Made available in DSpace on 2016-02-26T13:26:11Z (GMT). No. of bitstreams: 2 113.pdf: 1347460 bytes, checksum: 80440e5ca82280d37d179e0e683ccf9d (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015 / Antimoniais pentavalentes são considerados medicamentos de primeira linha no tratamento das diferentes formas de leishmaniose. O perfil de segurança dos medicamentos à base de antimônio (Sb), entretanto, ainda não foi completamente elucidado. O objetivo deste conjunto de estudos que constam desta tese foi fornecer informações adicionais sobre a segurança de um curso de tratamento com o antimoniato de meglumina (AM). O primeiro estudo investigou o acúmulo e eliminação do Sb do sangue e órgãos de ratos machos adultos tratados com uma dose diária de AM, por um período de 21 dias consecutivos. Foi observado que o antimônio é lentamente eliminado. O segundo estudo avaliou o desenvolvimento pós-natal da prole nascida e amamentada por ratas tratadas na gestação e lactação até o desmame com AM. A transferência de Sb através da placenta e via leite materno para a prole foi determinada. Os resultados mostraram, em geral, que o desenvolvimento pós-natal e a fertilidade dos ratos expostos não foram alterados. Os dados também sugerem que o Sb passa facilmente para o leite e está presente nesta matriz biológica em uma forma química que o torna bem absorvido pelos lactentes. Além disso, nós também investigamos se as atividades das enzimas citocromo P450 hepáticas (CYP), que participam do metabolismo de endo- e xenobióticos, foram alteradas pelo tratamento. Os resultados mostraram que um curso de tratamento de 24 dias com AM causou um consistente declínio das atividades de CYP1A no fígado de camundongos SW e DBA-2, e uma diminuição nas atividades de CYP2B9/10 nas fêmeas de SW, mas não em DBA-2 de ambos os sexos. / Não foram observadas outras alterações de atividade de CYPs (CYP2A5, 2E1, 3A11). Em síntese, os estudos aqui reunidos mostram que, após tratamento com antimoniais pentavalentes, níveis residuais de Sb persistem no fígado e outros órgãos por longo tempo. Os níveis de Sb são muito baixos no cérebro o que é consistente com a ausência de efeitos sobre o desenvolvimento neuromotor. O Sb é transferido para o leite materno e encontra-se nesta matriz biológica em forma que torna este metalóide biodisponível por via oral. Os resultados também mostraram que o acúmulo de Sb residual no fígado, exceto por discreto efeito depressor sobre CYP1A, não altera a atividade de monooxigenases. Este conjunto de dados amplia a base de dados disponível para avaliar a cinética de eliminação do Sb e a segurança do tratamento da leishmaniose com antimoniais pentavalentes. / Pentavalent antimony compounds are considered as first choice drugs to treat different clinical manifestations of leishmaniasis. The safety profile of antimony-based anti-leishmanial drugs, however, has not been entirely elucidated so far. The objective of the set of experimental studies presented in this thesis was to provide additional information on the safety of a course of treatment with meglumine antimoniate (MA). The first study was an investigation of the accumulation and clearance of antimony (Sb) in the blood and organs of adult male rats treated with a 21-day course of MA. It was observed that residual Sb is slowly eliminated from rat s organs and blood. The second study evaluated the postnatal development of the offspring born to and nursed by rats treated during gestation and lactation until weaning with MA. The transfer of Sb via placenta and mothers milk to the offspring was determined as well. Results showed that offspring postnatal development and fertility remained virtually unaltered after treatment with MA. Data suggested that Sb is transferred into breast milk and is present there in a chemical form that makes this metalloid bioavailable to suckling pups. Furthermore, we investigated whether activities of liver cytochrome P450 enzymes that take part in the metabolism of endogenous and exogenous substances were altered after a course of treatment with MA. It was found that a 24-d course of treatment with MA caused a consistent decline in CYP1A activity in the mouse liver. A decrease of CYP2B9/10 activity was noted in SW females but not in SW males and in DBA-2 of either sex.^ien / No other change of CYP activity (CYP2A5, 2E1, 3A11) was noted. In summary, data presented here showed that, after treatment with pentavalent antimonial drugs, residual levels of Sb remain in the liver and other tissues for a long time. Sb levels are low in the brain a finding that is consistent with the absence of effects of MA on the neuromotor development. Sb was transferred into breast milk and is found in this biological matrix in a chemical form that makes this metalloid bioavailable by the oral route. Results also showed that accumulation of residual levels of Sb in the liver, except for a mild depression of CYP1A, did not alter the activity of monooxygenases. The comprehensive set of experimental data presented adds to the database currently available for assessing the Sb elimination kinetics and the safety of pentavalent antimonial drugs used to treat leishmaniases. (AU)^ien

