Tem sido demonstrado que a administração sistêmica de canabinóides em ratas lactantes prejudica o comportamento materno. Portanto, objetivou-se determinar quais são, especificamente, as alterações provocadas neste cuidado materno mediante infusão crônica central de agonista do receptor CB1 (WIN 55,212-2) nas doses de 10 e 100nmol. As análises do comportamento materno foram realizadas em 4 sessões diárias (3 durante a fase clara e 1 durante a fase escura) de 72 minutos cada, sendo registradas de 3 em 3 minutos totalizando 25 observações por sessão (portanto, 100 observações diárias). O resultado das análises, durante a infusão da droga, indicou diminuição do tempo de lambida e consequente aumento no tempo que as ratas passam alimentando-se. Mesmo após o período de infusão da droga (7 dias), o comportamento materno total permaneceu diminuído. Como interferências sofridas durante o período neonatal que provoquem variações no cuidado materno podem persistir e influenciar o fenótipo dos filhotes, foram verificadas possíveis alterações comportamentais em respostas de ansiedade e medo na prole quando em idade adulta. Para tanto, os filhotes machos e fêmeas (quando completaram 8 semanas de vida), foram submetidos aos testes de campo aberto, labirinto em cruz elevado e medo condicionado ao contexto. Os resultados encontrados mostram que os filhotes machos apresentam menor latência para exibição do primeiro freezing no teste de medo. Por outro lado, as fêmeas apresentaram somente elevação da pressão arterial quando submetidas ao mesmo teste. Em conjunto, os resultados sugerem que canabinóides diminuem o cuidado materno em ratas lactantes, principalmente a lambida, e mesmo após a suspensão da infusão da droga, a redução do comportamento materno total permanece. Essa diminuição do cuidado materno refletiu principalmente nos filhotes machos, aumentando respostas relacionadas ao medo. / It has been demonstrated that systemic administration of cannabinoids in lactating rodents affect maternal behavior. Therefore, the objective was to determine what changes, specifically, in maternal care caused by chronic infusion of central CB1 receptor agonist (WIN 55,212-2) at doses of 10 and 100nmol. Analyses of maternal behavior were performed in 4 sessions daily (3 during the light phase and 1 during the dark phase) of 72 minutes each, being recorded from 3 in 3 minutes totaling 25 observations per session (so 100 daily observations) . The result of the analysis, during infusion of the drug, indicated decreased time to licking and consequent increase in the time that the rat is feeding. Even after the period of drug infusion (7 days), the total maternal behavior remained decreased. How interference occurred during the neonatal period that cause variations in maternal care may persist and influence the phenotype of the offspring, were evaluated possible changes in anxiety and fear responses in the offspring when in adulthood. Therefore, males and females puppies (when completed 8 weeks of life), were tested in the open-field, elevated plus maze and fear conditioning to context. The results show that male offspring have lower latency to display the first freezing in this fear test. Moreover, the females showed only elevated blood pressure when subjected to the same test. Together, the results suggest that cannabinoids decrease maternal care in lactating rats, mainly licking, and even after cessation of drug infusion, the reduction of total maternal behavior remains. This decrease in maternal care reflected mainly in male offspring, increasing responses related to fear. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Os hormônios tireoidianos são essenciais no controle de múltiplas funções envolvidas na manutenção da homeostase, incluindo os processos de produção de calor e balanço energético. As relações entre o eixo hipotálamo-hipófise-tireoide e a função imunológica são complexas e ainda carecem de mais investigações. Comportamento doentio é uma expressão de um estado motivacional desencadeada pela ativação do sistema imune inato periférico, pelo qual um organismo organiza suas funções para combater a infecção. O objetivo deste trabalho foi avaliar a influência do estado tireoidiano sobre as respostas comportamentais ao desafio imunológico. O hipotireoidismo experimental foi induzido por propiltiouracil (PTU) por 30 dias (0,05%), adicionado à água de beber. As doses de 100, 200 e 500 ug/Kg de lipopolissacarídeo foram testadas para evidenciarmos o comportamento doentio. Após, camundongos controle e tratados com PTU receberam a dose de 200 ug/kg de LPS ou solução salina (ip) e as respostas comportamentais foram avaliadas durante 24 horas. Nos camundongos com hipotireoidismo induzido pelo PTU observou-se aumento do tempo de imobilidade no nado forçado (FST), maior número de esferas escondidas (MB) e comprometimento das respostas mneicas nas tarefas de reconhecimento de objetos de longa duração (LTM) e no labirinto aquático de Moris (MWM). Durante o desafio imunológico, a locomoção em campo aberto (OF) e o tempo de floating no nado forçado (FST) não foram modificados duas horas após a aplicação do LPS. Porém, nas análises após 24 horas, houve redução da atividade locomotora, aumento do tempo de floating, diminuição da ingestão de alimentos e maior perda de peso, comprometimento da memória e menor tempo de investigação social nos camundongos tratados com PTU. Além disto, observamos um menor índice térmico associado à redução da expressão de c-Fos no núcleo paraventricular (PVN) e na área pré-optica mediana (MPOA). Estes resultados demonstram que o estado tireoidiano modifica as respostas comportamentais ao desafio imunológico, sugerindo que os hormônios tireoidianos são essenciais para a manifestação do comportamento doentio durante a endotoxemia. / Thyroid hormones are essential to control of multiple functions involved in maintaining homeostasis, including heat production and energy balance processes. Relations between the hypothalamic-pituitary-thyroid axis and immune function are complex and still require further investigation. Sickness behavior is an expression of a motivational state triggered by the activation of the peripheral innate immune system, by which an organism organizes its functions to combat the infection. The aim of this study was to evaluate the influence of thyroid status on behavior responses during endotoxemy. Experimental hypothyroidism was induced by propylthiouracil (PTU) for 30 days (0.05%, added to drinking water). Different doses (100, 200 and 500 ug/Kg) of lipopolysaccharide were tested to evidence sickness behavior. Then, control and treated with PTU mice received a 200ug/Kg LPS dose or saline (ip), and behavioral responses were evaluated for 24 hours. In mice with hypothyroidism PTU-induced were observed an increase in immobility time in the forced swimming (FST), a largest number of hidden balls (MB) and an impairment of memory answers in the long term object recognition tasks (LTM) and water maze Moris (WMM). During the immune challenge, locomotion in the open field (OF) and the floating time in the FST are not modified two hours after LPS administration. However, in the analysis after 24 hours, there was a reduction in locomotor activity, increased floating time, decreased food intake and higher weight loss, learning and memory impairment and also shorter social investigation time in PTU mice. In addition, we observed a lower thermal index and reduction of c-Fos expression in the paraventricular nucleus (PVN) and medial preoptic area (mPOA). These results demonstrate that the thyroid status modifies the behavioral responses to immune challenge, suggesting that the thyroid hormones are essential for the manifestation of sickness behavior during endotoxemy. / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais - FAPEMIG

O quefir e a cerveja são conhecidos por apresentar propriedades benéficas à saúde. Assim, foram avaliadas as atividades anti-inflamatórias e antiulcerogênicas de uma cerveja produzida por grãos de quefir, frente aos desafios de edema de pata e modelo de úlcera gástrica induzida por etanol. Os grãos de quefir foram adaptados por 12 dias em extrato de malte para a produção da cerveja. O teor de polifenóis apresentado nas cervejas foi avaliado por HPLC. O perfil metabólico dos animais tratados por 30 dias com as cervejas foi determinado através das dosagens de colesterol total, HDL-colesterol, triacilglicerol, ALT, AST, catalase e glutationa peroxidase. Os resultados revelaram níveis semelhantes de cerveja polifenóis e marcadores séricos entre todos os animais tratados, mas uma diminuição significativa sobre as respostas inflamatórias 41,1 ± 5,1 na primeira hora e 47,5 ± 2,9% na terceira hora e ulcerogênicas no grupo tratado com cerveja de quefir 14, 5 ± 1,2% (P<0,05), bem como com as cervejas modificadas com o quefirano de água. Microscopia eletrônica de varredura mostrou uma camada de revestimento sobre o estômago de animais tratados apenas com as amostras a base de quefir. Estes resultados sugerem propriedades funcionais de uma “Specialty Beer” feita com grãos de quefir como único fermentador. / As kefir and beer are known to exhibit some beneficial health properties, antiinflammatory and anti-ulcerogenic activities of a beer made with kefir were assessed using rat paw edema and ethanolinduced gastric ulcer model, respectively. The polyphenol content presented in the beers was evaluated by HPLC, whereas serum cholesterol, triacylglycerol,HDL-cholesterol, ALT, AST, catalase and glutathione peroxidase of treated animals were determined by molecular absorption. The results revealed similar levels of beer polyphenols and serum markers among all treated animals, but marked decreases in inflammatory 41,1 ± 5,1 and 47,5 ± 2,9%, first and third hour respectively and ulcerogenic responses in the group treated with kefir beer 14, 5 ± 1,2% (P<0,05) and with a control beer modified with aqueous kefiran. Scanning electron microscopy showed a coating layer on the stomach of animals treated only with kefir-based samples. These results suggest a functionality of a specialty beer made with kefir as single fermenter.

