Made available in DSpace on 2014-06-12T15:06:50Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo6585_1.pdf: 10499427 bytes, checksum: f34fd9b749fdd95e762bc974a19ae78d (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O gênero Cissampelos (Menispermaceae) compreende, em geral, trepadeiras herbáceas, com uma única espécie arbustiva, Cissampelos ovalifolia DC. No Brasil são encontradas oito espécies, das quais cinco ocorrem no Nordeste e uma espécie, Cissampelos sympodialis Eichl., é exclusiva do território brasileiro. A grande semelhança morfológica entre as espécies de Cissampelos contribui para problemas de identificação, troca e até mesmo falsificação quando as espécies são empregadas como medicinais. Este estudo envolve a caracterização anatômica e química de cinco espécies de Cissampelos utilizadas como medicinais no Nordeste do Brasil. Algumas características anatômicas observadas apresentam-se semelhantes entre as espécies como lâmina hipoestomática, estômatos anomocíticos, venação actinódroma-broquidódroma, mesofilo dorsiventral, feixes vasculares colaterais e colênquima lacunar. Contudo, alguns caracteres foliares foram distintivos, como presença e distribuição de papilas, tricomas tectores, contorno das paredes epidérmicas, micromorfologia e distribuição das ceras epicuticulares. Análises cromatográficas revelaram a presença de alcalóides que puderam ser visualizados em idioblastos secretores através de testes histoquímicos. O alcaloide warifteina foi identificado apenas em C. sympodialis podendo ser utilizado como um marcador químico

Magister Scientiae (Medical Bioscience) - MSc(MBS) / This study investigated the effect of the C. capensis extract (0.001, 0.01, 0.1, 1, 10, 100 1000 μg/ml) on LNCaP prostate cancer, TM3 Leydig and TM4 Sertoli cells for 24 and 96 hours. The following parameters were investigated: morphology, cell viability (XTT), testosterone modulation, DNA fragmentation (TUNEL), lactate dehydrogenase activity (LDH), testosterone production, anti-cancer drug combination. In a separate set of experiments, parameters affecting the initiation, progression and metastasis of cancer were investigated. These included the ability of the aqueous C. capensis rhizome extract to inhibit of reactive oxygen species (ROS) and reactive nitrogen species (RNS) production, and to inhibit collagenase and elastase activity.

Submitted by Márcio Maia (marciokjmaia@gmail.com) on 2016-09-08T17:34:01Z No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 3383101 bytes, checksum: e52ccda15daee8307b55ff0e71eeea15 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-08T17:34:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 3383101 bytes, checksum: e52ccda15daee8307b55ff0e71eeea15 (MD5) Previous issue date: 2015-08-31 / Cissampelos sympodialis Eichl., (Menispermaceae) is popularly known as “milona". This species has shown potential to interfere with the pathophysiology of asthma by exerting multiple synergistic effects. Warifteine, a bisbenzilsioquinoline alkaloid has been considered as the main bioactive substance present in the leaves and roots of this species. The present work used a metabolomics approach combined with multivariate data analysis to study quantitative and qualitative chemical variations in the leaf extracts during the phenological development of the plant (between 60 and 210 days after seedling, and the corresponding extracts were coded as CsL60, CsL90, CsL120, CsL150, CsL180 e CsL210) and its relation with the relaxing effect using in vitro guinea pig tracheal. 1H-NMR data from extracts were submitted to PCA analysis and the concentration of the identified compounds was quantified by 1H qNMR. The contents of warifteine and methylwarifteine were determined by HPLC and the total phenolic content of extracts was determined using the Folin-Ciocalteu method, using galic acid as standard. Extracts submitted to 1H-NMR spectroscopy were simultaneously screened to determine their potency in relaxing in vitro guinea-pig tracheal pre-contracted with carbachol. To investigate the relationship between chemical profile and pharmacological activity we used PLS regression. The method was able to identify and to quantitate 20 primary and secondary metabolites in the extracts. The concentration of the major alkaloids decrease from 2.0 ± 0.32 μg/mL for warifteine and 1.0 ± 0.14 μg/mL for methylwarifteine to undetectable levels from 90 days onwards after seedling for warifteine and 120 days for methylwarifteine. Phenolic compounds and derivatives of the flavonols quercetin and kaempferol behave in na opposite fashion, increasing its levels towards fructification (from 0.1 ± 0.05 to 1.0 ± 0.12 mmol/L for quercetin and from 0.4 ± 0.12 to 1.0 ± 0.16 mmol/L for kaempferol). The metabolomics study based on 1H-NMR spectroscopy with PCA was able to discriminate all extracts demonstrating that the phenological cycle is associated with clear differences in chemical composition, mainly due to variations in the concentration of sugars and quinic acid derivatives. The extract obtained during fructification (CsL210) was the most distinctive amongst all samples mainly due to signals from quinic acid derivatives, kaempferol and quercein derivatives. The content of major alkaloids decreased from 2.0 ± 0.32 μg/mL for warifteine and 1.0 ± 0.14 μg/mL to methylwarifteine to undetectable levels from 90 days onwards after seedling for warifteine and 120 days for methylwarifteine. The phenolic compounds and flavonoids quercetin (0.1 ± 0.05 a 1.0 ± 0.12 mmol/L) and kaempferol (0.4 ± 0.12 a 1.0 ± 0.16 mmol/L) behaved in an opposite fashion, increasing its concentration towards fructification. The six extracts relaxed the trachea pre-contracted with carbachol guinea pig, and the CsF210 extract (EC50 = 74.6 ± 7.9 μg/mL) more potent compared to CsL90 extracts (EC50 = 231.6 ± 38.9 μg/ml) and CsL180 (EC50 = 239.7 ± 15.1 μg/ml) in the presence of functional epithelium. There was no correlation between the content of alkaloids as determined by HPLC and the spasmolytic activity of the extracts. PLS analysis revealed a moderate correlation between 1H-NMR signals for quercetin and kaempferol derivatives and the spasmolytic activity of extracts. Taken together our results demonstrate for the first time that bisbenzylisoquinoline alkaloids warifteine and methylwarifteine do not seem to participate in the spasmolytic actions of polar Cissampelos sympodialis extracts. / Cissampelos sympodialis Eichler, pertence a família Menispermaceae, sendo conhecida popularmente como “milona". A espécie tem demonstrado por meio de testes pré-clínicos, potencial de interferir em processos relacionados com a fisiopatologia da asma, exercendo múltiplos efeitos sinérgicos. A warifteína, um alcaloide bisbenzilisoquinolínico, tem sido apontada como a principal substância