Made available in DSpace on 2016-12-23T13:49:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Juliana Macedo.pdf: 1847907 bytes, checksum: 0c2c478111632f7e86372a5f0f6c8756 (MD5) Previous issue date: 2012-05-05 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Ipriflavone is a synthetic isoflavone derivative from daidzein and clinically prescribed for treating and preventing osteoporosis in postmenopausal women. We investigated the potential of this drug against the cytotoxic and mutagenic effects induced by cyclophosphamide (CPA) chemotherapy, using the micronucleus assay in bone marrow erythrocytes of Swiss albino mice (Mus musculus) in vivo. To evaluate their possible mechanisms of action, performed the evaluation of antioxidant activity by DPPH assay. For in vivo testing was carried out three protocols: pretreatment, simultaneous treatment and post treatment. The ipriflavone was evaluated in three different concentrations dissolved in DMSO (1,71; 8,57 e 42,85mg.kg-1 m.c) and administered by oral via. The bone marrow was collected for the evaluation of polycromatic erythrocytes (PCE) and the ratio PCE/(PCE+NCE) (polychromatic erythrocytes / polychromatic erythrocytes + normochromatic erythrocytes). For the DPPH test were assessed five concentrations of ipriflavone (500, 250, 150, 50 e 10μg.mLˉ¹) using DPPH solution (60μM). The results of in vivo tests show that the three concentrations of ipriflavone studied significantly reduced the frequency of MNPCEs induced by CPA, in the pre-treatment protocol and demonstrated the same effect at the concentrations of 1,71 e 42,85mg.kg-1 m.c in the post-treatment. However, simultaneous treatment did not reduce the frequency of MNPCE in any of the concentrations tested. In all protocols performed, the ratio PCE/(PCE+NCE) increased. There was variation between the genders in some of the experimental groups and the evaluation of antioxidant activity of ipriflavone showed no ability to donate hydrogens, suggesting that it acts through other mechanisms, such as inactivation of the enzyme activity of cytochrome P-450 / Ipriflavona é uma isoflavona sintética derivada da daidzeína e utilizada no tratamento e prevenção da osteoporose em mulheres pós-menopausadas. Investigamos o potencial dessa droga contra os efeitos citotóxico e mutagênico induzidos pelo quimioterápico ciclofosfamida (CPA), por meio do ensaio do micronúcleo em eritrócitos de medula óssea de camundongos albinos Swiss (Mus musculus) in vivo. Para avaliar um de seus possíveis mecanismos de ação realizamos a avaliação de sua atividade antioxidante pelo método de DPPH. Para os testes in vivo foram realizados três protocolos: pré-tratamento, tratamento simultâneo e pós-tratamento. A ipriflavona foi avaliada em três concentrações dissolvidas em DMSO (1,71; 8,57 e 42,85mg.kg-1 m.c) e administrada via oral. A medula óssea foi coletada para a avaliação dos eritrócitos policromáticos micronucleados (MNPCEs) e da razão PCE/(PCE+NCE) (eritrócitos policromáticos/eritrócitos policromáticos + eritrócitos normocromáticos). Para o teste de DPPH foram avaliadas 5 concentrações de ipriflavona (500, 250, 150, 50 e 10μg.mLˉ¹) utilizando solução de DPPH 60μM. Os resultados obtidos nos testes in vivo demonstram que a ipriflavona nas três concentrações pesquisadas reduziu significativamente a frequência de MNPCEs induzidos pela CPA no protocolo de pré-tratamento e demonstrou o mesmo efeito nas concentrações de 1,71 e 42,85mg.kg-1 m.c, no pós-tratamento. Entretanto, no tratamento simultâneo, ela não reduziu a frequência de MNPCE em nenhuma das concentrações testadas. Em todos os protocolos realizados houve o aumento da razão PCE/(PCE+NCE), demonstrando sua eficácia na redução da citotoxicidade induzida pela CPA. Houve variação entre os gêneros em alguns dos grupos experimentais. A avaliação da atividade antioxidante da ipriflavona revelou sua ausência de capacidade em doar hidrogênios para o radical DPPH, sugerindo que a mesma atua por meio de outros mecanismos, como por exemplo, inativação da atividade enzimática das isoenzimas do citocromo P-450

A cistite hemorrágica (CH) consiste em um processo inflamatório difuso de origem infecciosa ou não que resulta em um sangramento da mucosa vesical. As CH crônicas recorrentes induzidas pela ciclofosfamida (CYP) são um desafio na prática clínica pela alta morbidade e por vezes mortalidade dos pacientes. O tratamento da CH induzida pela ciclofosfamida consiste no uso de MESNA, disulfiram, N-acetil-cisteína, anti-inflamatório, oxigênio hiperbárico, hiper-hidratação e irrigação vesical, mas novas terapias têm sido investigadas, inclusive usando produtos naturais. A espécie vegetal Chenopodium ambrosioides L., conhecida popularmente como mastruz, mastruço e erva-de-Santa-Maria, tem sido relatada pela população como anti-inflamatório e analgésico. O presente estudo investigou os efeitos do extrato bruto hidroalcoólico de folhas de Chenopodium ambrosioides na CH induzida pela ciclofosfamida em ratos. Vinte e nove ratos receberam 150 mg/kg de CYP por via intraperitoneal (i.p.) para indução de CH e em seguida foram divididos em três grupos: controle negativo (CN), tratados com soro fisiológico a 0,9%; extrato bruto hidroalcoólico de Chenopodium ambrosioides (EBHCa), tratado com dose única de 50 mg/kg de extrato bruto hidroalcoólico de Chenopodium ambrosioides (EBH) e controle positivo (CP), tratados com dose única de 15 mg/kg de diclofenaco de potássio, todos por gavagem. Após 48 horas da indução da CH os animais foram sacrificados para retirada da bexiga, que foi preparada para análise histopatológica e imuno-histoquímica. O EBH foi capaz de diminuir o peso da bexiga e histologicamente a inflamação aguda e crônica da bexiga, a extensão do infiltrado inflamatório na parede vesical e a neoformação capilar