Orientador: Mary Marcondes / Banca: Gisele Fabrino Machado / Banca: Raimundo Souza Lopes / Resumo: A Leishmaniose visceral em cães é descrita como uma doença de caráter crônico na qual os principais sintomas são perda progressiva de peso, caquexia, lesões dermatológicas, e recentemente, a doença tem sido relacionada com quadros neurológicos. Um total de 41 cães portadores de leishmaniose visceral, foram divididos em dois grupos. O primeiro composto por cães sem sintomas neurológicos (n=31) e o segundo grupo composto por cães com sintomas neurológicos (n=10). Amostras de encéfalo foram coletadas e armazenadas em formalina tamponada, para realização de imunoistoquímica para a pesquisa de formas amastigotas da Leishmania sp., linfócitos T CD3+, CD4+ e CD8+ e macrófagos. Não foram observadas formas amastigotas de Leishmania sp. Linfócitos T CD3+ estavam presentes em 24/31 (77,4%) dos cães sem sintomas neurológicos e em todos os cães do segundo grupo (p=0,0011). Linfócitos T CD4+ e CD8+ raramente foram observados, apresentando imunomarcação para CD4+ em 10/41 (24,3%) dos cães e em metade dos animais do grupo neurológico (p=0,0090). A presença de CD8+ foi detectada em 4/10 (40%) dos cães com doenças neurológicas (p=0,0021). Macrófagos foram observados em 38/41 (92,6%) cães, sem diferença estatística significante entre os dois grupos (p= 0,7664) / Abstract: Visceral leishmaniasis in dogs is described as a chronic disease whose main symptoms are progressive weigth loss, dermatologic lesions and, recently, the disease has been associated to neurologic disorders in dogs. A total of 41 Leishmania chagasi infected dogs were divided into two groups. The first composed of dogs without neurological signs (n=31) and the second by dogs with neurological disorders (n=10). Brain samples were collected, stored in 10% buffered formalin and subjected to immunohistochemical examination for amastigotes forms of Leishmania sp, CD3+, CD4+ and CD8+ T lymphocytes and macrophages. Imunnohistochemistry not revealed amastigote any forms of Leishmania sp. CD3+ T lymphocytes were present in 24/31 (77,4%) dogs without neurological signs and in all dogs from the second group (p=0.0011). CD4+ and CD8+ were rarely observed, with CD4+ immunostaining in 10/41 (24,3%) dogs, from which half of them had neurological disease (p=0.0090). The presence of CD8+ was detected only in 4/10 (40%) dogs from neurological group (p=0.0021). Macrophages were detected in 38/40 (92,6%) dogs, without significant differences between groups (p=0.7664) / Mestre

Orientador: Irma Godoy / Banca: Suzana Erico Tanni / Banca: Hugo Hyung Bok Yoo / Banca: Oliver Augusto Nascimento / Banca: Marcia Maria Faganello / Resumo: Estudos mostram que os valores médios da Interleucina 6 (IL-6) e Proteína CReativa (PCR) não mudam significativamente em pacientes com DPOC no período de um ano. No entanto, o acompanhamento de longo prazo desses mediadores não está estabelecido. Portanto, o objetivo do atual estudo é verificar a evolução dos marcadores inflamatórios sistêmicos de pacientes com DPOC após três anos e verificar a associação entre eles e os demais marcadores da doença. Uma coorte de 77 pacientes com DPOC estável foi avaliada no momento basal e 53 (VEF1=56±21%) foram incluídos no estudo. Nós avaliamos IL-6, PCR, distância percorrida em seis minutos (DP6) e índice de massa corporal (IMC) no momento basal e após três anos. A concentração plasmática de IL-6 foi avaliada por meio de ensaios imunoenzimáticos (ELISA) ultrassensíveis e a PCR foi obtida por meio de imunonefelometria com uso de kits ultrassensíveis. Os valores da IL-6 aumentaram significativamente após três anos em comparação ao momento basal [0,8 (0,5-1,3) vs 2,4 (1,3-4,4) pg/ml, p <0,001] e foram associados com piora da DP6. Os resultados da análise de regressão de Cox mostraram que os valores aumentados de IL-6 no momento basal foram associados com a mortalidade [Hazard Ratio (95% CI)=2,68 (0,13; 1,84); p=0,02]. Os valores médios da PCR não apresentaram alteração significativa [5 (1,6-7,9) vs 4,7 (1,7-10) mg/ L, p=0,84]; embora, onze pacientes (21%) apresentaram aumento >3 mg/L da PCR no período de três anos. O processo inflamatório