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Estudo citológico em urina de pacientes transplantados renais para pesquisa do poliomavirus humano tipo BKV / Study of urine cytology in kidney transplant patients in search of human kind polyomavirus BKVMaia, Tânia Maria Cavalcante January 2008 (has links)
MAIA, Tânia Maria Cavalcante. Estudo citológico em urina de pacientes transplantados renais para pesquisa do poliomavirus humano tipo BKV. 2008. 91 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2008. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-01-02T16:06:06Z
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Previous issue date: 2008 / The polyomavirus type BK has been associated to the nephropathy in the patients transplanted renal with an incidence varying among 3 - 4% and in 60% of the cases could take to the loss of the graft. Several studies have been demonstrating the importance of the discovery of the decoy cells in these patients' urine as first selection for the viral replication making it diagnose differential between the sharp cellular rejection and the nephropathy for the BK virus. In this context, the present study aimed at to detect the presence of BKV through the observation of the decoy cells in the urine of the transplanted renal, correlating this discovery with the serum urea levels and creatinine and the histopathology features through the renal biopsy. For so much, the 50 transplanted patients' urine renal (28 men and 22 women) assisted at two hospitals of Fortaleza (Academical Hospital Walter Cantídio and General Hospital of Fortaleza) they were analyzed as for the presence of decoy cells detected through the urinary cytology by the coloration of Papanicolau. Were the cytology analyzed and done classify in negative and positive (≥ 1 decoy cell). Result: Of the 50 cytology analyzed urinary 28 patients they were male and 22 female, alive donor's receivers (n = 43) or cadaverous (n = 7) with assertiveness for decoy cells of 24% (12 patient). Creatinine levels and increased urea, separately, they were not useful to suspect of the nephropathy for BKV or rejection of the transplant (p > 0,05). The correlation of the altered levels of urea and creatinine, with the presence or absence of the decoy cells, was significant for the statistics (p < 0,05). The biopsy revealed nephropathy for BKV in five (20%) of the patients with cells decoy in the urine and the more frequent histological discoveries were fibrose and infiltrated inflammatory mononuclear. The most employed immune suppression in the patients in study was the outline 1 (50%) (ciclosporina / azatioprina / zenapx), following for outlines 2 (16%) (MMF/FK 506/zanapax) 1 outline 3 (16%) (ciclosporina / prednizona / azatioprina). Conclusion: The assertiveness for decoy cells in this study (24%) it is coincident with the literature (8 -26%) suggesting active infection. The presence of the decoy cells in the urine was useful to define the patients' groups with possible nephropathy for BKV of those with nephropathy for rejection, because the negativity for decoy cells in the urine moves away in 100% of the cases the nephropathy for BKV, and his/her presence serves as guide to move forward in the nephropathy investigation for BKV. The biopsy confirmed in 5 of the 12 cases with decoy cells positive in the urine (20%) the nephropathy for the polyomavirus and one of them vein to lose the graft. The immunosuppressive outline used by the patients in study and the nephropathy presence for BKV was not it that more it links in the literature. Also the patients with nephropathy for BKV that used less associated outlines this condition had worse evolution. These last results indicate the need of new studies with larger number of patients, time of larger attendance and study of the stumps turn. / O poliomavirus tipo BK tem sido associado à nefropatia nos pacientes transplantados renais com uma incidência variando entre 3 - 4% e em 60% dos casos podendo levar à perda do enxerto. Diversos estudos têm demonstrado a importância do achado da célula decoy na urina destes pacientes como primeira triagem para a replicação viral fazendo o diagnóstico diferencial entre a rejeição celular aguda e a nefropatia pelo BK vírus. Neste contexto, o presente estudo objetivou detectar a presença do BKV através da observação da célula decoy na urina dos transplantados renais, correlacionando este achado com os níveis séricos de uréia e creatinina e o aspecto histopatológico através da biópsia renal. Para tanto, a urina de 50 pacientes transplantados renais (28 homens e 22 mulheres) atendidos em dois hospitais de Fortaleza (Hospital Universitário Walter Cantídio e Hospital Geral de Fortaleza) foram analisadas quanto à presença de células decoy detectadas através da citologia urinária pela coloração de Papanicolau. As citologias foram analisadas e classificadas em negativa e positiva (≥ 1 célula decoy). Resultado: Das 50 citologias urinárias analisadas 28 pacientes eram do sexo masculino e 22 do sexo feminino, receptores de doador vivo (n = 43) ou cadavérico (n = 7) com positividade para célula decoy de 24% (12 pacientes). Níveis de creatinina e uréia aumentados, isoladamente, não foram úteis para suspeitar da nefropatia pelo BKV ou rejeição do transplante (p > 0,05). A correlação dos níveis alterados de uréia e creatinina, com a presença ou ausência das células decoy, foi estatisticamente significativa (p < 0,05). A biópsia revelou nefropatia pelo BKV em cinco (20%) dos pacientes com células decoy na urina e os achados histológicos mais freqüentes foram fibrose e infiltrado inflamatório mononuclear. A imunossupressão mais empregada nos pacientes em estudo foi o esquema 1 (50%) (ciclosporina / azatioprina / zenapx), seguidos por esquemas 2 (16%) (MMF/FK 506 / zanapax) 1 esquema 3 (16%) (ciclosporina / prednizona / azatioprina). Conclusão: A positividade para células decoy neste estudo (24%) é coincidente com a literatura (8 -26%) sugerindo infecção ativa. A presença das células decoy na urina foi útil para definir os grupos de pacientes com possível nefropatia pelo BKV daqueles com nefropatia por rejeição, pois a negatividade para células decoy na urina afasta em 100% dos casos a nefropatia pelo BKV, e a sua presença serve de guia para avançar na investigação de nefropatia pelo BKV. A biópsia confirmou em 5 dos 12 casos com células decoy positivas na urina (20%) a nefropatia pelo poliomavirus sendo que um deles veio a perder o enxerto. O esquema de imunossupressão utilizado pelos pacientes em estudo e a presença de nefropatia pelo BKV não foi o que mais se relaciona na literatura. Também os pacientes com nefropatia pelo BKV que utilizaram esquemas menos associados a esta condição tiveram evolução pior. Estes últimos resultados indicam a necessidade de novos estudos com maior número de pacientes, tempo de acompanhamento maior e estudo das cepas virais.