do mesmo modo que o diclofenaco de potássio, quando comparados ao grupo CN. Observou-se ainda uma redução da expressão imuno-histoquímica de cicloxigenase-2 (COX-2) e do fator nuclear kappa B (NFB) na bexiga. No presente estudo o EBH das folhas de Chenopodium ambrosioides apresentou atividade anti-inflamatória, semelhante ao diclofenaco de potássio, no tratamento da CH induzida pela CYP. / Hemorrhagic cystitis (HC) consists of a diffuse inflammatory process that results on the bleeding of the bladder mucosa due to infectious or noninfectious etiology. Chronically recurrent CYP induced HC remains a challenge to clinical practice given its high morbidity and sometimes mortality of patients. Treatment consists of administering MESNA, disulfiram, N-acetylcysteine, anti-inflammatory, hyperbaric oxygen, hyperhydration and bladder irrigation, though new therapies have been investigated, such as the use of natural products. Popularly known as mastruz, mastruço and erva-de-Santa-Maria, Chenopodium ambrosioides L. has been generally reported by people as having anti-inflammatory and analgesic effects. The following study investigated the effects of a hydroalcoholic crude extract (EBH) of Chenopodium ambrosioides leaves on cyclophosphamide (CYP) induced HC in rats. In order to induce HC, twenty nine rats were intraperitoneally (i.p.) administered 150mg/kg of CYP and then divided into three groups: negative control (NC) were treated with 0,9% saline solution; hydroalcoholic crude extract of Chenopodium ambrosioides (EBHCa) were treated with a single dose of 50 mg/kg of EBH administered and positive control (PC) were treated with a single dose of 15 mg/kg of diclofenac potassium, all of them by gavage. After 48 hours of HC induction, all rats were sacrificed, their bladders removed and prepared for histopathological and immunohistochemical analysis. EBH was able to decrease bladder weight and histologically decrease acute and chronic bladder inflammation, decrease on the infiltrated inflammatory extension of the bladder wall and capillary neoformation in the same way of those from group CN. There was also a reduction in the immunohistochemical expression of cyclooxygenase-2 (COX-2) and nuclear factor kappa B (NFB) in the bladder. In this study, Chenopodium ambrosioides leaves EBH showed anti-inflammatory activity which was similar to results from diclofenac potassium used on treatment of CYP induced HC.

Evidências clínicas sugerem que pacientes sob tratamento quimioterápico apresentam alguma forma de dano cognitivo. Isso tem sido observado principalmente em estudos com mulheres submetidas ao tratamento adjuvante do câncer de mama. Devido ao potencial impacto clínico dessa complicação, torna-se necessário um maior número de estudos a respeito dos mecanismos envolvidos na disfunção cognitiva ocasionada por agentes quimioterápicos. Nesse sentido, é fundamental o desenvolvimento de modelos animais que aprimorem o conhecimento dessa possível disfunção. Em nosso estudo, foi avaliado o efeito da ciclofosfamida, agente quimioterápico largamente utilizado em oncologia, em especial na terapia adjuvante do câncer de mama. Foi utilizado um modelo animal com camundongos machos adultos que receberam injeção sistêmica da ciclofosfamida nas doses de 8, 40 ou 200 mg/kg ou controle com solução salina. Os animais foram treinados em tarefa de esquiva inibitória e comportamento em campo aberto, sendo avaliados após um dia ou sete dias do tratamento. Os camundongos tratados com ciclofosfamida nas doses de 40 ou 200 mg/kg um dia antes do teste mostraram significativo dano de retenção de memória. Esses resultados sugerem dano cognitivo agudo. O experimento controle não afetou o comportamento em campo aberto, o que enfraquece a possibilidade de dano por ação na locomoção, na motivação ou na ansiedade. Com base em nosso estudo e ampla revisão bibliográfica, é possível considerar um dano cognitivo agudo após injeção única de ciclofosfamida em modelo de camundongos de memória aversiva. Futuros estudos são necessários para caracterizar os déficits cognitivos induzidos pela quimioterapia em modelos animais e investigar os mecanismos responsáveis pelos diferentes efeitos da ciclofosfamida na memória em diferentes modelos experimentais. / Cognitive dysfunction has been reported following cytotoxic therapy, especially in patients receiving adjuvant treatment for breast cancer. Data on experimental models for the study of the mechanisms involved in cognitive dysfunction are scanty. Therefore, new animal models are needed to better understand the causes of cognitive dysfunction following cytotoxic therapy. We examined the effects of cyclophosphamide, a chemotherapeutic agent widely used in oncology, and important in adjuvant treatment of breast cancer, in an in vivo rodent model. In our experiments, male mice were given a systemic injection of cyclophosphamide (8, 40, 200 mg/kg) or saline solution as control. The animals were trained and tested 1 day and 7 days after the injection, in step-down inhibitory avoidance and open-field behavior. Mice treated with cyclophosphamide at 40 or 200 mg/kg 1 day before test showed significant impairment of 24-hour memory retention. Thus, such results suggest acute cognitive dysfunction. The control experiment did not show impairment in the open field behavior, indicating that drug effects on inhibitory avoidance could not be attributed to drug-induced alterations in locomotion, motivation, or anxiety. Based on our results and literature review, we were able to confirm the occurrence of an acute impairment of cognitive function with a single dose of cyclophosphamide in a mice model of aversive conditioning. Further studies are required to further characterize cognitive deficits induced by cancer chemotherapy in animal models.

