Orientador: Luiz Carlos Dias / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Química / Made available in DSpace on 2018-08-16T12:55:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Goncalves_CarolinedaCostaSilva_D.pdf: 6751607 bytes, checksum: 9bd088f8ddc948d84afa9c74d3c1b9bd (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Síntese Total das Basiliskamidas A e B: As basiliskamidas A e B são agentes antifúngicos isolados em 2002 por Anderson e colaboradores, a partir de uma cultura de bactérias marinhas Bacillus laterosporus (MK-PNG-276). Nesta primeira parte do trabalho, descrevemos a síntese total das basiliskamidas A e B. As basiliskamidas A e B são oriundas de um intermediário comum, o diol 1.4. As etapas chave incluem uma reação aldólica do tipo anti, mediada por (CHx)2B e uma reação de redução diastereosseletiva sob as condições de Narasaka. A basiliskamida B (1.2) foi obtida em 12 etapas e 6% de rendimento global e a basiliskamida A (1.1) em 14 etapas e 2,5% de rendimento global, a partir da etilcetona 1.47 (considerando a rota linear mais longa para ambas).Síntese do Fragmento C1-C9 da (-)-Dictiostatina (2.1): A (-)-dictiostatina (2.1) é uma macrolactona com potente atividade antitumoral, isolada em 1994 por Pettit e colaboradores, a partir da esponja marinha Spongia sp. e, posteriormente por Wright e co-autores a partir da esponja da família Corallistidea. Nesta segunda parte do trabalho, descrevemos a síntese do fragmento C1-C9 da (-)-dictiostatina (2.1). Os centros esterogênicos em C6 e C7 foram construídos através de uma reação de epoxidação enantiosseletiva de Sharpless seguido da abertura regio e diastereosseletiva do epóxido com Me2CuCNLi2. O fragmento C1-C9 (2.103) foi obtido em 13 etapas e 5% de rendimento global a partir do álcool 2.115, considerando a rota linear mais longa. / Abstract: Total Synthesis of Basiliskamides A and B: Basiliskamides A and B are antifungal agents isolated by Andersen and co-workers in 2002 from the marine bacterium Bacillus laterosporus (MK-PNG-276). The first chapter describes the total synthesis of basiliskamides A and B. Basiliskamides A and B were prepared from a common intermediate, 1,3-diol 1.4. Notable features of this approach include an anti-aldol reaction and a diastereoselective reduction using Narasaka's methodology. Basiliskamide B (1.2) was obtained in 12 steps and 6% overall yield and basiliskamide A (1.1) was prepared in 15 steps and 2.5% overall yield from ethyl ketone 1.47. Synthesis of C1-C9 fragment of (-)-Dictyostatin (2.1): The macrolactone (-)-dictyostatin (2.1) showed potent growth inhibition against a range of human cancer cells lines. This compound was isolated from the marine sponge Spongia sp by Petit and co-workes in 1994 and from Corallistidea sponges in 2001 by Wright and co-workers. The second chapter describes the synthesis of C1-C9 fragment of (-)-dictyostatin (2.1). The two stereocenters (C6 and C7) were created via a Sharpless's epoxidation followed by a diastereoselective epoxide opening mediated by Me2CuCNLi2. The synthesis of C1-C9 (2.103) fragment was achieved after 13 steps in 5% overall yield starting from alcohol 2.115. / Doutorado / Quimica Organica / Doutor em Ciências

Orientador: Angélica Zaninelli Schreiber / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-17T18:50:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Biancalana_FernandaSimasCorrea_D.pdf: 1602190 bytes, checksum: f9f6d1fcbc7dcd1bf6b7e3dc9f3c4a90 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: Nos últimos anos, os fungos demáceos têm sido intensamente reconhecidos como importantes patógenos, principalmente em pacientes imunocomprometidos, sendo reportadas como patogênicas mais de 100 espécies de 60 diferentes gêneros. O tratamento das infecções causadas por estes fungos é difícil, bastante demorado e algumas vezes sem sucesso, portanto, se fazem necessários mais estudos sobre a suscetibilidade destes patógenos a antifúngicos in vitro. Alguns autores têm demonstrado a excelente eficácia in vivo da terbinafina, em combinação com outros antifúngicos, para o tratamento destas infecções, porém são poucos os que avaliam seu efeito in vitro isoladamente, e menos ainda os relatos sobre associação desta com outros antifúngicos. A maioria dos trabalhos utiliza apenas o inóculo com conídios, que não é a principal morfologia do fungo encontrada no paciente. A realização de testes utilizando hifas poderia mimetizar as características do fungo no tecido infectado, demonstrando melhor o potencial terapêutico do antifúngico. Existem poucos relatos na literatura sobre avaliação dinâmica de crescimento de fungos, e nenhum deles realizado com fungos demáceos. Partindo deste princípio, foi investigada neste estudo a suscetibilidade in vitro de conídios e hifas fungos demáceos dos gêneros Alternaria, Bipolaris, Cladophialophora, Curvularia, Exophiala e Fonsecaea frente a anfotericina B, itraconazol e voriconazol e terbinafina, e esta última em combinação com os demais antifúngicos através da metodologia do tabuleiro de xadrez e avaliação dinâmica de crescimento. Quando avaliados isoladamente, o voriconazol foi o antifúngico mais ativo, seguido de itraconazol, terbinafina e anfotericina B, utilizando conídios. Quando foi feita a associação, os resultados indicaram 100% de sinergismo nas interações entre terbinafina e voriconazol, 96,5% de sinergismo entre anfotericina B e terbinafina e 75,9% de sinergismo entre terbinafina e itraconazol. Nenhum caso de antagonismo foi observado. Voriconazol e itraconazol demonstraram maior atividade frente a hifas dos isolados avaliados, seguidos de terbinafina e anfotericina B. Os isolados de C. bantiana e F. pedrosoi demonstraram altos valores de CIM frente a anfotericina B. Os valores