Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Methotrexate (MTX) is an antimetabolite drug analogue of folic acid with wide clinical application, used in high doses for the treatment of cancer and in low doses for the treatment of autoimmune diseases such as rheumatoid arthritis and psoriasis. Although effective, the MTX has several side effects. The oxidative stress seems to be involved with the toxicity caused by the MTX in various organs. Despite the effect on the imbalance of oxidative metabolism, the influence of polymorphisms of antioxidant enzymes on MTX toxicity is not well studied. In this context, the present study aimed to examine whether the Ala16Val polymorphism of the antioxidant enzyme superoxide dismutase manganese dependent (SOD2), which affects the efficiency of the detox enzyme, could have an effect on the cytotoxic response to MTX. For this, an in vitro study using peripheral blood mononuclear cells (PBMC) obtained from healthy donors harboring different genotypes of polymorphism Ala16Val-SOD (= genotypes AA, VV and AV) was performed. Once obtained, PBMCs were treated with MTX at concentrations of 10 and 100 μM for 24 and 72 hours and analyzed for the effect on viability, modulation of the oxidative metabolism-inflammatory and apoptotic. PBMC-AA which have a naturally SOD2 30 to 40% more efficient than the PBMC- VV, showed more resistance to treatment with MTX compared to PBMC-AV/VV assessed. As production levels of EROS and lipid peroxidation significantly increased in cells exposed to MTX, regardless of genotype, however, increased levels of protein carbonylation were observed only in PBMC-AV/VV. The PBMC-AA demonstrated decreased activity of SOD2 and the levels of glutathione peroxidase with PBMC-AA were higher. The levels of caspase-8 and -3 were increased in PBMC exposed to MTX, but the modulation of these genes, as well as Bax and Bcl-2 genes involved in apoptotic route, was genotype dependent. The MTX was able to raise the levels of inflammatory cytokines and decrease the level of anti-inflammatory cytokine IL-10, regardless of genotype. The results suggest that Ala16Val-SOD2 polymorphism is capable of modulating the cytotoxic response of PBMC to the MTX. / O Metotrexato (MTX) é um fármaco antimetabólito análogo do ácido fólico, com vasta aplicação clinica, utilizado em doses elevadas no tratamento de neoplasias e em baixas doses para o tratamento de doenças autoimunes, como a artrite reumatoide e a psoríase. Apesar de efetivo, o MTX possui diversos efeitos colaterais. Assim, o estresse oxidativo parece estar envolvido com a toxicidade causada pelo MTX a diversos órgãos. Apesar do efeito no desequilíbrio do metabolismo oxidativo, a influência de polimorfismos de enzimas antioxidantes sobre a toxicidade ao MTX ainda não é bem estudada. Nesse contexto, o presente estudo teve como objetivo analisar se o polimorfismo Ala16Val da enzima antioxidante superóxido dismutase dependente de manganês (SOD2), que afeta a eficiência detoxificadora da enzima, poderia ter efeito sobre a resposta citotóxica ao MTX. Para tanto, foi realizado um estudo in vitro utilizando células mononucleares do sangue periférico (CMSP), obtidas de doadores saudáveis portadores de diferentes genótipos do polimorfismo Ala16Val-SOD (genótipos = AA, VV e AV). Uma vez obtidas, as CMSPs foram tratadas com MTX nas concentrações de 10 e 100 μM por 24 e 72 horas, sendo posteriormente analisado o efeito sobre a viabilidade, modulação do metabolismo oxidativo-inflamatório e apoptótico. As CMSP-AA, que naturalmente apresentam uma SOD2 30 a 40% mais eficiente do que as CMSP-VV, apresentaram maior resistência ao tratamento com MTX em relação às CMSP-AV/VV. Quanto aos níveis de produção de EROS (espécies reativas de oxigênio) e lipoperoxidação, houve aumento significativo nas células expostas ao MTX independente do genótipo, entretanto, o aumento dos níveis de carbonilação de proteínas foi observado apenas em CMSP-AV/VV. Nas CMSP-AA houve diminuição da atividade da SOD2. Já quanto aos níveis de Glutationa Peroxidase, as CMSP-AA apresentaram uma elevação mais intensa. Os níveis das caspases 3 e 8 foram aumentados nas CMSP expostas ao MTX, mas a modulação desses genes, assim como do Bax e Bcl-2 (genes envolvidos rota apoptótica), foi genótipo-dependente. O MTX foi capaz de elevar os níveis das citocinas inflamatórias e diminuir o nível da citocina antiinflamatória IL-10, independente do genótipo. Os resultados sugerem que o polimorfismo Ala16Val-SOD2 é capaz de modular a resposta citotóxica de CMSP ao MTX.