Made available in DSpace on 2014-08-20T13:32:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_liana_flores_maciel.pdf: 841596 bytes, checksum: bb4ee1890724891a9fe7618cd7fa3c77 (MD5) Previous issue date: 2012-02-28 / The business related to equines in Brazil has an important participation in activities as leisure, culture and tourism, being responsible for millions of jobs. The equine distemper caused by Streptococcus equi subsp. equi is a disease of the respiratory tract with economical impact, generating losses with treatment and reduction in the animal performance. To solve this problem, prophylactic measures, such as the vaccination, are important. However, available commercial vaccines do not offer protection to more than 50% of the vaccinated animals. Several studies are being performed aiming the achievement of an efficient vaccine against the Adenitis, where several virulence factors are being evaluated as possible vaccine antigens, specially the M protein (SeM). Thus, the present work aimed the development and evaluation of a recombinant vaccine to the control of the equine distemper composed of the SeM antigen co-administrated with the recombinant Heat-labile enterotoxin B subunit of Escherichia coli (rLTB) and/or aluminium hydroxide (Al(OH)3). A total of 72 female BALB/c mice, divided into eight groups and 18 horses, divided into six groups, were inoculated by intramuscular or intranasal routes. The results obtained in the experiments showed that the rSeM was innocuous and immunogenic in both evaluated species, stimulating the production of specific immunoglobulin anti-rSeM without the addition of immunological adjuvant. Both adjuvant rLTB and Al(OH)3 were not capable to increase the titer of immunoglobulin anti-rSeM in mice, while in horses, the treatment rSeM + rLTB (IM) showed a significant increase in the level of seric immunoglobulin IgG anti-rSeM. Interestingly, the production of anti-rSeM secretory IgA in the upper respiratory tract has a significant increase in horses treated with rSeM + Al(OH)3 (IM). This result is promising to further studies with rSeM as an antigen for vaccines, as well as is the administration of rLTB as an immunological adjuvant. / A equinocultura no Brasil ganha espaço em setores ligados ao lazer, cultura e turismo, sendo responsável por milhões de empregos. A Adenite Equina causada pelo Streptococcus equi subsp. equi é uma doença do aparelho respiratório de elevado impacto econômico, gerando gastos com mão-de-obra e perda de desempenho dos animais. Para amenizar este problema, medidas profiláticas são importantes, como por exemplo, a vacinação. Porém, as vacinas disponíveis no mercado protegem apenas 50% dos animais. Vários estudos vêm sendo realizados para obtenção de uma vacina mais eficiente contra a Adenite, onde vários fatores de virulência do patógeno estão sendo avaliados como possíveis antígenos vacinais, com destaque para a proteína M de S. equi (SeM). Com base nisso este trabalho objetivou o desenvolvimento e avaliação de uma vacina recombinante para controle da Adenite Equina, utilizando como antígeno a rSeM e como adjuvantes a subunidade B da enterotoxina termolábil de Escherichia coli (rLTB) e ou hidróxido de alumínio (Al(OH)3). Para este estudo foram utilizados 72 camundongos Balb/c fêmeas divididos em 8 grupos e 18 cavalos divididos em 6 grupos, inoculados por via IM ou IN. Os resultados mostraram que a rSeM foi inócua e imunogênica para ambas as espécies avaliadas, estimulando níveis significativos de imunoglobulinas (lgs) anti-rSeM sem a necessidade de uso de qualquer adjuvante imunológico. Os adjuvantes rLTB e Al(OH)3 não foram capazes de incrementar significativamente os títulos de lgs antirSeM em camundongos, enquanto que em cavalos o tratamento rSeM + rLTB (IM) promoveu um aumento significativo no título sérico de IgG anti-rSeM. Interessantemente, a produção de IgA secretória anti-rSeM no trato respiratório superior de cavalos teve aumento significativo no tratamento com rSeM + Al(OH)3 (IM). Estes resultados são promissores para a continuidade de estudos visando a utilização da rSeM como antígeno vacinal. Da mesma forma, o uso da rLTB como adjuvante em vacinas para cavalos parece ser promissor.

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:32:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_juliana_alcoforado_diniz.pdf: 1026827 bytes, checksum: f7e6dae0a1eabce2f815ea02d01d8e6a (MD5) Previous issue date: 2012-09-12 / Leptospirosis is a zoonosis caused by bacteria of the Leptospira genus. In recent years, efforts to identify immunogenic components of leptospires have resulted in the characterization of several outer membrane lipoproteins that are expressed during infection. Previously, our group had produced polyclonal IgY antibodies against whole-cell leptospires strain Fiocruz L1-130, which were used in different forms of capture ELISAs. In this study we produced and characterized IgY antibodies against LipL32 in recombinant form (rLipL32), the most abundant lipoprotein in the proteome of pathogenic leptospires, in order to use they in diagnostic assays and prophylaxis of leptospirosis. For this, two 22-week-old hens were immunized on day 0 with rLipL32 and oil adjuvant by intramuscular route. Three booster immunizations on days 14, 28 and 42 were held, and the eggs were collected daily from day 45. The yolks were processed and the antibodies purified with polyethylene glycol, and monitored by SDS-PAGE. Specificity of purified antibodies was assessed through indirect ELISA and Western blot (WB) using both rLipL32 and whole-cell Fiocruz L1-130. After standardization of the first batch of IgY, antibodies were conjugated with horseradish peroxidase and fluorescein (FITC). In addition, we conducted a passive immunoprotection assay in hamster model, using homologous and heterologous challenge. SDS-PAGE confirmed the successful purification of IgY and a batch with a concentration of 13μg.