Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The Lecythidaceae family consists of about 230 species, classified in some 10 genera. The species Cariniana domestica (Mart) Miers is one of several Jequitibá species, the oldest and millenary trees from Brazil. The present work developed studies with the aim of characterize the species when concerning to chemical aspects, in order to contribute to the knowledge improvement about Lecythidadeae family. The barks of C. domestica were collected in Tangará da Serra-MS. Exsiccate was archived as voucher specimen in the herbarium of Department of Biology at UFSM (SMDB 11818). Plant material was dried, crushed and powdered. The powder was submitted to hidroalcoolic maceration (7:3, v/v) and concentrated under reduced pressure. The remained aqueous extract was partitioned to obtain the fractions FCH2Cl2, F-AcOEt e F-BuOH. Chromatographic procedures led to the isolation of phytosterols (β-sitosterol + stigmasterol) and pentacyclic triterpenes (lupeol + β- amyrin), which were identified by means of spectroscopic (1H-NMR and 13C-NMR) and chromatographic (GC/MS and HPLC) methods. Additionally, the antioxidant capacity was evaluated by measuring its scavenging ability on DPPH and also using TBARS assay. Contents of total polyphenolic and flavonoid were measured as well as a chromatographic profile searching for phenolic substances was determined.. From F-CH2Cl2, DPPH assay revealed high scavenging ability with IC50 values that ranged from 6.5 ± 0.81 to 19.5 ± 1.32 μg/mL. IC50 values obtained with TBARS assay ranged from 11.11 ± 0.85 to 44.5 ± 2.31 μg/mL. Polyphenolic contents varied from 54.6 ± 0.33 to 309.3 ± 2.73 mg/g. Total flavonoid and condensed tannin contents varied from 12.0 ± 0.12 to 14.18 ± 0.1 and 131 ± 0.03 to 149.7 ± 0.22, respectively. HPLC analysis revealed the presence of gallic, caffeic and chlorogenic acids, as well as the flavonoids rutin, quercetin and kaempferol. The carotenoids lycopene and β- carotene were identified in dichloromethane fraction. The results revealed that the species C. domestica achieves antioxidant properties and the compounds identified for the first time for this species can be related to its popular uses. / A família Lecythidaceae consiste em cerca de 230 espécies, classificada em 10 gêneros. A espécie Cariniana domestica (Mart) Miers é uma das diversas espécies de Jequitibá, as árvores milenares mais antigas do Brasil. O presente estudo teve o objetivo de caracterizar quimicamente a espécie, visando contribuir para um maior conhecimento sobre a família Lecythidaceae. As cascas de C. domestica foram coletadas no município de Tangará da Serra-MS e o material foi catalogado sob o registro SMDB 11818 no departamento de Biologia da UFSM. O material vegetal foi seco, triturado e moído. O pó obtido foi submetido à maceração hidroalcóolica (7:3, v/v), seguindo-se de concentração em evaporador rotatório. A partição do extrato aquoso remanescente originou as frações F-CH2Cl2, F-AcOEt e F-BuOH. Os procedimentos cromatográficos de isolamento levaram à obtenção do fitoesteróis (β-sitosterol + estigmasterol) e triterpenos pentacíclicos (lupeol + β-amirina), os quais foram identificados por métodos espectroscópicos (1H-RMN e 13C-RMN) e cromatográficos (CG/EM e CLAE). Adicionalmente, foi avaliada a capacidade antioxidante frente ao radical DPPH, bem como utilizando o método do TBARS. Foram ainda realizadas dosagens investigativas quanto ao teor de polifenóis totais e flavonóides e um perfil cromatográfico para identificação de alguns compostos fenólicos também foi traçado. Os ensaios com o radical DPPH revelaram elevada capacidade seqüestradora de radicais livres, sendo que os valores de IC50 obtidos variaram de 6,5 ± 0,81 a 19,5 ± 1,32 μg/mL. No ensaio do TBARS, os valores de IC50 obtidos variaram de 11,11 ± 0,85 a 44,5 ± 2,31. A determinação de polifenóis totais revelou um teor variável de 54,6 ± 0,33 a 309,3 ± 2,73 mg/g. As determinações de flavonóides totais e taninos condensados variaram de 12,0 ± 0,12 a 14,18 ± 0,1 mg/g e 131 ± 0,03 a 149,7 ± 0,22, respectivamente. A análise por CLAE revelou a presença dos ácidos gálico, caféico e clorogênico, além dos flavonóides rutina, quercetina e campferol. Na fração diclorometano foram identificados os carotenóides licopeno e β-caroteno. Os resultados obtidos demonstram que a espécie C. domestica apresenta propriedades antioxidantes e os compostos identificados pela primeira vez para esta espécie podem estar relacionados com seus usos populares.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:34:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 3943.pdf: 3672997 bytes, checksum: 976906627d883988e6f1df73a31d7614 (MD5) Previous issue date: 2011-11-24 / Financiadora de Estudos e Projetos / This work highlights the implementation, development and application of the Ultrafast Nuclear Magnetic Resonance (UFNMR) technique, proposed by Frydman and co-workers. Through this technique, it is possible to perform multidimensional experiments in a single scan, thus reducing the experiment time drastically, which can be a fraction of second. This study shows a practical protocol, which was optimized for the implementation of the first ultrafast 2D NMR COSY and HSQC experiments performed in Brazil and, to our knowledge, in the southern hemisphere. This process