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The aim of this work was the development of nanostructured formulations containing clobetasol propionate. Initially, it was validated a chromatographic method to assay clobetasol propionate in nanocapsule suspensions. Clobetasol propionate-loaded nanocapsules and nanospheres of poly(ε-caprolactone) (PCL) and nanoemulsion (0.5 mg mL-1) were prepared by the interfacial deposition of preformed polymer method, nanoprecipitation and spontaneous emulsification, respectively. Formulations were characterized by means of drug content, encapsulation efficiency, pH, mean size, polydispersity index, zeta potential, morphology analysis, and stability under storage. The PCL nanocapsules showed the highest physicochemical stability, followed by the nanoemulsions and nanospheres. In the evaluation of in vitro release of clobetasol propionate, the nanocapsules showed a better control of drug release, according to the biexponential model. The photodegradation study of clobetasol propionate against UVA light showed the importance of the polymer and the oil in the nanoparticles to protect the drug from light. From these results, the nanocapsules were chosen for the study of the influence of the polymerid material on the physicochemical stability umder storage, photostability, release profile of the drug and its release mechanism. The nanocapsules prepared with poly(lactide) (PLA) showed a higher stability in comparison to the nanocapsules prepared with poly(lactide-co-glycolide) 50:50 and 85:15, although its stability was lower than nanocapsules prepared with PCL. Photodegradation studies demonstrated the pretection of the nanoencapsulated drug, regardless of the polymeric material of the nanocapsule s wall. The in vitro release study demonstrated the controlled release of the drug according to an anomalous transport. Due to these results, the nanocapsules prepared with PCL were selected for the development and preparation of hydrogels. Similar formulations containing nanospheres and nanoemulsion were used to evaluate the influence of polymer and oil on different properties of the hydrogels. These dosage forms were evaluated for drug content, pH, spreadability, rheology and in vitro drug release. All hydrogels presented properties compatible to the topical application. The presence of the drug-loaded nanoparticles in hydrogels led a slower drug release, especially for the formulation containing nanocapsules. The drug release profile was according to the Higuchi model. / Este trabalho teve como principal objetivo o desenvolvimento de formulações nanoestruturadas contendo propionato de clobetasol. Inicialmente, foi validado um método cromatográfico para análise do propionato de clobetasol em suspensões de nanocápsulas poliméricas. As nanocápsulas e nanoesferas de poli(ε-caprolactona) (PCL) e nanoemulsões contendo propionato de clobetasol (0,5 mg/mL) foram preparadas pelo método da deposição interfacial do polímero pré-formado, nanoprecipitação e emulsificação espontânea, respectivamente. Foram avaliados teores de fármaco, eficiências de incorporação, pHs, diâmetros de partícula, índices de polidispersão, potenciais zeta, características morfológicas e estabilidade frente ao armazenamento das diferentes formulações. As nanocápsulas apresentaram maior estabilidade físico-química, seguida pelas nanoemulsões e nanoesferas. Na avaliação da liberação in vitro do propionato de clobetasol, as nanocápsulas apresentaram o maior controle na liberação do fármaco, seguindo um modelo biexponencial. O estudo da fotodegradação do propionato de clobetasol frente à luz UVA demonstrou a importância da presença do polímero e do óleo para o aumento da fotoestabilidade. Diante destes resultados, as nanocápsulas foram selecionadas para o estudo da influência do material polimérico sobre as características físico-químicas, estabilidade frente ao armazenamento, fotoestabilidade, perfil de liberação do fármaco e seu mecanismo de liberação. As nanocápsulas preparadas com poli(ácido lactídeo) (PLA) apresentaram uma maior estabilidade frente ao armazenamento em comparação com as nanocápsulas preparadas com poli(ácido lactídeo-coglicolídeo) 50:50 e 85:15, embora sua estabilidade tenha sido inferior às nanocápsulas preparadas com PCL. O estudo da fotodegradação demonstrou a proteção do fármaco quando nanoencapsulado, independente do tipo de polímero empregado na sua preparação. A liberação in vitro demonstrou a liberação controlada do fármaco com transporte anômalo. Diante de todos esses resultados, as nanocápsulas preparadas com PCL foram selecionadas para o desenvolvimento de formas farmacêuticas semissólidas (hidrogéis). Formulações similares contendo nanoesferas e a nanoemulsão foram utilizadas para se avaliar a influência do polímero e do óleo sobre diferentes propriedades dos hidrogéis. Estas formas farmacêuticas foram avaliadas quanto ao teor de fármaco, pH, espalhabilidade, reologia e liberação in vitro do fármaco. Os hidrogéis apresentaram propriedades compatíveis com a aplicação tópica. A presença do fármaco nanoencapsulado nos hidrogéis proporcionou sua liberação controlada, principalmente para as formulações contendo as nanocápsulas. O perfil de liberação do fármaco a partir dos hidrogéis seguiu o modelo de Higuchi.

