Made available in DSpace on 2016-06-02T19:23:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissGCS.pdf: 483128 bytes, checksum: f89fd5c8f1141c0a1005cce46caa511c (MD5) Previous issue date: 2005-06-06 / Behavioral sensitization is a progressive and enduring enhancement of the motor stimulant effects of psychostimulants and other drugs of abuse, elicited by repeated administration of these drugs. This phenomenon has been extensively studied in experimental animals and has been implicated as a key component in drug addiction. Nicotine and psychostimulants are often abused in combination. The aim of the present study was to examine the cross-sensitization between nicotine and amphetamine in rats exposed to repeated treatment with the drugs during adolescence. We evaluated the effects of the treatment with nicotine (0.4 mg/kg; s.c.) or amphetamine (5.0 mg/kg, i.p.) from postnatal day (P) 28 P34 on amphetamine- (1.0, 2.5, 5.0 mg/kg, i.p.) or nicotine induced locomotor activity 3 (P37) or 10 days (P44) after drug treatment ended. Further, the effects of amphetamine or nicotine were examined 36 days (P70) after nicotine or amphetamine treatments to determine whether the effects of drug exposure during periadolescence persisted into adulthood. Adolescent animals pretreated with amphetamine were sensitized to the locomotor-activating effects of nicotine. Moreover, the pretreatment with nicotine during adolescence increased locomotor activity induced by 5.0 mg/kg of amphetamine. Although adult rats are less sensitive to nicotine, this drug significantly increased the locomotor activity in adult rats that were pretreated with amphetamine during adolescence. In addition, in adult rats, the pretreatment with nicotine during adolescence increased locomotor activity induced by 1.0 mg/kg of amphetamine. These data suggest the crossensitization between amphetamine and nicotine in adolescent rats. Moreover, the sensitization is long-lasting and persists until adulthood. / A sensibilização comportamental é caracterizada pelo aumento progressivo e duradouro da atividade locomotora induzida pelos psicostimulantes e outras substâncias de abuso, decorrente da administração repetida dessas substâncias. Esse fenômeno tem sido extensivamente estudado em animais experimentais e tem sido implicada como um componente fundamental na dependência a substâncias psicoativas. Nicotina e psicostimulantes são sempre utilizados em combinação. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a sensibilização cruzada entre nicotina e anfetamina em ratos expostos ao tratamento repetido com essas substâncias na adolescência. Nós avaliamos o efeito do tratamento com nicotina (0,4 mg/kg; s.c.) ou anfetamina (5 mg/kg, i.p.) do dia pós natal (P) 28-34 sobre os efeitos na atividade locomotora induzida pela anfetamina (1,0; 2,5; 5,0 mg/kg, i.p.) ou nicotina 3 (P37) e 10 (P44) dias após o término do tratamento. Além disso, os efeitos da anfetamina ou nicotina foram avaliados 36 dias (P70) após os tratamentos com nicotina ou anfetamina para determinar se os efeitos da exposição da exposição às substâncias na adolescência persistiam até a idade adulta. Os animais adolescentes pré-tratados com anfetamina foram sensibilizados aos efeitos sobre a atividade locomotora induzidos pela nicotina. Além disso, o pré-tratamento com nicotina na adolescência aumentou a atividade locomotora induzida por 5,0 mg/Kg de anfetamina. Apesar de ratos adultos serem menos sensíveis à nicotina, essa substância aumentou significativamente a atividade locomotora em ratos adultos pré-tratados com anfetamina na adolescência. E ainda, em ratos adultos, o prétratamento com nicotina na adolescência aumentou a atividade locomotora induzida por 1,0 mg/Kg de anfetamina. Esses resultados sugerem a sensibilização cruzada entre anfetamina e nicotina em ratos adolescentes. Além disso, que a sensibilização é duradoura e persiste até a idade adulta.