A presença de endotoxina bacteriana na corrente circulatória é associada ao início e manutenção da sepse, condição complexa e heterogênea que promove a liberação de mediadores inflamatórios, os quais conduzem a alterações no sistema nervoso central e subsequente resposta imunológica inflamatória desequilibrada, com desencadeamento da síndrome da disfunção de múltiplos órgãos (SDMO). Os receptores TRPV1, por sua vez, participam da modulação de diversos sistemas e podem influenciar processos fisiológicos comprometidos por inflamação, representando potencial alvo terapêutico. O objetivo do estudo foi avaliar a participação dos receptores TRPV1 na lesão pulmonar aguda/síndrome do desconforto respiratório agudo (LPA/SDRA) e no comportamento doentio induzidos por endotoxina por meio do bloqueio de tais receptores com capsazepina (CPZ) em camundongos. No tocante à LPA/SDRA, os camundongos tiveram lesão induzida por LPS 5,0mg/kg com simultânea aplicação de CPZ e foram submetidos à análise após 24 horas. Foi observada a redução das resistências do sistema e tecidual, além da diminuição do colapso alveolar com o bloqueio dos receptores TRPV1, evidenciando a modulação da LPA/SDRA por esses receptores. Em relação ao comportamento doentio, camundongos receberam administração de CPZ 30 minutos antes da aplicação de LPS 200μg/kg, e após 2 horas foram submetidos aos testes comportamentais, coleta de sangue e tecidos. Observou-se que a administração do bloqueador atenuou os efeitos tipo-ansiosos e depressivos, o aumento de temperatura corporal e a expressão de c-fos em algumas áreas encefálicas induzidos pelo LPS. Entretanto, a CPZ não promoveu alterações na mobilidade, ingestão alimentar, ganho de peso, níveis plasmáticos de citocinas e expressão proteica dos receptores no hipocampo e hipotálamo. Tais resultados sugerem a participação dos receptores TRPV1 na modulação do comportamento doentio, na regulação da temperatura corporal e na mecânica respiratória após desafio imunológico. / Bacterial endotoxin presence in the bloodstream is associated with the onset and maintenance of sepsis, complex and heterogeneous condition that promotes the release of inflammatory mediators, which lead to changes in the central nervous system and subsequent unbalanced inflammatory immune response, with consequent multiple organ failure. The TRPV1 receptor, in turn, participate in the modulation of different systems and can influence physiological processes impaired by inflammation, and so represent a potential therapeutic target. The aim of the study was to evaluate the involvement of TRPV1 receptors in acute lung injury/ acute respiratory distress syndrome (ALI/ARDS) and in the sickness behavior induced by endotoxin, with the blockade by capsazepine (CPZ) in mice. Regarding the ALI/ARDS, animals had the disease induced by LPS 5.0mg/kg with simultaneous application of CPZ and were analyzed after 24 hours. Reduced resistance of the system and tissue was observed, in addition to decreased alveolar collapse by the blockade of TRPV1 receptors, showing a modulation by these receptors in the ALI/ARDS. Regarding sickness behavior, animals received CPZ administration 30 minutes before application of LPS 200 μg/kg, and after 2 hours were submitted to the behavioral tests and blood and tissues collection. The administration of blocker attenuated the anxious and depressive-like effects, the increased body temperature and the c-fos expression in some brain areas induced by LPS. However, CPZ did not promote changes in mobility, food intake, weight gain, plasma levels of cytokines and protein expression in the hippocampus and hypothalamus. These results suggest the involvement of TRPV1 receptors in the modulation of sickness behavior, in regulating body temperature and respiratory mechanics after immune challenge. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Submitted by Ana Rosa Silva (arosa@ufpa.br) on 2012-08-06T16:42:14Z No. of bitstreams: 2 Dissertacao_InvestigacaoPotencialCortical.pdf: 1300825 bytes, checksum: e29dc50db41425f1608dfcea32ebbc8b (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva(arosa@ufpa.br) on 2012-08-06T16:42:48Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertacao_InvestigacaoPotencialCortical.pdf: 1300825 bytes, checksum: e29dc50db41425f1608dfcea32ebbc8b (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-08-06T16:42:48Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertacao_InvestigacaoPotencialCortical.pdf: 1300825 bytes, checksum: e29dc50db41425f1608dfcea32ebbc8b (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Previous issue date: 2011 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / FINEP - Financiadora de Estudos e Projetos / FAPESPA - Fundação Amazônia de Amparo a Estudos e Pesquisas / Este trabalho avaliou o potencial cortical