Medicamentos fitoterápicos são aqueles cuja matéria-prima é exclusivamente originária de vegetais, descartando-se qualquer associação que inclua em sua composição outras substâncias ativas isoladas não vegetais. A lesão renal aguda (LRA) é caracterizada pelo rápido declínio da função renal, definida por um aumento absoluto da creatinina sérica de pelo menos 0,3mg/dl, elevação de 50% (1,5 vezes) do valor basal ou redução do fluxo urinário, documentado como oligúria ou menor que 0,5ml/kg por hora por mais de seis horas. Este estudo investigou o efeito protetor do Echinodorus macrophyllus (Ema) na nefrotoxicidade induzida pela ciclofosfamida. Foram utilizados ratos da raça Wistar, machos, adultos, distribuídos nos grupos: Controle: animais que receberam solução de cloreto de sódio 0,9% por via intraperitoneal (i.p.), (1,5ml/kg, dose única), Ema: animais que receberam Echinodorus macrophyllus, (2g/kg 1 x ao dia, durante 5 dias, por gavagem), CCF: animais que receberam ciclofosfamida (150mg/kg dose única, i.p.), CCF + Ema: animais que receberam Echinodorus macrophyllus e ciclofosfamida no 5º dia (i.p.). Foram avaliadas a função renal (FR) (clearance de creatinina); a lesão oxidativa (peróxidos urinários, substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico TBARS e tióis no tecido renal) e feita análise histológica renal (lesão tubulointersticial). Os resultados confirmaram a lesão nefrotóxica de caráter oxidativo induzida pela ciclofosfamida. O Ema demonstrou efeito renoprotetor antioxidante, com melhora da FR, redução dos níveis de peroxidação lipídica e metabólitos oxidativos. A análise histológica indicou dano significativo ao tecido renal pela CCF, que foi reduzido nos animais tratados com Ema. Este estudo demonstra claramente a LRA induzida pela ciclofosfamida e o efeito renoprotetor do Ema / Herbal medicines are those whose raw materials are exclusively originated from vegetables, excepting any association that includes in its composition other isolated active substances. Acute kidney injury (AKI) is characterized by a rapid decline in renal function defined by an absolute increase in serum creatinine of at least 0.3 mg/dL, a 50% (1.5 times) baseline increase or urinary flow reduction, documented as oliguria or less than 0.5 ml/kg per hour for a period surpassing six hours. This study investigated the protective effect of Echinodorus macrophyllus (Ema) in cyclophosphamide-induced nephrotoxicity. We used male adults Wistar mice, divided into four groups: Control group: animals receiving sodium chloride solution 0.9 intraperitoneally (ip) (1.5 ml/kg, single dose); Ema: animals that received Echinodorus macrophyllus (2g/kg one time daily for 5 days by gavage); CCF: animals receiving cyclophosphamide (150mg/kg single dose, i.p), CCF + Ema: animals receiving Echonodorus macrophyllus and cyclophosphamide on day 5. We evaluated renal function (RF) (creatinine clearance), oxidative damage (urinary peroxides, thiobarbituric acid reactive substances - TBARS and thiols in kidney tissues) and we also carried out histologic kidney analyses (tubulointerstitial injury). Data confirmed the oxidative nephrotoxic injury induced by cyclophosphamide. Ema proved to have renoprotective and antioxidant effects, with improvement in RF, reduced levels of lipid peroxidation and oxidative metabolites. The histologic analysis indicated significant damage to renal tissue by CCF, which was reduced in animals treated with Ema. This study clearly demonstrates LRA induced by cyclophosphamide and the renoprotective effect of Ema

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Introduction: Hemorrhagic cystitis (HC) is the main side effect of cyclophosphamide (CP) chemotherapy. This condition is characterized by the macro and microhaematuria, dysuria, suprapubic pain and increased urinary frequency. It is believed that acrolein, a CP metabolite, induces the generation of reactive oxygen species in the uroepithelial cell, resulting in peroxynitrite formation, which can cause damage to these cells. Mesna is the choice drug used to prophylactically treat HC, because it prevents the acrolein contact with the uroepithelium. Besides, antioxidant substances are thought to have a protective effect on HC, mainly because of the reduction of peroxynitrite formation through the inhibition of superoxide production. In this way, natural compounds or extracts with antioxidant and anti-inflammatory properties may possess potential to treat HC. Objectives: In the present study the effect of the ethanol extract of the inner bark of Caesalpinia pyramidalis (EECp) was investigated in the HC model in rats. Methods: In order to induce HC, animals received an i.p. injection of CP (200 mg/kg). A control group received only saline (0.9%) by the same route. One hour before this injection, animals were pre-treated with vehicle (Tween 80, 5%, p.o.) or EECP (100-400 mg/kg, p.o.). Mesna was used as a control and was administrated 5 min before and 4 and 8 h after the CP injection. In this manner, there were used 6 experimental groups: (i) Vehicle+Saline; (ii) Vehicle+CP; (iii) EECp (100 mg/kg)+CP; (iv) EECp (200 mg/kg)+CP; (v) EECp (400 mg/kg)+CP; (vi) Mesna+CP. After 24 h of CP or saline injection, animals were euthanized and the inflammatory/oxidative parameters were measured: (i) myeloperoxidase (MPO) activity in the urinary bladder and lung tissues; (ii) malondialdehyde (MDA) concentration in the urinary bladder and lung tissues; (iii) edema index in bladder; (iv) serum concentrations of nitrite and nitrate; (v) total and differential leukocyte counts in the peripheral blood; (vi) histological analyses of the urinary bladder. Results: The