sistêmico, avaliado pela IL-6, parece ser persistente e progressivo e associado com mortalidade e piora da performance física em pacientes com DPOC / Abstract: Past studies have shown that mean values of Interleukin-6 (IL-6) and Creactive protein (CRP) do not change significantly in COPD patients over a one-year period. However, longer period follow-up studies are still lacking. Thus, the aim of this study is to evaluate plasma CRP and IL-6 concentration over three years in COPD patients and to test the association between these inflammatory mediators and disease outcome markers. A cohort of 77 outpatients with stable COPD was evaluated at baseline, and 53 (mean FEV1, 56% predicted) were included in the prospective study. We evaluated IL-6, CRP, six-minute walking distance (6MWD), and body mass index (BMI) at baseline and after three years. Plasma concentration of IL-6 was measured by high sensitivity ELISA, and CRP was obtained by high sensitivity particle-enhanced immunonephelometry. IL-6 increased significantly after 3 years compared to baseline measurements [0.8 (0.5-1.3) vs 2.4 (1.3-4.4) pg/ml; p<0.001] and was associated with worse 6MWD performance. In the Cox regression, increased IL-6 at baseline was associated with mortality [Hazard Ratio (95% CI)=2.68 (0.13, 1.84); p=0.02]. CRP mean values did not change [5 (1.6- 7.9) vs 4.7 (1.7-10) pg/L; p=0.84], although eleven patients (21%) presented with changes >3 mg/L in CRP after 3 years. The systemic inflammatory process, evaluated by IL-6, seems to be persistent, progressive and associated with mortality and worse physical performance in COPD patients / Doutor

Made available in DSpace on 2015-10-06T13:03:07Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-08-23. Added 1 bitstream(s) on 2015-10-06T13:18:56Z : No. of bitstreams: 1 000819087.pdf: 1423284 bytes, checksum: a89857bcef9822e82a34c2b6424c6064 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A leishmaniose visceral é uma doença que causa manifestações clínicas variadas em cães, que podem apresentar desde alterações subclínicas a desordens generalizadas, incluindo alterações neurológicas. Há evidências do comprometimento das barreiras encefálicas, como a presença de infiltrado inflamatório com predomínio de linfócitos T CD3+ no sistema nervoso central. Deste modo, o objetivo deste trabalho foi determinar e comparar os imunofenótipos de linfócitos T no sangue periférico e no liquor e avaliar as lesões encefálicas em cães infectados. Verificou-se que os linfócitos T presentes em maior quantidade no liquor foram os duplos negativos (DN) e os duplos positivos (DP), com predomínio de TCRαβ. Também verificou-se que as células sanguíneas não diferiram das células do liquor em quantidade, o que indica que pode estar havendo um comprometimento da barreira hematoliquórica, permitindo que as células do sangue migrem para o liquor. Ocorreu também o predomínio de infiltrado linfohistioplasmocitário no encéfalo, principalmente em leptomeninges. Porém, não houve correlação entre a inflamação nessa área e as células T. Além disso, a correlação positiva entre a inflamação no subepêndima e as células T DN do liquor indica que essas células chegam no encéfalo também pelos vasos subependimários. Em conjunto, os resultados contribuem para explicar a inflamação observada no encéfalo de cães com leishmaniose, sendo que as células T DN podem ser responsáveis pela progressão neurológica da doença / Visceral leishmaniasis (VL) is a disease causing several clinical manifestations in dogs, that can present from subclinical to generalized disorders, including neurological disorders. There are evidences of cerebral barriers involvement, such as the presence of inflammatory infiltrate with predominance of CD3+ T cells in the brain of infected dogs. Therefore, the aim of this study was to determine and to compare the immunophenotypes of T lymphocytes in the peripheral blood and in the cerebrospinal fluid (CSF) of dogs with VL and evaluate the brain lesions. It was detected that the double negative (DN) and double positive (DP) T cells were present in higher percentage in the CSF, with predominance of TCRαβ. Besides, the amount of blood T cells did