Submitted by Franciele Moreira (francielemoreyra@gmail.com) on 2018-08-14T13:28:54Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Dienny Rodrigues de Souza - 2018.pdf: 2932501 bytes, checksum: b9f00bbcfe53fb6001ad592bd08bbc63 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2018-08-16T11:24:33Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Dienny Rodrigues de Souza - 2018.pdf: 2932501 bytes, checksum: b9f00bbcfe53fb6001ad592bd08bbc63 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-16T11:24:33Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Dienny Rodrigues de Souza - 2018.pdf: 2932501 bytes, checksum: b9f00bbcfe53fb6001ad592bd08bbc63 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2018-07-02 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Leptospirosis is a zoonosis caused by pathogenic spirochetes belonging to the genus Leptospira. The disease may progress to acute renal failure (Weil's Syndrome) and severe pulmonary haemorrhagic syndrome (SPHS), with a mortality rate of > 50%. The highest incidence of the disease occurs among the poorer populations and is associated with the lack of basic sanitation that gets worse during periods of heavy rainfall and flooding. Rodents and dogs are the main sources of transmission of the disease. Therefore, the identification of infected animals is essential towards eliminating reservoir hosts such as dogs and rodents. Therefore, means allowing the identification of leptospira infection in dogs and rodents is essential to permit control actions, decreasing the infection rate in the environment and consequently helping to prevent disease in humans. The objective of this study was to develop prototypes of lateral flow immunochromatographic tests to aid in the diagnosis and control of leptospirosis. The design used in the prototypes was based on a lateral flow immunochromatographic test for direct detection of specific antibodies using a recombinant antigen, known as rLigBrep, attached to the nitrocellulose membrane test line. As an antigen/antibody binding marker, polyvalent antibodies were conjugated to 40 nm colloidal gold, murine anti-mouse immunoglobulin for the murine, anti-canine (Rockland) and anti-canine IgG (Jackson) for canine prototypes. The canine prototypes were tested with 10 positive samples and 10 negative samples previously confirmed by the MAT and ELISA for canine leptospirosis. The staining intensity was recorded on a scale of 0 to 3. Low concentrations of rLigBrep antigen resulted in weak staining intensity. The results of the murine prototype provided the basic specifications to developed the canine prototypes. In the first canine prototype using Rockland conjugate, 5/10 positive samples presented staining intensity of 1. In the canine prototype using Jackson conjugate, 9/10 positive samples presented staining intensity variation of 1 to 3. The results of negative samples 8/10 presented a tenuous staining intensity on the test line, indicating the necessity to reduce the concentration of antigen and/or conjugate on the test. The studied prototypes were not evaluated to determine sensibility and specificity as they didn’t present similar results obtained on ELISA and MAT. Therefore, it has not been defined if the rLigBrep protein can be utilized in the development of a rapid immunochromatography test for the diagnosis of canine leptospirosis and as a marker of infection in rodents. / A leptospirose é uma zoonose causada por espiroquetas patogênicas do gênero Leptospira. A doença pode progredir para falência renal aguda (Síndrome de Weil) e síndrome hemorrágica pulmonar severa (SPHS), com taxa de mortalidade > 50%. A maior incidência da doença ocorre em populações mais carentes, ligada a deficiências em saneamento básico agravando-se em períodos de chuvas constantes e enchentes. Os roedores e os cães são os principais transmissores da doença. Portanto, meios que permitam a identificação de infecção por lepstospira em cães e roedores é essencial para permitir ações de controle, diminuindo a taxa de infecção no meio ambiente e consequentemente auxiliando na prevenção da doença nos humanos. O objetivo desse estudo foi desenvolver protótipos de testes imunocromatograficos de fluxo lateral para auxiliar no diagnóstico e controle da leptospirose. O desenho utilizado nos protótipos se baseiam em um teste imunocromatográfico de fluxo lateral para detecção direta de anticorpos específicos, utilizando antígeno recombinante rLigBrep fixado na linha teste da membrana de nitrocelulose. Como marcador da ligação antígeno/anticorpo foram utilizado nanoparticulas deouro coloidal de 40 nm conjugados a anti-imunoglobulina murina polivalente para o protótipo murino, anticorpo policlonal anti-IgG F(c) canino da Rockland e anticorpo policlonal anti-IgG F(c) canino da Jackson para os protótipos caninos. Os protótipos caninos foram testados com 10 amostras positivas e 10 amostras negativas confirmadas em MAT e ELISA para leptospirose canina. A intensidade de coloração dos resultados foi registrada em escala entre 0 a 3. As especificações dos materiais e concentrações do protótipo murino serviram de base para o desenvolvimento do protótipo canino. No protótipo canino utilizando conjugado Rockland, 5/10 amostras positivas apresentaram intensidade de coloração 1. Com o protótipo canino, utilizando conjugado Jackson, nas 9/10 amostras positivas a intensidade de coloração variou de 1 a 3. Entre resultados das amostras negativas 8/10 apresentaram uma coloração tênue na linha teste, indicando a necessidade de reduzir a concentração de antígeno e/ou conjugado no teste. Os protótipos estudados não foram avaliados para determinar a sensibilidade e especificidade pois ainda não apresentaram resultados semelhantes aos obtidos em ELISA e MAT. Portanto, não foi definido se proteína rLigBrep pode ser utilizada no desenvolvimento de um teste imunocromatográfico rápido para diagnóstico de leptospirose canina e como marcador de infecção por leptospiras em roedores.

Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2015-10-21T17:09:00Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Monalisa Martins Trentini - 2014.pdf: 3160453 bytes, checksum: bcd4f593c1bbefa247afd83aa66ef627 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2015-10-21T17:16:56Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Monalisa Martins Trentini - 2014.pdf: 3160453 bytes, checksum: bcd4f593c1bbefa247afd83aa66ef627 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-21T17:16:56Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Monalisa Martins Trentini - 2014.pdf: 3160453 bytes, checksum: bcd4f593c1bbefa247afd83aa66ef627 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2014-02-27 / Tuberculosis is a disease that affects thousands of people in the World. Although Brazil Health Program had achieved the goal of reducing to 50% the rate of death induced by Tuberculosis, this disease continues to be the second cause of death by infectious disease. One of the main problems to control the disease is the low efficacy of BCG vaccine in protecting young adults. The development of new vaccines that induces long lasting immune response or that stimulate the immunity induced by BCG may improve the control of TB spreading. This study evaluated the use of microstructured liposomes containing HspX with or without MPL or CpG DNA adjuvants as vaccine for tuberculosis. The HspX specific humoral and cellular immune responses were compared between the different vaccine formulations. All vaccines containing liposome microparticules and HspX were immunogenic and antigenic. Vaccines formulated with CpG DNA and HspX induced the strongest humoral and cellular immune responses, mainly by generating IFN- and TNF-by both CD4 and CD8 T cells. HspX and MPL mainly induced CD8 T cell activation and humoral specific responses. After protection efficacy evaluation against Mycobacterium tuberculosis challenge, the vaccine formulation that reduced both lung inflammatory lesions and the bacterial load was the microstructured liposome containing HspX and CPG DNA. These results show for the first time the use of microstructured liposome as adjuvant and delivery system in HspX vaccine formulation for tuberculosis. / A tuberculose é uma doença que acomete milhões de indivíduos no mundo. No Brasil esta doença é a segunda causa de morte por doença infectocontagiosa, embora o País tenha reduzido a metade o numero de mortes por tuberculose. Um dos principais problemas para o controle desta doença é a baixa eficácia da vacina BCG em proteger adultos. O desenvolvimento de novas vacinas que induzam uma resposta imune eficaz e duradoura, ou que estimulem a BCG a aumentar a imunidade já existente é de grande valia. O objetivo desta dissertação foi avaliar e comparar se lipossomas microestruturados contendo HspX em diferentes formulações vacinais, associados ou não a adjuvantes conhecidos: CpG DNA ou MPL poderiam influenciar na resposta imune humoral e celular de camundongos contra o Mycobacterium tuberculosis. Nossos resultados mostram que lipossomas microestruturados contendo HspX foram imunogênicos e antigênicos. As formulações vacinais contendo o adjuvante CpG DNA foram as principais indutoras de resposta humoral e celular específica, principalmente com produção de IFN- e TNF- tanto por linfócitos T CD4+ quanto CD8+. Formulações vacinais contendo HspX e MPL induziram resposta imune humoral e ativaram principalmente linfócitos T CD8. A formulação vacinal que melhor reduziu as lesões pulmonares provocadas pelo Mycobacterium tuberculosis, assim como a carga bacilar foi a composta por lipossomas microestruturados contendo HspX e CpG DNA. Estes resultados demonstram pela primeira vez o uso de lipossomas microestruturados em formulações de vacinas com o antígeno HspX para a tuberculose.

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-09-12T15:05:04Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Luciana da Silva Brito.pdf: 1123595 bytes, checksum: ae18a19335fe4f2a2bd36e831b9ac2fd (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-09-12T15:05:18Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Luciana da Silva Brito.pdf: 1123595 bytes, checksum: ae18a19335fe4f2a2bd36e831b9ac2fd (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-09-12T15:05:30Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Luciana da Silva Brito.pdf: 1123595 bytes, checksum: ae18a19335fe4f2a2bd36e831b9ac2fd (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-12T15:05:30Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Luciana da Silva Brito.pdf: 1123595 bytes, checksum: ae18a19335fe4f2a2bd36e831b9ac2fd (MD5) Previous issue date: 2013-08-30 / The poultry industry is an important economic activity in many countries. In large-scale installations of creation, which birds are exposed to stressors, problems related to diseases and deteriorating environmental conditions often occur and result in serious economic losses. Despite being a relatively old disease, coccidiosis is still one of the main diseases causing economic losses in broilers and breeders. This study aims to evaluate the metabolic and pathological changes in broilers experimentally infected with oocysts of Eimeria maxima. The research was conducted at the School of Veterinary Medicine and Animal Science of the Federal University of Tocantins (UFT), located in the municipality of Araguaína - TO, being performed the experimental protocol and analysis husbandry, in the Histology Laboratory of the Federal University of Amazonas (UFAM ) in Manaus-AM, where I made the preparation and analysis of histological slides, and the Laboratory of Clinical Analysis of the Regional Hospital of Coari, from Coari - AM, where biochemical analyzes were performed. To perform the experiment, we used 150 broiler strain cooB males, with ten days of age were randomized according to weight and randomly assigned to two experimental groups: control group was inoculated with 0.5 ml of distilled water; infected group inoculated with 0.5 ml of solution containing 5x104 sporulated oocysts of Eimeria maxima. The live performance was evaluated at 0 (day of inoculation), 5 °, 10 °, 15 °, 25 ° and 35 ° dpi, being slaughtered by cervical dislocation, fifteen birds / group. The first clinical signs were noticeable on the 5th dpi, where the birds showed apathy followed by fetid diarrhea, mucoid, ruffled feathers and lower weight gain compared with the control group of birds. At the end of the experiment the control group produced 28.839 kg of meat infected group and 28.053 kg of meat of chickens used in the study. Although the sum in beef production was higher in the control group The weight of the heart and gizzard of the experimental animals showed no significant difference, because the liver had difference on day 5 °, 15 ° and 35 ° dpi. As for hematócrit experimental chickens showed no significant difference (p> 0.05) from baseline to the end of the experiment, 5 ° - 35 ° dpi. Protein levels remained significant (p <0.05) on all days of collection. The pathologic evaluation showed congested mucosa and presence of large amounts of mucus at 6 dpi. Therefore, it is concluded that the dose of 5x103 E. Maximum inoculated in the experimental group was enough to cause harm to the animal organism. / A avicultura é considerada uma importante atividade econômica em diversos países. Em instalações de grande escala de criação, onde aves são expostas a fatores estressantes, problemas relacionados a doenças e deterioração das condições ambientais ocorrem freqüentemente e resultam em graves perdas econômicas. Apesar de ser uma doença relativamente antiga, a coccidiose ainda é uma das principais enfermidades causadoras de perdas econômicas em frangos de corte e reprodutoras. O presente trabalho visa avaliar as alterações patológicas e metabólicas em frangos de corte infectados experimentalmente com oocistos esporulados de Eimeria maxima. A pesquisa foi desenvolvida na Escola de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade Federal do Tocantins (UFT), localizada no município de Araguaína – TO, onde foram realizados o protocolo experimental e as análises zootécnicas; no Laboratório de Histologia da Universidade Federal do Amazonas (UFAM), em Manaus-AM, onde foram realizadas a confecção e análise das lâminas histológicas; e no Laboratório de Análises Clinicas do Hospital Regional de Coari, município de Coari – AM, onde foram feitas as análises bioquímicas. Para realização do experimento, foram utilizados 150 frangos de corte da linhagem Coob, machos, com dez dias de idade, randomizados de acordo com o peso e distribuídos em dois grupos experimentais: grupo controle, sendo inoculado com 0,5 ml de água destilada; grupo infectado, inoculado com 0,5ml de solução contendo 5x104 oocistos esporulados de Eimeria maxima. O desempenho zootécnico foi avaliado no 0 (dia da inoculação), 5°, 10°, 15°, 25° e 35° dpi, sendo abatidas, por deslocamento cervical, quinze aves/grupo. Os primeiros sinais clínicos foram perceptíveis no 5º dpi, onde as aves apresentaram apatia seguida de diarreia fétida, mucóide, penas eriçadas e ganho de peso inferior quando comparado com as aves do grupo controle. Ao final do experimento o grupo controle produziu 28,839 kg de carne e o grupo infectado 28,053kg de carne dos frangos utilizados no trabalho. Apesar da somatória na produção da carne ter sido maior no grupo controle O peso do coração e da moela dos animais experimentais não apresentou diferença significativa, já o fígado teve diferença no dia 5°, 15° e 35° dpi. Quanto ao hematócrito os frangos experimentais não apresentaram diferença significativa (p>0,05) desde o início do experimento até o final, 5° - 35°dpi. Os níveis de proteínas mantiveram- se significantes (p<0,05) em todos os dias de coleta. A avaliação patológica evidenciou mucosa congesta e presença de grande quantidade de muco no 6º dpi. Diante disso, conclui- se que a dose de 5x103 de E. maxima inoculada no grupo experimental foi suficiente para ocasionar danos ao organismo animal.

Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2014-11-20T11:55:44Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Camila Imai Morato - 2013.pdf: 4002125 bytes, checksum: 75c6fdada46a41f441e1dc6455c95483 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2014-11-20T11:56:10Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Camila Imai Morato - 2013.pdf: 4002125 bytes, checksum: 75c6fdada46a41f441e1dc6455c95483 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-20T11:56:10Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Camila Imai Morato - 2013.pdf: 4002125 bytes, checksum: 75c6fdada46a41f441e1dc6455c95483 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2013-02-22 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The American Tegumentary Leishmaniasis (ATL) is an infectious disease caused by parasitic protozoa of the genus Leishmania, whose most prevalent species in Brazil is L. (Viannia) braziliensis. The human macrophage infection with L. (V.) braziliensis has been poorly investigated and is not known whether leukotrienes, lipid mediators produced by macrophages, may modulate this infection. The objective of this study was to evaluate whether leukotrienes modulate infection of human macrophages with L. (V.) braziliensis IMG3, a field clinical isolate. Human monocyte-derived macrophages were infected with promastigote forms of MHOM/BR/2003/IMG (IMG3) at a ratio of ~ 10:1 (parasite:cell). Cultures were incubated for 4 h and then washed to remove excess extracellular parasites, and incubated for additional 24, 48 or 72 h. To inhibit leukotriene synthesis, the cultures were treated with MK0591 and to antagonize the LTB4 receptor, CP-105, 696. LTB4 was also added to the cultures. The measurement of LTB4 was performed on culture supernatants using enzyme immunoassay. To evaluate the involvement of reactive oxygen intermediates (ROI) and nitric oxide (NO) their respective inhibitors were used, apocynin and aminoguanidine. To assess the production of ROIs it was used nitroblue tetrazolium salt (NBT). The IMG3 infected human macrophages, being selected periods of 4 h and 48 h incubation to assess phagocytosis and microbicidal activity, respectively. Treatments with MK0591 or CP105, 696 significantly increased the infection index after 4 h or 48 h incubation (p <005). The results show that the presence of MK0591 is need during whole incubation time (48 h) but not the LTB4 antagonist, whose effect is maintained after incubation for 4 h. The addition of LTB4 to the cultures significantly decreased macrophage infection, both during the first 4 h and after 48 h of incubation (p <0.05). The parasites induced LTB4 production in macrophage cultures during the first 30 min, but this production decreased after 4 h (p <0.05). The ROI and NO inhibitors significantly increased the infection index, before (ROI and NO) or after treatment with LTB4 (ROI). Preliminary results showed that production of superoxide anion is induced by parasites and this is further increased by LTB4. In conclusion, the results suggest that human macrophages produce leukotrienes following infection with L. (V.) braziliensis, and the main of them is LTB4. The LTB4 inhibits phagocytosis and enhances the microbicidal activity of macrophages, contributing to control of the infection. Results suggest that L. (V.) braziliensis induces LTB4, NO and ROI production and, in turn, LTB4 increases the microbicidal activity of macrophages via increase of ROI. Understanding the involvement of leukotrienes in the control of human macrophage infection with L. (V.) braziliensis can lead to the development of novel therapeutic targets for ATL. / A Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) é uma doença infecto-parasitária causada por protozoários do gênero Leishmania, cuja espécie mais prevalente no Brasil é L. (Viannia) braziliensis.A infecção de macrófagos humanos com L. (V.) braziliensis tem sido pouco estudada e não é conhecido se os leucotrienos, mediadores lipídicos produzidos por macrófagos, podem modular a infecção destas células por este parasito. O objetivo deste trabalho foi avaliar se os leucotrienos modulam a infecção de macrófagos humanos pelo isolado L. (V.) braziliensis IMG3. Macrófagos humanos foram derivados de monócitos do sangue periférico e infectados com formas promastigotas do isolado MHOM/BR/2003/IMG (IMG3) na proporção de ~10:1 (parasitos:célula). As culturas foram incubadas por 4 h, sendo em seguida lavadas para retirar o excesso de parasitos extracelulares, e incubadas por adicionais 24, 48 ou 72 h. Para inibir a síntese dos leucotrienos, as culturas foram tratadas com MK0591 e para antagonizar o receptor de LTB4, CP-105,696. O LTB4 também foi adicionado às culturas. A dosagem de LTB4 foi realizada nos sobrenadantes das culturas, usando ensaio imunoenzimático. Para avaliar a participação de espécies intermediárias do oxigênio (ROI) e do óxido nítrico (NO), foram utilizados os seus respectivos inibidores, apocinina e aminoguanidina. Para avaliar a produção de ROIs foi utilizada a técnica do azul de tetrazólio (NBT). O isolado IMG3 infectou os macrófagos humanos, sendo selecionados os períodos de 4 h e 48 h de incubação para avaliar a fagocitose e a atividade microbicida, respectivamente. Os tratamentos com MK0591 ou CP105,696 aumentaram significantemente o índice de infecção, após 4 h ou 48 h de incubação (p < 005). Os resultados mostraram que há necessidade da presença do composto MK0591 durante todo o período de incubação (48 h), mas não a do antagonista do LTB4, cujo efeito é mantido após incubação por 4 h. A adição de LTB4 às culturas diminuiu significantemente a infecção dos macrófagos, tanto durante as primeiras 4 h quanto após 48 h de cultura (p < 0,05). Os parasitos induziram a produção de LTB4 nas culturas de macrófagos nos primeiros 30 min, caindo esta produção após 4 h (p < 0,05). Além disso, o uso de inibidores de ROI e NO aumentaram significantemente a infecção de macrófagos antes (ROI e NO) ou após a ativação com LTB4 (ROI). Os resultados preliminares mostram a produção de ânion superóxido, induzida pelos parasitos e uma tendência no aumento pelo LTB4. Em conclusão, os resultados sugerem que os macrófagos humanos produzem leucotrienos após a infecção por L. (V.) braziliensis, sendo o LTB4 o principal leucotrieno produzido. O LTB4 inibe a fagocitose e aumenta a atividade microbicida dos macrófagos, contribuindo para diminuir a infecção. Os resultados sugerem que há produção de ROI e NO após infecção com L. (V.) braziliensis e que o LTB4 aumenta a atividade microbicida dos macrófagos via aumento da produção de ROI. Entender a participação dos leucotrienos no controle da infecção de macrófagos humanos por L. (V.) braziliensis pode levar à descoberta de novos alvos terapêuticos para a LTA.

