O objetivo deste trabalho foi elucidar a interação entre a proantocianidina (PA), um agente natural e não tóxico de ligação cruzada, e o colágeno dentinário tipo I. A hipótese proposta é que o modelamento de uma dentina desmineralizada mais resistente e com melhores propriedades propiciará um substrato mais estável e íntegro para restaurações adesivas. Para isto, o estudo foi dividido em 4 fases: 1) Validação da PA como agente exógeno de ligação cruzada, testando matrizes de dentina desmineralizadas tratadas com extratos a base de PA em teste microflexural para análise do módulo de elasticidade (ME), variando o tempo de exposição (10, 30, 60, 120, 240 min), o tipo de extrato usado (semente de uva-GSE, semente de cacau-CSE, oxicoco-CRE, canela-CNE e açaí-ACE) e a longevidade (imediato, 3, 6 e 12 meses); 2) Estudar parâmetros relacionados às soluções de PA, como solubilidade (água, etanol e acetona), fonte (GSE e CSE) e concentração (0,65%, 3,25%, 6,5%, 15% e 30%), através da mensuração do ME pelo teste micro-flexural de matrizes de dentina desmineralizada; 3) Caracterização da dentina tratada com PA (GSE e CSE), sorção de água, calorimetria e degradação enzimática; 4) Analisar a resistência de união entre a dentina tratada com PA (GSE/CSE) e sistemas de adesivos comerciais (Adapter Single Bond Plus e One Step Plus), variando a concentração (6,5% e 30%), tempo de exposição (1, 10 e 60 min) e longevidade (imediato, 3, 6 e 12 meses). Foram realizadas análises de variâncias e teste de contraste de médias, quando necessário, para todos os ensaios. Os resultados de ME foram influenciados pelo tratamento com PA, dependendo do tipo de extrato usado, exibindo os melhores resultados para o maior tempo de exposição (240 min) para os extratos GSE e CSE. Embora os resultados imediatos com os extratos CRE e CNE não tenham aumentado, estes se mantiveram constantes apos 1 ano de armazenamento, o que não aconteceu para o ACE e os grupos controles. A solubilidade das soluções é influenciada diretamente pelo modo de extração e manufaturação dos extratos, sendo que GSE é solúvel em água destilada e CSE em acetona-água. A efetividade do GSE mostrou ser concentração-dependente, exibindo o maior ME para a concentração de 30%. A dentina tratada com agentes a base de PA foi mais resistente contra a colagenase, obteve uma menor sorção de água e um aumento significativo na temperatura de desnaturação quando comparada ao grupo controle. O GSE foi capaz de aumentar a resistência de união (RU) imediata para ambos os sistemas adesivos, mantendo-se constante para o Adapter Single Bond Plus ao longo do tempo. Para o One Step Plus todos os grupos mostraram diminuição da RU após 1 ano, independente do tempo de exposição. Quando a dentina foi tratada por 1 minuto, os valores de RU para o grupo 30% de GSE foram maiores do que os demais e mantiveram-se constante pelo período de armazenamento. O efeito dos agentes ricos em PA mostrou ser concentração e tempo dependente, porém uma dentina mais resistente e estável ao longo do tempo é possível de ser obtida, levando-se em conta a estrutura química, conteúdo de PA, solubilidade e outros fatores inerentes ao extrato / The aim of this study was to elucidate the interaction between proanthocyanidin based extracts (PA), a natural and non-toxic cross-linker, and type I dentin collagen. The hypothesis is that if a stronger and more stable collagen layer is chemically engineered, the resultant hybrid layer will be stronger and less prone to degradation. So, this research was divided into four phases: 1) PA validation as an exogenous cross-linking agent, testing the elastic modulus (E) of demineralized dentin treated with various PA based extracts (grape seed-GSE, cocoa seed-CSE, cranberry-CRE, cinnamon-CNE, and açai berry-ACE), exposure times (10, 30, 60, 120, 240 min), and long term effectiveness (immediate, 3, 6 and 12 months); 2) Evaluation of different parameters related to PA solutions, like solubility (water, ethanol and acetone), manufacturer (GSE and CSE) and concentration (0.65%, 3.25% 6.5%, 15% and 30%), E was also obtained by micro-flexural strength measurements of demineralized dentin matrix, 3) Characterization of PA treated dentin (GSE and CSE): water sorption, calorimetry and enzymatic degradation and 4) Analyze the bond strength ( BS) of PA treated dentin (GSE / CSE) with commercial adhesives systems (Adapter Single Bond Plus-SB and One Step Plus-OS), varying concentration (6.5% and 30%), exposure time (1, 10 and 60 min) and long-term effectiveness (immediate, 3, 6 and 12 months). Data were statistically analyzed at a 95% confidence interval. GSE and CSE extracts showed a time-dependant effect and were able to improve and stabilize the E of the organic matrix. CRE and CNE extracts were able to maintain the E of collagen matrices constant after 12 months artifical saliva storage. ACE and controls groups showed no effect over dentin organic matrix, did not prevent degradation and consequently reduced the mechanical properties. Herbal extraction process and other pharmacognostic parameters have an important influence on extract solubility as well as constitution, therefore GSE is better dissolved in water and CSE in acetone-water. GSE effect on demineralized dentin is concentration-dependant, with highest E values at 30% GSE concentration. Dentin treated with PA-based agents was more resistant against enzymatic degradation, less susceptible to water sorption and showed a higher denaturation temperature. As compared to the controls, GSE stabilized the dentin-resin bond strength values over a period of one year for both adhesives, however better results were achieved with SB. CSE showed less predictable results depending on the adhesive system used. One minute treatment with 30% GSE was capable of increasing short-term BS and stabilizing it for at least 6 months. Increased mechanical properties and stability of dentin matrix can be achieved by the use of PA-rich collagen crosslinkers regarding inherent characteristics of the natural compounds as chemical structure, solubility and PA content.

