Diversas condições durante as etapas de produção dos alimentos podem levar à introdução de micro-organismos patogênicos nas refeições. Esse fato pode ser relevante nos serviços de alimentação localizados em shopping centers pela limitada área física, número de equipamentos insuficientes e volume de refeições servidas. O objetivo do presente estudo foi avaliar esse tipo de estabelecimento quanto ao cumprimento de boas práticas e verificar a presença de matéria orgânica e contaminação bacteriana residual em refrigeradores que haviam sido submetidos à limpeza de rotina. Vinte estabelecimentos localizados em um shopping center de Porto Alegre foram incluídos no estudo. Em cada estabelecimento foi aplicada a Lista de Verificação em Boas Práticas para Serviços de Alimentação prevista na Portaria nº 78 de 28 de Janeiro de 2009 (CEVS) e foram colhidas três amostras com intervalo mensal da parede interna do refrigerador no dia subsequente à limpeza de rotina. As amostras foram avaliadas pelo sistema Clean Trace (3M), quanto à presença de Listeria sp., Coliformes Totais e Escherichia coli. Os dados resultantes da aplicação da Lista de Verificação apontaram que 55% dos estabelecimentos não atingiram a pontuação mínima (>75%) para serem considerados satisfatórios. Em 95% (57/60) das amostras colhidas nos refrigeradores, demonstrou-se a presença de matéria orgânica residual. Já as análises microbiológicas apontaram ausência de Listeria sp., presença de de Coliformes Totais e E. coli em 8,3% e 1,6% das amostras, respectivamente. Não houve associação entre a classificação do estabelecimento (satisfatório/insatisfatório) e a presença de matéria orgânica residual ou Coliformes Totais nos refrigeradores. Estes resultados demonstram a necessidade de constante revisão e monitoramento dos processos de higienização de equipamentos em serviços de alimentação. / Several conditions during all stages of food production can lead to the introduction of pathogenic micro-organisms in food. This fact may be relevant in the food service located in shopping malls by limited physical area, insufficient number of equipment and volume of meals served. The aim of this study was to evaluate this type of establishment for compliance with good practices and verify the presence of organic matter and residual bacterial contamination in refrigerators that had been submitted to routine cleaning. Twenty establishments located in a shopping center from Porto Alegre were included in the study. In each establishment a Checklist for Good Practice for Food Services, provided by Resoltuion No. 78 published on January 28th 2009 (CEVS), was aplied, and three samples were collected at monthly intervals from the inner wall of the refrigerator on the day following the routine cleaning. The samples were evaluated by the Clean Trace system (3M) for the presence of Listeria sp., Total Coliforms and Escherichia coli. The data resulting from application of the Checklist showed that 55% of establishments didn’t attained the minimum score (> 75%) to be classified satisfactory. From de samples taken on the refrigerator’s inner wall, 95% (57/60) demonstrated the presence of residual organic. Nevertheless, microbiological analyzes showed absence of Listeria sp., and isolation of Total Coliforms and E. coli in 8.3% and 1.6% of the samples, respectively. There was no association between the classification of the establishment (satisfactory / unsatisfactory) and the presence of residual organic matter or total coliform in the refrigerator. The results demonstrate the need for constant review and monitoring and improvement of sanitizing procedures of equipment in food service.

Diversas condições durante as etapas de produção dos alimentos podem levar à introdução de micro-organismos patogênicos nas refeições. Esse fato pode ser relevante nos serviços de alimentação localizados em shopping centers pela limitada área física, número de equipamentos insuficientes e volume de refeições servidas. O objetivo do presente estudo foi avaliar esse tipo de estabelecimento quanto ao cumprimento de boas práticas e verificar a presença de matéria orgânica e contaminação bacteriana residual em refrigeradores que haviam sido submetidos à limpeza de rotina. Vinte estabelecimentos localizados em um shopping center de Porto Alegre foram incluídos no estudo. Em cada estabelecimento foi aplicada a Lista de Verificação em Boas Práticas para Serviços de Alimentação prevista na Portaria nº 78 de 28 de Janeiro de 2009 (CEVS) e foram colhidas três amostras com intervalo mensal da parede interna do refrigerador no dia subsequente à limpeza de rotina. As amostras foram avaliadas pelo sistema Clean Trace (3M), quanto à presença de Listeria sp., Coliformes Totais e Escherichia coli. Os dados resultantes da aplicação da Lista de Verificação apontaram que 55% dos estabelecimentos não atingiram a pontuação mínima (>75%) para serem