Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2013-04-05T19:03:40Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_CiclosporinaAritemaNodoso.pdf: 47984678 bytes, checksum: 048af0e46d97abc8c46a603901903cd2 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva(arosa@ufpa.br) on 2013-04-08T14:40:18Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_CiclosporinaAritemaNodoso.pdf: 47984678 bytes, checksum: 048af0e46d97abc8c46a603901903cd2 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-04-08T14:40:18Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_CiclosporinaAritemaNodoso.pdf: 47984678 bytes, checksum: 048af0e46d97abc8c46a603901903cd2 (MD5) Previous issue date: 2003 / O ENH é séria intercorrência aguda ou subaguda que acomete pacientes das formas dimorfa-virchowiana e virchowiana da classificação de Ridley e Jopling. Neste estudo, foi utilizada uma droga imunorreguladora, a ciclosporina A, com o propósito de avaliar a eficácia nesta reação, cujo tratamento depende de medicamentos como a talidomida, que tem contra-indicações formais e corticóides, que provocam dependência, entre outros danos. Foram selecionados dez doentes de ENH com sintomas sistêmicos; todos haviam passado por vários episódios desta reação e faziam uso contínuo e prolongado de prednisona em doses elevadas e ocasionalmente, de talidomida. Os pacientes tomaram ciclosporina A em doses de 3-5 mg/kg/dia durante um período de 90 dias. Realizaram exames laboratoriais nos dias zero, 150 e 600 de uso da ciclosporina A e também o histopatológico das lesões de ENH (antes do tratamento e com 60 dias). Os exames laboratoriais solicitados foram: hemograma e leucograma; TGO; TGP: uréia e creatinina. Detectou-se leucocitose em graus entre moderado e elevado em 70% dos casos, mas evoluiu para leucocitose leve até o término do acompanhamento na mesma percentagem dos doentes. O exame bioquímico não mostrou alterações significantes, com exceção da elevação da TGO em um caso, da TGP em outro, além de dois pacientes que mostraram aumento da uréia e creatinina, mas que posteriormente, normalizaram sem precisar de medidas adicionais. Os achados histológicos encontrados no primeiro exame foram representados em 40% dos doentes, por dermatite granulomatosa e em 30%, por dermatite nodular. Na segunda análise, houve mudança para dermatite perivascular superficial e profunda em 50% dos casos e para paniculite septal em 20%; isto denota melhora histológica compatível com a melhora dos sintomas verificada nos primeiros quinze dias de terapêutica. A ação da ciclosporina A se revelou benéfica, principalmente na sintomatologia sistêmica, com exceção dos casos que se acompanhavam de neurite; desta forma, a ciclosporina A pode ser uma opção para a melhoria clínica das reações hansênicas tipo 11. / The ENL is a severe and acute interference that attacks patients of lepromatous and borderline lepromatous leprosy forms from Ridley and Jopling classification. In this study, the immunomodulator drug cyclosporine A was used to evaluate its effectiveness in ENL reaction, whose treatment is based on the use of drugs as thalidomide that has several restrictions and that induce dependence among other damages. Ten ENL patients with systemic manifestations and more than two reactions episodes were chosen. These patients had taken high doses of corticosteroids during years and eight of they, took thalidomide more than three times too. All patients were followed clinically for 90 days and took 3-5 mg/kg/daily, besides they accomplish laboratory exams in the zero day, 15 th and 60 th of use cyclosporine A and made also hystopathologic exams (before and 60 days after cyclosporine A). It was requesting the next laboratory exams: blood-count; leuko-count; TGO; TGP; urea and creatinine. Among laboratory exams changes, there was leucocytosis in 70% of patients that was reduced until the end of follow up in the same percentage. Biochemical exams didn't show significance disturb, except for the increase of TGO in one patient and of TGP in another, besides two cases who showed increase of urea and creatinine, but later on, they were better without any additional assistance. In 40 % of patients, the first's hystopathologic exams, alterations were represented for granulomatosis dermatitis and in 30% of sick ones, for nodular dermatitis. In second exams, there was change to superficial and deep infiltration in the blood vessel walls, in 50 % of cases; septal panniculitis in 20 %. It denotes histological improvement verified in the first fifteen days of therapy. The cyclosporine A action was specially useful in systemic symptoms, except in the cases who had neuritis. Then, cyclosporine A can be an alternative for clinical improvement to leprosy reaction type II.

Foi realizado um estudo prospectivo em dez crianças (média de idade de apresentação da doença, 3.0 ± 1.6 anos) usando ciclosporina (CSA) uma microemulsão utilizada no tratamento da síndrome nefrótica idiopática (SNI) - com função renal normal avaliada pelo clearance de creatinina estimado pela estatura, que apresentavam o C0 (nível do vale) entre 50 e 150 ng/ml e que encontraram remissão completa da doença com a CSA. O objetivo foi comparar os parâmetros farmacocinéticos da CSA entre crianças com SNI em remissão ou descompensadas da doença. O perfil farmacocinético da CSA foi avaliado através da área sob a curva de 12 horas (AUC012) utilizando sete pontos. Esse procedimento foi realizado no mesmo paciente durante a remissão e a descompensação da doença com a mesma dose de CSA em mg/kg. A AUC012 foi calculada através de régua trapezoidal. Todos os pontos da curva e a AUC04 simplificada foram comparados com a AUC012. Não foi encontrada diferença significativa em quaisquer pontos da curva nos dois estados da doença, nem mesmo quando normalizados pela dose em mg/kg. Nosso estudo mostrou que a AUC04 foi o principal parâmetro em ambos os estados da doença (remissão e recidiva) quando comparado com a AUC012 (r=0.95 na remissão e r=0.93 na recidiva), e o segundo melhor parâmetro foi o C2 (r=0.86 na remissão e r=0.80 na recidiva). Mais estudos controlados são necessários para reproduzir melhor estes achados e confirmar nossa proposta. Além disso, o C2 necessita ser determinado em crianças com SNI para evitar efeitos adversos enquanto promove eficiência / We report a prospective study in ten children (mean age at presentation, 3.0 ± 1.6 years) using Cyclosporin(CSA) - a microemulsion to treat Idiopathic Nephrotic Syndrome (INS), with normal renal function evaluated by creatinine clearance estimated by stature, who presented C0 (trough level) between 50 and 150 ng/ml and achieved complete remission with CSA. The objective is to compare the pharmacokinetic parameters of CSA between nephrotic children on remission and relapse of the nephrotic state. The pharmacokinetic profile of CSA was evaluated with the 12-hour area under the time-concentration curve (AUC012) using seven time sample points. This procedure was done in the same patient during remission and relapse with the same dose of CSA (mg/kg). The AUC012 was calculated by trapezoidal rule. All points of the curve and the resumed AUC04 were compared with AUC012. We detected no significant differences at any points of the curve during remission and relapse, even when data were normalized by dose (mg/kg). Our study has shown that AUC04 was the main point on both states of the disease, remission and relapse, when compared to AUC012 (r=0.95 on remission and r=0.93 on relapse), and the second parameter found was C2 (r=0.86 on remission and r=0.80 on relapse). More controlled studies are needed to reproduce the findings and confirm this proposition. The target C2 concentration needs to be determined for INS in children to avoid adverse effects while promoting efficacy