involves the setting of several parameters from the initial calibration of encoding gradients and pulses, to the setting of a specific acquisition scheme required by the technique. Furthermore, some important operational aspects are discussed in order to contribute, even more, to future implementations to be carried out safely and efficiently. Also, as part of this study, a software in C language was developed to obtain the real-time processing (1 second) of the UF-NMR data, and this was incorporated in the Bruker software for the acquisition and processing of NMR data - TopSpin® version 3.0. Finally, two studies were also performed using the UF-NMR experiments. The first one was the real-time identification of a mixture of flavonoids (epicatechin, naringenin and naringin), which underwent on-flow chromatographic separation, in a commercial HPLC-NMR system. UF-COSY experiments were performed during the chromatographic run, so that it was possible to obtain the 2D NMR spectra related to each flavonoid and to successfully follow their separation over the course of time. The second application was the monitoring of the hydrolysis reaction of the 2-(4-nitrophenyl)-1,3-dioxolane acetal. The hemiacetal intermediate of this reaction has a short lifetime, being difficult to identify by conventional NMR. Therefore, HSQC-UR experiments were performed during the reaction development, thus, it was possible to characterize the presence of the hemiacetal intermediate. This assignment was confirmed by quantum calculation of 1H and 13C NMR chemical shifts and of the NBOs (Natural Bonding Orbital). / O trabalho em questão destaca a implementação, desenvolvimento e aplicação da técnica de Ressonância Magnética Nuclear Ultrarrápida (RMN-UR), proposta por Frydman e colaboradores. Por meio desta técnica, é possível realizar experimentos multidimensionais numa única varredura, reduzindo dessa forma, drasticamente, o tempo de aquisição, que pode durar uma fração de segundo. É apresentado um protocolo prático, que foi otimizado para implementação dos primeiros experimentos de RMN 2D COSY e HSQC ultrarrápidos realizados no Brasil, e ao que se sabe no hemisfério Sul. Este processo envolve desde a calibração de pulsos e gradientes, até a configuração do esquema específico de aquisição relativo a esta técnica. Além disso, alguns aspectos operacionais importantes são discutidos visando contribuir ainda mais para que futuras implementações sejam realizadas de maneira segura e eficiente. Também como parte deste estudo foi desenvolvido um programa em linguagem de programação C, para o processamento em tempo real (1 segundo) dos dados de RMN-UR, e este foi incorporado ao programa computacional de aquisição e processamento dos dados de RMN da empresa Bruker - TopSpin® versão 3.0. Foram realizados ainda dois estudos aplicando os experimentos de RMN-UR. O primeiro trata-se da identificação em tempo real de uma mistura de 3 flavonoides (epicatequina, naringenina e naringina) submetida à separação cromatográfica, num sistema CLAE-RMN no modo fluxo contínuo. Experimentos de COSY-UR foram realizados ao longo de toda corrida cromatográfica, sendo possível obter os espectros 2D correspondentes de cada flavonoide e acompanhar com sucesso a separação destes no decorrer do tempo. A segunda aplicação foi o monitoramento da reação de hidrólise do acetal 2-(4-nitrofenil)-1,3-dioxolano. O intermediário hemiacetal desta reação possui curta duração, sendo portanto de difícil identificação via RMN tradicional. Por isso, foram realizados experimentos de HSQC-UR durante todo o desenvolvimento da reação e, por meio destes, foi possível caracterizar a presença do intermediário hemiacetal. A correlação atribuída a este foi confirmada através de cálculos quânticos de deslocamento químico de RMN de 1H e 13C e dos NBOs (Natural Bonding Orbital).

Bauhinia forficata, Leguminosae, é conhecida popularmente como pata-devaca e seus principais constituintes químicos são flavonóides. Ë comumente usada como antidiabética, mas existem relatos a respeito de suas atividades antioxidante e antiedematogênica. A fim de avaliar-se o comportamento de seus constituintes químicos frente a variações de temperatura e umidade, realizou-se estudo de estabilidade acelerada (50 ºC ± 2 oC e 90% ± 5% U.R.), onde a substância química majoritária (SQM) serviu como marcador para os devidos cálculos e, portanto, o seu isolamento prévio tornou-se imprescindível. Um método devidamente validado por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) foi utilizado para as análises e através das mesmas pode-se predizer uma reação de segunda ordem e, por conseguinte, um tempo de vida útil de 2,63 dias e um tempo de meia-vida de 23,65 dias. Avaliou-se, ainda, as atividades antioxidante (DPPH), antiedematogênica (edema em pata de ratos induzido pela carragenina) e anticolinesterásica (autobiografia). Para a atividade antioxidante, dos extratos testados, o butanólico foi o que demonstrou maior ação (54,73 µl/ml) sendo, no entanto, inferior ao padrão Ginkgo biloba (42,51 µl/ml). Na avaliação da atividade antiedematogênica, o extrato aquoso testado demonstrou um máximo de inibição de 76,5%. Ao testar-se a atividade anticolinesterásica de produtos isolados obtidos a partir de B. forficata, nenhuma ação significativa foi observada exigindo estudos complementares.