considerados satisfatórios. Em 95% (57/60) das amostras colhidas nos refrigeradores, demonstrou-se a presença de matéria orgânica residual. Já as análises microbiológicas apontaram ausência de Listeria sp., presença de de Coliformes Totais e E. coli em 8,3% e 1,6% das amostras, respectivamente. Não houve associação entre a classificação do estabelecimento (satisfatório/insatisfatório) e a presença de matéria orgânica residual ou Coliformes Totais nos refrigeradores. Estes resultados demonstram a necessidade de constante revisão e monitoramento dos processos de higienização de equipamentos em serviços de alimentação. / Several conditions during all stages of food production can lead to the introduction of pathogenic micro-organisms in food. This fact may be relevant in the food service located in shopping malls by limited physical area, insufficient number of equipment and volume of meals served. The aim of this study was to evaluate this type of establishment for compliance with good practices and verify the presence of organic matter and residual bacterial contamination in refrigerators that had been submitted to routine cleaning. Twenty establishments located in a shopping center from Porto Alegre were included in the study. In each establishment a Checklist for Good Practice for Food Services, provided by Resoltuion No. 78 published on January 28th 2009 (CEVS), was aplied, and three samples were collected at monthly intervals from the inner wall of the refrigerator on the day following the routine cleaning. The samples were evaluated by the Clean Trace system (3M) for the presence of Listeria sp., Total Coliforms and Escherichia coli. The data resulting from application of the Checklist showed that 55% of establishments didn’t attained the minimum score (> 75%) to be classified satisfactory. From de samples taken on the refrigerator’s inner wall, 95% (57/60) demonstrated the presence of residual organic. Nevertheless, microbiological analyzes showed absence of Listeria sp., and isolation of Total Coliforms and E. coli in 8.3% and 1.6% of the samples, respectively. There was no association between the classification of the establishment (satisfactory / unsatisfactory) and the presence of residual organic matter or total coliform in the refrigerator. The results demonstrate the need for constant review and monitoring and improvement of sanitizing procedures of equipment in food service.

A malária permanece um sério problema de saúde em países subdesenvolvidos. O estágio sanguíneo da infecção é responsável por todos os sintomas associados com a malária. Recentemente, tem sido mostrado que receptores imunes inatos são capazes de detectar sinais de dano, tais como a adenosina trifosfato ATP. O receptor P2X7 detecta altas concentrações de ATP extracelular. Ao avaliarmos a parasitemia e os parâmetros clínicos da doença em camundongos C57BL/6 e P2X7-/-, observamos uma semelhança em ambos os grupos até o dia 7 p.i., mas após este período os camundongos P2X7-/- tiveram dificuldade de controlar a parasitemia e restaurar os parâmetros clínicos. O ineficiente controle da parasitemia durante o período agudo e crônico em camundongos P2X7-/- foi associado com a baixa produção de IFNγ. Além disso, o receptor P2X7 aumenta a expressão de T-bet em células Th1 e controla o número de células Tfh. Este estudo mostra que o equilíbrio mediado pelo receptor P2X7 entre os fatores de transcrição Bcl-6 e T-bet ajusta a imunidade celular e humoral na malária. / Malaria remains a serious healthcare problem in developing countries. The blood stage of infection is responsible for all symptoms associated with malaria. Recently, it has been shown that innate immune receptors are able to detect signals as adenosine triphosphate (ATP). P2X7 receptor detects high levels of extracellular ATP. Evaluating the parasitemia and clinical parameters in C57BL/6 (B6) and P2X7-/- mice, we observed a similarity in both groups to day 7 p.i., but after this period the P2X7-/- mice had difficulty in controlling the parasitemia and restoring the clinical parameters. The inefficient parasite control in acutely and chronically infected P2X7-/- mice was associated with low production of IFNγ. Furthermore, P2X7 receptor increases the expression of T-bet in Th1 cells and controls the Tfh cell number. This study provides a new insight into immunology by showing that the balance between T-bet and Bcl-6 transcriptional factors tunes the cellular and humoral immunity in malaria.