μL-1 was stored at -20ºC until use. Both IgY and IgY conjugated with horseradish peroxidase recognized the recombinant and native protein in ELISA and WB. In this study we produced and characterized successfully IgY against rLipL32. Although these antibodies have not been tested with clinical samples from humans or animals, they have antigen detecting potential for use in the diagnosis of leptospirosis. / A leptospirose é uma zoonose causada por bactérias do gênero Leptospira. Nos últimos anos, esforços para a identificação de componentes imunogênicos nas leptospiras resultaram na caracterização de várias lipoproteínas de membrana externa que são expressas durante a infecção. Anteriormente, nosso grupo havia produzido IgY contra Leptospira interrogans cepa Fiocruz L1-130 inteira, a qual foi usada em diferentes formatos de ELISA de captura. No presente estudo, objetivamos produzir e caracterizar anticorpos IgY contra a proteína LipL32 na forma recombinante (rLipL32), a lipoproteína mais abundante no proteoma das leptospiras patogênicas, com intuito de utilizá-los posteriormente, no diagnóstico e na imunoprofilaxia da leptospirose. Para isso, duas galinhas com 22 semanas de idade foram imunizadas no dia 0 com rLipL32 e adjuvante oleoso, através da via intramuscular. Três outras imunizações foram realizadas nos dias 14, 28 e 42 e os ovos coletados diariamente a partir do dia 45. Os anticorpos foram obitidos através do processamento das gemas, purificados com polietilenoglicol e monitorados por SDS-PAGE. A especificidade dos anticorpos foi avaliada através de ELISA indireto e Western blot (WB), ambos utilizando rLipL32 e Fiocruz L1-130 inteira. Após a padronização do primeiro lote de IgY, os anticorpos foram conjugados com peroxidase e fluoresceína (FITC), e avaliados em um ensaio de imunização passiva em hamsters, com desafio homólogo e heterólogo. O SDS-PAGE confirmou o sucesso de purificação, e um lote de IgY com a concentração de 13μg.μL-1 foi estocado a -20ºC até o uso. A IgY pura e conjugada com peroxidase reagiram com as proteínas recombinante e nativa no ELISA e no WB. Nesse estudo, produzimos e caracterizamos com sucesso IgY contra rLipL32. Embora esses anticorpos não tenham sido testados com amostras clínicas de humanos e animais, eles possuem potencial para compor ensaios que visem a detecção do antígeno no diagnóstico da leptospirose.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-10-21T10:35:01Z No. of bitstreams: 1 fernandagambogibraga.pdf: 553726 bytes, checksum: f15cef0c1ba9bd936e4b249618ff1332 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-10-25T12:31:04Z (GMT) No. of bitstreams: 1 fernandagambogibraga.pdf: 553726 bytes, checksum: f15cef0c1ba9bd936e4b249618ff1332 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-25T12:31:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 fernandagambogibraga.pdf: 553726 bytes, checksum: f15cef0c1ba9bd936e4b249618ff1332 (MD5) Previous issue date: 2008-02-12 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / As leishmanioses são um grupo de doenças causadas por diferentes espécies do gênero Leishmania que afetam mais de 12 milhões de pessoas em todo o mundo. As manifestações clínicas podem variar desde simples lesões cutâneas à leishmaniose visceral que pode ser fatal. A quimioterapia convencional baseia-se em múltiplas injeções parenterais com antimoniais pentavalentes que são consideravelmente tóxicos e propensos a induzir resistência. Medicamentos de segunda linha, como Anfotericina B e suas formulações lipídicas, ou são demasiadamente caros para uso rotineiro nos países em desenvolvimento ou são tóxicos. Considerando que a busca de drogas mais eficazes contra Leishmania tornou-se extremamente necessária, este trabalho teve como objetivo avaliar o efeito in vitro de novos derivados da purina. Essas substâncias foram testadas contra promastigotas de L. amazonensis e L. chagasi e amastigotas de L. amazonensis, através do método colorimétrico do MTT e contagem dos parasitos. Foi também analisada a produção de NO pelas formas promastigotas e amastigotas de Leishmania e pelos macrófagos, medido espectrofotometricamente. Dentre os 13 derivados de purina testados, quatro, 6-(3-cloropropiltio)-9H-purina, ácido 2-(9H-purin-6-tioil)acético, sal de flúor de 7,8-diidro-(1,4)tiazepino(3,2,4-hi)purina e 6-(3'-(tioetilamina)propiltio)purina, inibiram o crescimento das formas promastigotas de L. amazonensis (IC50 de 50, 39, 28 e 50 μM, respectivamente). Somente o sal de 8,9-diidro-7H-(1,4) tiazepino(3,2,4-hi) purinil flúor inibiu o crescimento das formas promastigotas de L. chagasi (IC50 de 28 μM). O ácido 2-(9H-purin-6-tioil)acético apresentou a melhor atividade anti-amastigota e reduziu cerca de 50% do número de amastigotas intracelulares após 48h de tratamento. Os derivados purínicos, em geral, reduziram a produção de NO em promastigotas de Leishmania e em macrófagos, mas no processo de interação parasito/célula hospedeira não houveram alterações significativas na produção de NO. Também foi testada a citotoxicidade contra células mamíferas para todos os compostos que apresentaram efeito leishmanicida, mas nenhuma substância apresentou efeito significativo. Os resultados contribuiram para o avanço na investigação de novas drogas anti-leishmania, e sugerem que ácido 2-(9H-purin-6-tioil)acético tem um potencial leishmanicida promissor. / Leishmaniasis are a group of diseases caused by different species of the protozoan parasite Leishmania, which affect more than 12 million people worldwide. The clinical manifestations may range from single cutaneous lesions to fatal visceral leishmaniasis. Conventional chemotherapy relies on multiple parenteral injections with pentavalent antimonials that are considerably toxic and prone to induce resistance. Second-line drugs, such as amphotericin B and its lipid formulations, are either too toxic or expensive for routine use in developing countries. Considering it, the search for more effective drugs against Leishmania became extremely necessary. In order to find new drugs against leishmaniasis this work checked the in vitro effect of purine derivatives. These substances were assayed against L. amazonensis and L. chagasi promastigotes and amastigotes of L. amazonensis through the colorimetric method of MTT and counting of parasites. It also examined the production of NO the promastigote forms and amastigote forms of Leishmania sp and the macrophages measured spectrophotometrically. Among the 13 derivatives of purine assayed four substances: 6-(3-chloropropylthio)-9H-purine, 2-(9H-purin-6-ylthio)acetic acid, salt of fluor of 7,8-dihydro-[1,4]thiazepino[3,2,4-hi]purine and 6-(3'-(thioethylamine) propylthio)purine, inhibited the growth of promastigote forms of L. amazonensis (IC50 values of 50, 39, 28 and 50 μM, respectively). Only the salt of fluor of the 8,9-dihydro-7H-[1,4]thiazepino[3,2,4-hi]purine, inhibited the growth of promastigotes of L. chagasi (IC50 value of 28μM). The 2-(9H-purin-6-ylthio)acetic acid presented the best anti-amastigotes activity and this substance reduced approximately 50% of the number of intracellular amastigotes after 48h of treatment. In general the derivatives of purine reduced the production of NO in promastigotes of Leishmania and macrophages but in the process of interaction parasite/host cell there were no significant changes in the production of NO. We also had tested citotoxicity against mammalian cells for all the compounds that present leishmanicidal effect but none of the substances were found to have significant toxicity effect. The results contributed for advance in the research for new anti-leishmania drugs and suggest that 2-(9H-purin-6-ylthio)acetic acid has promising antileishmanial potencial.