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Avaliação da expressão de genes NEPH em células-tronco mesenquimais da placenta humanaSilva, Diego Amarante da January 2012 (has links)
Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento / Made available in DSpace on 2012-10-26T10:14:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1
310126.pdf: 1850967 bytes, checksum: 67fb92bdbc93e0e23a85bccd9bcc6cb5 (MD5) / A Célula-tronco (CT) é definida pela capacidade de autorrenovação e habilidade de se diferenciar em diversos fenótipos celulares. Nos últimos anos, vários estudos têm buscado a identificação e caracterização de CTs em tecidos adultos e extra-embrionários visando o desenvolvimento de alternativas para regeneração e reparo tecidual. Dentre as fontes de CTs adultas destaca-se a placenta, que além de desempenhar um papel crucial no desenvolvimento fetal, também é um importante reservatório de CTs mesenquimais (CTMs). A diferenciação de CTMs é um fenômeno ainda não totalmente esclarecido e influenciado pela atuação de diversas moléculas e pelo microambiente. Um grupo de proteínas de adesão conservadas evolutivamente que pode estar envolvido neste processo é o da família NEPH. Composta por NEPH1, NEPH2 e NEPH3, estas proteínas fazem parte da superfamília das imunoglobulinas (IgSF) e regulam a morfogênese de diferentes tecidos. Os ortólogos de NEPH têm sido amplamente caracterizados em vertebrados, onde atuam em diversos processos como no desenvolvimento neural, formação de sinapses e fusão de mioblastos. Além disso, vários estudos descrevem a expressão de NEPH1 e NEPH2 em diversos tecidos, o que apoia a hipótese de que tal expressão possa estar envolvida na diferenciação de CTs. Com isso, o enfoque deste trabalho foi comparar os níveis de expressão dos genes NEPH entre CTMs obtidas da placenta humana, no estado indiferenciado assim como após a indução à diferenciação adipogênica. As células da placenta utilizadas neste estudo apresentaram a expressão de marcadores de CTMs, a morfologia fibroblastóide esperada, bem como foram capazes de se diferenciar para o fenótipo adipogênico quando cultivadas em meio indutivo, caracterizando uma população de CTMs. Os resultados obtidos por RT-PCR em tempo real demonstraram que tanto as CTMs indiferenciadas quanto as induzidas para adipogênese apresentaram a expressão dos genes NEPH1 e NEPH2, sendo a expressão do gene NEPH1 75% mais alta nas CTMs induzidas à adipogênese do que nas células indiferenciadas. Com isso, sugerimos um papel do gene NEPH1 no processo de diferenciação das CTMs da placenta humana para adipócito. / The stem cell (SC), by definition, is undifferentiated and has the ability of self-renewal. SCs are also able to differentiate into diverse cell lineages. In recent years, several studies have searching for the characterization of SCs in adult and extra-embryonic tissues that could guide to develop strategies for tissue regeneration and repair. Among these tissues the placenta is an important source of adult SCs, being a reservoir of mesenchymal SCs (MSCs). Several biological signals and the environment influence the differentiation of MSCs, although this phenomenon is not yet fully understood. The NEPH protein family, which includes NEPH1, NEPH2 and NEPH3, is a group of evolutionarily conserved adhesion molecules that may be involved in this MSCs differentiation. These proteins are part of the immunoglobulin superfamily (IgSF) and regulate the morphogenesis of different tissues. The role of NEPH orthologs have been extensively characterized in vertebrates, where they act in neural development, synapse formation and myoblasts fusion. Moreover, several studies have described the expression of NEPH1 and NEPH2 in several tissues, supporting the hypothesis that they might be involved in SCs differentiation. Thus, the objective of this study was to compare the expression of NEPH genes between undifferentiated and differentiated MSCs obtained from human placenta. The placental cells used is this study comprise a population of MSCs, being characterized by the typical fibroblastic morphology, expression of MSCs markers and ability to differentiate into adipocytes when cultured in an inductive medium. Real time RT-PCR analysis demonstrated that both undifferentiated MSCs and MSCs differentiated into adipocytes express NEPH1 and NEPH2 genes. However, the expression of NEPH1 gene was 75% higher in MSCs differentiated into adipocytes than in the undifferentiated cells. In summary, our results suggest that NEPH1 gene may play a role in the differentiation of MSCs into adipocytes.