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:23:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissLRBS.pdf: 657336 bytes, checksum: 7eb05dcb7e6d7c9263676f62fb424c83 (MD5) Previous issue date: 2006-03-17 / Financiadora de Estudos e Projetos / The diet is an essential factor for the growth and maintenance of vital functions as well as to ability fish to reply the stressors. The reduction of oxygen concentration in the water may occur mainly in fish culture ponds, and may reduce the growth rate of the animals due to metabolism changes. Therefore the supplementation of the diet with copper and vitamin E can improve the animals defenses. Matrinxã specimens, Brycon cephalus, promising specie for fisheries, were fed with commercial ration (Co) and rations supplemented with vitamin E (E) and vitamin E+copper (E+Cu) during 30 days following by exposure to hypoxia (Hpx) during 24h (DO = 2,87 mgO2/L). The hematological variables [hematocrit (Hct), hemoglobin concentration ([Hb]), red blood cells (RBC), mean corpuscular volume (MCV), mean hemoglobin concentration (MHC) and mean corpuscular hemoglobin concentratrion (MCHC)]; metabolic changes such as concentrations of glucose, lactate, piruvate, ammonia, glycogen and protein in liver, red and white muscles and plasma (exception of glycogen) and, the oxidative stress parameters as concentration of peroxide lipids (HP), activity of superoxide dismutase (SOD), glutathione peroxidase (GHS-Px) and catalase (CAT) (exception in plasma) in the same tissues, including the gills and heart. The diets E and E+Cu may increase the aerobic capability of matrinxã when in hypoxic condition as there were increases of [Hb] and MCHC in group E+Cu and an increase in MCHC in E accompanied by an increase in the pyruvate and no change in lactate in most of tissues of fish fed wit supplemented diets. These results support the view that the both supplemented diets, and mainly the E+Cu, seem to increased the aerobic capacity of matrinxã during hypoxia. Hypoxia increased HP concentration only in the plasma and the supplemented diet change the oxidative stress, hematological and metabolical parameters. The diet E reduced HP concentration in the heart and red muscles during hypoxia and the diet E+Cu increased the enzyme concentration and activity without generated HP increase, even in conditions of higher aerobic metabolism. The obtained results suggest that the supplemented diets increased the aerobic capacity of matrinxã during hypoxia without increasing oxidative stress, while the metabolic adjustments front to the reduced concentration of O2 had been efficient to maintain the O2 delivery to the tissues since the hypoxia only modified the parameters analyzed when in association with the differentiated diets. / A dieta é fator essencial para o crescimento e manutenção das funções vitais principalmente frente a situações adversas. Em pisciculturas ocorrem situações de redução na concentração de oxigênio na água que podem reduzir o crescimento dos animais uma vez que interferem no metabolismo. A suplementação da dieta com vitaminas e metais essenciais, dentre eles o cobre e vitamina E, que tem função antioxidante, podem melhorar as defesas dos animais frente a estressores. Exemplares de matrinxã, Brycon cephalus, espécie promissora para piscicultura, foram alimentados durante 30 dias com ração comercial (Co) e ração suplementada com vitamina E (E) e vitamina E+cobre (E+Cu) e, posteriormente, foram expostos a hipóxia (Hpx) durante 24h (OD = 2,87 mgO2/L). As alterações hematológicas [hematócrio (Hct), concentração de hemoglobina ([Hb]), número de eritrócitos (RBC) volume corpuscular médio (VCM), concentração de hemoglobina média (HCM) e concentração média de hemoglobina corpuscular (CHCM)]; alterações metabólicas [concentrações de glicose, lactato, piruvato, amônia, glicogênio e proteína no plasma (exceção do glicogênio), fígado, músculos vermelho e branco] e os parâmetros de estresse oxidativo [(concentração de hidroperóxidos de lipídios (HP), atividade das enzimas superóxido dismutase (SOD), glutationa peroxidase (GHS-Px) e catalase (CAT)] nos mesmos tecidos com exceção do plasma, além de brânquias e coração foram analisadas em normóxia e hipóxia. A dieta E e, principalmente, a E+Cu parecem ter aumentado a capacidade aeróbica de matrinxã quando em hipóxia, pois houve aumento na [Hb] e CHCM no grupo E+Cu e aumento no CHCM em E, além de aumento no piruvato e ausência de aumento no lactato na maioria dos tecidos dos animais tratados com dieta suplementada. A hipóxia gerou aumento na concentração de HP somente no plasma e a dieta suplementada alterou parâmetros de estresse oxidativo, assim como hematológicos e metabólicos. A vitamina E reduziu HP em coração e músculo vermelho quando em hipóxia e a vitamina E + cobre aumentou atividade enzimática sem gerar aumento na concentração de HP, mesmo em condições de maior metabolismo aeróbico. Os resultados obtidos sugerem que as dietas suplementadas aumentaram a capacidade aeróbica de matrinxã em hipóxia sem aumentar o estresse oxidativo nesses animais, enquanto os ajustes metabólicos frente à reduzida concentração de O2 foram eficientes em manter o aporte de O2 para os tecidos, já que a hipóxia só alterou os parâmetros analisados quando em associação com as dietas diferenciadas.

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:23:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissTB.pdf: 9645708 bytes, checksum: fb4557357ff1bb7d06af97fe7f8f3980 (MD5) Previous issue date: 2006-04-07 / Financiadora de Estudos e Projetos / O exercício físico tem sido considerado uma das três bases, junto com dieta e medicamento, no tratamento do Diabetes Mellitus tipo 2 e, normalmente, sua prescrição tem sido realizada utilizando-se das variáveis freqüência cardíaca máxima e consumo máximo de oxigênio. O limiar anaeróbio, embora mais sensível para tal finalidade, ainda é pouco utilizado em intervenção com essa população. Dessa forma, os objetivos deste estudo foram verificar o efeito do treinamento físico no limiar ventilatório sobre o controle glicêmico, potência aeróbia, composição corporal e perfil lipídico de mulheres com DM 2 e avaliar os efeitos da orientação nutricional sobre o padrão dietético destas pacientes. Para tal propósito, foram estudadas 19 voluntárias, sendo distribuídas em dois grupos: controle (n = 10; 55,5 anos de idade; 71,8 ± 13,3 kg) o qual permaneceu sedentário durante a intervenção e treinado (n = 9; 52 anos de idade; 75,0 ± 18,2 kg) que realizou treinamento físico por 12 semanas na intensidade equivalente ao limiar ventilatório em pista de atletismo. Nas avaliações iniciais e finais foi avaliado o controle glicêmico, a potência aeróbia, a composição corporal, o perfil lipídico, além de ser realizado avaliação e orientação nutricional, sem prescrição de dieta controlada. A cada duas semanas era realizada análise glicêmica pré e pós-sessão de exercício físico. Já, na avaliação intermediária houve a realização de teste ergoespirométrico, para ajuste da velocidade relativa ao limiar ventilatório para o grupo treinado, além de avaliação e orientação nutricional. Em função do treinamento físico foram observados redução na hemoglobina glicada, aumento da velocidade máxima, do tempo de exaustão e discreto aumento do consumo máximo de oxigênio, além de aumento da velocidade relativa ao limiar ventilatório acompanhada de reduções no consumo de oxigênio e porcentagem de consumo máximo de oxigênio relativo ao limiar ventilatório. Além disso, houve redução de massa corporal e de massa e porcentagem de gordura corporal, além de manutenção dos valores de circunferência de cintura, os quais aumentaram no grupo controle. Os valores de glicemia pós-sessão de exercício físico foram reduzidos em todos os momentos de avaliação. Apesar dos valores de colesterol total e LDL colesterol reduzirem e os valores de HDL colesterol aumentarem significantemente apenas no grupo controle, no grupo treinado estes valores também se aproximaram de valores de referência. Os dois grupos mantiveram dieta normocalórica e a distribuição de macronutrientes não foi alterada no decorrer do estudo, contudo houve redução do consumo mensal de óleo de soja. Assim, pode-se concluir que o treinamento físico no limiar ventilatório foi efetivo para melhora do controle glicêmico de maneira aguda e crônica, da potência aeróbia, em termos máximos e submáximos e da composição corporal. Já a orientação nutricional, na perspectiva de reeducação alimentar, foi efetiva em aproximar os valores de perfil lipídico a valores de referência.