de CIM obtidos para as hifas foram menores que os dos conídios, chegando a duas ou quatro diluições abaixo do valor da CIM. Os resultados demonstraram 100% de sinergismo entre a terbinafina e os azólicos ou a anfotericina quando utilizadas hifas no sistema BCT. Concluindo, os resultados obtidos neste trabalho sugerem que a forma de hifas dos isolados avaliados é mais suscetível que a de conídios frente aos antifúngicos avaliados tanto isoladamente, como em associação. / Abstract: In recent years, the dematiaceous fungi have been widely recognized as important pathogens, especially in immunocompromised patients, being reported as pathogenic, more than 100 species of 60 different genera. Treatment of infections caused by these fungi is difficult, time consuming and sometimes without success, therefore, more studies are needed about the susceptibility of the pathogens to antifungal agents in vitro. Some studies have demonstrated excellent in vivo efficacy of terbinafine in combination with other antifungals to treat these infections, but few ones have evaluated the in vitro effect of terbinafine alone, and even less are about association with other antifungal agents. Most used only the inoculum with conidia, which is not the essencial morphology of the fungus found in the patient. Testing susceptibility using hyphae could mimic the characteristics of the fungus in infected tissue, demonstrating more clearly the therapeutic potential of the antifungal agent. There are few reports in the literature on dynamic evaluation of mold growth, and none of them performed with dematiaceous fungi. With this assumption, was investigated in this study the in vitro susceptibility of terbinafine alone and in combination with amphotericin, itraconazole and voriconazole against conidia and hyphae of dematiaceous fungi belonging to genera: Alternaria, Bipolaris, Cladophialophora, Curvularia, Exophiala and Fonsecaea, using the checkerboard methodology and evaluation of dynamic growth. When evaluated alone, voriconazole was the most active antifungal agent, followed by itraconazole, terbinafine and amphotericin B, using the broth microdilution method with conidia. In the association, the results indicated 100% of synergism in interactions between voriconazole and terbinafine, 96.5% of synergism between amphotericin and terbinafine and 75.9% of synergism between terbinafine and itraconazole. No case of antagonism was observed. Voriconazole and itraconazole demonstrated the highest activity with the use of BCT with hyphae of isolates evaluated, followed by terbinafine and amphotericin B. Isolates of C. bantiana and F. pedrosoi showed higher MIC values compared to amphotericin B. MIC values obtained for hyphae were lower than those of conidia two or four dilutions below the MIC value. The results demonstrated 100% synergistic interactions between terbinafine and azoles or amphotericin when testing hyphae in BCT system. In conclusion, the present results suggest that the hyphae form of tested isolates are more susceptible than conidia to the antifungal agent evaluated alone or in combination. / Doutorado / Ciencias Biomedicas / Doutor em Ciências Médicas

Orientador: Angelica Zaninelli Schreiber, Maria Luiza Moretti / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-06T13:48:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Loyola_AnaBeatrizAlkmimTeixeira_D.pdf: 5844968 bytes, checksum: 4d27c47d59746710e359ef7d4b61f1b7 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: Os fungos filamentosos do gênero Aspergillus são fungos hialinos, saprófitas, encontrados no solo e na vegetação em decomposição e têm sido, crescentemente, relatados em casos de infecções sistêmicas ou disseminadas. A patogenicidade destes fungos oportunistas está na alta concentração dos microconídios no ar, facilitando a sua inalação. Infecções por Fusarium spp são altamente resistentes à terapia disponível, com prognostico desfavorável e taxa de mortalidade em torno de 57% dos casos. Vários relatos têm descrito a tolerância in vitro, ou resistência, de espécies de Aspergillus aos agentes antifúngicos após falha terapêutica com anfotericina B. A infecção por Aspergillus sp em pacientes imunossuprimidos apresenta taxa de mortalidade em torno de 86%, independente do tratamento antifúngico. Assim, testes de suscetibilidade a antifúngicos são de estrema importância. O teste de microdiluição, utilizando suspensão de conídios, foi recentemente padronizado pelo CLSI. No entanto, em regra, as infecções causadas por fungos filamentosos são caracterizadas pela presença de hifas no tecido infectado, sendo portanto, a realização do teste de suscetibilidade com hifas, de grande interesse clinico. A concentração inibitória mínima (CIM) de vários agentes antifúngicos pode ser determinada pela observação da inibição de crescimento de um hifa isolada. Há poucos relatos na literatura sobre a medição automatizada do crescimento de hifas de Aspergillus sp. e nenhum relato para hifas de Fusarium sp. pelo sistema 'BioCell-tracer POT. MARCA REGISTRADA¿... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Aspergillus and Fusarium species are hyaline moulds that are usually found in the soil and plants. These organisms have emerged as a cause of disseminated invasive disease. It has been suggested that airborne conidia might invade the respiratory tract with primary lung or sinus localisation Fusarium species are largely resistant to available chemotherapy and are correlated with poor prognosis and lethal outcome in 57% of the cases. Several reports have described in vitro tolerance or resistance of Aspergillus spp to antifungal infection in immunossupressed patients shows mortality around 86%, independente of antifungal treatment. Antifungal susceptibility testing of filamentous fungi has therefore become more importante. Since most infections caused by filamentous fungi are characterized by the presence of hyphal elements in the tissue, the monitoring of hyphal susceptibility might be of clinical interest. The MICs of several antifungal agents cam be determined based on the growth rate of a single hypha. There are only few reports for automatic growth evaluation for Aspergillus spp and no reports for Fusarium spp using the 'BioCell-tracer POT. MARCA REGISTRADA¿ system. In this work, we selected four clinical isolates of Aspergillus and four clinical isolates of Susarium. For all strains we prodeeded microdilution and hypha susceptibility antifungal evaluation with amphotericin B and itraconazole...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Doutorado / Ciencias Biomedicas / Doutor em Ciências Médicas

Orientador: Jose Francisco Hofling / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-08T12:53:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Anibal_PaulaCristina_M.pdf: 2168298 bytes, checksum: 97eb6e5c3daa9ef33ad620dedafac901 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: A cavidade oral abriga uma complexa comunidade de microrganismos que podem estar aderidos aos dentes, à mucosa epitelial ou formando biofilme. A maioria desses microrganismos são comensais, com uma minoria causando infecções oportunistas. Dentre esses microrganismos, encontramos as leveduras do gênero Candida, principalmente em indivíduos imunocomprometidos; o principal agente etiológico da cárie dental Streptococcus mutans e, apesar da presença controversa, o patógeno oportunista Staphylococcus aureus. Diante do desenvolvimento de resistência aos antimicrobianos, há uma grande preocupação relacionada a qual tipo de tratamento utilizar no combate às infecções provocadas por esses microrganismos. O emprego de extratos brutos de plantas tem merecido a atenção de pesquisadores de vários países, já que podem inibir o crescimento bacteriano e fúngico por diferentes mecanismos quando comparados aos antimicrobianos, justificando a pesquisa em questão. As plantas utilizadas nesta pesquisa foram a Mentha piperita, Rosmarinus officinalis, Tabebuia avellanedae, Arrabidaea chica, Syzygium cumini e Punica granatum, extraídas com os solventes diclorometano e metanol, os quais foram eliminados em rotaevaporador, para a obtenção dos extratos brutos, a fim de se avaliar sua concentração inibitória mínima (CIM) frente a essas cepas de microrganismos. Os resultados obtidos revelaram-se promissores com as espécies de Candida testadas, principalmente com o extrato metanólico, cuja inibição apresentou atividade com alta sensibilidade das leveduras, porém essa mesma atividade não ocorreu entre as bactérias. Esses dados indicam a necessidade da ampliação do conhecimento sobre as espécies de plantas com potencial antimicrobiano, além de se testar extratos mais purificados e com propriedades farmacológicas ativas contra organismos microbianos. De qualquer forma, estes resultados nos levam a considerar esses extratos vegetais como fontes valiosas para a descoberta de novas moléculas bioativas empregadas para o tratamento alternativo no combate aos agentes microbianos, principalmente àqueles resistentes às drogas antifúngicas e antibacterianas convencionais / Abstract: The oral cavity is a source of a complex microorganisms community that may adhere to teeth, epithelial mucosa or form biofilms. Most of these strains are thought to be commensal, and a small number cause opportunistic infections. Among these microorganisms Candida yeast is the most commom in immunocompromised patients; Sretptococcus mutans is regarded as the primary etiologic agent of dental caries and, although considered controversial the presence, Staphylococcus aureus is also mentioned as an opportunistic pathogen in the oral cavity. Considering the frequent use of antifungal and antibiotics as antimicrobial agents, the development of resistance to these drugs has become an important and worrying factor for the treatment of the infections caused by these microorganisms. The use of crude plants extracts has been a researcherâ?¿s concern from all over the world, since they may inhibit the bacteria and fungi growing by different mechanisms present in the conventional antimicrobials, becoming an important source of investigation. The plants used in this research were Mentha piperita, Rosmarinus officinalis, Tabebuia avellanedae, Arrabidaea chica, Syzygium cumini and Punica granatum, extracted with dichloromethane and methanol solvents, followed by a minimal inhibitory concentration (MIC) evaluation. The data obtained with Candida strains were promising, specially with the methanolic extract that showed activity in a higher sensibility, but the same activity did not occur among the bacterias. This information increases our knowledge of the crude plants extracts effect against microbial organisms. Nevertheless, the results of this study indicated that these extracts are a promising source for the alternative treatment against the microbial agents, specially for those resistant to the conventional antimicrobial agents / Mestrado / Microbiologia e Imunologia / Mestre em Biologia Buco-Dental