O presente trabalho objetivou estudar as principais variáveis analíticas associadas aos métodos espectrofotométricos de quantificação do teor de taninos utilizando caseína e pó-de-pele, os reagentes de Folin-Denis e Folin-Ciocalteu, bem como a avaliação de diferentes tipos de PVPP (Divergan® F, Divergan® RS, Kollidon® CL e PVPP-P6755) na substituição dos substratos protéicos. Para tanto, dois métodos de análise, um espectrofotométrico e outro por CLAE foram desenvolvidos, utilizando os polifenóis catequina, ácido tânico, ácido gálico e pirogalol como substâncias de referência e rutina como flavonóide modelo. Para maiores inferências uma solução extrativa de folhas secas de Psidium guajava L também foi quantificada. A análise comparativa assinalou o uso vantajoso do reagente de Folin-Ciocalteu, em relação ao reagente de Folin-Denis. Em termos de reprodutibilidade, a caseína grau técnico (GT) mostrou-se superior à caseína purificada, embora essa última possua maior afinidade pelos polifenóis testados. Contudo, as análises por UV-VIS e por CLAE em comprimentos de onda de 280m e 352 nm, demonstraram que tanto a caseína GT quanto o pó-de-pele não são seletivos para complexar taninos, de acordo com as normas do ICH. Tanto o pó-de-pele quanto a caseína GT foram capazes de complexar polifenóis e rutina de maneira inespecífica. Isso foi evidenciado quando misturas de um único polifenol e rutina ou a fração flavonoídica de P. guajava foram testadas. A capacidade de complexação de polifenóis e rutina por parte da PVPP foi avaliada por UV-VIS, DSC e CLAE. Os melhores resultados foram observados para PVPP-P6755, no entanto com restrições. De maneira similar a caseína GT e pó-depele a PVPP-P6755 foram capazes de complexar de maneira inespecífica rutina e outros flavonóides do extrato de P. guajava. Uma validação plena para o caso específico de folhas de P. guajava é questionável. No entanto, o método baseado na utilização de PVPP mostrou-se passível de padronização utilizando 500,0 mg de pó de droga, 2,0 mL de reagente de Folin-Ciocalteu, tempo de leitura 30 min após adição desse reagente e quantificação em 760 nm. Sob essas condições, a análise comparativa demonstrou que 50,0 mg de PVPP foram, em termos analíticos, equivalentes a 100,0 mg de pó-de-pele ou a 750 mg de caseína GT.

Submitted by VIVIANE MAGRINI null (viviane_magrini@yahoo.com.br) on 2016-03-01T20:13:04Z No. of bitstreams: 1 Viviane Magrini.pdf: 5645437 bytes, checksum: 25fafce9b5405010cb429b17c172011c (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2016-03-03T19:58:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 magrini_v_me_araiq_par.pdf: 1328742 bytes, checksum: 4a2b2b27d644fb4d71ce706407afdc38 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-03T19:58:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 magrini_v_me_araiq_par.pdf: 1328742 bytes, checksum: 4a2b2b27d644fb4d71ce706407afdc38 (MD5) Previous issue date: 2016-02-18 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / O gênero Calycophyllum pertence à família Rubiaceae, conhecida pela diversidade de metabólitos secundários, e pela variedade de atividades biológicas: antifúngica, bactericida, antiviral e inseticida. A espécie vegetal Calycophyllum spruceanum Benth (Rubiaceae) é muito utilizada pelas populações da América do Sul no combate a doenças dermatológicas, estomacais, diabetes, parasitoses, câncer, entre outras, despertando o interesse pela investigação química deste táxon. A presente pesquisa objetivou o estudo bio-guiado dos extratos obtidos das folhas, galhos e de cascas do caule de C. spruceanum visando à identificação das substâncias bioativas isoladas, incluindo as inativas. A meta é identificar nas substâncias isoladas aquelas com propriedades cosméticas associadas ao uso popular desta espécie, conhecida na região Amazônica por esta propriedade. Diferentes extratos foram preparados e analisados por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) e Espectroscopia de Ressonância Magnética Nuclear (RMN 1H), acompanhados por ensaios biológicos (ensaio de capacidade redutora dos radicais DPPH˙ e ABTS˙+) para determinação de atividade antioxidante. O direcionamento do estudo foi feito em função dos ensaios antioxidantes aplicados aos extratos, conduzindo o estudo experimental para o extrato hidroetanólico de folhas ao foco do estudo, por ter apresentado a maior atividade antioxidante. Por meio de métodos espectroscópicos e espectrométricos (CLAE-DAD, CLAE-EM, CLAE-EM/EM; RMN de 1H e 13C; TOCSY 1D; HMBC; EM-IES) deste extrato e respectivas frações, pode-se identificar algumas substâncias antioxidantes potencialmente ativas, sendo estas: ácido 3,5-di-O-E-cafeoilquínico; duas séries homólogas de proantocianidinas (tipo-B) com grau de polimerização de 1 a 4, e proantocianidinas monoglicosiladas (tipo-B O-glicosilada) com grau de polimerização de 1 a 3; ácido 1,4-di-O-E-cafeoilquínico, quercetina 3-O-α-arabinopiranosil (16) β-glucopiranosídeo, ácido cafeoilquínico e canferol 3-O-β-D-glicopiranosil (12) β-D-xilopiranosídeo. Espera-se que ao final deste estudo, as informações forneçam subsídios para uma possível aplicação dos resultados