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Testes de inspeção visual e colpocitologiaRusso, Evandro January 2013 (has links)
Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, Florianópolis, 2013. / Made available in DSpace on 2013-12-06T00:16:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2013 / Introdução: Nos países em desenvolvimento que ainda concentram seus programas de rastreamento primário do câncer cervical apenas na colpocitologia (CO) como por exemplo, o Brasil, as taxas da doença têm diminuído ligeiramente ou permanecendo estáveis ao longo das duas últimas décadas. Portanto, há necessidade de testes adjuvantes à CO devido à sua baixa sensibilidade e alta taxa de falso negativo (TFN), e também para evitar os múltiplos estágios e a demora que vão desde o diagnóstico até o tratamento. Como metodologia alternativa, os testes de inspeção visual (TIV) têm sido considerados uma possível opção à CO no rastreamento primário do câncer cervical em locais com poucos recursos. Objetivo: Verificar o desempenho diagnóstico da colpocitologia oncótica e dos testes de inspeção visual (TIV) no Programa de Rastreamento e Detecção Precoce do Câncer de Colo Uterino em uma população de baixo risco. Desenho do estudo: Estudo transversal prospectivo de validação diagnóstica da CO e dos TIV do colo uterino quando empregados separadamente e em paralelo tendo como padrão ouro os resultados da colposcopia e histopatologia para os casos negativos e positivos, respectivamente. Métodos: A amostra foi composta por 919 mulheres atendidas na Rede Feminina de Combate ao Câncer de Florianópolis (RFCCF) durante o período de junho de 2010 a junho de 2012. Foi verificada a sensibilidade, a especificidade, os valores preditivos positivo e negativo, as taxas de falsos negativos e de falsos positivos. Utilizou-se estatística descritiva e analítica considerando-se como significativo os intervalos de confiança de 95% (IC 95%) e o valor de p<0,05. Resultados: Foram analisadas 882 mulheres que apresentaram alteração em 4,9% da CO e em 13,8% dos TIV dos quais, aproximadamente 10% de cada modalidade (VIA,VIAM, VILI e VILIM), separadamente, apresentaram-se alterados. Comparando-se aplicação em paralelo da CO sob critério amplo (= ASC-US) e dos TIV com a aplicação de forma isolada dos mesmos houve um ganho na sensibilidade de 33,3% e 13,3%, respectivamente, e valores equivalentes foram observados em relação à diminuição na TFN. Houve uma redução estatisticamente significativa de aproximadamente 5,5% na especificidade e um aumento significativo na TFP de 5,9%. O VPP caiu pela metade em relação à CO ampla (33,3% para 16,9%) e aumentou 1,5% em relação aos TIV. O VPN permaneceu praticamente o mesmo e tornando-se quase perfeito (99,9%) quando da aplicação em paralelo. Conclusão: Os dados demonstraram que a CO nesse estudo, apresentou-se com desempenho diagnóstico razoável para rastreamento do câncer da cérvice uterina e de suas lesões precursoras entre as mulheres avaliadas da RFCCF. Entretanto, os TIV aplicados de forma isolada ou em paralelo com a CO demonstram-se como boa opção no rastreamento primário dessas patologias, apresentando uma sensibilidade razoável, especificidade sempre boa, alto VPN, baixa TFP e de TFN. <br> / Abstract : Introduction: In developing countries such as Brazil, where the focus for the primary screening programs for cervical cancer has been only on Papanicolaou smear test (CO), the disease rates have declined slightly or remained stable over the past two decades. It follows, then, that other tests aimed at improving the CO use as for the tracking of cancer due to its low sensitivity and high false negative rate (FNR), and also to avoid the delay and multiple stages ranging from diagnosis to treatment, are necessary. As an alternative methodology, visual inspection tests (VIT) have been considered as a possible option for CO in primary cervical cancer screening in resources-lacking settings. Objective: To investigate the diagnostic performance of both CO and VIT in the Tracking and Early Detection of Cervical Cancer Program based in a low-risk population. Study Design: This is a prospective cross-sectional study of diagnostic validation of CO and VIT cervix tests when used separately and in parallel, having as the gold standard parameter the results of CO and histopathology tests for negative and positive cases, respectively. Methods: The sample consisted of 919 women being treated at the Rede Feminina de Combate ao Câncer de Florianópolis (RFCCF), from June 2010 to June 2012. The variables investigated were the sensitivity, the specificity, the positive (PPV) and negative predictive values (NPV) and the rates of false negatives (FNR) and false positives (FPR). We used descriptive and analytical statistics considering as significant the 95% confidence intervals (95% CI) and the value of p<0.05. Results: We analyzed 882 women who showed abnormalities in 4,9% of CO and 13,8% of VIT of which approximately 10% of each modality (VIA, VIAM, VILI and VILIM), separately, presented value alterations. Comparing the parallel implementation of CO under broad criteria (= ASC-US) to the VIT isolated-application test, it can be said that there was a gain in sensitivity of 33,3% and of 13,3%, respectively, and similar values were observed in relation to the decrease in FNR. There was also a statistically significant reduction of approximately 5,5% specificity and a significant increase in FPR of 5,9%. The PPV results have remained nearly half of broad CO (33,3% to 16,9%) and increased 1,5% compared to VIT results. The PNV remained virtually the same almost reaching the perfect status (99,9%) when the application was conducted in parallel. Conclusion: The present data showed that the CO possesses reasonable diagnostic performance for tracking cancer of the uterine cervix and its precursor lesions among women treated at RFCCF. However, the VIT, applied either alone or in parallel with the CO, has proved to be a good option for primary screening of these diseases, with reasonable sensitivity, stable good specificity, high NPV, and low FPR and FNR.
