anemia falciforme e possíveis fatores condicionantes das demandas encontradas. Os dados foram coletados com o mesmo grupo de participantes, através de perguntas referentes aos requisitos de autocuidado. A análise dos depoimentos identificou os déficits relacionados à manutenção de ingesta de água; manutenção do equilíbrio entre solidão e interação social; entre atividade, sono e repouso e no aprendizado para viver e conviver com a doença e suas conseqüências. Adolescência, doença crônica, orientação sociocultural, sistema familiar e de atendimento à saúde foram condicionantes na ação de autocuidado. O sistema de apoio-educação individualizado e contextualizado é aplicável aos déficits identificados, visando colaborar para o protagonismo do adolescente em relação ao seu cuidado, atendendo à Política Nacional de Atenção Integral às Pessoas com Doença Falciforme quanto à mudança na história natural da doença.

Orientador: Helena Zerlotti Wolf Grotto / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-08T13:21:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Noronha_JoseFernandodeAlmeida_D.pdf: 5060365 bytes, checksum: 9a433693a12ebc4fc3a72a0639d93c73 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Introdução: Plaquetas reticuladas (PRs) são plaquetas jovens recentemente liberadas pela medula óssea para a circulação e que possuem alto conteúdo de RNA em seu citoplasma. As PRs são descritas como plaquetas grandes, densas e mais ativas no processo de formação do trombo hemostático. A participação das plaquetas ativadas nos fenÃ'menos vaso-oclusivos que acometem pacientes com síndrome falciformes (SF) já está documentada, mas a avaliação do papel das PRs não foi ainda descrito. Assim, avaliamos o número e a atividade das PRs, correlacionando-os com os níveis séricos de P-selectina solúvel (sCD62p), interleucinaâ?¿6 (IL-6), interleucina-3 (IL-3) e trombopoietina (TPO) em sangue periférico de pacientes em diferentes estágios clínicos das SF. Casuística e Métodos: Foram estudados 89 pacientes adultos, sendo 38 em fase â?¿estávelâ??, 27 em crise hemolítica (CH), 27 em crise vaso-oclusiva (CVO) e 30 indivíduos saudáveis (grupo controle - GC). Os parâmetros plaquetários, incluindo a quantificação de macroplaquetas foram determinados em analisador hematológico. Através da técnica da citometria de fluxo com o uso de anticorpos monoclonais e thiazole orange (TO), realizamos as identificações e quantificações das plaquetas ativadas (anti CD41a + anti CD62p), PRs (anti CD41a + TO) PRs ativadas (TO + anti CD62p). As dosagens de sCD62p, IL-6, IL-3 e TPO foram realizadas pela técnica de ELISA. Resultados: O número de macroplaquetas foi significativamente superior nas 3 fases clínicas das SF em relação ao GC. O número de plaquetas ativadas, tanto reticuladas como maduras foi superior em todas as fases clínicas quando comparadas ao GC. Os valores de PRs mostraram-se mais elevados no grupo de pacientes em CVO do que na fase â?¿estávelâ?? e na CH. Em todos os grupos as PRs apresentaram um maior grau de ativação quando comparadas às plaquetas maduras. Os pacientes em CVO apresentaram maiores níveis de sCD62p em relação ao GC. Nas diferentes fases das SF observamos níveis séricos elevados de IL-6, IL-3 e TPO, embora não tenha sido observada correlação entre essas determinações com os números absolutos de PRs, Plaquetas ativadas (CD62p+) e PRs ativadas (TO+/CD62p+). Conclusões: Os resultados sugerem a contribuição das PRs na trombogênese das Síndromes Falciformes. Níveis elevados das interleucinas provavelmente indicam a participação das mesmas no processo inflamatório que acompanha os fenÃ'menos de vaso-oclusão, mas aparentemente esses moduladores inflamatórios não exercem efeito sobre a trombopoiese em pacientes com SF / Abstract: Introduction: Reticulated Platelets (RPs) are youngest platelets released recently from bone marrow to the blood and are characterized by the high citoplasmatic RNA content. RPs are described as higher size, denser and more active in the formation of thrombus than mature platelets. The participation of activated platelets in vaso-occlusive process in sickle cell disease patients have been documented, but the evaluation of the RPs role has not been established at the moment. We evaluated the number and activity of RPs and correlated them with serum soluble P-selectin (sCD62p), Interleukin-6 (IL-6), Interleukin 3 (IL-3) and thrombopoetin (TPO) levels in patients with sickle cell diseases in different clinical expressions. Casuistic and Methods: Eighty-nine adult patients were studied: 38 in steady-state, 27 in hemolytic crisis (HC), 27 in vascular-occlusive crisis (CVO) and 30 healthy individuals (control groupâ?