Introdução: Diversas afecções laríngeas exigem o uso de enxertos para correção de insuficiências anatômicas ou de múltipla aplicação de fármacos para controle da doença. Alguns bioimplantes, especialmente aqueles com propriedades de liberação controlada de drogas, podem ser úteis no tratamento dessas afecções laríngeas, como a papilomatose laríngea. O poli ácido lático-co-glicólico (PLGA), tem sido bastante testado em aplicações intraoculares e topicamente na cavidade nasal, com resultados bastante promissores. No entanto, um implante de PLGA nunca foi avaliado quanto à sua biocompatibilidade em tecidos laríngeos. Objetivo: Avaliar as alterações histológicas decorrentes da aplicação de PLGA em laringes de coelhos. Materiais e Métodos: Grupos de sete a oito coelhos foram sacrificados em diferentes tempos pós-manipulação cirúrgica (1, 2, 4 e 8 semanas), comparando o lado implantado com PLGA e o lado sham-operado. Os achados histopatológicos foram comparados entre os dois grupos em cada tempo cirúrgico, assim como foi avaliada a diferença comparada a laringes não manipuladas. Resultados: A implantação de PLGA promoveu maior infiltração de células inflamatórias, indução de fibrose e neovascularização até a 4ª semana pós-operatória avaliada. No entanto, após oito semanas de evolução, as hemilaringes implantadas com PLGA se apresentaram semelhantes às laringes sham-operadas, ou mesmo não manipuladas cirurgicamente, com retorno quase que completo às condições basais. Por outro lado, não houve diferença da quantidade de depósito de colágeno tipo I e III nas hemilaringes implantadas com PLGA, em nenhum dos tempos avaliados. Conclusão: O implante de PLGA parece ser seguro para aplicações intralaríngeas, produzindo reações inflamatórias nas quatro primeiras semanas, mas que são reversíveis em oito semanas. / Introduction: Several laryngeal affections require the use of grafts to correct anatomical insufficiencies or multiple application of drugs to control the disease. Some bioimplants, especially those with controlled drug release properties, may be useful in the treatment of such laryngeal conditions, such as laryngeal papillomatosis. Poly (lactic acid-co-glycolic acid), PLGA, has been widely tested in intraocular and nasal cavity applications, with very promising results. However, a PLGA implant has never been assessed for its biocompatibility in laryngeal tissues. Aim: To evaluate the histological changes resulting from the application of PLGA in rabbit larynx. Materials and Methods: Groups of 7-8 rabbits were sacrificed at different postsurgical times (1, 2, 4, and 8 weeks), comparing the implanted side with PLGA and the sham-operated side. Histopathological findings were compared between the two groups at each surgical time, as was the difference compared to the non-surgically manipulated larynx. Results: PLGA implantation promoted a higher infiltration of inflammatory cells, induction of fibrosis and neovascularization until the 4th postoperative week evaluated. However, after 8 weeks of evolution, PLGA implanted hemilarynx were similar to sham-operated or even non-surgically manipulated larynx, with a complete return to baseline conditions. On the other hand, there was no difference in the amount of collagen deposition type I and III in the hemilarynx implanted with PLGA, in none of the evaluated times. Conclusion: The PLGA implant appears to be safe for intralaryngeal applications, producing inflammatory reactions in the first 4 weeks, but which are reversible within 8 weeks.