Submitted by Geandra Rodrigues (geandrar@gmail.com) on 2018-01-08T14:04:31Z No. of bitstreams: 1 leticiamoronilacerda.pdf: 1709656 bytes, checksum: e9330eeb2472bbbef60623d8c02b95fb (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2018-01-22T18:43:42Z (GMT) No. of bitstreams: 1 leticiamoronilacerda.pdf: 1709656 bytes, checksum: e9330eeb2472bbbef60623d8c02b95fb (MD5) / Made available in DSpace on 2018-01-22T18:43:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 leticiamoronilacerda.pdf: 1709656 bytes, checksum: e9330eeb2472bbbef60623d8c02b95fb (MD5) Previous issue date: 2017-02-22 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Nos últimos anos, tem se notado uma mudança no perfil populacional, com consequente redução das doenças infectocontagiosas e aumento da prevalência de doenças crônicas não transmissíveis (DCNTs) que, em sua maioria, compartilham uma patogênese de caráter inflamatório. A inflamação é uma reação normal à perturbação da homeostase do tecido, seguida por uma fase de resolução e reparo. Dentre as células que participam do processo inflamatório, os macrófagos têm recebido grande atenção, uma vez que são responsáveis pela produção de uma grande variedade de mediadores, como citocinas, quimiocinas, espécies reativas de oxigênio e nitrogênio bem como mediadores lipídicos. Apesar de benéfica, a inflamação precisa ser finamente controlada visto que sua exacerbação pode resultar no surgimento de diversos tipos de patologias. Neste contexto, é crescente a necessidade de se desenvolver novos compostos capazes de atuar nos processos inflamatórios e/ou no câncer, de maneira efetiva e com o mínimo de efeitos adversos. Assim, o objetivo do presente estudo foi avaliar a atividade anti-inflamatória e antitumoral de novos adutos da reação de Morita-Baylis-Hillman (MBH), verificando se esta atividade tinha relação com uma possível atividade antioxidante, também testada. Para isso, primeiramente, foi determinada a viabilidade das células RAW 264.7 e J774A.1 após tratamento com adutos utilizando o ensaio de MTT. Em seguida, a ação destes adutos sobre a produção de óxido nítrico (NO), TNF-α, IL-6, CCL2 e moléculas coestimuladoras (CD80, CD86 e CD40) foi determinada em células RAW 264.7, enquanto sua ação sob a IL-1β foi determinada em células J774A.1. O melhor dos adutos foi também submetido aos testes in vivo em modelo murino de edema de orelha. Além disso, foi avaliada a viabilidade de células 4T1 e B16 tratadas com os compostos através do método do MTT enquanto a ação antioxidante foi determinada pelo teste de DPPH. Os resultados mostraram que somente um dos adutos apresentou citotoxicidade significativa na concentração de 75uM enquanto a 50uM nenhum dos adutos foi citotóxico. Concomitantemente, o tratamento com os adutos foi capaz de reduzir, a produção de NO, assim como de TNF-α, IL-6, IL-1β e CCL2. Os compostos também modularam a expressão das moléculas co-estimuladoras CD86 e CD40. In vivo, o aduto 4Br foi eficaz em reduzir o edema de orelha, o infiltrado inflamatório e a atividade da enzima mieloperoxidase (MPO), embora não tenha sido capaz de reduzir a produção de IL-1β, IL-6 e CCL-2 no tecido auricular. Em relação à viabilidade de células tumorais, cinco adutos foram tóxicos para células 4T1, enquanto seis deles foram efetivos em induzir a redução da viabillidade de células B16. Nenhum dos adutos apresentou atividade antioxidante, o que sugere que os mecanismos anti-inflamatórios e antitumorais desencadeados pelos adutos são independentes do potencial antioxidante. Os resultados encontrados até o momento sugerem uma possível aplicabilidade destes adutos em novas estratégias de combate a doenças inflamatórias e/ou na terapia contra o câncer. / Over the years, there has been a change in the population profile with a consequent reduction of infectious diseases and an increase in the prevalence of chronic noncommunicable diseases which, for the most of them, share an inflammatory pathogenesis. Inflammation is a normal reaction to disturbance of tissue homeostasis, followed by a resolution and repair phase. Among the cells that participate in the inflammatory process, macrophages have received great attention, since they are responsible for the production of a great variety of mediators, such as cytokines, chemokines, reactive species of oxygen and nitrogen as well as lipid mediators. Despite of beneficial, inflammation needs to be finely controlled since its exacerbation can result in the onset of various types of pathologies. In this context, the need to develop new compounds capable of acting in inflammatory processes and/or cancer is increasing in an effective way and with the minimum of adverse effects. Thus, the objective of the present study was to evaluate the anti-inflammatory and antitumor of new adducts of the Morita-Baylis-Hillman (MBH) reaction, verifying if this activity was related to a possible antioxidant activity, also tested. For this, the viability of RAW 264.7 and J774A.1 cells was determined after treatment with adducts using the MTT assay. The action of these adducts on the production of nitric oxide, TNF-α, IL-6, CCL2 and costimulatory molecules (CD80, CD86 and CD40) was determined in RAW 264.7 cells, while its action under IL- 1β was determined in J774A.1 cells. The best of the adducts was also submitted to in vivo tests in a murine model of ear edema. In addition, the viability of 4T1 and B16 cells treated with the compounds was assessed by the MTT method while the antioxidant action was determined by the DPPH test. The results showed that only one of the adducts presented significant cytotoxicity at the concentration of 75uM whereas at 50uM none of the adducts was cytotoxic. Concomitantly, treatment with adducts was able to reduce NO production, as well as TNF-α, IL-6, IL-1β and CCL2. The compounds also modulated the expression of CD86 and CD40 costimulatory molecules. In vivo, the 4Br adduct was effective in reducing ear edema, inflammatory infiltrate and myeloperoxidase enzyme activity. Although it was not able to reduce the production of IL-1β, IL-6 and CCL-2 in the tissue of the ears. Regarding the viability of tumor cells, five adducts were toxic to 4T1 cells, while six of them were effective in inducing the reduction of viability of B16 cells. None of the adducts presented antioxidant activity, which suggests that the anti-inflammatory and antitumor mechanisms triggered by the adducts are independent of the antioxidant potential. The result suggests a possible applicability of these adducts in new strategies to combat inflammatory diseases and/or cancer therapy.