INTRODUCCIÓN: El tratamiento de la enfermedad inflamatoria intestinal se ha basado en el uso de aminosalicilatos corticoides e inmunosupresores, que ayudan a controlar los brotes de la enfermedad, aunque no consiguen su curación. El bloqueo de las moléculas de adhesión endotelial, que permiten el reclutamiento de leucocitos desde el lecho vascular hacia el área inflamada, podría ser una diana terapéutica útil en esta enfermedad.OBJETIVOS: 1. Determinar el valor de las moléculas de adhesión endotelial como nuevas dianas terapéuticas en la enfermedad inflamatoria del intestino. 2. Evaluar el posible valor terapéutico de su modulación con anticuerpos monoclonales bloqueantes de las moléculas de adhesión endotelial, péptidos trébol y ciclosporina A.MATERIAL Y MÉTODOS: El modelo experimental utilizado ha sido el de la colitis inducida por DSS en el ratón, que remeda la colitis ulcerosa en humanos. Para cuantificar la expresión in vivo de las moléculas de adhesión endotelial se ha recurrido a la técnica del doble anticuerpo marcado y para evaluar su expresión in vitro. a los cultivos primarios de células endoteliales de vena de cordón umbilical humano. Asimismo, para analizar las interacciones leucocito-endotelio en las vénulas del colon se ha utilizado la microscopía intravital de fluorescencia.RESULTADOS Y CONCLUSIONES: 1. En la colitis experimental inducida por DSS existe un aumento en la expresión de las moléculas de adhesión endotelial ICAM-1, VCAM-1 y MAdCAM-1 y de las interacciones leucocito-endotelio (roadamiento y adhesión) en las vénulas postcapilares del colon. 2. VCAM-1 es la principal molécula responsable del incremento de la adhesión leucocitaria al endotelio y juega un papel fundamental en la fisiopatología de la enfermedad inflamatoria intestinal experimental. 3. El inmunobloqueo sostenido de VCAM-1 tiene efecto terapéutico ya que mejora el curso de la colitis. En cambio, la inmunoneutralización de ICAM-1 o de MAdCAM-1 no altera el curso clínico en este modelo experimental. 4. El aumento de la expresión de las moléculas de adhesión endotelial VCAM 1 y MAdCAM-1 en el colon es proporcional a la gravedad de la colitis inducida. 5. El péptido trébol TFF2 es útil en el tratamiento de la colitis experimental, siendo su administración tópica superior a la sistémica 6 TFF2 produce de forma indirecta, una reducción en la expresión de las moléculas de adhesión endotelial y en el reclutamiento leucocitario que contribuye a su efecto beneficioso. 7. La ciclosporina A mejora la colitis experimental inducida por DSS en el ratón. 8. El efecto terapéutico de la ciclosporina A se debe, en parte, a que reduce la producción de citocinas proinflamatorias y la expresión de las moléculas de adhesión del endotelio, actuando directamente sobre la célula endotelial, lo que decrece el reclutamiento leucocitario hacia el intestino inflamado.SUMARIO: 1- VCAM-1 es la molécula de adhesión endotelial más importante en este modelo experimental de colitis que remeda la colitis ulcerosa en humanos- 2 El inmunobloqueo de VCAM-1, en contraste con el de ICAM-1 o MAdCAM-1, podría atenuar la respuesta inflamatoria sin alterar los mecanismos inmunes fisiológicos ya que esta molécula no está implicada en la recirculación fisiológica de los leucocitos. 3. Los trabajos que componen esta Tesis Doctoral constituyen la base racional para investigar el efecto de los anticuerpos anti-VCAM-1 en los pacientes con colitis ulcerosa. / INTRODUCTION: Treatment of inflammatory bowel disease is currently based on the use of aminosalicylates, corticosteroids and immunomodulators, which can control flares of disease but are not curative. Blockade of endothelial adhesion molecules involved in the recruitment of leukocytes from the vascular bed to the inflammatory site might be a useful therapeutic strategy in this disease.AIM: To assess the usefulness of modulation of endothelial adhesion molecules with monoclonal antibodies, trefoil peptides (TFF2), and cyclosporin A (CsA) as a therapeutic strategy for experimental colitis. MATERIAL AND METHODS: Dextran sulphate sodium (DSS)-induced colitis, a murine model that mimics human ulcerative colitis, was used. Cell adhesion molecule expression was measured by the dual radiolabeled antibody technique. Leukocyte-endothelial cell interactions were determined in colonic venules by fluorescence intravital microscopy.RESULTS AND CONCLUSIONS: 1. VCAM-1 plays a central role in leukocyte recruitment in colitis since blockade of this adhesion molecule has a higher therapeutic effect than immunoneutralization of ICAM-1 or MAdCAM-1 in this experimental model.2. TFF2 is useful in the treatment of colitis, and topical administration is superior to the systemic route. Indirect reduction in adhesion molecule expression and leukocyte recruitment into the inflamed intestine contributes to the beneficial effect of TFF2 treatment.3. CsA A ameliorates DSS-induced colitis in mice. Reduced adhesion molecule expression resulting from diminished pro-inflammatory cytokine production and from a direct effect of CsA in endothelial cells decreases leukocyte recruitment into the inflamed intestine, contributing to this protective effect. SUMMARY: 1. VCAM-1 is the most important endothelial adhesion molecule in an experimental model of colitis that mimics human ulcerative colitis. 2. VCAM-1 immunoblockade, in contrast to ICAM-1 or MAdCAM-1, can attenuate the inflammatory response without altering the physiological immune mechanisms since this molecule is not involved in the physiological recirculation of leukocytes. 3. The results of this Doctoral Thesis constitute the rationale to investigate the effects of anti-VCAM-1 antibodies in patients with ulcerative colitis.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / The disabling effects of central nervous system (CNS) tumors are out of proportion to their low incidence. Theyâre second only to stroke as neurologic mortality causes. Brain metastases are the commonest intracranial tumors in adults, almost 10 times more frequent than primary brain tumors. Their diagnosis and treatment have met significant advances, although much more research about drug resistance and new treatment modalities are needed. New and even better brain tumor animal models will help to evaluate novel drug regimens and adjuvant therapies for CNS neoplasms. In the present work, the author presents a simple and easily reproducible brain tumor model utilizing the tumor cell line W256 transplanted to Wistar rats. They tested a drug widely used for palliative treatment of tumoral brain edema (dexamethasone), for survival impact. They also have tested the effects of a drug newly proposed as multidrug resistance reversal agent (cyclosporin â CS). Wistar albino rats had stereotaxic intracranial tumor inoculation after the surgical installation of a permanent canulla on the area of interest (right subfrontal caudate). The brain tumor model, as a model of metastatic brain disease, was successful, with reproducible tumor growth (95%), low incidence of extracranial tumor implantation (21% local, no distant metastasis) and few evidence of surgical site infection (21%). The median survival of the animals was 12.5 days (control), 13 days (CS vehicle treated), 11 days (CS treated), 9.5 and 9 days (dexamethasone 0.3 and 3.0 mg/kg/day). These differences were not significant, although the survival rates on the 12th day post-inoculation have showed a significant survival decrease for the case of dexamethasone 3,0 mg/kg/day (p < 0.05), but not for CS treatment (Fischerâs Exact Test). The estimated tumor volume was 17.08  6.7 mm3 (control) and 12.61  3.6 mm3 (CS treatment, not significant, Studentâs t-test). The tumor volume in the 9th day post-inoculation was estimated in 67,25  19,8 mm3. The doubling time was 24.25 h. This model behaved as an undifferentiated