Escherichia coli O157:H7 é um dos patógenos alimentares mais importantes da atualidade, e, recentemente, diversas cepas desse microrganismo foram isoladas no sul do Brasil. O objetivo deste trabalho foi caracterizar duas cepas de E. coli O157:H7, através da avaliação de sua resistência térmica, ácida e comportamento frente a diferentes desinfetantes e procedimentos de higienização de vegetais folhosos. Resultados demonstraram a redução significativa das contagens bacterianas, após 3 minutos a 60ºC, 2 minutos a 65º, 1 minuto a 70, 72º C e 75ºC. Contudo, após adaptação ácida, nenhuma das cepas foi inativada a 60ºC, por até 3 minutos. A 70ºC foi observado aumento significativo da resistência térmica apenas para a CC. Em relação à resistência ácida, ambas as cepas sobreviveram quando expostas ao meio TSBm a diferentes pH entre 2,0 a 9,5 ajustados com ácido clorídrico e ácido propiônico (AP). Apenas, o meio com pH 2,0, ajustado com AP, foi capaz de reduzir significativamente às contagens de ambas as cepas. Na avaliação da resistência aos desinfetantes, álcool etílico (96ºGl e 70%) e quaternário de amônio foram capazes de inativar ambas as cepas, mesmo na presença de matéria orgânica. O ácido orgânico, na concentração recomendada pelo fabricante e o dobro dessa concentração, reduziu cerca de 90% das contagens, após 5 minutos de exposição. O dicloroisocianurato de sódio só apresentou reduções significativas quando foram utilizadas duas vezes a concentração recomendada pelo fabricante. Todos os procedimentos de lavagem e desinfecção de alfaces, artificialmente contaminadas com E. coli O157:H7, reduziram as contagens em 2,97±1,21logUFC/g, apenas o tratamento conduzido a 10ºC, diferiu significativamente dos demais, apresentando maior redução 6,27±0,50logUFC/g. Esses resultados demonstram que as cepas de E. coli O157:H7 foram resistentes a diferentes situações de estresse, sendo portanto importantes do ponto de vista epidemiológico, visto que estão presentes no sul do Brasil e podem se tornar agentes etiológicos de surtos alimentares. / Escherichia coli O157:H7 is a major food pathogens today, and recently, several strains of this organism were isolated in southern Brazil. The objective of this study was to characterize two strains of E. coli O157: H7, by evaluating its thermal and acid resistance and behavior among different disinfectants and cleaning procedures on leafy vegetables. The results showed a significant reduction in bacterial counts after 3 minutes at 60 ° C, 2 min at 65 ° and 1 min at 70, 72 º C and 75 º C. However, after acid adaptation, none of the strains was inactivated at 60 ° C among 3 minutes. At 70 ° C significant increase in heat resistance was observed only for CC. Regarding acid resistance, both strains survived when exposed to TSBm medium at different pH adjusted from 2.0 to 9.5 with hydrochloric acid and propionic acid (PA). Only when the medium was adjusted with AP at pH 2.0 it was able to significantly reduce the counts of both strains. Evaluating the resistance to disinfectants, Ethyl Alcohol Free (96ºGl and 70 %) and quaternary ammonium were able to inactivate both strains, even in the presence of organic matter. For the orgnic acid in the concentration recommended by the manufacturer and at the double concentration there was reduced around 90 % of the counts after 5 minutes of exposure. The sodium dichloroisocyanurate only showed significant reductions when used in the double concentration recommended by the manufacturer. All procedures for cleaning and disinfecting the lettuces artificially contaminated with E. coli O157 : H7 counts decreased by 2.97 ± 1.21 log CFU / g , only the treatment conducted at 10 ° C reduced significantly from the others (6 , 27 ± 0.50 log CFU / g). The results demonstrate that the strains of E. coli O157 : H7 were resistant to different stress situations and therefore are important as an epidemiological point of view, as it is present in southern Brazil and can become etiologic agents of food borne outbreaks.

A maioria das bactérias não cresce como células individuais, mas em comunidades estruturadas como organismos pseudomulticelulares, ou biofilmes, estando presentes em praticamente todos os ecossistemas naturais e patogênicos. A adesão bacteriana à superfície e subsequente formação de biofilme promove mudanças metabólicas, fenotípicas e genotípicas que faz com que a sua erradicação seja extremamente difícil. Desta maneira, microrganismos que apresentam susceptibilidade a determinados antimicrobianos em testes laboratoriais convencionais, são na verdade altamente resistentes aos mesmos quando na forma de biofilmes. Bactérias na forma de biofilmes estão associadas com aproximadamente 80% das infecções médicas, ganhando destaque naquelas relacionadas a implantes médicos. Com o aumento da expectativa de vida humana, maior é a necessidade de substituição e reparo de funções biológicas e, portanto é estimado um aumento no número de pessoas hospitalizadas e que irão receber implantes biomédicos. Esses materiais, independente do seu nível de sofisticação, estão suscetíveis ao risco de colonização microbiana e infecção. O presente trabalho, conduzido de forma multidisclinar, utilizou microrganismos patogênicos e superfícies modelo, para demonstrar provas de conceito com relação a duas estratégias para o combate da formação de biofilmes de bactérias: (i) a busca por fitocompostos com atividade antiformação de biofilmes, guiado por relatos etnofarmacológicos, e o posterior recobrimento de superfície polimérica com estes compostos e, (ii) a modificação de propriedades de superfícies, através da técnica de plasma iônico, para a obtenção de superfícies antiadesivas. Assim, 45 extratos aquosos foram obtidos de 24 plantas utilizadas na medicina tradicional do bioma Caatinga. O rastreamento de atividade antibiofime e antibacteriana (nas concentrações de 0,4 e 4,0 mg/mL) evidenciou o alto potencial antibiofilme de extratos contra Staphylococcus epidermidis ATCC 35984 e indicou três plantas com atividade antimicrobiana para Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853. Subsequentemente, o estudo foi focado na purificação dos compostos bioativos de quatro plantas: Pityrocarpa moniliformis, ativa contra S. epidermidis e, Anadenanthera colubrina, Commiphora leptophloeos e Myracrodruon urundeuva, ativas contra P. aeruginosa. O fracionamento bioguiado e a caracterização química das frações por MALDI MS MS demonstraram que os compostos ativos nos quatros casos pertencem à classe dos taninos. Estruturas complexas de proantocianidinas (composta principalmente por profisetinidina para A. colubrina e por prorobinetinidina para C. leptophloeos), e de taninos hidrolisáveis (constituído por unidades de ácido gálico em M. urundeuva) foram identificadas. Estes taninos inibiram a formação de biofilme de P. aeruginosa através da ação bacteriostática, causando danos de membrana e excesso na proliferação de vacúolos bacterianos, embora a membrana de eritrócitos tenha sido preservada. Com