Submitted by Geandra Rodrigues (geandrar@gmail.com) on 2018-01-17T17:29:15Z No. of bitstreams: 1 alinemotafreitasmatos.pdf: 2642148 bytes, checksum: 97ec5fb8925f2abd9bf61640fb47e1be (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2018-01-23T14:13:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 alinemotafreitasmatos.pdf: 2642148 bytes, checksum: 97ec5fb8925f2abd9bf61640fb47e1be (MD5) / Made available in DSpace on 2018-01-23T14:13:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 alinemotafreitasmatos.pdf: 2642148 bytes, checksum: 97ec5fb8925f2abd9bf61640fb47e1be (MD5) Previous issue date: 2017-11-28 / A hanseníase ainda representa um sério problema de saúde pública no Brasil e no mundo. Apesar da expressiva redução da prevalência da doença a nível global, de 5,4 milhões nos anos 80 para menos de 200 mil casos atualmente, a taxa de detecção de casos novos se mantém quase a mesma em diferentes regiões ao longo dos anos. Juiz de Fora, uma cidade com mais de 500 mil habitantes, é referência para o tratamento de hanseníase, abrangendo diversas cidades mineiras. Esse trabalho analisou a situação epidemiológica da hanseníase em Juiz de Fora, comparando dois períodos marcados por mudanças demográficas e na estratégia de prevenção. Foram avaliados 379 casos novos, sendo 238 casos diagnosticados no período I (1995 a 2004) e 141 no período II (2005 a 2015). O estudo analisou o banco de dados das notificações de hanseníase (SINAN, Ministério da Saúde), avaliou as tendências e georreferenciou os casos para análise ecológica de forma espacializada. O georreferenciamento dos casos utilizou o programa ArcGis (versão 10.2.2) e a ocorrência dos casos foi avaliada em relação ao índice de vulnerabilidade da saúde (IVS), indicador que agrupa fatores socioeconômicos e de saneamento. Os resultados mostram queda da prevalência da doença e redução da taxa de detecção de casos novos. O número de casos novos com grau 2 de incapacidade ao diagnóstico, que sinaliza para diagnóstico tardio, mostrou redução significativa no período II, mas ocorreram picos nos anos 1997, 2007 e 2015. Ocorreu diminuição relativa no percentual de casos multibacilares (de 80,2% para 61,5%) e aumento da forma clínica tuberculóide. Análise por regressão logística demonstrou associação das taxas de detecção com IVS elevado. Em conclusão, os indicadores epidemiológicos direcionam para a eliminação da hanseníase no município de Juiz de Fora, os fatores envolvidos e as evidências de casos ocultos da doença na região são apresentados neste estudo. / Leprosy still represents a serious public health problem in Brazil and in the world. Despite the significant reduction in global disease prevalence from 5.4 million in the 1980s to less than 200,000 cases today, the rate of detection of new cases remains almost the same in different regions over the years. Juiz de Fora, a city with more than five hundred thousand people, is a referral point for leprosy treatment for several nearby cities in Minas Gerais. This study analyzed the epidemiological situation of leprosy in Juiz de Fora, comparing two periods marked by demographic changes and adjustments in prevention strategies. A total of 379 new cases were evaluated, of which 238 were diagnosed in period I (1995 to 2004) and 141 in period II (2005 to 2015). The study analyzed the database of leprosy reports (SINAN, Ministry of Health), assessed trends and georeferenced the cases for spatialised ecological analysis. The georeferencing of the cases used the ArcGis program (version 10.2.2) and the occurrence of the cases was evaluated in relation to the Health Vulnerability Index (HVI), an indicator that categorizes socioeconomic and sanitation factors. The results show decrease in the prevalence of the disease and reduction in the rate of detection of new cases. The number of new leprosy cases with grade II disabilities, that signal for late diagnosis, showed significant reduction in period II, but with peaks in the years 1997, 2007 and 2015. A relative decrease in the percentage of multibacillary cases (from 80.2 to 61.5%) and increase for the tuberculoid clinical form was observed. Logistic regression analysis showed association of detection rates with elevated HVI. In conclusion, the epidemiological indicators point to the elimination of leprosy in the municipality of Juiz de Fora, the factors involved and the evidences of hidden cases of the disease in the region are presented in this study.

Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2015-10-15T19:25:17Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Ildefonso Alves da Silva Junior - 2013.pdf: 3624734 bytes, checksum: a431bde2aa4d96da0132f877c14e72bd (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2015-10-15T19:27:35Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Ildefonso Alves da Silva Junior - 2013.pdf: 3624734 bytes, checksum: a431bde2aa4d96da0132f877c14e72bd (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-15T19:27:35Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Ildefonso Alves da Silva Junior - 2013.pdf: 3624734 bytes, checksum: a431bde2aa4d96da0132f877c14e72bd (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2013-02-18 / The American Tegumentary Leishmaniasis (ATL), caused by Leishmania protozoa, affects the skin and oropharyngeal/nasal mucosa. During transmission cycle, the procyclic promastigote forms grow in the vector gut and differentiate into infective metacyclic promastigotes by a process called metacyclogenesis, which also occurs in axenic cultures. The aim of this study was to evaluate the in vitro metacyclogenesis of L. (Viannia) braziliensis and L. (L.) amazonensis isolates obtained from patients with different clinical forms of ATL, using different methodologies, and the ability of these isolates to infect human macrophages. Parasites (L. (Viannia) braziliensis: IMG3, PPS6m, M2903 and L. (L.) amazonensis: MAB6 and PH8) were cultured in Grace´s insect medium and the amount of metacyclic forms was evaluated by using morphometry, Bauhinia purpurea lectin (BPL, to L. (Viannia) braziliensis) or 3A1-La antibody (to L. (L.) amazonensis) negative