Made available in DSpace on 2016-12-23T13:47:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Jucara Albina da Silva Gomes.pdf: 1575369 bytes, checksum: 1445d86b74105309d6fa7115013412e5 (MD5) Previous issue date: 2008-02-20 / Thaptomys is a monotypic genus. Thaptomys nigrita is only species recognized to the genus to the moment, although the taxonomic history of genus reveals more than one species has been described in the literature. Currently, there are four scenarios presented in taxonomic literature for the genus: 1) A single species, without subspecies, with wide geographical distribution, 2) One species with two subspecies, being Thaptomys nigrita nigrita distributed between southern of Bahia to northern of Santa Catarina and Thaptomys nigrita subterraneus distributed south of São Paulo to the north of Rio Grande do Sul, including eastern of Paraguay and northeastern of Argentina; 3) Two species with karyotype distinction, being Thaptomys sp. restricted to the south of Bahia with 2n = 50 and Thaptomys nigrita occurring in the rest of the genus distribution with 2n = 52, 4) Two species with morphological differentiation and one variant form, being Thaptomys sp. found in southern of Bahia and Thaptomys nigrita represented by the individuals found in the rest of the distribution of the genus, and a variant form found in Paraná. Thus, the objective of this study was to evaluate the four scenarios to the genus Thaptomys using molecular markers, and to test the existence of more than one taxonomic unit for the genus, from the study of 833 bp of nuclear gene cytochrome b (cit b). For this, we used population genetics analyzes, phylogenetic analyzes and analyzes of molecular variation (AMOVA). Our results revealed that the populations of the ends of the distribution are balanced demographic and population center of the distribution are expanding population. The time since the expansion reveal that the northern populations expanded to southward and southern populations expanded to northward. Phylogenetic analyzes and AMOVA reveal the existence of four evolutionarily significant units. Thus, we propose the existence of four taxonomic units for the genus Thaptomys: Thaptomys sp1, with 2n = 50 to the south of Bahia, Thaptomys nigrita to Espírito Santo, Minas Gerais, Rio de Janeiro and north of São Paulo, with 2n = 52; Thaptomys sp 2 to the center and east of São Paulo and Thaptomys subterraneus to south of São Paulo to Rio Grande do Sul, including northeastern to Argentina / Thaptomys é um gênero monotípico, sendo Thaptomys nigrita sua única espécie reconhecida, embora a história taxonômica do gênero revele que mais de uma espécie já foi descrita na literatura. Atualmente, existem quatro cenários taxonômicos apresentados na literatura para o gênero: 1) Uma única espécie, sem divisão subespecífica, com grande distribuição geográfica; 2) Uma espécie com duas subespécies, sendo Thaptomys nigrita nigrita distribuída entre o sul da Bahia até o norte de Santa Catarina e Thaptomys nigrita subterraneus distribuída do sul de São Paulo até o norte do Rio Grande do Sul, incluindo o leste do Paraguai e o nordeste da Argentina; 3) Duas espécies com distinção cariotípica, sendo Thaptomys sp. restrita ao sul da Bahia com 2n=50 e Thaptomys nigrita ocorrendo no restante da distribuição do gênero com 2n=52; 4) Duas espécies, com uma forma variante, com diferenciação morfológica, sendo Thaptomys sp. encontrado no sul da Bahia e Thaptomys nigrita representado pelo indivíduos encontrados no resto da distribuição do gênero, e uma forma variante encontrada no Paraná. Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi avaliar os quatro cenários de divisão do gênero Thaptomys utilizando marcadores moleculares, e testar a existência de mais de uma unidade taxonômica para o gênero, a partir do estudo de 833 pb do gene nuclear citocromo b (citb). Para isso foram feitas análises de variabilidade genética intrapopulacionais, análises de demográficas das populações, análises filogenéticas e análises de variação molecular interpopulacional (AMOVA). Nossos resultados revelaram que as populações das extremidades da distribuição de Thaptomys se encontram em equilíbrio demográfico e as populações do centro da distribuição estão em expansão populacional. Os tempos desde a expansão revelam que as populações do norte se expandiram em direção ao sul e as populações do sul em direção ao norte. As análises filogenéticas e as análises de AMOVA revelam a existência de quatro unidades evolutivamente significantes. Dessa forma, propomos a existência de quatro unidades taxonômicas para o gênero Thaptomys: Thaptomys sp1, com 2n=50 para o sul da Bahia, Thaptomys nigrita para Espírito Santo, Minas Gerais, Rio de Janeiro e norte de São Paulo, com 2n=52; Thaptomys sp 2 para o centro e leste de São Paulo e Thaptomys subterraneus para sul de São Paulo até o Rio Grande do Sul, incluindo o nordeste da Argentina