provocado visual de crianças com história de epilepsia com o objetivo de identificar marcadores eletrofisiológicos que indicassem alterações corticais em epilepsia. Foram estudados 34 sujeitos com história de epilepsia (18 sujeitos com epilepsia parcial e 16 com epilepsia generalizada). O grupo controle foi composto por 19 sujeitos sem história de crises epilépticas com faixa etária semelhante aos pacientes. Os componentes do potencial cortical provocado visual transiente para apresentação por padrão reverso de tabuleiros de xadrez foram avaliados quanto à amplitude, tempo implícito e razões de amplitude entre os componentes. Foi observado que os pacientes com epilepsia generalizada apresentaram componente N75 com amplitude maior que os demais grupos, enquanto as razões de amplitude N75/P100 e P100/N135foram menores em pacientes com epilepsia parcial que em outros grupos. Houve fraca correlação linear entre os parâmetros do potencial cortical provocado visual e a idade de início das crises epilépticas ou tempo de utilização das medicações antiepilépticas. Conclui-se que o componente N75 e as razões de amplitude N75/P100 e P100/N135 podem ser bons indicadores eletrofisiológicos para alterações funcionais corticais em epilepsia. / The present work evaluated the visual evoked cortical potential of children with clinical history of epilepsy in order to identify electrophysiological marker indicating cortical changes in epilepsy. Thirty-four subjects with history of epilepsy along the lifetime (18 subjects diagnosed with partial epilepsy and 16 subjects diagnosed with generalized epilepsy). The control group was composed by 19 subjects age-matched with no history of epilepsy. Visual evoked cortical potential components for pattern-reversal presentation of chessboards were evaluated in amplitude, implicit time, and amplitude ratio of components. It was observed that generalized epilepsy patients had larger N75 than other two groups, whilst N75/P100 and P100/N135 ration were smaller in partial epilepsy patients than other groups. There was weak correlation between the electrophysiological parameters and the age of seizures onset or time of antiepileptic drugs intake. In conclusion, N75 amplitude and amplitude ratio can be good electrophysiological markers to cortical changes in epilepsy.

Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2013-03-04T21:43:06Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_AvaliacaoEletrorretinograficaRatos.pdf: 1553874 bytes, checksum: 9e5c2b5ed2780fd8950f95bee4a7d614 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva(arosa@ufpa.br) on 2013-03-05T17:11:29Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_AvaliacaoEletrorretinograficaRatos.pdf: 1553874 bytes, checksum: 9e5c2b5ed2780fd8950f95bee4a7d614 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-03-05T17:11:29Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_AvaliacaoEletrorretinograficaRatos.pdf: 1553874 bytes, checksum: 9e5c2b5ed2780fd8950f95bee4a7d614 (MD5) Previous issue date: 2012 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / UFPA - Universidade Federal do Pará / A tireoide sintetiza a tiroxina (T4) e a 3,5,3’-triiodotironina (T3), ambos hormônios apresentam uma função crucial no desenvolvimento do sistema nervoso central, incluindo o sistema visual e a retina. A diminuição dos níveis sanguíneos do T3 e T4 ocasionam uma síndrome denominada de hipotireoidismo, o que pode levar à prejuízos visuais. Os déficits visuais gerados pelo hipotireoidismo estão diretamente relacionados ao período de desenvolvimento do indivíduo. Foi demonstrado em modelos murinos que o hipotireoidismo congênito diminui a espessura da retina, o número de células, e interfere na diferenciação da subpopulação de cones M. Desta forma buscaremos investigar possíveis alterações funcionais na retina de ratos wistar jovens após a tireoidectomia bilateral, utilizando respostas eletrofisiológicas não invasivas. Para tanto, dividimos os ratos em três grupos (controle, sham e tireoidectomizado) cada um contendo ≥ 8 animais. As cirurgias foram realizadas 30 dias pós-natal. Os eletrorretinogramas de campo total foram realizados 10, 15, 20, 25 e 30 dias após a cirurgia, utilizando protocolos para avaliar a resposta escotópica máxima, resposta fotópica (com e sem o uso de filtros de luz) e a resposta ao flicker (12, 15, 18 e 30 Hz). Os parâmetros analisados foram o tempo implícito e a amplitude das ondas a e b. Além disso, realizamos o monitoramento dos parâmetros clínicos dos animais, visando identificar características que indiquem um quadro de hipotireoidismo, bem como a dosagem dos hormônios tireoidianos. Os resultados obtidos demonstraram que em todos dos protocolos de estimulação utilizados no ERG houve diminuição nas amplitudes das ondas a e b nos animais tireoidectomizados em