Made available in DSpace on 2016-12-08T16:24:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGCA11MA086.pdf: 508247 bytes, checksum: 068115e565f2fefa22610ca6fc918645 (MD5) Previous issue date: 2011-11-09 / Artificial insemination is a established and applied biotech of reproduction to the current swine production, which main objective is to maximize the use of ejaculated, maintaining and improving reproductive efficiency. However, when there is a bacterial contamination in the semen, may be seriously impaired for sperm viability. Inseminated doses with bacterial contamination have reduced motility and pH, increase of agglutination, abnormalities of the acrosome and dead cells. The objective of this study was to investigate the bacterial contamination in semen collected in boar studs and relate it to quantitative and qualitative semen qualities, and test the sensitivities of the isolated agent using different antibiotics. Boar semen was collected from three artificial insemination centers in different regions of the state of Santa Catarina. These samples were analyzed at the Centro de Diagnóstico Microbiológico Animal CAV-UDESC, where it was performed the isolation, identification, bacterial count besides the antibiograns. The same samples were also evaluated for motility, vigor, concentration and agglutination. For this evaluation it was used data provided by the company. Smears were prepared from semen samples and stained with eosin-negrosina for the evaluation of sperm morphology. The data were subjected to analysis of variance using the GLM procedure of SAS statistical package. There was isolated 17 different bacterial genera, among which the most frequent were Staphylococcus sp. (26.43%), Proteus sp. (20.53%), Escherichia coli (9.47%), Pseudomonas sp. (11.05%), but there was not a significant correlation (P> 0.05) when comparing the number of colony forming unit / mL of semen with motility, concentration and morphological changes. It was found an isolated effect of the genus Staphylococcus sp. (P <0.05) causing a decrease in sperm motility of the samples where it was isolated. Most bacterial pathogens showed resistant to commercial antibiotics tested which refers to those used in the preparation of the inseminated doses from the boar studs / A Inseminação Artificial é uma biotécnica da reprodução bem estabelecida e aplicada na suinocultura atual, cujo objetivo principal é a maximização do uso dos ejaculados, mantendo e melhorando a eficiência reprodutiva. Entretanto, quando há contaminação bacteriana no sêmen, pode haver sério comprometimento para a viabilidade espermática. Doses inseminantes com contaminação bacteriana apresentam diminuição da motilidade e do pH, aumento da aglutinação, de anormalidades do acrossoma e de células mortas. O objetivo deste trabalho foi pesquisar a contaminação bacteriana em sêmens coletados em centrais de inseminação artificial e relacionar com suas qualidades quantitativas e qualitativas, além de testar a sensibilidades dos agentes isolados frente a diferentes antibióticos. Foi coletado sêmen suíno de três centrais de inseminação artificial em diferentes regiões do estado de Santa Catarina. Essas amostras foram submetidas à análise microbiológica no Centro de Diagnóstico Microbiológica Animal CAV-UDESC, onde foi realizado o isolamento, identificação, contagem bacteriana além dos antibiogramas. Estas mesmas amostras foram também avaliadas quanto à motilidade, vigor, aglutinações e concentração. Para esta avaliação foram utilizados dados fornecidos pela empresa. Foram realizados esfregaços das amostras de sêmen e corados com eosina-negrosina para a avaliação da morfologia espermática. Os dados foram submetidos à análise de variância utilizando-se o procedimento GLM do pacote estatístico SAS. Houve isolamento de 17 diferentes gêneros bacterianos, entre os quais os mais freqüentes foram Staphylococcus sp. (26,43%) Proteus sp. (20,53%), Escherichia coli (9,47%), Pseudomonas sp. (11,05%), porém não houve uma correlação significativa (P>0,05) quando comparados o número de unidade formadora de colônia /mL do sêmen com motilidade, concentração e alterações morfológicas. Foi encontrado um efeito isolado do gênero Staphylococcus sp. P(<0,05) provocando uma diminuição na motilidade dos espermatozóides das amostras onde o mesmo foi isolado. A maioria dos agentes bacterianos mostrou-se resistentes aos antibióticos comercias testados que foram aqueles mais utilizados para diluição de sêmen nas centrais de inseminação artificial