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Thymol, a monoterpene phenol derivative of cymene, is found in abundance in the essential oils produced by numerous herbs and spices such as thyme (Thymus vulgaris L.), oregano (Origanum vulgaris L.) and Lippia alba (mill.). Several biological effects have been described for thymol such as antioxidant, anti-inflammatory, local anesthetics, antinoceptive, healing and antibacterial properties. It was described the application of thymol in food Science, as herbicidad and inseticides. Moreover, essential oils containing thymol have been used in folk medicine to treat various physiological disorders such as gastrites, indigestion and stomach pains. The present study investigated the gastroprotective actions of thymol (10, 30 and 100 mg/kg, p.o.) in the acute indomethacin and ethanol and chronic acetic acid-induced ulcer models in rats. Some of the mechanisms underlying to the gastroprotective effect of thymol were investigated in the ethanol-induced ulcer model. Gastric secretion parameters (volume, pH, and total acidity) were also evaluted by the pylorus ligature model, and the mucus in the gastric content was determined. The antimicrobial activity against Helicobacter pylori of thymol was performed using the agar-well diffusion method. Thymol produced a dose dependent reduction (p < 0.01) on the total lesion area in the ethanol-induced ulcer model. This gastroprotection was also evaluated microscopically showing that the thymol at all doses decreased the loss of epithelial cells. The gastroprotective response caused by thymol (30 mg/kg) was signigicantly attenuated (P < 0.001) by intraperitoneal treatment of rats with indomethacin (a non-selective inhibitior of cyclo-oxygenase, 10 mg/kg) and glibenclamide (ATP-sensitive K channel blocker), but not by DL-Propargylglycine (PAG, a cystathionine-γ-lyase inhibitor) and Nw-nitro-L-arginine methyl ester hydrochloride (L-NAME, a non-selective inhibitor of nitric oxide synthase). Thymol (30 and 100 mg/kg) also reduced the ulcer index (p < 0.05) and the total lesion area (p < 0.001) in the indomethacin and acetic-induced ulcer models, respectively. In the model of pylorus ligature, the treatment with thymol failed to significantly change the gastric secretion parameters. However, after treatment with thymol (30 and 100 mg/kg) there was a significant increase (p < 0.01) in mucus production. Thymol showed no antimicrobial activity against H. pilory in vitro. Collectively, the present results provide evidence that thymol displays gastroprotective actions on the acute and chronic ulcer models involving mechanisms as increased amount of mucus, prostaglandins, and ATP-sensitive K+ channels. / O timol, um monoterpeno fenólico derivado do cimeno encontrado abundantemente em óleos essenciais, é produzido por numerosas plantas aromáticas e especiarias tais como tomilho (Timus vulgaris L.), orégano (Origanum vulgaris L.) e Lippia alba (mill.). Diversos efeitos biológicos têm sido descritos para o timol tais como antioxidante, anti-inflamatório, anestésico local, antinoceptivo, cicatrizante e antibactericida. É descrita a aplicação do timol em ciências dos alimentos, herbicida e inseticidas. Além disso, óleos essenciais contendo timol tem sido usados pela medicina popular para tratar diversas desordens fisiológicas como gastrite, indigestão e dores estomacais. O presente estudo investigou ações gastroprotetoras do timol (10, 30 e 100 mg/kg, v.o.) em modelos de úlcera aguda induzida por indometacina e etanol, e crônica induzida por ácido acético em ratos. Alguns dos mecanismos subjacentes ao efeito gastroprotetor do timol foram investigados em modelo de úlcera induzida por etanol. Parâmetros da secreção gástrica (volume, pH; e acidez total) também foram avaliados pelo modelo de ligadura de piloro, e o conteúdo do muco gástrico foi determinado. A atividade contra Helicobacter pylori do timol foi realizada pelo método de difusão em ágar. O timol produziu efeito dose-dependente reduzindo (p < 0,01) a área total de lesão em modelo de úlcera induzida por etanol. Esta gastroproteção também foi avaliada microscopicamente mostrando que o timol, em todas as doses, diminuiu a perda das células epiteliais. A resposta gastroprotetora causada pelo timol (30 mg/kg) foi significativamente atenuada (p < 0,001) pelo tratamento intraperitoneal dos ratos com indometacina (um inibidor não-seletivo da ciclo-oxigenase, 10 mg/kg) e glibenclamida (bloqueador de canais para potássio sensíveis a ATP), mas não pela DL-Propargilglicina (PAG, inibidor da cistationina-γ-liase) ou Nw-nitro-L-arginina metil éster cloridrato (L-NAME, um inibidor não-seletivo da sintase do óxido nítrico). O timol (30 e 100 mg/kg) também reduziu o índice de úlcera (p < 0,05) e área total de lesão (p < 0,001) por indometacina e por ácido acético, respectivamente. Em modelo de ligadura de piloro, o tratamento com timol não alterou os parâmetros de secreção gástrica. No entanto, após o tratamento com o timol houve um aumento significativo (p < 0,01) na produção do muco. O timol não apresentou atividade contra H. pylori in vitro. Coletivamente, os resultados apresentados fornecem evidências de que o timol exibe ações gastroprotetoras sobre os modelos de úlceras agudas e crônicas envolvendo mecanismos como o aumento da quantidade de muco, prostaglandinas e canais para potássio sensíveis a ATP.