not differ from those observed in the CSF, indicating that the blood-CSF barrier may be damaged, allowing the migration of cells from the blood to the CSF. Moreover, inflammatory infiltrate with predominance of lymphohistioplasmacytic cells was observed, mainly in leptomeninges. However, there was no correlation between the intensity of the inflammation in this area and the T cells. Furthermore, the positive correlation between intensity of the inflammation in the subependimal area and DN T cells in the CSF indicates that these cells also may reach the brain through the subependymal vessels. Together, the results contribute to explain the inflammation observed in the brain of dogs with VL, where the DN T cells may contribute to the neurological progression of the disease

Made available in DSpace on 2015-10-06T13:03:33Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-08-14. Added 1 bitstream(s) on 2015-10-06T13:18:24Z : No. of bitstreams: 1 000819084.pdf: 1209964 bytes, checksum: 04874bbac5638856dedf456279299e45 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A leishmaniose visceral é uma doença imunomediada que pode causar alterações na população de linfócitos T em diferentes órgãos e tecidos, e também aumento de células inflamatórias no encéfalo de cães infectados. O objetivo deste estudo foi avaliar e caracterizar as lesões encefálicas por meio de análise de cortes histológicos do encéfalo e as subpopulações de linfócitos T CD4+, CD8+, duplo-positivos (DP), duplo-negativos (DN), TCRs αβ e δγ e células dendríticas (cd11c+/MHC-II+) provenientes de linfonodos regionais da cabeça e do linfonodo poplíteo de cães com leishmaniose visceral utilizando citometria de fluxo. Os resultados mostram que encéfalos de cães com LV podem apresentar infiltrados inflamatórios em região de leptomeninges, plexo coroide e região subependimária. Entre os linfonodos, não houve diferença entre as subpopulações de linfócitos T, porém, observamos redução dos linfócitos T CD8+ e aumento dos T DN e TCR δγ enquanto que os CD4+ e DP e TCR αβ mantiveram-se próximos a valores de cães saudáveis, sugerindo assim que os linfócitos DN e TCR δγ podem estar relacionados com a resposta imunológica de cães sintomáticos com LV. Todos esses achados descartam a hipótese de que os linfonodos regionais da cabeça poderiam apresentar um padrão de resposta imune específica relacionada com as lesões encefálicas dos cães / Visceral leishmaniasis (VL) is an immune-mediated disease which may cause changes in T lymphocytes population in different organs and tissues, and also an increase in the inflammatory cells population in the brain of infected dogs. The aim of this study was to evaluate the encephalic lesions in brain sections, and to characterize the T lymphocytes subsets CD4+, CD8+, double-positive (DP), double-negative (DN), the TCRs αβ and δγ, and the dendritic cells (CD11c+/MHC-II+) from the regional lymph nodes of the head and the popliteal lymph node using flow cytometry. The results evidenced that the brain of dogs with VL may present inflammatory infiltrates in leptomeninges, choroid plexus and subependymal area. Between the lymph nodes, there was no difference among the T cell subsets, nevertheless, there was noticed a reduction in the CD8+ lymphocytes and an increase in the DN subset as well as the TCR δγ, while CD4+, DP and TCR αβ were detected in amounts closely related to described reference ranges, which suggests that the DN and TCR δγ lymphocytes may be related to the immune response in symptomatic dogs. Altogether, these findings discard the hypothesis that the regional lymph nodes of the head may present a specific pattern of immune response related to the brain lesions in dogs with VL.