Submitted by Ricardo Cedraz Duque Moliterno (ricardo.moliterno@uefs.br) on 2017-07-12T01:06:09Z No. of bitstreams: 1 TESE VERS?O FINAL MARCELO ARAUJO (1).pdf: 2342837 bytes, checksum: 363174d9d071939d3ad3c4f66b795b8a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-12T01:06:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TESE VERS?O FINAL MARCELO ARAUJO (1).pdf: 2342837 bytes, checksum: 363174d9d071939d3ad3c4f66b795b8a (MD5) Previous issue date: 2017-02-10 / Funda??o de Amparo ? Pesquisa do Estado da Bahia - FAPEB / Amburana cearensis (Allem?o) A.C.Sm. is native tree of Brazil adapted at semi-arid habitats. It has ecological, commercial and medicinal importance. A. cearensis is listed in the red list of endangered species. It is threatened by habitat loss and exploitation for use in folk medicine. The bark is used, in the traditional medicine, to cure respiratory diseases while seeds are used to treat lung diseases. This work aims to study the physiological aspects of germination and storage of Amburana cearensis (Allem?o) A.C.Sm. seeds. Four storage conditions were used and assessed during 27 months: airtight container in refrigerator; airtight container in laboratory, paper bags in laboratory and liquid nitrogen during 24 months. Germination test was performed at temperatures of 15, 20, 30, 35, 40 and 45 ?C with a photoperiod of 12 hours. Germination in salt solutions was used salt concentration of 100, 200, 300, 400 and 500 mM. A. cearensis seeds kept in refrigerated environment maintain the viability for at least two years. The ideal temperature in seed germination of A. cearensis is 38 ?C. Accessions differed in seed dry mass, in time until 50% imbibition (IMt50), and time until radicle protrusion (RP). The start of water uptake (TWU) was delayed by more than 4 d despite optimal contact between the seed surface and water, and this delay was stronger for smaller seeds and differed between accessions. Longer delay of imbibition was also correlated with higher optimum temperature for germination rate (To), and with longer time until radicle protrusion in water. The TWU, IMt50, and the RP differed between water and salt treatments for the accessions from the semi-arid habitat. These results suggest that it is not advisable to store A. cearensis seeds in laboratory environment without an airtight container and the delayed of the water uptake forms an adaptation to an environment with high temperature, low precipitation, and saline soils, most likely to spread the risk of completing germination at the start of the rainy season. / Amburana cearensis (Allem?o) A.C.Sm. ? uma ?rvore nativa do Brasil adaptada a habitats semi?ridos. Tem import?ncia ecol?gica, comercial e medicinal. A. cearensis est? inserida na lista vermelha de esp?cies amea?adas de extin??o. ? amea?ada por perda do habitat e explora??o para o uso na medicina popular. A casca ? utilizada, na medicina tradicional, para curar doen?as respirat?rias enquanto as sementes s?o usadas para tratar doen?as pulmonares. Este trabalho tem como objetivo estudar os aspectos fisiol?gicos da germina??o de sementes de Amburana cearensis. Foram utilizadas quatro condi??es de armazenamento e avaliados durante 27 meses: recipiente herm?tico em geladeira; recipiente herm?tico em laborat?rio; sacos de papel em laborat?rio e nitrog?nio l?quido. O teste de germina??o foi realizado em temperaturas de 15, 20, 30, 35, 40 e 45 ?C com fotoper?odo de 12 horas. Para germina??o em solu??es salinas foi utilizada concentra??o de 100, 200, 300, 400 e 500 mM. As sementes de A. cearensis mantidas em ambiente refrigerado mantiveram a viabilidade durante pelo menos dois anos. A temperatura ideal na germina??o de sementes de A. cearensis ? de 38 ?C. Os acessos diferiram entre si na massa seca da semente, no tempo at? 50% de imbibi??o (IMt50) e de protrus?o da rad?cula (RP). O in?cio da absor??o de ?gua (TWU) foi atrasado em mais de 4 d, apesar do ?timo contato entre a superf?cie da semente e a ?gua, e este atraso foi mais forte para as sementes menores diferindo entre os acessos. O atraso maior da embebi??o tamb?m foi correlacionado com uma temperatura ?tima mais alta para taxa de germina??o (To), e com maior tempo at? protrus?o da rad?cula em ?gua. O TWU, o IMt50 e o RP diferiram entre tratamentos de ?gua e sal para as acessos do habitat semi?rido. Estes resultados sugerem que n?o ? aconselh?vel armazenar sementes de A. cearensis em ambiente de laborat?rio sem recipiente herm?tico e o atraso da absor??o de ?gua forma uma adapta??o a um ambiente com alta temperatura, baixa precipita??o e solos salinos, muito provavelmente para espalhar o risco de completar a germina??o no in?cio da esta??o chuvosa.