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2017-01-12T12:29:32Z No. of bitstreams: 1 julianemarquesfelicissimo.pdf: 1079943 bytes, checksum: a9e0f1d1f97912241b0c7d91e6ed9aeb (MD5) / Approved for entry into archive by Diamantino Mayra (mayra.diamantino@ufjf.edu.br) on 2017-01-31T11:17:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 julianemarquesfelicissimo.pdf: 1079943 bytes, checksum: a9e0f1d1f97912241b0c7d91e6ed9aeb (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-31T11:17:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 julianemarquesfelicissimo.pdf: 1079943 bytes, checksum: a9e0f1d1f97912241b0c7d91e6ed9aeb (MD5) Previous issue date: 2014-08-11 / Legítima representante do rol de doenças tropicais negligenciadas, a esquistossomose causada pelos trematódeos do gênero Schistosoma spp. constitui uma enfermidade endêmica em 78 países, impondo grandes desafios à saúde das populações afetadas. Atualmente, a ausência de uma vacina eficaz reforça o papel da quimioterapia como o pilar do controle da morbidade e transmissão, a qual permanece restrita e ameaçada pela eminência de cepas resistentes ao praziquantel. Nos últimos anos, esforços vêm sendo empreendidos na tentativa de descobrir novos fármacos esquistossomicidas, com notável contribuição dos produtos naturais. Neste contexto, o flavonóide Licochalcona A - marcador quimiotaxonômico da espécie Glycyrrhiza inflata – que detém atividades biológicas diversas, como anti-inflamatória, antioxidante e antiprotozoária para espécies de Leishmania spp. e Plasmodium spp., demonstrou atividade esquistossomicida promissora em um estudo preliminar, sendo considerado o objeto do presente estudo. Desta forma, a proposta foi avaliar a progressão da esquistossomose mansônica em camundongos Swiss frente ao tratamento com LicoA, além de obter mais informações acerca de sua atividade contra vermes adultos in vitro. Após um período de 24 horas de incubação, a LicoA a partir de 50µM foi capaz de causar o escurecimento do tegumento dos vermes, a perda moderada da motilidade e áreas de intumescimento corporal. Além disso, produziu pontos de retenção do corante resorufin e consequentemente, a descontinuidade na marcação dos principais túbulos e ramos do sistema excretor dos esquistossomos. Este último pode ser a origem dos demais efeitos, contribuindo para o entendimento das potenciais influências da droga sobre receptores e/ou enzimas presentes nos esquistossomos. Além disso, a suposta inibição parcial das SmATPDases pode igualmente contribuir para o insucesso do parasitismo. Nos ensaios in vivo, o esquema de 50mg/Kg em duas doses administrado por via intraperitoneal foi o mais promissor, alcançado uma mediana de 25% da redução da carga parasitária e o maior deslocamento hepático dos vermes. Por outro lado, a droga não induziu alterações no oograma qualitativo ou no peso hepático e esplênico, mostrando relativa inércia sobre a cinética de oviposição. Mais estudos devem ser conduzidos para acumular evidências sobre o efeito esquistossomicida da Licochalcona A, principalmente os que contemplem um maior número de animais e de parâmetros analisados, como por exemplo, o perfil de citocinas e quimiocinas in vivo, além de outras metodologias in vitro e o aprimoramento daquelas que foram aqui empregadas, de modo a fornecer mais detalhes sobre a influência da LicoA em alguns sistemas intrínsecos ao parasito. / Schistosomiasis, one significant neglected tropical disease, is an infection caused by trematode worms of the genus Schistosoma spp. it is endemic in 78 countries, being a major public health challenge. Currently, the absence of an effective vaccine supports the chemotherapy as the mainstay of schistosomiasis control programs. However, the chemotherapy has limitations, such as, the emergence of praziquantel-resistant strains. In recent years, attempts to discover new antischistosomal drugs had remarkable contribution of natural products. In this context, the flavonoid Licochalcona A - chemotaxonomic marker of the specie Glycyrrhiza inflata - has several biological activities such as anti-inflammatory, antioxidant and anti-protozoan against species of Leishmania spp. and Plasmodium spp. Moreover, Licochalcona A showed promising schistosomicidal activity in a preliminary study. Thus, the aim of this study was to evaluate the progression of schistosomiasis in Swiss mice treated with LicoA and it activity against adult worms in vitro. After 24 hour incubation, concentrations from 50μM LicoA caused tegument darkening, moderate loss of motility and areas of swelling body. Moreover, the exposure to the compound produced accumulation of resorufin and hence the discontinuity in the labelling of the main branches and tubules in the excretory system of schistosomes. The latter may be the source of other effects, contributing to the understanding