Fibroblastos são as células mais numerosas encontradas nos tecidos orais como gengiva, ligamento periodontal e polpa dental. Além de exercerem função estrutural, estas células também desempenham papel importante na resposta imune destes tecidos através do reconhecimento de antígenos e produção de mediadores inflamatórios e citocinas. Evidências apontam ainda para o fato de que fibroblastos não constituem um grupo único de células. Sendo assim, os objetivos deste estudo foram: (I) avaliar a produção diferencial de fibroblastos de gengiva, ligamento periodontal e polpa dental de dentes permanentes e decíduos quanto à produção das quimiocinas CCL3 e CXCL12; (II) avaliar a produção de pró-colágeno I pelas células de polpa e (III) avaliar a expressão diferencial dos fibroblastos quanto a microRNAs. Dentes recentemente extraídos (terceiros molares hígidos) e fragmentos de gengivas saudáveis de três pacientes adultos foram obtidos no Laboratório de Farmacologia e Fisiologia Clínica da Faculdade de Odontologia de Bauru. Caninos decíduos de dois pacientes com indicação para extração por motivos ortodônticos foram obtidos na Clínica de Odontopediatria da mesma unidade. Culturas primárias de fibroblastos de gengiva (n=3), ligamento periodontal (n=3) e polpa de dente permanente (n=3) e polpa dental de dente decíduo (n=2) foram estabelecidas a partir de tecidos humanos por meio de técnica de explant. Após a quarta passagem, a produção de CCL3 e de CXCL12 foi avaliada após estímulo com concentrações crescentes (0 10 µg/mL) de ácido lipoteicóico de Enterococcus faecalis (EfLTA), lipopolissacarídeo de Porphyromonas gingivalis (PgLPS) ou LPS de Escherichia coli (EcLPS) por ELISA após 1, 6 e 24 h. O RNAm para as quimiocinas no grupo estimulado com EcLPS por 24 h foi avaliado por transcrição reversa seguida de reação em cadeia da polimerase quantitativa. A produção de pró-colágeno I por células de polpa estimuladas com EfLTA e PgLPS foi avaliada por imunofluorescência. O perfil de expressão de microRNAs foi investigado por ensaio de microarranjo. A produção de CCL3 foi aumentada (p< 0,05) pelos antígenos empregados, porém de maneira mais evidente para EcLPS em células de gengiva. A quimiocina CXCL12 foi detectada em níveis basais em todos os grupos de células, porém em maiores quantidades em fibroblastos de gengiva seguidos pelos de ligamento periodontal. A adição dos antígenos diminuiu a produção de CXCL12 de maneira distinta entre células e entre antígenos (p< 0,05). Fibroblastos de polpa decídua não apresentaram qualquer alteração na produção desta quimiocina pelos antígenos (p> 0,05). No período experimental de 24 h, a expressão do RNAm para CXCL12 não foi alterada enquanto a de CCL3 não foi detectada. A produção de pró-colágeno I se mostrou aumentada (p< 0,05) na presença do desafio antigênico em células de polpa com exceção para fibroblastos de polpa permanente que apresentaram diminuição na produção desta proteína quando estimulados com EfLTA. Em condições basais, fibroblastos do mesmo doador apresentaram perfil distinto de expressão de microRNAs envolvidos com a produção das proteínas-alvo deste estudo. A expressão de imunomiRs por EcLPS também se mostrou modificada de maneira distinta entre os fibroblastos, em especial os de ligamento periodontal. Com base nestes resultados, pode-se concluir que fibroblastos de diferentes tecidos orais apresentam comportamento diferencial frente a antígenos bacterianos comumente relacionados a patologias que afetam a cavidade oral. / Fibroblasts are the dominant cells within oral tissues such as gingiva, periodontal ligament and dental pulp. Besides the architectural maintenance of the connective tissues, fibroblasts are also involved in connective tissue immune response through antigen recognition and production of inflammatory mediators and cytokines. Recent studies also demonstrated that fibroblasts do not constitute a unique group of cells. Taken this togeter, the objectives of the present study were: (I) to evaluate the production of the chemokines CCL3 and CXCL12 by human gingival, periodontal ligament as well as permanent and deciduous dental pulp fibroblasts; (II) to evaluate the production of procollagen I by dental pulp fibroblasts and (III) to evaluate the differential pattern of expression of microRNAs by the oral fibroblasts. Recently extracted teeth (non-carious third molars) and fragments of healthy gingiva from three adults were obtained at the Laboratory for Clinical Pharmacology and Physiology at Dental School of Bauru. Deciduous canines from two patients with orthodontic indication for extraction were obtained at Pediatrics Clinics of Dental School of Bauru. Primary cultures of fibroblasts from gingiva (n=3), periodontal ligament (n=3) as well as permanent pulp (n=3) and deciduous pulp (n=2) were established through an explant technique. After the fourth passage, fibroblasts were challenged with increasing concentrations (0 10 µg/mL) of Enterococcus faecalis lipoteichoic acid (EfLTA), Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide (PgLPS) or Escherichia coli LPS (EcLPS) for 1, 6 and 24 h. The chemokines were assessed through ELISA while the mRNA for CCL3 and CXCL12 (EcLPS at 24 h) were assessed through reverse transcription followed by quantitative polymerase chain reaction. The expression of microRNAs was screened through a microarray assay. The production of CCL3 on cell supernatants was detected in all cellular groups, with higher amounts at gingival fibroblasts. EcLPS induced more important chemokine differences compared to the other antigens. CXCL12 basal levels were higher for gingival fibroblasts followed by periodontal ligament ones, but also detected in dental pulp fibroblasts. The production of this chemokine was decreased by stimulation in a different fashion for each antigen and cell type. Deciduous pulp fibroblasts did not display any differences in CXCL12 synthesis even in the presence of the microbial challenge. No differences were detected at mRNA level for CXCL12, while no expression for CCL3 could be detected at 24 h. Increased production of procollagen type I was observed for dental pulp cells in general, with the only exception for permanent pulp cells which displayed decreased production of the protein with EfLTA. Microarray analysis showed differential expression pattern of microRNAs comparing unstimulated cells from the same donnor. EcLPS was able to alter immunomiRs expression in some of the cellular groups, in particular periodontal ligament fibroblasts. In conclusion, our results showed that fibroblasts from distinct oral tissues display differential behavior against bacterial antigens commonly related to the diseases that affect the oral cavity.