Made available in DSpace on 2016-12-08T16:24:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGCA14MA148.pdf: 771365 bytes, checksum: 450534199d87b080ea5e2e5d1603a877 (MD5) Previous issue date: 2014-07-29 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Water quality is essential for appropriate processing of food. In dairy farms it is very important, for milk in as well as for the cleaning of the milking parlors, equipments and utensils. The Brazilian official regulations stipulate that the water used for the production and preparation of food, such as milking and sanitizing milking equipment, must be chlorinated and attend potability standards. Because of this, this research aimed to evaluate the influence of the use of chlorine tablets for the sanitization of the water used in milking parlors on the microbiological quality of water and milk. The experiment was conducted in 20 dairy farms region Serrana of Santa Catarina State - Brazil, between May and October 2013. It was installed an equipment to chlorinate the water through the chlorine tablet on the water box of the farms, being chlorine used for a period of two weeks. The concentration of chlorine in the water was 0.25 to 1.0 ppm, being monitored every 7 days. In each farm milk and water samples were collected in two periods without the use of chlorine, and two periods with the use of chlorine, being the first day (no chlorine: control) at 7° and 14° (with chlorine) and day 21 after uninstalling the chlorinators (no chlorine: control). Water samples were collected aseptically from the water outlet in the milking parlor and milk samples from bulk tank. In water and milk were investigated E. coli, Coliforms at 35ºC, mesophilic aerobes and psychrotrophic bacteria. In water pH, total hardness and organic matter were also analyzed and in milk levels of fat, protein and lactose and somatic cell count (SCC). The use of chlorine tablets in water improved (P <0.0001) the microbiological quality of the water, but did not affect the microbiological quality of milk (P> 0.05). The organic matter content was related to the counts of microorganisms in water, which are higher in samples with higher organic matter content. The farm technicization were related to the microbiological quality of the milk, but it does not affect CCS. It is conclude that chlorination improves the microbiological quality of the water, but without effect on the milk quality / A qualidade da água é essencial para o adequado processamento de alimentos, sendo que nos estabelecimentos leiteiros assume grande importância, visto ser fundamental para a ordenha, assim como para a higienização das instalações, equipamento e utensílios. Os regulamentos oficiais brasileiros estabelecem que a água utilizada para produção e elaboração de alimentos, tais como os procedimentos de ordenha e sanificação de equipamentos, deve ser clorada e atender aos padrões de potabilidade. Em função disto, objetivou-se avaliar a influência da utilização de pastilhas de cloro na sanificação da água utilizada em salas de ordenha sobre a qualidade microbiológica da água e do leite. O experimento foi realizado em 20 propriedades da região Serrana do Estado de Santa Catarina, no período de maio a outubro de 2013, nas quais foi instalado um equipamento para cloração da água por meio de pastilha de cloro, na caixa de água da propriedade, sendo o cloro utilizado por um período de duas semanas. A concentração de cloro na água foi de 0,25 a 1,0 ppm, sendo monitorado a cada sete dias. Em cada propriedade foram coletadas amostras de água e leite em dois períodos sem a utilização do cloro, e outros dois períodos com utilização do cloro, sendo no primeiro dia (sem cloro: controle), no 7° e 14° (com cloro) e 21° dia após a desinstalação dos cloradores (sem cloro: controle). As amostras de água foram coletadas assepticamente da saída de água, na sala de ordenha, e as amostras de leite do tanque de expansão. Foram pesquisados na água e no leite E.coli, coliformes a 35ºC, aeróbios mesófilos e bactérias psicrotróficas, na água pH, dureza total e matéria orgânica e no leite percentuais de gordura, proteína e lactose e, CCS. O uso de pastilhas de cloro na água melhorou (P<0,0001) a qualidade microbiológica da água, porém não afetou a qualidade microbiológica do leite (P>0,05). O teor de matéria orgânica teve relação com as contagens de microrganismos na água, sendo estas mais elevadas em amostras com maior teor de matéria orgânica. O grau de tecnificação das propriedades apresentou relação com a qualidade microbiológica do leite, porém não afetou a CCS. Conclui-se que a cloração da água melhora a qualidade microbiológica da água das propriedades leiteiras, porém sem interferir diretamente na qualidade do leite