of the potential influence of the drug on receptors and / or enzymes in schistosomes. In addition, the alleged partial inhibition of SmATPDases can also contribute to the failure of parasitism. In vivo tests, the 50 mg/kg schedule of two doses administered intraperitoneally were the most promising reached a median 25% reduction of worm burden and increased hepatic displacement of the worms. Moreover, the drug did not induce changes in the qualitative or oogram liver and spleen weight relative inertia about showing the kinetics of oviposition. Further studies should be conducted to collect evidence on the effect of schistosomicidal Licochalcona A, especially those that consider a larger number of animals and analyzed parameters, such as the profile of in vivo cytokines and chemokines, and other in vitro methods and the improvement of those who were employed here in order to provide more details on the influence of LicoA in some systems intrinsic to the parasite.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / ApÃs isquemia cerebral, o Trifosfato de Adenosina (ATP) atinge altas concentraÃÃes no espaÃo extracelular e pode atuar como agente tÃxico, que causa degeneraÃÃo celular e morte, mediada atravÃs de receptores P2X e P2Y. No presente estudo, foram investigados os efeitos do PPADS, um antagonista nÃo-seletivo dos receptores P2, sobre o comportamento e dano neuronal apÃs isquemia induzida por oclusÃo permanente da artÃria cerebral mÃdia por eletrocoagulaÃÃo. Os animais receberam PPADS (0,1, 0,5 e 1,0 nmols/1&#956;L) ou fluÃdo cerebroespinhal artificial (FCE) por injeÃÃo intracerebroventricular 10 min antes da isquemia. Os parÃmetros estudados foram funÃÃo sensÃrio-motora, aquisiÃÃo e retenÃÃo de memÃria, Ãrea de infarto cerebral e atividade da MPO, como marcador para infiltraÃÃo granulocÃtica. ApÃs isquemia, verificou-se atravÃs de avaliaÃÃo neurolÃgica, uma diminuiÃÃo significante do desempenho motor e funÃÃo sensorial dos animais. A percentagem da Ãrea de infarto nos animais falso-operados foi significantemente menor que naqueles submetidos à isquemia (FO: 0,89  0,18%; FO + PPADS 1,0: 1,18  0,1%; ISQ: 9,06  1,2%; ISQ + PPADS 0,5: 2,2  0,32%; ISQ + PPADS 1,0: 1,86  0, 18%). Foi observado ainda um aumento da atividade exploratÃria vertical (n de Rearings) nos animais tratados com PPADS quando comparados aos animais do grupo isquemiado (ISQ: 9,5  1,8; ISQ + PPADS 0,5: 26,9  2,9; ISQ + PPADS 1,0: 20,6  3,7; Kruskall-Wallis, p<0.05). O tratamento com PPADS melhorou de forma significante os dÃficits na memÃria operacional induzidos pela isquemia, avaliado no teste do Labirinto em Y (FO: 73,8  1,9%; ISQ: 56,7  2,9%; ISQ + PPADS 0,5: 76,7  3,2%; ISQ + PPADS 1,0: 72,6  4,0%). Um resultado semelhante foi observado na memÃria aversiva (teste da esquiva passiva) no qual o PPADS melhorou a aquisiÃÃo de memÃria de curta duraÃÃo. Os animais isquemiados demonstraram um aumento nos nÃveis de MPO no estriado (FO: 3,6  0,63; ISQ: 16,24  4,86) e cÃrtex temporal (FO: 6,16  1,23; ISQ: 22,33  4,98), e o tratamento com PPADS (1,0 nmols/1&#956;L) reverteu significantemente esse efeito (ISQ + PPADS â estriado: 6,13  0,65; cÃrtex: 6,28  0,38). Os resultados demonstram o envolvimento dos receptores P2 na fisiopatologia da isquemia cerebral. A inibiÃÃo dos receptores P2 pelo PPADS mostrou um significante efeito neuroprotetor sobre o dano neuronal, comportamento motor e memÃria apÃs isquemia e indicam que este efeito pode estar relacionado pelo menos em parte a uma atividade antiinflamatÃria deste composto.

Produtos de glicação avançada (AGE) alteram o metabolismo de lípides e, em especial, o efluxo de colesterol de macrófagos, por meio da redução dos receptores ABCA-1 e ABCG-1. Isto prejudica o transporte reverso de colesterol, sistema que favorece o fluxo de colesterol de macrófagos arteriais ao fígado, permitindo sua excreção na bile e eliminação fecal. Óxidos de colesterol modulam favoravelmente a homeostase lipídica em macrófagos e favorecem o transporte reverso de colesterol, embora o acúmulo de 7-cetocolesterol, 7-hidroxicolesterol e 7-hidroxicolesterol associe-se à aterogênese e morte celular. Neste estudo, avaliou-se o efeito do tratamento com glicolaldeído (GAD; oxoaldeído que induz rápida geração intracelular de AGE), em macrófagos sobrecarregados com LDL oxidada e incubados com HDL ou HDL e indutor de LXR (T0901317) sobre: 1) a distribuição seletiva de óxidos de colesterol e o conteúdo total de esteróis intracelulares e 2) o conteúdo de ABCA-1 e ABCG-1. Colesterol total e os diversos subtipos de óxidos de colesterol foram determinados por cromatografia a gás acoplada à espectrômetro de massa. O conteúdo dos receptores de HDL (ABCA-1 e ABCG-1) foi avaliado por imunoblot. Em macrófagos controles (C), a adição de HDL ou HDL + T0901317 promoveu redução no conteúdo de esteróis totais (colesterol + óxidos de colesterol), colesterol e 7-cetocolesterol. No