O Callithrix jacchus é uma espécie nativa do Brasil que vem sendo amplamente utilizada nas pesquisas biomédicas como modelo experimental, além de estar sofrendo significativas baixas na natureza, especialmente, pela destruição de seu habitat. Assim, estudou-se corações de 11 espécimes de Callithrix jacchus oriundos do Centro de Primatas da Alemanha (DPZ), para a caracterização biométrica, morfométrica macroscópica e quantificação de colágeno dos ventrículos direito e esquerdo corados com finalidade de identificar o padrão primário deste tecido para a espécie e compará-lo com outras espécies domésticas e o homem. Com base nos resultados, concluiu-se que não há diferenças biométricas significativas entre machos e fêmeas, exceto pelo perímetro torácico que evidenciou dimorfismo sexual para a espécie. Os pesos relativos dos corações foram semelhantes aos encontrados na espécies humana, bovina e eqüina. A morfometria média do coração foi estabelecida sem diferenças significativas entre machos e fêmeas. A quantificação de colágeno apresentou diferenças significativas entre as duas colorações utilizadas, sendo o picrosírius modificado o método que apresentou maiores valores. O ventrículo direito continha maior percentagem de colágeno quando comparado ao ventrículo esquerdo o que sugere que o ventrículo direito está mais predisposto a alterações decorrentes de modificações do tecido conjuntivo / The Callithrix jacchus is Brazil native species wich is being widely used as experimental model in biomedical research, besides facing great losses, especially through the destruction of its habitat. Accordingly, 11 hearts of Callitrix jacchus from the Center of Primates in Germany (DPZ) have been studied, in order to establish a biometrical characterization, gross morphometry and collagen quantification of the left and the right ventricle to establish a prime pattern for this species and compare it with other domestic species and human. Based on the obtained results, no significant biometrical difference was found between male and female, just the thoracic perimeter showed sexual dimorphism. The relative heart weight was similar to the one measured in human, bovine and equine species. The average morphometry of the hearts did not show any significant difference between male and female. The collagen quantification established a difference between the used colorings, evidencing the modified picrosirius presented higher values. The right ventricle contained a higher percentage of collagen compared with the left one, indicating the right ventricle to be more predisposed to alterations of the modified connective tissue

Recentemente, pesquisadores têm descrito resultados promissores oriundos da Biomembrana de Látex Natural (BML). Estudos vêm sendo desenvolvidos para comprovar as características indutoras de neovascularização e regeneração tecidual que foram atribuídas a esse material. Entretanto, a biocompatibilidade tem sido considerada um dos mais importantes itens para validar um biomaterial para sua aplicação em humanos. A proposta deste estudo foi investigar qualitativa e quantitativamente os efeitos deste biopolímero, confeccionado à partir da extração de látex vegetal oriundos da árvore da borracha, Hevea brasiliensis, em pele de ratos escaldados. Foram usados 22 ratos, Wistar machos, com pesos entre 200 e 300g, divididos em três grupos: Controle negativo - normais (GI), Controle positivo - queimados (GII) e Tratados com a BML (GIII). A lesão térmica foi realizada por escaldamento (LTE), padronizada pelo peso corpóreo e usando água quente (85ºC for 10 segundos), e a ortoeutanásia dos animais ocorreu nos períodos de 4 e 14 dias pós-lesão. Os animais foram mantidos sob as mesmas condições de alojamento, alimentação, temperatura, umidade e luz. O grupo GIII apresentou melhor cicatrização comparado àqueles do grupo GII. Observou-se que as fibras colágenas e elásticas apresentaram-se em uma rede melhor organizada no grupo GIII e observou-se, ainda, que o número de vasos também foi maior neste grupo. Como vistos em estudos anteriores, a BML favoreceu a cicatrização em áreas queimadas e a neoangiogênese, sugerindo que este biomaterial é um promissor recurso terapêutico para a cicatrização da pele, particularmente nos casos em que a revascularização tecidual seja importante. / Recent investigations have described promising results obtained with the Natural Latex Biomembrane (BML). Several studies had been performed to prove the inductive characteristics of vascularization and tissue regeneration that has been attributed to this material. However biocompatibility has been considered one of the most important items to validate a biomaterial for its application in human beings. The aim of this study was to investigate qualitatively and quantitatively the effects of a biopolymer based on vegetal latex extracted from the Hevea brasiliensis rubber tree in scalded rat skin. Twenty two male Wistar rats weighing between 200 300 g, were divided in three groups: Negative control - normal (GI), Positive control - scalded (GII), and Treated with the BML (GIII). The thermal burn standardized with the body weight, was made using hot water (85ºC for 10 seconds). Euthanasia was performed at 4, and 14 days pos-burn. Animals were kept under the same conditions of accommodation, feeding, temperature, humidity, and light. The burn area with satisfactory healing was greater in GIII than in GII. Collagen and elastic fibers could be seen in a very organized fashion in GIII group, in a similar arrangement that GI. The number of vessels was higher in GIII that others groups. Similar to earlier studies, the BML seemed to benefit cicatrization and neoangiogenesis in the burn skin, suggesting that this biomaterial might be a new type of therapeutic resource for skin burn replacement, especially in cases of desirable tissue revascularization.

