Orientador: Rosiane Lopes da Cunha / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-21T04:58:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Moraes_MarisaCorreade_M.pdf: 1452448 bytes, checksum: cbfd0da3e6558c06281ba86e39f14050 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: O colágeno é um subproduto de matadouro sendo amplamente utilizado como ingrediente na indústria, depois de extraído e purificado. As propriedades tecnológicas do colágeno estão intimamente relacionadas com a distribuição da massa molecular de suas fibras, que varia de acordo com as características da matéria-prima e condições do processo de obtenção do material. Com o intuito de avaliar o efeito das variáveis de processo (tempo,temperatura e pH), o colágeno foi extraído da camada interna da pele bovina e submetido a hidrólise em diferentes condições de temperatura (50, 60 e 80°C) e pH (3, 5, 7 e 10) durante 6 horas. Os produtos obtidos foram avaliados quanto ao teor de proteína solúvel, carga superficial, distribuição de massa molecular, desnaturação protéica, capacidade gelificante e emulsificante. Os produtos mostraram teor de proteína solúvel entre 5 e 82% (m/m), sendo os maiores valores obtidos em tratamentos realizados em temperatura mais elevada e/ou condições mais ácidas. Produtos obtidos em condições extremas de pH (3 e 10) ou temperaturas acima ou similar à temperatura de desnaturação do colágeno (80 e 60°C, respectivamente) tiveram sua estrutura mais desnaturada. Em geral, os hidrolisados obtidos em pH ácido formaram géis mais firmes, exceto o produzido a 80°C. Já os hidrolisados obtidos nos outros valores de pH (5, 7 e 10) formaram géis com baixos valores de tensão de ruptura porém, quando tratados em temperatura acima da temperatura de desnaturação e maior tempo de processo, apresentaram uma melhora nas propriedades gelificantes. A capacidade de retenção de água (CRA) foi próxima de 100%, exceto para hidrolisados obtidos em pH igual a 7 e 10 e temperatura de 50°C. A capacidade emulsificante destes hidrolisados também foi avaliada em emulsões óleo/água (O/A). A estabilidade das emulsões aumentou com a redução do pH e com o aumento do tempo de hidrólise, porém somente a emulsão em pH 3 e 6 horas de hidrólise não apresentou separação de fases. As emulsões mais estáveis (pH 3) apresentaram gotas com baixa polidispersão e diâmetro médio entre 1,5 e 5 µm. Em valores de pH próximo ao pI do colágeno houve a formação de agregados que desestabilizaram as emulsões, o que acarretou elevados valores de diâmetro médio (entre 8 e 17 µm). As emulsões estáveis mostraram comportamento pseudoplástico, porém nas emulsões em que ocorreu a separação de fases, a fase inferior (aquosa) sempre apresentou comportamento Newtoniano, enquanto que a fase creme foi pseudoplástica. De maneira geral, o uso de temperaturas mais amenas e pH ácido, possibilita a produção de hidrolisados com boas propriedades mecânicas, no entanto, em temperatura mais elevada obtém-se um produto com alta solubilidade. Se o objetivo é a obtenção de um gel com alta capacidade de retenção de água o mais indica-se utilizar pH abaixo ou próximo do pI ou elevadas temperaturas. Para melhorar a capacidade emulsificante o uso em pH abaixo do pI é o mais indicado / Abstract: Collagen is a byproduct of the slaughterhouse that is widely used as an ingredient in industry, after being extracted and purified. The technological properties of collagen are closely related to the molecular weight distribution of the fibers, which varies with the characteristics of raw materials and process conditions used to obtain the material. In order to evaluate the effect of process variables (time, temperature and pH), collagen was extracted from the inner layer of bovine hide and subjected to hydrolysis under different conditions of temperature (50, 60 and 80°C) and pH (3, 5, 7 and 10) for 6 hours. The products were evaluated for soluble protein content, surface charge, molecular weight distribution, protein denaturation, gelling and emulsifying capacity. The products showed soluble protein content between 5 and 82% (w / w), in which the highest values were obtained in the treatments carried out at higher temperature and/or under more acidic conditions. Products obtained under extreme conditions of pH (3 and 10) or temperatures above or similar to the collagen denaturation temperature (80 and 60°C, respectively) were more denatured. In general, the hydrolysates obtained at acidic pH formed firmer gels, except that produced at 80°C. The hydrolysates obtained in the other pH values (5, 7 and 10), in turn, formed gels with low values of