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:21:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissPPZ.pdf: 10164746 bytes, checksum: 6cb727b1bda5e6495013b55cc249b925 (MD5) Previous issue date: 2006-05-19 / Financiadora de Estudos e Projetos / The lambaris, which include small Astyanax scabripinnis fish, inhabit the headwaters of small streams, forming well known populational isolates. These populations are possibly inbred, presenting little or no gene flow and reduced size. It is believed that these characteristics have aided the fixation of a pronounced karyotypic variability, contributing to the elevated phenotypic plasticity observed between the populations. Due to these factors, this fish group has received special treatment, since they represent a species complex. However, despite abundant cytogenetic studies and all the attention granted to this group, such a polymorphism has not yet been verified on a molecular level and its phylogeny remains unresolved. The verification of whether the karyotypic variations found between the A. scabripinnis populations of the Campos do Jordão region also exist on a molecular level, the estimate of part of the current phylogenetic relationships between them and, also, the verification of whether there is any relationship between the presence or absence of B chromosomes in this species with the observed haplotypic diversity was possible through the analysis of the intraspecific genetic variation of a part of the mitochondrial cytochrome b. The results corroborate the hypothesis that these populations were in contact prior to the elevation of the Serra da Mantiqueira and that they are currently geographically separated. The phylogenetic relationships between the studied populations are discussed. The absence of evolutionary relationship between the cytochrome b gene and the supernumerary chromosomes of these populations was observed. / A espécie Astyanax scabripinnis, constituída por pequenos peixes, popularmente conhecidos como lambari, são habitantes das cabeceiras de pequenos córregos, formando isolados populacionais já bem conhecidos. Estas populações podem ser endogâmicas, apresentando baixo ou nenhum fluxo gênico e tamanho reduzido. Acredita-se que tais características tenham auxiliado na fixação de acentuada variabilidade cariotípica e morfológica, contribuindo para a elevada plasticidade fenotípica observada entre as diferentes populações. Devido a esses fatores, tem-se dado um tratamento especial para esse grupo de peixes, uma vez que eles representam um complexo de espécies. Porém, apesar dos estudos citogenéticos serem abundantes e de toda atenção voltada para este grupo, tal polimorfismo ainda não foi verificado em nível molecular, sendo sua filogenia ainda uma questão aberta. A partir da análise da variação genética intraespecífica de parte do gene mitocondrial citocromo b, foi possível verificar se as variações cariotípicas encontradas entre as populações de A. scabripinnis da região de Campos do Jordão também existem em nível molecular, bem como estimar parte das relações filogenéticas atuais entre as mesmas. A análise da rede de haplótipos corrobora a hipótese de que estas populações estiveram em contato anteriormente ao soerguimento da Serra da Mantiqueira, e hoje se encontram geograficamente separada. Além disso, foi possível inferir que a população do Lago do Pedalinho, provavelmente esteja sofrendo influencia de ações antrópicas e/ou do efeito fundador. Estudos futuros utilizando um número maior de indivíduos por população permitirão a realização de análise cladística aninhada, e a utilização de marcadores moleculares com taxa evolutiva mais rápida, poderá inferir sobre uma história evolutiva mais recente deste grupo de peixes.

Memoria para optar al título de Químico Farmacéutico / En general los procesos de biotransformación de fármacos originan metabolitos excretables por la orina. Nitrofurantoína y Nifurtimox son compuestos lipofílicos, sin embargo no existen antecedentes acerca de la eliminación de metabolitos de estos fármacos en orina. Su administración induce diversos efectos adversos asociados a la nitrorreducción que ellos sufrirían in vivo, reacción que genera un nitro anión radical (NO2.