injection of CP increased the MPO activity in the urinary bladder (P<0.001) and significantly altered all the histological parameters evaluated, when compared with the saline+vehicle group. Besides, it augmented the bladder weight (P<0.01), when compared with the saline+vehicle group, without changing the MDA concentrations. Systemically, we observed higher serum concentration of nitrite and nitrate and lung MPO activity, as wells as a decrease in the total leukocyte and mononuclear counts, with a slight increase in the polymorphonuclear counts (P<0.05), when compared with saline+vehicle group. Pre-treatment with EECp reduced the leukocyte influx to the urinary bladder, evidenced by the reduction of the MPO activity (P<0.001 for 100 and 400 mg/kg and P<0.05 for 200 mg/kg) and the histological score (P<0.05 for 100 mg/kg), accompanied by the diminution of the total histological score (P<0.05 for 100 mg/kg) and the basal concentration of MDA (P<0.05 for 100 and 400 mg/kg), when compared with the vehicle+CP group. It was also observed an attenuation of the lung injury caused by CP administration, by the reduction of the MPO activity (P<0.05 for 200 and 400 mg/kg) and basal MDA concentration (P<0.05 for 200 and 400 mg/kg), when compared with the vehicle+CP group. The pretreatment with EECp also reduced the serum concentration of the nitrate and nitrite (P<0.05 for 100 mg/kg and P<0.01 for 400 mg/kg), in addition to the polymorphonuclear cell counts (P<0.05 for all doses used), without any significant alteration in the total leukocyte and mononuclear counts. Conclusions: These results suggested that EECp possesses moderate anti-inflammatory and antioxidant effects on the HC and attenuates the CP-induced lung injury, being of interest for future studies involving therapeutical strategies to treat the effects associated with the chemotherapy with CP. / Introdução: A cistite hemorrágica (CH) é o principal efeito indesejado associado à quimioterapia com ciclofosfamida (CF). Esta condição é caracterizada pela presença de macro e micro hematúria, disúria, dor suprapúbica e aumento da frequência urinária. Acredita-se que a acroleína, metabólito da CF, induz a geração de espécies reativas de oxigênio no uroepitélio, resultando em CH. A prevenção desta patologia é feita com mesna, que atua impedindo o contato da acroleína com o uroepitélio. Entretanto, substâncias antioxidantes tem efeito protetor na CH e acredita-se que elas comprometam a produção de peroxinitrito por diminuir a produção de ânion superóxido e, desse modo, substâncias de origem natural com propriedades antioxidantes e anti-inflamatórias podem representar uma alternativa em potencial no tratamento da CH. O extrato etanólico de Caesalpinia pyramidalis (EECp) possui propriedades antioxidantes e anti-inflamatórias e, portanto, acredita-se que o mesmo possa modular vias inflamatórias envolvidas na CH. Objetivo: O presente estudo investigou o efeito do EECp na prevenção da CH induzida por CF. Métodos: A CH foi induzida pela injeção i.p. de CF (200 mg/kg) em ratos Wistar. Outro grupo recebeu somente salina (0,9%) pela mesma via. Os animais foram pré-tratados 1 h antes da injeção de CF ou salina com veículo (Tween 80 a 0,5%; v.o.) ou EECp (100-400 mg/kg; v.o.). O mesna foi administrado 5 min. antes e 4 e 8 h depois da indução da CH. Foram utilizados 6 grupos experimentais: (i) Veículo+Salina; (ii) Veículo+CF; (iii) EECp (100 mg/kg)+CF; (iv) EECp (200 mg/kg)+CF; (v) EECp (400 mg/kg)+CF; (vi) Mesna+CF. Após 24 h da injeção de CF ou salina os animais foram eutanasiados e alguns parâmetros inflamatórios foram medidos: (i) atividade de mieloperoxidase (MPO) na bexiga e no pulmão; (ii) concentração de malondialdeído (MDA) na bexiga e no pulmão; (iii) índice de edema na bexiga; (iv) concentrações séricas de nitrito e nitrato; (v) contagem total e diferencial de leucócitos em sangue periférico e (vi) análise histológica da bexiga. Resultados: A injeção de CF aumentou a atividade de MPO na bexiga (P<0,001) e alterou significativamente todos os parâmetros histopatológicos analisados, além de provocar aumento da massa da bexiga (P<0,01), sem alterar a concentração de MDA neste tecido, quando comparado ao grupo Veículo+Salina. Sistemicamente, observou-se elevação dos níveis séricos de nitrito e nitrato e da atividade de MPO pulmonar, bem como diminuição da contagem total de leucócitos e mononucleares, com aumento no número de polimorfonucleares, em relação ao grupo Veículo+Salina. O EECp causou a redução do influxo de leucócitos para a bexiga induzido pela CF, evidenciado pela diminuição do escore histológico (P<0,05 para 100 mg/kg) e a da atividade de MPO (P<0,001 para 100 e 400 mg/kg e P<0,05 para 200 mg/kg) na bexiga, acompanhado da diminuição do escore histológico total (P<0,05 para 100 mg/kg) e da concentração basal de MDA (P<0,05 para 100 e 400 mg/kg), quando comparado ao grupo Veículo+CF. Sistemicamente, a administração de EECp atenuou a lesão pulmonar induzida pela CF, demonstrada pela redução da atividade de MPO (P<0,05 para 200 e 400 mg/kg) e da concentração basal de MDA (P<0,05 para 200 e 400 mg/kg) neste tecido; reduziu as concentrações séricas de nitrito e nitrato (P<0,05 para 100 mg/kg e P<0,01 para 400 mg/kg) e diminuiu o número de leucócitos polimorfonucleares no sangue (P<0,05 para todas as doses usadas), quando comparado ao grupo Veículo+CF. Conclusão: Estes resultados permitem concluir que o EECp tem efeito anti-inflamatório e antioxidante moderados na CH, bem como atenua a lesão pulmonar induzida pela CF, podendo ser utilizado em estudos envolvendo estratégias terapêuticas futuras para o tratamento de efeitos associados à quimioterapia com CF.