selection, flow cytometry and Complement-resistance test after 2, 6 and 10 days of culture. Human monocyte-derived macrophages from healthy donors, activated or not with interferon gamma (IFN) and lipopolysaccharide (LPS), were infected with parasites from different days of culture or with selected metacyclic forms with BPL/3A1-La (1:1 parasite: macrophage) for 24 or 72 h. Growth patterns were similar among the isolates. Stationary-phase promastigotes (6, 10 days) showed morphological changes such as a reduction of the cell body and an increase in the flagellum length, in comparison to the parasites of the 2nd day. Leishmania. (L.) amazonensis promastigotes of the 6th and 10th day of culture presented higher length of the cell body and flagellum than L. (Viannia) braziliensis isolates. In stationary phase there was a significant increase in the percentage of metacyclic forms detected by the four techniques used (M2903: 71-86%; IMG3: 41-85%; PPS6m: 39-76%; PH8: 38-69% e MAB6: 47-84%; 6th day, medians of the techniques used). Despite the four techniques demonstrated similar metacyclogenesis profiles for all isolates evaluated, metacyclic forms densities varied with the technique and the day of culture. The BLP/3A1-La selection consistently identified the highest frequencies of metacyclic forms for all isolates (6th day) among the four techniques. Metacyclogenesis of the isolates was confirmed in in vitro macrophage infection assays which showed a significant increase of the index of infection with parasites of the 6th and 10th day compared to those of the 2nd day (24 or 72 h). No significant differences in capability to infect macrophages were detected between unfractionated or 6th day-selected metacyclic forms. The isolates showed different profiles of susceptibility to macrophage microbicidal mechanisms. The M2903 and PH8 strains were the most susceptible whereas MAB6 isolate was the most resistant among the isolates. As high amounts of metacyclic forms were present in all isolate cultures, considering BPL/3A1-La selection, the results suggest that resistance/susceptibility to macrophage control mechanisms is an intrinsic characteristic of the isolates. To evaluate the metacyclogenesis of clinical isolates together with the ability of parasites to infect human macrophages sets the conditions for obtaining efficient parasites to establish a successful infection what is critical for the evaluation of the pathogenesis and natural immune response in leishmaniasis. / A Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA), causada por protozoários Leishmania, acomete a pele e/ou as mucosas nasal e orofaríngea. Durante o ciclo de transmissão, as formas promastigotas procíclicas crescem no intestino do inseto vetor e diferenciam-se em formas promastigotas metacíclicas infectantes, por um processo chamado de metaciclogênese, que também ocorre em culturas axênicas in vitro. O objetivo deste estudo foi avaliar a metaciclogênese in vitro de isolados L. (Viannia) braziliensis e L. (L.) amazonensis, provenientes de pacientes com diferentes formas clínicas de LTA, usando diferentes metodologias, e a capacidade destes isolados em infectar macrófagos humanos. As curvas de crescimento (L. (V.) braziliensis: IMG3, PPS6m, M2903 e L. (L.) amazonensis: MAB6 e PH8) foram realizadas em meio Grace e após 2, 6 e 10 dias de cultivo, a quantidade de formas metacíclicas foi avaliada por meio de morfometria, ensaio de seleção com a lectina de Bauhinia purpurea (BPL, para L. (V.) braziliensis) ou anticorpo 3A1-La (para L. (L.) amazonensis), citometria de fluxo e ensaio de resistência ao Complemento. Macrófagos humanos derivados de monócitos de doadores sadios, ativados ou não com interferon gama (IFN e lipopolissacarídeo (LPS), foram infectados com os parasitos de diferentes dias de cultivo ou formas metacíclicas selecionadas com BPL/3A1-La (1:1, parasito:macrófago) por 24 ou 72 h. Os perfis das curvas de crescimento in vitro foram similares para todos os isolados. Parasitos da fase estacionária do crescimento (6, 10 dias) apresentaram alterações morfológicas, como a diminuição do tamanho do corpo celular e um aumento do comprimento do flagelo, em relação aos parasitos do 2º dia. As formas promastigotas L. (L.) amazonensis do 6º e do 10º dia de cultura apresentaram maiores comprimentos do corpo celular e do flagelo do que os parasitos L. (V.) braziliensis. Na fase estacionária houve um aumento significante da porcentagem de formas metacíclicas detectadas pelas quatro técnicas (M2903: 71-86%; IMG3: 41-85%; PPS6m: 39-76%; PH8: 38-69% e MAB6: 47-84%; 6º dia, valores min e max). Apesar das quatro técnicas mostrarem um similar perfil de metaciclogênese para todos os isolados avaliados, as densidades de formas metacíclicas variaram conforme a técnica utilizada, dependendo do dia de cultura. A técnica de seleção com BPL/3A1-La foi a que detectou maiores frequências de formas metacíclicas para todos os isolados no 6o dia. A metaciclogênese dos isolados foi confirmada nos ensaios de infecção in vitro dos macrófagos, mostrando um aumento significante no índice de infecção com parasitos do 6º e 10º dia em relação àqueles de 2o dia (24 ou 72 h). Não foram atestadas diferenças entre os índices de infecção de macrófagos incubados com parasitos totais ou formas metacíclicas selecionadas do 6º dia. Os isolados mostraram diferentes perfis de suscetibilidade aos mecanismos microbicidas dos macrófagos. As cepas M2903 e PH8 foram mais suscetíveis, enquanto o isolado MAB6, mais resistente. Como as quantidades de formas metacíclicas nas culturas, considerando a técnica de seleção BPL/3A1-La, foram elevadas para todos os isolados, os resultados sugerem que a resistência/suscetibilidade aos mecanismos de controle dos macrófagos seja uma característica intrínseca do isolado. Avaliar a metaciclogênese de isolados clínicos, simultaneamente à capacidade dos parasitos em infectar macrófagos humanos, define as condições necessárias para a obtenção de parasitos eficientes em estabelecer uma infecção, para uma adequada avaliação da patogenia e da resposta imune natural na leishmaniose.