-) intermediario que sufre reciclaje redox con O2, generando ROS. Naftaleno es un xenobiótico metabolizado por oxidación a través del sistema citocromo P450; además, induce estrés oxidativo por esta vía metabólica. En este trabajo realizamos un estudio comparativo entre el metabolismo de naftaleno y, Nitrofurantoína y Nifurtimox catalizado por el sistema citocromo P450. Para ello utilizamos una preparación enriquecida en retículo endoplásmico hepático de rata (microsomas). La incubación de los microsomas con ya sea naftaleno, Nitrofurantoína o Nifurtimox y NADPH indujo lipoperoxidación microsómica, fenómeno que fue inhibido por GSH y un extracto hidroalcohólico de Buddleja globosa (matico) de una forma concentración-respuesta. La lipoperoxidación microsómica inducida por los 3 xenobióticos ensayados tuvo un comportamiento bimodal y fue dependiente de la concentración de los xenobióticos; naftaleno aumentó la lipoperoxidación y, Nitrofurantoína y Nifurtimox, la disminuyeron. Así, la primera pendiente positiva obtenida en presencia de naftaleno fue 2 veces mayor que la segunda; asimismo, la pendiente negativa obtenida a concentraciones µM de ya sea Nitrofurantoína o Nifurtimox fue 20 y 10 veces mayor que la obtenida a concentraciones mM, respectivamente. Además, los 3 xenobióticos: a) disminuyeron el contenido de tioles microsómicos en condiciones de biotransformación, b) se unieron a la monooxigenasa citocromo P450 de una forma concentración-respuesta, c) inhibieron la O-desmetilación de p-nitroanisol, reacción catalizada por el sistema citocromo P450, fenómeno que fue prevenido parcialmente por GSH y DTT. Nuestros resultados muestran que Nitrofurantoína y Nifurtimox pueden ser nitrorreducidos y además, oxidados por el sistema citocromo P450; sin embargo, se requieren nuevos experimentos que permitan confirmar este postulado. Por otra parte, ya que el estrés oxidativo inducido por la nitrorreducción fue inhibido por antioxidantes, la administración de una terapia asociada podría ayudar a disminuir los efectos adversos descritos para estos fármacos. / In general, the drug biotransformation produces metabolites which are excreted by urine. Nitrofurantoin and Nifurtimox are lipophilic compounds; there are no date however, related with the elimination of metabolites of these drugs in urine. The administration of both drugs induce several adverse effects which are associated to it′s nitro-reduction in vivo; this reaction would generate a nitro anion radical (NO2 .-); in the presence of O2 this intermediate suffer redox reaction, so conducing to the formation of ROS. Naphtalen is oxidized by cytochrome P450 system inducing oxidative stress. Thus, in this work, we realized a comparative study between naphtalen and, Nitrofurantoin and Nifurtimox biotransformation catalyzed by cytochrome P450 system. In this study we used a preparation enriched in endoplasmic reticulum of rat liver (microsomes). The incubation of microsomes with naphtalen, Nitrofurantoin or Nifurtimox, and NADPH induced microsomal lipoperoxidation, phenomenon which was inhibited by GSH and a hydroalcoholic extract of Buddleja globosa (matico) as a concentration-response manner. The microsomal lipoperoxidation induced by the 3 xenobiotics assayed was conduced as a concentration-dependent and bimodal manner; but naphtalen increased the lipoperoxidation and, Nifrofurantoin and Nifurtimox diminished it. Thus, naphtalen first slope obtained was 2 fold higher than the second slope and, the negative slope obtained to μM drug concentrations of either Nitrofurantoin or Nifurtimox was 20 fold higher than that observed to mM drug concentrations. In biotransformation conditions the 3 xenobiotics: a) diminished the microsomal thiol content and the cytochrome P450 monooxygenase microsomal content ; b) inhibited the p-nitroanisole O-demethylation catalyzed by cytochrome P450 system, phenomenon which was partially inhibited by GSH and DTT. Nitrofurantoin and Nifurtimox could be nitro-reduced and also oxidized by cytochrome P450 system; however, new experiments are required to confirm this postulate. Because oxidative stress induced by the nitro-reduction of Nitrofurantoin and Nifurtimox was inhibited by antioxidant compounds, the administration of an associated therapy may be considered to diminish the adverse effects described for these drugs

Submitted by Alberto Vieira (martins_vieira@ibest.com.br) on 2018-02-07T23:20:32Z No. of bitstreams: 1 213156.pdf: 8809114 bytes, checksum: 6f63636896b1be11b8ef28da02574089 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-02-07T23:20:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 213156.pdf: 8809114 bytes, checksum: 6f63636896b1be11b8ef28da02574089 (MD5) Previous issue date: 1994-12 / CAPES / FINEP / A mobilização rápida de citocromo-oxidase por estimulação visual foi estudada em doze gatos (Felis catus) e três macacos (Cebus apella). A estimulação visual de baixa frequência espacial, desprovida de orientação espacial e com grandes variações de brilho ou cor permitiu a visualização de grumos ricos em citocromo-oxidase em preparações planas do córtex visual de gatos. Estes grumos apareceram nas camadas supragranulares de Vl, V2, V3 e outras áreas extra-estriadas do gato, e são morfologicamente equivalentes aos blobs recentemente descritos em gatos através de métodos histoquímicos não-convencionais. A