entanto, isto não foi observado em macrófagos GAD. Nas diversas condições experimentais, não houve diferença no conteúdo intracelular dos outros subtipos de óxidos de colesterol, em células C e GAD. Macrófagos GAD apresentaram menor conteúdo de ABCA-1 (45%), quando comparados aos macrófagos C, mesmo após adição de HDL ou HDL + T0901317. O conteúdo de ABCG-1 foi 36,6% menor em macrófagos GAD, na presença de HDL, em comparação às células C. Em conclusão, em macrófagos sobrecarregados com LDL oxidada, o tratamento com glicolaldeído diminui a exportação celular de colesterol e 7-cetocolesterol, mediada pela HDL. Isto é decorrente do menor conteúdo dos receptores ABCA-1 e ABCG-1 em macrófagos tratados com glicolaldeído, e pode contribuir para o desenvolvimento de aterosclerose no diabete melito / Advanced glycation end products (AGE) alter lipid metabolism and reduce the macrophage expression of ABCA-1 and ABCG-1 which impairs the reverse cholesterol transport, a system that drives cholesterol from arterial wall macrophages to the liver, allowing its excretion into the bile and feces. Oxysterols favors lipid homeostasis in macrophages and drive the reverse cholesterol transport, although the accumulation of 7-ketocholesterol, 7- hydroxycholesterol and 7- hydroxycholesterol is related to atherogenesis and cell death. We evaluated the effect of glycolaldehyde treatment (GAD; oxoaldehyde that induces a fast formation of intracellular AGE) in macrophages overloaded with oxidized LDL and incubated with HDL alone or HDL plus LXR agonist (T0901317) in: 1) the intracellular content of oxysterols and total sterols and 2) the contents of ABCA-1 and ABCG-1. Total cholesterol and oxysterol subspecies were determined by gas chromatography/mass spectrometry and HDL receptors content by immunoblot. In control macrophages (C), incubation with HDL or HDL + T0901317 reduced the intracellular content of total sterols (total cholesterol + oxysterols), cholesterol and 7-ketocholesterol, which was not observed in GAD macrophages. In all experimental conditions no changes were found in the intracellular content of other oxysterol subspecies comparing C and GAD macrophages. GAD macrophages presented a 45% reduction in ABCA-1 protein level as compared to C cells, even after the addition of HDL or HDL + T0901317. The content of ABCG-1 was 36.6% reduced in GAD macrophages in the presence of HDL as compared to C macrophages. In conclusion, in macrophages overloaded with oxidized LDL, glycolaldehyde treatment reduces the HDL-mediated cholesterol and 7-ketocholesterol efflux which is ascribed to the reduction in ABCA-1 and ABCG-1 protein level. This may contribute to atherosclerosis in diabetes mellitus

Neste trabalho investigamos a interação entre ATP-glutamato na modulação de potenciais de ação e atividade sináptica de neurônios PVN-RVLM, além de avaliar se esta interação induziria mudanças na atividade simpática lombar (ANSL) por estímulo osmótico. Utilizamos de técnicas de imunohistoquímica, whole-cell patch clamp e registro eletroneurográfico. Observou-se que o ATP aumenta a frequência de potenciais de ação em neurônios PVN-RVLM, efeito bloqueado por acido quinurênico (KYN) e PPADS. A injeção de ATP no PVN aumenta a ANSL (25 nmol: 72%), um efeito atenuado por PPADS e/ou KYN, e também por CNQX. O ATP não afeta a função sináptica, mas aumenta correntes glutamatérgicas induzidas por aplicação AMPA em 52%, a qual foi bloqueada por PPADS ou por quelação de Ca2+ intracelular. Além disso, o estímulo osmótico ativa neurônios do PVN que expressam receptores P2X2 e potencia as correntes mediadas por AMPA (53%), um efeito bloqueado por PPADS. Finalmente, demonstrou-se que receptores P2 no PVN são importantes na simpatoexcitação induzida por estímulo osmótico agudo. / In the present study we investigate the interaction of ATP-glutamate on the firing activity and synaptic function in PVN-RVLM neurons, besides whether that interaction would be translated in changes on sympathetic nerve activity (SNA) induced by osmotic stimulus. Immunohistochemistry, whole-cell patch clamp and electroneurography technical approaches were used. Our data have shown that ATP increases firing rate of PVN-RVLM neurons, an effect blocked by kynurenic acid (KYN) or PPADS. ATP injection into the PVN enhanced SNA (72%), which was attenuated by PPADS and/or KYN, or CNQX. ATP did not affect synaptic function but, glutamatergic currents evoked by AMPA application were augmented with ATP (AMPA area: 52%), blocked by PPADS and chelation of intracellular Ca2+. In addition, we observed that acute osmotic stimulus activates P2X2 expressing neurons in the PVN. Moreover, an osmotic challenge potentiated AMPA responses (53%), an effect blocked by PPADS. Finally, we demonstrated that P2 receptors in the PVN are important for osmotically-driven sympathoexcitation.