The problem of adulteration of drugs, nowadays, is not limited just to cases of synthetic formulations (manufactured drugs). The presence of synthetic drugs which are illegally added to herbal formulations, especially those used in the treatment of obesity, is also recurrent. The diet pills called "natural that are the most employeed for this purpose in Brazil are currently the Caralluma Fimbriata, Cascara Sagrada, Vesiculosus Fucus, Centella Asiatica and Garcinia Cambodia. Some synthetic adjuvants are also frequently found in these formulations, such as Vitamin C, collagen and hydrochlorothiazide. This study aimed to analyze samples of herbal in 9 Brazilian states (GO, DF, SC, PR, CE, RJ, RS, SP and MG) in order to detect possible cases of tampering. 106 acquired herbal samples were analyzed using analytical methodology based on capillary zone electrophoresis (CZE) with contactless conductivity detection (C4D). 35.84% of the 106 analyzed samples, showed suspected electrophoretic peaks suspected of tampering with similar characteristics and timing of migration to the contaminants, already studied. 3.8% of the samples by synthetic drugs fenproporex and sibutramine presented adulteration, with concentrations ranging from 3.1 to 10.0 mg / g. The applied methodology allows the identification and quantification of four major adulterants presented in literature (amfepramone, fenproporex, sibutramine and fluoxetine) at concentrations above 1mg / g in weight loss capsules. / O problema da adulteração de medicamentos na atualidade não se limita apenas aos casos de formulações sintéticas (medicamentos industrializados). A presença de drogas sintéticas adicionadas ilegalmente a formulações fitoterápicas, principalmente as utilizadas no tratamento da obesidade, também é recorrente. Os emagrecedores denominados naturais mais empregados para este fim no Brasil atualmente são a Caralluma Fimbriata, Cáscara Sagrada, Fucus Vesiculosus, Centella Asiática e Garcínia Camboja. Alguns coadjuvantes sintéticos também são encontrados com freqüência nestas formulações, como Vitamina C, colágeno e hidroclorotiazida. Este trabalho teve por objetivo analisar amostras fitoterápicas de 9 estados brasileiros (GO, DF, SC, PR, CE, RJ, RS, SP e MG) a fim de detectar possíveis casos de adulteração. Foram analisadas 106 amostras fitoterápicas adquiridas empregando-se metodologia analítica baseada na eletroforese capilar de zona (CZE) com detecção condutométrica sem contato (C4D). Das 106 amostras analisadas 35,84% apresentaram picos eletroforéticos suspeitos de adulteração, com características e tempos de migração semelhantes aos dos adulterantes já pesquisados. Apresentaram adulteração 3,8% das amostras pelos fármacos sintéticos femproporex e sibutramina, com concentrações variando de 3,1 a 10,0 mg/g. A metodologia empregada possibilita a identificação e a quantificação de 4 dos principais adulterantes citados na literatura (anfepramona, femproporex, sibutramina e fluoxetina) em concentrações acima de 1mg/g em cápsulas emagrecedoras.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Treatment with antipsychotic drugs may cause tardive dyskinesia in humans and orofacial dyskinesia in rodents. Although the dopaminergic system in basal ganglia has been implicated in these movement disorders, their underlying mechanisms remain unclear. In recent years, the identification of high density of CB1 cannabinoid receptors within the basal ganglia has suggested a potential role for endocannabinoids in the control of basal ganglia-related movement disorders. Thus, the present study aimed to investigate whether CB1 receptors are involved in haloperidol-induced orofacial dyskinesia in rats. Adult male rats were treated with haloperidol decanoate (38 mg/kg, i.m., single administration). After 24 days, the animals were submitted to stereotaxic surgery for insertion of cannulas on right ventricle. After recovery, the effect of anandamide (6 nmol, i.c.v.) and/or the CB1 receptor antagonist SR141716A (30 μg, i.c.v.) on haloperidol-induced VCMs was assessed. Anandamide reversed haloperidol-induced VCMs. SR141716A (30 μg, i.c.v.) did not alter haloperidol-induced VCM per se, but prevented the effect of anandamide on VCM in rats. In conclusion, our results show that activation of CB1 receptor may prevent haloperidol-induced VCMs in rats, implicating cannabinoid signaling via CB1 receptor in orofacial dyskinesia. / O tratamento com antipsicóticos pode causar discinesia tardia em humanos e discinesia orofacial em roedores. Embora a via dopaminérgica nigroestriatal tem sido implicada nestas alterações motoras, seus mecanismos continuam não completamente esclarecidos. Recentemente, a identificação da alta densidade de receptores canabinóides (CB1) nos gânglios da base tem sugerido que os canabinoides possuem um papel importante no controle das desordens de movimento. Desta forma, o objetivo do presente estudo foi investigar se os receptores CB1 estão envolvidos na discinesia orofacial induzida por haloperidol em ratos. Ratos machos adultos receberam decanoato de haloperidol (38 mg/kg, i.m., administração única). Após 24 dias os mesmos foram submetidos a cirurgia estereotáxica para a implantação de cânula no ventrículo direito. Após um período de recuperação, o efeito da anandamida (agonista canabinóide) (6 nmol, i.c.v.) e/ou do antagonista do receptor CB1, SR141716A (30 μg, i.c.v.), sobre os MMVs foi analisado. A anandamida reverteu os MMVs induzidos por haloperidol. O SR141716A (30 μg, i.c.v.) per se não alterou os MMVs induzidos por haloperidol, mas preveniu o efeito da anandamida sobre os MMVs em ratos. Em conclusão, nossos resultados mostram que a ativação dos receptores CB1 pode prevenir os MMVs induzidos por haloperidol em ratos, sugerindo a participação da sinalização canabinóide via receptor CB1 na discinesia orofacial.