bioativa presente nas folhas e nas raízes desta espécie. O presente estudo utilizou metodologia metabolômica baseada em RMN e combinação com análise multivariada para analisar a variação química qualitativa e quantitativa dos constituintes presentes nos extratos hidroalcoólicos das folhas durante o desenvolvimento da planta (entre 60 a 210 dias após o plantio, codificados como CsF60, CsF90, CsF120, CsF150, CsF180 e CsF210) e a relação com o efeito in vitro sobre traqueia isolada de cobaia. Os dados de RMN-1H dos seis extratos das folhas foram submetidos à análise por PCA e os teores dos compostos identificados foram quantificados por RMNq-1H. O teor de warifteína e metilwarifteína foram determinados por CLAE e o teor de fenólicos totais determinado pelo método de Folin-Ciocalteu, utilizando ácido gálico como o composto fenólico padrão. Os extratos submetidos à análise por RMN-1H foram simultaneamente testados quanto à sua potência em relaxar in vitro a traqueia de cobaia pré-contraída com carbacol. Para estudar a relação entre o perfil químico e a atividade farmacológica foi empregada a técnica de PLS (Partial Least Squares). O estudo foi capaz de identificar e quantificar vinte substâncias dentre metabólitos primários e secundários presentes em todos os extratos das folhas. Os teores dos alcaloides majoritários decaem de 2,0 ± 0,32 μg/mL para warifteína e 1,0 ± 0,14 μg/mL para metilwarifteína a níveis não detectáveis, a partir de 90 dias após o plantio para a warifteína e a partir de 120 dias para metilwarifteína. Os compostos fenólicos e os flavonóis quercetina (0,1 ± 0,05 a 1,0 ± 0,12 mmol/L) e caempferol (0,4 ± 0,12 a 1,0 ± 0,16 mmol/L) se comportam de forma contrária, aumentando os seus níveis no sentido da frutificação. Através da análise de PCA foi possível diferenciar todos os extratos, demonstrando que o ciclo vegetativo está associado com diferenças claras na composição química, principalmente devido a variações na concentração de açúcares, compostos fenólicos e derivados do ácido quínico. O extrato (CsF210) originado das folhas no período da frutificação foi o mais distinto entre as amostras, sendo os sinais atribuídos aos derivados do ácido quínico, quercetina e caempferol responsáveis por esta discriminação. Os seis extratos foram capazes de relaxar a traqueia de cobaia pré-contraída com carbacol, sendo o extrato CsF210 (CE50 = 74,6 ± 7,9 μg/mL) mais potente em relação aos extratos CsF90 (CE50 = 231,6 ± 38,9 μg/mL) e CsF180 (CE50 = 239,7 ± 15,1 μg/mL) na presença de epitélio funcional. Não houve correlação entre o teor de alcaloides determinados por CLAE e a atividade espasmolítica dos extratos. Por outro lado, a análise por PLS demonstrou correlação entre os sinais de derivados dos flavonóis quercetina e caempferol e a potência espasmolítica dos extratos. Em conjunto nossos resultados demonstram pela primeira vez que os alcaloides bisbenzilisoquinolínicos warifteína e metilwarifteína não parecem estar envolvidos nas ações espasmolíticas dos extratos polares de Cissampelos sympodialis.

Submitted by Cristhiane Guerra (cristhiane.guerra@gmail.com) on 2017-02-03T15:23:14Z No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 940006 bytes, checksum: 7a3088e68d7479fcd18f7a8da0705ccc (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-03T15:23:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 940006 bytes, checksum: 7a3088e68d7479fcd18f7a8da0705ccc (MD5) Previous issue date: 2016-02-15 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Cissampelos sympodialis Eichl (Menispermaceae) is a native plant of Paraiba region which is used in folk medicine to treat various inflammatory conditions such as asthma and rhinitis. This plant has several biologically active metabolites such as warifteine, methyl warifteine, milonine, among others. Preliminary data show that warifteine exhibits anti-inflammatory activity in a murine model of asthma. The aim of this study was to evaluate whether milonina, metabolite of Cissampelos sympodialis has acute anti-inflammatory activity. For this purpose, we used the model of paw edema induced by phlogistic agents, histological analysis, anaphylactic shock reaction, scratching behavior and antinociceptive activity tests such as writhing and hot plate. The pretreatment of animals with milonina was able to inhibit significantly (p <0.05) paw edema induced by carrageenan in the period between one and two hours while the challenge with compound 48/80, the milonia was capable of inhibiting (p <0.05) the edema at two times 30 and 60 min. The milonina at 2mg / kg was able to protect 75% of animals from death induced by compound 48/80 in anaphylactic shock test. The morphological analysis of the skin of animals subjected to the itch behavior induced by compound 48/80 showed preservation of epithelial structures. In addition, milonina was able to decrease significantly (p <0.05), nociception induced by acetic acid and hot plate a pattern of the inhibition of inflammatory pain. Thus, these data suggest that milonina has acute anti-inflammatory activity via inhibition of mast cell action. / A planta Cissampelos sympodialis EICHL. (Menispermaceae) é uma planta nativa da região paraibana a qual é utilizada na medicina popular para tratamento de diversas afecções inflamatórias, como asma e rinite. Essa planta apresenta vários metabólitos biologicamente ativos como a warifteína, metil-warifteína, milonina, entre outros. Dados preliminares mostram que metabólitos como wariftéina apresenta atividade anti-inflamatória em modelo murino de asma. O objetivo desse trabalho foi avaliar se a milonina, metabólito de Cissampelos sympodialis apresenta atividade anti-inflamatória aguda. Para isso, utilizou-se modelos animais de edema de pata induzido por agentes flogísticos, análise histológica, choque anafilático, scratching behaviour e testes de atividade antinociceptiva, tais como, contorções abdominais e da placa quente. O pré tratamento dos animais com milonina foi capaz de inibir de forma significativa (p<0,05) o edema de pata induzido por carragenina no período entre uma e duas horas enquanto que, no desafio com o composto 48/80, a milonia foi capaz de inibir (p<0,05) o edema nos dois tempos avaliados isto é 30 e 60 min. A milonina a 2mg/kg foi capaz de proteger em 75% os animais da morte induzida pelo composto 48/80 no teste de choque anafilático. Na análise morfológica da pele dos animais submetidos ao comportamento de coceira induzido pelo composto 48/80 observou-se a preservação das estruturas epiteliais. Em adição, a milonina foi capaz de diminuir de forma significativa (p<0,05), a nocicepção induzida por ácido acético e placa quente um padrão de inibição de dor inflamatória. Diante disso esses dados sugerem que a milonina apresenta atividade anti-inflamatória aguda via inibição da ação de mastócitos.