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-03-16T14:07:25Z No. of bitstreams: 2 Dissertação_ Marissa B. Anjos.pdf: 1468936 bytes, checksum: 00b93348700901474a18adf50c5298fa (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-03-16T14:07:42Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação_ Marissa B. Anjos.pdf: 1468936 bytes, checksum: 00b93348700901474a18adf50c5298fa (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-16T14:07:42Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação_ Marissa B. Anjos.pdf: 1468936 bytes, checksum: 00b93348700901474a18adf50c5298fa (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-09-29 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Aqueous extract from Bellucia dichotoma bark (EaBd) has traditionally been used in cases of snakes-bites accidents and has been shown to be promising against Bothrops atrox (VBa) poisoning. Antibothropic serum (SAB) is the conventional therapy after the accident with B. atrox. There is evidence of the local blocking action of EaBd in poisoned mice, however studies of the systemic action of this plant against VBa are lacking. The association between EaBd and SAB could also be an alternative for the injured. The spleen is the site responsible for filtration, immune response of the blood, as well as site of extramedullary hematopoiesis. In the present study, Swiss mice were challenged with bothropic venom and treated with Bellucia dichotoma, using the same extract concentration and native population preparation conditions, in order to investigate the action of venom and the possible antiofidic effect of EaBd in the period of 24 h. Thus, five experimental treatments (n = 4) were established: saline, VBa (Bothrops atrox venom), EaBd, EaBd/SAB and SAB. After the experimental period, the animals were sacrificed and the spleens removed and fixed in buffered formalin for further processing in histological resin. Each organ was serially sectioned (9-12 sections/organ) that allowed the determination of the total volume of the spleen and its microstructure according to modern stereological techniques. B. atrox venom reduced the volume of the erythropoietic region of the red pulp and the volume of the periarteriolar lymphoid sheath (PALS), a region rich in T lymphocytes of the white pulp. In addition, the population of follicular macrophages was significantly increased in the VBa group in relation to the other groups. The treatment EaBd and EaBd/SAB did not present significant changes, except for the capsule component that was increased in EaBd/SAB. The treatments involving the extract were also similar to saline and SAB treatments. In conclusion, the aqueous extract of B. dichotoma administered orally shortly after B. atrox poisoning is effective in inhibiting the quantitative morphological changes in the spleen of mice poisoned when evaluated after 24 hours. / O extrato aquoso da casca de Bellucia dichotoma (EaBd) é utilizado tradicionalmente em casos de acidentes ofídicos e tem se mostrado como promissor contra o envenenamento por Bothrops atrox (VBa). O soro antibotrópico (SAB) é a terapia convencional após o acidente com B. atrox. Há evidencias da ação bloqueadora local de EaBd em camundongos envenenados, contudo faltam estudos da ação sistêmica dessa planta contra VBa. A associação entre EaBd e SAB também poderia ser uma alternativa para o acidentado. O baço é o sítio responsável pela filtração, resposta imune do sangue, como também local da hematopoiese extramedular. No presente estudo, camundongos Swiss foram desafiados com o veneno botrópico e tratados com Bellucia dichotoma, utilizando a mesma concentração do extrato e condições de preparo da população nativa, a fim de investigar a ação do veneno e o possível efeito antiofídico do EaBd no período de 24 h. Assim, cinco tratamentos experimentais (n=4) foram estabelecidos: salina, (veneno de Bothrops atrox) VBa, VBa/EaBd, VBa/EaBd/SAB (soro antibotrópico) e VBa/SAB. Após o período experimental, os animais foram sacrificados e os baços removidos e fixados em formalina tamponada para posterior processamento em resina histológica. Cada órgão foi serialmente seccionado (9-12 seções/órgão) que permitiram a determinação do volume total do baço e de sua microestrutura segundo as modernas técnicas estereológicas. O veneno de B. atrox reduziu o volume da região eritropoiética da polpa vermelha e o volume da bainha linfoide periarteriolar (PALS), região rica em linfócitos T da polpa branca. Além disso, a população de macrófagos foliculares esteve significativamente aumentada no grupo VBa em relação aos demais grupos. O tratamento EaBd e EaBd/SAB não apresentaram alterações significativas, com exceção do componente cápsula que esteve aumentado em EaBd/SAB. Os tratamentos envolvendo o extrato também mostraram-se similares aos tratamentos salina e SAB. Em conclusão, o extrato aquoso de B. dichotoma administrado por via oral logo após o envenenamento por B. atrox é efetivo na inibição das alterações morfológicas quantitativas no baço de camundongos envenenado quando avaliados após 24 horas.