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Ocimum gratissimum L. (Lamiaceae), known as alfavaca, is widely distributed in tropical and warm-temperature regions. It is used as a food flavoring and for medicinal purposes against infectious diseases. Its biological properties are attributed to the presence of thymol or eugenol-rich essential oils. This study describes qualitative and quantitative variations in essential oils from stems, inflorescences and leaves of O. gratissimum L. grown in southern Brazil, in two harvest periods. The evaluation of eugenol content, antibacterial activity and toxicity of the different ethanolic extracts from dried aerial parts of O. gratissimum were studied. Afterwards, the essential oil from fresh inflorescences had its antibacterial activity, toxicity and chemical composition determined. The essential oils were obtained by hydrodistillation and analyzed by GC/MS. The extracts were obtained by maceration, soxhlet, ultrasonic cleaning bath, ultrasonic horn and microwave-assisted extractions. Eugenol content was determined by GC-FID using the pure compound isolated from aerial parts of the plant as reference. Antibacterial activity was assayed by microdilution method as established by CLSI/NCCLS. Toxicity was verified by brine shrimp (Artemia salina L.) lethality test. The major compounds of all essential oils were eugenol (52.6 - 89.2 %) and γ-muurolene (6.2 35.3 %). The harvest season influenced only the yields of inflorescence and stem essential oils. The low seasonal variation of eugenol in the essential oil of the leaves indicated that these are the best source to obtain this compound. Inflorescences essential oil was bacteriostatic (MIC between 0.5-2 mg/mL) and bactericidal (MBC between 1-4 mg/mL) against all strains tested. Significant differences (P<0.05) among the extractive methods used to the obtention of ethanolic extracts were observed in all analyses. Higher antimicrobial activity was verified to extracts compared to the essential oil tested against S. aureus ATCC 25923 and clinical isolate of B. cereus, MRSA (MIC of 0.66 mg/mL), ESBL and Shigella flexneri (MIC of 1.32 mg/mL). Bactericidal activity of the extracts was verified in Grampositive bacteria. Eugenol content did not explain all differences obtained among the antimicrobial activities of the tested extracts. The results suggest synergistic action among phyto-constituents. Maceration was considered the best extraction process considering the biological activities of all extracts. The antimicrobial avaliation results confirmed the brine shrimp lethality test as predictive method for this activity. / Ocimum gratissimum L. (Lamiaceae), conhecida popularmente como alfavaca, é uma planta amplamente distribuída em regiões de clima tropical e temperado. É utilizada como aromatizante de alimentos e medicinalmente no combate a doenças infecciosas. Suas propriedades biológicas têm sido atribuídas à presença de óleo essencial rico em timol ou eugenol. Este trabalho descreve as variações qualitativas e quantitativas nos óleos essenciais obtidos a partir dos talos, inflorescências e folhas desta espécie cultivada no Sul do Brasil em relação ao período de coleta. Também descreve a avaliação da atividade antibacteriana, toxicidade e teor de eugenol nos extratos etanólicos brutos das partes aéreas secas de O. gratissimum obtidos por diferentes metodologias. O óleo essencial obtido a partir das inflorescências frescas deste vegetal teve sua composição química, atividade antibacteriana e toxicidade estudadas. Os óleos essenciais foram obtidos por hidrodestilação e analisados por CG/EM. Os extratos etanólicos foram obtidos através dos métodos de maceração, soxhlet, banho de ultrassom, sonda de ultrassom e micro-ondas. O conteúdo de eugenol nos extratos foi determinado por CG-FID utilizando eugenol obtido das partes aéreas de O. gratissimum como padrão. A avaliação da atividade antibacteriana foi realizada pelo método de microdiluição em caldo (CLSI/NCCLS). O teste de letalidade frente à Artemia salina L. foi utilizado para análise da toxicidade. Os constituintes majoritários de todos os óleos foram eugenol (52,6 - 89,2 %) e γ-muuroleno (6,2 35,3 %). Apenas os óleos essenciais das inflorescências e talos tiveram seus rendimentos influenciados pela estação de coleta. A pequena variação no teor de eugenol presente no óleo essencial das folhas indicou ser esta a melhor parte do vegetal para a obtenção deste composto. O óleo essencial das inflorescências foi bacteriostático (CIM entre 0,5-2 mg/mL) e bactericida (CBM entre 1-4 mg/mL) frente a todas as cepas bacterianas testadas. Os extratos etanólicos demonstraram diferenças significativas (P< 0.05) entre si em relação a rendimento, teor de eugenol, atividade antibacteriana e toxicidade. Maior atividade antimicrobiana foi verificada para os extratos comparado ao óleo essencial testado frente à S. aureus ATCC 25923 e aos isolados de B. cereus, MRSA (CIM de 0,66 mg/mL), ESBL e Shigella flexneri (CIM de 1,32 mg/mL). Ação bactericida dos extratos foi obtida principalmente frente a bactérias Gram-positivas. Os teores de eugenol detectados nos extratos de O. gratissimum não puderam ser correlacionados com a atividade bacteriostática, o que sugere efeito sinérgico entre fito-constituintes. A maceração foi considerada como a melhor metodologia para a obtenção de extratos etanólicos das partes aéreas desta espécie. Os resultados de atividade antibacteriana confirmaram o teste de toxicidade frente à Artemia salina L. como um método preditivo deste tipo de atividade.