Orientador: Angelica Zaninelli Schreiber / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-08T15:37:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Correa_FernandaSimas_M.pdf: 2038543 bytes, checksum: 170a6e791e2c64d599b88b8485092a96 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Dermatófitos do gênero Microsporum acometem preferencialmente pele e pêlos, sendo M.canis e M.gypseum as espécies mais isoladas em nosso meio. Antifúngicos tópicos e sistêmicos são indicados para o tratamento destas dermatofitoses, que é considerado mais difícil quando comparado ao de outros gêneros de fungos queratinofílicos. Deste modo, a determinação da suscetibilidade aos antifúngicos in vitro destes microrganismos é de interesse para embasamento da terapêutica empírica, avaliação de falhas terapêuticas, e testes de novos antifúngicos. No entanto, os dermatófitos não foram incluídos no documento relacionado do CLSI (M38-A, 2002). Os estudos disponíveis até o momento, utilizando conídios dos fungos, apresentam resultados muito divergentes, devido a falta de padronização e o grande número de variáveis pré-analíticas envolvidas. Em adição, uma vez que a forma de hifas predomina no tecido infectado, há controvérsias sobre o fato de se a forma conidial seria adequada para os testes. Há poucos relatos na literatura sobre avaliação dinâmica de crescimento de fungos e a taxa de inibição destes por drogas antifúngicas, mas nenhum destes realizados com dermatófitos. Este estudo se propôs a determinar condições para realização do teste de suscetibilidade pelo método de microdiluição em caldo e padronizar a avaliação de crescimento dinâmico pelo sistema BCT® para seis cepas do gênero Microsporum, determinando respectivamente CIM e CFM e taxas de inibição de crescimento frente a ciclopirox olamina, terbinafina e griseofulvina. Os resultados obtidos apontaram: ágar batata como o melhor meio de cultura para produção de conídios, inóculo de 1x 103 células/ml, incubação de 7 dias a 28ºC e leitura final considerando 100% de inibição do crescimento para o teste de microdiluição em caldo. Os resultados de CIM variaram de 1,0 a 16,0 µg/ml para ciclopirox olamina, de 0,005 a 0,004 µg/ml para terbinafina e de 2,5 a 20,0 µg/ml para griseofulvina. No Sistema Automatizado BioCell-Tracer® os testes foram realizados com: concentração de PLL de 0,05%; inóculo ? 1x106 conídios/ml em 5?l; incubação a 30ºC por 72 a 96h; 30ºC como temperatura de realização do teste e tempo total de experimento de 3 horas e 30 minutos. Todas as cepas apresentaram taxa de inibição de crescimento acima de 85% na fase de exposição à droga frente aos antifúngicos avaliados, na concentração equivalente ao resultado de CIM obtido pela técnica de microdiluição em caldo e, em pelo menos, uma diluição abaixo / Abstract: Dermatophytes of the genus Microsporum preferentially invade skin and hair, being M.canis and M.gypseum the most prevalent species in our routine. Topics and systemic antifungal agents are indicated for the treatment of theses dermatophytoses, which is considered more difficult when compared to other genera of keratinofilic fungi. By the way, the determination of in vitro antifungal susceptibility of these organisms is interesting as a guide of empiric therapy, evaluation of therapeutic failures and to evaluate new antifungal agents. However, dermatophytes were not included in the CLSI document (M38-A, 2002). The studies available until now, using fungi conidia, present divergent results due to the lack of standartization and the large number of pre-analytical variables involved. In addiction, once the hyphae forms predominate in infected tissues, there are controversies about if the conidial form would be adequate for the tests. There are few articles in the literature about dynamical evaluation of fungi growth and their growth inhibition rate in contact with antifungal agents, but none with dermatophytes. This study proposed the determination of conditions for broth microdilution susceptibility test and the standardization of dynamical growth evaluation by the BCT® system for six strains of Microsporum sp, determining respectively MIC and MFC and the inhibition rate after application of ciclopirox olamine, terbinafine and griseofulvin. The results pointed: potato dextrose agar as the best culture medium for conidium production, inoculum concentration of 1x 103 conidia/ml, incubation for 7 days at 28ºC and test enpoint at 100% of growth inhibition for broth microdilution test. The MIC results ranged from 1,0 to16,0 µg/ml for ciclopirox olamine, 0,005 to 0,004 µg/ml for terbinafine and 2,5 to 20,0 µg/ml for griseofulvin. On the automatizated system BioCell-Tracer®, the tests were realized with: PLL concentration of 0,05%; inocula of ? 1x106 conídia/ml in 5?l; incubation at 30ºC for 72 to 96hand also 30ºC as the test temperature, 3 hours and 30 minutes as total time of experiment. All strains showed growth inhibition rate above 85% on drug exposure phase against the antifungal agents evaluated, in MIC obtained by both microdilution method and, at least, one dilution below / Mestrado / Patologia Clinica / Mestre em Ciências Médicas

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-03-07T09:29:09Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Ivanete F. Souza.pdf: 1234783 bytes, checksum: 7fd3beb35c0496a66d5f3fd370ed127b (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-03-07T09:29:23Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Ivanete F. Souza.pdf: 1234783 bytes, checksum: 7fd3beb35c0496a66d5f3fd370ed127b (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-03-07T09:29:37Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Ivanete F. Souza.pdf: 1234783 bytes, checksum: 7fd3beb35c0496a66d5f3fd370ed127b (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-07T09:29:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Ivanete F. Souza.pdf: 1234783 bytes, checksum: 7fd3beb35c0496a66d5f3fd370ed127b (MD5) Previous issue date: 2016-02-16 / The Amazon Biodiversity symbolize Is a great potential to Discovery of new bacterial straight producer of active biomolecules with importance biotechnological as antimycotics that can be producing by endophytic microorganisms whose the object may be the yeast Candida albicans. This yeast is