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:35Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-07-14Bitstream added on 2014-06-13T19:53:32Z : No. of bitstreams: 1 schwardt_tf_me_araca.pdf: 288540 bytes, checksum: f6b713d25bd498b2a46d22b12adc7738 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A Leishmaniose visceral em cães é descrita como uma doença de caráter crônico na qual os principais sintomas são perda progressiva de peso, caquexia, lesões dermatológicas, e recentemente, a doença tem sido relacionada com quadros neurológicos. Um total de 41 cães portadores de leishmaniose visceral, foram divididos em dois grupos. O primeiro composto por cães sem sintomas neurológicos (n=31) e o segundo grupo composto por cães com sintomas neurológicos (n=10). Amostras de encéfalo foram coletadas e armazenadas em formalina tamponada, para realização de imunoistoquímica para a pesquisa de formas amastigotas da Leishmania sp., linfócitos T CD3+, CD4+ e CD8+ e macrófagos. Não foram observadas formas amastigotas de Leishmania sp. Linfócitos T CD3+ estavam presentes em 24/31 (77,4%) dos cães sem sintomas neurológicos e em todos os cães do segundo grupo (p=0,0011). Linfócitos T CD4+ e CD8+ raramente foram observados, apresentando imunomarcação para CD4+ em 10/41 (24,3%) dos cães e em metade dos animais do grupo neurológico (p=0,0090). A presença de CD8+ foi detectada em 4/10 (40%) dos cães com doenças neurológicas (p=0,0021). Macrófagos foram observados em 38/41 (92,6%) cães, sem diferença estatística significante entre os dois grupos (p= 0,7664) / Visceral leishmaniasis in dogs is described as a chronic disease whose main symptoms are progressive weigth loss, dermatologic lesions and, recently, the disease has been associated to neurologic disorders in dogs. A total of 41 Leishmania chagasi infected dogs were divided into two groups. The first composed of dogs without neurological signs (n=31) and the second by dogs with neurological disorders (n=10). Brain samples were collected, stored in 10% buffered formalin and subjected to immunohistochemical examination for amastigotes forms of Leishmania sp, CD3+, CD4+ and CD8+ T lymphocytes and macrophages. Imunnohistochemistry not revealed amastigote any forms of Leishmania sp. CD3+ T lymphocytes were present in 24/31 (77,4%) dogs without neurological signs and in all dogs from the second group (p=0.0011). CD4+ and CD8+ were rarely observed, with CD4+ immunostaining in 10/41 (24,3%) dogs, from which half of them had neurological disease (p=0.0090). The presence of CD8+ was detected only in 4/10 (40%) dogs from neurological group (p=0.0021). Macrophages were detected in 38/40 (92,6%) dogs, without significant differences between groups (p=0.7664)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-01-31Bitstream added on 2014-06-13T19:21:36Z : No. of bitstreams: 1 ferrari_r_dr_botfm.pdf: 683564 bytes, checksum: 4f22fe73c82611851ed24de3858cb5e6 (MD5) / Estudos mostram que os valores médios da Interleucina 6 (IL-6) e Proteína CReativa (PCR) não mudam significativamente em pacientes com DPOC no período de um ano. No entanto, o acompanhamento de longo prazo desses mediadores não está estabelecido. Portanto, o objetivo do atual estudo é verificar a evolução dos marcadores inflamatórios sistêmicos de pacientes com DPOC após três anos e verificar a associação entre eles e os demais marcadores da doença. Uma coorte de 77 pacientes com DPOC estável foi avaliada no momento basal e 53 (VEF1=56±21%) foram incluídos no estudo. Nós avaliamos IL-6, PCR, distância percorrida em seis minutos (DP6) e índice de massa corporal (IMC) no momento basal e após três anos. A concentração plasmática de IL-6 foi avaliada por meio de ensaios imunoenzimáticos (ELISA) ultrassensíveis e a PCR foi obtida por meio de imunonefelometria com uso de kits ultrassensíveis. Os valores da IL-6 aumentaram significativamente após três anos em comparação ao momento basal [0,8 (0,5-1,3) vs 2,4 (1,3-4,4) pg/ml, p <0,001] e foram associados com piora da DP6. Os resultados da análise de regressão de Cox mostraram que os valores aumentados de IL-6 no momento basal foram associados com a mortalidade [Hazard Ratio (95% CI)=2,68 (0,13; 1,84); p=0,02]. Os valores médios da PCR não apresentaram alteração significativa [5 (1,6-7,9) vs 4,7 (1,7-10) mg/ L, p=0,84]; embora, onze pacientes (21%) apresentaram aumento >3 mg/L da PCR no período de três anos. O processo inflamatório sistêmico, avaliado pela IL-6, parece ser persistente e progressivo e associado com mortalidade e piora da performance física em pacientes com DPOC / Past studies have shown that mean values of Interleukin-6 (IL-6) and Creactive