tumor, with local invasiveness features compared with that of primary brain tumors. It fits well, in this way, for the study of tumor cell migration on CNS parenchyma. Phenomena like neuronal degeneration, neuron cell edema and death, and gliosis, as well as perivascular cell infiltrates, were seen frequently. One could find, also, neoangiogenesis, satellite tumor growth, and tumor cell migration in normal brain parenchyma. Besides heavy parenchymatous infiltration, it was also disclosed markedly tumor cell migration along white matter tracts, such as callosal fibers and infiltration in the Virchow-Robins perivascular space. The model presents as a dual brain tumor and leptomeningeal carcinomatosis model. It could be used for the study and treatment test in the scenario of these two pathologies. The intracerebral tumor growth induced peripheral blood neutrophil count elevation (ANOVA, p < 0.01), higher chance for neutrophilia (Fischerâs Exact Test, p < 0.01), higher chance for lymphopenia (Fischerâs Exact Test, p < 0.01) and brain weight increase (Studentâs t-test, p < 0.001) comparing to control. There was no significant change in any of the other hematologic, biochemical and biological parameters tested. CS treatment did not alter any of the tests, as compared to non-treated brain tumor animals. The only exception was the mean animal weight on the first week post-inoculation (ANOVA, p < 0.05). CS, in this way, was responsible for an early cachexia in the brain tumor inoculated animals. CS treatment of brain tumor animals did show non-significant effects indicating a volume (26%) and weight tumor decrease, and tumor infiltrating neutrophil increase (odds ratio - OR = 5.6). This indicates the necessity to further study morphologically and functionally the local inflammation in brain tumor inoculated animals, as well the effects of CS administration. In conclusion, the W256 intracerebral tumor model is simple, easily performed, reproducible and of great potential utility. In this model, tumor inoculation can lead to hematologic and biologic modifications in the experimental animals. CS could apparently lead to early tumor caquexia in this tumor model. However, CS treatment did not modify the survival chance of the brain tumor animals, in sharp contrast to dexamethasone 3.0mg/kg/day, a much-used drug in the treatment of brain tumors, which decreased the animal survival. / Os importantes efeitos incapacitantes dos tumores do sistema nervoso central (SNC) sÃo desproporcionais a sua baixa incidÃncia. Mesmo assim, entre as doenÃas neurolÃgicas, ficam atrÃs apenas dos acidentes vasculares do SNC como causa de morte. MetÃstases cerebrais constituem os tumores intracranianos mais comuns do adulto, ocorrendo atà 10 vezes mais freqÃentemente que tumores primÃrios. AvanÃos significativos ocorreram em seu diagnÃstico e tratamento, embora mais pesquisa sobre os fenÃmenos que diminuem o efeito de drogas em metÃstases cerebrais e tratamentos eficazes para estas patologias sejam cada vez mais necessÃrios. O desenvolvimento de melhores modelos animais de tumores do SNC serà necessÃrio para a avaliaÃÃo in vivo de novas formas de quimioterapia (QT) e terapia adjuvante para tumores cerebrais. No presente trabalho, o autor objetivou desenvolver um modelo de tumor cerebral simples e de fÃcil reproduÃÃo utilizando a linhagem W256, alÃm de testar o efeito na sobrevida animal de uma droga largamente usada para o tratamento de efeitos secundÃrios a edema cerebral (dexametasona). O autor tambÃm testou uma droga envolvida numa nova proposta de reversÃo de multirresistÃncia a drogas anti-neoplÃsicas em tumores cerebrais (ciclosporina â CS). Ratos albinos (Wistar) tiveram o tumor inoculado atravÃs de estereotaxia, apÃs a instalaÃÃo cirÃrgica de uma cÃnula no ponto escolhido (caudato subfrontal direito). O modelo de tumor implantado no cÃrebro de ratos, simulando uma metÃstase cerebral, mostrou-se bem sucedido e reprodutÃvel (95% de crescimento tumoral), com baixa incidÃncia de disseminaÃÃo tumoral extracraniana local (21%), baixa evidÃncia de infecÃÃo local (21%), ausÃncia de metÃstases à distÃncia e ausÃncia de sinais de infecÃÃo sistÃmica. Os animais sobreviveram uma mediana de 12,5 dias (grupo controle), 13 dias (tratados com veÃculo da CS), 11 dias (tratados com CS), 9,5 e 9 dias (dexametasona 0,3 e 3,0 mg/kg/dia, respectivamente). As diferenÃas entre estas medianas nÃo foram significantes (teste de Kruskal-Wallis), embora as diferenÃas entre as taxas de sobrevida no 12o dia apÃs a inoculaÃÃo tenham mostrado reduÃÃo significante no grupo que recebeu dexametasona 3,0 mg/kg/dia (p < 0,05), mas nÃo no grupo tratado com CS (teste de Fischer). O volume tumoral estimado (VTE) no sÃtimo dia pÃs-inoculaÃÃo (7DPI) foi de 17,08  6,7 mm3 no controle e 12,61 3,6 mm3 apÃs tratamento com CS, sem diferenÃa significante (teste t-Student). O VTE no 9DPI de animais do grupo Tumor foi de 67,25  19,8 mm3. O tempo de duplicaÃÃo foi de 24,25 h. O modelo comportou-se como um tumor de caracterÃsticas indiferenciadas, apresentando invasividade local comparada à de tumores primÃrios do SNC, prestando-se ao estudo da migraÃÃo de cÃlulas tumorais no SNC. Observaram-se fenÃmenos como degeneraÃÃo neuronal hidrÃpica, edema celular neuronal, sinais de morte celular neuronal e gliose, alÃm da presenÃa de infiltrados celulares tumorais e inflamatÃrios perivasculares. Observaram-se, tambÃm, neoformaÃÃo vascular, formaÃÃo de nÃdulos tumorais satÃlites ao tumor principal e migraÃÃo celular tumoral no parÃnquima cerebral normal. Observou-se, alÃm da infiltraÃÃo parenquimatosa, marcante migraÃÃo celular tumoral ao longo de tratos de substÃncia branca (corpo caloso) e ao longo dos espaÃos perivasculares de Virchow-Robins. O modelo apresenta-se como um misto de tumor cerebral intraparenquimatoso e carcinomatose leptomenÃngea, podendo ser utilizado para estudar o comportamento e testar formas de tratamento para ambas as patologias. O crescimento tumoral intracerebral induziu aumento do nÃmero de neutrÃfilos no sangue perifÃrico (ANOVA, p < 0,01), maior chance de apresentar neutrofilia (teste de Fischer, p < 0,01), maior chance de apresentar linfopenia (teste de Fischer, p < 0,01) e aumento do peso dos cÃrebros dos animais experimentais (teste t-Student, p < 0,001) em relaÃÃo ao controle. Nenhum dos outros valores hematolÃgicos, bioquÃmicos e biolÃgicos foi alterado de maneira significante. O tratamento de animais inoculados com tumor com a CS, nÃo alterou nenhuma das medidas hematolÃgicas, bioquÃmicas ou biolÃgicas em relaÃÃo aos animais inoculados com tumor e nÃo tratados, exceto o peso dos animais na primeira semana apÃs inoculaÃÃo tumoral (ANOVA, p < 0,05). A CS, dessa forma, induziu significantemente uma caquexia precoce nos animais inoculados com tumor cerebral. O tratamento com CS de animais inoculados com tumor mostrou tendÃncias nÃo significantes a diminuir volume (26%) e massa (7%) tumorais e aumentar nÃmero de neutrÃfilos infiltrantes de tumor (razÃo de chance - RC = 5,6) e necrose tumoral, indicando a necessidade de posteriores estudos para caracterizar morfolÃgica e funcionalmente a resposta inflamatÃria local em animais inoculados com tumor e a influÃncia da CS neste processo, alÃm do efeito da CS na angiogÃnese tumoral. Concluindo, o modelo de W256 intracerebral mostrou-se simples, de fÃcil execuÃÃo, reprodutÃvel e Ãtil. Neste modelo, a inoculaÃÃo tumoral induz modificaÃÃes hematolÃgicas e biolÃgicas nos animais. A CS pareceu exarcebar a caquexia tumoral neste modelo. A CS, todavia, nÃo alterou a chance de sobrevida de animais inoculados com tumor cerebral, ao contrÃrio da dexametasona 3,0 mg/kg/dia, que reduziu esta chance. A CS, assim, parece ser mais segura neste modelo tumoral que uma droga largamente utilizada para tratamento de pacientes com metÃstase cerebral.