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The yeast Malassezia pachydermatis belongs to the normal microbiota of animals, and is usually implicated as responsible for otitis media and recently by various forms of dermatitis, mainly in dogs. This study aimed to evaluate the in vitro susceptibility of 26 M. pachydermatis isolates against the antifungals fluconazole, itraconazole, ketoconazole, clotrimazole, miconazole, terbinafine and nystatin, and to the combinations of these with thymol, carvacrol and cinnamaldehyde by the checkerboard method, based on document M27-A3. The activity of itraconazol, ketoconazole and clotrimazole against 20 isolates of M. pachydermatis, through simultaneous and sequential exposure of these agents, was also evaluated by the disk-diffusion technique. The minimum inhibitory concentration (MIC) for fluconazole ranged from 1-64 μg/mL, itraconazole 0.01-1 μg/mL, ketoconazole 0.01-0.5 μg/mL, clotrimazole 0.5-32 μg/mL, miconazole 2-32 μg/mL, terbinafine 0.12-32 μg/mL and nystatin 16-64 μg/mL. High rates of synergism were observed in the combinations of nystatin + thymol (88.46%), nystatin + carvacrol (88.46%), nystatin + cinnamaldehyde (73.07%), clotrimazole + thymol (69.23%), clotrimazole + carvacrol (69.23%), miconazole + thymol (65.38%), miconazole + carvacrol (76.92%) and miconazole + cinnamaldehyde (65.38%). However, high rates of indifference were observed in the combinations of fluconazole + thymol (53.84%), carvacrol + fluconazole (46.15%), fluconazole + cinnamaldehyde (65.38%), thymol + itraconazole (61.53%), carvacrol + itraconazole (69.23%), itraconazole + cinnamaldehyde (65.38%), terbinafine + thymol (73.07%), terbinafine + carvacrol (65.38%), terbinafine + cinnamaldehyde (73.07%) and clotrimazole + cinnamaldehyde (61.53%). Ketoconazole combined with thymol, carvacrol and cinnamaldehyde had the highest rates of antagonism (42.3%). The prior exposure of M. pachydermatis to itraconazole resulted in a reduction of the inhibition halo when compared with itraconazole and ketoconazole used simultaneously (p <0.01). Moreover, prior exposure of clotrimazole significantly increased the zone of inhibition (p <0.001) when compared to the simultaneous exposure of itraconazole and clotrimazole. The most significant associations deserve in vivo evaluation in order to verify their potential in the treatment of infections caused by M. pachydermatis. / Malassezia pachydermatis é uma levedura pertencente à microbiota normal de animais e, usualmente, apontada como responsável por otites externas e recentemente por diversas formas de dermatites, principalmente em cães. Este estudo teve como objetivo avaliar a suscetibilidade in vitro de 26 isolados de M. pachydermatis frente aos antifúngicos fluconazol, itraconazol, cetoconazol, clotrimazol, miconazol, terbinafina e nistatina, e combinações desses com timol, carvacrol e cinamaldeído, através do método de checkerboard , baseado no documento M27-A3. Também foram avaliadas a atividade do itraconazol, cetoconazol e clotrimazol, em 20 isolados de M. pachydermatis, através da exposição simultânea e sequencial desses agentes utilizando-se a técnica de disco-difusão. Isoladamente, as concentrações inibitórias mínimas (CIMs) para o fluconazol variaram de 1- 64 μg/mL, para o itraconazol 0,01-1 μg/mL, para o cetoconazol 0,01-0,5 μg/mL, para o clotrimazol 0,5-32 μg/mL, para o miconazol 2-32 μg/mL, para a terbinafina 0,12-32 μg/mL e para a nistatina 16-64 μg/mL. Altas taxas de sinergismo foram observadas nas combinações de nistatina + timol (88,46%), nistatina + carvacrol (88,46%), nistatina + cinamaldeído (73,07%), clotrimazol + timol (69,23%), clotrimazol + carvacrol (69,23%), miconazol + timol (65,38%), miconazol + carvacrol (76,92%) e miconazol + cinamaldeído (65,38%). No entanto, fluconazol + timol (53,84%), fluconazol + carvacrol (46,15%), fluconazol + cinamaldeído (65,38%), itraconazol + timol (61,53%), itraconazol + carvacrol (69,23%), itraconazol + cinamaldeído (65,38%), terbinafina + timol (73,07%), terbinafina + carvacrol (65,38%), terbinafina + cinamaldeído (73,07%) e clotrimazol + cinamaldeído (61,53%) tiveram altas taxas de indiferença. Cetoconazol combinado com timol, carvacrol e cinamaldeído apresentaram as maiores taxas de antagonismo (42,3%). A exposição prévia de M. pachydermatis ao itraconazol resultou em uma diminuição da zona de inibição, quando comparado com o itraconazol e cetoconazol usados simultaneamente (p <0,01). Por outro lado, a exposição prévia do clotrimazol aumentou significativamente a zona de inibição (p <0,001), quando comparado à exposição simultânea de clotrimazol e itraconazol. As associações de maior relevância merecem avaliação in vivo, a fim de verificar o potencial das mesmas no tratamento de infecções por M. pachydermatis.