A cistite hemorrágica (CH) consiste em um processo inflamatório difuso de origem infecciosa ou não que resulta em um sangramento da mucosa vesical. As CH crônicas recorrentes induzidas pela ciclofosfamida (CYP) são um desafio na prática clínica pela alta morbidade e por vezes mortalidade dos pacientes. O tratamento da CH induzida pela ciclofosfamida consiste no uso de MESNA, disulfiram, N-acetil-cisteína, anti-inflamatório, oxigênio hiperbárico, hiper-hidratação e irrigação vesical, mas novas terapias têm sido investigadas, inclusive usando produtos naturais. A espécie vegetal Chenopodium ambrosioides L., conhecida popularmente como mastruz, mastruço e erva-de-Santa-Maria, tem sido relatada pela população como anti-inflamatório e analgésico. O presente estudo investigou os efeitos do extrato bruto hidroalcoólico de folhas de Chenopodium ambrosioides na CH induzida pela ciclofosfamida em ratos. Vinte e nove ratos receberam 150 mg/kg de CYP por via intraperitoneal (i.p.) para indução de CH e em seguida foram divididos em três grupos: controle negativo (CN), tratados com soro fisiológico a 0,9%; extrato bruto hidroalcoólico de Chenopodium ambrosioides (EBHCa), tratado com dose única de 50 mg/kg de extrato bruto hidroalcoólico de Chenopodium ambrosioides (EBH) e controle positivo (CP), tratados com dose única de 15 mg/kg de diclofenaco de potássio, todos por gavagem. Após 48 horas da indução da CH os animais foram sacrificados para retirada da bexiga, que foi preparada para análise histopatológica e imuno-histoquímica. O EBH foi capaz de diminuir o peso da bexiga e histologicamente a inflamação aguda e crônica da bexiga, a extensão do infiltrado inflamatório na parede vesical e a neoformação capilar do mesmo modo que o diclofenaco de potássio, quando comparados ao grupo CN. Observou-se ainda uma redução da expressão imuno-histoquímica de cicloxigenase-2 (COX-2) e do fator nuclear kappa B (NF&#61547;B) na bexiga. No presente estudo o EBH das folhas de Chenopodium ambrosioides apresentou atividade anti-inflamatória, semelhante ao diclofenaco de potássio, no tratamento da CH induzida pela CYP. / Hemorrhagic cystitis (HC) consists of a diffuse inflammatory process that results on the bleeding of the bladder mucosa due to infectious or noninfectious etiology. Chronically recurrent CYP induced HC remains a challenge to clinical practice given its high morbidity and sometimes mortality of patients. Treatment consists of administering MESNA, disulfiram, N-acetylcysteine, anti-inflammatory, hyperbaric oxygen, hyperhydration and bladder irrigation, though new therapies have been investigated, such as the use of natural products. Popularly known as mastruz, mastruço and erva-de-Santa-Maria, Chenopodium ambrosioides L. has been generally reported by people as having anti-inflammatory and analgesic effects. The following study investigated the effects of a hydroalcoholic crude extract (EBH) of Chenopodium ambrosioides leaves on cyclophosphamide (CYP) induced HC in rats. In order to induce HC, twenty nine rats were intraperitoneally (i.p.) administered 150mg/kg of CYP and then divided into three groups: negative control (NC) were treated with 0,9% saline solution; hydroalcoholic crude extract of Chenopodium ambrosioides (EBHCa) were treated with a single dose of 50 mg/kg of EBH administered and positive control (PC) were treated with a single dose of 15 mg/kg of diclofenac potassium, all of them by gavage. After 48 hours of HC induction, all rats were sacrificed, their bladders removed and prepared for histopathological and immunohistochemical analysis. EBH was able to decrease bladder weight and histologically decrease acute and chronic bladder inflammation, decrease on the infiltrated inflammatory extension of the bladder wall and capillary neoformation in the same way of those from group CN. There was also a reduction in the immunohistochemical expression of cyclooxygenase-2 (COX-2) and nuclear factor kappa B (NF&#61547;B) in the bladder. In this study, Chenopodium ambrosioides leaves EBH showed anti-inflammatory activity which was similar to results from diclofenac potassium used on treatment of CYP induced HC.

Evidências clínicas sugerem que pacientes sob tratamento quimioterápico apresentam alguma forma de dano cognitivo. Isso tem sido observado principalmente em estudos com mulheres submetidas ao tratamento adjuvante do câncer de mama. Devido ao potencial impacto clínico dessa complicação, torna-se necessário um maior número de estudos a respeito dos mecanismos envolvidos na disfunção cognitiva ocasionada por agentes quimioterápicos. Nesse sentido, é fundamental o desenvolvimento de modelos animais que aprimorem o conhecimento dessa possível disfunção. Em nosso estudo, foi avaliado o efeito da ciclofosfamida, agente quimioterápico largamente utilizado em oncologia, em especial na terapia adjuvante do câncer de mama. Foi utilizado um modelo animal com camundongos machos adultos que receberam injeção sistêmica da ciclofosfamida nas doses de 8, 40 ou 200 mg/kg ou controle com solução salina. Os animais foram treinados em tarefa de esquiva inibitória e comportamento em campo aberto, sendo avaliados após um dia ou sete dias do tratamento. Os camundongos tratados com ciclofosfamida nas doses de 40 ou 200 mg/kg um dia antes do teste mostraram significativo dano de retenção de memória. Esses resultados sugerem dano cognitivo agudo. O experimento controle não afetou o comportamento em campo aberto, o que enfraquece a possibilidade de dano por ação na locomoção, na motivação ou na ansiedade. Com base em nosso estudo e ampla revisão bibliográfica, é possível considerar um dano cognitivo agudo após injeção única de ciclofosfamida em modelo de camundongos de memória aversiva. Futuros estudos são necessários para caracterizar os déficits cognitivos induzidos pela quimioterapia em modelos animais e investigar os mecanismos responsáveis pelos diferentes efeitos da ciclofosfamida na memória em diferentes modelos experimentais. / Cognitive dysfunction has been reported following cytotoxic therapy, especially in patients receiving adjuvant treatment for breast cancer. Data on experimental models for the study of the mechanisms involved in cognitive dysfunction are scanty. Therefore, new animal models are needed to better understand the causes of cognitive dysfunction following cytotoxic therapy. We examined the effects of cyclophosphamide, a chemotherapeutic agent widely used in oncology, and important in adjuvant treatment of breast cancer, in an in vivo rodent model. In our experiments, male mice were given a systemic injection of cyclophosphamide (8, 40, 200 mg/kg) or saline solution as control. The animals were trained and tested 1 day and 7 days after the injection, in step-down inhibitory avoidance and open-field behavior. Mice treated with cyclophosphamide at 40 or 200 mg/kg 1 day before test showed significant impairment of 24-hour memory retention. Thus, such results suggest acute cognitive dysfunction. The control experiment did not show impairment in the open field behavior, indicating that drug effects on inhibitory avoidance could not be attributed to drug-induced alterations in locomotion, motivation, or anxiety. Based on our results and literature review, we were able to confirm the occurrence of an acute impairment of cognitive function with a single dose of cyclophosphamide in a mice model of aversive conditioning. Further studies are required to further characterize cognitive deficits induced by cancer chemotherapy in animal models.