protein (CRP) do not change significantly in COPD patients over a one-year period. However, longer period follow-up studies are still lacking. Thus, the aim of this study is to evaluate plasma CRP and IL-6 concentration over three years in COPD patients and to test the association between these inflammatory mediators and disease outcome markers. A cohort of 77 outpatients with stable COPD was evaluated at baseline, and 53 (mean FEV1, 56% predicted) were included in the prospective study. We evaluated IL-6, CRP, six-minute walking distance (6MWD), and body mass index (BMI) at baseline and after three years. Plasma concentration of IL-6 was measured by high sensitivity ELISA, and CRP was obtained by high sensitivity particle-enhanced immunonephelometry. IL-6 increased significantly after 3 years compared to baseline measurements [0.8 (0.5-1.3) vs 2.4 (1.3-4.4) pg/ml; p<0.001] and was associated with worse 6MWD performance. In the Cox regression, increased IL-6 at baseline was associated with mortality [Hazard Ratio (95% CI)=2.68 (0.13, 1.84); p=0.02]. CRP mean values did not change [5 (1.6- 7.9) vs 4.7 (1.7-10) pg/L; p=0.84], although eleven patients (21%) presented with changes >3 mg/L in CRP after 3 years. The systemic inflammatory process, evaluated by IL-6, seems to be persistent, progressive and associated with mortality and worse physical performance in COPD patients

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:18Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-12-05Bitstream added on 2015-04-09T12:47:45Z : No. of bitstreams: 1 000814294_20150610.pdf: 154779 bytes, checksum: 51dd92acc01e4cdcca6fb139c344baff (MD5) Bitstreams deleted on 2015-06-12T11:19:03Z: 000814294_20150610.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-12T11:19:38Z : No. of bitstreams: 1 000814294.pdf: 481135 bytes, checksum: 6396c52973d54e22945046da7a3983f0 (MD5) / Em Medicina Veterinária o linfoma é uma neoplasia caracterizada por proliferação clonal de linfócitos malignos, sendo uma das mais comuns em cães. Há evidências que as Tregs inibem a função efetora contra tumores, resultando em disfunção de células T em humanos e cães com câncer. O aumento da expressão da enzima ciclooxigenase-2 (COX-2) pelas células do tumor e células inflamatórias locais, estimula o desenvolvimento das Tregs. Deste modo, o tratamento com inibidores de COX-2, como os anti-inflamatórios não esteroidais é mais uma estratégia para a supressão das Tregs. Neste contexto, este trabalho teve como objetivo avaliar quantitativamente, por intermédio da citometria de fluxo, as Tregs em cães com linfoma, submetidos ao protocolo quimioterápico CHOP, associado ou não a um inibidor de COX-2 (Firocoxib). Foram utilizados 12 cães controles (hígidos), 12 cães com linfoma tratados com o protocolo CHOP e 12 cães com linfoma, tratados com o CHOP+Firocoxib. As Tregs formam avaliadas por citometria de fluxo, no momento do diagnóstico, após a indução da quimioterapia (5ª semana) e ao término do protocolo (20ª semana). Os resultados mostraram que os cães com linfoma apresentaram porcentagens maiores de Tregs (17,08±1,62) quando comparados ao grupo controle (5,67±1,62) (p<0,0001). Além disso, no grupo linfoma teve uma diminuição das porcentagens de Tregs ao final do protocolo quimioterápico, nos grupos tratados com o protocolo CHOP tradicional (GT1) (8,648±1,736) e no grupo tratado com CHOP associado a um firocoxib (GT2) (5,903±1,126) (p<0,0001). E que entre os grupos, GT1 (20,66±2,487) e GT2 (12,79±0,7673), apenas no momento do diagnóstico (M0), foi estatisticamente diferente (p<0,0114). Conclui-se que cães com linfoma multicêntrico possui um aumento das Tregs, e durante o protocolo quimioterápico, associado ou não a um firocoxib, essas células diminuem significativamente / In Veterinary Medicine lymphoma is a neoplasm characterized by clonal proliferation of malignant lymphocytes, one of the most common in dogs. There is evidence that Treg inhibit the effector function against tumors, resulting in T cell dysfunction in humans and dogs with cancer. Increased expression of cyclooxygenase-2 enzyme (COX-2) by tumor cells and local inflammatory cells, stimulates the development of Treg. Thus, treatment with COX-2 inhibitors such as nonsteroidal anti-inflammatory is a further strategy for the removal of Tregs. In this context, this work aimed to evaluate quantitatively, through flow cytometry, Tregs in dogs with lymphoma undergoing chemotherapy protocol CHOP, with or without a COX-2 inhibitor (Firocoxib). 