científicos sobre a espécie vegetal, visando um produto para a linha de cosmético funcional. / The Calycophyllum genus belongs to the Rubiaceae’s family, known for its high diversity of secondary metabolites, which have a wide range of biological activities (antifungal, antibacterial, antiviral and pesticide). It is widely used by the people of South America against skin diseases, stomach, diabetes, parasites, cancer, among others. It is therefore essential to study the chemical composition of these species used in folk medicine, aiming to validate the traditional use, with scientific data and thus contributing to the search for new bioproducts. This research aimed the bio-guided fractionation of the extracts from the leaves, branches and stem bark extracts of Calycophyllum spruceanum Benth (Rubiaceae), to identify the secondary metabolites in the extracts and fractions, including bioactive ones, for further evaluation of the cosmetic potential of this species, commonly known in the Amazon region. Different extracts were prepared and analyzed by High Performance Liquid Chromatography (HPLC) and Nuclear Magnetic Resonance spectroscopy (1H NMR), and screened by biological assays (assay of reducing capability of ABTS˙+ and DPPH˙radicals) to determine the antioxidant activity. The chemical investigation was carried out based on the antioxidant activity of the extracts. The experimental study focused on the hydroethanolic extract of leaves, that presented the higher antioxidant activity, which would support the traditional uses of this specie as cosmetic. By means spectroscopic and spectrometric analysis (HPLC-DAD, HPLC-MS, HPLC-MS/MS; 1H NMR and 13C; TOCSY 1D; HMBC, ESI-MS) of this extract and its fractions, some compounds were identified: the 3,5-di-O-E-caffeoylquinic acid; two homologous series of proanthocyanidins (B-type) with a degree of polymerization from 1 to 4 and monoglicosyl proanthocyanidins (B-type O-glycosylated) with degree of polymerization from 1 to 3; 1,4-di-O-E-caffeoylquinic acid, quercetin-3-O-α-arabinopyranosyl (16) β-glucopyranoside, caffeoylquinic acid and kaempferol 3-O-β-D-glucopyranosyl (12) β-D-xilopyranosil, which could be responsible for the activity. It is expected that the the complete study of this species provide chemical information, which will validate this plant specie as a potential source of antioxidant natural products that could be material for functional cosmetics. / CNPq: 166069/2014-0

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-03-30Bitstream added on 2014-06-13T20:17:46Z : No. of bitstreams: 1 passoni_mh_me_arafcf.pdf: 404173 bytes, checksum: 0602419a359e80c6739ffbcafd458c33 (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A teicoplanina é um antibiótico glicopeptídico, cujo mecanismo de ação é inibir a síntese da parede celular bacteriana. Esse antibiótico vem sendo bastante utilizado no Brasil no combate a bactérias Gram-positivas multiresistente a fármacos. Em razão deste fármaco ser relativamente novo no mercado, não há metodologia de análise descrita em compêndios oficias. Este trabalho apresenta procedimentos para quantificação de teicoplanina em pó para solução injetável. O método espectrofotometrico na região ultravioleta a 279 nm, na faixa de concentração de 60,0 a 110,0 μg/mL (r2 = 0,999), apresentou linearidade, precisão e exatidão, com teor médio no pó para solução injetável de 97,45%. A cromatografia líquida de alta eficiência utilizou coluna C18 (4,6 x 250 mm, 5 mm) e a fase móvel constituída de metanol : acetonitrila (50:50, V/V), na faixa de concentração de 70,0 a 120,0 mg/mL (r2 = 0,999) e apresentou linearidade, precisão e exatidão, com teor médio no pó para solução injetável de 99,12%. Os dados foram calculados pela análise de variância (ANOVA), permitindo assim aplicação destes métodos no controle de qualidade. / Teicoplanin is a glycopeptide antibiotic, which inhibits the bacteria cellular membrane synthesis. This antibiotic is quite new and has been used in Brazil to combat Gram-positive bacteria that are multi-drug resistant. There is not described analytical methodology in official literature. This work reports procedures for the quantification of teicoplanin in pharmaceutical forms. In the UV-spectrophotometry at 279 nm, the Lambert-Beer law was obeyed in the concentration range from 60.0 to 110.0 μg/mL (r2 = 0,999), whose analysis presented linearity, precision and accuracy, with average in powder for injection of 97.45. In the second method, HPLC methods, the samples were injected into a Waters Symmetry C18 column (4.6 x 250 mm, 5 mm). The mobile phase was consisted of acetonitrile and methanol (50:50, V/V). UV detection was performed at 279 nm, and the samples and reference solutions were prepared in the mobile phase; the calibration curve for teicoplanin was linear from 70.0 to the 120.0 mg/mL range (r2 = 0.999). The procedure presented linearity, precision, accuracy, with average in powder for injection of 99.12%. The statistical data were calculated by analysis of variance (ANOVA), that it allows the application of the analytical methods in the quality control of pharmaceutical preparations.