Made available in DSpace on 2015-05-14T13:00:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 4361699 bytes, checksum: e5a69841109235b04a866e4c6017cf05 (MD5) Previous issue date: 2013-08-29 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The application of preparative high pressure liquid chromatography (PREP-HPLC) in the isolation of natural products is shown as a robust, versatile and fast technique that ensures the purification and isolation of substances in complex matrices, as natural products. This technique is a powerful tool in an area in which purification and obtainment of samples in large amount is somewhat laborious, and often, there is a need for re-isolation of samples; thus, its reproducibility is a great advantage. The combination of HPLC with mass spectrometry allows merging the advantages of chromatography, such as the high selectivity and separation efficiency, with the mass spectrometry advantages, as information related to molecular structure, the molar mass and enhancement of additional selectivity. Cissampelos sympodialis Eichl. is a Brazilian species and the infusion of this plant is traditionally used in the northeast of Brazil to treat asthma, bronchitis and rheumatism, between other inflammatory diseases. The objective of this work to develop a rapid and reproducible method for isolation of established chemical biomarkers of plant and other alkaloids from C. sympodialis Eichl., and use the standard of warifteine in quantification of it in biological fluids to determine the pharmacokinetic parameters of the alkaloid after administration of it in rats in vivo. The chromatographic method consisted of a gradient from 0-15 min (75 % B), 15-20 min (80 % B), 20-25 min (100 % B),  278 nm, and flow of 5.0 mL/min during 20 min, with mobile phase of methanol (B) and water (A) basified with ammonium to reach pH 8.0, and the amount of sample mass injected per experiment was 800 mg. The alkaloids isolated were warifteine (99.79 % of purity), methyl-warifteine (98.52 % of purity), the mixture of epimers of desmethyl-roraimine, and a new alkaloid not referred in literature that was elucidated and named as Sousine. Animals from Ratus novergicus species received an intravenous single dose of warifteine of 1.0 mg/Kg, and the blood samples were collected in 5, 15, 30, 60, 120 and 180 minutes. The blood samples were centrifuged to obtain the plasma and then were extracted by protein precipitation with acetonitrile. The pharmacokinetic parameters were calculated based on plasmatic concentrations versus time curves using non-compartmental model. The linearity range to chromatographic method was between 10 and 500 ng/mL e the kinetic parameters were Cmáx 16.08 μg/mL, Tmáx 12.5 min-1, Kel 0.01355 min-1. The method developed to isolation of alkaloids from C. sympodialis Eichl. is a practical, rapid and robust one. The HPLC-MS/MS method enabled to quantify warifteine in rat plasma with samples extraction by protein precipitation, yet, there was a great variability between animals in the kinetics experiment. / A aplicação da cromatografia a líquido de alta eficiência preparativa (CLAE-PREP) no isolamento de produtos naturais, mostra-se como uma técnica robusta, versátil e rápida, que garante a purificação e o isolamento de substâncias de matrizes complexas, como os produtos naturais. Essa técnica é uma ferramenta valiosa numa área em que a purificação e obtenção de amostras em quantidade é algo laborioso, e muitas vezes, há necessidade de reisolamento de amostras; assim, sua reprodutibilidade é uma grande vantagem. A combinação da CLAE com a espectrometria de massas permite unir as vantagens da cromatografia, como a alta seletividade e eficiência de separação, às vantagens da espectrometria de massas, como a obtenção de informação estrutural, massa molar e aumento adicional de seletividade. Cissampelos sympodialis Eichl. é uma espécie da flora brasileira, a infusão das raízes da planta é popularmente utilizada no nordeste do Brasil para tratamento de asma, bronquite e reumatismo, dentre outras enfermidades inflamatórias. O objetivo deste trabalho foi desenvolver um método rápido e reprodutível para o isolamento dos marcadores químicos estabelecidos e de outros alcaloides de C. sympodialis Eichl., e utilizar o padrão de warifteína para quantificação da mesma em fluidos biológicos com vistas à determinação de parâmetros farmacocinéticos do alcaloide após administração in vivo em ratos. O método cromatográfico utilizado consistiu em gradiente de 0-15 min (75 %), 15-20 min (80 %), 20-25 min (100 %),  de 278 nm, fluxo de 5,0 mL/min e tempo de corrida de 20 min, com fase móvel de metanol e água, ambos basificados com amônia para pH 8,0 e a massa de FATT-rz injetada por cada corrida cromatográfica na coluna foi 800 mg. Foram isolados os alcaloides warifteína (pureza 99,79%), metil-warifteína (pureza 98,52%), os epímeros de desmetil-roraimina, além de um alcaloide inédito na literatura que teve sua estrutura elucidada e foi denominado de Sousina. Animais da espécie Ratus wistar receberam dose única de 1,0 mg/Kg de warifteína intravenosa e as coletas de sangue foram realizadas nos tempos 5, 15, 30, 60, 120 e 180 min. As amostras sangue foram centrifugadas para obtenção do plasma e extraídas por precipitação de proteínas utilizando acetonitrila. Os parâmetros farmacocinéticos foram calculados com base nas curvas de concentração plasmática versus tempo pelo modelo não-compartimental. A faixa de linearidade para o método cromatográfico foi entre 10 e 500 ng/mL e os parâmetros cinéticos foram Cmáx 16,08 μg/mL, Tmáx 12,5 min-1, Kel 0,01355 min-1. O método de isolamento por CLAE-PREP é uma alternativa prática, rápida e robusta para obtenção dos alcaloides de C. sympodialis. O método proposto por CLAE-EM/EM permitiu quantificar a warifteína em fluido plasmático de rato com a extração das amostras por precipitação de proteínas, ainda, houve grande variabilidade interindividual entre os animais usados no experimento cinético.