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Aplicabilidade da PCR em tempo real ao diagnóstico da leptospirose humana e ao monitoramento da contaminação ambiental por espécies patogênicas de LeptospiraRiediger, Irina Nastassja January 2012 (has links)
Orientador : Prof. Dr. Alexander W. Biondo / Orientador : Prof. Albert Icksang Ko / Coorientador : Prof. Dr. Marco Aurélio Krieger / Coorientador : Dr. Alex Hoffmaster / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular. Defesa: Curitiba, 27/02/2012 / Inclui referências : f. 150-169 / Resumo: cuja sintomatologia é inespecífica. Humanos desenvolvem formas graves de leptospirose e os métodos diagnósticos atuais não são eficazes para a detecção precoce da doença. O uso de um método de PCR em tempo real pode permitir o diagnóstico precoce e a quantificação das bactérias em amostras clínicas; além da quantificação do risco ambiental em amostras de água. Foi demonstrado que o método permite a detecção das leptospiras em amostras de sangue total coletadas nos primeiros seis dias de doença, após os quais a carga bacteriana decai de modo inversamente proporcional ao título de anticorpos. O limite mínimo de detecção foi estimado em 280 GEq/mL. O ponto de corte prognóstico foi estimado em 159 GEq/mL para o desenvolvimento de LPHS, com sensibilidade de 64,3% (IC 95% 35,1-87,2%), especificidade de 68,8% (IC 95% 62,8-74,3%) e acurácia 68,0%. Para óbito, o ponto de corte prognóstico foi definido em 1.181 GEq/mL, com sensibilidade de 76,5% (IC 95% 50,1-93,2%), especificidade de 89,3% (IC 95% 85,0-92,8%) e acurácia de 88,3%. A seleção do kit para extração do DNA e estabelecimento de parâmetros de concentração, volume inicial de amostra e limite mínimo de detecção permitiu a adaptação do método de qPCR para a quantificação das leptospiras em amostras ambientais. O método adaptado foi validado em estudo conduzido com amostras ambientais coletadas na comunidade de Pau da Lima, em Salvador (Bahia, Brasil). Os resultados apontaram maior positividade entre as amostras coletadas em baixa altitude (50% das amostras positivas), bem como entre as amostras coletadas pela manhã em comparação com a tarde (17,7% vs. 5,8%). A positividade foi maior entre amostras de esgoto do que entre amostras de água empoçada (17,7% vs. 5,6%). Também houve diferença de positividade entre as amostras coletadas nos períodos úmido e com umidade intermediária (16,0% vs. 9,7%). Assim, concluímos que o método de qPCR é uma ferramenta útil para o diagnóstico e avaliação prognóstica em pacientes com suspeita clínica de leptospirose. O método também foi eficaz na identificação de possíveis focos de infecção a partir da avaliação de amostras de água coletadas em área endêmica. Palavras-chave: Leptospira, leptospirose, PCR em tempo real, sangue total, carga bacteriana, prognóstico, amostra ambiental de água. / Abstract: are non-specific. Humans develop severe forms of leptospirosis and the current diagnostic methods are not suited for the early diagnosis of the disease. The use of a real-time PCR method allowed for an early diagnosis and bacterial quantification in clinical samples, as well as quantification of environmental burden in water samples. It has been shown that this method allows for the detection of leptospires in whole blood samples obtained during the first six days of illness, after which the bacterial load decrease is inversely proportional to the raise in antibody titer. The lower limit of detection was estimated to be 280 GEq/mL. The prognostic threshold was estimated at 159 GEq/mL for the development of LPHS, with sensitivity of 64.3% (95% CI 35.1- 87.2%), specificity of 68.8% (95% CI 62.8-74.3%) and accuracy of 68.0%. For death, the prognostic threshold was set at 1.181 GEq/mL, with sensitivity of 76.5% (95% CI 50.1-93.2%), specificity of 89.3% (95% CI 85.0-92.8%) and accuracy of 88.3%. Selection of the commercial kit for DNA extraction, and establishment of concentration parameters, initial sample volume and lower limit of detection led to the adaption of the qPCR method to allow for the quantification of leptospires in environmental samples. The adapted method was validated in a study conducted with environmental samples collected in the slum community of Pau da Lima, in Salvador (Bahia, Brazil). Results showed a higher positivity for samples collected at low altitudes (positivity of 50%), as well as for samples collected in the morning when compared to those collected in the afternoon (17.7% vs. 5.8%). Positivity was also higher for sewage than for puddle water (17.7% vs. 5.6%). There was also difference in positivity for samples collected during the wet season when compared to those collected during the period with intermediate humidity (16.0% vs. 9.7%). Therefore, we conclude that the qPCR method is a useful tool for the diagnosis and prognostic evaluation of patients with a clinical suspicion of leptospirosis. The method was also reliable in identifying possible infection sites through the evaluation of water samples collected from an endemic area. Keywords: Leptospira, leptospirosis, real time PCR, whole blood, bacterial load, prognosis, environmental water sample.