análise morfométrica revela um aumento do tamanho médio de blobs de Vl para V2 e de V2 para V3. A análise densitométrica de secções do córtex estriado de macacos estimulados monocularmente por diferentes tempos revelou um pico de ativação de citocromo-oxidase em trinta minutos de estimulação, seguido de queda da densidade óptica em tempos maiores. Estes resultados indicam que o fenômeno seja fásico. A estimulação monocular por luz estroboscópica permite evidenciar colunas de dominância ocular em Vl de macaco após trinta minutos. O fenômeno de mobilização rápida de citocromo-oxidase pode provir da ativação imediata de um ou mais genes que codificam suas subunidades, de interações alostéricas com ATP ou da redistribuição local de mitocôndrias. / The cytochrome oxidase fast mobilization was studied in twelve cats (Felis catus) and three monkeys (Cebus apella). Visual stimulus of low spatial frequency, with variations in colour and brightness and no spatial orientation allowed the observation of cytochrome oxidase-rich patches in flattened sections of cat's visual cortex. The patches appeared in Vl, V2 and V3 supragranular layers, as well as in other extra-striated areas. Morphologically, those patches are equivalent to the blobs recently described in cat by improved histochemical methods. The morphometric analysis reveals that blobs medium size tend to increase from Vl to V2 and from V2 to V3. The densitometric analysis of monocularly stimulated monkey' s striate cortex sections shows a cytochrome-oxidase activation peak after thirty minutes of stimulation, followed by a decrease in optical density at greater times. This indicates that the phenomena is composed of two distinct phases. The monocular stimulation by stroboscopic light shows ocular dominance columns in monkey's Vl after thirty minutes. The cytochrome oxidase fast mobilization phenomena may be the product of the immediate activation of one or more genes of the enzyme' s subunits, of allosteric interactions with ATP, or of local redistribution of mitochondria.

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Introdução: As variações da CYP2D6 estão associadas com o desfecho clínico das pacientes na terapia adjuvante do câncer de mama com tamoxifeno (TAM). Esta associação deve-se principalmente a hidroxilação do N-desmetiltamoxifeno (NDT) pela CYP2D6 a endoxifeno (EDF) que, por sua alta potência antiestrogênica, é o principal responsável pela eficácia terapêutica. O objetivo deste estudo foi avaliar a relação entre o genótipo e o fenótipo da CYP2D6 com os níveis de EDF e a razão metabólica [NDT]/[EDF] em uma população do Sul do Brasil. Métodos: Foram obtidas amostras de plasma em vale de 97 pacientes em terapia com o tamoxifeno. A genotipagem da CYP2D6 foi realizada com ensaio Luminex, com determinação de escores de atividade genotípica (EAG). As concentrações do TAM e seus metabólitos foram determinados por CLAE-DAD e classificadas em metabolizadores lentos (ML), intermediários (MI), rápidos com atividade diminuída (MR-D), rápidos com atividade rápida (MR-R) e ultra-rápidos (UR). A fenotipagem foi realizada através da determinação do dextrometorfano (DMT) e do dextrorfano (DTF) por CLAE-FL nas amostras de plasma coletadas três horas após administração oral de 33 mg de DMT. A atividade da CYP2D6 foi avaliada pela razão metabólica [DMT]/[DTF]. Resultados: A genotipagem da CYP2D6 mostrou prevalência de 4,1% de ML, 4,1% de MI, 49,5% de MR-D, 39,2% de MR-R e 3,1% de UR. O genótipo (EAG) foi significativamente correlacionado com o fenótipo ([DMT]/[DTF]), com uma associação moderada (rs= -0,463; p<0,001). As medianas das concentrações plasmáticas do TAM e seus metabólitos (ng mL-1) foram: TAM 57,17; HTF 1,01; EDF 6,21; NDT 125,50. Os níveis de EDF foram inferiores nos ML em comparação aos MR (p<0,05). O fenótipo apresentou maior associação, porém ainda moderada, com os níveis de EDF e [NDT]/[EDF] em comparação ao genótipo (r= -0,507 r=0,625, p<0,001 versus r= 0,356 r=0,516; p<0,01). Ao fenótipo da CYP2D6 foram atribuídas 26% da variabilidade dos níveis de EDF e 38 % das razões metabólicas [NDT]/[EDF], enquanto que ao genótipo foram atribuídas 12% e 27 %, respectivamente. Conclusão: A genotipagem e/ou fenotipagem da CYP2D6 não foram capazes de predizer completamente as concentrações de EDF. Desta forma, sugerimos que estudos futuros utilizem o monitoramento dos níveis de EDF durante a terapia com TAM, com o objetivo de avaliar a sua efetividade. / Background: An association between CYP2D6 variation and clinical outcomes among women with breast cancer treated with tamoxifen (TAM) has been demonstrated, such that the presence of 2 functional CYP2D6 alleles was associated with better clinical outcomes. This association is mainly due the CYP2D6 mediated hydroxylation of N-desmethyltamoxifen (NDT) to yield endoxifen (EDF), which because of its high antiestrogenic potency, is the main responsible for the