relação à P. moniliformis, proantocianidinas ricas em prodelfinidina (0.125 mg/mL) foram os compostos responsáveis pela completa inibição da formação de biofilme de S. epidermidis, sem afetar a viabilidade do microrganismo. Como demonstrado por diversas técnicas, os resultados indicam que tanto a superfície bacteriana (S. epidermidis) quanto a superfície dos materiais testados (vidro e poliestireno) são espontaneamente recobertos pelas proantocianidinas, tornando-as superfícies hidrofílicas. Através da técnica de “spin coating”, a superfície polimérica foi recoberta com estas proantocianidinas, convertendo-se em uma superfície fortemente hidrofílica. A habilidade de prevenir a adesão de S. epidermidis foi mantida e o material se mostrou compatível com as células epiteliais de mamíferos, indicando o grande potencial destes produtos naturais como agentes funcionais de recobrimento de superfícies. No outro enfoque deste estudo, a modificação de propriedades de superfícies via descarga de plasma dos gases N2/H2 produziu, de maneira rápida e bastante efetiva, superfícies de poliestireno capazes de impedir a adesão de bactérias altamente resistentes aos antimicrobianos. Através de espectroscopia de raio X, verificou-se que uma concentração de nitrogênio de 8,8% e a componente polar da energia de superfície superior a 15 mJ/m2, são necessários para reduzir a adesão de bactérias que apresentam superfície hidrofílica (como enterobactérias produtoras de carbapenemase e MRSA), enquanto que cepas hidrofóbicas (exemplificadas pelo S. epidermidis) mantiveram a capacidade de aderir e formar biofilmes. As interações respulsivas explicam os efeitos antiadesivos obtidos, tanto no recobrimento de superfícies por proantocianidinas quanto no tratamento por plasma iônico. / Most bacteria do not grow as individual cells, but in communities structured as pseudomulticelulares organisms, or biofilms, being present in virtually all natural ecosystems and pathogens. The bacterial adhesion to surfaces and subsequent biofilm formation promotes metabolic, phenotypic and genotypic changes, which makes their eradication extremely difficult. Thereby, microorganisms that exhibit susceptibility to antimicrobials during conventional laboratory tests are in fact highly resistant to them when in the form of biofilms. Bacteria living as biofilms are associated with approximately 80% of all medical infections, mainly those related to indewelling devices. With increasing life expectancy, greater is the need for replacement and repair biological functions and, therefore, it is estimated an increasing number of hospitalized people and who will receive biomedical implants. However, regardless of the level of material sophistication, all of them are susceptible to the risk of microbial colonization and infection. This study, conducted in a multidisclinar way, employed pathogenic microorganisms and surface models to demonstrate proofs of concept regarding two strategies to combat bacterial biofilm formation: (i) the search for phytocompounds having antibiofilm formation activity, guided by ethnopharmacological reports, and further the polymer surface coating with these compounds, and (ii) the modification of surface properties, by the ionic plasma discharge technique to obtain anti-adhesive surfaces. Thus, 45 aqueous extracts were obtained from 24 plants used in the tradicinal medicine of the Caatinga biome. The screening of antibiofim and antibacterial activities (at concentrations 0.4 and 4.0 mg/mL) showed the high antibiofilm potential of the extracts against Staphylococcus epidermidis ATCC 35984 and indicated three plants with antimicrobial activity against Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853. Subsequently, the study was focused on the purification of bioactive compounds from four plants: Pityrocarpa moniliformis, active against S. epidermidis and, Anadenanthera colubrina, Commiphora leptophloeos and Myracrodruon urundeuva, active against P. aeruginosa. The bioguided fractionation and the chemical characterization of the fractions by MALDI MS MS showed that the active compounds in the four cases belong to the class of tannins. Complex structures of proanthocyanidins (mainly composed profisetinidin for A. colubrina and prorobinetinidin for C. leptophloeos), and hydrolysable tannins (consisting of gallic acid units in M. urundeuva) were identified. These tannins inhibited biofilm formation of P. aeruginosa through bacteriostatic action, causing membrane damage and excess on the proliferation of bacterial vacuoles while the erythrocyte membrane was preserved. With respect to P. moniliformis, proanthocyanidins riched in prodelphinidin (0.125 mg/mL) were the compounds responsible for the complete inhibition of S. epidermidis biofilm formation, without affecting the viability of the microorganism. As demonstrated by various techniques, the results indicated that both surfaces, of the bacterium (S. epidermidis) and of the tested materials (glass and polystyrene), were spontaneously covered by proanthocyanidins, becoming hydrophilic surfaces. Using spin coating technique, the surface was coated with these proanthocyanidins, making the surface highly hydrophilic. The ability to prevent adherence of S. epidermidis was maintained and the material proved to be compatible with mammalian epithelial cells, indicating the potential usefulness of these natural products as functional agents for coating surfaces. In another approach of this study, the modification of surface properties via plasma discharge using N2/H2 gases mixtures produced, by a quickly and effectively way, polystyrene surfaces able to prevent the adhesion of bacteria highly resistant to antibiotics. Through X-ray spectroscopy, it was found that a nitrogen concentration of 8.8% and the polar component of surface energy greater than 15 mJ/m2 are needed to reduced adhesion by bacteria exhibiting hydrophilic surface (such as Enterobacteriaceae carbapenemase-producing and the MRSA), while hydrophobic strains (exemplified by S. epidermidis) had the capacity to adhere and to form biofilms. The respulsive interactions could explain the anti-adhesive effects obtained in the coating of surfaces by proanthocyanidins as well as in the ionic plasma treatments.