todos os dias avaliados após a cirurgia, quando comparados com animais do grupo controle e sham. Os resultados da avaliação do tempo implícito para ambas as ondas não demonstraram diferença estatística quando comparamos os diversos grupos ao controle. Também podemos constatar uma redução do ganho de peso e tamanho nos animais que sofreram tireoidectomia, associados à redução dos níveis de hormônio tireoidiano (T3). Concluímos dessa forma que os hormônios tireoidianos estão diretamente ligados a alterações funcionais na retina dos animais que sofreram tireoidectomia, bem com, na redução da aquisição de peso e aumento de tamanho. / The thyroid synthesizes thyroxine (T4) and 3,5,3 '-triiodothyronine (T3), both hormones have a crucial role in the development of the central nervous system, including the retina and visual system. The decrease in blood levels of T3 and T4 causes a syndrome called hypothyroidism, which may lead to visual impairment. The visual deficits generated by hypothyroidism are directly related to the development period of the individual. It has been demonstrated in murine models that congenital hypothyroidism decreases the retinal thickness, the number of cells and interferes with the differentiation of M cones. Here, we investigated the possible functional changes in juvenile rat’s retina after bilateral thyroidectomy using noninvasive electrophysiological responses. Therefore, we divided the rats into three groups (control, sham and thyreoidectomized) each containing n≥8 animals. The surgeries were performed 30 days post-natal and the full-field electroretinogram (ERG) were performed 10, 15, 20, 25 and 30 days after surgery, using standard protocols for assessing the scotopic response maximum, photopic response (with and without the use of light filters) and response to flicker (12, 15, 18 and 30 Hz). The parameters analyzed were implicit time and amplitude of a- and b-waves of ERG. We also perform monitoring of clinical parameters of animals in order to identify characteristics that indicate a hypothyroidism, as well as the dosage of thyroid hormones. The results showed that there was a decrease in the a- and b-waves amplitudes in thyroidectomy animals (10, 15, 20, 25 and 30 days after surgery), compared to control and sham animals at all the stimulation protocols used in ERG. The results of the evaluation of the implicit time for both waves showed none statistical difference when comparing to control and sham groups. Also we observed a reduction in size and weight of thyroidectomy animals, associated with reduced levels of thyroid hormone (T3). Thus we concluded that the thyroid hormones are directly related to functional changes in the retina of thyroidectomy animals, together with the reduction of weight and size.

Submitted by Cleide Dantas (cleidedantas@ufpa.br) on 2014-08-13T12:27:57Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_EletrofisiologiaVisaoModelo.pdf: 2711799 bytes, checksum: 837e1db907b5ec94457aabc9d56b8935 (MD5) / Approved for entry into archive by Irvana Coutinho (irvana@ufpa.br) on 2014-08-22T14:03:26Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_EletrofisiologiaVisaoModelo.pdf: 2711799 bytes, checksum: 837e1db907b5ec94457aabc9d56b8935 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-08-22T14:03:26Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_EletrofisiologiaVisaoModelo.pdf: 2711799 bytes, checksum: 837e1db907b5ec94457aabc9d56b8935 (MD5) Previous issue date: 2014 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O diabetes mellitus constitui um problema de saúde pública mundial devido ao seu potencial de morbidade e mortalidade. Esta patologia é caracterizada como uma desordem metabólica com hiperglicemia crônica, resultado de uma deficiência absoluta ou relativa na secreção e/ou ação da insulina. Associado a esse quadro, problemas com a tireoide são frequentemente encontrados em pacientes acometidos por diabetes, principalmente com o avançar da idade. Além disso, há um corpo de conhecimento que descreve que tanto o diabetes quanto o hipotiroidismo provocam isoladamente perdas visuais, no entanto, não há muitas publicações acerca da fisiologia envolvendo em conjunto ambas patologias com as complicações visuais. O presente trabalho objetivou investigar questões relevantes para uma compreensão mais detalhada do quadro de evolução do comprometimento retiniano em modelos animais acometidos concomitantemente por duas doenças: diabetes e hipotireoidismo. Para isso, foram utilizados 50 ratos Wistar machos (Rattus norvegicus), com dois meses de idade, pesando entre 80 a 120 gramas, divididos em quatro grupos: um grupo controle sem procedimentos; um grupo com hipotireoidismo optando por um modelo experimental de tireoidectomia bilateral; um grupo com diabetes, com aplicação de 200 mg/Kg a 2% de