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-05-11T13:29:19Z No. of bitstreams: 1 micheliaantoniadonascimentogusmao.pdf: 2029497 bytes, checksum: 4ab5e6f5d64e0b6010c2ea583d1ed036 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-06-20T18:43:57Z (GMT) No. of bitstreams: 1 micheliaantoniadonascimentogusmao.pdf: 2029497 bytes, checksum: 4ab5e6f5d64e0b6010c2ea583d1ed036 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-20T18:43:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 micheliaantoniadonascimentogusmao.pdf: 2029497 bytes, checksum: 4ab5e6f5d64e0b6010c2ea583d1ed036 (MD5) Previous issue date: 2013-03-06 / FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / A esquistossomose é uma doença que acomete cerca de 200 milhões de pessoas no mundo causando grande morbidade. Devido à falta de vacina para essa doença, muitos antígenos são pesquisados. Um domínio antigênico B (r156-195) da ATPDase 2 de Schistosoma mansoni foi previamente descrito, e dois peptídeos sintéticos (SmB1LJ, r155-176; SmB2LJ, r175-194) derivados deste domínio foram obtidos com o objetivo de avaliar a imunogenicidade dessa proteía. O inóculo de cada peptídeo em camundongos BALB/c induziu atividade imunoestimulatória significativa, elevando os níveis de anticorpos IgG1 e IgG2, como detectado por ELISA. Os anticorpos policlonais anti-SmB1LJ e anti-SmB2LJ, quando imobilizados em Proteína A-Sepharose, imunoprecipitaram aproximadamente 42-96% da atividade ADPásica da preparação de verme adulto. Por “Western blots” do complexo imunoprecipitado, três bandas de 76, 63 e 55 kDa foram identificadas pelos dois soros imunes, confirmando a identidade da ATPDase 2, e sugerindo que esta proteína está sujeita a vários processamentos pós-tradução, tais como glicosilação e proteólise, resultando finalmente em uma proteína secretada de 55 kDa. Adicionalmente, anticorpos policlonais anti-SmB2LJ inibiram 62% e 37% das atividades ATPásica e ADPásica, respectivamente, enquanto anticorpos policlonais anti-SmB1LJ inibiram ADPase (92%), mas não atividade ATPásica, sugerindo que o domínio B da ATPDase 2 do S. mansoni está envolvido na regulação catalítica da enzima, sendo um novo alvo para o desenho de inibidores. Imunomarcação com anticorpos policlonais anti-SmB2LJ de cortes de fígado de camundongo infectado revelaram reações positivas na superfície externa do miracídio no ovo de S. mansoni. Fluorescência intensa foi detectada na região entre o miracídio e o lado interno da casca do ovo, localizada no envelope de von Lichtenberg, a qual é uma região de produção de componentes imunogênicos. Fluorescência foi também detectada no lado de fora da casca do ovo, aprisionada pelos microespinhos de superfície, confirmando que esta proteína, como no verme adulto, é também secretada de ovos de S. mansoni. Nenhuma reatividade foi observada nos tecidos granulomatosos circundantes. Amostras de plasmas de camundongos Swiss infectados com S. mansoni foram testadas por ELISA usando SmB1LJ or SmB2LJ como antígeno. Reatividade significativamente maior de anticorpos IgG, IgG1 ou IgG2a foi detectada com SmB1LJ, enquanto somente anticorpo IgG1 foi altamente reativo com SmB2LJ. A reatividade de amostras de plasma (diluídas 1:200) de camundongos Swiss previamente inoculados com apirase de batata ou r-potDomínio B, um polipeptídio com cauda de hexahistidina derivado do domínio B (r78-117) da apirase de batata, e homólogo ao domínio B da ATPDase 2, foi também testada por ELISA usando os peptídeos como antígenos. Anticorpos policlonais IgG e IgG1 anti-apirase de batata reagiram significativamente com SmB1LJ, enquanto somente IgG1 reagiu com SmB2LJ. Anticorpos policlonais anti-r-potDomínio B não reagiram significativamente com SmB2LJ. Comparado aos controles, amostras de plasma (diluídas 1:200) destes animais pré-imunizados com apirase de batata ou r-potDomínio B e desafiados com S. mansoni não reagem significativamente com os peptídeos. Os resultados confirmaram que o domínio B da ATPDase 2 está potencialmente envolvido na resposta imune do hospedeiro, e os peptídeos SmB1LJ e SmB2LJ podem ser usados em estudos da esquistossomose. / Schistosomiasis is a disease that affects approximately 200 million people worldwide causing great morbidity. Due to lack of vaccine for this disease, many antigens are searched. An antigenic domain B (r156-195) from the Schistosoma mansoni ATPDase 2 isoform was previously described, and two synthetic peptides (SmB1LJ, r155-176; SmB2LJ, r175-194) belonging to this domain were obtained. Inoculation of each peptide in healthy BALB/c mice induced significant immunostimulatory activity, increasing the IgG1 and IgG2a antibody levels, as detected by ELISA. The polyclonal anti-SmB1LJ and anti-SmB2LJ antibodies, when immobilized on Protein A-Sepharose, immunoprecipitated approximately 42-96% of the ADPase activity from the adult worm preparation. By Western blots of immunoprecipitated complex, three bands of 76, 63 and 