The atenolol is a selective β-blocker that acts specially on β-one adrenergic receptors of the heart, used in the control of high blood pressure, pectoris angine, cardiac arrhythmias and the treatment of miocardic stroke. This paper aimed to optimize the described methodologies for drugs and tablets of atenolol. It proposes to develop and validate simple and more accessible tests to evaluate atenolol tablets and raw material. It also emphasizes the ideal characteristics for drugs in the pre-formulation and development of the pharmaceutical form. Methodologies were developed and validated by HPLC and UV spectrophotometric for the quantification of atenolol in tablets. Raw material characterization techniques were also applied for the classification of atenolol in the pre-formulation. A pharmaceutical equivalence test was performed and compared to the national market reference drug. The HPLC developed method presents advantages over the official methodology to establish an analysis without the use of ionic pareator heptane sulphonate, for being faster and more simple. Both quantitative development methods were linear, specific exact, precise, robust and equivalent between themselves. For the dissolution performed with atenolol pharmaceutical form, after the dissolution efficiency analysis no meaningful difference were observed between the obtained dissolution curves through developed methods and the pharmacopeial methodology. The atenolol raw material analysis permitted its characterization, assuring an adequate use in the pharmaceutical form manufacturing. The comparative analysis between the test drug and reference drug allowed to claim that the two formulations are similar and with the some in vitro performance, i.c., they are pharmaceutical equivalent. The described methods are useful in routine quality analysis control of atenolol. The comparative analysis between the proposed methods and official methodology demonstrated that there is no statistical meaningful differences characterizing their equivalence. / O atenolol é um betabloqueador seletivo que age preferencialmente sobre os receptores adrenérgicos beta-1 do coração, utilizado no controle da hipertensão arterial, angina pectoris, arritmias cardíacas e no tratamento do infarto do miocárdio. Este trabalho tem o objetivo de otimizar as metodologias descritas para a avaliação do fármaco e comprimidos de atenolol, através do desenvolvimento e validação de métodos simples e mais acessíveis para avaliação de comprimidos e matéria prima de atenolol. Procura, também, destacar as características ideais para o fármaco na fase de pré-formulação e desenvolvimento da forma farmacêutica. Neste contexto, foram desenvolvidas e validadas metodologias por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) e espectrofotometria no ultravioleta para quantificação de atenolol em comprimidos. Foram também aplicadas técnicas de caracterização da matéria prima para classificação da mesma na fase de pré-formulação. O método desenvolvido por cromatografia líquida de alta eficiência apresenta vantagens sobre o método farmacopeico por estabelecer uma análise sem utilização de reagente de pareamento iônico, heptanossulfonato, por ser mais rápido e simples. Ambos os métodos quantitativos desenvolvidos apresentaram-se lineares, específicos, exatos, precisos, robustos, e equivalentes entre si. Para o estudo de dissolução realizado com as formulações farmacêuticas de atenolol, após a análise de eficiência de dissolução, não se observou variação significativa entre as curvas de dissolução obtidas através dos métodos desenvolvidos e da metodologia farmacopeica. A análise da matériaprima de atenolol permitiu sua caracterização, garantindo um emprego adequado na fabricação da forma farmacêutica. As análises comparativas entre o medicamento teste e o medicamento referência permitem afirmar que as duas formulações são semelhantes e com mesmo desempenho in vitro, isto é, são equivalentes farmacêuticos. Os métodos descritos são úteis em análise de controle de qualidade rotineira de formulações farmacêuticas de atenolol e a análise comparativa entre os métodos propostos e a metodologia oficial, demonstrou não haver diferença estatisticamente significativa, caracterizando a equivalência dos mesmos.