Made available in DSpace on 2015-05-14T13:00:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1807154 bytes, checksum: 7aebebd024c49081a819ffba28e2ccae (MD5) Previous issue date: 2009-12-21 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Cissampelos sympodialis Eichl. (Menispermaceae) is a plant species used in popular medicine in Northeast of Brazil, whose pharmacological effects shows a great potential in treatment of respiratory diseases. Fosfodiesterase inhibition and smooth muscle relaxant effects are attributed to its leaves extract. Sildenafil, an oral fosfodiesterase type 5 inhibitor, is a drug used in treatment of pulmonary hypertension by vasodilatory effects through a cyclic guanosine 3´,5´-monophosphate (cGMP) dependent mechanism. This study was designed to investigate chronic effects of Cissampelos sympodialis extract in monocrotaline (MCT) induced pulmonary hypertension in rats, using sildenafil as a reference drug. After a single subcutaneous injection of MCT, rats were randomized to receive repeated administration of saline, sildenafil, Cissampelos sympodialis extract or both twice a day for 4 weeks. In the last day of treatment, animals were submitted to a median toracotomy to access pulmonary pressure. Four weeks after MCT injection, there was a significant development of pulmonary hypertension (60.19 ± 6.81), in contrast with SHAM group (32.77 ± 1.80). The increases in pulmonary mean pressure, ratio of right ventricular weight to body weight and thickening of the precapillary artery wall were significantly attenuated in the Cissampelos sympodialis extract (37.40 ± 3.76; 0.63 ± 0.04; 57.33 ± 5.04; respectively) and Sildenafil groups (34.57 ± 3.85; 0.68 ± 0.04; 57.00 ± 4.07; respectively), when compared to control group (52.65 ± 4.05; 1.14 ± 0.07; 89.43 ± 1.29; respectively). Combination therapy (32.16 ± 3.65; 0.86 ± 0.02; 64.62 ± 7.28; respectively) with sildenafil and extract had no additive effects in this model. These results suggest that therapy with oral Cissampelos sympodialis extract and sildenafil attenuates the development of monocrotaline induced pulmonary hypertension and that combination therapy has no additional effects compared with sildenafil or extract given alone. / Cissampelos sympodialis Eichl. (Menispermaceae) é uma planta usada na medicina popular do Nordeste do Brasil, cujos efeitos farmacológicos apresentam um grande potencial no tratamento de doenças respiratórias. Efeitos sobre o relaxamento de músculo liso e inibição de fosfodiesterases são atribuídos ao extrato das folhas de C. sympodialis. Sildenafil, um inibidor da fosfodiesterase do tipo 5, é uma droga usada no tratamento da hipertensão pulmonar pelo seu efeito vasodilatador, causado por um mecanismo dependente de 3´, 5´-monofosfato de guanosina cíclica (GMPc). Este estudo foi desenhado para investigar os efeitos crônicos do extrato de Cissampelos sympodialis em ratos com hipertensão pulmonar induzida pela monocrotalina (MCT), usando o sildenafil como droga de referência. Após uma injeção subcutânea única de MCT, ratos foram randomizados para receber duas doses diárias de salina, sildenafil, extrato de Cissampelos sympodialis ou ambos, durante quatro semanas. No último dia de tratamento, os animais foram submetidos a uma toracotomia mediana para medição das pressões pulmonares. Houve um desenvolvimento significante de hipertensão pulmonar, após quatro semanas, nos ratos submetidos à injeção de MCT (60,19 ± 6,81), em contraste com o grupo SHAM (32,77 ± 1,80). O aumento da pressão arterial pulmonar média, relação entre o peso do ventrículo direito e o peso do animal e espessamento da parede das artérias pré-capilares pulmonares foram significantemente atenuados pelo uso do extrato de Cissampelos sympodialis (37,40 ± 3,76; 0,63 ± 0,04; 57,33 ± 5,04; respectivamente) e sildenafil (34,57 ± 3,85; 0,68 ± 0,04; 57,00 ± 4,07; respectivamente) em relação ao grupo controle (52,65 ± 4,05; 1,14 ± 0,07; 89,43 ± 1,29; respectivamente). A terapia combinada (32,16 ± 3,65; 0,86 ± 0,02; 64,62 ± 7,28; respectivamente) com sildenafil e extrato não provocou efeitos aditivos em relação ao tratamento isolado com cada um deles neste modelo. Estes resultados sugerem que a terapia oral com extrato de Cissampelos sympodialis e sildenafil atenua o desenvolvimento da hipertensão pulmonar induzida pela monocrotalina e que a terapia combinada não traz efeitos adicionais, quando comparados com o emprego do sildenafil ou do extrato de Cissampelos sympodialis isoladamente.