Em Implantodontia, o titânio (Ti) é o material de escolha para a confecção dos implantes dentários por apresentar excelentes propriedades mecânicas e biocompatibilidade. Entretanto, novas estratégias de modificações da topografia e da composição bioquímica da superfície de Ti vêm sendo pesquisadas com o objetivo de incrementar a biocompatibilidade do Ti. A combinação de alterações topográficas em escala nanométrica e revestimento com o colágeno tipo I seria uma modificação com potencial para aumentar e/ou acelerar o processo de osseointegração. Assim, o objetivo desse estudo foi avaliar o efeito de superfície de Ti com nanotopografia revestida com colágeno sobre a osteogênese in vitro. Para isso, osteoblastos derivados de calvária de ratos foram cultivados em meio osteogênico sobre 4 superfícies de Ti: usinada (Ti Usi), usinada revestida com colágeno (Ti Usi/Col), com nanotopografia (Ti Nano) e com nanotopografia revestida com colágeno (Ti Nano/Col). A osteogênese foi avaliada pelos seguintes parâmetros: viabilidade celular; expressão das proteínas sialoproteína óssea (BSP) e osteopontina (OPN); atividade de fosfatase alcalina (ALP); expressão dos genes ALP, colágeno tipo I (COL), osteocalcina (OC), OPN, osterix (OSX) e runt-related transcription factor 2 (RUNX-2); e a formação de matriz extracelular mineralizada. Os dados foram comparados por análise de variância (ANOVA) seguido pelo pós-teste Student- Newman-Keuls e o nível de significância adotado foi de 5%. Aos 7 dias, a viabilidade celular foi maior sobre a superfície Ti Nano/Col, comparada às outras superfícies, dentre as quais não foi detectada diferença estatisticamente significante. Houve um 11 aumento da atividade da ALP dos 7 para os 10 dias; aos 7 dias, a atividade da ALP foi menor na superfície Ti Usi em comparação às superfícies Ti Nano e Ti Nano/Col; e aos 10 dias a atividade da ALP foi maior nas células crescidas sobre a superfície Ti Nano/Col comparado às demais superfícies. A imunolocalização, tanto para a OPN aos 3 dias quanto para BSP aos 7 e 10 dias, foi maior nos grupos Ti Nano e Ti Nano/Col com marcações fortes por todo o citoplasma além de depósitos extracelulares adjacentes às células. A expressão dos genes marcadores osteoblásticos avaliados foi maior sobre as superfícies Ti Nano e Ti Nano/Col, em comparação com as superfícies Ti Usi e Ti Usi/Col. A formação de matriz mineralizada foi maior nas superfícies Ti Usi/Col e Ti Nano/Col em relação às superfícies Ti Usi e Ti Nano, dentre as quais não foi detectada diferença estatisticamente significante. Esses resultados sugerem que a combinação de nanotopografia com revestimento com colágeno de superfícies de Ti estimula os eventos intermediários da osteogênese e tem potencial para favorecer a osseointegração dos implantes de Ti. / In Implantology, titanium (Ti) is the material of choice for the manufacture of dental implants because of its excellent mechanical properties and biocompatibility. However, new strategies to modify the topography and biochemical composition of Ti surfaces have been tested in order to increase the biocompatibility of Ti. The combination of topographic changes at the nanoscale and coating with collagen type I has potential to increase and/or accelerate the osseointegration process. The aim of this study was to evaluate the effect of Ti surface with nanotopography coated with collagen on in vitro osteogenesis. For this, osteoblasts harvested from rat calvaria were cultured in osteogenic medium on 4 Ti surfaces: machined (Ti Usi), machined coated with collagen (Ti Usi/Col), nanotopography (Ti Nano) and nanotopography coated with collagen (Ti Nano/Col). The osteogenesis was evaluated using the following parameters: cell viability; expression of bone sialoprotein protein (BSP) and osteopontin (OPN); Alkaline phosphatase (ALP) activity; gene expression of ALP, type I collagen (COL), osteocalcin (OC), OPN, osterix (OSX) and runt-related transcription factor 2 (RUNX-2); and the formation of mineralized extracellular matrix. Data were compared by analysis of variance (ANOVA) followed by Student-Newman-Keuls post-test and the significance level was set at 5%. At 7 days, cell viability was higher on the Ti Nano/Col compared 13 to other surfaces, among which was not detected statistically significant differences. There was an increase in ALP activity from 7 to 10 days; at 7 days, the activity of ALP was lower in Ti Usi surface compared to Ti Nano and Ti Nano/Col surfaces; and at 10 days the activity of ALP was higher in cells grown on the Ti Nano/Col surface compared to other surfaces. The immunolocalization to both OPN at 3 days and BSP at 7 and 10 days was higher in Ti Nano and Ti Nano/Col surfaces with strong labeling throughout the cytoplasm as well as extracellular deposits. The expression of the osteoblast marker genes was higher on Ti Nano and Ti Nano/Col surfaces compared to Ti Usi and Ti Usi/Col surfaces. The formation of mineralized matrix was higher in Ti Usi/Col and Ti Nano/Col surfaces than in Ti Usi and Ti Nano between which there was no statistically significant difference. These results suggest that the combination of nanotopography with collagen in Ti surfaces stimulates the intermediate events of the in vitro osteogenesis and seems to have potential to promote osseointegration of Ti implants.