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-10-13T14:32:54Z No. of bitstreams: 1 Jose Wilton Pinheiro Junior.pdf: 1486430 bytes, checksum: 24b38026485ee7cc269f6334912b551c (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-13T14:32:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Jose Wilton Pinheiro Junior.pdf: 1486430 bytes, checksum: 24b38026485ee7cc269f6334912b551c (MD5) Previous issue date: 2008-03-07 / The objective of this study was to study the production, hygienicalsanitary and reproduction aspects, and the epidemiology bacterial infectious (brucellosis and clamidofilosis) and parasitic (toxoplasmosis) diseases involved in reproduction disturbs in sheep in the state of Alagoas. Twenty seven properties distributed in twenty three municipalities in the state of Alagoas were studied. To the study of the the production, hygienical-sanitary and reproduction aspects, investigative questionnaires involving questions related to the properties were applied and analyzed. To the anti-Brucella abortus antibodies search the Tamponated Acidified Antigen, Modified Tamponated Acidified Antigen and Complement Fixation Reaction techniques were used. The agreement among the tests used in the Brucella abortus infection diagnosis was verified using the Kappa coefficient. For the study of Brucella ovis infection, the immunodiffusion technique in gelatinous agar was employed. To the anti-Chlamydophila abortus antibodies search the Complement Fixation Reaction technique with a 1:32 cutoff point was used. TheToxoplasma gondii infection diagnosis was done based on the indirect immunoflorescency technique considering the cutoff point of 1:64. To the study of risk factors associated with the Clamydophila abortus and Toxosplama gondii infection were selected variables related to properties characteristics, hygienical-sanitary management and reproduction disturbs. The analysis of the sanitary and socio-economic profile allowed to observe that the sheep creator from Alagoas is an individual with reasonable degree of education, that need information about the nutritional, reproductive and sanitary management and they still suffer the effects of the infectious and parasitic diseases occurrence, highlighting the miscarriage and reproduction disturbs. The utilization of biological techniques of reproduction is still ignorant, mainly assembles a natural in most herds studied. It was not observed positive animals to B. abortus and the agreement among the RB, RBm tests comparing to the FCR test was weak (K = 0.00; 0.00). From an amount of two hundred and seventy nine analyzed samples to B. ovis, it was observed that nine (3.2%) were positive and two hundred and seventy (96.8%) negative, distributed in six herds (37.5%) and in sixmunicipalities (46.2%). It was not possible to observe any significant statistics differences among sex, age, region, property size, creation management, significant association was observed for a historical of the reproduction disturbs (p<0,001). The results referents to the C. abortus shown that 59/274 (21.5%) were positive and 187 (68.3%) negative, noting77.7% of focus infection. The only variable that presented a significant association within the multivariate analysis statistics was the region (p<0.001; OR=3.48; I.C. 1.79 – 6.76). To the T. gondii infection, it was possible to see a significant association among the variables: age (OR=4.01; I.C. 2.03 – 7.94), property size (OR=0.48; I.C. 0.26 – 0.90), semi-intensive creation system (OR=3.17; I.C. 1.24 – 8.13), current water fount (OR=3.13; I.C. – 1.66 – 5.87), and the presence of cats (OR=1.72; I.C. 1.08 – 2.75). Based on the obtained results of the sero-epidemiologic inquiry, the conclusion is that the animals are exposed to the B. ovis, C. abortus e T. gondii infection with different epidemiological meanings in the studied population. Sanitary measures and works in health promotion should be encouraged aiming the prevention and control of the dissemination of these important agents in animal and public health. / Objetivou-se com este trabalho estudar aspectos de produção, higiênicosanitário e reprodutivo, além da epidemiologia de algumas doenças infecciosas bacterianas (brucelose e clamidofilose) e parasitária (toxoplasmose) envolvidas em distúrbios reprodutivos em ovinos no Estado de Alagoas. Foram estudadas 27 propriedades distribuídas em 23 municípios nas três mesorregiões do Estado de Alagoas. Para o estudo dos aspectos produtivos, higiênico-sanitário e reprodutivo, foram aplicados e analisados questionários investigativos, abordando perguntas objetivas relacionadas às propriedades. Para a pesquisa de anticorpos anti-Brucella abortus foram utilizadas as técnicas Antígeno Acidificado Tamponado, Antígeno Acidificado Tamponado Modificado e Reação da Fixação do Complemento. A concordância entre os testes utilizados no diagnóstico da infecção por Brucella abortus foi verificada utilizando-se o coeficiente Kappa. Para o estudo da infecção por Brucella ovis empregou-se a técnica de Imunodifusão em Gel de Agar. Para pesquisa de anticorpos anti-Chlamydophila abortus utilizou-se a técnica deReação da Fixação do Complemento com ponto de corte 1:32. O diagnóstico da infecção por Toxoplasma gondii foi realizado com base na técnica de Imunofluorescência Indireta considerado ponto de corte 1:64. Para o estudo dos fatores de risco associados às infecções por Clamydophila abortus e Toxoplasma gondii foram selecionadas variáveis relacionadas às características das propriedades, manejo higiênico-sanitário e distúrbios reprodutivos. A análise do perfil sócio-econômico e sanitário permitiu observar que o ovinocultor alagoano é um indivíduo com razoável grau de escolaridade, necessita de informações sobre práticas de manejo nutricional, reprodutivo e sanitário e ainda sofrem os efeitos da ocorrência de enfermidades infecto-contagiosas e parasitárias, destacando-se o aborto e outros distúrbios reprodutivos. A utilização das biotécnicas da reprodução ainda é insipiente, predominando a monta natural na maioria dos rebanhos estudados. Não foram observados animais positivos para B. abortus e a concordância entre os testes AAT, AATm frente a RFC foifraca (K = 0,00; 0,00). Das 279 amostras analisadas para B. ovis, observou-se que nove (3,2%) foram positivas e 270 (96,8%) negativas, distribuídas em seis rebanhos (37,5%) e em seis municípios (46,2%). Não foram observadas diferenças estatísticas significativas entre sexo, idade, região, tamanho da propriedade, sistema de criação, observou-se associação significativa para histórico de distúrbios reprodutivo(p<0,001). Os resultados referentes à infecção por C. abortus demonstraram que 59/274 (21,5%) animais forampositivos e 187 (68,3%) negativos, constatando-se 77,7% de focos da infecção. A única variável que apresentou associação significativa na análise multivariada foi a região (p<0,001; OR=3,48; I.C. 1,79 – 6,76). Para a infecção por T. gondii, observou-se prevalência geral de 32,9% e o número de focos de 100%. Na análise estatística multivariada, observou-se associação significativa para as variáveis: idade (OR=4,01; I.C. 2,03 – 7,94), tamanho da propriedade (OR=0,48; I.C. 0,26 – 0,90), sistema de criação semiintensivo (OR=3,17; I.C. 1,24 – 8,13), fonte de água corrente (OR=3,13; I.C. – 1,66 – 5,87) e presença de gatos (OR=1,72; I.C. 1,08 – 2,75). Com base nos resultados obtidos nos inquéritos soro-epidemiológicos, conclui-se que os animais estão expostos a infecção por B. ovis, C. abortus e T. gondii com significados epidemiológicos distintos na população estudada. Medidas sanitárias e trabalhos de promoção em saúde devem ser incentivados com objetivo de prevenir e controlar a disseminação destes agentes importantes na saúde animal e coletiva.