strain at fractures but, when treated at temperatures above the denaturation during long time, they showed an improvement in those properties. The water holding capacity (WHC) was approximately 100%, except for hydrolysates obtained at pH 7 and 10 and temperature of 50°C. The emulsifying capacity of such hydrolysates, was also evaluated in oil/water (O/W) emulsions. The stability of the emulsion increases with decreasing pH and increasing hydrolysis time, but only at pH 3 and 6 hours of process the emulsion showed no phase separation. These emulsions showed low polydispersity and droplet size between 1.5 and 5 µm. At pH values near the pI of collagen the formation of aggregates that destabilized the emulsions occurred, which resulted in higher droplet size (between 8 and 17 mm). The stable emulsions showed shearthinning behavior, but in case of emulsions in which phase separation occurred, the lower phase (aqueous) always presented Newtonian behavior, while the cream phase was a shearthinning fluid. In general, lower temperatures and acid pH, allows the production of hydrolysates with good mechanical properties, however, at higher temperature gives a product with high solubility. If the goal is to obtain a gel with high water retention capacity, it is indicated using pH below or close to the pI or elevated temperatures. To improve the emulsifying capacity the use of pH below the pI is the most suitable / Mestrado / Engenharia de Alimentos / Mestre em Engenharia de Alimentos

A não-união de fratura é uma complicação relativamente comum em ortopedia humana e veterinária. Dentre os tipos de não-união, a atrófica costuma ser a mais difícil de tratar. Atualmente, o tratamento amplamente utilizado para esses casos é invasivo. Buscando alternativas, o presente estudo objetivou observar se o decanoato de nandrolona interfere positivamente no incremento de regeneração de não-união de fratura óssea com déficit vascular induzida experimentalmente em rato. Foram utilizados 10 ratos adultos da linhagem Wistar (Rattus norvegicus), divididos em 2 grupos (grupo controle - GC e grupo tratado - GNan). Protocolos cirúrgicos foram desenvolvidos a fim de promover fratura na diáfise do fêmur esquerdo com indução de déficit vascular por remoção do periósteo e endósteo e isolamento do foco de fratura com artefato de látex. Em seguida ao estabelecimento do quadro de não-união de fratura nos dois grupos de estudo, foi administrado 1,5mg/kg de decanoato de nandrolona IM, uma vez por semana, durante 4 semanas no GNan. A verificação do perfil morfológico do tratamento foi realizada pelo exames radiológicos periódicos, exame anatomopatológico, microscopia eletrônica de varredura, microtomografia computadorizada e microscopia óptica. Os resultados mostraram que o protocolo de não-união de fratura desenvolvido foi eficiente para estudos qualitativos e quantitativos de crescimento ósseo. Adicionalmente, foi observado que o decanoato de nandrolona promoveu incremento significativo de regeneração óssea em não-união de fratura com déficit vascular por aumento da atividade osteoblástica e redução da atividade osteoclástica no GNan. Houve aumento de massa óssea na cabeça femoral e diferentes regiões da diáfise femoral. As análises de percentual de colágeno não revelaram diferenças significativas entre GC e GNan, portanto, a qualidade óssea entre os grupos é semelhante. Dada viabilidade econômica do fármaco, é sugerido ensaios mais avançados que comprovem o potencial terapêutico do decanoato de nandrolona no tratamento de não-união de fratura atrófica em pacientes humanos e veterinários / The nonunion fracture is a relatively frequent complication in both human and veterinary medicine. Among their types, the atrophic nonunion fracture is usually the most difficult to treat and the elective treatment is surgery. In order to search for alternative therapeutic approach, the present study aimed to analyze the morphological changes induced by the use of nandrolone decanoate in experimental nonunion fracture with vascular deficit in the rat model. Ten adult Wistar rats (Rattus norvegicus) were divided into two groups, control (GC) and nandrolone decanoate (GNan). Surgical protocols were developed to promote fracture nonunion in the left femur diaphysis with vascular deficit by removing the periosteum and endosteum and isolating the fracture site using a latex artifact. After the establishment of the nonunion fracture, the GNan was treated with nandrolone decanoate (1.5mg/kg IM, once a week, during 4 weeks). Periodical radiological examinations were performed. In addition, anatomopathological evaluation, scanning