12 dogs were used controls (healthy), 12 dogs with lymphoma treated with CHOP protocol and 12 dogs with lymphoma treated with CHOP + Firocoxib. Tregs form assessed by flow cytometry at diagnosis after induction chemotherapy (Week 5) and the protocol termination (20 weeks). The results showed that dogs with lymphoma had higher percentages of Tregs (17.08 ± 1.62) compared with the control group (5.67 ± 1.62) (p <0.0001). Moreover, in the lymphoma group had a decrease of Treg percentages at the end of chemotherapy protocol, the groups treated with the traditional CHOP protocol (GT1) (8.648 ± 1.736) and in the CHOP arm associated with a firocoxib (GT2) (5,903 ± 1.126) (p <0.0001). And that between the groups, GT1 (20.66 ± 2.487), and GT2 (12.79 ± 0.7673) only at the time of diagnosis (M0), was statistically different (p <0.0114). It was concluded that dogs with multicentric lymphoma has increased Tregs, and during the chemotherapy protocol, with or without a firocoxib, these cells decrease significantly

Made available in DSpace on 2015-05-14T16:53:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-08-25Bitstream added on 2015-05-14T16:59:20Z : No. of bitstreams: 1 000826506_20160824.pdf: 153918 bytes, checksum: d5ded8370e2d61cb9c08c67b2aa9b8b7 (MD5) Bitstreams deleted on 2016-08-29T14:25:02Z: 000826506_20160824.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-08-29T14:25:39Z : No. of bitstreams: 1 000826506.pdf: 566712 bytes, checksum: 85576a500370f23bba238b3ce890a33e (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O papilomavírus humano (HPV) vem sendo associado ao carcinoma espinocelular (CEC) de orofaringe, como um possível fator etiológico. As oncoproteínas virais E6 e E7 são capazes de inibir a produção de citocinas do padrão Th1 e iniciar a produção de citocinas do padrão Th2, prejudicando a resposta celular frente à infecção. O propósito deste trabalho é avaliar o efeito das oncoproteínas virais E6 e E7 do HPV-16 sobre a resposta de células T (CD4 e CD8) de pacientes com e sem CEC de cabeça e pescoço. Foram recrutados para o estudo 20 indivíduos, sendo 10 pacientes com diagnóstico de CEC de cabeça e pescoço e 10 indivíduos sem câncer. Para avaliar a proliferação celular e liberação de citocinas (TNF-α, IFN-γ, IL-2, IL-4 e IL-10) das células T CD4 e CD8 frente ao estímulo com os peptídeos sintéticos dos genes E6 e E7 do HPV-16, a técnica ELISA foi utilizada. O mapeamento do DNA do HPV-16 foi realizado em amostras de plasma e saliva pela técnica de PCR em tempo real. Os resultados mostraram que o peptídeo E7 do HPV-16 inibiu a produção das citocinas pelas células T CD4 e CD8 derivadas dos indivíduos sem câncer (6/10) e pacientes com CEC de cabeça e pescoço (5/10) (p<0,05). A proteína Concanavaliana A induziu a proliferação das células T CD4 e CD8 dos indivíduos sem câncer e pacientes com CEC de cabeça e pescoço (p<0,05). As respostas celulares quanto à atividade proliferativa e a produção de citocinas dos pacientes com CEC de cabeça e pescoço foram semelhantes às respostas dos indivíduos sem câncer / The human papillomavirus (HPV) has been associated with squamous cell carcinoma (SCC) of the oropharynx, as a possible etiologic factor. The viral oncoproteins, E6 and E7 are able to inhibit the production of Th1 cytokines and initiate the production of Th2 cytokines, damaging the cellular response to infection. The purpose of this study is to evaluate the effect of viral oncoproteins E6 and E7 of HPV-16 on the response of T cells (CD4+ and CD8+) in patients with or without SCC of the head and neck. It was recruited for the study, 20 individuals, 10 patients with SCC of the head and neck and 10 individuals without cancer. To assess cell proliferation and cytokine release (TNF-α, IFN-γ, IL-2, IL-4 and IL-10) of CD4 and CD8 stimulation against synthetic peptides of the HPV-16 E6 and E7 genes, ELISA