O objetivo deste estudo foi investigar os efeitos do hipotiroidismo experimental sobre o leito vascular da aorta torácica. Para a análise histológica foram realizadas colorações de hematoxilina-eosina, picrosirius e Weigert. Na análise de expressão proteica, foram realizadas as quantificações para colágeno I e III, elastina, MMP-9 e MMP-2, TIMP-1 e TIMP-2. As análises histológicas demonstraram uma diminuição da AST das aortas dos animais hipo e juntamente a esta alteração, foi constatada a diminuição da expressão proteica de colágeno do tipo I. Em relação à elastina, foi possível observar aumento da expressão deste elemento nas aortas dos animais hipotiroideos. Na avaliação da expressão proteica para MMP-9, foi possível verificar uma redução desta proteína no grupo hipotiroideo, assim como um aumento da expressão de TIMP-2. Frente aos presentes resultados, é possível sugerir que o estado hipometabólico desencadeado pelo hipotiroidismo afeta as CMLVs comprometendo mecanismos de síntese/degradação, alterando o importante arranjo da MEC presente na aorta torácica. / The aim of this study was to investigate hypothyroidism effects on thoracic aorta wall. For histological analyses were performed stains like hematoxilin-eosin, picrosirius and Weigert. In the protein expression assays were performed quantification for collagen I and III, elastin, MMP-9, MMP-2, TIMP-1 and TIMP-2. The histological analyses showed a decrease in aortas CSA and also a decrease in protein expression of collagen I in the hypo group. As regards to elastin, was possible to see an increase of this protein expression in hypo animals. In the evaluation for MMP-9 expression, was found a decrease in this protein and for TIMP-2 an increase in hypothyroidism group. Facing to these results, is possible to suggest that the hypometabolic state triggered by hypothyroidism, affects the VSMCs compromising mechanisms of synthesis/degradation and changing the important constitution of thoracic aorta ECM.

Orientadores: Denise Pontes Cavalcanti, Luciana Cardoso Bonadia / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-24T20:03:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silveira_KarinadaCosta_M.pdf: 2998560 bytes, checksum: 286fe3d0377e879226faf2cb88d92569 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: As displasias esqueléticas ou osteocondrodisplasias são doenças genéticas que afetam o crescimento e o desenvolvimento do tecido ósseo e cartilaginoso produzindo, em geral, baixa estatura. Mutações em heterozigose no gene COL2A1 são responsáveis por uma série de displasias esqueléticas conhecidas como colagenopatias do tipo II que geralmente apresentam um padrão espondiloepifisário típico. Apesar das mutações no COL2A1 serem, em geral, "privadas", o estudo molecular desse gene em pacientes com fenótipos sugestivos de colagenopatia do tipo II pode contribuir seja para um melhor entendimento das colagenopatias do tipo II seja para refinar, quando possível, a correlação genótipo-fenótipo. O objetivo desse estudo foi investigar o gene COL2A1 numa coorte de pacientes com fenótipo de colagenopatia do tipo II de modo a melhorar o conhecimento sobre essas colagenopatias. Foram estudados 33 pacientes com fenótipo de colagenopatia do tipo II. A análise molecular foi feita por sequenciamento automático bidirecional direto do gene COL2A1, começando pelos domínios relacionados a cada fenótipo seguido de sequenciamento completo das regiões codificantes do gene quando as primeiras foram negativas. Foram identificadas alterações potencialmente deletérias em heterozigose em 23 dos 33 pacientes (69,7%): 18 alterações do tipo missense (11 inéditas, 7 descritas), 4 alterações que alteram sítio de splice (2 inéditas, 2 descritas) e uma deleção inédita. Das mutações do tipo missense encontradas, duas foram recorrentes em 5 pacientes: p.G594E e p.R989C. Ambas as mutações recorrentes foram associadas a fenótipos graves: a p.R989C foi observada em displasia espondiloepifisária congênita (SEDC) grave enquanto que a p.G594E foi associadaa 2 recém-nascidos com fenótipo de SEDC-letal. Para todas as mutações novas, a análise in silico, estudo em controles e/ou dos pais confirmaram a patogenicidade de todas elas. Concluindo, os resultados deste estudo permitiram a identificação de 14 mutações novas no gene COL2A1 e um melhor refinamento da correlação genótipo-fenótipo / Abstract: Skeletal dysplasias are genetic disorders that affect the growth and development of the bone and cartilage tissues producing, in general, short stature. Heterozygous mutations in the COL2A1 gene are responsible for a number of skeletal dysplasias that usually exhibit a pattern spondyloepiphyseal and are called type II collagenopathies. Although the mutations in COL2A1 are usually privates, molecular studies of this gene in patients with suggestive phenotypes can contribute to a better understanding of the type II collagenopathies. The aim of this study was to sequence the COL2A1 in a cohort of patients with type II collagenopathy phenotypes in order to refine the knowledge regarding the genotype-phenotype correlation. Thus, 33 patients with suggestive phenotype were studied. The molecular analysis was performed by automated Sanger bidirectional sequencing of the COL2A1 gene, starting with the domains related to each phenotype followed by whole sequencing of the gene coding regions when the first ones were negative. Potentially deleterious changes in heterozygosity were identified in 23 of 33 patients (69.7 %): 18 missense changes (11 undescribed), 4 changes that modify the splice site (2 undescribed) and a new deletion. The pathogenicity of the undescribed changes were confirmed by in silico analysis, study of control individuals and/or of the respective parents. Among the found missense mutations, two were recurrent and associated with severe phenotypes. These mutations, p.G594E and p.R989C, were found in five patients. The R989C change was observed in three children presenting a phenotype of spondyloepiphyseal dysplasia congenita (SEDC), which follow up showed a pattern of severe SEDC featured by severe disproportioned short stature with coxa vara and kyphoscoliosis. The G594E change was associated with two newborns presenting also a SEDC phenotype, however with lethal evolution. In conclusion, the results of this study allowed the identification of 14 new mutations in COL2A1 gene and a better refinement of the genotype-phenotype correlation / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestra em Ciências Médicas