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Pesquisa de terapias para o melanoma em modelos de metástases pulmonares em camundongosAndrade, Lucas Ferrari de January 2014 (has links)
Orientador : Prof. Dr. Edvaldo da Silva Trindade / Orientadora : Profª. Drª. Dorly de Freitas Buchi / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular. Defesa: Curitiba, 28/08/2014 / Inclui referências / Resumo: Melanoma é um câncer de pele cujas metástases para órgãos distantes levam à óbito milhares de pessoas todos os anos. Até o presente momento, não existe uma forma de terapia que possua alta frequencia de respostas duradouras. Sendo assim, muitos pacientes com câncer utilizam homeopatia como uma terapia integrativa e complementar, e relatam terem vivenciado os benefícios do tratamento. Entretanto, existem poucas evidências científicas que comprovem sua real eficácia. Sendo assim, no presente estudo foi investigado o potencial anti-melanoma de um medicamento homeopático chamado M1, com base em sua ação imunoestimulante relatada anteriormente. Para tanto camundongos C57BL/6 foram injetados intravenosamente com células de melanoma B16F10 ou LWT1 para formação de metástases pulmonares e tratados com M1 ou seu veículo (água). Após 14 días de tratamento, os camundongos foram eutanasiados e os pulmões foram removidos para análises microscópicas e por citometria de fluxo. As análises histológicas revelaram que M1 reduziu a formação de metástases em ambos os modelos de melanoma. Adicionalmente, o tamanho dos nódulos, bem como a proliferação e angiogênese tumorais estavam todas reduzidas em metástases de melanoma B16F10 de camundongos tratados com M1. Interessantemente, a ação do M1 foi independente da imunidade inata e adaptativa mediada por linfócitos. Por outro lado, pulmões de camundongos com B16F10 e tratados com M1 posuíram menores frequencias de células mielóides imunossupressoras caracterizadas pela marcação CD11b+ Gr-1baixo AT1R+. A presença de AT1R nessas células sugere um papel na angiogênese tumoral, inibida pelo M1. Adicionalmente, as metástases de melanoma apresentaram um fenótipo de marcações para imunofluorescência associado à menor malignidade tumoral, como maior expressão de Beta-Catenina e menor expressão de Ácido Hialurônico. Esses dados revelaram que o tratamento com M1 resultou em menor carga tumoral de metástases de melanoma em camundongos e sugerem um possível mecanismo de ação celular: o controle da angiogênese pela inibição de células CD11b+ Gr-1baixo AT1R+ com consequente menor desenvolvimento tumoral e aumento de apoptose. Esses dados comprovam a eficiência do tratamento com M1 para o câncer de pele tipo melanoma. / Abstract: Melanoma is a skin cancer with increasing incidence and incurable metastases, which annually kills thousands of people worldwide. Until now, there is not a therapy with high efficacy rate and durable response. Therefore many cancer patients use integrative therapies such as Homeopathy and claim the benefits from these treatments. However, there are not enough scientific evidences to support efficacy of these homeopathic medicines. Therefore, in this study was investigated the antimelanoma potential of a homeopathic medicine termed M1, based on M1's immunestimulatory action that has been previously reported. C57BL/6 mice were injected intravenously with B16F10 or LWT1 mouse melanoma cells and treated with M1 or vehicle (water). Following 14 days of treatment, mice were euthanized, lungs removed and analysed by microscopy or flow cytometry. Microscopic analysis revealed the quantity of metastases was reduced by treatment with M1 for both melanoma cell lines. Furthermore, metastases' size, proliferation and angiogenesis were all reduced by M1 treatment for the B16F10 model. Surprisingly, these effects by M1 treatment were not associated but independent of innate and adoptive immune responses for B16F10 and LWT1 melanoma metastases. On the other hand, mice's lungs with B16F10 and treated with M1 had fewer frequency of CD11b+ Gr-1low AT1R+ myeloid-derived suppressor cells. The expression of AT1R on these cells suggests a possible role for tumour angiogenesis, inhibited by M1. Additionally, melanoma metastases had a phenotype determined by microscopy typical for decreased malignancy, such as increased Beta-Catenin and decreased Hyaluronic Acid expression. In summary, these data reveal M1 treatment reduces tumor burden of melanoma metastases in mice and suggest a possible mechanism of action: control of angiogenesis by inhibition of CD11b+ Gr-1low AT1R+ cells with consequent reduction of tumor development and increased tumour apoptosis. These data show the efficacy of treatment with M1 and provide insights in the importance of treatment with homeopathic medicines. Key words: Melanoma. Homeopathy. M1. Angiogenesis. CD11b+ Gr-1low AT1R+ cells.
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Avaliação do papel da proteína TCTP em melanoma murino (B16-F1 e B16-F10)Ferreira, Marianna Boia January 2014 (has links)