O tratamento de pacientes com doenças inflamatórias oculares crônicas frequentemente implica no uso prolongado de drogas anti-inflamatórias sistêmicas como, corticosteroides e outros imunossupressores, podendo acarretar efeitos colaterais importantes. O uso local destas drogas pode contribuir para aumentar seus efeitos desejáveis e reduzir os efeitos colaterais. Implantes intraoculares biodegradáveis são capazes de disponibilizar o fármaco diretamente na cavidade vítrea em doses terapêuticas por período prolongado. O copolímero do ácido lático e glicólico (PLGA) é um clássico exemplo entre os polímeros sintéticos biodegradáveis aplicados em sistemas de liberação de fármacos devido à sua biocompatibilidade e ausência de toxicidade em testes in vivo. A ciclosporina A (CsA) é um imunossupressor largamente usado na clínica médica, e também tem sido empregada no tratamento de várias doenças inflamatórias intraoculares. O objetivo deste estudo foi avaliar a farmacocinética vítrea da CsA, quando aplicada por meio de implante biodegradável de PLGA intravítreo na concentração de 350 µg em olhos de coelhos, assim como avaliar a ocorrência de toxicidade retiniana causada pela presença intraocular do sistema de liberação de fármacos por meio de eletrorretinografia (ERG) e histopatologia. Dos sessenta coelhos que foram utilizados neste estudo, 38 receberam o implante intravítreo de PLGA contendo CsA e 22 somente os veículos. Somente o olho direito dos coelhos foi analisado na pesquisa. O estudo teve duração de oito semanas. Quatro coelhos do grupo CsA e dois do grupo controle foram sacrificados semanalmente para a coleta do vítreo e posterior estudo farmacocinético. Quatro animais de cada grupo foram escolhidos para terem a pressão intraocular aferida semanalmente. Seis coelhos foram submetidos a ERG no início e ao final do estudo, sendo então sacrificados, e os olhos processados para estudos histológicos da retina. O período inferido de permanência da CsA na cavidade vítrea foi de 17 semanas. Nos dois grupos, com e sem CsA, não foram observadas alterações histológicas na retina, entretanto houve importante redução da onda b nas fases escotópicas da ERG no grupo CsA, indicando toxicidade na via dos bastonetes após as oito semanas de seguimento. Em resumo, estes resultados mostraram que a CsA aplicada por meio de implantes oculares de PLGA na dose de 350 µg não causa alterações histológicas da retina, mas provoca um padrão exclusivo de diminuição da onda b. Em estudos futuros, seria interessante avaliar os efeitos de implantes contendo concentrações inferiores a 350 µg de CsA, e também, veículos que permitam que sua liberação seja mais lenta, evitando-se, assim, a toxicidade observada nos ERGs e confirmar sua aplicabilidade clínica como alternativa interessante para o tratamento de doenças oculares inflamatórias crônicas. / Treatment of patients with chronic inflammatory ocular diseases often involves the use of systemic anti-inflammatory drugs such as corticosteroids and other immunosuppressive agents for a long period of time, which may cause significant systemic side effects. Intraocular use of these drugs may help to improve their local beneficial effects and reduce systemic adverse effects. Biodegradable intraocular implants are able to deliver drugs directly into the vitreous cavity in therapeutic doses for an extended period of time. Poly-lactic-co-glycolic acid (PLGA) is a good example of synthetic biodegradable polymers used in ocular drug delivery systems due to its biocompatibility and absence of toxicity. Cyclosporine A (CsA) is a largely used immunossupressor, and it has also been employed for treatment of various intraocular inflammatory diseases. The objective of this work was to evaluate the pharmacokinetics of CsA, when applied in biodegradable PLGA intravitreal implants in rabbit eye and its retina toxicity by electroretinography and histopathology. Right eyes of sixty rabbits were used on this study, 38 received the PLGA implant containing 350 µg of CsA, and 22 the implant without the drug and were followed during 8 weeks. Four animals of CsA group and 2 of control group were sacrificed weekly to have their vitreous samples collected for subsequent pharmacokinetic study. Four animals from each group were chosen to have intraocular pressure measured weekly. Six animals of each group underwent electroretinography tests at baseline and at the end of the study. Then they were sacrificed and had their eyes processed for histological studies of the retina. It was hypothetically calculated that CsA would take 17 weeks to be completely delivery by this system. Histologically the retina did not show alterations in both groups, but there was a significant reduction in the b wave of the scotopic ERG phases in the CsA group indicating toxicity of the rods pathway after 8 weeks of follow-up. In summary, PLGA implants with 350 µg of CsA does not cause retinal histological changes, but decreases b wave amplitude. In future studies it would be interesting to test lower concentrations of CsA using this delivery system to decrease possible toxicity and to guarantee its clinical applicability.