technique was used. The mapping of the HPV-16 DNA was performed in plasma and saliva samples by real time PCR. The results showed that the HPV-16 E7 peptide inhibited the production of cytokines by CD4 and CD8 T cells derived from subjects without cancer (6/10) and patients with SCC of the head and neck (5/10) (p <0, 05). The concavaline A protein induced proliferation of CD4 and CD8 T cells from individuals without cancer and patients with SCC of the head and neck (p <0.05). Cellular responses as to proliferative activity and cytokine production in patients with SCC of the head and neck were similar to the responses of individuals without cancer / FAPESP: 12/05381-0

Made available in DSpace on 2018-07-27T18:26:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-06-03. Added 1 bitstream(s) on 2018-07-27T18:30:37Z : No. of bitstreams: 1 000873683.pdf: 2162420 bytes, checksum: 8020e5fc7625f96c8be7397dc9a7ec86 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / A fagocitose, por células dendríticas (CD), de células apoptóticas (CA) infectadas induz a produção de TGF-β, IL-6 e IL-23, propiciando um microambiente com condições ideais para diferenciação de células Th17. Recentes resultados obtidos por nosso grupo demonstram que a fagocitose, por CD, de células apoptóticas infectadas resulta também na produção de altos IL- 1 e PGE2. A presença destes mediadores solúveis foi capaz de induzir a diferenciação de células Th17, in vitro, no entanto, a inibição da síntese de PGE2, pelo tratamento com inibidor não seletivo da COX (Indometacina), resultou no aumento da porcentagem destes linfócitos. Neste estudo foi avaliado o efeito da fagocitose de células apoptóticas infectadas com Escherichia coli (CA+Ec) na diferenciação de células Th17 in vivo e o efeito de PGE2 neste processo. A instilação de animais com CA+Ec, induziu a produção das citocinas IL-6, IL-1β e TGF-β no pulmão, o que sugere que a presença de CA+Ec é capaz de gerar um microambiente favorável para induzir a diferenciação Th17. A instilação de CA+Ec promoveu a diferenciação de células Th17, assim como a produção de IL-17. Porém, o tratamento com inibidor de COX resultou no aumento na porcentagem e no número de células Th17 no pulmão. A presença destas células resultou no aumento na porcentagem de neutrófilos no tecido pulmonar que parece refletir na diminuição da carga bacteriana recuperada do pulmão, quando comparado com animais que não receberam o tratamento. Assim, o conjunto destes resultados sugere que a fagocitose de CA+E. coli promove a diferenciação de células Th17. No entanto, a secreção de PGE2, pela fagocitose destas CA+Ec suprime a diferenciação e/ou migração de células Th17 para o pulmão, levando a inibição do recrutamento de neutrófilos e aumento da suscetibilidade às infecções pulmonares. / The phagocytosis of infected-apoptotic cells (iAC) by dendritic cells (DC) induces the production of TGF-β, IL-6 and IL-23, providing a microenvironment to Th17 cell differentiation. Recent data obtained in our group showed that the phagocytosis of infected- apoptotic cells by CD also results in high levels of IL-1β and PGE2. The presence of these soluble mediators was able to induce the differentiation of Th17 cells, in vitro. However, the inhibition of PGE2 synthesis, by non-selective COX inhibitor (indomethacin), result the increase of percentage of Th17. In this study, it was evaluated the effect of phagocytosis of infected-apoptotic cells (AC+E. coli) during the Th17 cell differentiation, in vivo, and the effect of PGE2 in this process. The inoculation of AC+ Ec (in.) into lung induced the production of IL-6, IL-1β and TGF-β in lung, suggesting that the presence of AC+Ec is able to induce a microenvironment favorable to Th17 cell differentiation. The instillation of AC+Ec induced the differentiation of Th17 cells. However, the treatment of the animals with COX inhibitor resulted in an increase in the percentage, and number, of Th17 cells in the lung. The presence of these cells increased in the percentage of neutrophils in the lung and that apparently reflect in bacterial clearance from the lung, compared to animals that received no treatment. Taken all together, the phagocytosis of AC+Ec promotes the Th17 cell differentiation. However, the production of PGE2 by efferocytosis suppresses the differentiation and / or migration of Th17 cells to the lungs, impair the recruitment of neutrophils and increase the susceptibility to lung infections. / FAPESP: 11/17611-7