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Introduction: Hemorrhagic cystitis (HC) is the main side effect of cyclophosphamide (CP) chemotherapy. This condition is characterized by the macro and microhaematuria, dysuria, suprapubic pain and increased urinary frequency. It is believed that acrolein, a CP metabolite, induces the generation of reactive oxygen species in the uroepithelial cell, resulting in peroxynitrite formation, which can cause damage to these cells. Mesna is the choice drug used to prophylactically treat HC, because it prevents the acrolein contact with the uroepithelium. Besides, antioxidant substances are thought to have a protective effect on HC, mainly because of the reduction of peroxynitrite formation through the inhibition of superoxide production. In this way, natural compounds or extracts with antioxidant and anti-inflammatory properties may possess potential to treat HC. Objectives: In the present study the effect of the ethanol extract of the inner bark of Caesalpinia pyramidalis (EECp) was investigated in the HC model in rats. Methods: In order to induce HC, animals received an i.p. injection of CP (200 mg/kg). A control group received only saline (0.9%) by the same route. One hour before this injection, animals were pre-treated with vehicle (Tween 80, 5%, p.o.) or EECP (100-400 mg/kg, p.o.). Mesna was used as a control and was administrated 5 min before and 4 and 8 h after the CP injection. In this manner, there were used 6 experimental groups: (i) Vehicle+Saline; (ii) Vehicle+CP; (iii) EECp (100 mg/kg)+CP; (iv) EECp (200 mg/kg)+CP; (v) EECp (400 mg/kg)+CP; (vi) Mesna+CP. After 24 h of CP or saline injection, animals were euthanized and the inflammatory/oxidative parameters were measured: (i) myeloperoxidase (MPO) activity in the urinary bladder and lung tissues; (ii) malondialdehyde (MDA) concentration in the urinary bladder and lung tissues; (iii) edema index in bladder; (iv) serum concentrations of nitrite and nitrate; (v) total and differential leukocyte counts in the peripheral blood; (vi) histological analyses of the urinary bladder. Results: The injection of CP increased the MPO activity in the urinary bladder (P<0.001) and significantly altered all the histological parameters evaluated, when compared with the saline+vehicle group. Besides, it augmented the bladder weight (P<0.01), when compared with the saline+vehicle group, without changing the MDA concentrations. Systemically, we observed higher serum concentration of nitrite and nitrate and lung MPO activity, as wells as a decrease in the total leukocyte and mononuclear counts, with a slight increase in the polymorphonuclear counts (P<0.05), when compared with saline+vehicle group. Pre-treatment with EECp reduced the leukocyte influx to the urinary bladder, evidenced by the reduction of the MPO activity (P<0.001 for 100 and 400 mg/kg and P<0.05 for 200 mg/kg) and the histological score (P<0.05 for 100 mg/kg), accompanied by the diminution of the total histological score (P<0.05 for 100 mg/kg) and the basal concentration of MDA (P<0.05 for 100 and 400 mg/kg), when compared with the vehicle+CP group. It was also observed an attenuation of the lung injury caused by CP administration, by the reduction of the MPO activity (P<0.05 for 200 and 400 mg/kg) and basal MDA concentration (P<0.05 for 200 and 400 mg/kg), when compared with the vehicle+CP group. The pretreatment with EECp also reduced the serum concentration of the nitrate and nitrite (P<0.05 for 100 mg/kg and P<0.01 for 400 mg/kg), in addition to the polymorphonuclear cell counts (P<0.05 for all doses used), without any significant alteration in the total leukocyte and mononuclear counts. Conclusions: These results suggested that EECp possesses moderate anti-inflammatory and antioxidant effects on the HC and attenuates the CP-induced lung injury, being of interest for future studies involving therapeutical strategies to treat the effects associated with the chemotherapy with CP. / Introdução: A cistite hemorrágica (CH) é o principal efeito indesejado associado à quimioterapia com ciclofosfamida (CF). Esta condição é caracterizada pela presença de macro e micro hematúria, disúria, dor suprapúbica e aumento da frequência urinária. Acredita-se que a acroleína, metabólito da CF, induz a geração de espécies reativas de oxigênio no uroepitélio, resultando em CH. A prevenção desta patologia é feita com mesna, que atua impedindo o contato da acroleína com o uroepitélio. Entretanto, substâncias antioxidantes tem efeito protetor na CH e acredita-se que elas comprometam a produção de peroxinitrito por diminuir a produção de ânion superóxido e, desse modo, substâncias de origem natural com propriedades antioxidantes e anti-inflamatórias podem representar uma alternativa em potencial no tratamento da CH. O extrato etanólico de Caesalpinia pyramidalis (EECp) possui propriedades antioxidantes e anti-inflamatórias e, portanto, acredita-se que o mesmo possa modular vias inflamatórias envolvidas na CH. Objetivo: O presente estudo investigou o efeito do EECp na prevenção da CH induzida por CF. Métodos: A CH foi induzida pela injeção i.p. de CF (200 mg/kg) em ratos Wistar. Outro grupo recebeu somente salina (0,9%) pela mesma via. Os animais foram pré-tratados 1 h antes da injeção de CF ou salina com veículo (Tween 80 a 0,5%; v.o.) ou EECp (100-400 mg/kg; v.o.). O mesna foi administrado 5 min. antes e 4 e 8 h depois da indução da CH. Foram utilizados 6 grupos experimentais: (i) Veículo+Salina; (ii) Veículo+CF; (iii) EECp (100 mg/kg)+CF; (iv) EECp (200 mg/kg)+CF; (v) EECp (400 mg/kg)+CF; (vi) Mesna+CF. Após 24 h da injeção de CF ou salina os animais foram eutanasiados e alguns parâmetros inflamatórios foram medidos: (i) atividade de mieloperoxidase (MPO) na bexiga e no pulmão; (ii) concentração de malondialdeído (MDA) na bexiga e no pulmão; (iii) índice de edema na bexiga; (iv) concentrações séricas de nitrito e nitrato; (v) contagem total e diferencial de leucócitos em sangue periférico e (vi) análise histológica da bexiga. Resultados: A injeção de CF aumentou a atividade de MPO na bexiga (P<0,001) e alterou significativamente todos os parâmetros histopatológicos analisados, além de provocar aumento da massa da bexiga (P<0,01), sem alterar a concentração de MDA neste tecido, quando comparado ao grupo Veículo+Salina. Sistemicamente, observou-se elevação dos níveis séricos de nitrito e nitrato e da atividade de MPO pulmonar, bem como diminuição da contagem total de leucócitos e mononucleares, com aumento no número de polimorfonucleares, em relação ao grupo Veículo+Salina. O EECp causou a redução do influxo de leucócitos para a bexiga induzido pela CF, evidenciado pela diminuição do escore histológico (P<0,05 para 100 mg/kg) e a da atividade de MPO (P<0,001 para 100 e 400 mg/kg e P<0,05 para 200 mg/kg) na bexiga, acompanhado da diminuição do escore histológico total (P<0,05 para 100 mg/kg) e da concentração basal de MDA (P<0,05 para 100 e 400 mg/kg), quando comparado ao grupo Veículo+CF. Sistemicamente, a administração de EECp atenuou a lesão pulmonar induzida pela CF, demonstrada pela redução da atividade de MPO (P<0,05 para 200 e 400 mg/kg) e da concentração basal de MDA (P<0,05 para 200 e 400 mg/kg) neste tecido; reduziu as concentrações séricas de nitrito e nitrato (P<0,05 para 100 mg/kg e P<0,01 para 400 mg/kg) e diminuiu o número de leucócitos polimorfonucleares no sangue (P<0,05 para todas as doses usadas), quando comparado ao grupo Veículo+CF. Conclusão: Estes resultados permitem concluir que o EECp tem efeito anti-inflamatório e antioxidante moderados na CH, bem como atenua a lesão pulmonar induzida pela CF, podendo ser utilizado em estudos envolvendo estratégias terapêuticas futuras para o tratamento de efeitos associados à quimioterapia com CF.