O núcleo do trato solitário rostral (NTSr), localizado no bulbo, é considerado a primeira estação sináptica para a integração da informação sensorial ao sódio e envia e recebe projeções de diferentes áreas encefálicas envolvidas com o controle do equilíbrio hidroleletrolítico, incluindo o núcleo parabraquial lateral (NPBL) na ponte. A ativação de receptores adrenérgicos alfa2, purinérgicos ou GABAérgicos do NPBL promove uma facilitação da ingestão de sódio hipertonico. Portanto, os objetivos do presente estudo foram: a) testar se o bloqueio do NTSr altera o comportamento de ingestão de sódio hipertônico; b) testar se a ativação de receptores GABAérgicos do NPBL altera a palatabilidade ao sódio; e c) investigar se há uma interação entre o mecanismo adrenérgico e purinérgico do NPBL para o controle da ingestão de sódio. Foram utilizados ratos Wistar ou Holtzman (290-320g) com cânulas implantadas bilateralmente em direção ao NPBL ou NTSr. Em ratos depletados de sódio (tratamento com furosemida 20 mg/kg s.c. seguido de dieta deficiente de sódio por 24 h), a administração bilateral de cloreto de cobalto (bloqueador da transmissão sináptica, 1 mM/0,1 μl) no NTSr promoveu um discreto aumento da ingestão de sódio (16,81,9 ml/60 min), enquanto que não houve alteração da ingestão de sódio após as injeções de muscimol (agonista de receptores GABAA, 120 pmol/0,1 μl) (11,52,7 ml/60 min) em relação ao tratamento controle (salina: 11,11,4 ml/60 min). Em ratos saciados, administração de muscimol no NPBL não alterou o número de respostas hedônicas (8918) ou aversivas (2416) em resposta a infusão intra-oral de NaCl 0,3 M em comparação ao controle (salina: 11715 e 2310, respectivamente). Por último, em animais depletados de sódio, injeções bilaterais de moxonidina (agonista de receptores adrenérgicos alfa2/imidazólicos, 0,5 nmol/0,2 μl) no NPBL aumentaram a ingestão de NaCl 0,3 M (29,27,6, vs. veículo: 16,32,6 ml/120 min) e de água (5,11,4, vs. veículo: 1,60,8 ml/120 min). A prévia administração bilateral de suramin (antagonista purinérgico P2 não seletivo, 2 nmol/0,2 μl) no NPBL reduziu os efeitos da moxonidina sobre a ingestão de NaCl 0,3 M (14,06,9 ml/120 min) e de água (1,6 0,5 ml/120 min). Porém, apenas a injeção de suramin no NPBL quase aboliu a ingestão de NaCl 0,3 M (2,52,4 ml/120 min) e aboliu a ingestão de água (0,10,1 ml/120 min). Em outro grupo de ratos, moxonidina injetada no NPBL aumentou a ingestão de NaCl 0,3 M (29,7±4,2, vs. veículo: 18,9±0,7 ml/120 min). Apenas a administração bilateral de PPADS (antagonista de receptores purinérgicos P2X, 4,0 nmol/0,2 μl) no NPBL não alterou a ingestão de NaCl 0,3 M (18,5±4,6 ml/120 min). O pré-tratamento com PPADS no NPBL bloqueou os efeitos da moxonidina sobre a ingestão de NaCl 0,3 M (14,3±4,1 ml/120 min). Em suma, os presentes resultados sugerem que: a) o bloqueio da transmissão sináptica do NTSr pode facilitar a ingestão de sódio; b) o bloqueio de receptores GABAérgicos do NPBL parece não alterar as respostas comportamentais oro-faciais de percepção ao sabor ao sódio hipertônico; e c) há uma importante interação entre o mecanismo purinérgico e adrenérgico alfa2 do NPBL para o controle da ingestão de sódio hipertônico induzida por depleção de sódio / The rostral portion of the nucleus of the solitary tract (rNTS), located in the medulla oblongata, is considered the first synaptic relay for integration of sodium taste sensorial information. The rNTS receives and send projections to different forebrain and hindbrain areas related to hydroeletrolitic balance control, including the lateral parabrachial nucleus (LPBN) in the pons. Separate activation of alpha2-adrenergic and P2 purinergic receptor, as well as GABAergic receptor activation, in LPBN facilitates hypertonic NaCl intake. Therefore, the aims of the present study were: a) to test if the inhibition of rNTS would change sodium-depletion induced sodium intake; b) to test if the LPBN GABAergic mechanism interfere with sodium palatability; and c) to investigate the effects of the blockage of purinergic receptors of the LPBN on the facilitation of 0.3 M NaCl intake induced by alpha2-adrenoceptor activation into the LPBN. Thus, male Wistar or Holtzman rats received bilateral LPBN or rNTS cannulas. In sodium-depleted (furosemide, 20 mg/kg b. wt. subcutaneously combined with sodium deficient diet for 24 h) male rats, bilateral injections of cobalt chloride (synaptic blocker, 1 mM/0.1 μl) caused a small increase (16.81.9 ml/60 min), while muscimol (GABAA receptor agonist, 120 pmol/0.1 μl) injections did not change sodium-depletion induced sodium intake (11.52.7 ml/60 min) in comparison to control treatment (11.11.4 ml/60 min). In satiated rats treated with muscimol (0.5 nmol/0.2 μl) injections into the LPBN, the number of hedonic (89 18) and aversive (2416) responses to intra-oral infusion of 0.3 M NaCl were not different from those observed after LPBN saline injections (11715 e 2310, respectively). Finally, in sodium-depleted rats bilateral LPBN injections of moxonidine (alpha2 adrenergic/imidalozine receptor agonist, 0.5 nmol/0.2 μl) into the LPBN increased sodium depletion-induced 0.3 M NaCl intake (29.27.6, vs. vehicle: 16.32.6 ml/120 