therapeutic efficacy of TAM. The aim of this study was to evaluate the relation of CYP2D6 genotyping and phenotyping with EDF levels and [NDT]/[EDF] metabolic ratio in breast cancer patients from South of Brazil under TAM therapy. Methods: Trough blood samples were collected from 97 patients. CYP2D6 genotyping was performed with a Luminex assay and calculation of Genotypic activity scores (GAS). Tamoxifen and metabolites EDF, NDT and 4-hidroxy-tamoxifen (HTF) were measured in plasma by HPLC-PDA. CYP2D6 phenotyping was performed by determination of dextromethorphan (DMT) and dextrorphan (DTF) by HPLC-FL at plasma collected three hours after oral administration of 33 mg of DMF. Phenotypes were given according to [DMT]/[DTF] metabolic ratio. Results: CYP2D6 genotyping indicated a prevalence of 4.1% PM, 4.1% IM, 49.5% EM-S, 39.2% EM-F and 3.1% UM. Genotype (GAS), was significantly correlated with phenotype ([DMT]/[DTF]), with a moderate association (rs= -0.463; p<0.001). Median plasma concentrations (ng mL-1) (N=97) were: TAM 57.17; HTF 1.01; EDF 6.21; NDT 125.50. EDF levels were lower in PM than in EM (p<0.05). Phenotype showed stronger, but still moderate, association with EDF and [NDT]/[EDF] than genotype (r= -0.507 r=0.625, p<0.001 versus r= 0,356 r=0.516, p<0.01). Phenotype accounted for 26% of the variability in EDF levels and 38 % of [NDT]/[EDF], while genotype for 12% and 27 %, respectively. Conclusion: CYP2D6 genotyping and/or phenotyping could not fully predict EDF concentrations. Monitoring EDF itself could be considered in further studies during TAM therapy in order to evaluate its efficacy

Os gliomas representam o tipo de tumor primário mais comum do sistema nervoso central. Apesar dos avanços nas técnicas cirúrgicas e de radioterapia e nos protocolos de quimioterapia, não há tratamento eficiente disponível. O ácido retinóico na forma all-trans (atRA) é um agente anti-proliferativo utilizado para o tratamento de alguns tipos de lesões pré-malígnas e tumores, como a leucemia promielocítica. Entretanto, sua utilização no tratamento clínico de tumores sólidos, incluindo os gliomas, é limitada, devido ao rápido desenvolvimento de resistência aos efeitos anti-tumorais do atRA. Para endereçar este problema, foi proposto: a) clonar e analisar a função de cyp26b1 de rato, uma enzima da família dos citocromos P450 envolvida na metabolização de ácido retinóico, previamente descrito em nosso laboratório como potencialmente envolvido na resposta de células de glioma ao tratamento com atRA; b) gerar e caracterizar uma variante da linhagem celular C6 de glioma de rato resistente aos efeitos anti proliferativos de atRA. O cDNA de cyp26b1 de rato, até então desconhecido, foi amplificado, clonado e seqüenciado com sucesso. A seqüência protéica correspondente é conservada e agrupa-se no dendrograma com outras proteínas Cyp26B1, mesmo de organismos distantes como zebrafish, em detrimento de outras proteínas parálogas da família Cyp26. Cyp26b1 é fortemente induzida por atRA em células de glioma de rato e humano, de forma dose-dependente. Embora seja expresso em amostras de cérebros humanos normais e de glioma, não foram encontradas diferenças significativas entre os diferentes graus de matlignidade tumoral, ou em comparação com cérebro normal. A super-expressão de cyp26b1 de rato através de transfecção estável de células de glioma de rato e humano, bem como de células P19 de teratocarcinoma de camundongo, não alterou significativamente as características de crescimento celular, tanto em substrato sólido quanto em substrato semi-sólido. O tratamento prolongado de células C6 de glioma de rato com atRA levou à obtenção de uma população policlonal resistente aos efeitos anti-proliferativos de atRA, a partir da qual uma linhagem celular clonal resistente foi isolada com sucesso. Esta variante clonal, denominada linhagem celular C6R, apresenta inibição de crescimento por atRA diminuída, quando comparada com a linhagem celular C6 parental e com a variante ST1. Além disso, esta variante também mostrou uma tendência, embora não significativa estatisticamente, de gerar tumores maiores quando injetados no subcutâneo de camundongos do tipo nude. A expressão de genes previamente descritos como induzidos pelo tratamento com atRA em células ST1 é fortemente inibida na linhagem celular C6R. Além disso, menor expressão de RAR&#946;, RAR&#947; e CRABP-1 foi também observada em células C6R, enquanto que expressão muito maior de RXR&#947; e CRABP-2 foi encontrada nas células resistentes a atRA, em comparação com as células C6 parentais. Como conclusões gerais deste trabalho, foi proposto que cyp26b1 parece estar envolvido no metabolismo e detoxificação de atRA e parece não ser efetor da inibição de crescimento induzida por atRA, nem estar relacionado com a resistência de células de glioma ao tratamento com atRA. Por outro lado, o isolamento e caracterização de uma linhagem celular resistente