¿CG). Platelet parameters including the percentage of larger platelets were obtained by an automatic hematological analyzer. Monoclonal antibodies, thiazole orange (TO) dye and flow cytometric technique were used to identify and to quantify activated platelets (anti CD41a+ and anti CD62p+), RPs (anti CD41a+ and TO+) and activated RPs (TO+ and anti CD62p+). Soluble CD62p, IL-3, IL-6 and TPO determinations were measured by ELISA tests. Results: The number of macroplatelets was significantly higher in steady-state, CVO and HC groups than in CG. The number of activated mature platelets and activated RPs was higher in all stages of the disease when compared with CG. PRs values were more elevated in group of patients with CVO than in HC and steady-state. The degree of activation was higher in PRs than in mature platelets independently on sickle cell disease phase. CVO patients showed higher serum levels of sCD62p than CG. IL-6, IL-3 and TPO serum levels were increased in sickle cell disease, but there was not a correlation between those determinations and parameters related to platelets. Conclusions: Our results suggest that PRs contribute to the thrombogenesis process in sickle cell disease. Increased serum levels of interleukins probably indicate the participation of PRs in inflammatory process which is associated to vascular-occlusive phenomenon, but apparently those inflammatory mediators do not have an effect on thrombopoiese in sickle cell disease patients / Doutorado / Ciencias Biomedicas / Doutor em Ciências Médicas

Orientador: Nicola Amanda Conran Zorzetto / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-15T08:53:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Miguel_LedianaIagalo_M.pdf: 1386194 bytes, checksum: b81f5aa45e96b255588df48747c1397c (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A adesão anormal das células brancas e vermelhas ao endotélio, que desencadeia numa diminuição do fluxo de sangue na microcirculação, é um dos principais fatores envolvidos na iniciação da vaso-oclusão em pacientes falciformes (AF). O estado inflamatório crônico, característico nos pacientes com AF, eleva a circulação de citocinas, as quais podem contribuir significativamente para a ativação e adesão das células vermelhas e brancas ao endotélio. O óxido nítrico (NO) e a via de sinalização dependente em NO têm importante efeito inibidor nas propriedades adesivas de leucócitos. Drogas que aumentem a biodisponibilidade de NO ou que atuem na via de sinalização NO-GMPc podem ser benéficas no tratamento de alguns aspectos da AF. Já é de conhecimento que pacientes com AF apresentam níveis elevados de algumas citocinas presentes no plasma, assim sendo, este estudo teve como objetivo avaliar os efeitos in vitro das citocinas nas propriedades adesivas de neutrófilos e células vermelhas de indivíduos controles e pacientes com AF. Adicionalmente, foram determinados os efeitos de BAY 73-6691, um inibidor da enzima hidrolizante de GMPc, fosfodiesterase 9A (PDE9A) e BAY 41-2272, um ativador de guanilato ciclase, na ausência ou presença da estimulação pelas citocinas na adesão dessas células. Os neutrófilos e as células vermelhas de indivíduos controles e pacientes com AF foram isolados de sangue periférico. A adesão das células à fibronectina foi determinada utilizando o ensaio de adesão estático na presença ou ausência das citocinas IL-8 (10-500ng/ml), TNF-alpha (10-100ng/ml) e GM-CSF (0,1-10ng/ml) e/ou na presença/ausência de BAY 73-6691 (60µM), BAY 41-2272 (60nM) ou DMSO como veículo (0.2%v/v). Como previamente demonstrado, os neutrófilos de pacientes com AF (neutrófilos AF) possuem uma maior capacidade de aderir à FN do que os neutrófilos de indivíduos controle (neutrófilos CON). A estimulação das células in vitro com as três citocinas aumentaram significativamente as adesões à FN dos neutrófilos CON e aumentou ainda mais a adesão dos