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2016-10-19T14:01:53Z No. of bitstreams: 1 Liliana Andrea dos Santos.pdf: 813903 bytes, checksum: 14125d7515e4b40b82521f950f227906 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-19T14:01:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Liliana Andrea dos Santos.pdf: 813903 bytes, checksum: 14125d7515e4b40b82521f950f227906 (MD5) Previous issue date: 2015-07-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The composting process is a microbial biotransformation used as an alternative for the adequate destination of the crop residues. It is a simple, economic and efficient technique for the treatment and stabilization of these residues and minimizes the environmental impacts in soil, air and water besides eliminates plant and human pathogens. The goals of this work were to investigate the survival of a mutant of phytobacteria Ralstonia pseudosolanacearum (CRMRS74Rif) in tomato crop residues during composting process and analyze the quality of the organic compound in relation to physical, chemical and microbiological variables. Three composting piles were made of tomato and napier grass crop residues plus ovine manure. Then, nine mesh bags with 10 g of infected tomato plants were placed in each pile, three at each depth of 20, 40 and 60 cm. Piles were turned over after 10, 20 and 30 days when evaluations of bacterial survival were made. At the end of the composting process, we quantified microbial population, antagonism against R. pseudosolanacearum, total phenolic content and compost quality. At the first evaluation (10 days) CRMRS74Rif were not recovered in culture medium, indicating that it was already eliminated of the infected material. Total bacteria were present in high populations in the compound, ranging from 7.0 x 1012 to 2.0 x 1016 CFU/g of compound, and the fluorescent Pseudomonas were the most frequent. Sixty-two isolates showed antagonistic activity against R. pseudosolanacearum CRMRS74Rif, detected by the inhibition halo formation. However, only 32 isolates maintained the antagonism in a second in vitro assay. The fungal population ranged from 3.2 x 102 to 1.2 x 103 CFU/g of compound. Based on morphological structures 40 isolates were identified at genus level: Aspergillus spp., Cladosporium spp., Curvularia spp., Fusarium spp., Paecilomyces spp., Trichoderma spp., and the Oomycete Pythium sp. Among these isolates, nine produced toxic metabolites and inhibited the pathogen growth with halos ranging from 15 to 23 mm. The total population of actinomycetes in compound ranged from 3.8 to 9.5 x 104 CFU/g of compound and based on cultural characteristics 33 isolates were selected for the antagonistic tests. Among them, four produced toxic metabolites against R. pseudosolanacearum CRMRS74Rif with halos ranging from 23 to 33 mm. Total phenolic content found in composting pile averaged 0.0065%. The high temperatures generated in the piles during the termophylic phase (media 50oC), the presence of antagonistic microbial populations and the phenolic compounds might be the cause of the quick elimination of R. pseudosolanacearum from the compound. The results of the physico-chemical and microbiological analysis attended the established limits of the current Brazilian legislation for using and comercialization of an organic compound, indicating that the obtained product has good quality. / A compostagem é um processo microbiano de biotransformação, considerada uma alternativa para a destinação adequada dos resíduos culturais, sendo uma técnica simples, viável economicamente e eficiente no tratamento e estabilização dos resíduos, minimizando os impactos ambientais no solo, no ar e na água, além de eliminar micro-organismos patogênicos aos vegetais e aos seres humanos. Os objetivos da pesquisa foram investigar a sobrevivência de um mutante da fitobactéria Ralstonia pseudosolanacearum (CRMRS74Rif) em restos culturais de tomateiro durante a compostagem e verificar a qualidade do composto orgânico em relação a variáveis físicas, químicas e microbiológicas. Três pilhas de compostagem foram constituídas de restos culturais de tomateiro e capim elefante, e esterco de ovino. Nove bolsas contendo 10 g de tecidos de tomateiro infectado foram depositadas em cada pilha, três em cada profundidade (20, 40 e 60 cm). Os revolvimentos das pilhas foram feitos aos 10, 20 e 30 dias de compostagem, quando então foram realizadas as avaliações da sobrevivência da fitobactéria. Ao final do processo (30 dias) foram quantificados os micro-organismos presente no composto e o antagonismo a R. pseudosolanacearum, os compostos fenólicos totais e variáveis da qualidade do composto. Na primeira avaliação realizada aos 10 dias o mutante não foi recuperado em meio de cultura, indicando que já havia sido eliminado do material infectado. As bactérias totais foram quantificadas em elevadas populações no composto, variando de 7,0 x 1012 a 2,0 x 1016 UFC/g de composto, com predominância de Pseudomonas do grupo fluorescente. Sessenta e dois isolados apresentaram atividade antagônica a R. pseudosolanacearum CRMRS74Rif, detectada através da formação de halo de inibição do crescimento bacteriano. No entanto, apenas 32 isolados mantiveram o antagonismo em novo teste realizado in vitro. A população de fungos variou de 3,2 x 102 a 1,2 x 103 UFC/g de composto. Com base nas estruturas morfológicas, foram identificados 40 isolados ao nível de gênero: Aspergillus spp., Cladosporium spp., Curvularia spp., Fusarium spp., Paecilomyces spp. e Trichoderma spp., e também o Oomiceto Pythium sp., e destes, nove produziram metabólitos tóxicos e inibiram o crescimento bacteriano, com halos variando de 15 a 23 mm. A população total de actinomicetos no composto variou de 3,8 a 9,5 x 104 UFC/g de composto, e com base em características culturais foram selecionados 33 isolados para teste de antagonismo, dois quais, quatro produziram metabólitos tóxicos contra R. pseudosolanacearum CRMRS74Rif, com halos variando de 23 a 33 mm. Compostos fenólicos totais foram encontrados nas pilhas de compostagem em uma concentração média de 0,0065%. As altas temperaturas geradas nas pilhas durante a fase termofílica (em média 50oC), a presença de micro-organismos antagonistas e compostos fenólicos foram responsáveis pela rápida eliminação de R. pseudosolanacearum do composto. Os resultados das análises físico-químicas e microbiológicas atenderam aos limites estabelecidos pela legislação vigente para uso e comercialização de composto orgânico, indicando que o composto obtido é de boa qualidade.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-11-03T12:56:44Z No. of bitstreams: 1 Romulo Menna Barreto Valenca.pdf: 688661 bytes, checksum: d80c675dd68a0dfbf5ff078ecc666613 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-03T12:56:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Romulo Menna Barreto Valenca.pdf: 688661 bytes, checksum: d80c675dd68a0dfbf5ff078ecc666613 (MD5) Previous issue date: 2009-10-05 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The objective of this study was to determine the prevalence and identify the risk factors associated with infection by Leptospira spp. in commercial pig farms in the state of Alagoas, Brazil. To compose the study, were used 342 pigs (312 sows and 30 boars) from at seven swine herds distributed in five districts of the state of Alagoas. The serological diagnosis of infection was done by Microscopic Agglutination Test (SAM). The risk factors analysis was performed by the application of research questionnaires, consisting of objective questions relating to the designer, the general characteristics of the property, the production management, and reproductive health. Detected a prevalence of 16.10% (55/352) of pigs positive. The risk factors associated were: The not perform quarantine (p = 0.003, OR = 5.43, CI = 1.79 -16.41) and artificial insemination utilization (p = 0.023, OR = 3.38, CI = 1.18 - 9, 66). Was foundsignificant association of sows infection with the increased number of stillborn and mummified, and with the increase frequency of estrus recurrence and increased the numbers of days from weaning to service of