min) and water intake (5.11.4, vs. vehicle: 1.60.8 ml/120 min). Pretreatment with suramim (non-selective P2 purinergic antagonist, 2 nmol/0.2 μl) abolished the effects of moxonidine on 0.3 M NaCl intake (14.06.9 ml/120 min) and water intake (1.60.5 ml/120 min). However, suramim alone into the LPBN almost abolished 0.3 NaCl intake (2.52.4 ml/120 min) and abolished water intake (0.10.1 ml/120 min) by sodium depleted rats. In another group of rats, bilateral injections of moxonidine (0.5 nmol/0.2 μl) into the LPBN increased sodium depletion-induced 0.3 M NaCl intake (29.7±4.2, vs. vehicle: 18.9±0.7 ml/120 min). The P2X purinergic antagonist PPADS (pyridoxalphosphate-6-azophenyl-2',4'-disulfonic acid, 4 nmol/0.2 μl) alone into the LPBN did not change 0.3 NaCl intake (18.5±4.6 ml/120 min).Therefore pretreatment with PPADS into the LPBN abolished the effects of moxonidine on 0.3 M NaCl intake (14.3±4.1 ml/120 min). In summary, present results suggest that a) synaptic blockade into rNTS might facilitate sodium intake; b) GABAergic mechanisms into the LPBN are not involved with sodium palatability in satiated ratsand c) α2-adrenergic and P2X purinergic receptors interact in the LPBN to facilitate sodium intake. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

O diabetes mellitus (DM) em longo prazo pode levar a diversos problemas entre eles a insuficiência renal, cegueira, alterações vasculares e neurológicas. Entre as teorias que explicam como a hiperglicemia crônica conduz aos danos celulares e teciduais responsáveis pelas complicações observadas no DM, a formação dos produtos finais de glicação avançada (AGEs) é considerada uma das mais importantes. Sabe-se também que nas doenças cardiovasculares, uma das principais complicações do diabetes, ocorre um aumento das quinureninas, produtos de oxidação do triptofano, numa reação catalisada pela enzima Indolamina 2,3 dioxigenase (IDO). Neste trabalho avaliamos a influência dos AGEs sobre a modulação da enzima IDO no estado diabético e seu impacto nos principais marcadores de risco cardíaco. Foi utilizado um modelo experimental de diabates induzido pela injeção i.p. de aloxano em ratos Wistar que foram divididos em 6 grupos (n=8 por grupo): Diabético Ativado (DA), Diabético Não Ativado (DNA), Diabético Ativado tratado com aminoguanidina (DAAG), Diabético Não Ativado tratado com AG (DNAAG), Controle Ativado (CA) e Controle Não Ativado (CNA). A aminoguanidina (AG) é um conhecido inibidor da formação de AGEs e foi administrada por gavagem por 50 dias após a instalação do DM. A formação de quinureninas reflete a atividade de IDO e foi medida em macrófagos peritoneais e homogenato de cérebro, por HPLC. A expressão de IDO foi avaliada por Dot blot, imunofluorescência e imunocitoquímica. Os principais marcadores de risco cardíaco (colesterol total e suas frações e PCR-US) foram determinados através de kits comerciais. Além disso, foi avaliado também o perfil glicêmico e renal destes animais, uma vez que os AGEs são nefrotóxicos. Como esperado, no estado diabético houve um aumento de 2,9 vezes na formação dos AGEs, em relação aos animais controle e a aminoguanidina inibiu cerca de 35% da formação destes produtos. Observamos um aumento na atividade e expressão de IDO em macrófagos e homogenato de cérebro de ratos diabéticos em relação ao controle. O aumento visto em macrófagos foi mais evidente quando estas células foram ativadas pelo LPS, mimetizando uma situação de infecção. Este aumento ocorreu de forma independente da concentração dos AGEs, uma vez que não houve diferença entre os grupos tratatos e não tratados pela AG. Da mesma forma observada para a modulação da IDO, o tratamento com a AG não alterou os perfis glicêmico, lipídico e renal no nosso modelo experimental. Nossos resultados demonstram que o estado hiperglicêmico eleva os níveis de IDO. Estes achados sugerem que IDO pode vir a se tornar um marcador da morbidade do diabetes e potencial alvo em novas estratégias terapêuticas para o DM. / The diabetes mellitus (DM) is a chronic disease that is known to cause several longterm complications such as renal insufficiency, blindness, vascular and neurological changes. There are some theories trying to explain how chronic hyperglycemia may lead to cellular and tissue impairments and the Advanced Glycation End-Products (AGE) theory is one of the most important. Cardiovascular disease is one of the diabetes mellitus long-term complications and in this case it was observed an increased serum concentration of kynurenine, an indoleamine 2, 3 dioxygenase (IDO) catalyzed tryptophan oxidation product. In this study we evaluated the IDO modulation by AGEs in diabetic rats and the impact of this modulation in cardiac risk markers. For diabetes model, Wistar rats were treated with intraperinoeal (i.p.) injection of aloxane. It was evaluated 6 different groups (n=8): Activated diabetic (DA), Non Activated diabetic (DNA), Activated diabetic treated with aminoguanidine (DAAG), Non activated diabetic treated with aminoguanidine (DNAAG), Activated control (CA) and Non activated control (CAN). Aminoguanidine (AG) is a known AGEs formation inhibitor and it was administrated by gavage during 50 