Submitted by Cássia Santos (cassia.bcufg@gmail.com) on 2016-12-16T09:22:11Z No. of bitstreams: 2 Tese - Aline de Araujo Freitas - 2015.pdf: 4592269 bytes, checksum: 4e3d268a1c9a9eb3594460d9effc4237 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Silva (jtas29@gmail.com) on 2016-12-16T13:48:42Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Aline de Araujo Freitas - 2015.pdf: 4592269 bytes, checksum: 4e3d268a1c9a9eb3594460d9effc4237 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-16T13:48:42Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Aline de Araujo Freitas - 2015.pdf: 4592269 bytes, checksum: 4e3d268a1c9a9eb3594460d9effc4237 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2015-09-25 / Outro / Leprosy is a complex dermato-neurological disease that presents multiple clinical forms and its differential diagnosis requires clinical expertise. The clinical manifestations in leprosy are defined by the type of imune response developed by the patient: cellular/Th1 or humoral/Th2 in paucibacillary/PB and multibacillary disease respectively. Multidrugtherapy (MDT) is considered efficacious however its impact on the immune responses of PB and MB leprosy patients remains unknown. Currently no single laboratory test is capable to detect all clinical forms of leprosy and laboratory tests are not available to aid the differential diagnosis. This study evaluated the impact of MDT on both cell-mediated immunity (CMI) and antibody responses by the follow up of untreated PB and MB leprosy patients evaluated at 2 time points after MDT using a panel of recombinants M. leprae proteins (rML). At diagnosis, PB patients produced interferon gamma (IFNγ), and MB patients exhibited low or absent response. Shortly after MDT, IFNγ production was observed only to LID-1 in PB and MB leprosy patients (p<0,05). Almost 2 years after MDT, IFNγ levels declined in PB and MB patients. Most untreated PB patients were seronegative to PGL-I and rML, remaining so after MDT. Most untreated MB patients were seropositive to all antigens, and IgG to rMLs declined after MDT. Reduction in antigen-specific CMI in PB and in antibody response in MB patients may help monitor MDT effectiveness but may also have a role in the risk of relapse/reinfection. This study also evaluated the usefulness of cellular test (Whole blood assay – WBA to LID-1) and serology to PGL-I and LID-1 to differential diagnosis of leprosy. Newly diagnosed and untreated PB and MB leprosy patients, patients with other dermatoses clinically suspect of leprosy and healthy endemic individuals were recruited in two geographic areas of Brazil (Goiânia and Fortaleza). Higher IFN levels to LID-1 were detected in PB leprosy patients when compared to all other study groups: MB patients (p<0.0001), other dermatoses (p=0.0008) and endemic controls (p<0.0001). In MB patients, the seroreactivity to LID-1 and PGL-I was statistically different from: PB leprosy (p<0.0001), other dermatoses (p<0.0001) and endemic controls (p<0.0001). The IFN detection by WBA-LID-1 and the serology to PGL-I and LID-1 were able to discriminate leprosy patients from patients with other dermatoses indicating their utility for the differential diagnosis of leprosy. / A hanseníase é uma doença dermato-neurológica complexa que apresenta múltiplas formas clínicas e o diagnóstico diferencial requer expertise clínica. As manifestações clínicas da hanseníase são definidas de acordo com o tipo de resposta imune do paciente, a qual pode ser celular/Th1 na doença paucibacilar (PB) ou humoral/Th2 na doença multibacilar (MB). A multidrogaterapia (MDT) é considerada eficaz, todavia, pouco se sabe sobre seu impacto na resposta imune de pacientes com hanseníase PB e MB. Não existe um teste laboratorial único adequado para o diagnóstico de todas as formas clínicas da hanseníase e que possa contribuir para o diagnóstico diferencial. Este estudo avaliou o impacto da MDT nas respostas imune celular e humoral de pacientes PB e MB recém-diagnosticados, não tratados em dois momentos após a conclusão da MDT utilizando um painel de proteínas recombinantes do M. leprae (rMLs). Ao diagnóstico, pacientes PB produziram IFN para todas as rMLs, pacientes MB produziram baixos níveis de IFN. Cerca de 4-8 meses após o término da MDT observou-se aumento nos níveis de IFN em pacientes PB e MB (p<0,05), contudo, não houve produção de IFN cerca de 2 anos após o término da MDT. A sororeatividade de pacientes PB ao diagnóstico foi negativa para a maioria das rMLs e para o PGL-I e este perfil não foi modificado após a MDT. Ao diagnóstico pacientes MB apresentaram alta soropositividade para rMLs e PGL-I após a MDT os níveis de IgG declinaram. A redução nos níveis de IFN para LID-1 em pacientes PB e o declínio de IgG em pacientes MB podem auxiliar no monitoramento da eficácia da MDT, entretanto não se sabe qual a repercussão desta redução no risco de recidiva/reinfecção. Este estudo também avaliou a utilidade do teste de imunidade celular (ensaio de sangue total/EST para LID-1) e da sorologia para PGL-I e LID-1 no diagnóstico diferencial da hanseníase. Pacientes PB e MB recém- diagnosticados, não tratados, pacientes com outras dermatoses clinicamente semelhantes à hanseníase e indivíduos saudáveis de área endêmica (EC) foram recrutados em duas áreas endêmicas do Brasil (Goiânia e Fortaleza). Maiores níveis de IFN para LID-1 foram detectados em pacientes PB quando comparados aos outros grupos de estudo: MB (p<0,0001), outras dermatoses (p=0,0008) e EC (p<0,0001). Em pacientes MB a sororeatividade para LID-1 e PGL-I foi estatisticamente diferente quando comparada com pacientes PB (p<0,0001), pacientes com outras dermatoses (p<0,0001) e EC (p<0,0001). A detecção de IFN e a sorologia para PGL-I e LID-1 foram capazes de discriminar pacientes PB e MB de pacientes com outras dermatoses indicando a utilidade destes testes no diagnóstico diferencial da hanseníase.

Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2017-03-17T20:34:28Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Bruno de Paula Oliveira Santos - 2017.pdf: 5505330 bytes, checksum: 269d17015f2059d9a94e4f080ef0448e (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-03-20T13:52:55Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Bruno de Paula Oliveira Santos - 2017.pdf: 5505330 bytes, checksum: 269d17015f2059d9a94e4f080ef0448e (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-20T13:52:55Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Bruno de Paula Oliveira Santos - 2017.pdf: 5505330 bytes, checksum: 269d17015f2059d9a94e4f080ef0448e (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-03-10 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Tuberculosis is an infectious disease caused mainly by the bacteria Mycobacterium tuberculosis. The only way to prevent is to vaccinate with BCG, an attenuated Mycobacterium bovis strain. However, the vaccine has variable efficacy in different people and it does not protect adults. The aim of this study was to develop new subunit vaccine formulations, evaluating a new adjuvant: Advax and two recombinant fusion proteins: CMX and ECMX. To formulate the subunit vaccines three adjuvants were used: the Advax3, Advax4 and CpG-DNA. First we addressed the CMX protein. BALB/c mice were separated in experimental groups that received 3 doses of the vaccines, besides the control groups (Saline, BCG, CMX, Advax3 and Advax4). The vaccines induced increase the local inflammatory response and they were able to activate blood and lymphatic endothelial cells on draining lymph nodes. After the first dose, the mice vaccinated with Advax3 + CMX, Advax4 + CMX and CpG-DNA + CMX generate IgG2a humoral immune response. After the second dose, the vaccinated mice also induced an IgG1 response. After challenging with M. tuberculosis and after 45 days, the vaccines BCG, Advax3 + CMX, Advax4 + CMX and CpG-DNA + CMX showed specific Th1 responses. However, the Th17 cellular response was not observed. Evaluating the lung lesions induced by the infection, Advax4 + CMX group presented reduced inflammatory cell infiltrate and maintenance on the pulmonary architecture. The vaccines Advax3 + CMX e Advax4 + CMX were able to extend the animals life, but none, except the BCG, were able to reduce the bacillary load on the lungs of infected mice, forty five or ninety days after the challenge. To improve the vaccine, ECMX was tested with Advax4. This vaccine showed similar humoral and cellular responses and reduced M. tuberculosis bacillary load. The vaccine formulations developed were immunogenic and the formulations containing Advax4 + ECMX were more effective and may be tested as vaccine against tuberculosis. / Tuberculose é uma doença infecto-contagiosa causada principalmente pelo Mycobacterium tuberculosis. A única forma de prevenção é a vacina BCG. Entretanto, essa vacina tem eficácia variável em diferentes populações e não protege indivíduos adultos. O objetivo desse trabalho foi desenvolver novas formulações vacinais de subunidade proteica testando um novo adjuvante: Advax e duas proteínas de fusão recombinante: CMX e ECMX. Foram utilizados três adjuvantes: Advax3, Advax4 e CpG-DNA. Primeiro foram testadas formulações vacinais contendo CMX. Camundongos BALB/c foram separados em grupos que receberam 3 doses de vacinas de subunidade proteica, além dos grupos controles (Salina, BCG, CMX, Advax3 e Advax4). Foram avaliadas as lesões induzidas no local da inoculação e os linfonodos drenantes. As vacinas estimularam aumento da celularidade no local da inoculação e conseguiram ativar células endoteliais vasculares e linfáticas nos linfonodos drenantes. Após a primeira dose, os camundongos vacinados com Advax3 + CMX, Advax4 + CMX e CpG-DNA + CMX geraram resposta imune humoral do tipo IgG2a. Após a segunda dose, os camundongos vacinados com as formulações citadas também induziram resposta do tipo IgG1. As vacinas BCG, Advax3 + CMX, Advax4 + CMX e CpG-DNA + CMX induziram respostas do tipo Th1 específicas tanto no baço quanto no pulmão. Entretanto, a resposta celular do tipo Th17 não foi observada. Nos cortes histológicos, foi possível observar que a formulação Advax4+CMX conseguiu reduzir o infiltrado inflamatório e manter a arquitetura tecidual. As formulações Advax3 + CMX e Advax4 + CMX conseguiram prolongar a sobrevida dos animais, mas nenhuma das vacinas, exceto a BCG, conseguiu reduzir a carga bacilar nos pulmões dos camundongos infectados. Utilizando Advax4 + ECMX observou-se o mesmo tipo de resposta imune celular e humoral que culminou com redução da carga bacilar do Mycobacterium tuberculosis. As formulações vacinais desenvolvidas são imunogênicas e a formulação vacinal contendo Advax4 + ECMX apresentou melhor eficácia e poderá ser testada como um candidato a vacina contra tuberculose.

Submitted by JÚLIO HEBER SILVA (julioheber@yahoo.com.br) on 2017-05-02T18:25:08Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Ana Carolina Vieira da Costa - 2017.pdf: 14344522 bytes, checksum: b31bb0d6ea37eec29c70d7d93855498f (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-05-03T11:56:23Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Ana Carolina Vieira da Costa - 2017.pdf: 14344522 bytes, checksum: b31bb0d6ea37eec29c70d7d93855498f (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-03T11:56:23Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Ana Carolina Vieira da Costa - 2017.pdf: 14344522 bytes, checksum: b31bb0d6ea37eec29c70d7d93855498f (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-03-10 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / American Tegumentary Leishmaniasis (ATL) is caused by protozoa of the genus Leishmania. The parasite is hosted by macrophages in cutaneous or mucosal lesions. Monocytes are precursors of macrophages, but there is little information about monocyte activation during ATL. The present study aimed to evaluate cytokine profile of monocytes from patients with localized cutaneous leishmaniasis (LCL) in whole blood cultures stimulated with toll-like receptor (TLRs) and NOD2 receptor agonists. Peripheral blood from patients with active lesions and no treatment, and from healthy blood donors paired by sex and age, was diluted into culture medium and incubated with lipopolysaccharide (LPS), TLR4 agonist; lipopeptide Pam3Cys (Pam), TLR2 agonist; muramyldipeptide (MDP), NOD2 agonist or Leishmania (V.) braziliensis antigen (Ag). After incubation, supernatants were collected to measure IL-6 and TNF (6 h) and IL-10 (24 h) by ELISA. There was production of IL-6, TNF and IL-10 in cultures from patients and controls after stimulation with all agonists and Ag (p < 0.05, medium vs stimulus, n = 29). No differences were detected between concentrations of TNF and IL-10, but IL-6 was higher produced in non-stimulated cultures from patients than controls (p < 0.05, n = 29) or when the stimulus was MDP (p < 0.05, n = 19). The combination Pam/MDP increased the production of IL-6, TNF and IL-10 in cultures from patients and controls when compared with each stimulus isolated (p < 0.05, n = 13 - 14); similarly, Ag and MDP together induced higher concentrations of IL-6, TNF and IL-10 (IL-6 and IL-10, especially in cultures from patients) in comparison with each stimulus (p < 0.05, n = 11 - 14). There was no correlation between the number, size or time of lesions and levels of IL-6, TNF or IL-10. Patients with more than one cycle of treatment to obtain clinical cure showed higher levels of MDP-induced IL-6 than those cured with one cycle of treatment (p < 0.05, n = 17 cured with one cycle vs 8 cured with more than one cycle). Data suggest that LCL patient monocytes can be activated via TLR2, TLR4 or NOD2 to produce pro-inflammatory (IL-6, TNF) and anti-inflammatory (IL-10) cytokines and IL-6 can be associated with tissue lesion and delay of lesion healing indicating an immunopathogenic role in LCL. / A Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) é causada por protozoários do gênero Leishmania, que acomete a pele e/ou mucosas. Os monócitos são precursores de macrófagos, células hospedeiras do parasito, e pouco se sabe sobre seu nível de ativação durante a LTA. O presente estudo teve como objetivo avaliar o perfil de resposta de citocinas produzidas por monócitos de pacientes com leishmaniose cutânea localizada (LCL) em hemoculturas, após ativação com agonistas de receptores similares a toll (TLRs) e de receptor NOD2. O sangue periférico de pacientes com LCL, com lesões ativas e sem tratamento, e de indivíduos controles, pareados por sexo e idade, foi diluído em meio de cultura e incubado com lipopolissacarídeo (LPS), agonista de TLR4; lipopeptídeo Pam3Cys (Pam), agonista de TLR2; muramildipeptídeo (MDP), agonista de NOD2 ou antígenos de Leishmania (V.) braziliensis (Ag). Após incubação, os sobrenadantes foram colhidos para dosagem de IL6 e TNF (6 h) e IL-10 (24 h), por ELISA. Nas hemoculturas dos pacientes e dos controles, houve produção de IL-6, TNF e IL-10, após incubação com todos os estímulos (p < 0,05, Meio vs estímulos, n = 29). Ao comparar pacientes e controles, não houve diferença quanto à produção de TNF e IL-10, mas a produção de IL-6 foi maior nas hemoculturas não estimuladas dos pacientes (p < 0,05, n = 29) e na presença do MDP (p < 0,05, n = 19). A combinação Pam/MDP aumentou a produção de IL-6, TNF e IL-10 nas hemoculturas dos pacientes e controles, em relação a cada estímulo sozinho (p < 0,05, n = 13 - 14); de maneira similar, Ag e MDP juntos aumentaram a concentração de IL-6, TNF e IL-10 (IL-6 e IL-10, especialmente nas hemoculturas dos pacientes) (p < 0,05, n = 11 - 14). Não houve correlação significante entre o número, o tamanho e o tempo das lesões dos pacientes com LCL e as concentrações de IL-6, TNF e IL-10 nas hemoculturas dos mesmos. Quando comparados os pacientes clinicamente curados após um ciclo de medicamento e aqueles clinicamente curados após mais de um ciclo de medicamento em relação às concentrações de TNF e IL-10 não foram detectadas diferenças significantes entre os grupos, porém, em relação à produção de IL-6, foi observado que esta foi mais elevada nos pacientes curados com mais de um ciclo de medicamento, após o estímulo MDP (p < 0,05, n = 17 curados com 1 ciclo vs 8 xv curados com mais de 1 ciclo). Os dados sugerem que os monócitos de pacientes com LCL podem ser ativados via TLR2, TLR4 e NOD2, induzindo a produção de citocinas pró-inflamatórias (IL-6, TNF) e anti-inflamatória (IL-10) e a IL-6 pode estar associada ao dano tecidual e a demora na cura dos pacientes, possuindo um papel imunopatogênico na LCL humana.