Submitted by Barroso Patrícia (barroso.p2010@gmail.com) on 2013-05-03T19:57:32Z No. of bitstreams: 1 disertacao anaterezacerqueiralima.pdf: 3350970 bytes, checksum: 9b57f86665b9a1e4995fdfeb649dd03c (MD5) / Made available in DSpace on 2013-05-03T19:57:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 disertacao anaterezacerqueiralima.pdf: 3350970 bytes, checksum: 9b57f86665b9a1e4995fdfeb649dd03c (MD5) Previous issue date: 2010 / A asma é uma das doenças crônicas mais prevalentes em âmbito mumdial. Estudos epidemiológicos indicam que os ácaros mais frequentemente envolvidos na asma e na rinite alérgica em países tropicais e subtropicais são, respectivamente, Blomia tropicalis (BtE) e Dermatophagoides pteronyssinus (Dp). Embora ácaros sejam os agentes alergizantes mais importantes, o modelo experimental de alergia, a ovalbumina (Ova), é o mais abundantemente utilizado na literatura para o estudo da asma. A planta Cissampelos sympodialis (CsE) é usada para o tratamento de algumas doenças inflamatórias, incluindo a asma. Nesse contexto, o objetivo do presente trabalho foi padronizar modelo experimental de alergia a ácaros e avaliar o potencial de CsE e os seus alcaloides, especialmente, warifteína (Wa). Camundongos AJ foram sensibilizados com 10μg por animal (s.c.) de BtE ou Dp e tratados ou não com 400 mg/Kg de CsE ou 8 mg/Kg da total fração de alcaloides (TAF) ou 4 mg/Kg de Wa (v.o.). Foram analisados os seguintes parâmetros: (a) número de células totais no lavado bronco-alveolar (BAL); (b) contagem diferencial de células do BAL; (c) atividade de peroxidase eosinofílica (EPO) no BAL; (d) os níveis séricos de IgE total por ELISA; (e) IgE anti BtE por PCA; (f) os níveis de IL-4, IL-5, IL-13, IL-10 e IFN-γ no BAL; e (g) as alterações histopatológicas no pulmão. Após a sensibilização dos animais com baixa dose BtE (10 g/animal), eles apresentaram vários parâmetros imunológicos aumentados, relacionados à fisiopatologia da asma. Quando foi comparada a sensibilização de camundongos com BtE e Dp, os animais sensibilizados por BtE produziram mais eosinófilos, EPO, IL-13 e IL-5 no BAL que os animais sensibilizados com Dp. O tratamento dos animais com o CsE, Wa ou TAF levou a uma redução no número de células totais e de eosinófilos no BAL. A mesma redução foi observada nos níveis de EPO no BAL. Os níveis de IL-5 e IL-13 foram também reduzidos nos animais tratados com CsE, enquanto os níveis de IL-10 foram significativamente aumentados no BAL dos animais tratados com CsE. O tratamento também reduziu a densidade de células inflamatórias do pulmão verificada mediante exame histopatológico. Sendo assim, pôde-se demonstrar, neste trabalho: que a sensibilização com baixas doses de BtE consegue estimular parâmetros imunológicos importantes na fisiopatogênia da asma; que a sensibilização de animais com BtE estimula um padrão de resposta imunológico Th2; e que o potencial de CsE, mais do que seus alcaloides isolados, constitui um importante agente imunomodulador na asma, podendo ser um futuro candidato a droga para compor o arsenal terapêutico dessa patologia. / Universidade Federal da Bahia, Instituto de Ciências da Saúde

Submitted by Maria Suzana Diniz (msuzanad@hotmail.com) on 2015-06-19T12:38:56Z No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 4771941 bytes, checksum: 6114eb1b0cca2bd044155269ba37e794 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-06-19T12:38:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 4771941 bytes, checksum: 6114eb1b0cca2bd044155269ba37e794 (MD5) Previous issue date: 2011-12-09 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The leaf ethanolic extract of Cissampelos sympodialis showed promising activity in different animal models of asthma. Several alkaloids have been isolated and identified in the extract, including warifteine and methylwarifteine (bisbenzylisoquinoline), as well as milonine (morphinandienone). In this work we describe the development and validation of a method for simultaneous quantification of chemical markers in ethanolic extracts applied to the study of seasonality and isolation of two bisbenzylisoquinoline alkaloids. Already for milonine, warifteine and methylwarifteine were isolated, purified and quantified in crude ethanolic extracts of leaves using a methodology developed and validated. The warifteine and methylwarifteine were isolated from total alkaloid fraction of roots (TAF-r) of C. sympodialis, whereas that the milonine was isolated from the TAF-l. The structural identification was performed by Nuclear Magnetic Resonance spectroscopy of 1H and 13C, mass spectrometry and infrared spectrometry. The method made use of high performance liquid chromatography with ultraviolet detection (278 nm) using a reverse phase column C18 (250 x 4.6 mm, 5mm) and a mobile phase mixture of water-triethylamine (0,05%) (A) : methanol (B) in order gradient: 0-5 min. (60%), 5-15 min. (72%), 15-25 min.(80%), 25-30 min. (60%). at a rate of 1 mL / min. and running time of 30 min. The chromatographic method was validated in accordance with the recommended resolution of 899 of Agência Nacional de Vigilância Sanitária, and was linear in the concentration range used (2-100 mg / mL), selective (with good separation between the three chromatographic peaks and interfering) and robust. The calibration model used was of standard addition. In the study of seasonality of the markers was observed that there was significant decrease in the concentration of milonine, warifteine and methylwarifteine between February and April. These prominent decreases between the months of February and April for the three molecules coincide with the fruiting period of the plant being observed the appearance of warifteine and methylwarifteine alkaloids in the fruits. This observation suggests the need of the biosynthesis of these alkaloids for the fruits. Through chromatographic and spectrometric techniques was