Submitted by Clebson Anjos (clebson.leandro54@gmail.com) on 2016-03-29T20:27:46Z No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 2669382 bytes, checksum: fb66bf1acb3ce2716e7b49b03dadbce6 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-29T20:27:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 2669382 bytes, checksum: fb66bf1acb3ce2716e7b49b03dadbce6 (MD5) Previous issue date: 2014-02-26 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Evaluation of the pharmacokinetic and toxicological profile is essential in the study of new drugs. However, these studies are rare and have been performed, in many cases, after the onset of clinical studies. Trachylobane-360 (T-360), a diterpene ent-7-acetoxytrachyloban-18-oic acid, obtained from Xylopia langsdorffiana, shows antitumor and spasmolytic activities, making it a promising molecule. Moreover, there are no reports on the toxicological and pharmacokinetic studies of this natural product. Considering all these aspects, the present study aimed to evaluate the toxicity and pharmacokinetics of T-360. In the acute toxicity test in mice, the T-360 showed low toxicity at doses of 50 mg/kg (i.v.), and 300 mg/kg (i.p.), showing no significant behavioral and haematological changes. However, the dose of 300 mg/kg (i.v.) caused death in four out of six animals (LD50 of 200 mg/kg). T-360 was not genotoxic in micronucleus assay, because it does not increase the frequency of micronucleated erythrocytes of mice treated with 25, 150 and 300 mg/kg (i.p.). Among the appropriate bioanalytical techniques for pharmacokinetic study highlights the high performance liquid chromatography coupled to mass spectrometry (HPLC/MSn). A HPLC/MSn method developed consisted of ESI ionization, in negative mode, basifying the medium, with detection of molecular ion 359 m/z. The fragmentation study showed that the ion 359 m/z is fragmented into 299 m/z, which is used to detect T-360. The best chromatographic conditions were established: C18 column under isocratic elution with mobile phase consisting of H2O:MeCN (65:35) and 0.1% of NH4OH in the aqueous phase. In method developing of extracting the T-360 in whole blood was evaluated influences the type of extracting solvent and different times and centrifugation forces. T-360 was better recovered (37.02%) of the blood matrix using CHCl3 and 14,000 xg for 15 min, showing the matrix effect and efficiency of the extraction process of -51.23% and 18.05 %, respectively. After optimization of the method, repeating the procedure and acidifying the sample, there was an increase recovery of T-360 (49.47%), reduction of matrix effect (-37.60%) and increase the efficiency of the process extraction (32.24%). In the validation of analytical method for quantification of T-360 in whole blood, using the Riparina I as internal standard (PI), the method presented himself as selective/specific, linear over the concentration range evaluated, accurate and precise. Moreover, presented limit of detection and quantification of 50 and 100 ng/mL, respectively. Finally, pharmacokinetic parameters were obtained by applying the validated method to samples of blood collected from mice subjected to treatment with T-360 at a dose of 25 mg/kg (i.v.), Obtaining the following results: Cmax of 321,34 μg/mL, t1/2 of 3,89 min, Ke of 10,68 h-1 CLs of 830,97 mL/h/kg and Vd 0,08 L/kg, which characterizes tissue distribuition. From the data analysis, it can be suggested that the T-360 continues to be a promising molecule having low toxicity. Furthermore, the pharmacokinetic results propel the continued investigation of other parameters, using other routes of administration, and the study of metabolites responsible, at least in part, by anti-tumor activity. / A avaliação do perfil farmacocinético e toxicológico é essencial no estudo de novos candidatos a fármacos. No entanto, estes estudos são escassos e vêm sendo realizados, em muitos casos, após o início dos ensaios clínicos. Trachylobano-360 (T-360), o diterpeno ácido ent-7-acetoxitrachylobano-18-óico, obtido de Xylopia langsdorffiana, apresenta atividades antitumoral e espasmolítica, tornando-se uma molécula promissora. Além disso, não há relatos na literatura de estudos toxicológicos e farmacocinéticos deste produto natural. Considerando todos esses aspectos, o presente trabalho objetivou avaliar a toxicidade e a farmacocinética do T-360. No ensaio de toxicidade aguda em camundongos, o T-360 mostrou baixa toxicidade nas doses de 50 mg/kg (e.v.) e 300 mg/kg (i.p.), não induzindo nenhuma alteração comportamental e hematológica significantes. Porém, a dose de 300 mg/kg (e.v.) provocou morte em quatro de seis animais (DL50 estimada em 200 mg/kg). O T-360 não se mostrou genotóxico no ensaio do micronúcleo, pois não aumentou a frequência de eritrócitos micronucleados de camundongos tratados com 25, 150 e 300 mg/kg (i.p.). Dentre as técnicas bioanalíticas apropriadas para o estudo farmacocinético, destaca-se a cromatografia líquida de alta eficiência acoplada ao espectrômetro de massas (CLAE-EMn). Foi desenvolvido um método CLAE-EMn que consistiu em ionização por ESI, em modo negativo, basificando o meio, com detecção do íon molecular 359 m/z. O estudo de fragmentação mostrou que o íon 359 m/z é quebrado em 299 m/z, sendo esta fragmentação utilizada para detecção do T-360. As melhores condições cromatográficas estabelecidas foram: eluição isocrática em coluna C18, com fase móvel composta de H2O:MeCN (65:35) e 0,1% de NH4OH na fase aquosa. No desenvolvimento do método de extração do T-360 em sangue total avaliou-se as influências do tipo de solvente extrator e diferentes tempos e forças de centrifugação. O T-360 foi melhor recuperado (37,02%) da matriz sangue utilizando CHCl3 e 14.000 x g por 15 min, apresentando efeito de matriz e eficiência do processo de extração de -51,23% e 18,05%, respectivamente. Após a otimização do método, repetindo-se o procedimento e acidificando a amostra, houve aumento da recuperação do T-360 (49,47%), diminuição do efeito de matriz (-37,60%) e aumento da eficiência do processo de extração (32,24%). Na validação do método analítico para quantificação do T-360 em sangue total, utilizando a Riparina I como padrão interno (PI), o método apresentou-se como seletivo/específico, linear no intervalo de concentrações avaliado, exato e preciso. Além disso, apresentou limite de detecção e quantificação de 50 e 100 ng/mL, respectivamente. Por último, parâmetros farmacocinéticos foram obtidos através da aplicação do método validado às amostras de sangue coletadas de camundongos submetidos ao tratamento com T-360 na dose de 25 mg/kg (e.v.), obtendo-se como resultados: Cmax de 321,34 μg/mL, t1/2 de 3,89 min, Ke de 10,68 h-1, CLs de 830,97 mL/h/kg e Vd 0,08 L/kg, o que caracteriza distribuição tecidual. A partir das análises dos dados, pode-se sugerir que o T-360 continua sendo uma molécula promissora por apresentar baixa toxicidade. Além disso, os resultados farmacocinéticos obtidos impulsionam a continuidade da investigação de outros parâmetros, usando outras vias de administração, e o estudo de metabólitos responsáveis, pelo menos em parte, pela atividade antitumoral.