days after the DM was installed. Kynurenine formation is a measure of IDO acitivity and it was evaluated, by HPLC, in peritoneal macrophages and brain homogenates. The IDO protein expression was analyzed by Dot Blot, Immunofluorescence and immunocytochemistry. The main cardiac risk markers (total cholesterol and fractions and PCR-US) were determined by commercial kits. The glycemic and renal profile were also evaluated since AGEs are known to be nephrotoxic. As expected, we observed an increase in AGEs by 2,9 times when compared with the control and the aminoguanidine compound inhibited 35% of tthese products. There was an increase in the IDO expression and activity in macrophages and brain homogenates in diabetic rats when compared with control. This rise was more evident when the animals were treated with LPS, mimicking an infection. The difference of IDO activity and expression was not due to the AGEs concentration since we did not observe difference between the AG treated and non-treated groups. The same way observed by IDO modulation, the AG treatment did not alter the glycemic, lipidic and renal profiles in this experimental model. These results showed that the hyperglycemic state increase IDO levels. These findings suggest that IDO might be a morbid diabetes marker and a potential target of new therapeutic strategies of DM. / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais - FAPEMIG

Durante algumas das reações que levam à formação de AGEs, espécies reativas de oxigênio são geradas e concorrem paralelamente com o estresse oxidativo e com os danos estruturais e funcionais às macromoléculas. A formação de AGEs in vivo pode envolver os neutrófilos, que após estímulo inflamatório, induzem importantes enzimas geradoras de ERO, como o sistema NADPH oxidase. Entretanto ainda permanecem questionamentos sobre a relação entre o Sistema NADPH oxidase de neutrófilos e os AGEs. O presente trabalho visa contribuir para o entendimento do papel do sistema NADPH oxidase e da geração de ERO na formação de AGEs e o impacto da formação destes produtos na função renal destes animais. Foi utilizado um modelo experimental de diabetes induzido pela injeção i.p. de aloxano em ratos Wistar que foram divididos em 5 grupos: controle, diabético, diabético tratado com aminoguanidina (AG), diabético tratado com apocinina (AP) e diabético tratado com apocinina e aminoguanidina (AP+AG). A AG é um conhecido inibidor da formação de AGEs, e a AP é inibidor do sistema NADPH oxidase. Os inibidores, ou água foram administrados aos animais por gavagem por 50 dias após a instalação do DM. A formação de ERO reflete a atividade de NADPH oxidase e foi mensurada em neutrófilos peritoneais por quimiluminescência e pelo ensaio de redução do citocromo C. A expressão das subunidades p47phox e a p67phox do sistema NADPH oxidase foi avaliada por imunofluorescência. Os AGEs circulantes foram avaliados por fluorescência e a função renal foi avaliada pela dosagem da uréia e creatinina séricas e análises histológica dos rins. Pelos parâmetros avaliados neste estudo, verificamos que o tratamento com AP, diminuiu a geração de ERO tanto no grupo controle, quanto diabético, mas não afetou a via de formação de AGEs. O que indica que, provavelmente, não há interrelação entre as vias do sistema da NADPH oxidase de neutrófilos e a formação de AGEs, no nosso modelo experimental. O tratamento com a AP atenuou a glomerulonefrite do grupo diabético. A AG, na dose e no tempo administrado, 100mg/Kg por 50 dias, melhorou o perfil glicêmico dos animais diabéticos, preveniu a formação de AGEs e o dano glomerular. Além disso, o tratamento com a AG aumentou a atividade do sistema NADPH oxidase e a expressão das subunidades citosólicas p47phox e a p67phox do sistema. Não podemos afirmar que o aumento da atividade e expressão do sistema NADPH oxidase seja devido à diminuição dos AGEs no nosso sistema ou um efeito isolado da aminoguanidina, ainda não descrito na literatura. A compreensão do papel desta enzima em modelo experimental de diabetes pode ajudar na compreensão do processo inflamatório persistente que ocorre devido ao acúmulo desses produtos nas complicações da doença, permitindo uma melhor adequação da abordagem clínica e tratamento desses pacientes. / Chronic hyperglycemia observed in diabetes disease leads to the advanced glycation end products (AGEs) formation, which are able to damage the patient organs, especially the kidney. Some AGEs formation reactions may also generate reactive oxygen species (ROS) and they are able to compete with oxidative stress and structural and functional macromolecules damages. Neutrophils are immune cells capable of expressing great amount of important ROS generator enzymes such as NADPH oxidase just after inflammatory stimuli. There are still questions about the relationship between the neutrophil NADPH oxidase system and AGEs despite the information that in vivo AGEs formation may involve neutrophils. The present study aims to contribute to the understanding of NADPH oxidase role and its ROS generation in AGEs formation and what is the impact of these products formation in renal function of rat model. Our experimental diabetes model