present in the human body as commensally, being able to cause serious infections, especially in individual immune depressed by diseases as cancer, AIDS and diabetes. It is resistant to antifungal available actually. This way, the object this study was find, from the Amazon bacteria, a bacteria able of produce actives molecules against the C. Albicans yeast, with a purpose to make the production of a active extract that make possible to fractionate and purify the active substance. In the search this anti-candida substance after a analysis of bacteria from different habitats as Waters of the Rio Negro and Solimões and strains derived from endophytic bacteria work collection of Applied Genetics Laboratory Health and Biotechnology of UEA, initially had their potential antimicrobial tested against different pathogenic organisms (Mycobacterium smegmatis, Pseudomlmonasae ruginosa and Staphylococcus aureaus) by cross streaking. The potentials microorganisms were selected and identified by morphology and for sequences of the 16S rDNA region. The growth was made in two different culture media to production of crud extract. The verification the anti-candida action was by diffusion tests in Agar and the quantification was through the Minimum Inhibitory Concentration (MIC). The extract produced was pré-purified by chromatography in open column and was applied thin layer chromatography (TLC) to check the fractions obtained. In total six endopthytic bacteria were selected because they had antimicrobial activity against at least one of pathogens tested, but only the bacteria 229 presented active against C. albicans being cultivate to produce of extract and possibility of identified of anti-candida substance. The culture media that showed better production of biomolecules was the ISP2, according to analysis of size of the halos from of the extract produced. The colony growth was identified as B. amyloliquefaciens and morphologically characterized as Gram positive bacilli The pré-purification resulted in two actives fractions as MIC of 0,25 and 0,5 ug.mL-1 . This way, conclude that in Amazon is possible the identify of bacteria with pharmacological activities from which can be produce antimycotic molecules. / A Biodiversidade Amazônica representa um grande potencial para descoberta de novas linhagens bacterianas produtoras de biomoléculas ativas de importância biotecnológica, como os antimicóticos que podem ser produzidos por microrganismos endofíticos cujo o alvo pode ser a levedura Candida albicans. Esta levedura está presente no corpo humano de forma comensal, sendo capaz de ocasionar graves infecções, principalmente em individuos com o sistema imunológico debilitado por doenças como câncer, AIDS e diabetes. Ela apresenta resistência aos antifúngicos disponíveis na atualidade. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi encontrar, a partir de bactérias da Amazônia, uma bactéria capaz de produzir moléculas ativa contra a levedura C. albicans afim de fazer a produção de um extrato ativo que fosse possível fracionar e purificar a substância ativa. Na busca desta substância anti-candida, após a análise de bactérias de diversos habitats como águas dos Rios Negro e Solimões e de cepas oriundas de coleção de trabalho de bactérias endofiticas do Laboratório de Genética Aplicada a Sáude e a Biotecnologia da UEA tiveram inicialmente seu potencial antimicrobiano testado frente a diferentes microrganismos patogênicos (Micobacterium smegmatis, Pseudomonas aeruginosa e Staphylococcus aureus) por estrias cruzadas. Os microrganismos com potencial foram selecionados e identificados por morfológia e pelas sequências da região 16S do rDNA. Fez-se o cultivo em dois meios de cultura diferentes para produção do extrato bruto. A verificação da ação anti-candida foi por testes de difusão em ágar e a quantificação desta através da Concentração Mínima Inibitória (CIM). O extrato produzido foi pré-purificado por cromatografia em coluna aberta e aplicou-se cromatografia em camada delgada (CCD) para acompanhamento das frações obtidas. Ao total seis bactérias endofíticas foram selecionadas por apresentarem atividade antimicrobiana contra ao menos um dos patógenos testados, porém, somente a bactéria 229 apresentou-se ativa contra C. albicans sendo cultivada para produção do extrato e tentativa de identificação da substância anti-candida. O meio de cultura que apresentou melhor produção da biomolécula foi o ISP2, conforme avaliação do tamanho dos halos a partir do extrato produzido. A colônia cultivada foi identificada como Bacillus amyloliquefaciens e caracterizada morfologicamente como bacilos Gram positivo. A pre-purificação resultou em duas frações ativas com CIM de 0,25 e 0,5 ug.mL-1. Conclui-se desta maneira que na Amazônia é possível a identificação de bactérias com atividades farmacológicas a partir das quais pode-se produzir moléculas antimicóticas

Submitted by Marlene Santos (marlene.bc.ufg@gmail.com) on 2016-04-04T21:35:12Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Dayane Kelly Sabec Pereira - 2015.pdf: 7161660 bytes, checksum: 9e90c47a6af39120173e8142ccb64d21 (MD5) license_rdf: 19874 bytes, checksum: 38cb62ef53e6f513db2fb7e337df6485 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-04-05T11:15:37Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Dayane Kelly Sabec Pereira - 2015.pdf: 7161660 bytes, checksum: 9e90c47a6af39120173e8142ccb64d21 (MD5) license_rdf: 19874 bytes, checksum: 38cb62ef53e6f513db2fb7e337df6485 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-05T11:15:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Dayane Kelly Sabec Pereira - 2015.pdf: 7161660 bytes, checksum: 9e90c47a6af39120173e8142ccb64d21 (MD5) license_rdf: 19874 bytes, checksum: 38cb62ef53e6f513db2fb7e337df6485 (MD5) Previous issue date: 2015-09-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The increased bacterial resistance is an important factor in the number of deaths in hospitals, hampering the cure and elevating spending on assistance. Thus it is urgent to develop new drugs, synthetic or natural origin. A group of compounds that have been prominent are the thiosemicarbazones (TSCs) and semicarbazones (SCs) due to low cost of synthesis and broad spectrum of action, antifungal, antibacterial, anti-inflammatory and antiviral. In this study tests were performed with four synthesized chemical binders, denominated: H2L0; H2L1; H2L2 and H2L3 and H2L3 the four compounds complexed ligand named: Bipy-fenil-Sn, Bipy-nit-Cu, (H2L3)butil-Sn and (H2L3)bipy-Sn submitted to quantitative tests to determine the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and Minimum Fungicidal Concentration (MFC) and also evaluated for cytotoxicity cardiomyocytes and peritoneal macrophages. The standard strains ATCC (American Type Culture Collection) used were bacteria Staphylococcus aureus and Klebsiella pneumoniae, yeast and fungi: Candida albicans, Candida tropicalis and Candida parapsilosis. The tests were performed in triplicate in 96 well plates, incubated for 24 hours at 35 ° C, with specific medium. The observed antibacterial activity of the compounds H2L1, H2L2 and H2L3 on S. aureus, presented MIC in range from 3.7 to 19.7 μg/mL; to K. pneumoniae the MICs of the compounds were over 500 μg/mL. The compound H2L3, inhibited the growth of three species of Candida tested MIC between 5.6 - 6.2 μg/mL. Because of this, the binder was chosen for complexation with metals. The complexed compounds obtained MICs 1.6 to 245.8 μg/mL. MFC tests with the compounds H2L0, H2L1 and H2L2 showed no change in the growth curve of the colonies to the three species of Candida. As for the compounds complexed MFC tests indicated a fungicidal effect of bipy-nit-Cu, bipy-fenil-Sn, only on C. albicans at concentrations of 250 μl/mL and less than 62.5 μl/mL. Cytotoxicity tests revealed that the compounds exhibit cytotoxicity under moderate conditions. In the compounds complexed with metals, antifungal activity showed up similar to H2L3 isolated compound, obtaining a satisfactory result for further research with compounds under study, presenting a great antimicrobial potential which is no prospect of a future metalodrug. / O aumento da resistência bacteriana é um fator importante no número de ocorrência de mortes em ambientes hospitalares, dificultando a cura e elevando os gastos com a assistência. Desta forma faz-se urgente o desenvolvimento de novos fármacos, sintéticos ou de origem natural. Um grupo de compostos que tem se destacado são as tiossemicarbazonas (TSCs) e as semicarbazonas (SCs), por apresentarem baixo custo de síntese e amplo espectro de ação, antifúngica, antibacteriana, antiinflamatória e antiviral. Neste trabalho foram utilizados quatro ligantes químicos sintetizados, denominados: H2L0; H2L1; H2L2 e H2L3 e quatro compostos complexados ao ligante H2L3 denominados: Bipy-fenil-Sn, Bipy-nit-Cu, (H2L3)butil-Sn e (H2L3)bipy-Sn submetidos a testes quantitativos para determinação da Concentração Inibitória Mínima (MIC) e da Concentração Fungicida Mínima (MFC) e também avaliada a citotoxidade em cardiomiócitos e macrófagos peritoneais. As cepas de padrão ATCC (American Type Culture Collection) utilizadas foram de bactérias Staphylococcus aureus e Klebsiella pneumoniae, e fungos leveduriformes: Candida albicans, Candida tropicalis e Candida parapsilosis. Os testes foram realizados em triplicata, em placas 96 poços, incubadas por 24 horas a 35ºC, com meio específico. A atividade antibactericida observada dos compostos H2L1, H2L2 e H2L3, sobre S. aureus, apresentou MIC na faixa de 3,7 a 19,7 μg/mL; para K. pneumoniae os MICs dos compostos foram superiores a 500 μg/mL. O composto H2L3, inibiu o crescimento das três espécies de Candida testadas com MIC entre 5,6 – 6,2 μg/ml. Devido a isso, este foi o ligante escolhido para a complexação com metais. Os compostos complexados obtiveram valores de MIC 1,6 a 245,8 μg/mL Os testes de MFC com os compostos H2L0, H2L1 e H2L2 não apresentaram alteração na curva de crescimento para as três espécies de Candida. Quanto aos compostos complexados, os testes de MFC apontaram um efeito fungicida do bipy-nit-Cu, bipy-fenil-Sn, somente sobre C. albicans, nas concentrações de 250 μl/mL e menores que 62,5 μl/mL. Os testes de citotoxidade revelaram que os compostos apresentam citotoxidade em condições moderadas. Nos compostos complexados com metais, a atividade antifúngica apresentou-se semelhante ao composto H2L3 isolado, obtendo um resultado satisfatório para novas pesquisas com os compostos em estudo, apresentando um ótimo potencial antimicrobiano ao qual há perspectiva de uma futura metalodroga.

Orientador: Angélica Zaninelli Schreiber / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-25T21:59:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ReichertLima_Franqueline_M.pdf: 2034183 bytes, checksum: 203b846210e23f42a824280eb3cadda2 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: O gênero Cryptococcus engloba duas espécies consideradas patogênicas: C.neoformans e C.gattii. Apesar dos avanços na área médica, a criptococose permanece uma das infecções fúngicas sistêmicas mais importantes no Brasil. Anfotericina B (AMB) associada a flucitosina (5FC) é a terapia de indução indicada porém, no Brasil, 5FC não está disponível e o tratamento segue somente com AMB ou em associação com fluconazol (FCL). Este trabalho avaliou a ocorrência de espécies e os genótipos de isolados clínicos de pacientes atendidos no Hospital de Clínicas da UNICAMP em um período de 5 anos; isolados ambientais