A ciclofosfamida (CPA) é um agente alquilante da classe das oxazafosforinas amplamente usada no tratamento de múltiplas formas de câncer e de doenças autoimunes em adultos e crianças. A CPA está disponível na clínica como racemato, no entanto, dados pré-clínicos demonstraram diferenças na eficácia e toxicidade dos seus enantiômeros, sendo o enantiômero (S)-(-)-CPA o de maior índice terapêutico. O presente estudo investigou a enantiosseletividade e a influência do CYP2B6, CYP2C9, CYP2C19 e CYP3A na disposição cinética da ciclofosfamida (CPA) em pacientes portadoras de câncer de mama. Foram incluídas na investigação 15 pacientes previamente submetidas ao procedimento de retirada do tumor e tratadas com CPA racêmica (900-1000 mg) e epirrubicina. A atividade in vivo do CYP3A foi avaliada empregando o midazolam como fármaco marcador. As amostras seriadas de sangue foram coletadas até 24 horas após a administração do primeiro ciclo da CPA. Os enantiômeros da CPA foram extraídos do plasma, usando mistura de acetato de etila:clorofórmio (75:25, v/v) e separados na coluna Chiralcel® OD-R com fase móvel constituída por acetonitrila:água (25:75, v/v), contendo 0,2% de ácido fórmico. Os enantiômeros da CPA foram analisados por LC-MS-MS, sendo que os íons protonados e seus respectivos íons-produtos foram monitorados nas transições 261>141 para a CPA e 189>104 para o padrão interno (antipirina). A recuperação foi maior que 95% para ambos os enantiômeros da CPA e o limite de quantificação foi de 2,5 ng/mL de plasma para cada enantiômero. Os coeficientes de variação e os erros relativos obtidos na avaliação da precisão e exatidão intra e inter-ensaios foram menores que 10%. Os parâmetros farmacocinéticos foram calculados empregando o programa WinNonlin e utilizando modelo monocompartimental e cinética de primeira ordem. Os parâmetros farmacocinéticos com razões enantioméricas diferentes da unidade foram avaliados com base no teste de Wilcoxon (P0,05). A disposição cinética da CPA é enantiosseletiva em pacientes com câncer de mama, com acúmulo plasmático do enantiômero (S)-(-)-CPA (AUC 195,00 vs 174,80 g.h/mL) em função do clearance preferencial do enantiômero (R)- (+)-CPA (5,13 vs 5,99 L/h). Os clearances de ambos os enantiômeros da ciclofosfamida não diferem em função dos genótipos CYP2B6, CYP2C9 e CYP2C19 e da atividade in vivo do CYP3A avaliada pelo clearance do midazolam. / Cyclophosphamide (CPA) is an alkylating oxazaphosphorine agent widely used in the treatment of multiple forms of cancer and autoimmunes disesases in adults and children. CPA is used as a racemic mixture, although preclinical data have demonstrated differences in the efficacy and toxicity of its enantiomers, with the (S)-(- )-CPA exhibiting a higher therapeutic index. The present study investigated the enantioselectivity and influence of CYP2B6, CYP2C9, CYP2C19 and CYP3A on the kinetic disposition of cyclophosphamide (CPA) in patients with breast cancer. Fifteen patients previously submitted to removal of the tumor and treated with racemic CPA (900-1000 mg) and epirubicin were included in the study. The in vivo activity of CYP3A was evaluated using midazolam as a marker drug. Serial blood samples were collected up to 24 h after administration of the first cycle of CPA. The CPA enantiomers were extracted from plasma using a mixture of ethyl acetate:chloroform (75:25, v/v) and separated on a Chiralcel® OD-R column, with the mobile phase consisting of acetonitrile:water (25:75, v/v) and 0.2% formic acid. The CPA enantiomers were analyzed by LC-MS-MS, and the protonated ions and their respective ion products were monitored at transitions of 261>141 for CPA and of 189>104 for the internal standard (antipyrine). Recovery was higher than 95% for both CPA enantiomers and the quantification limit was 2.5 ng/mL plasma for each enantiomer. The coefficients of variation and relative errors obtained for the evaluation of the intra- and interassay precision and accuracy were less than 10%. The pharmacokinetic parameters were calculated with the WinNonlin program using a monocompartmental model and first-order kinetics. The pharmacokinetic parameters presenting enantiomer ratios different from one were evaluated using the Wilcoxon test (P0.05). The kinetic disposition of CPA was enantioselective in patients with breast cancer, with plasma accumulation of the (S)-(-)-CPA enantiomer (AUC 195.00 vs 174.80 g.h/mL) due to the preferential clearance of the (R)-(+)-CPA enantiomer (5.13 vs 5.99 L/h). Clearances of both CPA enantiomers did not differ between the CYP2B6, CYP2C9 and CYP2C19 genotypes or as a function of in vivo activity of CYP3A evaluated by the midazolam clearance.