ao tratamento com atRA sugere que a resistência está relacionada à expressão diferencial de receptores de retinóides e de proteínas de ligação ao ácido retinóico. / Gliomas are among the most common primary tumors of the central nervous system. Despite the advances in surgical and radiotherapy procedures and chemotherapy protocols, efficient treatment is still not available. Retinoic acid is a anti-proliferative agent used for treatment of a number of pre-malignant lesions and tumors, as promyelocytic leukemia. However, its clinical use in treatment of solid tumors, including gliomas, is impaired by the rapid development of resistance to the anti-tumoral effects of atRA. In order to address this problem, we proposed: a) to clone and analyze the role of rat cyp26b1, a member of cytochrome P450 superfamily envolved in the metabolization of retinoic acid, which has previously been described by our group as being potentially involved in the response of glioma cells to retinoic acid treatment; b) to generate and characterize a variant of rat C6 glioma cell line resistant to anti proliferative effects of atRA. The previously unknown cDNA of rat cyp26b1 was successfully amplified, cloned and sequenced. The protein is conserved and clustered in dendrograms with other cyp26b1 proteins, even from distant organisms as zebrafish, in detriment of other cyp26 paralogs. Cyp26b1 is strongly induced by atRA in rat and human glioma cells, in a dose-dependent fashion. Although expressed in human normal brains and glioma samples, no significant differences were found among different tumor grades nor comparing to normal brain. Stable-transfection and overexpression of rat cyp26b1 in rat and human glioma cell lines, as well as P19 mouse teratocarcinoma cell line, did not significantly modified cell growth properties, either on solid or semi-solid substrates. Prolonged treatment of C6 rat glioma cell line with atRA leads to isolation of an atRA-resistant polyclonal cell population, from which a resistant clonal cell line was successfully isolated. This clonal variant, named C6R cell line, displayed diminished growth inhibition by atRA compared to the parental C6 cell line and the variant ST1 cell line. In addition, this variant also showed a trend, although not quite statistically significant, to generate larger tumors when xenografted s.c. into nude mice. Expression of genes previously described as being induced by atRA-treatment in ST1 cells is strongly impaired in the C6R resistant cell line. In addition, lower expression of RAR&#946;, RAR&#947 and CRABP-1 was also observed in C6R cells, whereas a much higher expression of RXR&#947; and CRABP-2 was found in the resistant cells when compared to the parental C6 cells. As general conclusions of this work, we found that cyp26b1 is more likely to be involved in primary atRA metabolism and detoxification and does not seem to be an effector of atRA-induced cell growth arrest nor to be related to the resistance of glioma cells to atRA treatment. On the other hand, isolation and characterization of an atRA-resistant cell line suggests that atRA resistance is more likely to be due to differential expression of retinoid receptors and retinoic acid binding proteins.

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Studies in humans and laboratory animals have shown that inflammation and infectious processes are associated with changes in expression and activity of cytochrome P450 (CYP), which are responsible for the metabolism of most drugs in clinical use. In this context, the objectives of this work were: observe pharmacokinetic changes of CYP450 during human visceral leishmaniasis, describe the epidemiological, clinical and laboratory characteristics of patients with visceral leishmaniasis and evaluate the activity of the isoenzymes CYP3A4, CYP2C9 and CYP2C19 in patients with visceral leishmaniasis before and after treatment. This is a cross-sectional study, developed into an inpatient unit of a school hospital linked to the Federal University of Sergipe, reference in the diagnosis and treatment of visceral leishmaniasis in the state, which involved 24 patients. The study was conducted in four phases: before treatment, immediately after treatment, ninety and one hundred and eighty days after the end of treatment. In each phase, patients ingested the medication omeprazole (CYP2C19 substrate), losartan (CYP2C9 substrate) and midazolam (CYP3A4 substrate), which were used as evidence of the enzymes for which are substrates. Collecting blood samples (5 mL) of the patients before the administration of these drugs and 15, 30, 45 minutes and 1, 2, 3, 4, 5 and 6 hours after administration of those drugs. It was also collected all urine produced in 8 hours after the ingestion of drugs and separate a aliquot of 20 mL for analysis. Liquid chromatography coupled to mass spectrometry high efficiency (LC-MS) was used for the quantification of drugs