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-03-07T12:23:49Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Iaci G. Fortes.pdf: 3341230 bytes, checksum: 5cf680c1f700af06ff6e5e563e9b7748 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-03-07T12:24:12Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Iaci G. Fortes.pdf: 3341230 bytes, checksum: 5cf680c1f700af06ff6e5e563e9b7748 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-03-07T12:24:29Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Iaci G. Fortes.pdf: 3341230 bytes, checksum: 5cf680c1f700af06ff6e5e563e9b7748 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-07T12:24:29Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Iaci G. Fortes.pdf: 3341230 bytes, checksum: 5cf680c1f700af06ff6e5e563e9b7748 (MD5) Previous issue date: 2015-09-29 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Introduction: Hepatitis C infection (HCV) is presented as both acute and chronic and most often is asymptomatic, it presents several risk factors that may vary across population groups and the definition of infection is still a challenge reflecting in blood banks which can be detected by the marker antibody against HCV (anti-HCV) and HCV NAT (detection of HCV nucleic acids). Objective: To trace the epidemiological profile and the molecular characteristics of HCV infection in candidates for blood donation the Blood Center of Roraima. Methods: positive or indeterminate anti-HCV candidates were selected by the 2nd sample collection attendance as routine. It was collected results of the screening of blood donation and 2nd sample. And new sample collected for quantification of HCV RNA by Abbott RealTimeTM HCV Assay platform and applied epidemiological questionnaire. Results: Candidates for blood donation had the characteristics, young people aged 18-29 years (63.6%) of males (72.7%), single (50.0%), from the capital Boa Vista, and 54.5% were repeat donors, with evidence of exposure to risk factors (surgical procedures, hygiene objects sharing, etc.); 21 candidates to blood donation obtained positive results or indeterminate for anti-HCV and one result with NAT detectable HCV screening of the donation. In the 2nd sample test anti-HCV, 12 were reagents, 9 non-reactive, 1 indeterminate and NAT undetectable. In no sample was detectable HCV RNA. Conclusion: It is suggested that these donors are low viral load being impossible to detect or plasma clearance or anti-HCV results from the screening of blood donation can be false positives. / Introdução: A infecção pelo vírus da hepatite C (HCV) apresenta-se na forma tanto aguda quanto crônica e na maioria das vezes é assintomática, apresenta diversos fatores de risco que podem variar entre os grupos populacionais e a definição de infecção ainda é um desafio, refletindo em bancos de sangue onde pode ser detectada pelos marcadores anticorpo contra o HCV (anti-HCV) e NAT HCV (detecção de ácidos nucléicos do HCV). Objetivo: Traçar o perfil epidemiológico e as características moleculares da infecção pelo HCV em candidatos a doação de sangue do Hemocentro de Roraima. Métodos: Candidatos anti-HCV positivo ou indeterminado foram selecionados mediante o comparecimento de coleta de 2ª amostra como de rotina. Foi coletado resultados da triagem da doação de sangue e 2ª amostra. E coletado nova (3ª amostra) amostra para quantificação de RNA HCV pela plataforma Abbott RealTimeTM HCV Assay e aplicado questionário epidemiológico. Resultados: O grupo de candidatos a doação de sangue foi constituído por jovens entre 18-29 anos (63,6%), predomínio de do sexo masculino (72,7%), solteiros (50,0%), todos procedentes da capital Boa Vista, e cerca de 54,5% não eram doadores de primeira vez, com evidências de exposição a fatores de risco (procedimentos cirúrgicos, compartilhamento de objetos de higiene, entre outros); 21 candidatos a doação de sangue obtiveram resultados positivo ou indeterminado para anti-HCV e 1 resultado com NAT HCV detectável na triagem da doação. No teste de 2ª amostra para anti-HCV, 12 foram reagentes, 9 não reagentes e 1 indeterminado e NAT de 2ª amostra indetectável. Em nenhuma amostra foi possível detectar RNA HCV. Conclusão: Sugere-se que estes doadores se encontram com carga viral baixa sendo impossível a detecção ou clearence plasmático ou resultados anti-HCV provenientes da triagem da doação de sangue podem ser falso-positivos

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-03-17T11:06:11Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Cacilda S. Y. Mallmann.pdf: 3158977 bytes, checksum: 98919264cd60f9ac2f5553060b4c6c44 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-03-17T11:06:24Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Cacilda S. Y. Mallmann.pdf: 3158977 bytes, checksum: 98919264cd60f9ac2f5553060b4c6c44 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-03-17T11:06:44Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Cacilda S. Y. Mallmann.pdf: 3158977 bytes, checksum: 98919264cd60f9ac2f5553060b4c6c44 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-17T11:06:44Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Cacilda S. Y. Mallmann.pdf: 3158977 bytes, checksum: 98919264cd60f9ac2f5553060b4c6c44 (MD5) Previous issue date: 2015-03-30 / Sjögren's syndrome (SS) is a chronic inflammatory disease that affects the epithelial tissue of exocrine secretion glands, characterized by immunological changes as the infiltration of salivary and lacrimal glands by CD4 + T lymphocytes and B lymphocytes and the presence of autoantibodies against nuclear antigens. Genetic, hormonal and environmental factors are also important in its pathogenesis. In its diagnosis are used different criteria approved by the American College of Rheumotology (ACR) and the European Call Against Rheumatism (EULAR) which include semi-quantitative histological examination of samples of minor salivary glands sublabial processed in paraffin and stained with hematoxylin-eosin (foci scores; 50 lymphocytes/4 mm2). From the experimental point of view, this method is susceptible to bias, since it is based on an extremely limited area of tissue to be analyzed and has the potential to result in lower precision and accuracy. In an attempt to minimize such bias this proposal aims to standardize quantitative morphometric measurements in minor salivary gland biopsies (GSM) in SS suspected patients using stereological tools free of systematic bias, therefore, to ensuring precision and accuracy in morphometry. Such tools allow the detection of minimal morphological changes that would otherwise be overlooked by semi-quantitative assessment of routine. To this end, 10 biopsies of female patients suspected of having SS were histologically processed and embedded in acrylic resin hydroxyethyl methacrylate (Technovit 7100, Heraues-Kulzer, Germany). The blocks containing the biopsy fragments were randomly oriented to allow obtaining isotropic sections (Orientator). Serial sections (6-13/biopsy) were stained with eosin hematoxylin and Harrys. Fields of view chosen in a uniform, systematic and random way were photographed and analyzed quantitatively using appropriate software (IMOD 4.5/Stereology). Based on the criteria for the diagnosis of SS by the ACR, patients were divided into Group Non-SS (N = 4; 0-1 satisfied criterion) and SS group (N = 6; 2-3 criteria met). In evaluating the density of the components of GSMs (t-test), there was a significant increase in the proportion of lymphocytes in the SS group (p = 0.033). The other components showed no