Aloxana; e dois grupos com as duas patologias, adotando ambos os procedimentos experimentais, alterando a sequência das patologias em questão. Nos grupos estudados foi utilizado para avaliar as alterações visuais, um método não invasivo amplamente utilizado no meio acadêmico que é o eletrorretinograma (ERG) em diferentes períodos de 30, 45 e 60 dias. Assim, encontramos uma diminuição da amplitude média da onda-a dos animais nos grupos com diabetes e com as duas patologias em todos os registros realizados, os que apresentaram maiores diferenças estatísticas foram em relação ao registro de estocópica máxima, como também diferença no potencial oscilatório de ambos os grupos com as duas patologias. Os resultados obtidos dão suporte à hipótese que as duas patologias concomitantes (diabetes e hipotireoidismo) diminuem significativamente as respostas do ERG. / Diabetes mellitus is a worldwide public health problem because of its potential morbidity and mortality. This pathology is characterized as a metabolic disorder with chronic hyperglycemia, results from an absolute or relative deficiency in the secretion and/or insulin action. Associated to this case, problems with the thyroid are often found in patients with diabetes, especially with advancing age. Furthermore, there is a body of knowledge describing that both diabetes and hypothyroidism cause visual loss, however, there are not many publications on the physiology involving both pathologies in conjunction with the visual complications. Therefore, this work aimed to investigate issues relevant to a more detailed understanding of the framework for the evolution of retinal impairment in animal models simultaneously affected by two diseases: diabetes and hypothyroidism. For this, 50 male Wistar rats (Rattus norvegicus) were used, two-months-old, weighing between 80 to 120 grams, divided into four groups: a control group without procedures; a group with hypothyroidism opting for a bilateral experimental model of thyroidectomy; a group with diabetes, with application of 200 mg/kg to 2% Aloxana; and two groups with both pathologies, adopting both experimental procedures by changing the sequence of the pathologies in question. In the studied groups, it was used the electroretinogram (ERG), a non-invasive method widely used in academia to evaluate the visual changes, in different periods of 30, 45 and 60 days. We found a decrease in the average amplitude of the wave-a of the animals in the groups with diabetes and with both pathologies in all the realized registrations, the ones that showed the highest statistical differences were in relation to the registration of maximum estocópica, as well as difference in oscillatory potential of both groups with both pathologies. These results support the hypothesis that both concomitant pathologies (diabetes and hypothyroidism) significantly diminish the ERG responses.

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:22:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TeseCKM.pdf: 1278719 bytes, checksum: e6f475e245c9c48760e1aefa654ef6c0 (MD5) Previous issue date: 2006-06-08 / Universidade Federal de Minas Gerais / ACLF is a fibrinolytic non-hemorrhagic metallopeptidase from the venom of the snake Agkistrodon contortrix laticinctus. rACLF is synthesized as a zymogen (pro- ACLF) with 412 aminoacids, while the active form of enzyme has 222 aminoacids. The ORF (open reading frame) that codes for the peptidase was isolated (from a cDNA venom gland library of A. contortrix. lacticinctus ) and characterized. This work shows the effects of rACLF on endothelial cells (HUVECs), tumor cells (HeLa, MDA-MB-231 and MCF-7) and non-tumor cell (fibroblast) as well its proteolytic activity on extracellular matrix proteins. Our results showed that rACLF inhibited the apoptosis induced by serum deprivation in HUVECs, but had no effect on cell proliferation. rACLF had direct effect on HUVECs, since it was observed an increased amount of IL-8 in the cell supernatants, in addition to the expression induction of molecules related to adhesion and inflammation processes. rACLF and rACLH were not cytotoxic to human fibroblasts. On the other hand, both proteins caused decrease of cell viability, changes in morphology, and detachment of HeLa cells. On human fibroblasts, rACLF modulated the expression of chemokines CXC, IL-8 and GRO, and chemokine CC, MCP1. The supernatant of human fibroblasts and HeLa cells were analyzed for MMP-2 (gelatinase-A) secretion. No difference was observed after 48 h incubation with rACLF and controls. rACLF presented hydrolytic activity on extracellular matrix proteins, such as laminin, fibronectin, collagen IV, and thrombospondin. Furthermore, hydrolytic activity on insulin &#946; chain peptide was tested and compared to rACLH activity. rACLF was shown to be more