seropositive sows. It is concluded that infection with Leptospira spp. is disseminated in commercial pig farms in the state of Alagoas, favoring the reproductive failures and decrease of zootechnical performance. The risk factors identified in this study are facilitators in the dissemination of infection and should be adjusted to control the disease in the herds studied. / Objetivou-se com este estudo calcular a prevalência e identificar os fatores de risco associados à infecção por Leptospira spp. em suínos criados em granjas tecnificadas no Estado de Alagoas, Brasil. Para compor a amostra do estudo de prevalência foram utilizados 342 suínos, sendo 312 matrizes e 30 varrões, oriundos de sete granjas de ciclo completo e distribuídas em cinco municípios do Estado de Alagoas. O diagnóstico sorológico da infecção foi realizado pela técnica de Soroaglutinação Microscópica (SAM). A análise dos fatores de risco foi realizada por meio da aplicação de questionários constituídos por perguntas objetivas referentes ao criador, às características gerais da propriedade, ao manejo produtivo, reprodutivo e sanitário. Obteve-se uma prevalência de 16,10% (55/342) de suínos soropositivos. Os fatores associados foram: não realização de quarentena (p = 0,003; OR = 5,43; IC = 1,79 – 16,41) e a utilização da inseminação artificial (p = 0,023; OR = 3,38; IC = 1,18 – 9,66). Detectou-se associação entre a infecção dasmatrizes e o aumento do número de natimortos e mumificados, assim como com a maior freqüência de repetição de cio e aumento do intervalo desmama/estro nas matrizes soropositivas. Conclui-se que a infecção por Leptospira spp. encontra-se disseminada nas granjas suinícolas tecnificadas no Estado de Alagoas e contribui com a ocorrência de falhas reprodutivas e queda nos índices zootécnicos nessas propriedades. Os fatores de risco identificados nesse estudo são facilitadores na disseminação do agente e devem ser corrigidos para controlar a doença nos rebanhos estudados.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2016-11-29T13:11:30Z No. of bitstreams: 1 Meridiana Araujo Goncalves Lima.pdf: 1167108 bytes, checksum: 93203a05064b2dbacc9e7b72b0813a60 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-29T13:11:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Meridiana Araujo Goncalves Lima.pdf: 1167108 bytes, checksum: 93203a05064b2dbacc9e7b72b0813a60 (MD5) Previous issue date: 2016-02-29 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Bacterial wilt caused by Ralstonia solanacearum (Rs) is one of the most important tomato diseases in Brazil. The effectiveness of ginger and melaleuca at 1%, rosemary at 0.50% and bergamot, lemongrass, clove, citronella, eucalyptus, sweet orange, palmrose and sage at 0.14% (v/v) essential oils was evaluated in vitro and via biofumigation of the soil infested with Rs. It was analyzed the in vitro growth; the population of Rs in soil before and seven days after biofumigation; and the components of resistance to disease and the growth of tomato plants cv. TY 2006, 15 days after transplanting. The clove oil was fractioned and its major chemical component was compared with the essencial oil in relation to the variables already cited. The in vitro growth of Rs was reduced by 100% with rosemary, lemongrass, citronella, clove, eucalyptus and palmrose oils. The population of Rs in soil was reduced by rosemary, clove, lemongrass, ginger, melaleuca and palmrose oils, with emphases for clove oil, which reduced Rs populations by 42.3%. The biofumigation with clove oil reduced the disease incidence, bacterial wilt index (BWI), and area under the disease curve progress (AUDPC) by 90.2, 97 and 98.8%, respectively and elevated the latent period by 10 days compared as the control with tween 20. The eugenol was the major constituent (87%) of the clove oil showing the same reduction effects of the components of disease resistance. The clove oil and the eugenol acetate did not reduce the height, and the fresh and dry biomass of plants. In asecond experiment, it was also evaluated the effect of silicon (Si) supplementation on the production of tomato transplants cultivars (cvs.) Santa Clara, TY 2006 and Yoshimatsu 4-11. The transplants were produced in substrate without Si (-Si) or with 3 g of calcium silicate de calcium/kg of substrate (+Si) and transplanted to Rs infected soil. After 15 days of growing it was evaluated the resistance components; the plant growth by measuring height, and the fresh and dry biomass of plants; the chlorophyll index; the Si content in plant tissues; the Rs population in stem base; and the enzymatic activity of phenylalanine amonia-lyases (PAL), β-1,3 glucanases (GLU) and peroxidases (POX). The Si supplementation on cvs. Santa Clara and TY 2006 reduced severity (33.2 and 42%), AUDPC (23.1 and 19.2%) and BWI (21.7 and 10%), respectively. The Si supplementation in the substrate did not affect plant growth, the chlorophyll index; the Si content in plant tissues and the Rs population in stem. Higher activities of PAL and GLU were evidenced on +Si plants. Therefore, the soil biofumigation with clove oil at 0.14% and the production of tomato transplants in substrate with Si have the potential to be integrated in the bacterial wilt management. / A murcha bacteriana causada por Ralstonia solanacearum (Rs) é uma das doenças economicamente mais importantes em tomateiro. Os óleos essenciais de gengibre e melaleuca a 1%, alecrim a 0,50% e bergamota, capim limão, cravo, citronela, eucalipto, laranja doce palmarosa e sálvia a 0,14% (v/v) foram testados in vitro e pela biofumigação do solo infestado com Rs. Foram avaliados o crescimento in vitro, a população de Rs no solo antes e sete dias depois da biofumigação, os componentes de resistência à doença e o crescimento das plantas em tomateiros da cv. TY 2006, aos 15 dias após o transplantio. O óleo de cravo foi fracionado e seu constituinte químico majoritário foi comparado com o óleo essencial quanto a redução da doença e demais variáveis citadas anteriormente. No ensaio in vitro, os óleos de alecrim, capim limão, citronela, cravo, eucalipto e palmarosa inibiram completamente o crescimento de Rs. A população de Rs no solo foi reduzida pelos óleos de alecrim, cravo, capim limão, gengibre, melaleuca e palmarosa, destacando-se o cravo com redução de 42,3%. A biofumigação com o óleo de cravo reduziu a incidência, o índice de murcha bacteriana (IMB) e a área abaixo da curva de progresso da doença (AACPD) em 90,2; 97 e 98,8%, respectivamente e elevou o período de latência - PL50 em 10 dias com relação a testemunha com Tween 20. Este óleo apresentou o eugenol como constituinte majoritário (87%), com os mesmos efeitos na redução dos componentes de resistência da doença. O óleo de cravo e o acetato de eugenol não reduziram a altura, biomassa fresca e seca das plantas. Em um segundo experimento, foi avaliado o efeito da suplementação do silício (Si) na produção de mudas de tomateiro das cultivares (cvs.) Santa Clara, TY 2006 e Yoshimatsu 4-11. As mudas foram produzidas em substrato sem silício (-Si) ou com 3 g de silicato de cálcio/kg de substrato (+Si) e transplantadas para solo com Rs. Aos 15 dias de cultivo, foram avaliados os componentes de resistência à doença; o crescimento das plantas, medindo-se a altura e o peso da biomassa fresca e seca, o índice reativo de clorofila; o conteúdo de Si na planta; a população de Rs no caule; e as atividades enzimáticas de fenilalanina amônia-liases (FAL), β-1,3 glucanases (GLU) e peroxidases (POX). A suplementação com Si nas cvs. Santa Clara e TY 2006 promoveu redução da doença avaliada pela severidade (33,2 e 42%), AACPD (23,1 e 19,2%) e IMB (21,7 e 10%), respectivamente. A suplementação com Si no substrato não afetou de forma significativa o crescimento das plantas, o índice reativo de clorofila, o acúmulo de Si nos tecidos das plantas e a população de Rs nos tecidos do caule. Foi evidenciada maior atividade enzimática de FAL e GLU nas plantas tratadas (+Si). Desta forma, a biofumigação do solo com o óleo de cravo a 0,14 % e a produção de mudas em substrato tratado com Si têm potencial como medidas a serem utilizadas no manejo da murcha bacteriana em tomateiro.