significant changes. The number of lymphocytes (p=0.025) and lymphoplasmacytic infiltrates (p = 0.038) were increased in the SS group, but no significant change was observed in the number of plasma cells and the volume of GSMs between groups. The CE of GSM Cavaliere volume remained below 5%. The number of evaluated sections influences the precision and accuracy of the results. There is no correlation between pathological score and stereological evaluation of lymphocytic infiltrates. The SS group was characterized by the presence of positive values for the Anti-SSA antibodies/Anti- SSB, high focal score and reduced dry score. We conclude that quantitative analysis of GSM by stereology provides detailed information that can implement and complement the laboratory and clinical findings in the diagnosis of Sjögren's syndrome. / No diagnóstico da Síndrome de Sjögren (SS) usamos os critérios aprovados pela American College of Rheumotology (ACR), que é uma doença inflamatória crônica do tecido epitelial das glândulas de secreção exócrina. É caracterizada por alterações imunológicas como a infiltração das glândulas salivares e lacrimais por linfócitos T CD4+ e linfócitos B e pela presença de autoanticorpos contra antígenos nucleares. Do ponto de vista experimental, as metodologias envolvidas nesta caracterização são suscetíveis ao viés, visto que se baseiam em uma área extremamente restrita de tecido a ser analisado e têm o potencial de gerar resultados com baixa precisão e acurácia. A proposta neste trabalho foi padronizar medidas morfométricas usando estereologia na glândula salivar menor (GSM) de pacientes suspeitos de SS afim de garantir precisão e acurácia na determinação de SS. Para tal, 10 biópsias de mulheres foram processadas histologicamente e incluídas em resina acrílica. Seções seriais (6-13/biópsia) foram coradas após a fragmentação da biópsia em blocos orientados ao acaso, para permitir a obtenção de seções isotrópicas (orientator). Campos de vista escolhidos de forma uniforme, sistemática e ao acaso foram fotografados em Estereomicroscópio Digital System e analisados quantitativamente. Aplicando os critérios da ACR para SS, houve segregação dos pacientes em Grupo Não-SS e Grupo SS. Na avaliação da densidade de volume dos componentes das GSMs (test-t) houve um aumento significativo na proporção de linfócitos do Grupo SS (p = 0,033). Os demais componentes não apresentaram alterações significativas. O número de linfócitos (p = 0,025) e infiltrados linfoplasmocitários (p = 0,038) estiveram aumentados no Grupo SS, contudo nenhuma alteração significativa foi observada no número de plasmócitos e no volume das GSMs entre os grupos. Na determinação do volume da GSM o coeficiente de erro manteve-se abaixo de 5%. O número de seções avaliadas influencia a precisão e acurácia dos resultados. Não há correlação entre os dados patológicos e o estereológico na avaliação dos infiltrados linfocitários. Concluímos que a análise estereológica fornece informações detalhadas que podem implementar e complementar os achados no diagnóstico da Síndrome de Sjögren.

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-02-01T14:39:07Z No. of bitstreams: 1 Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-02-01T14:39:34Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-02-01T14:40:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-01T14:40:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) Previous issue date: 2012-04-30 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Leprosy is an infectious disease characterized by different clinical forms that are associated with the type of immune response against Mycobacterium leprae. Polymorphisms present in the first intron of IFN- may have an important role in the regulation of the immune response, which could have functional consequences for gene transcription. Later studies identified the present of five polymorphisms in the IL12RB2 promoter region, this polymorphisms will may transcriptional factor suppress IL12R2 expression affect the development of cellular immune response. In the present study we investigated a possible association of the +874 T/A SNP and IFN-, microsatellite and polymorphisms present in the IL12RB2 promoter region associated with susceptibility to leprosy or with development of clinical forms in patients from brazilian Legal Amazon states. Nucleotide sequencing was performed with samples from 118 leprosy patients and 114 controls subjects, as well as immunophenotyping of CD4 +, CD8 + and CD69 + T cells by flow cytometry. Between leprosy patients and controls subjects, as well as between PB and MB patients were no observed significant differences among the studied genotypes in the polymorphisms of IL12RB2 studies. The polymorphisms -1035, -1023 and -464 present an absolute correlation (p<0.0001) having a combination of a same genotype in this positions. The microsatellite encoding 16 CA repeats was significantly associated with PB compared to MB patients (p = 0.019), being individuals homozygous for the +874 A allele present IFN- and the mean level of CD4 + and CD69 + T cells were higher. Our data suggest that polymorphisms present in the first intron of IFN- and of the IL12RB2 promoter region are not associated with susceptibility to leprosy, nevertheless, the +874 A/A genotype and microsatellite encoding 16 CA repeats may be related to a higher cellular immune response in patients and are consistently more frequently detected in PB patients. / A hanseníase é uma doença infecciosa caracterizada por apresentar diferentes formas clínicas que estão associadas com o tipo de resposta imune ao Mycobacterium leprae. Polimorfismos genéticos presentes no primeiro íntron de IFN- podem apresentar importante papel na regulação da resposta imune, podendo resultar em consequências funcionais na transcrição do gene. Estudos anteriores identificaram a presença de cinco polimorfismos na região promotora de IL12RB2, sendo que estes polimorfismos poderiam suprimir fatores de transcrição na expressão de IL12R2, afetando o desenvolvimento da resposta imune celular. No presente estudo investigamos uma possível associação do SNP +874, do microssatélite de IFN- e de polimorfismos presentes na região promotora de IL12RB2 com a susceptibilidade à hanseníase ou com desenvolvimento das formas clínicas em pacientes dos Estados da Amazônia Legal brasileira. O sequenciamento nucleotídico foi realizado em 118 pacientes com hanseníase e 114 indivíduos controles, assim como a imunofenotipagem de células T CD4 +, CD8 + e CD69 + pela citometria de fluxo. Entre pacientes com hanseníase e indivíduos controles, assim como entre pacientes PB e MB não foram observadas diferenças significativas entre os genótipos estudados nos polimorfismos de IL12RB2. Os polimorfismos - 1035, -1023 e -464 apresentam uma correlação absoluta (p<0,0001) havendo combinação de um mesmo genótipo nas respectivas posições. O microssatélite com 16 repetições foi significativamente associado com pacientes PB quando comparado aos pacientes MB (p = 0,019). Indivíduos homozigóticos ao alelo +874 A apresentaram maiores níveis de IFN- e maior média de células T CD4 + e CD69 +. Nossos dados sugerem que polimorfismos presentes no primeiro íntron de IFN- e da região promotora de IL12RB2 não estão associados com a susceptibilidade à hanseníase. No entanto, o genótipo +874 A/A e 16 repetições de CA de IFN- podem estar relacionados à alta resposta imune celular observada nestes pacientes, sendo também mais frequentemente encontrados em pacientes PB.