Submitted by Maryse Santos (maryseeu4@gmail.com) on 2016-09-02T14:35:55Z No. of bitstreams: 1 Dissertação de mestrado PPGIBA Isabella da Motta Passos.pdf: 3280548 bytes, checksum: b79b047ec4d53bbab26965c89fd73380 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-09-16T12:44:12Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação de mestrado PPGIBA Isabella da Motta Passos.pdf: 3280548 bytes, checksum: b79b047ec4d53bbab26965c89fd73380 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-09-16T12:50:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação de mestrado PPGIBA Isabella da Motta Passos.pdf: 3280548 bytes, checksum: b79b047ec4d53bbab26965c89fd73380 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-16T12:50:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação de mestrado PPGIBA Isabella da Motta Passos.pdf: 3280548 bytes, checksum: b79b047ec4d53bbab26965c89fd73380 (MD5) Previous issue date: 2011-09-20 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Leprosy is a chronic infectious disease caused by Mycobacterium leprae, with a broad clinical spectrum, which affects the skin and nerves. Only 5% of infected individuals will develop the disease. Patients present with various clinical forms directly associated with the immune response, where individuals that have the tuberculoid pole, presents a vigorous cell-mediated response, with predominant Th1 cytokines profile, resulting in bacillary containment and individuals that have the lepromatous pole, presents humoral immune response with production of Th2 cytokines, which cause bacillary spread. Although they are described Th1 and Th2 responses in leprosy, various aspects of immunology of this disease have yet to be elucidated. Interleukin 17 (IL-17) is a cytokine capable of producing inflammation, indizindo quimicinas (CXCL8) and colony-stimulating factor granulocyte (G-CSG), with subsequent increase of neutrophils to the infection site. Plays an important role in the pathological development of autoimmune diseases and infection by extracellular pathogens, when produced by T helper lymphocytes. In intracellular infections, as is the case of mycobacteria, IL-17 acts in the defense early in the infection, being produced by cells of the innate system, such as lymphocytes Tδγ. This type of immune response has not been studied in leprosy and the aim to investigate the response pattern of IL-17 in leprosy patients was collected from peripheral blood to evaluate the levels of IL-17, IL-23 and IL-6 in serum by ELISA. We also analyzed the expression of genes for IL-17, IL-23 and IL-6 in biopsies of skin lesions by polymerase chain reaction quantitative (qPCR). This study aimed to evaluate the IL-17 and related cytokines response and compare the pattern of response observed among patients of the tuberculoid pole, lepromatous and healthy subjects. The results showed no detection of IL- 17 and IL-23 in peripheral blood in as many patients as in controls, but IL-6 was increased in lepromatous patients. When evaluated the expression of these cytokines in biopsy lesions of leprosy patients, all clinical forms showed low expression of IL-17, IL23 and IL-6 compared to healthy subjects. Moreover, negative correlation was demonstrated expression of IL-17 and IL-23 with the bacterial index. This absence of IL-17 in patients may be a constitutive feature of leprosy genetic or circumstantial event induced by a local presence of the pathogen, as an escape mechanism. / A hanseníase é uma doença infecciosa crônica causada pelo Mycobacterium leprae, de amplo espectro clínico, que afeta principalmente a pele e os nervos. Apenas 5% dos indivíduos infectados irão desenvolver a doença. Os pacientes apresentam diversas formas clínicas associadas diretamente com a resposta imune, onde indivíduos do polo tuberculoide apresentam vigorosa resposta mediada por células, com perfil predominante de citocinas Th1, resultando na contenção bacilar e indivíduos do polo virchowiano apresentam resposta imune humoral, com produção de citocinas Th2, que ocasionam a dispersão bacilar. Embora estejam descritas as respostas Th1 e Th2 na hanseníase, vários aspectos da imunologia desta doença precisam ainda ser elucidados. A interleucina 17 (IL-17) é uma citocina capaz de produzir inflamação, indizindo quimicinas (CXCL8) e fator estimulante de colônias de granulócitos (G-CSG), com aumento subsequente de neutrófilos para o local na infecção. Tem papel importante no desenvolvimento patológico das doenças autoimunes e na infecção por patógenos extracelulares, quando produzidas pelos linfócitos T helper. Nas infecções intracelulares, como é caso das micobacterioses, a IL-17 atua na defesa nos primeiros momentos da infecção, sendo produzida pelas células do sistema inato, como os linfocitos Tδγ. Este tipo de resposta imunológica ainda não havia sido estudada na hanseníase e com intuito de investigar o padrão de resposta IL-17 em pacientes com hanseníase foi realizada coleta de sangue periférico para avaliação da produção das citocinas IL-17, IL-23 e IL-6 no soro pela técnica de ELISA. Também foi avaliada a expressão dos genes para IL-17, IL-23 e IL-6 em biópsias de lesão cutânea pela reação em cadeia da polimerase quantitativo (qPCR). Este estudo teve como objetivo avaliar as citocinas relacionas à resposta IL-17 e comparar o padrão de resposta observado entre os pacientes dos pólos tuberculoide, virchowiano e indivíduos controles. Os resultados mostraram ausência de detecção de IL-17 e IL-23 no sangue periférico tantos nos pacientes quanto nos controles, porém IL-6 estava aumentada nos pacientes virchowianos. Quando avaliados a expressão dessas citocinas na biópsia lesão dos pacientes de hanseníase, todas as formas clínicas apresentaram baixa expressão de IL-17, IL23 e IL-6 em comparação aos controles. Além disso, foi demonstrada correlação negativa da expressão de IL-17 e IL-23 com o índice baciloscópico. Esta ausência de IL-17 em pacientes pode ser uma característica constitutiva genética da hanseníase ou um evento circunstancial induzido pela presença local do patógeno, como um mecanismo de escape.