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:03:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 VideannyVAS.pdf: 505722 bytes, checksum: 93cf2e382da9c35e84a47a279a6d117f (MD5) Previous issue date: 2008-09-29 / The intake of adequate quantities of food, including those rich in vitamins, is necessary for a healthy life. The lack of vitamin A has been characterized as a public health problem in developing countries, however, a high intake of vitamin A can result in toxic and teratogenics effects. High concentrations of vitamin A have been observed in the livers of animals. The objective of this study was to assess the levels of retinol in chicken livers and verify the effect of frozen storage on these levels. 64 livers from two chicken strains, Cobb and Ross, were used, came from four different farms. We examined 32 livers from each strain, 8 samples from each farm. Liver sample were homogenized individually, then 4 aliquots were taken from each sample. One of aliquots was analyzed immediately after slaughter (T0), the others were analyzed after 30, 60 and 90 days of storage at -18oC (T30, T60 and T90, respectively). Retinol dosage in the liver was determined by High Performance Liquid Chromatography (HPLC). The levels of retinol varied significantly according to the strain. The mean retinol value in the fresh samples was 6678.0 ? 1337.7 and 8324.1 ? 1158.5 ?g/100g in the Cobb and Ross strain, respectively. Values of 4258 ? 918.7 ? 1391.7 and 4650.5 ? 1391.7 μg/100g were found after 90 days of storage for Cobb and Ross strain, respectively. The liver freezing caused a significant reduction in their levels of retinol, causing a loss of up to 44% with respect to fresh livers. The reduction in retinol levels occurred from 30 days of storage. Even with the losses from the frozen, the ingestion of a typical portion of 100 g of liver, regardless the chicken strain analyzed, surpass all recommendations of consumption and the maximum tolerable intake of vitamin A (3000 μg/day) for adults / A ingest?o de quantidades adequadas de alimentos, incluindo aqueles ricos em vitaminas, ? necess?ria para uma vida saud?vel. A car?ncia de vitamina A tem sido caracterizada como um problema de sa?de p?blica nos pa?ses em desenvolvimento, entretanto, uma alta ingest?o de vitamina A pode resultar em efeitos t?xicos e teratog?nicos. Altas concentra??es de vitamina A tem sido observadas nos f?gados de animais. O objetivo deste trabalho foi avaliar os n?veis de retinol em f?gados de frango e verificar o efeito da estocagem sob condi??es de congelamento sobre esses n?veis. Foram utilizados 64 f?gados de duas linhagens de frango, Cobb e Ross, provenientes de quatro diferentes propriedades. Examinamos 32 f?gados de cada linhagem, 8 amostras de cada granja. As amostras de f?gado foram homogeneizadas individualmente, em seguida foram retiradas de cada amostra 4 al?quotas. Uma das al?quotas foi analisada imediatamente ap?s o abate (T0), as demais foram analisadas ap?s 30, 60 e 90 dias de armazenamento a 18oC (T30, T60 e T90, respectivamente). A dosagem de retinol no f?gado foi realizada atrav?s da Cromatografia L?quida de Alta Efici?ncia (CLAE). Os n?veis de retinol variaram significativamente de acordo com a linhagem. O valor m?dio de retinol nas amostras frescas da linhagem Cobb e Ross foi de 6678,0 ? 1337,4 e 8324,1 ? 1158,5 ?g/100g, respectivamente. Valores de 4258 ? 918,7 e 4650,5 ? 1391,7 μg/100g foram encontrados ap?s 90 dias de estocagem para a linhagem Cobb e Ross, respectivamente. O congelamento do f?gado causou uma redu??o significativa nos seus n?veis de retinol, ocasionando uma perda de at? 44% com rela??o aos f?gados frescos. A redu??o nos n?veis de retinol ocorreu a partir de 30 dias de estocagem. Mesmo com as perdas decorrentes do congelamento, a ingest?o de uma t?pica por??o de 100 g de f?gado, independentemente da linhagem do frango analisada, ultrapassa todas as recomenda??es de consumo e o limite m?ximo de ingest?o toler?vel de vitamina A (3000 ?g/dia) para adultos

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2017-02-02T15:21:11Z No. of bitstreams: 1 RodrigoAlbertBarachoRuegg_DISSERT.pdf: 974954 bytes, checksum: 9e856f1f06a920e1fa423c790937ebd9 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2017-02-09T20:46:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 RodrigoAlbertBarachoRuegg_DISSERT.pdf: 974954 bytes, checksum: 9e856f1f06a920e1fa423c790937ebd9 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-09T20:46:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 RodrigoAlbertBarachoRuegg_DISSERT.pdf: 974954 bytes, checksum: 9e856f1f06a920e1fa423c790937ebd9 (MD5) Previous issue date: 2016-09-05 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (CAPES) / In Brazil, the production and consumption of giblets are under development, in particular the liver, which