Submitted by Cláudia Bueno (claudiamoura18@gmail.com) on 2016-03-21T17:16:47Z No. of bitstreams: 2 Tese - Ludimila Paula Vaz Cardoso - 2009.pdf: 2018391 bytes, checksum: a45731b4e5b612ada7fa15b35c75c521 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-03-22T14:04:38Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Ludimila Paula Vaz Cardoso - 2009.pdf: 2018391 bytes, checksum: a45731b4e5b612ada7fa15b35c75c521 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-22T14:04:38Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Ludimila Paula Vaz Cardoso - 2009.pdf: 2018391 bytes, checksum: a45731b4e5b612ada7fa15b35c75c521 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2009-08-04 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / HIV-1 resistance to antiretroviral (ARV): nucleoside reverse transcriptase inhibitors (NRTI), non-nucleoside reverse transcriptase inhibitors (NNRTI), protease inhibitors (PI) and new ARV classes, like enfurvitide (T-20), represents a challenge for sustainable virological and immunologic responses. This study describes the prevalence of primary and secondary HIV-1 drug resistance and subtypes circulating in Central West Brazil. HIV-1 phylogenetic diversity and ARV resistance mutations were assessed among 97 ARV naïve patients, 48 ARV experienced patients and 77 HIV-1 pregnant women from Goiânia/GO. Protease (PR), partial reverse transcriptase (RT) and gp41 genes were amplified and sequenced from plasma RNA. HIV-1 pol subtypes were assigned by phylogenetic analysis and env/gag subtypes were identified by heteroduplex mobility analysis (HMA). ARV resistance mutations were analyzed by Stanford University Database, Internacional AIDS Society, Los Alamos Database and other sources. Among ARV naïve patients, primary drug resistance ranged from 8-10%. IP (n=2), NRTI (n=3), NRTI (n=1), IP+NRTI (n=1) e NRTI+NNRTI (n=3). Subtype B represented 82.5%, subtype F1 6.2%, subtype C 3.1%, BPR/F1RT 7.2% and one sample was F1PR/CBRT mosaic. Among ARV experienced patients, secondary drug resistance was 79%: NRTI (n=1), NNRTI (n=1), PI+NRTI or NRTI+NNRTI (n=20), PI+NRTI+NNRTI (n=16, considered multidrug resistant-MDR). In the HIV-1 pol gene, subtype B represented 79.2%, subtype F1 4.2%, subtype C 2.1%, F1PR/BRT 8.3% and BPR/F1RT 6.3%. Among MDR patients, the mosaic F1PR/BRT/F1ENV (n=1) and subtype BPR/BRT/BENV (n=13) were identified. G36E, N42T and N43S T-20 resistance mutations were observed in 3 MDR patients. In the group of pregnant women, none had primary drug resistance mutations. Among 42 ARV experienced pregnant women, 16.7% presented HIV-1 isolates with drug resistance mutations: NRTI (n=2), NRTI + NNRTI (n=2), PI + NTRI (n=2) and PI+NRTI+NNRTI (n=1). Regarding HIV-1 subtypes in env gag/PR RT genes, 66.2% were subtype B, 3.9% subtype C and 6.5% subtype F1. Our data from Central West Brazil show extensive genetic diversity with a significant proportion of distinct BF1 recombinants and the co-circulation of subtypes B, F1 and C. Moreover our data show that ARV naïve and ARV experienced patients, including pregnant women, can benefit from genotyping for ARV drug resistance, to improve clinical management and salvage therapy, which are also important to control HIV-1 transmission. / A resistência do HIV-1 aos antirretrovirais (ARV): inibidores da transcriptase reversa análogos a nucleosídeos e nucleotídeos (NRTI), inibidores da transcriptase reversa não análogos a nucleosídeos (NNRTI), inibidores da protease (IP) e novas classes de drogas antirretrovirais, como o enfurvitida (T-20), representa um desafio para a resposta virológica e imunológica dos pacientes HIV+/Aids. Este estudo descreve a prevalência de resistência primária e secundária do HIV-1 aos ARVs e os subtipos circulantes na região Centro-Oeste do Brasil. A diversidade filogenética do HIV-1 e as mutações de resistência foram avaliadas entre 97 pacientes virgens de tratamento, 48 pacientes em terapia ARV e 77 gestantes HIV+/Aids de Goiânia/GO. Os genes da protease (PR), parte da transcriptase reversa (TR) e da gp41 foram amplificados e sequenciados a partir do RNA plasmático. Os subtipos no gene pol foram avaliados através da análise filogenética e no gene env/gag foram identificados através da análise da mobilidade do heteroduplex (HMA). As mutações de resistência aos ARVs foram analisadas através do banco de dados da Universidade de Stanford, da Sociedade Internacional de Aids, de Los Alamos e outras fontes. Entre os pacientes virgens de tratamento, a prevalência de resistência primária variou de 8-10%: IP (n=2), NRTI (n=3), NRTI (n=1), IP+NRTI (n=1) e NRTI+NNRTI (n=3). O subtipo B representou 82,5%, o subtipo F1 6,2%, o subtipo C 3,1%, o mosaico BPR/F1RT 7,2% e uma amostra apresentou o mosaico F1PR/CBRT. Entre os pacientes em terapia ARV, a prevalência de resistência secundária foi de 79%: NRTI (n=1), NNRTI (n=1), IP+NRTI or NRTI+NNRTI (n=20), IP+NRTI+NNRTI (n=16, considerados multiresistentes-MDR). No gene pol do HIV-1, o subtipo B representou 79,2%, o subtipo F1 4,2%, o subtipo C 2,1%, o mosaico F1PR/BRT 8,3% e o mosaico BPR/F1RT 6,3%. Entre os pacientes MDR, foram identificados o mosaico F1PR/BRT/F1ENV (n=1) e o subtipo BPR/BRT/BENV (n=13). As mutações de resistência ao T-20, G36E, N42T e N43S, foram observadas em 3 pacientes MDR. No grupo das gestantes, nenhuma apresentou mutação de resistência primária. Entre 42 gestantes em tratamento ARV, 16,7% apresentaram isolados do HIV-1 com mutações de resistência aos ARVs: NRTI (n=2), NRTI+NNRTI (n=2), IP+NTRI (n=2) e IP+NRTI+NNRTI (n=1). Em relação aos subtipos do HIV-1 nos genes env gag/PR TR, 66,2% foram do subtipo B, 3,9% subtipo C e 6,5% subtipo F1. Nossos resultados do Centro-Oeste do Brasil mostram grande diversidade genética com significantiva proporção de recombinantes BF1 e a co-circulação de subtipos B, F1 e C. Além disso, nossos dados mostram que pacientes virgens de tratamento e em terapia ARV, incluindo gestantes, podem se beneficiar da genotipagem do HIV-1 para resistência aos ARVs, para melhorar a conduta clínica e a terapia de resgate, que também são importantes para o controle da transmissão do HIV-1.