coletados na cidade de Campinas-SP e o perfil de suscetibilidade aos antifúngicos sozinhos contra isolados clínicos e ambientais e o efeito de combinações de antifúngicos frente a isolados clínicos de Cryptococcus spp.. A identificação de espécies e genótipos foi realizada por testes bioquímicos, Restriction Fragment Length Polymorphism do gene URA5 (URA5-RFLP) e sequenciamento da região Internal Transcribed Spacer (ITS) do DNA ribossomal. Testes de suscetibilidade para AMB, 5FC, FCL, voriconazol (VRC), itraconazol (ITC) e terbinafina (TRB) isolados foram realizados conforme CLSI M27-A3 (2008). Os testes com antifúngicos combinados (AMB+5FC; AMB+FCL; AMB+TRB; FCL+TRB), foram realizados pelo método do "tabuleiro de xadrez" para determinação do Coeficiente de Inibição Fracional (CIF) para avaliar o tipo de interação entre as substâncias (sinergismo, indiferença ou antagonismo). Dentre 75 isolados clínicos reativados, foram identificados 66 C.neoformans e 9 C.gattii. Todos C.gattii pertenceram ao genótipo VGII enquanto que 62 isolados de C.neoformans ao genótipo VNI e apenas 4 ao genótipo VNII. Foram obtidos 92 isolados ambientais de Cryptococcus, pertencentes às espécies C.neoformans (genótipo VNI), C.laurentii, C.albidus, C.flavescens e Cryptococcus spp.. Os valores dos intervalos de CIM para C.neoformans clínicos foram AMB: ? 0,125-1 µg/mL; 5FC: ? 0,125-2 µg/mL; FCL: 0,25-8 µg/mL; VRC: ? 0,015-0,125 µg/mL; ITC: 0,03-0,25 µg/mL e TRB: 0,125-2 µg/mL. Intervalos de CIM para C.gattii variaram de 0,25-1 µg/mL para AMB; 0,5-4 µg/mL para 5FC; 2-16 µg/mL para FCL; 0,06-0,25µg/mL para VRC; 0,06-0,5 µg/mL para ITC e 0,5-4 µg/mL para TRB. Foram observados elevados valores de CIM para os antifúngicos 5FC e FCL frente aos isolados ambientais de C.albidus e C.laurentii. O genótipo VNI de C.neoformans clínico mostrou 75,80% de interação sinérgica para AMB+5FC; 79,03% para AMB+FCL; 77,42% para AMB+TRB e 95,16% para FCL+TRB. O genótipo VNII apresentou 100% de sinergismo em todas as combinações. C.gattii (VGII) apresentou 88,9% de sinergismo nas combinações AMB+5FC e AMB+FCL; 100% para AMB+TRB e FCL+TRB. Não foi observado efeito antagônico nas combinações de antifúngicos. Foi observado bom desempenho nas combinações realizadas, especialmente naquelas envolvendo a TRB para ambas as espécies C.neoformans e C.gattii. O genótipo VNI foi o predominante entre os genótipos que afetam os pacientes com criptococose na região de Campinas. Em infecções de difícil tratamento ou que não respondem aos antifúngicos convencionais, a combinação de diferentes antifúngicos como AMB+TRB ou FCL+TRB podem vir a ser uma alternativa em países onde 5FC não está disponível, como no Brasil. Mais estudos são necessários para avaliar o papel dos genótipos na sensibilidade aos antifúngicos, assim como estudos de combinações de antifúngicos in vitro e in vivo para que novas estratégias possam ser empregadas no tratamento da criptococose / Abstract: Cryptococcus genus comprises two species considered pathogenic: C.neoformans and C.gattii. Despite advances in the medical field, cryptococcosis remains one of the most important systemic fungal infections in Brazil. Amphotericin B (AMB) associated with flucytosine (5FC) induction therapy is indicated but, in Brazil, 5FC is not available and treatment follows only with AMB or in combination with fluconazole (FCL). This study evaluated the prevalence of species and molecular subtypes of clinical isolates from patients treated at the Hospital of UNICAMP in a period of 5 years; environmental isolates collected in Campinas ¿ SP and in vitro antifungal susceptibility profile of antifungal agents alone against clinical and enviromental isolates of Cryptococcus spp. and the effect of combinations of antifungal agents against clinical isolates of Cryptococcus spp.. The species identification and subtyping was performed by biochemical tests, Restriction Fragment Length Polymorphism of URA5 gene (RFLP - URA5) and sequencing of the Internal Transcribed Spacer region (ITS) of ribosomal DNA. Susceptibility tests for AMB, 5FC, FCL, voriconazole (VRC), itraconazole (ITC) and terbinafine (TRB) isolated were performed according to CLSI M27-A3 (2008). Combined antifungals tests (AMB +5FC; AMB+FCL; AMB +TRB, FCL+TRB), were performed by the "Checkerboard" method to determine the Fractional Inhibitory Coefficient index (FIC) to assess the type of interaction between substances (synergism, indifference or antagonism). Among the 75 viable clinical isolates, 66 were identified as C.neoformans and 9 as C.gattii. All C.gattii belonged to subtype VGII while 62 isolates belonged C.neoformans VNI genotype and only 4 VNII. 92 environmental isolates of Cryptococcus were obtained. The species C.neoformans (subtype VNI) C.laurentii, C.albidus, C.flavescens and Cryptococcus spp.were identified. The MIC range values of clinical C.neoformans for AMB were: ? 0.125 -1 µg/mL; 5FC: ? 0.125 to 2 µg/mL; FCL: 0.25-8 µg/mL; VRC: ? 0.015 to 0.125 µg/mL; ITC: 0.03 to 0.25 µg/mL and TRB: 0.125 to 2 µg/mL. MIC for C.gattii ranged from 0.25-1 µg/mL for AMB; 0.5-4 µg/mL for 5FC; 2-16 µg/mL for FCL; 0.06 to 0.25 µg/mL for VRC; 0.06 to 0.5 µg/mL for ITC and 0.5-4 µg/mL for TRB. High MIC values were observed for FCL and 5FC against environmental isolates of C.albidus and C.laurentii. The VNI C.neoformans genotype showed 75.80 % of synergistic interaction for AMB+5FC; 79.03 % for AMB + FCL; 77.42 % for AMB + TRB and 95.16 % for FCL+TRB. The VNII genotype showed 100% synergism in all combinations. C.gattii (VGII) showed 88.9 % of synergism in combinations AMB+5 FC and AMB+FCL; 100 % for AMB+TRB and TRB+FCL. No antagonistic effect was observed in all evaluated antifungal combinations. Good performance was observed in all combinations performed, especially those involving TRB for both C.neoformans and C.gattii species. The VNI was the predominant genotype among genotypes affecting patients with cryptococcosis in Campinas region. In difficult to treat infections or unresponsive to conventional antifungal agents, the combination of different antifungals so as AMB+FCL or TRB+TRB may become an alternative in countries where 5FC is not available, as in Brazil. More studies are needed to evaluate the role of genotypes in sensitivity to antifungal agents, as well as antifungal agents combination studies in vitro and in vivo so that new strategies can be employed in the treatment of cryptococcosis / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestra em Ciências Médicas