isolated and identified FAT roots of C. sympodialis a mixture of the epimers 7’- desmetilroraimine and 1' - epi - 7'- desmetilroraimine bisbenzylisoquinoline alkaloids that are inedited in the literature. / O extrato etanólico das folhas de Cissampelos sympodialis Eichl mostrou promissora atividade em diferentes modelos animais de asma. Vários alcaloides têm sido isolados e identificados no extrato, incluindo warifteína e metilwarifteína (bisbenzilisoquinolínicos), assim como milonina (morfinandienônico). Nesse trabalho descrevemos o desenvolvimento e validação de método para quantificação simultânea dos marcadores químicos em extratos etanólico aplicado ao estudo da sazonalidade e o isolamento de dois alcalóides bisbenzilisoquinolínicos. Os alcalóides milonina, warifteína e metilwarifteína foram isolados, purificados e quantificados em extratos etanólico bruto das folhas através de metodologia desenvolvida e validada. A warifteína e metilwarifteína foram isolados da fração de alcaloides totais das raízes (FAT-r) de C. sympodialis, enquanto a milonina foi isolada da FAT-f. A identificação estrutural dos alcaloides foi realizada por espectroscopia de Ressonância Magnética Nuclear de 1H e 13C, espectrometria de massas e espectrometria de infravermelho. O método fez uso de cromatografia líquida de alta eficiência com detecção por ultravioleta (278 nm), utilizando uma coluna de fase reversa C18 (250 x 4,6 mm, 5μm) e como fase móvel uma mistura de água-trietilamina (0,05%) (A) : metanol (B) em modo gradiente: 0-5 min. (60%), 5-15 min. (72%), 15-25 min. (80%), 25-30 min. (60%) a um fluxo de 1 mL/min. e tempo de corrida de 30 min. O método cromatográfico desenvolvido foi validado segundo o preconizado na Resolução 899 da Agência Nacional de Vigilância Sanitária, e se mostrou linear na faixa de concentração utilizada (2-100 μg/mL), seletivo (com boa separação entre os três picos cromatográficos e interferentes), preciso (DPR%≤15%), exato (bias 85-115%) e robusto. O modelo de calibração utilizada foi o de adição de padrão. No estudo da sazonalidade dos marcadores foi possível observar que houve diminuição significativa da concentração de milonina, warifteína e metilwarifteína entre os meses de fevereiro e abril. Essas diminuições proeminentes para as três moléculas coincidem com o período de frutificação da planta sendo verificado o aparecimento de warifteína e metilwarifteína nos frutos. Essa observação sugere a necessidade da biossíntese dos alcaloides pelos frutos. Através de técnicas espectrométricas e cromatográfica foi isolado e identificado da FAT-r de C. sympodialis uma mistura de epímeros a 7’- desmetilroraimina e a 1’- epi - 7’- desmetilroraimina que são alcalóides bisbenzilisoquinolínicos inéditos na literatura. Palavras-chaves: CLAE, Menispermaceae, warifteína, metilwarifteína, milonina, Cissampelos sympodialis, variação sazonal.

Submitted by Cristhiane Guerra (cristhiane.guerra@gmail.com) on 2017-02-01T13:21:44Z No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 3972647 bytes, checksum: f6010ee1fd045c2fe490f404bbb4d37e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-01T13:21:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 3972647 bytes, checksum: f6010ee1fd045c2fe490f404bbb4d37e (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 / Cissampelos sympodialis Eichl. (Menispermaceae) is an endemic species in Brazil, popularly known as "Milona", "Jarrinha" or "Orelha-de-onça". This species was selected for this study considering the chemotaxonomic (alkaloids and flavonoids) and ethnopharmacological criteria, due to this species be popularly used to treat inflammatory disorders. This study aimed to evaluate the acute preclinical toxicity and anti-ulcer activity of the ethanolic extract (EtOHE-Cs) and alkaloids total fraction (TAF-Cs) obtained from aerial parts of C. sympodialis. In acute toxicity, doses of 300 and 2000 mg/kg EtOHE-Cs were administered orally (p.o.). Our experiment conditions shows that, this type of doses did not induce signs of toxicity in female mice and 50% of lethal dose (LD50) is equal to or greater 5000 mg/kg according to the OECD 423 guide. For TAF-Cs was founded that the animals treated with the dose of 2000 mg/kg showed straub tail and analgesia. In addition, the LD50 of this substance being approximately 1000 mg/kg. To evaluate the gastroprotective activity using induced acute models of gastric ulcers were used: ethanol and containment of gastric juice in rats, anti-inflammatory non-steroidal drug (NSAID - piroxicam) and stress (immobilization and cold) in mice. In ulcer model induced by ethanol the results showed that carbenoxolone (100 mg/kg), EtOHE-Cs or TAF-Cs (62.5; 125; 250 and 500 mg/kg – v.o.) reduced the ulcerative lesion area (ULA) of 97, 69, 75, 94, 98; 97, 88, 90, 94, 95% (p<0,001) respectively in comparison with the negative control. In the same model, treatment with carbenoxolone (100 mg/kg), EtOHE-Cs (500 mg/kg) or TAF-Cs (250 mg/kg) improved histological parameters analyzed. Considering ulcers induced by NSAIDs, cimetidine (100 mg/kg), the EtOHE-Cs or TAF-Cs (62.5; 125; 250 and 500 mg/kg – p.o.) reduced the ulcerative lesion index (ULI) in 43, 59, 60, 64, 76; 47, 51, 62, 75 and 78% (p<0,001), respectively. In the lesions induced by stress cimetidine, EtOHE-Cs or TAF-Cs at the same doses reduced ULI at 44, 37, 38, 42, 52; 57, 39, 54, 75 and 76% (p<0,001), respectively. Ulcers induced by restraining of the gastric juice (pylorus ligation) treated with cimetidine (100 mg/kg), EtOHE-Cs (500 mg/kg) and TAF-Cs (250 mg/kg) decreased the ULI at 35, 42 and 40 % (p.o.) (p<0,001) and 39, 34 and 33% (intraduodenally – i.d.) (p<0,01), respectively. To investigate the mechanisms of samples of C. sympodialis involved in gastroprotective activity it was evaluated the antisecretory or neutralizing mechanisms of the gastric acid secretion and cytoprotective, antioxidant and