Made available in DSpace on 2016-12-08T16:44:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGPV12MA064.pdf: 1012596 bytes, checksum: c4f66f0fa2a1b45c1ad39219f45c6b2d (MD5) Previous issue date: 2012-07-10 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The bacterial wilt (Curtobacterium flaccumfaciens pv. flaccumfaciens) has showed one of the most important diseases in the bean crop. Its symptoms occur from wilts at leaves to death of the infected plant. The control is based on the use of healthy seeds, crop rotation and especially resistant cultivars. The goal of this study was to estimate the efficiency of selection in segregating populations of beans for bacterial wilt resistance and indicate the best time of the cycle to make the selection of resistant plants and also to test in field the effectiveness selection at greenhouse for resistance to this disease. To achieve these objectives were used converging crosses between Aruã x Guará, Pyatã x Guará and Pyatã x Pérola, originating F2, F2:3, F3:4 which were subsequently inoculated with Curtobacterium flaccumfaciens pv. flaccumfaciens cff 2634 and evaluated according to a scale related to the common symptoms of the disease at 20, 40 and 60 days after inoculation. The field test of the effectiveness selection at greenhouse was used the same crosses, however, the populations used were in the generations F2:3, F3:4 and F4:5, subsequently measured the agronomic traits such as plant height, first pod, stem diameter, number of pods per plant, number of grains per plant, grain weight in grams per line and resistance to bacterial wilt. Through the data can be established that the populations of Aruã x Guará, Pyatã x Guará and Pyatã x Pérola have similar behavior in relation to resistance to the bacterial wilt symptoms. The selection was effected for the coming populations of Aruã x Guará and Pyatã x Pérola. The favorable time for distinguishing and selecting reliably segregating plants is between 40 and 60 days after inoculation. It was likewise observed that there is genetic diversity and superiority of selected plants on not select plants and their parents, indicating in the field that the greenhouse selection for resistance to bacterial wilt was effective / A murcha de curtobacterium (Curtobacterium flaccumfaciens pv. flaccumfaciens) tem se mostrado uma das doenças emergentes mais importantes na cultura do feijão. Seus sintomas ocorrem desde murchas nas folhas até à morte da planta infectada. O controle está baseado em uso de sementes sadias, rotação de cultura e principalmente cultivares resistentes. Assim, o objetivo deste trabalho foi estimar a eficiência da seleção em populações segregantes de feijão para resistentes à murcha de curtobacterium e indicar o melhor período do ciclo da cultura para proceder a seleção das plantas resistentes e também testar a campo a efetividade da seleção em casa de vegetação. Para atingir estes objetivos foram usados cruzamentos convergentes entre Aruã x Guará, Pyatã x Guará e Pyatã x Pérola, dando origem a populações segregantes que nas das gerações F2, F2:3 e F3:4 foram inoculadas com Curtobacterium flaccumfaciens pv. flaccumfaciens cff 2634 e avaliadas segundo uma escala de notas referentes aos sintomas comuns da doença aos 20, 40 e 60 dias após a inoculação. O teste a campo da efetividade da seleção em casa de vegetação usou os mesmos cruzamentos, entretanto as populações avaliadas são relativas às gerações F2:3, F3:4 e F4:5 sendo posteriormente mensurados os caracteres agronômicos como altura de planta, inserção do primeiro legume, diâmetro do caule, número de legumes por planta, número de grãos por planta, peso em gramas de grãos por linha e resistência à murcha de curtobacterium. Através dos dados pôde se estabelecer que as populações segregantes de Aruã x Guará, Pyatã x Guará e Pyatã x Pérola possuem comportamento semelhante em relação à resistência aos sintomas da murcha de curtobacterium. A seleção foi efetiva para as populações oriundas de Aruã x Guará e Pyatã x Pérola e o período propício para distinguir e selecionar de maneira confiável as plantas segregantes ocorre entre 40 e 60 dias após a inoculação. Foi da mesma forma observado que existe divergência genética e superioridade de plantas selecionadas sobre plantas não selecionadas e genitores, indicando a campo que a seleção em casa de vegetação visando resistência à murcha de curtobacterium foi efetiva