and metabolites in the samples. The reason omeprazol/5-hidróxi-omeprazol plasma concentrations obtained 4 h after drug administration was used to evaluate the activity of CYP2C19, and the CYP2C9 enzyme activity was estimated by the ratio of concentrations losartano/E-3174 in urine collected 8h after administration of the drug. To estimate the activity of CYP3A4 was calculated the apparent clearance (CL / F) of midazolam. The results showed a prevalence of the disease in males and that most cases occurred in patients residing in urban areas. In relation to the clinical findings were present weight loss, fever, malaise and hepatomegaly in 100% of participants, and 50% were diagnosed between 90 and 180 days the onset of symptoms. On laboratory changes, anemia, leukopenia, thrombocytopenia, hypoalbuminemia, normal or slightly altered transaminases were found. As the enzymatic activity, the apparent clearance of midazolam found himself reduced during illness and increased after treatment; the metabolic ratio of omeprazole plasma concentration of 5-hydroxy-omeprazole and the ratio of the concentration urine losartano/E-3174 were increased during illness, and reduced after treatment, indicating a reduction in the activity of CYP3A4, 2C9 and 2C19 during LV and increase after treatment. The knowledge that occur changes on the activity of the cytochromes P450 and, consequently, on the pharmacokinetics of drugs during visceral leishmaniasis, may contribute to better understanding of the response to drugs during the disease. / Estudos realizados em seres humanos e animais de laboratório têm demonstrado que a inflamação e os processos infecciosos estão associados a alterações na expressão e na atividade dos citocromos P450 (CYP), os quais são responsáveis pelo metabolismo da maioria dos fármacos de uso clínico. Nesse contexto, os objetivos deste trabalho foram: observar as alterações farmacocinéticas dos CYP450 durante a LV humana, descrever as características epidemiológicas, clínicas e laboratoriais dos pacientes com leishmaniose visceral e avaliar a atividade das isoenzimas CYP3A4, CYP2C9 e CYP2C19 em pacientes com leishmaniose visceral antes e após o tratamento. Trata-se de um estudo transversal, desenvolvido em uma unidade de internamento de um hospital escola vinculado à Universidade Federal de Sergipe, referência no diagnóstico e tratamento da leishmaniose visceral no Estado, do qual participaram 24 pacientes. O estudo foi realizado em quatro fases: antes do início do tratamento, imediatamente após o término do tratamento, noventa e cento e oitenta dias após o término do tratamento. Em cada fase, os pacientes ingeriram os medicamentos omeprazol (substrato do CYP2C19), losartano (substrato do CYP2C9) e midazolam (substrato do CYP3A4), os quais foram usados como prova da atividade das enzimas para as quais são substratos. Foi realizada coleta de amostras de sangue (5 mL) dos pacientes antes da administração desses medicamentos, e 15, 30, 45 minutos e 1, 2, 3, 4, 5 e 6 horas após a administração dessas drogas. Também foi coletada toda a urina produzida nas 8h seguintes à ingestão dos medicamentos e separada uma alíquota de 20 mL para análise. A cromatografia líquida de alta eficiência acoplada à espectrometria de massas (LC-MS-MS) foi utilizada para quantificação dos medicamentos e seus metabólitos nas amostras coletadas. A razão das concentrações plasmáticas omeprazol/5-hidróxi-omeprazol obtidas 4h após a administração do fármaco foi usada para avaliar a atividade do CYP2C19, e a atividade da enzima CYP2C9 foi estimada pela razão das concentrações losartano/E-3174 na urina coletada nas 8h seguintes à administração do fármaco. Para estimar a atividade do CYP3A4 foi calculado o clearence aparente (CL/F) do midazolam. Os resultados mostraram que houve predomínio da doença no sexo masculino e que a maioria dos casos ocorreu em pacientes residentes na zona urbana. Em relação ao quadro clínico, estiveram presentes emagrecimento, febre, hepatomegalia e mal estar em 100% dos participantes, e 50% deles foram diagnosticados entre 90 e 180 dias do início dos sintomas. Sobre as alterações laboratoriais, foram encontradas anemia, leucopenia, plaquetopenia, hipoalbuminemia, transaminases normais ou levemente alteradas. Quanto à atividade enzimática, o clearence aparente do midazolam encontrava-se reduzido durante a doença e aumentado após o tratamento; a razão metabólica da concentração plasmática de omeprazol-5-hidróxi-omeprazol e a razão da concentração losartano/E-3174 na urina encontravam-se aumentadas durante a doença e reduzidas após o tratamento, indicando uma redução da atividade dos CYP3A4, 2C9 e 2C19 durante a LV e um aumento após o tratamento. O conhecimento de que ocorrem alterações na atividade dos citocromos P450 e, consequentemente, na farmacocinética das drogas durante a LV, pode contribuir para um melhor entendimento da resposta aos medicamentos durante a doença.