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-05-05T20:11:33Z No. of bitstreams: 1 thaisoliveiradepaula.pdf: 2273561 bytes, checksum: 4f5aa492b38202c3543127af1e67af1e (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-06-07T15:46:58Z (GMT) No. of bitstreams: 1 thaisoliveiradepaula.pdf: 2273561 bytes, checksum: 4f5aa492b38202c3543127af1e67af1e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-07T15:46:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 thaisoliveiradepaula.pdf: 2273561 bytes, checksum: 4f5aa492b38202c3543127af1e67af1e (MD5) Previous issue date: 2016-03-14 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / A obesidade nos dias atuais é considerada uma pandemia, acometendo pessoas de todas as idades, sexo e raça. É uma doença que cursa com um estado inflamatório crônico de baixo grau, de causa multifatorial, associada a complicações metabólicas de alta morbimortalidade que geram elevados custos ao sistema de saúde. A microbiota intestinal possui grande importância no desenvolvimento da função intestinal. Estudos recentes têm associados à microbiota intestina humana ao desenvolvimento e manutenção da obesidade envolvendo vários mecanismos distintos. O objetivo do presente estudo foi avaliar a diversidade bacteriana no ecossistema intestinal de indivíduos obesos, com sobrepeso e eutróficos e correlacionar o perfil microbiano com o perfil nutricional e bioquímico destes pacientes. Foram avaliados 72 indivíduos classificados em eutróficos (n=24), com sobrepeso (n=24) e obesos (n=24), de acordo com o IMC. Medidas antropométricas, avaliação sociodemográfica e nutricional dos pacientes foram realizadas. Dos 72 indivíduos amostrados 63,9% pertence ao sexo feminino e 36,1% ao masculino, com uma média de idade de 39,6 anos, representativo de indivíduos adultos. A densidade de diferentes grupos bacterianos foi avaliada por hibridização fluorescente in situ (FISH) e análises de fingerprint foram realizadas pelo método de PCR-Eletroforese em Gel com Gradiente Desnaturante (DGGE) utilizando os iniciadores para o domínio Bactéria. Os resultados da FISH mostraram uma densidade relativa menor no grupo de obesos, comparado aos eutróficos, na maioria dos grupos bacterianos estudados, porém a razão Firmicutes/Bacteroidetes encontra-se aumentada nos obesos em relação aos eutróficos. A MIH dos indivíduos com sobrepeso mostrou estar em um processo de transição, indo ao encontro à microbiota de pessoas obesas. A análise de PCR-DGGE mostrou uma maior similaridade da MIH entre os grupos com sobrepeso e obeso. Indivíduos do mesmo grupo tenderam a se agrupar mais próximo, mesmo em clusters diferentes. As análises de correlação (spearman) entre os grupos bacterianos e paramêtros bioquímicos e antropométricos dos indivíduos mostrou uma correlação negativa moderada entre colesterol total e colesterol LDL e alguns grupos bacterianos, porém essa correlação só foi percebida no grupo de eutróficos, sugerindo que a MIH se comporta de maneira diferente dependendo do tipo de ambiente intestinal. A análise de correlação (odds ratio) entre razão Firmicutes/Bacteroidetes alterada (razão >1), com os índices IMC (>25), glicose (>100 mg/dL) e colesterol séricos (>200 mg/dL) mostraram uma correlação positiva, sugerindo que esses fatores que estão fortemente associados ao processo de obesidade, podem afetar a composição da MIH, de maneira a propiciar um ambiente que privilegie um aumento de Firmicutes. / Nowadays obesity is considered a pandemic, affecting people of all ages, gender and ethnicity. It is a chronic disease that leads to a chronic low-grade inflammatory state, with multifactorial cause, associated with metabolic complications with high morbimortality which generates high costs to the health care system. There is a great importance related to the gut microbiota and its functional development. Recent studies have associated gut microbiota to obesity development and maintenance, involving different mechanisms. This study objective was to evaluate the bacterial diversity in gut ecosystem between obese, overweight and eutrophic people, besides correlating microbial profile and nutricional-biochemical profile in each patient. 72 patients have been evaluated and classified as eutrophic (n=24), overweight (n=24) or obese (n=24) according to BMI. Anthropometric measurements, socio-demographic and nutricional evaluation have been carried out. . From these 72 patients 63% are female and 36,1% male, with a mean age of 39,61 years, representative of adults individuals. The density of different bacterial groups has been evaluated using Fluorescence in situ hybridization (FISH) and Fingerprint Analyze have been made with PCR- Denaturing Gradient Gel Electrophoresis (DGGE) using initiators to the domain Bacteria. Though the results from FISH showed that the ratio Firmicutes/Bacteroidetes is greater in obeses than eutrophics, they showed a reduced relative density in obese. The overweights gut microbiota is still at the process of transition to meet obese people’s microbiota. PCR-DGGE Analysis showed more similarity of Human Gut Microbiota(HGM) between the groups with overweight and obese, and who is in the same group tends to group together next to, even on different clusters. Correlation analysis (spearman) between bacterial groups and Anthropometric-Biochemical from these individuals showed a moderate negative correlation between total cholesterol and LDL-cholesterol and some bacterial groups, but this correlation was just realized in eutrophic group, suggesting the HGM behas in a different way according to intestinal environment. Correlation analysis (odds ratio) between ratio Firmicutes / Bacteroidetes changed (ratio>1), with the BMI index (>25), glucose (>100 mg/dL) and serum cholesterol (>200 mg/dL) showed a positive correlation suggesting that these factors, which are related with the obese process, can affect the composition of Human Gut Microbiota, increasing positively Firmicutis.