Orientadora : Profª. Drª. Andrea Senff Ribeiro / Coorientador : Prof. Dr. Silvio Sanches Veiga / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular. Defesa: Curitiba, 27/02/2017 / Inclui referências : f. 73-83 / Resumo: O tumor do tipo melanoma da pele apresenta baixa incidência contudo, sua letalidade é extremamente elevada. As linhagens B16 constituem um modelo de melanoma murino muito útil na oncologia experimental. A linhagem B16F10 apresenta alta capacidade de invasão e metastização enquanto que a linhagem B16-F1 apresenta menor motilidade in vitro e, portanto, baixo potencial metastático. A TCTP (Translationally Controlled Tumor Protein) é expressa em diversos organismos e tecidos, o que aponta um papel biológico fundamental. Diferentes estudos já estabeleceram seu envolvimento na regulação do ciclo e proliferação celular, bem como na malignidade e como fator protetor contra estresse e apoptose. Dessa forma, o objetivo desse trabalho foi avaliar o papel da TCTP em melanoma murino (B16F1 e B16F10). O perfil proteico bidimensional apresentado pelas linhagens foi diferente: a linhagem B16-F10 apresentou 201 spots e a linhagem B16-F1 126 spots. Essa diferença pode estar relacionada à complexidade celular da B16-F10, mais maligna e metastática. Em ambos os extratos foi identificada uma proteína com mobilidade eletroforética de 20 kDa e pI de 4,8 (valores esperados para TCTP). Além disso, a TCTP foi imunodetectada por western blotting. A linhagem B16- F1 apresentou um menor sinal de detecção quando comparada à B16-F10., Essa diferença poderia estar associada a uma maior expressão de TCTP em células tumorais mais metastáticas e invasivas e, consequentemente, a B16F10 apresentaria níveis superiores de TCTP. Esta hipótese foi confirmada por PCR em tempo real: B16-F10 apresentou níveis de RNAm para TCTP superiores aos encontrados para B16-F1. Esses dados corroboram com os resultados do western blotting e com dados da literatura que relacionam a TCTP à linhagens malignas, devido ao seu papel anti-apoptótico e seu antagonismo com a p53. A fim de avaliar o papel biológico da TCTP no melanoma, esta foi silenciada na linhagem B16-F10, utilizando a técnica de RNAi. O silenciamento diminuiu os níveis de TCTP em 50 a 70% quando utilizado 50 nM e 60 a 80% quando utilizado 100 nM do duplex após 24, 48 e 72 horas de transfecção. As linhagens transfectadas com RNAi para TCTP apresentaram menor proliferação, menor migração e maior adesão celular às moléculas da matriz extracelular quando comparadas às linhagens transfectadas com o controle negativo. Porém, não houve qualquer alteração significativa da viabilidade celular. O aumento da proliferação celular e do potencial migratório são dois eventos muito importantes para a tumorigênese, e estão intimamente relacionados à malignidade. Portanto, o silenciamento foi capaz de regredir o fenótipo de malignidade da linhagem B16-F10, deixando esse mais próximo da B16-F1. Dessa forma, nosso estudo caracterizou os perfis celulares das duas linhagens e demonstrou uma diferença no número de proteínas e parceiros moleculares entre ambas linhagens. Além disso, nossos dados sugerem que o silenciamento da TCTP tornou a linhagem B16-F10 menos metastática e maligna, com um fenótipo mais próximo ao de uma célula normal. Mais estudos são necessários com o intuito de identificar possíveis parceiros e melhor entender o papel dessa proteína multifuncional no melanoma murino. Palavras-chave: TCTP, melanoma, B16-10, B16-F1, câncer / Abstract: Skin melanoma tumor displays low incidence, however, its lethality is extremely high. B16 cell lines typify a murine melanoma model very useful on the experimental oncology field. B16-F10 cell line exhibits high invasion and metastization capacities while B16-F1 cell line depicts lower in vitro motility and, therefore, low metastasis potential. TCTP (translationally controlled tumor protein) is expressed in several organisms and tissues, which suggests a fundamental biological role. Different studies have already settled its participation in cell cycle regulation and cell proliferation, as well as in malignancy and as a protective factor against stress and apoptosis. Thus, this study aimed to assess the TCTP role in in murine melanoma (B16-F1 and B16- F10). Two-dimensional electrophoresis profiles of proteins from the two cell lines were different: B16-F10 cells presented 201 electrophoresis spots while B16-F1 originated 126 spots. This difference may be related to the B16-F10 cell complexity, since this cell line is more malignant and metastatic. In both cell extracts was identified a protein with electrophoretic mobility about 20 kDa and deduced pI of 4.8 (expected parameters for TCTP). Furthermore, TCTP was immunodetected by western blotting analysis. B16-F1 cells produced low detection signals when compared to the B16-F10 cells. This difference may be associated to the higher TCTP expression in more metastatic and invasive tumoral cells and, consequently, B16-F10 would present higher TCTP levels. This hypothesis was confirmed by Real-Time PCR, since B16-F10 revealed RNAm levels for TCTP higher than the B16-F1. These data corroborate with western blotting results and the specific literature, which connect TCTP and malignant cell lines due to the anti-apoptotic function and its p53 antagonism. In order to evaluate the biological role of TCTP in melanoma, it was performed the TCTP silencing in B16-F10 cell line by using RNA interference (RNAi) method. The gene silencing reduced TCTP levels in 50% to 70% when used 50 nM and 60% to 80% when used 100 nm of the duplex after 24, 48 and 72 hours of transfection. The transfected cell lines with RNAi for TCTP presented lower proliferation, lower migration and higher cell adhesion to extracellular matrix molecules when compared to the cell lines transfected with negative control. However, there was no significant change in cell viability. Increasing cell proliferation and migration potential are two events very important for the tumorigenesis process and they are closely related to the malignancy. Therefore, gene silencing was able to recede the malignant phenotype of B16- F10 cell line, resulting in a similar aspect to the B16-F1 cells. Thus, this study characterized the profile of two cell lines and it demonstrated differences in protein number and molecular partners between these two cell lines. Moreover, the generated data suggest that TCTP gene silencing became B16-F10 cells less metastatic and malignant, resembling the normal cell phenotype. Further studies are necessary in order to identify possible partners and to better understand the TCTP role in the murine melanoma. Key-words: TCTP, melanoma, B16-10, B16-F1, cancer.