electron microscopy, computed micro-tomography and optical microscopy techniques were performed. The results showed that the surgical protocols to establish the nonunion fracture were efficient and allowed qualitative and quantitative evaluation of bone growth. Besides, the nandrolone decanoate promoted the bone regeneration at the nonunion fracture site by raising the osteblastic activity and reducing the osteclastic activity. The percentage of collagen analysis did not reveal significant differences between GC and GNan. This guarantees some quality for the regenerated bone. Due to the economical viability of the use of nandrolone decanoate use, new advanced studies are recommended to prove the therapeutic potential of that anabolic steroid for the treatment of atrophic nonunion fracture in humans and other animals

Orientador : Mario Fernando de Goes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-02T02:39:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Montes_MarcosAntonioJapiassuResende_D.pdf: 4527824 bytes, checksum: c03f81bab153f2ba9658374caf302faa (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: A união ao esmalte é tida como um procedimento estabelecido, já a união à dentina permanece um desafio. Os maiores obstáculos para uma união à dentina são, além da contração de polimerização rígida dos compósitos restauradores, que desafia a interface, a própria dentina como substrato, devido ao seu alto conteúdo orgânico e umidade. Este estudo, buscou avaliar e discutir o conceito de "parede cavitária resiliente" bem como a morfologia das interfaces de união à dentina. Avaliar morfologicamente os efeitos de prétratamentos de superficie para união à dentina, relacionando-os a implicações clínicas. Avaliar a qualidade marginal de cavidades com alto fator-C, com uso de resinas de baixa viscosidade e remoção do colágeno. Avaliar a adaptação interna de cavidades com alto fator-C e margens em dentina, e avaliar e propor um novo método para observação da região desmineralizada na base da camada híbrida. Com base nos resultados, pôde-se concluir que o uso de uma camada intermediária de baixo módulo de elasticidade entre o adesivo e o compósito restaurador pode absorver tensões, melhorando o selamento marginal e preservando a união. Os pré-tratamentos de superficie promovem alterações diferenciadas na dentina, e devem influir nos procedimentos de união. A qualidade marginal foi melhorada com a remoção do colágeno, para o sistema adesivo com acetona, e o uso de uma camada intermediária de baixo módulo de elasticidade para o sistema autocondicionante. Os sistemas adesivos testados não foram capazes de prevenir a nanoinfiltração quando usados de acordo com as recomendações dos fabricantes. A remoção do colágeno melhorou a adaptação interna com o sistema adesivo com acetona, e preveniu a ocorrência da nanoinfiltração. A metenamma de prata mostrou-se um método apropriado para detecção e estudo da nanoinfiltração / Abstract: While bonding to enamel has been considered a reliable procedure, bonding to dentin remains a challenge. There are two major problems related to dentin bonding: the rigid polymerization shrinkage of the restorative composites that challenges the bonded interface; and dentin itself as a bonding substrate, due to its high organic content and its intrinsic wetness. This study, composed by four independent and sequenced articles, had the following objectives. To evaluate and to discuss the "elastic cavity wall" concept and the morphological aspects of the bonded interfaces. To evaluate the morphological effects of surface pre-treatments recommended to dentin bonding, and relate them to clinical implications; To evaluate the marginal quality of restorations in cavities with high C-factor by using low-viscosity resins and afier collagen depletion. To evaluate the internal adaptation in cavities with high C-factor and margins in dentin, and to evaluate and to propose a new method for observations of the demineralized zone at the base of the hybrid layer. The results demonstrated that the use of a low elastic modulus intermediate layer between the adhesive and the composite resin may absorb stress, thereby may enhance the marginal seal and preserve the bond. The surface pre-treatments promoted distinct alterations on dentin, and must influence considerably the bonding procedures. The marginal quality was improved with collagen depletion, afier acid-etching, for the acetonebased adhesive system, and the use of a low elastic modulus intermediate layer for the selfetching primer. The bonding systems tested were unable to prevent nanoleakage when used according to manufacturer's instructions. Collagen depletion enhanced internal adaptation of restorations for the acetone-based system and prevented nanoleakage occurrence. Silver methenamine staining is a useful method to detect nanoleakage / Doutorado / Doutor em Materiais Dentários