efficient than rACLH on this substrate. In conclusion, the results of this study increased the knowledge on the protein effects on different cell lines and open up perspectives for new studies concerning signaling and regulation mechanisms affected by this protein activity. / A ACLF é uma metalopeptidase da peçonha da serpente Agkistrondon contortrix laticinctus. A ACLF é sintetizada na forma de zimogênio (pró-ACLF) com 412 aminoácidos, enquanto a sua forma ativa possui 222 aminoácidos. A fase aberta de leitura que codifica para a peptidase foi isolada (de uma biblioteca de cDNA feita a partir da glândula venenífera da serpente) e caracterizada. Este trabalho apresenta os efeitos da rACLF em células endoteliais (HUVECs), tumorais (HeLa, MDA-MB-231 e MCF-7) e não-tumorais (fibroblastos), bem como a atividade proteolítica da enzima sobre proteínas da matriz extracelular, como colágeno, fibronectina, laminina e trombospondina. Nossos resultados demonstraram que a rACLF inibiu a apoptose induzida por privação de soro fetal bovino em HUVECs, mas não foi capaz de induzir a proliferação celular. A rACLF apresentou efeito direto sobre as células endoteliais, aumentando a liberação de IL-8, além de induzir a expressão de moléculas envolvidas na adesão celular e reposta inflamatória. A rACLF e a rACLH não foram citotóxicas para fibroblastos humanos. Por outro lado as duas enzimas estudadas causaram redução na viabilidade alteração na morfologia e desgrudamento em células HeLa. Em fibroblastos, a rACLF modulou a expressão das quimoquinas CXC, IL-8 e GRO e CC, MCP1. Nos sobrenadantes de fibroblastos e HeLa incubados com rACLF por 48 h não foi observada diferença na secreção de MMP-2 (gelatinase-A). A rACLF apresentou atividade sobre proteínas da matriz extracelular, como laminina, fibronectina, colágeno IV e trombospondina. A rACLF também hidrolisou alguns substratos fluorogênicos e foi mais eficiente na hidrólise do substrato correspondente ao peptídeo central da cadeia &#946; da insulina, quando comparada com a rACLH .Os resultados deste trabalho contribuíram para melhor entendimento dos efeitos da proteína estudada sobre diferentes linhagens celulares e abrem perspectivas para novos estudos voltados à elucidação dos mecanismos de regulação e sinalização afetados pela atividade da proteína.

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:22:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DoutLCPM.pdf: 584106 bytes, checksum: b355f1fcb37c7c5f0e92501d271f22e2 (MD5) Previous issue date: 2003-11-05 / Universidade Federal de Minas Gerais / Ovariectomized (ovx) rat bones were used to evaluate the effects of sodium fluoride treatment on bone physical, chemical and biomechanical parameters. Wistar rats, with four months of age, were randomly divided in: basal, intact and ovx treated with sodium fluoride (0, 20, 40, 60, 80 and 100 ppm) groups. The basal group was sacrificed in the beginning of the experiment and the other groups after 2, 4, 6 and 8 months of treatment. Bone demineralization of femur due to osteopenia (induced by sexual steroids deficiency) resulted in lower values of bone density that resulted in lower values of biomechanical parameters when compared to intact group. Higher values of maximum force, failure force, resilience and stiffness of femur from ovx group treated with sodium fluoride, when compared to ovx group, were observed. The use of sodium fluoride as a therapeutic agent inhibited the osteopenia induced by castration and enhanced the bone quality, mainly when low dose was used (40 ppm)during short periods of treatment (2 and 4 months). / Características ósseas de ratas ovariectomizadas tratadas com fluoreto de sódio Ossos de ratas ovariectomizadas foram utilizados para avaliar os efeitos do tratamento com fluoreto de sódio sobre as características físicas,químicas e biomecânicas. Ratas Wistar, com 4 meses de idade foram divididas em vários grupos (Grupo basal, intactas, e ovariectomizadas tratadas com várias dosagens de fluoreto de sódio (0, 20, 40, 60, 80 e 100ppm). O grupo basal foi sacrificado no início do experimento e os outros grupos após 2 ,4, 6 e 8 meses de tratamento. A desmineralização óssea ocorrida nos fêmures provocada pela osteopenia propiciou resultados menores de densidade óssea e valores biomecânicos dos ossos quando comparados com o grupo intacto. Resultados maiores para carga máxima, carga de ruptura, resiliência e rigidez foram observados neste estudo para os grupos castrados e tratados com fluoreto de sódio quando comparados com os grupos ovariectomizados. A utilização do fluoreto de sódio como agente terapêutico inibiu a perda óssea induzida em ratas ovariectomizadas e propiciou melhorias das qualidades ósseas, principalmente quando utilizou-se dosagem baixa (40 ppm) e períodos curtos de ingestão ( 2 e 4 meses).