55 kDa were identified by the two immune sera, confirming the ATPDase 2 identity, and suggesting that this protein is subject to several posttranslational processing, such as glycosylation and proteolysis, resulting finally in a secreted protein of 55 kDa. Additionally, polyclonal anti-SmB2LJ antibodies inhibited 62% and 37% of the ATPase and ADPase activities, respectively, whereas polyclonal anti-SmB1LJ antibodies inhibited ADPase (92%), but not ATPase activity, suggesting that the domain B from the S. mansoni ATPDase 2 is involved in enzyme catalytic regulation, being a new target for inhibitor design. Immunolabelled cryostat sections of infected mouse liver by the anti-SmB2LJ polyclonal antibodies revealed positive reactions on the external surface from the miracidium in the S. mansoni egg. Intense fluorescence was detected in the region between the miracidium and the inner side of the egg-shell, located in von Lichtenberg’s envelope, which is a region of production of immunogenic components. Fluorescence was also detected in the outer side of the egg-shell and entrapped by the surface microspines, confirming that this protein, like in the adult worm, is also secreted from the S. mansoni eggs. No reactivity was observed in the surrounding granumomatous tissues, which are rich en inflammatory cells. Serum samples from S. mansoni-infected Swiss mice were tested by ELISA using SmB1LJ or SmB2LJ as coating antigen. Significantly higher IgG, IgG1 or IgG2a antibody reactivity was detected against SmB1LJ, whereas only IgG1 antibody was highly reactive against SmB2LJ. The reactivity of plasma samples (diluted 1:200) from Swiss mice previously inoculated with potato apyrase or r-potDomain B, a 6xHis tag polypeptide belonging to the domain B (r78-117) from the potato apyrase, homologue to the domain B from the ATPDase 2, was also tested by ELISA using the peptides as coating antigens. Polyclonal IgG and IgG1 anti-potato apyrase antibodies significantly reacted with SmB1LJ, whereas only IgG1 reacted with SmB2LJ. Polyclonal anti-r-potDomain B antibodies did not significantly react with SmB2LJ. Compared to controls, plasma samples (diluted 1:200) from these animals pre-immunized with potato apyrase or r-potDomain B and challenged with S. mansoni did not react significantly with peptides. The results confirmed that the domain B from the ATPDase 2 is potentially involved in the host immune response, and peptides SmB1LJ and SmB2LJ can be used in schistosomiasis studies.

Submitted by Geandra Rodrigues (geandrar@gmail.com) on 2018-04-04T18:08:27Z No. of bitstreams: 1 anacarolinaribeirogomesmaia.pdf: 687971 bytes, checksum: 19edf64a9349768df07f14662c3d6df6 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2018-04-05T11:27:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 anacarolinaribeirogomesmaia.pdf: 687971 bytes, checksum: 19edf64a9349768df07f14662c3d6df6 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-05T11:27:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 anacarolinaribeirogomesmaia.pdf: 687971 bytes, checksum: 19edf64a9349768df07f14662c3d6df6 (MD5) Previous issue date: 2015-05-04 / PROQUALI (UFJF) / A NTPDase 1 (50 kDa) de promastigotas de Leishmania infantum foi purificada por eletroforese em gel não-desnaturante. A identidade desta proteína ou de seu domínio B conservado (r83-122) foi confirmada por “Western blots” utilizando soros imunes produzidos contra a apirase de batata (SA), r-potDomínioB (SB), um polipeptídeo recombinante derivado do domínio B desta proteína vegetal, e LbB1LJ (SC; r82-103) e LbB2LJ (SD; r102-121), peptídeos sintéticos derivados do domínio B da NTPDase 1 de L. braziliensis. Sua antigenicidade foi evidenciada em “Western blots” pela reatividade com soros de cães com leishmaniose visceral. Os soros imunes SC ou SD inibiram sua atividade (87-99%) em preparação de promastigotas, sugerindo um efeito direto sobre o domínio B. Por ELISA, 45-50% de 38 cães infectados foram soropositivos para LbB1LJ e LbB2LJ confirmando a antigenicidade deste domínio. / The NTPDase 1 (50 kDa) of Leishmania infantum promastigotes was purified by nondenaturing gel electrophoresis. The identity of this protein or of its conserved domain B (r83-122) was confirmed by Western blots using immune sera raised against potato apyrase (SA); r-potDomainB (SB), a recombinant polypeptide derived from the B domain of this vegetable protein, and LbB1LJ (SC; r82-103) and LbB2LJ (SD; r102-121), synthetic peptides derived from the B domain of the L. braziliensis NTPDase 1. Its antigenicity was evidenced in Western blots by the reactivity with serum samples from dogs with visceral leishmaniasis. The immune sera SC and SD inhibited its activity (87- 99%) in promastigotes preparation, suggesting a direct effect on the B domain. By ELISA, 45-50% of 38 infected dogs were seropositive for LbB1LJ and LbB2LJ confirming the antigenicity of this domain.