O bussulfano (BU) e a ciclofosfamida (CY) são fármacos utilizados nos regimes de condicionamento pré-transplante de células tronco hematopoéticas (TCTH). O BU apresenta estreito intervalo terapêutico, alta variabilidade interindividual na farmacocinética e graves reações adversas. O presente estudo avaliou a administração de uma dose teste de BU oral para a individualização do regime de dosagem, definiu o melhor tempo de coletas esparsas para o monitoramento terapêutico do BU e validou um algoritmo baseado em modelo compartimental e farmacocinética populacional em pacientes submetidos ao TCTH. Trinta pacientes portadores de doenças hematológicas tiveram o tratamento com BU individualizado baseado em uma dose teste oral de 0,25 mg/Kg de BU. As doses foram baseadas no clearance aparente calculado na dose teste e as concentrações plasmáticas foram confirmadas após a quinta dose de tratamento. Os coeficientes de variação obtidos entre os valores de clearance avaliados na dose teste e na quinta dose foram <= 30%, exceto para 5 pacientes. Não foram observadas associação entre os parâmetros farmacocinéticos do BU e a evolução clínica dos pacientes. Com a finalidade de estimar os melhores tempos de coletas ideais para aplicação no monitoramento terapêutico do BU, um modelo farmacocinética populacional foi utilizado e um esquema de coletas esparsas com não mais de cinco amostras por paciente (t = 0,5; 2,25; 3; 4 e 5 horas após a dose) demonstrou ser suficiente para a caracterização da farmacocinética do BU. O presente estudo avaliou também a farmacocinética dos enantiômeros da ciclofosfamida (CY) e seus metabólitos (4-hidroxiciclofosfamida e carboxiciclofosfamida), em pacientes submetidos ao TCTH. Foram investigados pacientes portadores de esclerose sistêmica (n=10) e esclerose múltipla (n=10) em regime de condicionamento com 50 mg CY /kg/dia durante 4 dias. Dois ensaios específicos baseados na análise por LC-MS/MS foram desenvolvidos e validados para analisar os enantiômeros da CY e seus metabólito 4- hidroxiciclofosfamida (HCY) e carboxiciclofosfamida (CEPM) em plasma humano. Os parâmetros farmacocinéticos dos enantiômeros da CY e seus metabólitos foram calculados empregando o programa WinNonlin e mostraram acúmulo plasmático dos enantiômeros (S)- (-)-CY (AUC 215, 0 vs 186,2 ?g.h/mL para os paciente EM e 219,1 vs 179,2 ?g.h/mL para os paciente ES) e HCY (1), provavelmente o (R)-(+)-HCY (AUC 5,6 vs 3,7 ?g.h/mL para os paciente EM e 6,3 vs 5,6 ?g.h/mL para os paciente ES) em ambos os grupos de pacientes investigados. A disposição cinética do metabólito CEPM não mostrou enantiosseletividade. A farmacocinética da CY e seus metabólitos HCY e CEPM não diferiu entre os pacientes portadores de EM ou ES. Não foi observado correlação entre o metabolismo da CY e os genótipos avaliados (CYP2B6 e CYP2C9). Não foi possível correlacionar os valores de AUC0-? dos enantiômeros da CY e/ou dos metabólitos HCY e CEPM com a toxicidade ao uso de CY em virtude do pequeno número de pacientes investigados. / Busulfan (BU) and cyclophosphamide (CY) are drugs used during conditioning treatment for hematopoietic stem cell transplantation (HSCT). BU presents narrow therapeutic window, high interindividual variability in the pharmacokinetics and serious adverse effects. The present study evaluated the administration of a BU test dose for dose individualization, set the best sparse sampling scheme for BU therapeutic monitoring and validated an algorithm based on compartmental and population pharmacokinetics model in HSCT patients. Thirty patients received BU individualized treatment based on an oral test dose of 0.25 mg/kg. Doses were based on apparent clearance calculated with BU test dose. Plasma concentrations were confirmed after the fifth treatment dose. Coefficients of variation obtained between the clearance values evaluated in the test dose and fifth dose were <= 30%, except for 5 patients. No association between BU pharmacokinetic parameters and clinical outcome was observed. To estimate the ideal sampling scheme for BU therapeutic drug monitoring, a population pharmacokinetic model was used. Sparse sampling scheme with no more than five samples per patient (t = 0.5, 2.25, 3, 4 and 5 hours after dosing) was shown to be sufficient to characterize the BU pharmacokinetics. This study also evaluated the pharmacokinetics of the cyclophosphamide enantiomers and its metabolites (4-hydroxycyclophosphamide and carboxicyclophosphamide) in HSCT patients. We investigated patients with systemic sclerosis (SS) (n = 10) and multiple sclerosis (MS) (n = 10) in the conditioning regimen with CY 50 mg/kg/day for 4 days. Two specific tests based on LC-MS/MS analysis were developed and validated to analyze the CY enantiomers and its metabolite 4-hydroxycyclophosphamide (HCY) and carboxicyclophosphamide (CEPM) in human plasma. Pharmacokinetics of CY enantiomers and its metabolites were calculated using WinNonlin software and showed plasma accumulation of (S)-(-)-CY (AUC 215.0 vs 186.2 ?g.h/mL for the MS patient and 219.1 vs. 179.2 ?g.h/mL for the SS patient) and HCY (1), probably the (R)-(+)-HCY (AUC 5.6 vs 3.7 ?g.h /mL for MS patients and 6.3 vs 5.6 ?g.h/ mL for the SS patients) enantiomers in both groups of investigated patients. CEPM kinetics disposition showed lack of enantioselectivity. The pharmacokinetics of CY and its metabolites (HCY and CEPM) did not differ between patients with MS or SS. There was no correlation between the metabolism of CY, CYP2B6 and CYP2C9 genotypes. It was not possible to correlate the AUC0-? of CY enantiomers and/or its metabolites (HCY and CEPM) with CY toxicity due to the small number of patients investigated.