neutrófilos AF. A incubação de ambos os neutrófilos, CON e AF, com BAY 73-6691, mas não BAY 41-2272, reduziu significativamente as propriedades adesivas à FN; esse evento foi acompanhado por uma diminuição da expressão das moléculas de adesão, L-selectina e CD11b (subunidade Mac-1) na superfície de neutrófilos AF. Além do mais, nas concentrações utilizadas, BAY 73-6691, mas não o BAY 41-2272, diminui significativamente a adesão de neutrófilos CON e AF após estimulação com IL-8, TNF-a e GM-CSF. No entanto, esse evento não foi acompanhado por alterações na expressão da moléculas de adesão na superfície de neutrófilos AF quando estimulados com IL-8. As células vermelhas de indivíduos AF também apresentaram uma maior capacidade de se aderir à FN quando comparadas às células de indivíduos controles. No entanto, ao contrário dos neutrófilos, na presença de IL-8 (10-500ng/ml) e TNF-a (0.1-1µg/ml), não houve alteração das propriedades adesivas dessas células tanto de indivíduos controles quanto das células de pacientes com AF. Além disso, BAY 73-6691 e BAY 41-2272, não alteraram a adesão basal tanto das células vermelhas de controles quanto pacientes com AF. Os principais mediadores inflamatórios, utilizados em concentrações fisiologicamente relevantes, foram capazes de aumentar as propriedades adesivas de neutrófilos, mas não das células vermelhas, de indivíduos controles e AF. Portanto, sugerimos que as citocinas inflamatórias circulantes podem desempenhar um papel na indução das propriedades adesivas dos neutrófilos em pacientes falciformes; em contrapartida, outros fatores além do estímulo inflamatório, podem ser mais importante para induzir a adesão das células vermelhas de pacientes AF. Dados sugerem que agentes que aumentam os níveis de GMPc intracelular podem ser úteis para reduzir as propriedades adesivas de neutrófilos AF, mesmo na presença de um estado inflamatório. PDE9A é altamente expressa pelas células hematopoiéticas e a inibição desta enzima, com conseqüente elevação de GMPc, pode representar um alvo terapêutico para drogas que são tecido/célula específicas, necessitando de mais estudos in vivo e in vitro para a terapêutica de AF / Abstract: The adhesion of both red and white cells to the vessel walls of the microcirculation initiates vaso-occlusion in sickle cell disease (SCD). The chronic inflammatory nature of SCD leads to elevation of circulating cytokines in patients, which may contribute significantly to the activation of red and white cells and their consequent adhesion. Nitric oxide (NO) and the NO-dependent signaling pathway have important inhibitory effects on cellular adhesive properties. Drugs that enhance NO bioavailability or NO-cGMP-dependent signaling may hold potential for treatment of various aspects of SCD. It is known that levels of certain cytokines are augmented in the plasma of SCD individuals; therefore, this study aimed to observe the effect of cytokines, on the in vitro adhesive properties of neutrophils (neu) and red blood cells (RBC) from healthy control (CON) and steady-state SCD (SCD) individuals. Furthermore, the effects of BAY 73-6691, an inhibitor of the cGMP-hydrolyzing enzyme, phosphodiesterase 9A (PDE9A) and BAY 41-2272, a guanylate cylase activator, on non-stimulated and cytokine-stimulated cell adhesion were determined. Neutrophils and red blood cells (RBC) were isolated from the peripheral blood of CON and SCD individuals. Cell adhesion to immobilized fibronectin was assessed using static adhesion assays in the presence or absence of the cytokines, IL-8 (10-500ng/ml), TNF-alpha (10-100ng/ml) and GM-CSF (0,1-10ng/ml) and/or in the presence/absence of BAY 73-6691 (10-60µM), BAY 41-2272 (60nM) or DMSO vehicle (0.2%v/v). As previously demonstrated, SCDneu have a greater capacity to adhere to FN than CONneu. Stimulation of cells in vitro with all three cytokines significantly augmented both CONneu adhesion to FN and further increased SCDneu adhesion. The incubation of both CONneu and SCDneu with BAY 73-6691, but not BAY 41-2272, significantly reduced their adhesions to FN; this was accompanied by a decrease in the expressions of the L-selectin and CD11b (Mac-1-subunit) adhesion molecules on the SCAneu surface. Furthermore, BAY 73-6691, but essentially not BAY 41-2272, significantly inhibited