Le thiosemicarbazide et le 4-méthylthiosemicarbazide réagissent par condensation avec des dérivés benzaldéhyde pour donner des produits de type thiosemicarbazone pouvant jouer le rôle de ligands.Ces derniers peuvent conduire en milieu éthanolique à la formation de divers complexes en réagissant avec des sels métalliques comme les chlorures et/ou bromures de cuivre(II), de nickel(II), de zinc(II), de cobalt(II) et de cadmium(II). La structure de ces ligands et de leurs complexes a été déterminée par spectroscopie infrarouge, par des analyses élémentaires et par cristallographie. Les ligands se présentent tous sous forme thione à l’état solide tandis que les complexes obtenus peuvent revêtir différents états : soit monodentés, mononucléaire ou polynucléaire à deux atomes de soufre provenant du groupement thiosemicarbazone, comme l’étude cristallographique a pu le démontrer, soit bidentés avec des sites decoordination dont l’azote provenant du groupement imine et le soufre du groupement thiol. Les propriétés antifongiques de ces divers composés ont été testées vis-à-vis de champignons pathogènes de l’homme comme Aspergillus fumigatus, Candida albicans, C. glabrata, C. tropicalis, C. krusei, C. parapsilosis et Exophiala dermatitidis. Seuls les complexes avec le cadmium ont montré des activités antifongiques significatives et le ligand de pdiméthylaminobenzaldéhyde thiosemicarbazone a inhibé presque totalement la croissance d’E. dermatitidis / Thiosemicarbazide and 4-methylthiosemicarbazide react with benzaldehyde derivatives by condensation to give different thiosemicarbazone ligands. The latter conduct in ethanolic medium to various complexes by reacting with chlorides and / or bromidesof copper (II), nickel (II), zinc (II), cobalt (II) and cadmium (II). The structures of the ligands and their complexes have been determined mainly by crystallography and by infrared spectroscopy, as well as by elementary analyzes. The ligands are in thion form in solid form.The complexes obtained are either monodentate, mononuclear or polynuclear complexes with two sulfur atoms of the thiosemicarbazone group, such as the determination of the crystal structure has shown either bidentate complexes with coordination sites, imine nitrogen and sulfur of the thio group. Their antifungal properties have been tested against human pathogenic strains: Aspergillus fumigatus, Candida albicans, C. glabrata, C. tropicalis, C. krusei, C. parapsilosis and Exophiala dermatitidis. Only thecomplexes with cadmium exhibited significant activities against the fungal species studied and the thiosemicarbazone of p-dimethylaminobenzaldehyde ligand almost completely inhibited the growth of E. dermatitidis

Magister Scientiae Dentium - MSc(Dent) / The antimicrobial and antifungal efficacy of indigenous plant extracts against Streptococcus mutans , Escherichia coli and Candida albicans .Aim: To determine the antimicrobial and antifungal efficacy of indigenous plant extracts, Tamarindus Indica (T. ndica), Hibiscus sabdariffa (H. sabdaraffi), Adansonia digitata (A.digitata) and Moringa oleifera (M. oleifera) against Streptococcus mutans ( S. mutans ), Escherichia coli ( E. coli ) and Candida albicans (C. albicans) objectives:The objectives of this study were to: 1.Measure the zones of growth inhibition by T. indicia , A. digitata , M.oleifera and H. sabdariffi extracts against, S.mutans , E.coli and C.albicans . 2.Compare the size of inhibition zones of different bacteria or fungus, S. mutans ,E.coli and C. albicans, around the same plant extract.3.Compare the size of inhibition zones for the same bacteria in different plant extracts T.indicia ,A.digitata H.sabdariffi and M.oleifera Methodology .The antimicrobial and antifungal effect of the ethanolic extracts of T. indica , H.sabdariffa, A.digitata and M.oleifera was performed using the disc diffusion method against S. mutans ,E.coli and C.albicans. The antibacterial and antifungal activity of the plants was determined by measuring the diameter of the inhibition zones. esults and conclusion: The results showed that.T.indica and H.sabdariffa ethanolic extracts have an antibacterial effect against S.mutans and E.coli.However, H.sabdariffi showed a significantly higher antibacterial effect against E.coli and S.mutans, with a range of 14.50mm to 12.01mm and 16.41 mm to 14.39 mm compared to T.indica ,with a range of 11.41 mm to 7.04mm and 6.88mm to 10.40mm, respectively.Furthermore, the statistical multiple pairwise test (Conover Iman procedure/Two -tailed test) omputed that the effect of H.sabdariffi is significantly (critical value >7.229) greater for the G ram positive S.mutans than the G ram negative E.coli.On the other hand,T.indica showed a similar antibacterial effect against S.mutans and E.coli,respectively.In contrast, M. oleifera and A.digitata ethanolic plant extracts showed no antibacterial effect against E.coli and S.mutans. All the indigenous plants tested, T.indica ,H.sabdariffa, M. oleifera and A.digitata had no antifungal activity on C.albicans