Orientador: Aureo Evangelista Santana / Coorientador: Mirela Tinucci Costa / Banca: Maura Rosane Valério Ikoma / Banca: Felipe Augusto Ruiz Sueiro / Banca: Marcia Ferreira da Rosa Sobreira / Banca: Sabryna Gouveia Calazans / Resumo: Em Medicina Veterinária o linfoma é uma neoplasia caracterizada por proliferação clonal de linfócitos malignos, sendo uma das mais comuns em cães. Há evidências que as Tregs inibem a função efetora contra tumores, resultando em disfunção de células T em humanos e cães com câncer. O aumento da expressão da enzima ciclooxigenase-2 (COX-2) pelas células do tumor e células inflamatórias locais, estimula o desenvolvimento das Tregs. Deste modo, o tratamento com inibidores de COX-2, como os anti-inflamatórios não esteroidais é mais uma estratégia para a supressão das Tregs. Neste contexto, este trabalho teve como objetivo avaliar quantitativamente, por intermédio da citometria de fluxo, as Tregs em cães com linfoma, submetidos ao protocolo quimioterápico CHOP, associado ou não a um inibidor de COX-2 (Firocoxib). Foram utilizados 12 cães controles (hígidos), 12 cães com linfoma tratados com o protocolo CHOP e 12 cães com linfoma, tratados com o CHOP+Firocoxib. As Tregs formam avaliadas por citometria de fluxo, no momento do diagnóstico, após a indução da quimioterapia (5ª semana) e ao término do protocolo (20ª semana). Os resultados mostraram que os cães com linfoma apresentaram porcentagens maiores de Tregs (17,08±1,62) quando comparados ao grupo controle (5,67±1,62) (p<0,0001). Além disso, no grupo linfoma teve uma diminuição das porcentagens de Tregs ao final do protocolo quimioterápico, nos grupos tratados com o protocolo CHOP tradicional (GT1) (8,648±1,736) e no grupo tratado com CHOP associado a um firocoxib (GT2) (5,903±1,126) (p<0,0001). E que entre os grupos, GT1 (20,66±2,487) e GT2 (12,79±0,7673), apenas no momento do diagnóstico (M0), foi estatisticamente diferente (p<0,0114). Conclui-se que cães com linfoma multicêntrico possui um aumento das Tregs, e durante o protocolo quimioterápico, associado ou não a um firocoxib, essas células diminuem significativamente / Abstract: In Veterinary Medicine lymphoma is a neoplasm characterized by clonal proliferation of malignant lymphocytes, one of the most common in dogs. There is evidence that Treg inhibit the effector function against tumors, resulting in T cell dysfunction in humans and dogs with cancer. Increased expression of cyclooxygenase-2 enzyme (COX-2) by tumor cells and local inflammatory cells, stimulates the development of Treg. Thus, treatment with COX-2 inhibitors such as nonsteroidal anti-inflammatory is a further strategy for the removal of Tregs. In this context, this work aimed to evaluate quantitatively, through flow cytometry, Tregs in dogs with lymphoma undergoing chemotherapy protocol CHOP, with or without a COX-2 inhibitor (Firocoxib). 12 dogs were used controls (healthy), 12 dogs with lymphoma treated with CHOP protocol and 12 dogs with lymphoma treated with CHOP + Firocoxib. Tregs form assessed by flow cytometry at diagnosis after induction chemotherapy (Week 5) and the protocol termination (20 weeks). The results showed that dogs with lymphoma had higher percentages of Tregs (17.08 ± 1.62) compared with the control group (5.67 ± 1.62) (p <0.0001). Moreover, in the lymphoma group had a decrease of Treg percentages at the end of chemotherapy protocol, the groups treated with the traditional CHOP protocol (GT1) (8.648 ± 1.736) and in the CHOP arm associated with a firocoxib (GT2) (5,903 ± 1.126) (p <0.0001). And that between the groups, GT1 (20.66 ± 2.487), and GT2 (12.79 ± 0.7673) only at the time of diagnosis (M0), was statistically different (p <0.0114). It was concluded that dogs with multicentric lymphoma has increased Tregs, and during the chemotherapy protocol, with or without a firocoxib, these cells decrease significantly / Doutor