CONneu and SCDneu adhesion stimulated by IL-8, TNF-alpha and GM-CSF. However, this was not accompanied by alterations in adhesion molecule presentation on IL-8-stimulated SCAneu. As previously reported, SCD RBC have a greater capacity to adhere to FN, in vitro, compared to CON RBC. However, in contrast to neutrophils, cytokines IL-8 (10-500ng/ml) and TNF-alpha (0.1-1µg/ml) did not alter the capacities of neither CON RBC nor SCD RBC to adhere to FN. Furthermore, BAY 73-6691 and BAY 41-2272 did not affect either basal CON RBC or SCD RBC adhesion. Key SCD inflammatory mediators were found, at physiologically relevant concentrations, to augment the adhesive properties of neutrophils from control and SCD individuals. Circulating inflammatory cytokines may play a role in the induction of leukocyte adhesive properties in SCD; in contrast factors other than inflammatory stimuli may be more important for induction of SCD RBC adhesion. Data suggest that elevation of intracellular cGMP may be an important approach for reducing SCD leukocyte adhesive properties, even in an inflammatory environment. PDE9A is highly expressed in hematopoietic cells and inhibition of this enzyme, with consequent augmentation of cGMP, may represent a tissue/cell-specific therapeutic drug target worthy of further in vitro and in vivo studies as a therapy for SCD / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

Orientador: Nicola Amanda Conran Zorzetto, Fernando Ferreira Costa / Texto em português e inglês / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-24T19:18:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Garrido_VanessaTonin_D.pdf: 6610754 bytes, checksum: 9b799d90821835bae6ac5d806b1d2f1c (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: A anemia falciforme (AF) é uma hemoglobinopatia hereditária resultante de uma mutação no gene que codifica a subunidade ?-globina, levando à produção da hemoglobina S (HbS) nos eritrócitos. Com a polimerização da HbS, durante a desoxigenação, ocorre a deformação e fragilização das células vermelhas, resultando em anemia hemolítica e eventos vaso-oclusivos. As crises vaso-oclusivas são a principal causa de morbidade nos pacientes com anemia falciforme e as plaquetas parecem ter um papel importante nesse processo, pois uma vez ativadas elas secretam e expressam mediadores que induzem uma resposta inflamatória tanto em leucócitos como em células endoteliais. A proposta deste trabalho foi investigar a produção e expressão dos mediadores inflamatórios derivados de plaquetas, LIGHT e CD40L, em controles (indivíduos saudáveis; CON), pacientes com anemia falciforme (AF) e pacientes com anemia falciforme em terapia com hidroxiureia (AFHU). Também avaliamos o envolvimento das plaquetas e seus mediadores na ativação de leucócitos e células endoteliais. Os níveis plasmáticos de ambas citocinas foram significativamente maiores em indivíduos AF e AFHU do que nos indivíduos controle e, curiosamente, apesar da hidroxiureia ser capaz de diminuir a concentração plasmática de algumas citocinas inflamatórias, a terapia com essa droga não foi associada com qualquer alteração nos níveis de LIGHT ou CD40L. Foi observada uma correlação expressiva da concentração de LIGHT com níveis plasmáticos de CD40L, IL-8, ICAM-1, Trombospondina-1 e TNF-?, enquanto que a concentração plasmática de CD40L correlacionou-se com os níveis de TNF-? e principalmente com Trombospondina-1, indicando que tanto LIGHT como CD40L podem estar participando ou então refletindo a inflamação crônica presente na anemia falciforme. A expressão proteica de LIGHT foi significativamente maior na superfície de plaquetas de indivíduos AF e AFHU em comparação com plaquetas CON e apresentou uma correlação com marcadores de ativação plaquetária. A secreção de LIGHT pelas plaquetas foi determinada por ELISA e concentrações significativas dessa citocina puderam ser detectadas no sobrenadante de plaquetas CON e AF, sugerindo que essas células podem ser uma fonte importante de LIGHT na circulação. Apesar da expressão de CD40L não ter sido detectada na superfície das plaquetas de pacientes e controles, as plaquetas de pacientes AF secretaram uma quantidade maior de CD40L em comparação aos controles e foi observada uma correlação significativa entre a liberação de LIGHT