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Caracterização de proteína TcZC3H31 de Trypanosoma cruzi, uma CCCH ZINC Finger essencial para metaciclogêneseAlcântara, Monica Visnieski January 2014 (has links)
Orientador : Dr. Stenio Perdigão Fragoso / Co-orientadora : Drª. Gisele Fernanda Assine Picci / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular. Defesa: Curitiba, 10/06/2014 / Inclui referências / Área de concentração : Biologia Celular e Molecular / Resumo: O protozoário Trypanosoma cruzí, agente causador da Doença de Chagas, possui
características incomuns em relação à organização e expressão gênicas, tais como genes arranjados em polícístrons, transcritos processados por uma reação de trans splícíng, ausência promotores clássicos da RNA Polimerase 11 e poucos fatores de transcrição codificados em seu genoma. Essas características sugerem que a regulação diferencial da expressão gênica, que permitem um ciclo de vida complexo, é controlada por mecanismos pós-transcricionais, principalmente através de elementos em eis presentes, em geral, nas regiões não traduzidas (UTRs) dos mRNAs e de proteínas ligadoras de RNA (fatores em trans). As proteínas CCCH zínc fínger, caracterizadas por possuírem três resíduos de cisteína e um de histidina que coordenam um íon zinco na sequência C-X7;8-C-X5-C-X3-H, estão entre as proteínas ligadoras de RNA que promovem o controle do processamento, estabilidade, distribuição e tradução dos mRNAs. O objetivo do presente trabalho foi estudar o papel que proteína TcZC3H31 (a qual possui três domínios CCCH zínc fínger) desempenha durante o ciclo de vida do T. cruzí, usando técnicas como nocaute gênico, superexpressão e ribonômica. Essa proteína é expressa quase que exclusivamente nas formas epimastigota e tripomastigota metacíclico. Durante a divisão celular (G2, mitose e citocinese) de epimastigotas foram observadas estruturas com alta concentração dessa proteína, as quais não são observadas nos parasitas em na fase G1 do ciclo celular. Foram obtidos parasitas nocautes para esse gene, os quais foram incapazes de se diferenciar de epimastigota para a forma tripomastigota metacíclico, enquanto
parasitas superexpressando TcZC3H31 se diferenciam com maior eficiência do que os parasitas selvagens, sugerindo que essa proteína é essencial para a diferenciação do T. cruzí. Ensaios de imunoprecipitação de RNA seguida de sequenciamento (experimentos de ribonômica) permitiram a identificação de mRNAs alvos dessa proteína. A maioria dos genes identificados nessa análise codificam proteíno-quinases. O padrão de expressão de alguns RNAs alvos foi avaliado por PCR quantitativa ao longo do ciclo de vida e nos parasitas mutantes obtidos. Através dessas análises foi possível identificar um grupo de 5 genes para os quais padrão de expressão acompanha ao da proteína TcZC3H31, ou seja, seus mRNAs estão aumentados quando a proteína está superexpressa e diminuídos quando a proteína está ausente
(nocaute gênico).
Palavras-chave: Trypanosoma cruzí. CCCH zínc fíngers. Regulação da expressão
gênica. Regulação pós-transcricional. Metaciclogênese. / Abstract: The protozoan parasite Trypanosoma cruzí is the causative agent of chagas disease and presents unusual gene expression and organization features. For example, genes are arranged in polícístrons, transcripts are processed through a trans splícíng reaction, and their genome lacks the classic RNA Polymerase li promoters and encodes only a few transcription factors. Those features suggest that the differential regulation of gene expression, required for the complexity of their life cycle, is controled at the posttranscriptional level, mainly through eis contrai elements, which are generally present in the untranslated regions (UTRs) of mRNAs and trans-acting factors, such as RNAbinding proteins (RBPs). The CCCH zínc fínger proteins are characterized by the presence of three cystein and one histidine residues that coordinate the zinc ion in the motif C-X718-C-X5-C-X3-H. They are RNA binding proteins that contrai mRNA processing, stability, distribution and translation. The aim of the present work was to to examine the role that the TcZC3H31 (a three CCCH zínc fínger motifs-containing protein) plays during the life cycle of T. cruzí. TcZC3H31 is almost exclusively expressed in the
epimastigote and metacyclic trypomastigote forms. During cell division (G2, mytose and cytokinesis phases) TcZC3H31 was concentrated in structures, which were not
observed in the G1 phase. T. cruzí null mutant for TcZC3H31 gene is not able to
undergo differentiation to metacyclic trypomastigote forms, whereas TcZC3H31-
superexpressing parasites differentiate more efficiently than wild type counterpart.
These data suggest that TcZC3H31 protein is essential for T. cruzí differentiation. RNA immunoprecipitation followed by sequencing (ribonomic assays) identified the
TcZC3H31 mRNA targets. Most of them encode for protein kinases. The expression pattern of some targets through the life cycle and in the mutant parasites was measured by quantitative PCR. This analysis enabled the identification of a 5 genes group wich showed an expression pattern similar to the expression of TcZC3H31 protein, with an increase of these mRNAs in response to the protein overexpression and a decrease in the protein absence (gene knockout).
Key words: Trypanosoma cruzí. CCCH zínc fíngers. Gene expression regulation.
Postranscriptional regulation. Metacyclogenesis.
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Estudo das histonas H4K12ac e H3K36me3 em neoplasias da tireóide: comparação entre tipos histológicos e comportamento metastático / Study of histone H4K12ac and H3K36me3 in thyroid neoplasms: comparison between histological types and metastatic behaviorMoraes, Sávio de 26 February 2014 (has links)
O diagnóstico pré-operatório de nódulos tireoidianos permanece, em alguns casos, um desafio. Atualmente, a punção biópsia por agulha fina, seguida da citologia, é o procedimento de escolha, mas sua aplicação mostra limitações. Por isso, é extremamente instigante e motivadora a ideia de identificar alterações moleculares que possam distinguir nódulos tireoidianos benignos dos malignos.
Alterações epigenéticas, em especial as modificações pós-traducionais de histonas, desempenham um papel importante no controle da expressão gênica, e as células cancerosas exibem mudanças nos padrões dessas modificações. Poucas informações estão disponíveis sobre as modificações de histonas presentes nas neoplasias da tireóide e sobre a relação entre tais modificações e a agressividade do tumor.