was reached by alloxan i.p. injection in rats. These animals were divided in five groups: control, diabetic, diabetic treated with aminoguanidine (AG), diabetic treated with apocynin (AP) and diabetic treated with apocynin and aminoguanidine (AG + AP). AG is an AGEs formation inhibitor, and AP is a NADPH oxidase inhibitor. The inhibitors compounds or the vehicle (water) were administered by gavage for 50 days after DM confirmation. ROS formation reflects the NADPH oxidase activity and it was measured by chemiluminescence assay and by cytochrome C reduction in peritoneal neutrophils. The expression of NADPH oxidase p47phox and p67phox subunits was assessed by immunofluorescence. Circulating AGEs were analyzed by fluorescence and the renal function was evaluated by serum urea and creatinin concentration and by kidney histological sections. Our results showed that AP treatment decreased ROS generation in both control and diabetic groups, but did not affect the process of AGEs formation. This may indicate that in our experimental model there is no interrelation between the neutrophil NADPH oxidase system and the AGEs formation. It was also observed that the AP attenuated glomerulonephritis in diabetic mice. AG, at the administered dose and time, 100mg/Kg for 50 dias, improved glycemic control, prevented the AGEs formation and prevented glomerular damage. Furthermore, AG treatment increased the NADPH oxidase activity and its p47phox and p67phox cytosolic subunits expression. We are not able to confirm if the increased activity and expression of NADPH oxidase were caused by the AGEs decrease in our system or by an isolated effect of aminoguanidine not yet described. Understanding the NADPH oxidase role in experimental diabetes could improve the knowledge about the persistent inflammatory process that occurs due to these products accumulation during the disease complication, allowing a better clinical approach and treatment of these patients. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

O aumento da ingestão de alimentos industrializados e produtos como refrigerantes, bebidas açucaradas e xarope de milho contendo alta concentração de frutose podem originar desordens metabólicas como obesidade, resistência à insulina, diabetes mellitus tipo 2 e doenças cardiovasculares em humanos. Estas desordens metabólicas podem alterar a resposta imunológica destes indivíduos. O objetivo deste trabalho foi investigar a hiperalgesia inflamatória e comportamento doentio após um desafio imunológico em animais com desordens metabólicas induzidas por dieta rica em frutose. Ratos adultos machos foram tratados com água ou solução de frutose 10% por cinco semanas. A hiperalgesia inflamatória periférica através do teste de Von Frey eletrônico foi avaliada após estímulo com carragenina, lipopolissacarídeo (LPS) ou prostaglandina E2 (PGE2). Comportamento doentio foi avaliado 2 horas após a injeção de LPS ou veículo. Os animais foram sujeitos ao teste de campo aberto, interação social, ingestão alimentar e avaliação da resposta febril. Expressão de citocinas foi avaliada nos tecidos adiposos e hipotálamo e a resposta neural foi investigada via imunohistoquímica para c-Fos. Comparado ao grupo controle, a frutose induziu dislipidemias, altos níveis de glicose, aumento da adiposidade retroperitoneal e epididimal e resistência a insulina. O aumento da hiperalgesia inflamatória periférica foi observado em animais tratados com frutose. Em resposta ao LPS os animais tratados com frutose exibiram respostas comportamentais exacerbadas e aumento da febre além do aumento da expressão de citocinas no hipotálamo e tecido adiposo quando comparados aos animais tratados com água. A expressão de Fos induzida pelo LPS foi maior em diversas áreas cerebrais nos animais controle e esta resposta foi aumentada nos ratos induzidos por dieta de frutose. Neste estudo podemos concluir que a dieta rica em frutose desempenha um importante papel na indução de desordens metabólicas as quais irão intensificar a hiperalgesia inflamatória e o comportamento doentio em resposta a um desafio imunológico via indução de citocinas no hipotálamo. / The increased intake of processed foods and products such as soft drinks, sweetened drinks and corn syrup containing high concentration of fructose can cause metabolic disorders such as obesity, insulin resistance, type 2 diabetes mellitus and cardiovascular disease in humans. These disorders may alter the immune response of these individuals. The objective of this study was to investigate the inflammatory hyperalgesia and sickness behavior after an immune challenge in animals with metabolic disorders induced by diet rich in fructose. Adult male Wistar rats were provided either water or a fructose solution (10%) for 5 weeks. Peripheral inflammatory hyperalgesia according to the Von Frey test were evaluated after stimuli with carrageenan, lipopolysaccharide (LPS) and prostaglandin E2 (PGE2). Sickness behaviors were assessed 2 h following the injection of either a lipopolysaccharide (LPS) or vehicle. The rats were subjected to an open field test, a social interaction test, a food intake test and a fever evaluation. Cytokine expression was assessed