is the source of nutrients considered to be a rich source of vitamin A. This vitamin is a micronutrient that plays an essential role in vision, growth, development and maintenance of the epithelial tissue, and in immunological processes in reproduction. Being a food easy acquisition and low commercial value, the chicken liver is a bet to combat vitamin A deficiency (VAD), which affects mainly children and pregnant women in developing countries. This study aimed to analyze the concentration of retinol by high performance liquid chromatography (HPLC) in livers of farms of chickens, organic and hillbillies in different conditions of thawing and cooking, marketed in the city of Natal/RN. In addition, this study aimed to validate an adaptation of the methodology proposed by Hosotani & Kitawaga (2003) for retinol analysis in this food so that the method of analysis become simple, fast and cheap. The mean values of retinol in farm chicken liver for the three brands analyzed were: 9152,9 ? 719; 4673,1 ? 389; 5943,6 ? 614 mg/100 g (p < 0,05). The average retinol organic chicken liver was 3401,33 ? 597,12 g / 100 g. The average retinol in hillbilly chicken liver was 30094.79 ? 4628,75 g/100 g. It was observed that the baking oven for 35 minutes at 200 ? C and thawing process in microwave for one minute caused a significant loss of 39,9 % (p < 0,05) and 26,2 % (p < 0,01), respectively, the retinol concentration in farm chicken liver. The method validation technique resulted in a rapid extraction and determination and quantification need retinol in chicken liver samples, with an average retention time of 5,2 minutes at 23 ? C, with excellent results linearity (R = 0,9999 ) standard stock stability and freeze-thaw process accurately coefficient of variation below 15% and recovery with values of 93 % to 101,2 %. Despite significant losses in thermal processes, consumption of an average serving of roasted liver (88 g) supplies the daily requirement of vitamin A for a man over 14 years up to 6 times and 20 times the daily needs of children 1 to 3 years. The study showed a significant difference between farm livers brands as well as free-range and organic chicken livers, and a significant loss in the retinol content in chicken livers when subjected to thermal processing. The validated method is suitable and safe for retinol analysis in this type of food. / In Brazil, the production and consumption of giblets are under development, in particular the liver, which is the source of nutrients considered to be a rich source of vitamin A. This vitamin is a micronutrient that plays an essential role in vision, growth, development and maintenance of the epithelial tissue, and in immunological processes in reproduction. Being a food easy acquisition and low commercial value, the chicken liver is a bet to combat vitamin A deficiency (VAD), which affects mainly children and pregnant women in developing countries. This study aimed to analyze the concentration of retinol by high performance liquid chromatography (HPLC) in livers of farms of chickens, organic and hillbillies in different conditions of thawing and cooking, marketed in the city of Natal/RN. In addition, this study aimed to validate an adaptation of the methodology proposed by Hosotani & Kitawaga (2003) for retinol analysis in this food so that the method of analysis become simple, fast and cheap. The mean values of retinol in farm chicken liver for the three brands analyzed were: 9152,9 ? 719; 4673,1 ? 389; 5943,6 ? 614 mg/100 g (p < 0,05). The average retinol organic chicken liver was 3401,33 ? 597,12 g / 100 g. The average retinol in hillbilly chicken liver was 30094.79 ? 4628,75 g/100 g. It was observed that the baking oven for 35 minutes at 200 ? C and thawing process in microwave for one minute caused a significant loss of 39,9 % (p < 0,05) and 26,2 % (p < 0,01), respectively, the retinol concentration in farm chicken liver. The method validation technique resulted in a rapid extraction and determination and quantification need retinol in chicken liver samples, with an average retention time of 5,2 minutes at 23 ? C, with excellent results linearity (R = 0,9999 ) standard stock stability and freeze-thaw process accurately coefficient of variation below 15% and recovery with values of 93 % to 101,2 %. Despite significant losses in thermal processes, consumption of an average serving of roasted liver (88 g) supplies the daily requirement of vitamin A for a man over 14 years up to 6 times and 20 times the daily needs of children 1 to 3 years. The study showed a significant difference between farm livers brands as well as free-range and organic chicken livers, and a significant loss in the retinol content in chicken livers when subjected to thermal processing. The validated method is suitable and safe for retinol analysis in this type of food.