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:09:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MichelleCF_TESE.pdf: 2764239 bytes, checksum: af9951c05c7267abaecbc91592b7596d (MD5) Previous issue date: 2010-03-29 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / In this study, it has been investigated the influence of silver film deposition onto 100% polyester woven and non-woven, on the survival of Escherichia coli and Staphylococcus aureus in contact with these surfaces. The treatment was performedin a chamber containing the working gas at low pressure (~ 10-2 mbar). Some process parameters such as as voltage: 470 V; pressure: 10-2 mbar; current : 0.40 A and gas flow: 6 and 10 cm3/min were kept constant. For the treatments with pur?argon plasma using a flow of 6 and 10 cm3/min, different treatment times were evaluated, such as, 10 , 20, 30, 40, 50 and 60 minutes. Contact angle (sessile drop), measurements were used to determine the surface tension of the treated fabrics and its influence on the bacteria grow as weel as the possibilities of a biofilm formation. The formation of a silver film, as well as the amount of this element was verified byEDX technique. The topography was observed through scanning electron microscopy (SEM) to determine the size of silver grains formed on the surfaces of the fabric and assess homogeneity of treatment. The X-ray diffraction (XRD) was used to analyze the structure of silver film deposition. The woven fabric treatments enabled the formation of silver particulate films with particle size larger than the non-woven fabrics. With respect to bacterial growth, all fabrics were shown to be bactericidal for Staphylococcus aureus (S. aureus), while for the Escherichia coli (E. coli), the best results were found for the non-woven fabric (TNT) treated with a flow of 10 cm3/min to both bacteria / Neste trabalho, investigou-se a influ?ncia da deposi??o de filme de prata em tecidos planos e tecido n?o tecido 100% poli?ster, sobre a sobreviv?ncia das bact?rias Escherichia coli e Staphylococcus aureus em contato com essas superf?cies. O tratamento foi realizado em uma c?mara contendo os gases de trabalho sob baixa press?o (~ 10-2 mbar) mantendo-se constante durante todo ensaio alguns par?metros do processo, tais como, voltagem: 470 V; press?o: 10-2 mbar; corrente: 0,40 A e fluxo de g?s: 6 e 10 cm3/min e diferentes tempos de tratamento: 10, 20, 30, 40, 50 e 60 minutos. Atrav?s do teste de ?ngulo de contato (gota s?ssil), foi determinada a tens?o superficial dos tecidos tratados e sua influ?ncia para com o crescimento de bact?rias e a poss?vel forma??o de um biofilme. A forma??o de um filme de prata, bem como a quantidade deste elemento foi verificada pela t?cnica deEDX. A topografia foi observada por Microscopia de Eletr?nica de Varredura (MEV), a fim de determinar o tamanho dos gr?os de prata formados sobre as superf?cies do tecido e analisar a homogeneidade do tratamento. A Difra??o de raios-X (DRX) foi utilizada para analisar a estrutura da prata depositada. Os tratamentos de tecidos planos propiciaram a forma??o de filmes de prata particulados com tamanho de part?culas maiores que os tecidos n?o tecidos. Com rela??o ? prolifera??o bacteriana, todos os tecidos mostraram-se bactericidas para a bact?ria Staphylococcus aureus (S. aureus), enquanto que para a bact?ria Escherichia coli (E. coli), os melhores resultados foram encontrados para o Tecido n?o tecido (TNT) tratados com fluxo de 10 cm3/min para ambas bact?rias

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:14:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 FabriciaLF_DISSERT.pdf: 3549779 bytes, checksum: 2364a7c4e80831b956545a9a31de3525 (MD5) Previous issue date: 2012-11-19 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / A meningite bacteriana (MB) ? uma doen?a infecto-contagiosa que apresenta altas taxas de mortalidade e morbidade, constituindo-se assim um grave problema de sa?de p?blica. ? caracterizada por uma intensa inflama??o granuloc?tica que leva a inj?ria neuronal e consequentemente surgimento de sequelas neurol?gicas. A resposta inflamat?ria determina tanto a susceptibilidade ? MB como sua consequ?ncia cl?nica. Essa resposta depende n?o s? do tipo e da intensidade do est?mulo, mas tamb?m de fatores gen?ticos do hospedeiro, tais como polimorfismos localizados em regi?es codificantes ou regulat?rias de genes importantes durante a infec??o, dentre os mais frequentes os polimorfismos de um ?nico nucleot?deo (SNPs). O objetivo desse estudo foi investigar a associa??o entre os polimorfismos em TNF -308G/A, TNF -857C/T, IL-8 -251A/T, AADAT+401C/T, que codificam prote?nas importantes durante a resposta inflamat?ria e APEX1 Asn148Glu, OGG1 Ser326Cys e PARP-1 Val762Ala, que codificam enzimas de reparo de DNA, com a ocorr?ncia da MB. O estudo foi realizado com um grupo de 54 pacientes, admitidos no Hospital Giselda Trigueiro, Natal-RN, Brasil, o qual ? refer?ncia para doen?as infecciosas no estado, e um grupo controle formado por 110 volunt?rios