The knowledge of the variability of antigens of blood groups is essential in the transfusional practice, mainly to avoid grave alloimmunizations. This study had as objective to evaluate the prevalence of the phenotypes from the blood donors from Santa Maria´s Blood Center. These donors were evaluated for the mainly antigens of ABO, Rh and Kell systems. About the phenotyped samples with Rh system, 1274 samples (54.18%) were phenotyped as positives Rh and 1077 samples (45.82%) phenotyped as negative Rh. From the phenotyped donors as negatives Rh, 103 samples (9.5%) were positives for the ―C‖ or ―E‖ antigen. Relating the percentage of the Kell system positive in donors with negative Rh, was gotten 8.3%. We concluded that the negative Rh donor must be analyzed for other antigens of Rh system and for the Kell antigen, exactly being less immunogenics, these antigens are able to cause Grave Hemolytic Disease and Alloimmunizations. The D antigen Phenotypic expression may vary due to changes qualitative/quantitative: weak D, partial D. This study analyzed a sample of donors by genotyping to identify the most common D variants in this region was found (44%) weak D, (3%) and partial D. Strengthens thus the importance of established protocols for use of rare blood and ensure the proper use of blood products, as well as the safety of blood transfusion. / O conhecimento da variabilidade dos antígenos de grupos sanguíneos é essencial na prática transfusional, principalmente para evitar aloimunizações graves. Assim, este estudo teve como objetivo avaliar a prevalência dos fenótipos dos doadores de sangue do Hemocentro de Santa Maria, os quais foram avaliados para os principais antígenos dos sistemas ABO, Rh e Kell. Das amostras fenotipadas quanto ao sistema Rh, 1274 amostras (54.18%) foram fenotipadas como Rh positivos e 1077 amostras (45,82%) fenotipadas como Rh negativo. Dos doadores fenotipados como Rh negativos, 103 amostras (9,5%) foram positivas para o antígeno ―C‖ e/ou ―E‖. Relacionando o percentual do sistema Kell positivo em doadores Rh negativos foi de 8,3%. Conclui-se, então, que o doador Rh negativo deve ser analisado para os demais antígenos do sistema Rh e para o antígeno Kell, pois, mesmo sendo menos imunogênicos, estes antígenos são capazes de causar doença hemolítica graves e aloimunizações. O antígeno D pode variar de expressão fenotípica, devido a alterações qualitativas/quantitativas: D fraco, D parcial. Este trabalho analisou uma amostragem de doadores, através de genotipagem para identificar quais as variantes de D mais freqüentes nesta região, foi encontrado (44%) D fraco, (3%) D parcial. Reforça, dessa forma, a importância de ser estabelecidos protocolos para utilização destes sangues raros e garantir o uso correto destes hemocomponentes, assim como a segurança transfusional.

In the last two decades it has been seen a large increase in blood stream infections by Candida spp. The candidemias are associated with high morbidity and mortality, as well as the increase in hospital costs. The phenomenon of resistance highlights the importance of performing tests for susceptibility to antifungal agents. Such tests are improving constantly in an attempt to standardize their interpretations. This study evaluated the susceptibility of Candida spp. isolated from candidemias during a period of 15 years divided into three periods of five years in Santa Maria, RS, Brazil, interpreting minimum inhibitory concentrations according to the proposal of the CLSI and the new breakpoints recently proposed by Pfaller et al. Among the 525 isolates during the three periods, C. parapsilosis was the predominant species (49.14%), followed by C. albicans (34.47%), C. tropicalis (8.19%), C. glabrata (3.61%), C. lusitaniae (1.90%), C. guilliermondii (1.71%) and C.krusei (0.95%). During the study period and considering the two criteria, 136 non-susceptible isolates were found. According to CLSI, we identified 40 (7.61%) non-susceptible isolates, from wich 19 (3.61%) were resistant. According to Pfaller et al., 96 (18.28%) isolates presented themselves as nonsusceptible, being 11 (2.09%) resistant. All isolates were susceptible to amphotericin B and 3 presented themselves dose-dependent or intermediate suscpetible to flucytosine and caspofungin. Resistance was detected only among the azole antifungals: itraconazole (2.09%), fluconazole (1.14%) and voriconazole (0.38%). The isolation of species resistant to the antifungal agents used was not a prominent feature in this study. Detecting a higher number of non-susceptible species highlighted the relevance of evaluating of susceptibility tests by new breakpoints in order to find a more efficient therapy. / Nas últimas duas décadas observou-se um grande aumento nas infecções de corrente sanguínea por Candida spp. As candidemias estão associadas a altas taxas de morbidade e mortalidade, bem como ao incremento nos custos hospitalares. O fenômeno da resistência evidencia a importância da realização de testes de suscetibilidade aos agentes antifúngicos. Tais testes estão aprimorando-se constantemente na tentativa de uniformizar suas respectivas interpretações. O presente estudo avaliou a suscetibilidade de Candida spp. isoladas de candidemias por um período de 15 anos divididos em três períodos de cinco anos, em Santa Maria, RS, Brasil, interpretando as concentrações inibitórias mínimas de acordo com a proposta do CLSI e os novos breakpoints recentemente propostos por Pfaller et al. Entre os 525 isolados nos três períodos avaliados, C. parapsilosis foi a espécie predominante (49,14%), seguida por C. albicans (34,47%), C. tropicalis (8,19%), C. glabrata (3,61%), C. lusitaniae (1,90%), C. guilliermondii (1,71%), e C. krusei (0,95%). Durante o período estudado e considerando-se os dois critérios, foram detectados 136 isolados não sensíveis. Segundo o CLSI, foram identificados 40 (7,61%) isolados não sensíveis, sendo 19 (3,61%) resistentes. De acordo com Pfaller et al., 96 (18,28%) isolados apresentaram-se como não sensíveis, sendo 11 (2,09%) resistentes. Todos os isolados foram sensíveis a anfotericina B e 5 e 3 isolados apresentaram-se intermediários a flucitosina e caspofungina, respectivamente. Resistência foi detectada somente entre os antifúngicos azólicos: itraconazol (2,09%), fluconazol (1,14%), e voriconazol (0,38%). O isolamento de espécies resistentes aos agentes antifúngicos utilizados não foi uma característica marcante no presente estudo. Este estudo permitiu uma melhor visão da epidemiologia local. A detecção de um maior número de espécies não sensíveis ressaltou a relevância da avaliação dos testes suscetibilidade através dos novos breakpoints a fim de ser direcionada a uma terapia mais eficiente.