A Ciclosporina A (CsA) é o medicamento de escolha utilizado no controle da rejeição de órgãos em pacientes transplantados. Efeitos adversos associados ao fármaco, como alterações ósseas e o aumento gengival são fatores de risco para a doença periodontal. O objetivo do estudo foi avaliar o efeito da indução de doença periodontal no tecido ósseo, tecido epitelial e tecido conjuntivo de ratos previamente tratados com a CsA. Foram utilizados quarenta ratos Wistar, com 12 semanas de vida, divididos em quatro grupos (n=10): grupo Controle (GC); grupo Ciclosporina A (GCsA), administração de 10mg/kg de CsA durante sessenta dias a partir do início do experimento; grupo Ciclosporina A Ligadura (GCsAL), inserção da ligadura após trinta dias do início do experimento e administração de 10mg/Kg de CsA desde o início do experimento, durante sessenta dias; grupo Ligadura (GL), inserção da ligadura após trinta dias do início do experimento. Os animais foram sacrificados após sessenta dias por meio de perfusão cardíaca para a realização da análise histológica e histomorfométrica do tecido gengival e tecido ósseo, análise radiográfica do suporte ósseo periodontal e da densidade radiográfica e análise bioquímica da Fosfatase Alcalina. Os resultados foram submetidos à análise de variância (ANOVA, Tukey) a 5% e ao teste não paramétrico de Kruskal- Wallis. Os valores médios para GC (60.5 2.22%) e GCsAL (58.1 2.24%) foram equivalentes entre si para o suporte ósseo periodontal e diferentes de GCsA (55.0 4.44%) e GL (54.8 3.11%) (p=0.0007). Os valores médios da densidade radiográfica não apresentaram diferença estatística significativa (p=0.1776). Em relação à fosfatase alcalina, novamente não foi observada diferença significativa entre os grupos (p=0.2806). Os valores médios de células TRAP+ por grupo experimental, não apresentaram diferença estatística significativa (p=0.3995). Os valores médios para GC (0.29 0.03mm2) e GCsA (0.30 0.02mm2) foram equivalentes entre si para a área do ligamento periodontal e diferentes de GCsAL (0.43 0.17mm2) e GL (0.41 0.11mm2) (p=0.3994). Na área total do tecido gengival, os valores médios para GCsA (0.088 0.033mm2) e GL (0.101 0.034mm2) foram equivalentes entre si e diferentes de GC (0.053 0.020mm2) e GCsAL (0.146 0.047mm2) (p=0.000001). Na proporção área do conjuntivo e área total, os valores médios para GC (28.60 8.64%) foi equivalente ao GCsA (32.72 14.13%) e diferente do GCsAL (38.50 10.98%) e GL (37.70 7.49%) (p=0.0093). Em relação à proporção área do epitélio e área total, os valores médios para GC (71.39 8.64%) foi equivalente ao GCsA (67.27 14.13%) e diferente do GCsAL (61.49 10.98%) e GL (63.37 7.44%) (p=0.0142). Na proporção área do epitélio e área do conjuntivo, os valores médios para GC (2.80 1.13) foi equivalente ao GCsA (2.18 1,32) e diferente do GCsAL (1.89 1.17) e GL (1.81 0.80) (p=0.0334). Baseados nestes resultados pode-se concluir que a exposição prévia a CsA não modificou significativamente a evolução da doença periodontal induzida em ratos. / Cyclosporine A (CsA) is the drug of choice used to prevent organ transplant rejection. Side effects associated to the drug, like bone alterations and gingival overgrowth are considered risk factors to periodontal disease. The objective of the present study was to evaluate the effect of periodontal disease on the bone tissue, epitelial tissue and connective tissue of the rats previously treated with CsA. Forty Wistar rats with 12 weeks were divided into four groups: Control Group (CG, n=10); CsA Group (CsAG, n=10), with CsA (10mg/kg) administration during 60 days since the beginning of the experiment; CsA and Ligature Group (CsALG, n=10), with ligature placement at 30 days after the beginning of the experiment with CsA administration during the whole period; and, Ligature Group (LG, n=10), with ligature placement at 30 days after the beginning of the experiment. After blood sample collection for the biochemical analysis of the Alkaline Phosphatase (PA) activity, the animals were sacrificed by intracardiac perfusion at 60 days after the beginning of the experiment. The mandibles were removed for histologic and histometric analyses of the gingival and bone tissues, and radiographic analysis of the alveolar bone support and density. The data were subjected to analysis of variance (ANOVA, Tuckey) at 5% and to the non-parametric test of Kruskal-Wallis. The mean percentage of alveolar bone support for the CG (60.5 2.22%) was similar to the CsALG (58.1 2.24%) and different to the CsAG (55.0 4.44%) and LG (54.8 3.11%) (p=0.0007). Bone density and PA activity were not statistically different among groups (p=0.1776, and p=0.2806, respectively). The mean values for TRAP+ cells were not statistically different among experimental groups (p=0.3995). The mean values of the periodontal ligament area for CG (0.29 0.03mm2) were similar to the CsAG (0.30 0.02mm2) and statistically different to the CsALG (0.43 0.17mm2) and to the LG (0.41 0.11mm2) (p=0.3994). With regards to the total area of the gingival tissue, the mean values for the CsAG (0.088 0.033mm2) and LG (0.101 0.034mm2) were similar between each other and statistically different to the CG (0.053 0.020mm2) and CsALG (0.146 0.047mm2) (p=0.000001). Regarding the proportion of connective tissue area to the total area, the mean value of the CG (28.60 8.64%) was similar to the CsAG (32.72 14.13%) and statistically different to the CsALG (38.50 10.98%) and to the LG (37.70 7.49%) (p=0.0093). In relation to the proportion of the epithelial tissue area to the total area, the mean value for the CG (71.39 8.64%) was similar to the CsAG (67.27 14.13%) and different to the CsALG (61.49 10.98%) and LG (63.37 7.44%) (p=0.0142). In the proportion of epithelial tissue area to the connective tissue area, the mean value for the CG (2.80 1.13) was similar to the CsAG (2.18 1.32) and different to the CsALG (1.89 1.17) and LG (1.81 0.80) (p=0.0334). Based on these results it can be concluded that previous exposure to CsA did not significantly modify the development of periodontal disease induced in rats.