saud?veis. Todos os indiv?duos inclu?dos no estudo autorizaram o uso do material biol?gico para a pesquisa atrav?s de termo de consentimento. Os gen?tipos foram investigados por PIRA-PCR ou PCR-RFLP. As frequ?ncias al?licas e genot?picas tamb?m foram associados com os n?veis de cito/quimiocinas, medidas pelo m?todo xMAP, e com os n?veis de imunoglobulinas. N?o encontramos diferen?as significativas na distribui??o individual entre pacientes e controles saud?veis das variantes TNF -857C/T e IL8 -251A/T, no entanto, foi observada uma maior frequ?ncia do alelo polim?rfico TNF-308A (P= 0,0145, OR= 0,34) no grupo controle, sugerindo um poss?vel papel protetor contra a doen?a. Os portadores do SNP em TNF -308G/A tamb?m apresentaram aumento nos n?veis de TNF-&#945; (P=0,0515) e IL- 6 (P=0,0135) no grupo MB e para MCP-1 (P=0,0381) e TNF-&#945; (P=0,0547 borderline) no grupo controle. Al?m disso, a an?lise de combina??o entre os genes estudados mostrou associa??o significativa para as combina??es entre APEX1148Glu/_ com OGG1 326Cys/_ e com PARP-1 762Ala/_ (P= 0,0007, OR=5,35), e IL-8 -251T/ com APEX1148Glu/_ (P= 0,0003, OR= 2,90) que foram mais frequentes em pacientes com MB, os quais afetaram os n?veis de cito/quimiocinas e celularidade em amostras de LCR de pacientes com MB. Esse trabalho foi realizado com a contribui??o de uma equipe multidisciplinar que envolveu diversos profissionais das ci?ncias biol?gicas e da sa?de, como bi?logos, farmac?uticos e m?dicos. Os nossos dados indicam que a avalia??o extensiva da variabilidade gen?tica pode contribuir para uma melhor compreens?o da susceptibilidade ? MB como tamb?m para outras doen?as infecciosas que ativam os mesmos mecanismos de resposta imune

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-12-17Bitstream added on 2014-06-13T19:58:43Z : No. of bitstreams: 1 salvi_dtb_me_araiq.pdf: 8254301 bytes, checksum: 206fba452475ee19cd840bec61eb7015 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Esta dissertação apresenta a preparação e caracterização de membranas condutoras iônicas baseadas em celulose produzida pela bactéria Gluconacetobacter xylinus. Estas membranas foram preparadas a partir da imersão de membranas de celulose bacteriana (CB) em soluções aquosas de ácidos (ácido acético e ácido trifluoroacético) e/ou plastificantes (trietanolamina e glicerol). Estrutura e perfil térmico destas membranas condutoras foram investigados por difração de raios X (DRX), microscopia eletrônica de varredura (MEV), termogravimetria (TG), calorimetria exploratória diferencial (DSC), espectroscopia vibracional na região do infravermelho (FTIR) e espectroscopia de espalhamento Raman. As propriedades elétricas foram avaliadas utilizando-se espectroscopia de impedância eletroquímica (EIE). As análises de DRX mostram o aumento de plastificante diminui a cristalinidade das amostras, cujo recobrimento das microfibrilas pelo plastificante pode ser visualizado por análise de MEV, e os valores de condutividade iônica obtidos são maiores em comparação aos da CB seca. A condutividade na membrana é dependente do conteúdo de umidade e o plastificante age impedindo a desidratação da membrana. Foi observado também que combinações de ácido e plastificante resultaram em membranas com maiores condutividades do que aquelas em que houve apenas adição do plastificante, uma vez que a adição de ácidos pode aumentar a condutividade protônica / This dissertation presents the preparation and characterization of ionic conducting membranes based on cellulose produced by bacteria Gluconacetobacter xylinus. These membranes have been prepared from bacterial cellulose membranes (BC) soaked in acids (acetic and trifluoroacetic acids) and/or plasticizer (triethanolamine and glycerol) aqueous solutions. The structure and thermal behavior of the conducting membranes were investigated by X-ray diffraction (XRD), scanning electron microscopy (SEM), thermogravimetry (TG), differential scanning calorymetry (DSC), infrared spectroscopy (FTIR) and Raman spectroscopy. Electrical properties were performed utilizing electrochemical impedance spectroscopy (EIS). From XRD analyses the amorphous phase becomes larger after increasing the amount of plasticizer that covers the cellulose microfibrils as revealed by SEM, and the obtained conductivity values were high in comparison to dried BC. The conductivity in the membrane is dependent on the moisture content and the plasticizer acts avoiding complete membrane dryness. It was also observed that the combination of acid and plasticizer resulted in membranes with higher ionic conductivity than plasticized ones, once the addition of acids may improve protonic conductivity