Orientador: Valéria Maia Merzel / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-16T14:04:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_CynthiaCanedoda_D.pdf: 9736339 bytes, checksum: 506af9b64177978ae4c3c5c0588e1b28 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Os efluentes de refinarias contêm vários compostos tóxicos, que podem provocar sérios danos aos seres vivos se não tratados previamente. Os fenóis são poluentes encontrados em efluentes de diversas indústrias, incluindo as refinarias de petróleo, e são conhecidos como um dos compostos mais tóxicos encontrados no meio ambiente. Portanto, há necessidade constante de buscar formas de remover ou reduzir a presença destas substâncias nos efluentes. Este trabalho teve como objetivos analisar e explorar a diversidade microbiana presente em lodo de sistemas de tratamento de efluentes de refinarias petróleo, através da construção de bibliotecas de genes RNAr 16S e bibliotecas metagenômicas em vetores do tipo fosmídeo. Análises filogenéticas das bibliotecas de genes RNAr 16S e metagenômicas mostraram uma comunidade bacteriana bastante diversa, com predominância do Filo Proteobacteria, seguido de Actinobacteria, Planctomycetes, Verrucomicrobia, Cloroflexi e Bacteroidetes. Dentre os gêneros mais abundantes, se destacaram Thauera, Comamonas, Diaphorobacter e Thiobacillus. Espécies pertencentes a estes gêneros realizam o processo de desnitrificação e espécies de Thauera e Comamonas estão relacionadas com a degradação de compostos aromáticos. A grande diversidade bacteriana refletiu em uma ampla diversidade metabólica, sendo obtido um grande número de resultados para genes relacionados com processos biológicos importantes para o tratamento de efluentes, como o metabolismo de nitrogênio, enxofre, fósforo, além de genes relacionados com o catabolismo de compostos aromáticos, tais como benzoato, bifenil e fenol. Adicionalmente, foram observadas possíveis novas sequências para os genes que codificam enzimas-chaves responsáveis pela meta-clivagem de fenol e outros aromáticos, como fenol hidroxilase e catecol 2,3-dioxigenase. No presente estudo foram também realizadas triagens funcionais dos 13.200 clones para enzimas hidrolíticas, com detecção de dois hits para esterase e um para lipase. Este trabalho mostrou que a bioprospecção genômica microbiana é uma estratégia inovadora na área de tratamento de efluentes, que pode contribuir para o conhecimento da microbiota responsável pela degradação dos poluentes. / Abstract: Refinery wastewater has several toxic compounds that may cause serious damage to life. Phenolic compounds are found in several industrial effluents, including petroleum refinery, and represent a significant environmental toxicity hazard. Therefore, there is a constant need to search for new technologies able to remove and reduce the presence of these substances in wastewater. This study aimed to analyze and explore the microbial diversity present in sludge from refinery wastewater treatment systems through the construction of 16S rRNA genes libraries and metagenomic libraries in fosmid vectors. Sequencing and phylogenetic analyses of libraries showed a highly diverse bacterial community, with predominance of the Proteobacteria phylum, followed by Actinobacteria, Planctomycetes, Verrucomicrobia, Cloroflexi and Bacteroidetes. The most abundant genera were Thauera, Comamonas, Diaphorobacter and Thiobacillus. Species belonging to these genera are facultative anaerobic and may be involved with the denitrification process, and Thauera and Comamonas species are related with degradation of aromatic compounds. This bacterial diversity reflected in a broad metabolic diversity. Analysis of the metagenomic data derived from pyrosequencing revealed a lot of hits related with biological processes of great relevance for wastewater treatment, such as genes for nitrogen, sulfur and phosphorus metabolism, in addition to genes related to the catabolism of aromatic compounds, such as benzoate, biphenyl and phenol. Additionally, sequences representing possible new genes encoding for key-enzymes responsible for the meta-cleavage of phenol and other aromatic compounds, such as phenol hydroxylase and cathecol 2,3-dioxygenase, were found in the fosmid libraries. Finally, high-throughput functional screening of 13,200 clones for hydrolytic enzymes yielded two positive hits for lipase and one for esterase. The data gathered together in this work showed that microbial genomic prospection is an innovative strategy for the wastewater treatment system that may undoubtedly contribute to the knowledge of microorganisms responsible by pollutant degradation. / Doutorado / Genetica de Microorganismos / Doutor em Genetica e Biologia Molecular

Orientador: Marcelo Lancellotti / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Insituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-17T17:20:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pereira_RafaellaFabianaCarneiro_M.pdf: 1664553 bytes, checksum: 346b9075da4d999b30fc615fe83733fd (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: Neisseria meningitdis, ou meningococo, é uma bactéria comensal da nasofaringe humana. Contudo, algumas linhagens meningocócicas ocasionalmente ultrapassam a mucosa respiratória e a barreira hematoencefálica e causam enfermidades como meningite e septicemia. Como a espécie humana é o único hospedeiro natural para esse patógeno, estudos in vitro com modelos celulares são uma ferramenta importante para a análise da interação entre o meningococo e seu hospedeiro. Este trabalho teve por objetivo avaliar a influência de diferentes linhagens de N. meningitidis na adesão celular, morfologia e expressão de quimiocinas inflamatórias em culturas in vitro de células humanas. Tais parâmetros também foram avaliados em um sistema in vitro de co-cultura celular entre células de origem nervosa e endotelial a fim de mimetizar a barrreira hematoencefálica humana. Os resultados obtidos indicam que a adesão de diferentes linhagens bacterianas em células humanas de sítios específicos do processo infeccioso do meningococo, como Hep-2 (laringe), NCIH460 (pulmão), Hec1b (endotelial) e NG97 (neuroglia) foi capaz de mimetizar o processo fisiopatológico deste microrganismo. Em condições in vitro, células de origem nervosa mostraram-se mais suscetíveis à infecção nos parâmetros avaliados como uma elevada expressão de TNF-?, quimiocina característica em infecções meningocócicas. A linhagem B4 destacou-se entre as linhagens meningocócicas estudadas, apresentando elevados percentuais de adesão em células humanas com valor máximo de adesão em NG97. Células HEp-2 apresentaram poucas alterações morfológicas significativas frente à infecção por N. meningitidis. Tais resultados podem estar associados ao fato do trato respiratório superior ser o habitat natural do meningococo, no qual a interação entre este patógeno e as células hospedeiras seja comensal e não-invasiva. O modelo mimético de barreira hematoencefálica, realizado em transwell, indicou comunicação entre as células que o compõem e uma maior expressão dos níveis de quimiocinas inflamatórias quando comparada à infecção desta bactéria por cada uma das células estudadas isoladamente. Tal modelo foi capaz de mimetizar a barreira hematoencefálica, fato o que torna possível sua aplicação em estudos da passagem de