Orientador: Agrício Nubiato Crespo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-21T18:54:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Maunsell_RebeccaChristinaKathleen_D.pdf: 9219065 bytes, checksum: 7a2dbabb91abc053959ca5648b8d5f88 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Alterações benignas das pregas vocais são causas importantes de disfonia e compreendem parte significativa dos casos atendidos pelo otorrinolaringologista na prática diária. Nas últimas décadas diversas técnicas foram descritas para o tratamento cirúrgico destas lesões, com sucesso variável. Para uma excelente qualidade vocal é necessária a preservação do complexo movimento ondulatório da superfície das pregas vocais. A presença de cicatriz nas pregas vocais pode comprometer o resultado da cirurgia e constitui hoje um dos principais desafios da fonocirurgia. Existem inúmeros tratamentos das cicatrizes das pregas vocais e, ainda hoje, com resultados bastante insatisfatórios. Diversos autores têm estudado o processo cicatricial procurando meios de intervir para interromper a produção de substâncias que alterem definitivamente as propriedades vibratórias das pregas vocais. Laringologistas com grandes séries de pacientes tratados cirurgicamente descrevem resultados excelentes com uma ou outra variação de suas técnicas cirúrgicas. Faltam, no entanto, estudos controlados que confirmem o melhor efeito de uma técnica sobre outra. Relatos clínicos tendem a favorecer uma ou outra técnica conforme a experiência e formação do cirurgião, disponibilidade de material e instrumental cirúrgico. Existem divergências quanto à necessidade de fechamento da incisão por meio de sutura, utilização de cola de fibrina ou permitir que a reepitelização ocorra por segunda intenção. Objetivo: Comparar os aspectos cicatriciais resultantes da técnica de microflap das pregas vocais quando utilizadas cola de fibrina, sutura e cicatrização por segunda intenção. Material e Métodos: Realizou-se estudo experimental em coelhos comparando as técnicas: microflap, microflap e seu fechamento com sutura e microflap e seu fechamento com cola de fibrina com o objetivo de avaliar os efeitos de cada técnica na cicatrização das pregas vocais. A cicatrização foi avaliada histologicamente em três tempos pós-operatórios: sete dias, trinta dias e três meses. Avaliou-se a concentração de colágeno, presença de células inflamatórias, espessuras do epitélio e da lâmina própria. Resultados: As três técnicas provocaram um aumento significativo na concentração de colágeno em comparação com grupo controle normal, não operado. A cicatrização por segunda intenção provocou menor concentração de colágeno aos 90 dias. Todas as técnicas apresentaram aumento significativo da espessura epitelial uma semana após as intervenções. O grupo submetido a sutura atingiu níveis semelhantes ao do grupo controle após 90 dias. Após sete dias a espessura da lâmina própria obteve valores próximos aos normais com todas as técnicas. Após 90 dias apenas o grupo submetido a confecção do microflap e uso de cola manteve espessura semelhante ao grupo controle, todos os outros tiveram uma significativa redução da espessura. O número de células inflamatórias aumentou significativamente com todas as técnicas exceto nas pregas vocais submetidas a microflap e cola após 30 dias e, também, nas pregas vocais submetidas à microflap e sutura após 90 dias. Conclusão: Apesar do uso da cola de fibrina e suturas em microfonocirurgia serem seguros e resultar em bons resultados conforme relatados por outros autores, ainda não há evidência científica que justifique seu uso / Abstract: Benign lesions of the vocal cords are an important cause of dysphonia and represent a significant number of patients attended by the otolaryngologist specialist. Several techniques have been described for the surgical treatment of these lesions with variable outcome. Satisfactory vocal quality is imperative when considering a good or bad surgical outcome. To achieve satisfactory vocal quality the complex vibratory movement of the vocal folds must be preserved and kept at its best. Scarring of the vocal folds may compromise vocal outcome and this is the main challenge in microphonosurgery nowadays. Several treatments have been described to solve the problem of scar formation on the vocal folds. Nevertheless, satisfactory long-term vocal quality has been described as quite disappointing. Studies have focused on the early stages of the scarring process of the vocal cords and on the refinement of surgical techniques to prevent or minimize scar formation. There is, a lack of studies comparing surgical techniques and their impact on scar formation. Clinical reports tend to favor one or other technique but these vary depending on the surgeons personal experience and training, instrumentation and material availability. There is a consensus on the need of maximum preservation of the epithelium and superficial lamina propria and minimal exposure of vocal ligament. On the other hand the need of microsuture or glue to cover the wound is controversial. Objective: To compare scarring characteristics of microflap in vocal folds when left to heal by second intention and when the defect was closed with sutures or fibrin glue. Material and methods: A comparative experimental study comparing the microflap technique alone, microflap with microsuture and microflap with fibrin glue was carried out. The experiments were performed out on a rabbit model to evaluate the effects of each technique on vocal cord healing and scar formation. Healing was evaluated histologically one week, 30 and 90 days after surgical intervention. Scar formation was evaluated based on: collagen concentration, inflammatory cell infiltration, epithelium and lamina propria thickness. Results: A significant increase in collagen concentration was observed with all three techniques when compared to normal control vocal folds. Vocal folds submitted to microflap alone presented the smallest values for collagen concentration at 90 days. Conclusion: All techniques showed significant increase in epithelium thickness one week after the procedures. At 90 days epithelium thickness had decreased in all techniques but reached values similar to control vocal folds only in the suture group. Lamina propria thickness was similar to the control group in all groups after one week, after 90 days only the fibrin glue group was not significantly different from the control group. Inflammatory cells where significantly increased in all groups except for the suture group at 90 days. Although the use of sutures and glue is safe and can produce good vocal results as reported by experienced surgeons there remains to be no evidence consistently justifying its use in microphonosurgery / Doutorado / Otorrinolaringologia / Doutora em Ciências Médicas