Orientador: Jesus Aparecido Ferro / Coorientador: Helen Alves Penha / Banca: Fabrício José Jaciani / Banca: Flávia Maria de Souza Carvalho / Resumo: O cancro cítrico tem como agente causal a bactéria Xanthomonas citri subsp. citri (Xac), que afeta diferentes espécies de citros economicamente importantes. É uma doença ainda sem método curativo, e pela sua relevância e dano econômico, faz-se necessário o entendimento em termos moleculares da interação Xac-citros para o desenvolvimento de estratégias que controlem a doença. O objetivo do presente trabalho foi investigar os efeitos da deleção da ORF XAC0024 presente no genoma da Xac isolado 306, que codifica uma proteína hipotética conservada e que apresenta vários domínios putativos, entre eles o domínio peptidase M23. A hipótese é que esta proteína pode estar envolvida com a patogenicidade e/ou virulência da bactéria. Para obter o mutante ΔXAC0024 foi utilizada a técnica de mutagênese sítio-dirigida, seguida de recombinação homóloga com o vetor suicida pOK1. O mutante ΔXAC0024 foi analisado em relação às características de patogenicidade, crescimento in vivo e in vitro, capacidade de autoagregação, produção de biofilme e produção de goma xantana. O teste de patogenicidade e a curva de crescimento in vivo foram realizados em limão cravo utilizando o método de infiltração por seringa para a inoculação da bactéria. Os sintomas do desenvolvimento da doença foram registrados por fotografia digital até o 25º dia após a inoculação (dai) e a curva de crescimento in vivo também foi determinada até o 25º dai. A curva de crescimento in vitro e a agregação célula-a-célula foram analisa... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The bacteria Xanthomonas citri subsp. citri (Xac) is the causal agent of citrus canker, a disease that affects different species of economically important citrus. There is no a curative method for this disease, and do to its relevance and economic damage, it is necessary to understand at molecular level the Xac-citrus interaction in order to develop strategies to control the disease. The objective of this study was to investigate the effects of the deletion of the ORF XAC0024 present in the genome of Xac strain 306, which encodes a conserved hypothetical protein and has several putative domains, including peptidase M23 domain. It is hypothesized that this protein may be involved in the pathogenicity and / or virulence of the bacterium. For the ΔXAC0024 mutant was used for site-directed mutagenesis technique, followed by homologous recombination with the suicide vector pOK1. The ΔXAC0024 mutant was analyzed in relation to pathogenicity characteristics, growth in vivo and in vitro, self-aggregation capacity, biofilm production and production of xanthan gum. The pathogenicity test and in vivo growth curves were performed on Rangpur lime using syringe-infiltration method for the inoculation of bacteria. Symptoms of the disease development were recorded by digital photography to the 25° day after inoculation (dai) and in vivo growth curve was also determined to give the 25°. The growth curve in vitro and cell-to-cell aggregation were analyzed in liquid culture medium NB. Biofilm p... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Resumo: A lixiviação bacteriana, ou biolixiviação é um processo biotecnológico que se fundamenta na utilização de microorganismos capazes de solubilizar metais pela oxidação de sulfetos metálicos, sendo nos dias atuais, uma das mais importantes alternativas para a extração de metais, sobretudo do ponto de vista ambiental e econômico. Uma das principais espécies utilizada neste processo é o Acidithiobacillus ferrooxidans, uma bactéria aeróbia, mesofílica e acidofílica, que obtém energia pela oxidação de substratos inorgânicos, basicamente o íon ferroso e compostos reduzidos de enxofre. Todavia, a interação dessa espécie com os sulfetos metálicos é um assunto ainda pouco entendido e de muita controvérsia na literatura. Com intuito de melhor entender estas diferenças, o presente trabalho estudou a oxidação da molibdenita (MoS2) e da covelita (CuS) pelo A. ferrooxidans linhagem LR em algumas condições fisiológicas, destacando-se a fonte energética de crescimento (íon ferroso e S0) e a remoção das substâncias exopoliméricas (EPS) para células crescidas em íon ferroso. A cinética de oxidação destes sulfetos também foi avaliada. Tais estudos foram realizados pela técnica de respirometria celular, que permite avaliar rapidamente a oxidação do substrato a partir de medidas de oxigênio consumido pela bactéria. Em todas as condições testadas a covelita apresentou significativa diferença de oxidação pelo A. ferroxidans LR em comparação com a