immunoregulatory properties. Treatments (p.o. and i.d.) with EtOHE-Cs (500 mg/kg) and TAF-Cs (250 mg/kg) did not alter biochemical parameters of gastric juice, suggesting that gastroprotective activity does not involve antisecretory or neutralizing mechanisms. The gastroprotective activity of EtOHE-Cs (500 mg/kg) involves participation of sulfhydryl groups, nitric oxide, KATP, mucus and prostaglandins. The gastroprotection promoted by the TAF-Cs (250 mg/kg) involves the participation of sulfhydryl groups, mucus and prostaglandins. EtOHE-Cs (500 mg/kg) (p<0,001) and TAF-Cs (250 mg/kg) (p<0,01) showing antioxidant activity by an increase in reduced glutathione (GSH) levels compared to the negative control in ethanol-induced gastric ulcers. The EtOHE-Cs (500 mg/kg) reduces the levels of pro-inflammatory cytokines, interleukin 1 beta (IL-1β) (p<0,001) and tumor necrosis factor (TNF-α) (p<0,05) and levels of anti-inflammatory interleukin were increased, interleukin 10 (IL-10) (p<0,001) compared to the negative control. Treatment with TAF-Cs (250 mg/kg) did not alter IL-1β and TNF-α levels, however this treatment increased IL-10 levels compared to the negative control (p<0,001). In the cysteamine-induced duodenal ulcer lansoprazole (30 mg/kg), EtOHE-Cs (500 mg/kg) or TAF-Cs (250 mg/kg) reduced the ULA in 93, 49; 61 and 89% (p<0,001), respectively. Considering these results, it was possible to suggest that C. sympodialis and derivates presents antiulcerogenic activity and the gastroprotective activity of this species involves cytoprotective, antioxidants and immunoregulatory mechanisms. / Cissampelos sympodialis Eichl. (Menispermaceae) é uma espécie endêmica no Brasil, popularmente conhecida como “milona”, “jarrinha” ou “orelha-de-onça”. Esta espécie foi selecionada para este estudo a partir de critérios quimiotaxonômicos (alcaloides e flavonoides) e etnofarmacológico, já que essa espécie é utilizada popularmente no tratamento de desordens inflamatórias. Este trabalho teve como objetivo avaliar a toxicidade pré-clínica aguda e a atividade antiulcerogênica do extrato etanólico bruto (EEtOH-Cs) e da fração de alcaloides totais (FAT-Cs) obtidos das partes aéreas de C. sympodialis. No ensaio de toxicidade aguda, as doses de 300 e 2000 mg/kg do EEtOH-Cs administrado por via oral (v.o.) não induziu sinais de toxicidade em camundongos fêmeas nas condições experimentais avaliadas e a dose letal 50% (DL50) é igual ou superior a 5000 mg/kg de acordo com o guia 423 da OECD. Para a FAT-Cs foi verificado que os animais tratados com a dose de 2000 mg/kg apresentaram cauda em straub e analgesia, sendo a DL50 dessa substância de aproximadamente 1000 mg/kg. Para a avaliação da atividade gastroprotetora foram utilizados os modelos de indução aguda de úlcera gástrica: por etanol em ratos, anti-inflamatório não-esteroidal (AINE - piroxicam), estresse (por imobilização e frio) em camundongos e contensão do suco gástrico em ratos. No modelo de úlcera induzida por etanol a carbenoxolona (100 mg/kg), o EEtOH-Cs ou FAT-Cs (62,5; 125; 250 e 500 mg/kg - v.o.) reduziram a área de lesão ulcerativa (ALU) em 97, 69, 75, 94, 98; 97, 88, 90, 94, 95% (p<0,001), respectivamente, em comparação ao controle negativo. Na úlcera por etanol, os tratamentos com carbenoxolona (100 mg/kg), EEtOH-Cs (500 mg/kg) e FAT-Cs (250 mg/kg) melhoraram os parâmetros histológicos analisados. Nas úlceras induzidas por AINE, a cimetidina (100 mg/kg), o EEtOH-Cs ou FAT-Cs (62,5; 125; 250 e 500 mg/kg - v.o.) reduziram o índice de lesão ulcerativo (ILU) em 43, 59, 60, 64, 76; 47, 51, 62, 75 e 78% (p<0,001), respectivamente. Em lesões induzidas por estresse a cimetidina, o EEtOH-Cs ou FAT-Cs nas mesmas doses reduziram o ILU em 44, 37, 38, 42, 52; 57, 39, 54, 75 e 76% (p<0,001), respectivamente. Nas úlceras induzidas por contensão do suco gástrico (ligadura do piloro) a cimetidina (100 mg/kg), o EEtOH-Cs (500 mg/kg) e FAT-Cs (250 mg/kg) diminuíram o ILU em 35, 42 e 40% (p<0,001) (v.o.) e em 39, 34 e 33% (p<0,01) (intraduodenal – i.d.), respectivamente. Na perspectiva de investigar os mecanismos envolvidos na atividade gastroprotetora das amostras de C. sympodialis foram avaliados os mecanismos antissecretórios ou neutralizantes da secreção ácida gástrica, mecanismos citoprotetores, antioxidante e imunorregulatório. Os tratamentos (v.o. e i.d.) com o EEtOH-Cs (500 mg/kg) e FAT-Cs (250 mg/kg) não alteraram os parâmetros bioquímicos do suco gástrico, sugerindo que a atividade gastroprotetora não envolve mecanismos antissecretórios ou neutralizantes. A atividade gastroprotetora do EEtOH-Cs (500 mg/kg) envolve participação de grupamentos sulfidrila, óxido nítrico, KATP, muco e prostaglandinas. A gastroproteção promovida pela FAT-Cs (250 mg/kg) envolve a participação de grupamentos sulfidrila, muco e prostaglandinas. O EEtOH-Cs (500 mg/kg) (p<0,001) e FAT-Cs (250 mg/kg) (p<0,01) apresentaram atividade antioxidante por um aumento nos níveis de glutationa reduzida (GSH) quando comparados ao controle negativo, nas úlceras induzidas por etanol. O EEtOH-Cs (500 mg/kg) diminui os níveis das citocinas pró-inflamatórias, interleucina 1 beta (IL-1β) (p<0,001) e fator de necrose tumoral alfa (TNF-α) (p<0,05) e aumentou os níveis da interleucina anti-inflamatória, interleucina 10 (IL-10) (p<0,001), quando comparado ao controle negativo. O tratamento com a FAT-Cs (250 mg/kg) não alterou os níveis de IL-1β e TNF-α mas aumentou os níveis de IL-10 (p<0,001), quando comparado ao controle negativo. No modelo de úlcera duodenal induzida por cisteamina, o lansoprazol (30 mg/kg), EEtOH-Cs (500 mg/kg) ou FAT-Cs (250 mg/kg) reduziram a ALU em 93, 49; 61, e 89% (p<0,001), respectivamente. Diante desses resultados, foi possível sugerir que C. sympodialis e seus derivados apresentam atividade antiulcerogênica e que a atividade gastroprotetora dessa espécie envolve mecanismos citoprotetores, antioxidantes e imunorregulatórios.