Orientador: Eliana Aparecida de Rezende Duek / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Mecânica / Made available in DSpace on 2018-08-20T13:28:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cherutti_Giselle_M.pdf: 10018129 bytes, checksum: f1dee789d5fd5395442f06833f2c1fa7 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Um dos desafios da Engenharia Tecidual é o de promover um melhor funcionamento de órgãos e tecidos danificados por doenças ou traumas. Com o objetivo de desenvolver um dispositivo bifásico para futura regeneração dérmica e aplicação na Engenharia Tecidual e Medicina Regenerativa, cultivou-se células fibroblásticas da linhagem VERO sobre uma matriz dérmica suína acelular associada a um polímero biorreabsorvível, poli (L-ácido láctico) (PLLA), com adição de um plastificante, o trietil citrato de sódio (TCS). Para a realização da pesquisa, membranas PLLA-TCS e PLLA puro foram preparadas e caracterizadas através de Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV), Ensaio Dinâmico Mecânico pelo Módulo de Tração, Espectroscopia na região do Infravermelho com Transformada de Fourier (FTIR), Ressonância Magnética Nuclear (RMN 13C e 1H), Ângulo de Contato e Calorimetria Exploratória Diferencial (DSC). Os resultados mostraram que as membranas de PLLA- TCS, tornaram-se porosas e mais hidrofílicas em relação as membranas de PLLA puro, o que aumentou sua interação com as células fibroblásticas. Após a associação das membranas de PLLA-TCS à derme suína, as amostras foram analisadas por meio de Técnicas Histológicas e Microscopia Confocal para avaliar a presença de fibras colágenas e sua organização no arcabouço. Em seguida realizou-se cultura de células fibroblásticas sobre o dispositivo bifásico após 24 horas e 2 dias de cultivo para ensaios de Viabilidade Celular, e posteriormente Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV). Os resultados obtidos pelos ensaios mecânicos e biológicos comprovaram que o material apresentou interação suporte-célula, principalmente devido a sua porosidade e afinidade celular apresentada pela composição estrutural da matriz dérmica, sendo atóxico às células VERO. O material atuou como substrato celular, sendo que a proliferação das células VERO foi maior em comparação com a placa de cultivo (controle), havendo infiltração celular. Concluí-se assim, que o dispositivo estudado apresenta potencial para ser utilizado como um substituto dérmico para implantes em áreas de queimaduras extensas, por ser altamente poroso, promovendo assim, maior migração, adesão e crescimento celular ao mesmo tempo em que o dispositivo é degradado pelo organismo. A capacidade de deformação apresentada pelo futuro substituto dérmico também auxilia em sua implantação, por facilitar o procedimento cirúrgico, que muitas vezes necessita distender um pouco o material para o total recobrimento da lesão; ou as movimentações naturais da pele após o implante. Além disso, o dispositivo minimiza as chances de contração do enxerto, por ser constituído por um componente dérmico / Abstract: One of the challenges of the Tissue Engineering is to promote a better functioning of organs and tissues damaged by diseases or traumas. With target for developing a biphasic device for future regeneration and dermal application in Tissue Engineering and Regenerative Medicine, fibroblasts from VERO cell line were cultivated on a porcine acellular dermal matrix associated to a bioresorbable polymer (PLLA) with the addition of a plasticizer (TCS). For this present study, PLLA-TCS membranes and pure PLLA were prepared and analyzed by means of characterization tests such as Scanning Electron Microscopy (SEM), Dynamical Mechanical Analysis (DMA), Spectroscopy of the Fourier Transform Infrared, Nuclear Magnetic Ressonance (NMR 13C e 1H), Contact Angle and Differential Scanning Calorimetry (DSC). The results showed that the PLLA-TCS, became porous and more hydrophilic compared to pure PLLA, which increased its interaction with the fibroblast cells. After the association of the PLLA-TCS to the porcine dermal matrix, the samples were analyzed by Histological Techniques and Confocal Microscopy to evaluate the presence of collagen fibers and their organization within scaffold. Afterwards, a culture of fibroblasts cell on the biphasic device was performed after 2 days and 24 hours of cultivation the Cellular Viability test was done and posteriorly Scanning Electron Microscopy (SEM). The results of the biphasic device in relation to mechanical and biological tests showed the cell-support interaction, through the analysis of viability, cell morphology and structural organization of collagen fibers and polymer structure, are nontoxic to VERO cells. The material behaves as a cell substrate where proliferation of VERO cells and their infiltration was higher compared to the cell culture plate. It can therefore be concluded that the studied device has the potential to be used as a substitute for dermal implants in areas of extensive burns, for being highly porous, thus promoting increased migration, adhesion and cell growth while the device is degraded by the body. The device deformation capacity also helps in the substitute implantation for facilitating the surgical procedure which often need to stretch the material for coverage of the injury completely or natural movements of the skin after implantation. Furthermore, the device minimizes the chances of skin graft contraction as the gadget consists of a dermal component / Mestrado / Materiais e Processos de Fabricação / Mestre em Engenharia Mecânica