Há evidências de que a ciclosporina, imunossupressor utilizado nos transplantes de células- tronco hematopoéticas, impregna nos cateteres de silicone quando os mesmos são utilizados para a sua infusão; podendo a coleta de amostras para dosagem sérica do medicamento por essa via resultar em níveis falsamente elevados. Apesar de já existirem dados comprovando a possibilidade de se coletar as amostras da via do cateter venoso central não utilizada para a infusão, há escassez de estudos e também controvérsias quanto ao melhor momento para realizar o procedimento, assim como divergências quanto ao volume de sangue ideal a ser descartado. Esse ensaio clínico controlado randomizado teve como objetivo verificar o efeito do tempo transcorrido entre a interrupção da infusão de ciclosporina e a coleta das amostras na dosagem sérica do medicamento, em relação à via utilizada para a coleta e ao volume de descarte. Os sujeitos foram aleatorizados em dois grupos. No grupo A, a coleta das amostras em acesso venoso periférico, via do cateter utilizada para a infusão da ciclosporina e via não utilizada para infusão foi realizada imediatamente após a interrupção da infusão do medicamento, sendo que na última a coleta foi realizada após descarte de 5 mL e de 10 mL de sangue. No grupo B os mesmos procedimentos foram realizados, porém cinco minutos depois da interrupção. Participaram 32 sujeitos adultos, a maioria do sexo masculino (68,75%), portadores de leucemia (59,37%), com doadores aparentados (84,37%) e histocompatibilidade total (90,62%). A coleta realizada previamente ao início da infusão da ciclosporina atestou ausência desta no sangue e impregnada nos cateteres. As demais foram realizadas nos 32 sujeitos depois de 24 horas do início da infusão; em 12 do grupo A e 16 do grupo B sete dias depois; e em nove do grupo A e 13 do B 14 dias após iniciado o uso do medicamento. O principal motivo que levou à interrupção da coleta foi a transição da ciclosporina para via oral (71,87%). Inicialmente, nas análises intra sujeitos, a diferença entre a dosagem sérica obtida na via do cateter utilizada para a infusão da ciclosporina e as outras vias foi significativa (p < 0,001), enquanto entre o acesso venoso periférico e via não utilizada para a infusão, independente do volume de descarte, não houve diferença (p > 0,05). Quando realizadas as comparações entre os grupos, não foram observadas diferenças (p > 0,05) quanto à influência do tempo transcorrido entre a interrupção da infusão e a coleta das amostras de sangue, independente da via de coleta utilizada e do volume descartado. Conclui-se que a via do cateter não utilizada para infusão da ciclosporina é segura para ser utilizada na coleta das amostras para dosagem sérica desse medicamento; e o procedimento pode ser realizado imediatamente após a interrupção da infusão, desde que empregada a técnica adequada com descarte de 5 mL de sangue. Assim evita-se que o sujeito, já fragilizado e submetido a um tratamento complexo, seja exposto a mais um procedimento doloroso e associado ao estresse que é punção venosa periférica / There is evidence that cyclosporine, an immunosuppressant used in hematopoietic stem cell transplantation, impregnate in silicone catheters when they are used for its infusion; and the sample collection for serum levels of medication through this line may result in falsely elevated levels. Although there are data demonstrating the possibility to collect samples through the line of the central venous catheter not used for the infusion, there are few studies and also controversies regarding the best time to perform the procedure, as well as disagreement about the optimal volume of blood to be discarded. This randomized controlled trial aimed to verify the effect of time elapsed between discontinuation of the infusion and serum sample collection in relation to the line used for collection and volume of discard. The subjects were randomized into two groups. In group A, samples collected from a peripheral venous access, through catheter line used for cyclosporine infusion and catheter line not used for cyclosporine infusion was performed immediately after discontinuation of the drug infusion, and the last collection was performed after discarding 5ml and 10ml of blood. In group B, the same procedures were done, but five minutes after the interruption. The participants were 32 adults, most males (68,75%), with leukemia (59,37%), with related donors (84,37%), and total histocompatibility (90,62%). The collection performed prior to the start of cyclosporine infusion attested absence of cyclosporine in blood and presence of it in catheters. The others were performed in 32 subjects after 24 hours prior the start of infusion; in 12 of group A and 16 of group B after seven days; and in 9 of group A and 13 of B fourteen days after starting the medication. The main reason that led to discontinuation of the collection was the switch of cyclosporine to oral administration (71,87%). Initially, in the intra-subject analysis, the difference between the serum levels obtained in the line used for cyclosporine infusion of and other lines was significant (p < 0,001), while there was no difference between the peripheral venous access and the line not used for infusion, independently of the volume of discard (p > 0,05). When performed comparisons between groups, no differences were observed (p > 0,05) in the influence of time elapsed between discontinuation of the infusion and collection of blood samples, regardless the line used for collection and volume of discard. It is concluded that the catheter line not used for infusion of cyclosporine seems to be safe for use in serum samples collection of this medication; and the procedure can be performed immediately after discontinuation of the infusion, since used the technique with adequate discard of 5ml of blood. This avoids that the subject, already weakened and subordinated to a complex treatment, be exposed to a painful and stressful procedure such as peripheral venipuncture

Para avaliar a exposição ao ácido micofenólico (MPA) na fase inicial pós-transplante renal, receptores foram destinados para receber tacrolimo (n=33) ou ciclosporina (n=19, controle) com MMF. Foram feitas coletas de farmacocinética (AUC) do inibidor de calcineurina e MPA nos dias 7, 14, 30, 60 e 180 pós-transplante. Dos dias 14-180, a MPA-AUC foi mais elevada no grupo tacrolimo devido a um maior segundo pico de MPA. Com doses fixas de MMF, uma grande porcentagem de curvas ficou abaixo da faixa terapêutica. No dia 7, a equação que emprega a concentração pré-dose (C0) e na segunda hora (C2) foi a mais precisa para estimar AUC. Após o dia 7, a equação que utiliza C2 foi a mais precisa. A exposição ao MPA nos primeiros seis meses após transplante renal é maior sob tacrolimo do que ciclosporina. Entretanto, para qualquer inibidor de calcineurina empregado com MMF, uma equação que emprega C0 e C2 (dia 7) e C2 isoladamente (após o dia 7), permite a monitoração de MPA com grande precisão / To evaluate the exposure to mycophenolic acid (MPA) early after renal transplantation, recipients were allocated to tacrolimus (n = 33) or Neoral (n =19, control) plus MMF. Pharmacokinetic curves (AUC) of calcineurin inhibitor and MPA were drawn on days 7, 14, 30, 60 and 180 post-transplant. From days 14-180, MPA-AUC was higher in tacrolimus group due to a higher second MPA peak. With fixed MMF doses, a great amount of curves fell below the proposed therapeutic range. On day 7, the equation that uses pre-dose (C0) and second-hour (C2) concentrations was the most accurate. After day 7, the equation that uses C2 alone was the most accurate. Exposure to MPA during the first six months after transplantation is higher under tacrolimus than Neoral. Nevertheless, despite the calcineurin inhibitor associated with MMF, an equation that uses C0 and C2 up to day 7 and C2 thereafter allows precise MPA monitoring