The identification of bioactive compounds in Brazilian fruit is extremely important for bioprospecting of natural substances with potential pharmacotherapeutic. Likewise, evaluations of profiles of antioxidant activity and toxicity are part of the initial processes of exploitation of plant extracts, being included in the efficacy and safety parameters. The Amazonian fruits have been noted for its excellent therapeutic potential in several experimental tests. Within this context is the tucumã, an Amazon fruit comes from a palm (Astrocaryum aculeatum), widely used in the state of Amazonas to the manufacture of candy, ice cream, liqueur or fresh consumption. Studies have shown the presence of a large amount of carotenoids in the fruit pulp. However, the fruit lacks information related to the antioxidant properties and presence of other chemical constituents. The objective of this study was to evaluate the ethanol extracts of the pulp and peel tucumã for the presence of bioactive compounds, antioxidant activity and cytotoxicity. The identification of bioactive compounds and total polyphenols were performed using High Performance Liquid Chromatography (HPLC) and Folin-Ciocalteau method, respectively. The antioxidants evaluations were made by the scavenger method of radical 2,2 - diphenyl-1-picril-hydrazyl (DPPH) and Total Reactive Antioxidant Potential (TRAP) test. The cytotoxicity assays were performed by the techniques of 3 - (4,5)-dimetiltialzolil difeniltetrazólio -2.5 (MTT) and by trypan blue exclusion. The results showed the presence of a large amount of polyphenols in the peel (790.9 ± 43.65 mg/100 g) and pulp (663.9 ± 92.40 mg/100 g) of the fruit. In addition, we detected the presence of important bioactive compounds such as flavonoids (peel = 77.9 ± 0.02 mg/100 g; pulp = 40.6 ± 0.06 mg/100 g), tannin (peel = 26.4 ± 0.01 mg/100 g; pulp = 6.4 ± 0.05 mg/100 g) and alkaloids (peel = 1.3 ± 0.29 mg/100 g; pulp = 0.7 ± 0.05 mg/100 g). Among the compounds identified were beta-carotene, rutin, quercetin, gallic acid, caffeic acid and chlorogenic acid, with higher concentrations in the peel in relation to the pulp (except the gallic acid). The extracts showed high antioxidant activity, with IC50 values corresponding to 8.98 ± 0.39 mg / ml (peel) and 11.24 ± 0.461 mg / ml (pulp) for the TRAP method, and 102.38 ± 4.8 ng / ml (peel) and 224.57 ± 3.9 (pulp) for the DPPH method. However, at concentrations above 100 μg / ml, both extracts showed cytotoxic effects. The results suggest that the ethanol extracts of the pulp and peel tucumã have high antioxidant activity in the presence of bioactive compounds that show great potential pharmacotherapeutic. / A identificação de compostos bioativos em frutos brasileiros é de extrema importância para a bioprospecção de substâncias naturais com potenciais farmacoterapêuticos. Da mesma forma, as avaliações de perfis de atividade antioxidante e de toxicidade fazem parte dos processos iniciais da exploração de extratos vegetais, sendo incluídos nos parâmetros de eficácia e segurança. Os frutos amazônicos têm se destacado por seus excelentes potenciais terapêuticos em diversos ensaios experimentais. Dentro desse contexto encontra-se o tucumã, um fruto amazônico oriundo de uma palmeira (Astrocaryum aculeatum), amplamente utilizado no estado do Amazonas para a fabricação de doces, sorvetes, licores ou para o consumo in natura. Estudos demonstram a presença de uma grande quantidade de carotenoides na polpa do fruto. No entanto, o fruto carece de informações relacionadas às propriedades antioxidantes e à presença de outros constituintes químicos. O objetivo deste trabalho foi avaliar os extratos etanólicos da polpa e da casca de tucumã quanto à presença de compostos bioativos, atividade antioxidante e citotoxicidade. A identificação de compostos bioativos e de polifenóis totais foram realizadas por meio de Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) e método de Folin-Ciocalteau, respectivamente. As avaliações antioxidantes foram feitas pelo método de sequestro de radicais 2,2- difenil-1-picril-hidrazil (DPPH) e teste de Total Reactive Antioxidant Potential (TRAP). Os ensaios de citotoxicidade foram realizados pelas técnicas de 3-(4,5)-dimetiltialzolil -2,5 difeniltetrazólio (MTT) e exclusão por azul de Tripan. Os resultados demonstraram a presença de uma grande quantidade de polifenóis na casca (790,9 ± 43,65 mg/100g) e na polpa (663,9 ± 92,40 mg/100g) do fruto. Além disso, foi