e CD40L em plaquetas de pacientes AF, indicando que pode existir uma associação na secreção dessas duas citocinas. A expressão dos receptores de LIGHT (HVEM e LT?R) e de CD40L (CD40) foi avaliada por citometria de fluxo em plaquetas, neutrófilos, linfócitos e monócitos. Foi observado que o receptor HVEM estava mais expresso em plaquetas e linfócitos de pacientes com anemia falciforme, enquanto que a expressão do receptor CD40 estava elevada nas plaquetas, nos neutrófilos, nos linfócitos e nos monócitos de pacientes, comparando com o grupo controle. Esses dados mostram que a via de sinalização de LIGHT e CD40L pode estar alterada na anemia falciforme, contribuindo com a ativação dos leucócitos. Quando avaliamos a participação das plaquetas na ativação dos leucócitos, observamos que as plaquetas de indivíduos com anemia falciforme foram eficientes em aumentar a expressão do marcador de ativação, CD69, nos linfócitos e também em induzir o fenótipo pró-inflamatório nos monócitos. Enquanto que a co-cultura de HUVECs com plaquetas demonstrou que as plaquetas de pacientes com anemia falciforme possuem uma capacidade maior de induzir a expressão de ICAM-1 em células endoteliais do que as plaquetas de indivíduos controle. Na presença de anticorpos anti-CD40L observamos uma redução drástica no aumento da expressão de ICAM-1 pelas plaquetas e apesar dessa expressão também ter sido reduzida na presença de anticorpos anti-LIGHT, esses resultados não foram estatísticamente significativos. Interessantemente, altas concentrações plasmáticas de LIGHT estavam associadas com a elevada velocidade de regurgitação tricúspide, um indicativo de hipertensão pulmonar na anemia falciforme e uma associação significativa também foi encontrada entre níveis elevados de CD40L e pacientes com histórico de Síndrome Torácica Aguda. Essas evidências sugerem que LIGHT e CD40L parecem estar contribuindo com a ativação dos leucócitos e do endotélio, exercendo um papel importante na fisiopatogenia da anemia falciforme e aparentemente nas manifestações clínicas desta doença. Os resultados encontrados neste estudo evidenciam a importância que as plaquetas e seus mediadores inflamatórios, LIGHT e CD40L, podem ter na propagação da inflamação vascular presente na anemia falciforme, se tornando possíveis alvos para novas abordagens terapêuticas / Abstract: Sickle cell disease results from a single amino acid substitution in the gene encoding the ?-globin subunit, leading to hemoglobin S production in red blood cells. Polymerization of deoxygenated sickle hemoglobin leads to decreased deformability of red blood cells, resulting in hemolytic anemia and vaso-occlusive events. Platelets appear to play an important role in the vaso-occlusive process, as following their activation they express and secrete mediators that induce an inflammatory response in endothelial cells and leukocytes. The purpose of this study was to investigate the production and expression of LIGHT and CD40L on platelets, the presence of this protein in the plasma of controls (healthy subjects; CON), sickle cell anemia patients (AF) and sickle cell anemia patients on hydroxyurea therapy (AFHU). In addition, this study evaluated the involvement of platelets and their mediators, LIGHT and CD40L, in the activation of leukocytes and endothelial cells. Plasma levels of both cytokines were significantly higher in AF and AFHU individuals than in control individuals and interestingly, HU therapy was not associated with a reduction in these levels. A significant correlation was observed between levels of LIGHT with plasma levels of CD40L, IL-8, ICAM-1, Thrombospondin-1 and TNF-?, whereas the plasma concentration of CD40L correlated with levels of TNF-? and especially with plasma Thrombospondin-1. LIGHT expression was significantly higher on the surface of platelets from AF and AFHU subjects, compared with CON individuals and this expression demonstrated a correlation with markers of platelet activation. LIGHT secretion was determined by ELISA and significant concentrations of this cytokine could be detected in the supernatant of platelets from CON and AF individuals, indicating that platelets may be an important source of LIGHT. Although CD40L expression was not detected on the platelet surface in patients or