A fim de prevenir a rejeição do órgão transplantado pelo hospedeiro, se faz necessário o uso de drogas imunossupressoras, como a ciclosporina, que pode levar ao aparecimento de efeitos colaterais como hipertensão arterial, nefrotoxicidade, hepatotoxicidade, e hiperplasia gengival medicamentosa (HGM), que pode ser potencializada se bloqueadores de canal de cálcio como a nifedipina forem associados a fim de controlar a pressão arterial. A patogênese da HGM ainda é incerta, entretanto fatores como a presença de cálculo e placa, concentração plasmática da droga, idade e fatores hormonais podem influenciar as características clínicas e o desenvolvimento da HGM. Recentemente, alguns vírus têm sido associados com a HGM. O HPV (Papiloma Vírus Humano) tem sido associado com casos severos de HGM, enquanto que o EBV (Vírus Epstein-Barr) é associado ao aparecimento de desordens linfoproliferativas pós transplante, que se apresentam como HGM. O objetivo deste trabalho foi avaliar a freqüência e o grau da HGM em pacientes transplantados renais (TR), identificar o EBV e HPV na HGM destes pacientes, e correlacionar a HGM, índice de placa, presença de cálculo e presença do EBV e HPV nos pacientes TR. Foram examinados os prontuários de 58 pacientes TR atendidos no CAPEFOUSP, e os dados com relação à medicação imunossupressora em uso e presença ou ausência de HGM foram registrados. Foram contatados 15 pacientes TR, dos quais foram colhidos dados demográficos, história médica, drogas em uso e história dental. No exame intra-oral foram observados o índice de placa, grau da HGM e presença de cálculo. A HGM foi removida e enviada a Disciplina de Patologia Bucal para análise microscópica. Os espécimes removidos foram comparados com um grupo controle composto por 20 casos de hiperplasia gengival inflamatória. Ambos os grupos foram submetidos ao exame de rotina, enfatizando a presença de coilócitos e a análise molecular, com hibridização in situ para o EBV (sondas EBER e Lytic) e HPV (sonda de amplo espectro e tipos 6/11, 16/18 e 31/33 nos casos positivos para a sonda de amplo espectro). 42% dos pacientes apresentaram HGM grau 1, 50% grau 2 e 8% grau 3. Cálculo estava presente em 50% dos pacientes. O índice de placa médio encontrado foi de 72%. Todas as amostras gengivais removidas cirurgicamente apresentaram um quadro histopatológico compatível com HGM. Os coilócitos estavam presentes em 100% dos casos do grupo de estudo e em 80% dos casos do grupo controle. O HPV esteve presente em 20% dos casos do grupo de estudo e em 10% do grupo controle. O EBV estava presente em 100% dos casos do grupo de estudo e em 90% dos casos do grupo controle, para ambas as sondas, entretanto no grupo de estudo foi observada uma expressão maior do EBV, tanto em quantidade de células marcadas, como em áreas mais profundas. Concluímos que a maioria dos pacientes TR apresentou HGM leve a moderada; EBV foi encontrado em todos os pacientes TR, caracterizando uma infecção oportunista, enquanto que o HPV foi encontrado nas mesmas proporções nos pacientes TR e no grupo controle; não foi encontrada correlação entre índice da HGM, índoce de placa, presença de cálculo e presença do EBV e HPV. / In order to prevent graft rejection in organ transplantation, is necessary the use of immunosuppressive drugs, as cyclosporin, that has several side effects, such as high blood pressure, nephrotoxicity, hepatotoxicity and gingival overgrowth (GO), that can be increased if calcium channel blockers, such as nifedipine, are associated in order to control de blood pressure. The pathogenesis of GO is still uncertain, but some factors such as the presence of calculus and plaque, drug plasmatic concentration, age and hormonal factors can influence the clinical aspects and development of GO. Recently some virus have been associated to GO as well. HPV (Human Papilloma Virus) have been associated to severe cases of GO and EBV (Epstein-Barr Virus) have been associated to posttransplantation lymphoproliferative disorders presenting as GO. The aim of this work was to evaluate GO incidence and score in renal transplant patients (RTP), identify EBV and HPV in GO from RTP, and correlate GO, plaque score, presence of calculus, and presence of EBV and HPV in RTP. We reviewed 58 charts from RTP attending to Special Care Dentistry Center (CAPE-FOUSP). Immunosuppressant drugs and presence or absence of GO were registered. 15 RTP were asked to show up in order to be examined. We collected demographic data, medical history, drugs in use and dental history. In intra-oral exam we observed plaque score, GO score and presence of calculus. GO were removed and sent to Oral Pathology Department for microscopic analysis. GO was compared to a control group composed by 20 cases of inflammatory gingival hyperplasia and both groups were submitted to routine exam emphasizing the presence of koilocytes and to molecular analysis with in situ hybridization for EBV (EBER and Lytic probes) and for HPV (wide spectrum probe and 6/11, 16/18, 31/33 types in cases where wide spectrum were positive). 42% of the patients presented GO score 1, 50% score 2 and 8% score 3. Calculus were presented in 50% of the patients. The average of plaque score was 72%.All GO specimens removed had a histopathological exam compatible with drug induced gingival overgrowth. Koilocytes were presented in 100% of study group (SG) and in 80% of control group (CG). HPV were presented in 20% of the SG and in 10% of the CG. EBV was presented in 100% of SG and in 90% of CG, for both probes, but in SG it could be observed in deeper areas of the epithelium and in a more pronounced expression. We concluded that most RTP presented mild to moderate GO, EBV were found in all RTP, characterizing an opportunistic infection, while HPV were found in the same proportions than in the control group and there were no statistical correlation between GO, plaque score, presence of calculus and presence of EBV and HPV.

Made available in DSpace on 2016-01-26T12:51:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 gloriaelisa_tese.pdf: 873601 bytes, checksum: 4169d3e3662f4f5b0cb50f642bec7715 (MD5) Previous issue date: 2005-11-28 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Cyclosporine A (CsA) is a immunosuppressant drug, whose most serious toxic effect is chronic nephrotoxicity, characterized by decreased glomerular filtration rate and the development of irreversible renal fibrosis. It may go through the placenta to the developing fetus. Currently, a great number of women with childbearing potential is treated by CsA, increasing the chances of pregnancy under the effect of this drug. Our objectives were to assess CsA effects on the renal structure and function during pregnancy. The low-salt-diet (0.06%) model was used in pregnant (P/CsA) and virgin (V/CsA) Munich-Wistar female rats receiving CsA; in virgin (V/VH) and pregnant (P/VH) rats with vehicle at a dosage of 15 mg/kg/day of CsA subcutaneously or vehicle. Glomerular filtration rate (GFR, ml/min/100g) , renal blood flow (RBF, Doppler ultrasound, ml/min), renal vascular resistance (RVR, mmHg/ml/min), blood pressure (BP, intracarotid probe, mmHg), blood levels of CsA (BCsA, radioimmunoassay, ng/ml), urinary volume (UV, ml/min), plasma and urinary creatinine (mg/dl), urine sodium excretion (UNa, mEq/l), sodium excretion