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:22:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TeseMRC.pdf: 2769640 bytes, checksum: 6788308a574e038c255f1acad41740d0 (MD5) Previous issue date: 2004-06-09 / Universidade Federal de Minas Gerais / This work presents the isolation and biological characterization of a novel metalloprotease/disintegrin, BaG, isolated from the Bothrops alternatus snake venom. BaG was purified in a two-step chromatographic model using Gelatin-Sepharose and DEAE-Sepharose resins. The molecular mass of purified protein was estimated by SDS-PAGE as approximately 130kDa under non-reducing conditions and 55kDa under reducing conditions. This result suggests a dimeric structure for BaG. BaG shows proteolytic activity on casein, which was inhibited by EDTA. This protein did not induce any hemorrhage when applied intradermally in mice at doses up to 10µg. 1,10-phenanthroline-treated BaG (BaG-I) inhibits ADPinduced platelet aggregation with an IC50 of approximately 180nM. BaG-I also inhibits fibronectina-mediated cell adhesion with an IC50 of 3.65µM. K562 cells bind to BaG-I probably though interaction with integrin &#945;5&#946;1, since anti-&#945;5&#946;1 antibodies inhibited K562 cell adhesion to BaG-I. BaG-I also induces the detachment of K562 cell previously bound to fibronectin and decreases the number of viable K562 cells after 24, 48 and 72h of incubation. In the second part of this work, gene expression analyses in human fibroblasts treated with alternagin-C (ALT-C) were carried out. ALTC is a disintegrin-like/cysteine-rich protein isolated from the venom of B. alternatus. This protein induces the expression of various cell signaling- and cell proliferation-related genes including VEGF, which was confirmed by ELISA analysis. This induction could explain some previous results showing that ALT-C stimulates cell proliferation in endothelial cells. / Esta tese apresenta o isolamento e a caracterização biológica de uma metaloprotease/desintegrina, BaG, isolada a partir do veneno bruto da serpente Bothrops alternatus. A BaG foi purificada através de duas etapas cromatográficas em resina de Gelatina-Sepharose 4B e DEAESepharose. A massa molecular da proteína purificada foi de aproximadamente 130kDa em condições não redutoras e de 55kDa em condições redutoras. Tal comportamento migratório distinto em SDSPAGE sugere uma estrutura dimérica para a BaG. A BaG apresentou atividade proteolítica sobre a caseína, a qual foi inibida na presença de EDTA. A BaG (10µg) não foi capaz de formar halos hemorrágicos após ser introduzida sub-cutaneamente em camundongos, o que sugere um caráter não hemorrágico para esta proteína. A BaG tratada com 1,10- fenantrolina (BaG-I) inibiu a agregação plaquetária induzida por ADP com um IC50 de 180nM e a inibiu também a adesão de células da linhagem K562, mediada por fibronectina com um IC50 de 3,65µM. A BaG liga-se à integrina &#945;5&#946;1, presente na superfície das células K562 e é capaz de promover a desadesão destas células, previamente aderias à fibronectina, além de diminuir a viabilidade desta mesma linhagem celular após 24, 48 e 72h de incubação. Na segunda parte deste trabalho, foram realizadas análises de expressão gênica em fibroblastos humanos, após o tratamento destes com a alternagina-C (ALT-C). A ALT-C é uma proteína que apresenta os domínios desintegrina-like/rico em cisteína, isolada do veneno de B. alternatus. Esta proteína mostrou induzir a expressão de várias moléculas relacionadas a eventos de proliferação e sinalização celular, dentre elas o VEGF, o que foi comprovado através de ensaios de ELISA. Este indução da expressão de VEGF poderia explicar resultados prévios obtidos com a ALT-C nos quais esta proteína é capaz de induzir a proliferação em células endoteliais.