molibdenita. A análise da cinética de oxidação dos sulfetos demonstrou que a molibdenita apresenta uma cinética que segue Michaelis-Menten, o mesmo não acontecendo para a covelita, provavelmente devido a forma com que estes sulfetos reagem ao ataque químico-bacteriano, fato determinado pelas estruturas eletrônicas dos sulfetos minerais. / Abstract: Bacterial leaching or bioleaching is a biotechnological process that applies microorganisms able to solubilize metals by metallic sulfides oxidation. This process is nowadays one of the most important alternatives for recovering metals, mainly by environmental and economic aspects. One of the most important bacteria employed in this process is Acidithiobacillus ferrooxidans. It is a gram-negative, acidophilic, aerobic and chemoautotrophic bacteria that obtain energy by the oxidation of inorganic substrates like ferrous ion and reduced sulfur compounds, including metal sulfides. Nevertheless, the interaction of this specie with metallic sulfides remains unclear. With the aim to understand these interactions, the present work has studied the covellite (CuS) and molydenite (MoS2) oxidation by A. ferrooxidans strain LR under different physiological conditions such as the source energy for growth (S0 and ferrous ion) and the removal of extracellular polymeric substances (EPS). These studies were performed by respirometric technique tha t allow evaluating very quickly the substrate oxidation by oxygen uptake measures. For all essays realized it was observed that the efficiency of covellite oxidation by A. ferrooxidans LR is much better than molybdenite. On the kinetic oxidation analyses, molybdenite revealed to be according to Michaelis-Menten substrate saturate kinetic. On the other hand, covellite was not in agreement with Michalis-Menten kinetic. This finding is probably associated with the pathway which these minerals sulfide react to chemistry-bacterial attack, what is influenced by electronic structures of mineral sulfides. Regarding essays performed with cells of A. ferrooxidans strain LR grown with different substrates (ferrous ion and sulfur) and to essays which EPS of bacterial cells were removed, the results obtained did not show differences in covellite oxidation. / Orientador: Oswaldo Garcia Júnior / Coorientador: Denise Bevilaqua / Banca: Assis Vicente Benedetti / Banca: Fernanda de Castro Reis / Mestre

Orientador: Manoel Victor Franco Lemos / Coorientador: Janete Apparecida Desidério / Banca: Ana Maria Guidelli Thuler / Banca: Fernando Hercos Valicente / Banca: Lucia Maria Carareto Alves / Banca: Odair Aparecido Fernandes / Resumo: A caracterização molecular de 46 isolados de Bacillus thuringiensis foi realizada por meio da técnica de PCR com os oligonucleotídeos iniciadores gerais Gral-cry8(d)/Gral-cry8(r), resultando na identificação do isolado BT_I622 como portador do gene cry8 (coleóptero-específico). O fragmento obtido de aproximadamente 376 pares de base (pb), localizado na porção inicial do gene, foi clonado em vetor pGEM®-T Easy, sequenciado e analisado por bioinformática. A determinação da sequência completa do gene cry8 presente no isolado BT_I622, foi realizada pela estratégia de "primer walking" com a utilização de oligonucleotídeos específicos. Os iniciadores foram elaborados através do programa Primer3, com base nas sequências de genes cry8 depositadas no banco de dados público GenBank (NCBI) e, por meio da análise das sequências geradas com o par de oligonucleotídeos gerais utilizados inicialmente na caracterização dos isolados. As amplificações com diferentes combinações de iniciadores resultaram na obtenção de fragmentos em torno de 1420, 3302, 628, 1580, 508 e 510 pb, os quais foram clonados, sequenciados e analisados pelos programas Phred/Phrap/Consed visando a montagem do gene. A sequência contendo 3531 pb foi comparada ao GenBank pela ferramenta BLASTn, apresentando 98% de similaridade com o gene cry8Ka2. Paralelamente, a sequência de aminoácidos deduzida (1176 aa) revelou 75% de identidade com a proteína Cry8Ba1 na análise com o algoritmo BLASTp, demonstrando que o isolado BT_I622 é portador de um novo gene cry8. Os bioensaios indicaram que as larvas de Sphenophorus levis são sensíveis a nova proteína Cry8 de B. thuringiensis / Abstract: The molecular characterization of 46 Bacillus thuringiensis isolates was carried out using the PCR technique with primers designed to detect cry8 genes (Gral-cry8(d)/Gral-cry8(r)), resulting in the identification of the isolate BT_1622 as a cry8 gene carrier (coleopteran specific). The ca. 376 base pairs (bp) fragment obtained was located in the initial part of the gene, which was cloned into the plasmid pGEM®-T