controls, sickle platelets secreted an increased amount of CD40L, compared to controls. A significant correlation was observed between CD40L and LIGHT release in sickle cell patients, indicating that the production of these two proteins may be tightly coupled. The expression of LIGHT (HVEM and LT?R) and CD40L (CD40) receptors was evaluated by flow cytometry on the surface of platelets, neutrophils, lymphocytes and monocytes. An increased HVEM receptor expression was observed on the platelets and lymphocytes of sickle cell patients, whereas the expression of the CD40 receptor was elevated on platelets, neutrophils, lymphocytes and monocytes from sickle cell patients, compared to control subjects. Evaluating the contribution of platelets to leukocyte activation, we observed that platelets from sickle cell anemia individuals increased the expression of the activation marker, CD69, on lymphocytes and also induced a pro-inflammatory phenotype on monocytes. Co-culture of HUVEC with platelets demonstrated that sickle cell platelets have an increased ability to induce ICAM-1 expression on endothelial cells than platelets from control subjects. Furthermore, in the presence of anti-CD40L antibodies, a drastic reduction was observed in this increase. Although the expression of endothelial ICAM -1 was also reduced in the presence of anti-LIGHT antibodies, these results were not statistically significant. Interestingly, high plasma concentrations of LIGHT were associated with elevated tricuspid regurgitant velocity, indicative of pulmonary hypertension in sickle cell anemia. A significant association was also found between high levels of CD40L and patients with a lifetime history of acute chest syndrome. LIGHT and CD40L appear to contribute to leukocyte and endothelial activation, playing an important role in the pathophysiology of sickle cell anemia and apparently in the clinical manifestations of this disease. These results highlight the important role that platelets and their inflammatory mediators may play in the vascular inflammation that is known to occur in sickle cell anemia / Doutorado / Fisiopatologia Médica / Doutora em Ciências

Orientadores: Sara T. O. Saad, Carlos Lenz Cesar / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T17:05:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Brandao_MarceloMendes_D.pdf: 5903908 bytes, checksum: 0c74a8c1fd4bd94885347577c4ae2bde (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: Lasers têm sido uma ferramenta cada vez mais utilizada na área da Biologia Celular e Medicina para medidas, diagnóstico e manipulação. Dentre essas utilizações destaca-se o trabalho pioneiro de A. Ashkin e colaboradores em 1986 que demonstraram o uso de uma técnica baseada na transferência de momentum dos fótons para capturar partículas dielétricas. Logo a seguir eles utilizaram essa técnica para capturar e manipular partículas biológicas com tamanhos variando de décimos a centenas de micra, demonstrando, desta forma, que este sistema funciona como uma "pinça óptica" para realizar manipulações intra e extracelulares sem causar prejuízo algum ao organismo vivo. Neste trabalho, a pinça óptica foi empregada para a análise do comportamento mecânico de hemácias normais, portadoras de hemoglobina 5 (homozigotos e heterozigotos) no estado normal e em crise falcêmica, esferocitose hereditária e anemia ferropriva. Foi ainda estudada a ação da hidroxiureia na reologia dos eritrócitos, da irradiação gama e da heterozigose para hemoglobina 5 em células estocadas em bolsas de doação de sangue. As análises foram feitas com um feixe de laser fortemente focado por uma objetiva de x100 de um microscópio, acoplado a um sistema de vídeo utilizado para gravar as imagens e posteriormente envia-Ias para análise em um computador. Pelo menos 20 células de cada participante foi pinçada pelo laser e arrastada contra plasma humano AS + com viscosidade conhecida em 6 velocidades constantes variando de 150 J.1m1s a 250J.1m1s (150, 170, 190, 210, 230, 250J.1m1s). A análise da deformação celular em razão da velocidade nos permitiu ter uma visão da elasticidade celular. A pinça óptica apresenta uma vantagem em relação as técnicas comumente utilizadas para aferir a deformabilidade celular, a análise das células é individual, levando em consideração