fármacos e outros patógenos por essa barreira. / Abstract: Neisseria meningitidis,or meningococci, is a commensal bacterium of the human nasopharynx. However, occasionally some meningococcal strains can cross the respiratory mucosa and the blood-brain barrier and cause life-threatening diseases such as meningitis and septicaemia. Since the human species is the only natural host for this pathogen, in vitro studies with cellular models are an important tool for the analysis of the meningococci and its host. The aim of this present work was to value the influence of several strains of N. meningitidis in cellular adhesion, morphology and inflammatory chemokines expression in human cells cultivated in vitro. These parameters were also evaluated in a co-cultivated cellular system with glial and endothelial cells aiming mimicking the human blood brain barrier. The results indicate that the adhesion of different bacterial strains from specific sites of infectious process of meningococci as Hep-2 (larynges), NCIH460 (lung), Hec1b (endothelial) and NG97 (glial cells) was capable of mimicking, partially, the pathophysiology of this microorganism. In in vitro conditions, cells from nervous origin showed more susceptibility to infection then others in this evaluated parameters such as a high TNF-? expression, a common chemokine in meningococcals diseases. The B4 strain distinguished from the others by presenting high rates of adhesion in human cells with maximum value on NG97. HEp-2 cells showed few expressives morphologic alterations after meningococcal infection. These results may be associated with the fact that the upper human respiratory tract is the meningoccci natural habitat, in which the interaction between this pathogen and host cells are commensal and not-invasive.The mimicking blood-brain barrier model, performed in transweel, has demonstrated some communication between the cells and greater expression of inflammatory chemokines when compared to the infection in isolated cells. This model was capable of mimicing the blood-brain barrier, which makes its application possible in studies of drugs and others pathogens who might crossover though this barrier. / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-02-15T16:46:49Z No. of bitstreams: 1 lauramariaandradedeoliveira.pdf: 1852262 bytes, checksum: 703240e1ddc07fe9a86ba010f803bbcc (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-02-26T12:26:34Z (GMT) No. of bitstreams: 1 lauramariaandradedeoliveira.pdf: 1852262 bytes, checksum: 703240e1ddc07fe9a86ba010f803bbcc (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-26T12:26:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 lauramariaandradedeoliveira.pdf: 1852262 bytes, checksum: 703240e1ddc07fe9a86ba010f803bbcc (MD5) Previous issue date: 2014-02-17 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A microbiota vaginal é considerada um ambiente complexo, onde várias espécies bacterianas coexistem e desenvolvem complexas relações. Vaginose bacteriana (VB) é uma síndrome caracterizada por uma depleção de espécies de Lactobacillus predominantes na microbiota vaginal saudável e um aumento de outras espécies, principalmente Gardnerella vaginalis e Atopobium vaginae. O objetivo desse trabalho foi avaliar a microbiota vaginal de pacientes com e sem VB, atendidas no serviço de ginecologia do SUS e da rede privada de Juiz de Fora/MG, quanto a sua diversidade bacteriana e quantificar os principais gêneros e espécies envolvidos na patogênese da doença. Secreção vaginal de pacientes com e sem VB foram coletadas e transportadas para o laboratório, em meio específico. Lâminas foram coradas pelo método de Gram, a fim de estabelecer o escore de Nugent para avaliação das pacientes entre saudáveis e doentes. O DNA total das secreções foi extraído e PCR quantitativa (qPCR) em tempo real foi realizada, utilizando primers específicos para Lactobacillus spp., G. vaginalis, A. vaginae, Mobiluncus spp. e Mycoplasma hominis. A partir do DNA total extraído também foi realizada PCR convencional utilizando primers específicos para Domínio Bacteria e os filos Actinobacteria e Firmicutes, e em seguida foi realizada técnica de Eletroforese em Gel com Gradiente Desnaturante (DGGE). Foi realizada também a técnica de Hibridização Fluorescente in situ (FISH), para identificação e quantificação de bactérias pertencentes aos filos Actinobacteria, Firmicutes, α-Proteobactéria, β-Proteobactéria e γ-Proteobactéria. Entre os grupos saudável e doente (VB) foi observada diferença estatisticamente significativa na quantificação de Lactobacillus spp., G. vaginalis, A. vaginae, Mobiluncus spp. e M. hominis. Lactobacillus spp. esteve presente em maior concentração no grupo saudável enquanto que G. vaginalis, A. vaginae, Mobiluncus spp. e M. hominis estiveram presentes em maior concentração no grupo doente (VB). De um modo geral, a concentração de G. vaginalis e Mobiluncus spp. elevou-se com o aumento do escore de Nugent; em contrapartida, a concentração de Lactobacillus spp., decresceu com o aumento do escore de Nugent. A análise de agrupamento mostrou que, com algumas exceções, os perfis de pacientes apresentando o mesmo status de saúde tenderam a se agrupar juntos, porém em clusters separados e que os agrupamentos parecem ser regidos pelo status de saúde das pacientes. As variáveis riqueza e diversidade revelaram perfis complexos entre as amostras e a análise de componente principal (PCA) mostrou que as amostras dentro do grupo VB tenderam a se agrupar na análise dos filos Actinobacteria e Firmicutes. Não foi observada diferença estatisticamente significativa entre os grupos saudável e doente (VB) em relação a quantificação dos filos Actinobacteria, Firmicutes, α-Proteobactéria, β-Proteobactéria e γ-Proteobactéria. O uso combinado das técnicas DGGE, FISH e PCR quantitativa em tempo real representam uma estratégia bem sucedida para o monitoramento qualitativo e quantitativo de alterações na microbiota vaginal relacionadas a doenças infecciosas, como a vaginose bacteriana. Tal fato pode contribuir tanto para o desenvolvimento de ferramentas que auxiliem no diagnóstico de mulheres acometidas pela VB, especialmente as pacientes assintomáticas, e também pode contribuir com a melhoria e otimização dos regimes terapêuticos adotados na prática clínica para o tratamento da VB. / The vaginal microbiota is considered a complex environment where several bacterial species coexist and develop complex relationships. Bacterial vaginosis (BV) is a syndrome characterized by a depletion of Lactobacillus species prevalent in healthy vaginal microbiota and an increase in other species, especially Gardnerella vaginalis and Atopobium vaginae. The aim of this study was to evaluate the vaginal microbiota of patients with and without BV, attended at the gynecology service of the SUS and the private service of health of Juiz de Fora/MG, as its bacterial diversity and quantify the major genera and species involved in the disease pathogenesis. Vaginal secretions of patients with and without BV were collected and transported to the laboratory in a specific medium. Slides were stained by the Gram method in order to establish the Nugent Score for evaluation of patients between healthy and sick. The total DNA of secretions was extracted and Real-time Polymerase Chain Reaction (qPCR) was performed using specific primers for Lactobacillus