Easy, sequenced and analyzed by bioinformatics. The complete sequence determination of this gene found within isolate BT_1622 was done using the "primer walking" strategy. The primers were designed using the software Primer3, comparing to previously sequenced cry8 genes found in the public database GenBank (NCBI) and analyzing the sequences generated with the pair of general primers used initially in the characterization of isolates. The amplifications with different primer combinations resulted other fragments of this gene with 1,420; 3,302; 628; 1,580; 508 and 510 bp, which were cloned, sequenced and analyzed using the software Phred/Phrap/Consed to obtain the full gene. The 3,531 bp sequence was compared to the GenBank using the BLASTn tool, and showed 98% of similarity with the gene cry8Ka2. Also, the deduced amino acid sequence (1,176 amino acids) showed 75% identity to the Cry8Ba1 using the algorithm BLASTp, demonstrating that the isolate BT_1622 carriers a new cry8 gene. The bioassay results indicated that the Sphenophorus levis larvae are sensitive to the new Cry8 protein of B. thuringiensis / Doutor

Orientador: Jesus Aparecido Ferro / Coorientador: José Belasque Júnior / Banca: Rui Pereira Leite / Banca: Nelson Arno Wulff / Banca: Manoel Victor Franco Lemos / Banca: Jackson Antônio Marcondes de Souza / Resumo: Um dos objetivos do presente estudo foi avaliar a diversidade genética de isolados brasileiros de X. citri subsp. citri (Xcc) com base em genes efetores do Sistema de Secreção Tipo III (avrXacE1, avrXacE2, avrXacE3, avrBs2, hpaF, XAC3090 e pthA4). Um total de 49 haplótipos foi identificado entre os 157 isolados analisados por "Southern blot", e o maior polimorfismo genético observado nas análises com a sonda PthA4. Esses efetores estão amplamente distribuídos na população do patógeno e podem ser úteis para uma melhor compreensão da interação patógeno-hospedeiro. Outro objetivo desse trabalho foi a caracterização patogênica e genética de isolados de X. fuscans subsp. aurantifolii tipos B e C (Xfa-B e Xfa-C). Observou-se pequena agressividade dos isolados de Xfa-B e grande variação na patogenicidade de Xfa-C. Os isolados de Xfa-C produtores de pigmento escuro em meio de cultura foram menos agressivos que os isolados não produtores. Alguns isolados de Xfa-C foram patogênicos também a limões, limas ácidas, citrumelo 'Swingle' e tangerinas. Os isolados de Xfa-B e Xfa-C foram diferenciados pelas técnicas de AFLP, BOX e ERIC-PCR, com relativa diversidade entre isolados do mesmo patótipo, e análises da sequência do gene gyrB revelaram alta similaridade desses isolados com espécies de Xanthomonas patogênicas a outros hospedeiros (X. fuscans subsp. fuscans e X. axonopodis pvs. anacardii, dieffenbachiae, rhynchosiae, sesbaniae e vignicola). No presente estudo também foi descrito o primeiro relato de X. alfalfae (Xa) no Brasil. Os isolados investigados demonstraram limitada patogenicidade e agruparam-se geneticamente com X. alfalfae subsps. alfalfae e citrumelonis e X. axonopodis pvs. allii, cassiae, desmodii, patelii e ricini / Abstract: In the present study, as one of the objectives, is showed the genetic diversity of Brazilian strains of X. citri subsp. citri (Xcc) based on effector genes of the Type III Secretion System (avrXacE1, avrXacE2, avrXacE3, avrBs2, hpaF, XAC3090 e pthA4). A total of 49 haplotypes were identified from 157 Xcc strains by Southern blot analysis using the cited genes as DNA probes. The highest polymorphism was observed with the PthA4. Those bacterium genes are extensively present in the Xcc population and can be used to a better comprehension of the Xcc-plant interaction. As a second objective, we present the genetic and pathogenic characterization of X. fuscans subsp. aurantifolii types B and C strains (Xfa-B e Xfa-C). In the pathogenic testes carried out Xfa-B presented a very limited pathogenicity, weaker than Xfa-C. Strains of this last pathotype presented a relatively high degree of pathogenicity variation, and those Xfa-C strains producers of dark pigment on culture medium were less pathogen than those not producers. Also some Xfa-C strains are pathogens to limes, lemons, Swingle citrumelo, and mandarins. Strains of Xfa-B and C were clearly differentiated by the molecular techniques AFLP, BOX and ERIC-PCR. Sequences of the gyrB gene revealed a high similarity of Xfa strains and other pathovars of Xanthomonas not pathogens of citrus. Finally, we presented the first detection of X. alfalfa (Xa) in Brazil, detected on a single Swingle citrumelo tree in São Paulo state. The Brazilian Xa strains showed a very limited pathogenicty, similar of a X. alfalfa subsp. citrumelonis / Doutor