a interação do citoplasma e da membrana. Os resultados sugerem que alterações na membrana da hernácia ou da hemoglobina causam um distúrbio no comportamento mecânico normal dos eritrócitos,. tomando-os mais rígidos, algumas vezes ultrapassando a capacidade de medida da metodologia. Com a pinça foi possível caracterizar a ação da HU no comportamento mecânico das células HbSS. A metodologia de pinça óptica pode ser muito útil para se verificar o efeito de outras drogas na deformabilidade de hemácias normais ou em pacientes com alterações da hemoglobina ou da membrana celular e também, estudar o efeito de diferentes conservantes para estocagem de hemácias / Abstract: The deformability of erythrocytes is a critical determinant of blood flow in microcirculation. By capturing red blood cells with optical tweezers and dragging them through a viscous fluid we were able to measure their overall elasticity. Laser optical tweezers, based on photon momentum transfer, have been used successfully in a variety of biological applications. This technique is capable of measuring the whole red blood cell elasticity and viscosity. The optical trap was performed with a Nd:YAG laser strongly focused in a microscope connected to a CCD camera. A computer captured the images, where they were quantitatively and qualitatively analyzed. The elasticity measurement was obtained by dragging the RBC with the optical tweezers through the plasma fluid with a known viscosity. It should be pointed out that the laser does not exert any pressure or photo-damage on the cell. The analysis of the cell deformation vs velocity allowed us to obtain cell elasticity expressed in dyn/cm. The model we used to extract the values for the membrane elasticity and viscosity assumed that the cell is a parallelepiped with length lo, width W and negligible thickness which is located at distance Z1 trom the bottom of the Neubauer chamber and Z2 trom the cover slip. We assumed that the elastic response to an applied force is given by F=J.1(WILo)~L, where F is the force, J.1 is the elasticity and ~L is the cell length deformation. We assumed a drag force F given by F=TI(Wl.o(kq)V, where TI is the plasma viscosity, (1/Zeq)= (11Z1)+ (11Z2) and Vis the drag velocity. The equilibrium occurs when one force cancels the other. Therefore the elongation ~L as a function of drag velocity is given by ~L= (Tllo 1(J.1Zeq)] V, which can be used to extract a value for J.1 provided by the plasm viscosity TI, length lo and Zeq which are easily measured. We measured, and compared, the red blood cell deformability trom normal contrais (HbAA) , patients with: homozygous (HbSS) and heterozygous (HbAS) sickle hemoglobin, HbSS subjects on sickling crisis, hereditary spherocytosis and with iron deficiency anemia. We also studied ,the action of hydroxyurea on rheologic behavior of HbSS cells, the gamma irradiation and the heterozygosis for sickle hemoglobin on cells storage on blood donation bags. Our results showed that the red blood cell deformability was significantly lower in HbS subjects (HbSS and HbAS) , except for HbSSIHU cells, whose deformability was similar to the normal controls. Our data showed that the laser optical tweezers technique is able to detect differences in HbS red blood cells trom subjects taking hyd,roxyurea as well as to differentiate red blood cells trom normal controls and HbAS, indicating that this is a very sensitive method and can be applied for detection of drug-response in sickle cell disease. The sensitivity of the laser optical tweezers method showed that there is no significant change in elasticity over time up to 14 days of storage, regardless of whether the unit was irradiated or not. However, beyond 21 days of storage, irradiated units demonstrate decreased elasticity. RBCs elasticity trom AS units stored for 1, 14 and 21 days presented significantly lower elasticity when compared to HbAA cells stored for the same period. Mostly of RBcs trom HbAS units stored for 28 and 35 days, Hereditary spherocytosis cells and sickle crisis cells were very rigid or escaped trom the optical trapo So these cells did not stay in the trap when the velocities were increased. Hence, the accuracy of elasticity measurement was impaired. / Doutorado / Clinica Medica / Doutor em Clínica Médica