in both adipose tissue and hypothalamus samples. The neural response was assessed in the forebrain via immunohistochemistry for c-Fos. Compared with the control group, the fructose diet induced dyslipidemia and significantly higher plasma glucose levels as well as both epididymal and retroperitoneal adiposity and insulin resistance. Increased peripheral inflammatory hyperalgesia were observed in animals treated with fructose. Furthermore, in response to LPS, the rats subjected to a fructose diet exhibited exacerbated sickness behaviors and accentuated febrile responses. Larger increases in cytokine expression were observed in both the hypothalamus and the adipose tissue of the obese rats compared with the control rats in response to LPS. LPS induced Fos protein expression in several areas of the brains of the control rats; however, larger numbers of Fos-positive cells were observed in the brains of the rats that were fed a fructose diet. In this study we conclude that the high-fructose diet plays an important role in the induction of metabolic disorders which will enhance inflammatory hyperalgesia and sickness behavior in response to an immune challenge induction via cytokines in the hypothalamus. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

O glúten corresponde à fração proteica do trigo, centeio e cevada, estando presente na alimentação de grande parte dos brasileiros devido ao alto consumo de carboidratos. Diversos tipos de reações de hipersensibilidade ao glúten são descritos na literatura, envolvendo mecanismos inflamatórios e imunológicos diversos, gerando sinais e sintomas variados nos indivíduos acometidos. O objetivo deste estudo foi avaliar se a presença de glúten na dieta altera o perfil lipídico, os níveis sanguíneos basais de insulina e glicose, a ingestão alimentar e a massa corporal de ratos. Os animais foram divididos em três grupos (n=18), que receberam dieta padrão sem glúten (Controle) ou dieta experimental contendo 15% (G15) ou 30% (G30) da fonte proteica à base de glúten, durante 1, 2 e 4 semanas. A cada dois dias, a massa corporal e a ingestão alimentar foram avaliadas e, após cada período de tratamento, 6 animais de cada grupo foram eutanasiados para coleta do sangue. Para a comparação entre grupos foi feita a análise de variância de uma via (one-way ANOVA) seguida do pós-teste de Newman-Keuls e os valores de p<0.05 foram considerados como diferentes estatisticamente. Não foram observadas diferenças significativas (p>0,05) na massa corporal, ingestão alimentar, nos níveis de colesterol total, colesterol HDL, colesterol não – HDL, da insulinemia de jejum e do HOMA-IR dos ratos alimentados com glúten em nenhum dos tempos experimentais. Em contrapartida, os animais alimentados com ração contendo glúten apresentaram valores de triglicerídeos maiores do que os observados nos animais do grupo controle após 1 semana (p<0,01) e 2 semanas de tratamento (p<0,001). Após quatro semanas de tratamento, somente os animais alimentados com ração contendo 30% de glúten apresentaram valores de triglicerídeos maiores (p<0,05). A presença do glúten (30%) na dieta também elevou a glicemia de jejum dos ratos após 1 (G30; p<0,001), 2 e 4 (G15 e G30; p<0,001) semanas de tratamento em comparação aos controles. Com base nos resultados apresentados, foi possível concluir que a presença de glúten na dieta de ratos é capaz de promover uma elevação significativa dos níveis séricos de glicose e triglicerídeos, sem alteração elevação da ingestão alimentar, da massa corporal, do HOMA-IR, da insulinemia e dos níveis de colesterol e suas frações. / Gluten is the protein component of wheat, barley and rye and is largely present in food due to increased consumption of refined carbohydrates. It has been described several types of gluten hypersensitivity with different kind of inflammatory and immunologic mechanisms, signals and symptoms. From these considerations, the present study aims to evaluate the effect of gluten on lipid profile, fasting glucose and insulin, body mass gain and food intake of rats. The animals were divided into three groups (n = 18), fed on a gluten free (AIN 93-G) diet (controls) or AIN 93- G modified diet with 15% or 30% of gluten as a protein source (G15 and G30, respectively), during one, two and four weeks. Measurements of food intake and body mass were performed by each two days and the blood and white adipose tissue (WAT) collected in the end of the treatment. There were no differences in body mass gain, WAT, food intake, cholesterol, non HDL–c, HDL–c, fasting insulin and HOMA-IR (p > 0.05). In contrast, rats fed on a 15% and 30% gluten diet show an increase in fasting glucose after one (G30 p<0.001), two and four (G15 and G30 p<0.001) weeks, as well as in triglycerides levels after one (p<0.01), two (p<0.001) and four (p<0.005) weeks in comparison to the control group. We concluded that gluten intake increases the glucose and triglycerides levels in rats, without changing weight gain, white adipose tissue, insulin, HOMA- IR, cholesterol, HDL- c, non HDL-c and food intake. / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais - FAPEMIG

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