spp., G. vaginalis, A. vaginae, Mobiluncus spp. and Mycoplasma hominis. From the total DNA extracted from conventional PCR also was performed using specific primers to Bacteria domain and Actinobacteria and Firmicutes phyla, and then Denaturing Gradient Gel Electrophoresis (DGGE) was performed. The identification and quantification of bacteria belonging to the phyla Actinobacteria, Firmicutes, α-Proteobacteria, β-Proteobacteria and γ-Proteobacteria were performed by the technique of Fluorescence in situ Hybridization (FISH). Among the healthy and diseased (VB) groups statistically significant difference was observed in the quantification of Lactobacillus spp., G. vaginalis, A. vaginae, Mobiluncus spp. and M. hominis. Lactobacillus spp. was present in higher concentration in the healthy group while G. vaginalis, A. vaginae, Mobiluncus spp. and M. hominis were present in higher concentrations in the patient group (VB). In general, the concentration of G. vaginalis, and Mobiluncus spp. increased with the increment in the Nugent Score; however, the concentration of Lactobacillus spp decreased with the raise of the Nugent score. The cluster analyses showed that, with few exceptions, the profiles from patients with the same health status grouped together in separate clusters and there was a distinct separation based on the health status of the patients. The richness and diversity showed complex profiles and principal component analysis (PCA) showed that the samples within the VB group grouped together on the analysis of the phyla Firmicutes and Actinobacteria. No statistically significant difference was observed between healthy and diseased groups (VB) for quantification of the phyla Actinobacteria, Firmicutes, α-Proteobacteria, β-Proteobacteria and γ-Proteobacteria. The combined use of techniques DGGE, FISH and real-time quantitative PCR represent a successful strategy for qualitative and quantitative monitoring of changes in vaginal microbiota related to infectious diseases such as Bacterial Vaginosis.This may contribute to both the development of tools that aid in the diagnosis of women affected by BV, especially asymptomatic patients, and may also contribute to the improvement and optimization of therapeutic regimes adopted in clinical practice for the treatment of BV.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / A otite resulta da inflamaÃÃo do conduto auditivo e representa 8-15% dos casos na prÃtica veterinÃria. Com o objetivo de delinear e comparar o perfil de isolamento de microrganismos a partir dos ouvidos mÃdio e externo de cÃes com otite foi realizado este estudo. No perÃodo de agosto/2003 a marÃo/2004 foram analisados 64 cÃes com otite externa e mÃdia associados e 50 cÃes com conduto auditivo hÃgido. A coleta de amostras foi realizada no Centro de Controle de Zoonoses de Fortaleza-CE e a anÃlise microbiolÃgica no Setor de Microbiologia do Depto. de Patologia e Medicina Legal/UFC. As amostras do ouvido externo foram coletadas com auxÃlio de swab estÃril eas de ouvido mÃdio atravÃs da tÃcnica de osteotomia da bula timpÃnica. A cultura e identificaÃÃo de microrganismos foram realizadas segundo metodologia estabelecida e os testes de susceptibilidade atravÃs do mÃtodo de difusÃo em Ãgar gel (NCCLS). Em cÃes otopatas as alteraÃÃes mais frequentes foram: escoriaÃÃes no pavilhÃo auricular (72%), otalgia (12%) e alteraÃÃo no posicionamento do pavilhÃo (12%). Em 62% dos animais a membrana timpÃnica se encontrava Ãntegra, embora mostrasse alguma alteraÃÃo estrutural. A cultura foi positiva em 48% das amostras de ouvido mÃdio e os agentes isolados com maior frequÃncia foram: Estafilococos coagulase-positiva (62,5%), bacilos Gram-negativos nÃo fermentadores (10%), enterobactÃrias (5%) e Candida albicans (5%). Foi verificada diferenÃa no nÃmero e variedade de espÃcies isoladas do ouvido externo quando comparado ao ouvido mÃdio, onde predominaram: Bacillus sp. (27,1%), M. pachydermatis (23,4%) e S. intermedius (21,8%). Os agentes mais isolados nos ouvidos externos de cÃes com otite bilateral foram: Bacillus sp. (27,9% e 31%), M. pachydermatis (25,9% e 24%), S. intermedius (23,8% e 24,6%) e EnterobactÃrias (6% e 6,1%). Observou-se diferenÃa significativa (p<0,0001) na forma como os agentes se associam, revelando a individualidade de cada conduto auditivo nesses quadros. A presenÃa de bactÃrias anaerÃbias estritas nÃo foi observada. Cepas de S. intermedius (n=83) mostraram resistÃncia intermediÃria à maioria dos antimicrobianos testados e altos nÃveis de resistÃncia a: penicilina (36,1%), ampicilina (27,7%), tetraciclina (27,7%), eritromicina (14,5%) e clindamicina (12%). Os resultados obtidos descrevem a variedade de agentes bacterianos e fÃngicos associados aos quadros de otite canina e sugerem a necessidade de se adotar procedimentos sistemÃticos e direcionados para o diagnÃstico e tratamento de otopatias em cÃes. / Otitis results from auricular inflammation and represents 8-15% of all cases received in the veterinarian practices. This study was done to outline and compare the isolation profile in external and middle ears from dogs with otitis. Between August/2003 and March/2004, 64 dogs with both otitis externa and media and 50 dogs with bilateral otitis externa were studied. Fifty dogs with healthy ears were used as control group. The collection was done ate the Zoonosis Control Center in Fortaleza-CE and the microbiological analysis at the Microbiological Center - Department of Pathology and Legal Medicine-UFC. Samples from the external ears were collected with sterile swabs and the ones from the middle ears by osteotomy of the tympanic bulla. The microrganisms were cultured and identified according to methods previously described and susceptibility tested by agar diffusion method (NCCLS). In otitic dogs the most frequent alterations were: lesions of the pinna (72%), local pain (12%) and alteration of the pinna position (12%). Sixty-two per cent of the dogs showed entire tympanic membrane with some structural alteration. Microbiogical growth was seen in 48% of the samples fromdogss with otitis media, and the most frequent isolates were: Estafilococos positive-coagulase (62.5%), non-fermentative Gram-negative (10%), Enterobacteriaceae (5%) and Candida albicans (5%). It was observed that there was an increased number and variety of species isolated in external ears comparaed to middle ears. In samples from external ears, the following predominated: Bacillus sp. (27.1%), M. pachydermatis (23.4%) e S. intermedius (21.8%). The most frequent species isolated in dogs with bilateral otitis externa were: Bacillus sp. (27.9% e 31%), M. pachydermatis (25.9% e 24%), S. intermedius (23.8% e 24.6%) e EnterobactÃrias (6% e 6.1%). There was a significative difference (p<0.0001) in the way the isolates were associated, which showed the individuality from each ear in bilateral otitis externa. In this study, no anaerobic microrganisms were isolated. S. intermedius strains (n=83) showed intermediate resistance to most of the cntimicrobials tested and high resistance to penicillin (36.1%), ampicillin (27.7%), tetracyclin (27.7%), erythromycin (14.5%) and clindamycin (12.0%). These results describe tha variety of bacterial and fungal isolates associated with canine otitis and reveal the need to adopt systematic procedures for the diagnosis and treatment of dogs with otitis.