Made available in DSpace on 2015-05-14T13:00:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 5040357 bytes, checksum: d112d16462e653eb7f528351d768dc3f (MD5) Previous issue date: 2014-02-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Cissampelos sympodialis Eichl (Menispermaceae) is a plant commonly found in semi-arid regions of Brazil. Its roots and leaves are used in folk medicine to treat arthritis, rheumatism and respiratory disorders. Studies have shown its anti-inflammatory, immunomodulatory and anti-asthmatic effects. The aim of this study was: 1) to evaluate the effect of administration, intranasally (i.n.) of the leave extract (AFL) and its alkaloids warifteine (WAR), methylwarifteine (MWA) and milonine (MIL) in the lungs of BALB/c mice sensitized and challenged with ovalbumin (OVA) and 2) to analyze the effects of alkaloids on inflammatory cells and their molecules related to inflammation. The parameters evaluated in vivo were: the cell migration into bronchoalveolar lavage (BAL), histopathological changes in the lung tissue and analysis of IgE levels on the serum. In vitro assays, were evaluated the phosphorylation of JNK kinase enzyme and expression of COX-2 on cultured macrophage and mast cells. The results showed that the AFL and the alkaloids were able to inhibit the migration of inflammatory cells, mainly eosinophils to the lung. However the AFL and milonine induced neutrophil migration to the lung. Treatment with the extract and the alkaloids inhibited the production of mucus by goblet cells present in the bronchial epithelium and the migration of TCD4+ and TCD8+ into the lung tissue, except warfteine that increased the TCD8+ subpopulation,. Only the AFL treatment was able to decrease serum IgE concentration and, among the alkaloids, MWA was able to inhibit the production of interleukin-13 (IL-13) by cells from the BAL. In vitro tests showed that the alkaloids presented no toxicity for macrophage and mast cells at all concentrations tested 0.1, 1.0 and 10 μM. However, only milonine was able to inhibit degranulation of mast cells via inhibition of histamine release. The inhibition of JNK phosphorylation was observed with MWA and MIL independent of COX-2 activation. These results indicate that the extract, when administered intranasally, has antiasthmatic effect by decreasing the eosinophil migration into the lung and the mucus production and, MWA is one of the important compounds present into the extract due to decreasing the JNK phosphorylation. In addition, these data provide additional information to produce an herbal plant for the treatment of intranasal airway inflammatory disorders and the MWA may be the molecular marker for the quality and effect of the herbal medicine. / Cissampelos sympodialis Eichl. (Menispermaceae) é uma planta comumente encontrada em regiões semiáridas do Brasil. Suas raízes e folhas são usadas na medicina popular no tratamento de artrite, reumatismo e doenças respiratórias. Estudos têm demonstrado seu efeito anti-inflamatório, antiasmático e imunomodulador. Os objetivos do presente trabalho foram: 1) avaliar o efeito da administração, por instilação nasal (i.n.), do extrato das folhas de Cissampelos sympodialis (AFL) e de seus alcaloides warifteina (WAR), metilwarifteina (MWA) e milonina (MIL) em pulmões de camundongos BALB/c sensibilizados e desafiados com ovalbumina (OVA) e 2) analisar o efeito destes alcaloides sobre células inflamatórias e suas moléculas relacionadas com a inflamação. Os parâmetros avaliados in vivo foram: padrão de migração de células no lavado bronco alveolar (BAL), alterações histopatológicas no tecido pulmonar e análise dos níveis de IgE no soro. Nas análises in vitro, em cultura de macrófagos e mastócitos, foram avaliados a fosforilação das enzimas JNK quinase e a expressão da COX-2. Os resultados demonstraram que o AFL e os alcaloides foram capazes de inibir a migração das células da inflamação, em especial, os eosinófilos no pulmão. Entretanto, o AFL e a milonina induziram aumento no número de neutrófilos no pulmão. Os tratamentos com o extrato e os alcaloides inibiram a produção de muco pelas células caliciformes presentes no epitélio brônquico e a migração de linfócitos T CD4+ e TCD8+ da cavidade pulmonar, com exceção da warifteina que aumentou a subpopulação T CD8+. Apenas o tratamento com AFL foi capaz de diminuir a concentração de IgE sérica e, entre os alcaloides, somente a MWA foi capaz de inibir a produção da interleucina-13 (IL-13) pelas células do BAL. Nos ensaios in vitro, observou-se que os alcaloides não apresentaram toxicidade para mastócitos e macrófagos em todas as concentrações testadas 0.1, 1.0 e 10 μM. Entretanto, apenas a milonina foi capaz de inibir degranulação de mastócitos via inibição da liberação da histamina. A inibição da fosforilação da JNK foi observada com a MWA e a MIL independentes da expressão da enzima COX-2. Estes resultados indicam que o extrato, quando administrado por instilação nasal, apresenta efeito antiasmático principalmente pela diminuição da migração de eosinófilos para o pulmão e pela produção de muco e que a MWA é um dos compostos presentes no extrato importante para o efeito antiasmático da planta devido á diminuição da fosforilação da JNK. Em adição, estes dados fornecem informações para a produção de um fitoterápico da planta para o tratamento intranasal de doenças inflamatórias das vias aéreas e a MWA pode ser o marcador molecular de qualidade e efeito do fitoterápico.