verificada a presença de compostos bioativos importantes, como flavonoides (casca = 77,9 ± 0,02 mg/100g; polpa = 40,6 ± 0,06 mg/100g), taninos (casca = 26,4 ± 0,01 mg/100g; polpa = 6,4 ± 0,05 mg/100g) e alcaloides (casca = 1,3 ± 0,29 mg/100g; polpa = 0,7 ± 0,05 mg/100g). Dentre os compostos identificados estavam beta-caroteno, rutina, quercetina, ácido gálico, ácido cafeico e ácido clorogênico, com concentrações superiores na casca em relação à polpa (com exceção do ácido gálico). Os extratos apresentaram alta atividade antioxidante, com valores de IC50 correspondentes a 8,98 ± 0,39 μg/ml (casca) e 11,24 ± 0,461 μg/ml (polpa), para o método de TRAP, e 102,38 ± 4,8 ng/ml (casca) e 224,57 ± 3,9 (polpa) para o método de DPPH. No entanto, em concentrações superiores a 100 μg/mL, ambos os extratos apresentaram efeitos citotóxicos. Os resultados sugerem que os extratos etanólicos da polpa e da casca de tucumã apresentam alta atividade antioxidante, com a presença de compostos bioativos que demonstram excelentes potenciais farmacoterapêuticos.

This study verified the effect of late clamping (from 1 to 3 minutes after it is born) of the umbilical cord on the levels of hemoglobin, hematocrite and ferritine in children at birth, at three months and at six months and, still, the levels of bilirubins at the end of the first week of life, in order to detect cases of hyperbilirrubinemia. One hundred and eleven babies born at the University Hospital of santa Maria, RS, not only by vaginal birth by also by caesarian surgery and clinically healthy were used (45 ones were subjected to the early clamping and 66 ones to the late clamping). The collect of venous blood of the babies on their first day was made in the maternity and, the other collects were taken in returns to the laboratories of clinical analysis. The mothers socio-economical variants and the babies nutritional habits were also studied. the program Statsoft Statistica v 7.0.61.0EN was used to analyze the data statistically and the results were expressed on their averages. The hemoglobine and the hematocrite from the babies subjected to the late clamping were significantly superior to the values presented by the babies subjected to the early clamping, on their first day of life. There was no significant difference in the dosage of total bilirubin and fractions of babies according to the time of clamping as well as there was no case of hyperbilirrubinemia and the levels of ferritine of the children subjected to the late clamping showed to be superior to the ones presented by those children subjected to the early clamping in the third and in the sixth months. Thus, it is noticed that the late clamping might be a strategy to prevent the anemia because of iron defficiency in infants. / Este estudo verificou o efeito do pinçamento tardio (de 1 a 3min após o nascimento) do cordão umbilical sobre os níveis de hemoglobina, hematócrito e ferritina em crianças no nascimento, aos três meses e aos seis meses e, ainda, os níveis das bilirrubinas ao final da primeira semana de vida, para detectar casos de hiperbilirrubinemia. Foram alocados 111 bebês a termo nascidos no Hospital Universitário de Santa Maria, RS, tanto de parto vaginal quanto cesárea e clinicamente saudáveis (45 foram submetidos ao pinçamento precoce e 66 ao pinçamento tardio). A coleta de sangue venoso dos bebês no primeiro dia de vida foi efetuada na maternidade e as coletas posteriores foram realizadas em retornos ao laboratório de análises clínicas do hospital. Variáveis socioeconômicas da mãe e de alimentação da criança também foram estudadas. Utilizou-se o programa Statsoft Statistica v 7.0.61.0EN para a análise estatística dos dados e os resultados foram expressos em média. A hemoglobina e o hematócrito dos bebês submetidos ao pinçamento tardio do cordão umbilical foram significativamente superiores aos valores apresentados pelos bebês submetidos ao pinçamento precoce, no primeiro dia de vida. Não houve diferença significativa na dosagem da bilirrubina total e frações dos bebês de acordo com o tempo de pinçamento, assim como, não houve nenhum caso de hiperbilirrubinemia e os níveis de ferritina das crianças submetidas ao pinçamento tardio mostraram-se superiores aos apresentados pelas crianças submetidas ao pinçamento precoce no terceiro e no sexto mês. Assim, constatou-se que o pinçamento tardio do cordão umbilical pode se constituir em uma estratégia para prevenir a anemia por deficiência de ferro em lactentes.