Este estudo avalia o padrão de expressão e relevância biológica das modificações de histonas H4K12ac e H3K36me3, em tecidos de neoplasias tireoidianas e tireóide normal, através da imuno-histoquímica. Nele evidencia-se que, reatividade para H4K12ac é um evento observado em todas as amostras de tireóide normal, adenomas e carcinomas de tireoide, não sendo possível sua utilização como um marcador para essas neoplasias. A H3K36me3 mostra maior marcação no tecido normal em comparação às neoplasias, fato que aponta para um possível papel dessa marca de histona na tumorigênese tireoidiana. Diferente dos outros tecidos, que mostram marcação nuclear, o carcinoma oncocítico apresenta marcação citoplasmática, para ambas as moléculas, além de marcação mais intensa para H3K36me3. A associação dessas histonas à membrana mitocondrial pode ser o evento que determina tais diferenças. / The preoperative diagnosis of thyroid nodules remains, in some cases, a challenge. At present, fine needle aspiration biopsy, followed by cytology, is the gold standard, but its application is limited. It is therefore extremely motivating the idea to identify molecular changes that can distinguish malignant from benign thyroid nodules.
Epigenetic alterations, particularly histone modifications, play an important role in control of gene expression, and cancer cells exhibit alterations in these modifications patterns. Little information about histone modifications in thyroid neoplasms and relationship between such modifications and the tumor aggressiveness is at present available.
This study evaluates the expression pattern and biological relevance of histone modifications H4K12ac and H3K36me3, in thyroid tumors and normal thyroid tissues, by immunohistochemistry. Here it is evidenced that, reactivity to H4K12ac is an event observed in all samples of normal thyroid, thyroid carcinomas and adenomas, so it is not possible use this modification as a marker for these neoplasms. The H3K36me3 shows level of staining higher in normal tissue as compared to neoplasms, a fact that suggests a possible role of this histone mark on thyroid tumorigenesis. Unlike other tissues, that show nuclear staining, carcinoma oncocytic exhibits cytoplasmic staining, to both molecules, as well as a higher level for H3K36me3. Association between histones and mitochondrial membrane could be an event that determines such differences. / Dissertação (Mestrado)
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Valor clínico da citopatologia, do antígeno carcinoembriônico, e do uso combinado da citopatologia e do antígeno carcinoembriônico dos derrames pleuraisNegretto, Juliana January 1981 (has links)
Recentemente novas técnicas no diagnóstico oncológico foram introduzidas, uma delas sendo a determinação do antígeno carcinoembriônico (CEA) no líquido pleural, o que poderia auxiliar a citopatologia no diagnóstico diferencial. Cento e duas amostras de líquido pleural, não selecionadas, foram submetidas ao exame citopatológico e à dosagem dos níveis de CEA para avaliar o rendimento do uso combinado da citopatologia e do CEA na detecção de neoplasia. O teste utilizado para a determinação do CEA foi o de radioimunoensaio, através da técnica conhecida como “Sandwich”, onde é medida a radioatividade do complexo anticorpo-antígeno-anticorpo marcado. Duas ou três lâminas, para o exame citopatológico, foram coradas pelo método de Papanicolaou e o mesmo número, pelo método de Leishman. Sessenta e dois casos foram classificados como derrames pleurais não neoplásicos, ou seja, 22 casos devidos a tuberculose pleural, 18 a pneumonia, 9 a insuficiência cardíaca congestiva, 5 a embolia pulmonar, 4 a insuficiência renal, 2 a colagenoses e 2 a abscesso sub-frênico. Os demais 40 casos foram ocasionados por neoplasias. Dessas 40 casos, 34 forma devidos a neoplasias epiteliais, onde 14 eram carcinoma brônquico, 10 carcinoma de mama, 4 tumor primitivo desconhecido, 2 carcinoma gástrico, 2 carcinoma de ovário, 1 carcinoma de pâncreas e 1 carcinoma de reto, e 6 foram devidos a neoplasis não epiteliais. O CEA sendo um teste relativamente novo nos derrames pleurais, procurou-se estabelecer com exatidão seus características operacionais: Especificidade, Sensibilidade. Índice de falsos positivos, Índice de falsos negativos, Valos crítico discriminativo, Valor preditivo do resultado positivo e Valor preditivo do resultado negativo. Foi escolhido arbitrariamente, após análise dos resultados, como valor crítico discriminativo para o CEA, o nível de 8,0 ng/ml. Acima deste valor encontraram-se 61,8% dos derrames pleurais causados pelas neoplasias epiteliais. Apenas dois casos (3%) dos derrames pleurais não neoplásicos apresentaram níveis acima deste valor crítico discriminativo: ambos eram devidos à empiema pleural pós-pneumônico. As neoplasias não epiteliais não atingiram o nível escolhido como valor crítico discriminativo, devido a uma característica própria de não secretarem, ou secretarem o CEA em pequena quantidade. O rendimento (sensibilidade) da citopatologia nas neoplasias foi de 75% havendo ocorrido 25% de falsos negativos; a especificidade foi 100%, não tendo ocorrido falsos positivos. O uso combinado da citopatologia e do CEA apresentou uma especificidade de 97% e uma sensibilidade de 82,5%; havendo sobre a citopatologia isolada um ganho na sensibilidade de 75% para 82,5% e sobre o uso isolado do CEA um ganho de 60 para 82,5% na sensibilidade. Conclui-se, pois, pela vantagem de se dosar o CEA nos casos com citopatologia negativa, usando-se o nível de 8,0 ng/ml como valor crítico discriminativo, entre os derrames pleurais neoplásicos e os com etiologia benigna.
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O exame citológico diferencial neutrófilos/eosinófilos no escarroVieira, Vera Beatriz Guirland January 1977 (has links)
Resumo não disponível
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