fraction (FeNa,%) urinary osmolality (UOsm, m/Osm/K), osmolar clearance (COsm, ml/min), urinary nitric-oxide (NO, griess, umol/mgCr), immunohistochemistry for angiotensin II-positive renal cells and renal histology were measured in the middle and at the end of the gestational period (21 days). Results are presented as mean ± standard error of mean and analyzed by ANOVA and Student-Neuman-Keuls test. After 10 days of treatment, the pregnancy caused significant increases of 27% in the GFR (GC; 1.19 ± 0.04 vs 0.94 ± 0.05 in V/C, p<0.05) and of 36% in RBF (G/C; 4.9 ± 0.2 vs 3.6 ± 0.1 in V/C, p< 0.001) and significant decreases of 13% in MBP (GC; 112 ± 4 vs 129 ± 5 in V/C, p<0.05) and of 29% in RVR ( GC; 24 ± 1 vs 34 ± 2 in VC, p<0.05) of vehicle treated animals. In contrast, in CsA-treated animals, there was no significant GFR increase in pregnancy (20%, G/CsA; 0.95 ± 0.07 vs 0.79 ± 0.07 in V/CsA, p>0.05) nor was there a significant MPB decrease (7%, G/CsA; 110 ± 3 vs 118 ± 4 in V/CsA, p>0.05). The significant RBF increase (38%, G/CsA; 3.3 ± 0.2 vs 2.4 ± 0.1 in V/CsA p<0,01) and significant RVR decrease ( 24%, G/CsA 38 ± 3 vs 50 ± 3 in V/CsA, p<0.05) were maintained in this group. Pregnancy caused a significant decrease of CsA serum levels (G/CsA; 544±58 vs 805±71 in V/CsA, p<0.01). CsA treated animals showed a trend to higher urinary nitric oxide levels, however, the difference was not statistically significant. There was no difference in urinary nitric oxide between virgin and pregnant rats. Pregnancy increased the number of angiotensin II-positive cells in the renal interstitium (3.9 ± 0.6 in G/CsA vs 2.5 ± 0.4 in V/CsA and 4 ± 1.4 in G/C vs 1.9 ± 0.86 in V/C), however these differences did not reach statistical significance. The number of angiotensin II-positive cells in the afferent arteriole was greater in pregnant rats when compared to virgin rats (G/C; 1.3 ± 0.3 vs 0.21 ± 0.2 in V/C) and greater in CsA-treated virgin rats when compared to vehicle-treated rats (V/CsA; 1 ± 0.3 vs 0.21 ± 0.2 in V/C), however these differences were not statistically significant. After 20 days, V and P rats had similar (NS) GFR and RBF decreases and CsA vs Control for GFR (p<0.001), for RBF (p<0.01), and a similar RVR increase (NS). MBP values showed similar decreases in V vs P rats (NS) and a decrease in Csa vs C animals (p<0.05). SCsA was lower in P vs V rats (p<0.001). AII expression in the interstice increased for V/CsA vs V/C rats (p<0.001) and for G/CsA vs P/C rats (p<0.05). The same was observed in the afferent arteriole, for V/CsA vs v/C (p<0.01); however it was not statistically significant for pregnant rats. Only the V/CsA group had an IF score of 0.2 ± 0.1 after 20 days. In the middle of normal pregnancy, CsA altered the renal hemodynamics, impairing both the increase of GFR and the decrease of BP, although the blood levels of the drug were lower in pregnant rats than in virgin rats. The NO urinary system does not seem to be connected to this phenomenon. AII expression in the interstice and in the afferent arteriole was greater for CsA treated-pregnant animals vs controls. Pregnancy did not impair CsA-induced interstitial fibrosis. / A ciclosporina A (CsA) é uma droga imunossupressora cujo efeito tóxico mais grave é a nefrotoxicidade, caracterizada pela queda da filtração glomerular e pelo desenvolvimento de fibrose intersticial renal irreversível. A CsA pode passar através da placenta para o feto em desenvolvimento. Atualmente, um grande número de mulheres em idade fértil são tratadas com CsA, aumentando a chance de gestação sob efeito desta droga. Os objetivos deste estudo foram avaliar os efeitos da CsA sobre a função e estrutura renal durante a gravidez. Utilizou-se o modelo da manobra de restrição de sal na dieta (0,06%) em ratas Munich-Wistar, virgens que receberam CsA (V/CsA), grávidas com CsA (G/CsA), virgens com veículo (V/C) e grávidas com veículo (GIC), na dose de 15 mg/Kg/dia de CsA subcutâneo ou veículo. Avaliou-se na metade e no final do período gestacional a filtração glomerular (FGR, depuração de inulina, ml/min/100g), o fluxo sanguíneo renal (FSR, ultra-som Doppler, ml/min), a resistência vascular renal (RVR, mmHg/ml/min), a pressão arterial média (PAM, cateter intracarotídeo, mmHg), os níveis sanguíneos de CsA (SCsA, radioimunoensaio, ng/ml), o volume urinário (VU, l/min), a creatinina plasmática e urinária (mg/dl), a excreção urinária de sódio (UNa, mEqIl), a fração de excreção de sódio (FeNa,%), a osmolalidade urinária (Uosm, m/Osm/K), a depuração osmolar (Cosm, ml/min), o óxido nítrico urinário (NO, griess, pmol/mgCr), a imunohistoquímica para células renais positivas para angiotensina II (células/campo) e a histologia renal. Os resultados são apresentados como média erro padrão e comparados por ANOVA e StudentNeuman-Keuls. Após 10 dias de tratamento a gravidez provocou aumentos significantes de 27% na FGR (GC; 1,19 0,04 vs 0,94 0,05 em V/C, p<0,05) e de 36% no FSR (G/C 49 + 0,2 vs 36 + 0,1 em V/C, p< 0,001) e quedas significantes de 13% na PAM (GC; 112 4 vs 129 5 em V/C, p<0,05) e de 29% na RVR (GC; 24 1 vs 34 2 em VC, p<0,05) Nota de Resumo dos animais tratados com veículo. Em contraste, nos animais tratados com CsA, na gravidez não houve aumento significante da FOR (20%, G/CsA; 0,95 + 0,07 vs 0,79 + 0,07 em V/CsA, p>0,05) ou queda significante da PAM (7%, G/CsA; 110 3 vs 118 4 em V/CsA, p>0,05). Neste grupo manteve-se a elevação significante do FSR (38%, G/CsA; 3,3 0,2 vs 2 4 0,1 em V/CsA p<0,01) e a diminuição significante da RVR (24%, C/CsA 38 3 vs 50 3 em V/CsA, p<0,05). A gravidez provocou diminuição significante dos níveis séricos de CsA (G/CsA; 544 58 vs 805 71 em V/CsA, p<0,0 1). Os animais tratados com CsA apresentaram tendência a níveis mais elevados de óxido nítrico urinário, porém a diferença não foi estatisticamente significante. Não houve diferença de óxido nítrico urinário entre ratas virgens e grávidas. A gravidez causou aumento do número de células positivas para angiotensina II no interstício renal (3,90,6 em G/CsA vs 2,5 0,4 em V/CsA e 4 1,4 em C/C vs 1,9 0,86 em V/C), porém estas diferenças não alcançaram signíficância estatística. O número de células positivas para angiotensina li na arteríola aferente foi maior nas ratas grávidas quando comparadas às virgens (G/C; 1,3 0,3 vs O 21 + O 2 em V/C) e maior nas ratas virgens tratadas com CsA quando comparadas às tratadas com veículo (V/CsA 1 + 0,3 vs 021 + 02 em V/C), porém, estas diferenças não foram estatisticamente significantes. Após 20 dias, V e O apresentaram queda similares (NS) na FGR e FSR, sendo CsA vs Controle para FGR (p<0.001), para FSR (p<0.01), e aumentando similar na RVR (NS). Os valores da PAM apresentaram quedas similares, em V vs G (NS) e diminuição nos animais com CsA vs C (p<0,05). A SCsA foi menor em G vs V (p<0,01). A expressão de AII no interstício aumentou, para V/CsA vs V/C (p<0,001) e para G/CsA vs G/C (p<0,05). O mesmo aconteceu na arteríola aferente, para V/CsA vs V/C (p<0,01); todavia não foi estatisticamente significante para as ratas prenhes. Nota de Resumo Apenas o grupo V/CsA após 20 dias apresentou escore de 0,2 + 0,1 de IRF. A CsA alterou desfavoravelmente a hemodinâmica renal na metade da gravidez normal, prejudicando o aumento da FGR e prejudicando queda da PA na prenhez normal, apesar de as ratas prenhes apresentarem níveis sangüíneos da droga menores em relação às virgens. O NO não parece estar envolvido nesse fenômeno. A expressão da AII no interstício e na arteríola aferente foi maior para os animais com CsA e prenhes vs controles. A gravidez não prejudicou a fibrose intersticial causada pela CsA.