Orientador: Maria Beatriz Puzzi, Maria Helena Stangler Kraemer / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T03:54:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Souto_LuisRicardoMartinhao_M.pdf: 2402921 bytes, checksum: a79b6ae181ce1b24d01ec608815d8bf7 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: A obtenção de uma pele humana que apresente derme e epiderme, reconstruída a partir de células isoladas de pacientes, possibilita a realização de enxertos autólogos de pele reconstruída em laboratório (in vitro) em pacientes com áreas doadoras escassas além de permitir ensaios com substâncias químicas e drogas in vitro e não mais in vivo. A partir da cultura de fibroblastos humanos, é possível obter um número suficiente de células que podem ser injetadas em uma matriz de colágeno bovino tipo I que, mantida imersa em meio de cultura, específico para fibroblastos, permite a formação de uma derme humana reconstruída in vitro. Sobre essa derme, através de cultura de queratinócitos e melanócitos humanos, forma-se uma epiderme diferenciada levando à formação de uma pele humana reconstruída in vitro, constituída de derme e epiderme associadas. Essa pele humana formada é, histologicamente, semelhante à pele humana in vivo. Na derme, identifica-se o tecido colágeno, com suas células, e a matriz extracelular organizados paralelamente à epiderme. Esta se desenvolve em várias camadas. Não há distinção entre derme e epiderme no experimento controle, onde não foi utilizado o colágeno bovino tipo I / Abstract: The technique to obtain human skin presenting dermis and epidermis reconstructed from cells isolated from patients allows the performance of autologous grafts of skin reconstructed in laboratory (in vitro) on patients with scarce donor sites, in addition to permitting trials with chemical substances and drugs no more in vivo, but in vitro. It is possible to obtain a sufficient number of cells from human fibroblast culture that can be injected in bovine collagen type I matrix and kept submerged in a specific culture medium for fibroblasts. This will permit the formation of human dermis reconstructed in vitro. On this dermis, through culture of human keratinocytes and melanocytes, a differentiated epidermis is formed, leading to the creation of human skin reconstructed in vitro, composed of associated dermis and epidermis. This human skin is histologically formed in the same way as human skin in vivo. Collagen tissue can be identified in the dermis, with its cells and extracellular matrix organized in parallel to the epidermis, which is developed in several layers / Mestrado / Patologia Clinica / Mestre em Ciências Médicas

Memoria para optar al título de Químico Farmacéutico / El corazón está constituido por numerosos tipos celulares, de los cuales el 90% corresponde a cardiomiocitos y fibroblastos. Los fibroblastos representan dos tercios de la población celular del corazón y están encargados principalmente del recambio de las proteínas de la matriz extracelular. Estas células tienen la capacidad de responder a una variedad de citoquinas, factores de crecimiento y expresan sus receptores indicando que pueden responder de manera autocrina; y por la acción de TGF-1, se diferencian a miofibroblastos, un fenotipo celular altamente secretor de colágeno y principal encargado del proceso de cicatrización. Por otro lado, existen numerosos antecedentes que demuestran que en fibroblastos cardiacos, la activación de las vías de transducción que conducen al aumento del AMPc contribuye a la reducción de la fibrosis cardiaca, por regular procesos antifibróticos entre ellos disminuir la adhesión, migración y la diferenciación a miofibroblasto. Recientemente se ha descrito en la literatura a la proteína EPAC-1 (del acrónimo exchange protein activated directly by cAMP), quien a través de las GTPasas pequeñas Rap 1 y Rap 2 modula secreción de colágeno y migración. Sin embargo, no existen antecedentes de si EPAC-1 regula en fibroblastos y miofibroblastos cardiacos la adhesión y migración celular; y la contracción de geles de colágeno. Por lo anterior, en este trabajo se estudió los niveles de expresión de EPAC-1 en fibroblastos y miofibroblastos cardiacos, y si EPAC-1 regula los procesos antes mencionados. Para ello, se utilizaron estímulos que aumentan el AMPc (forskolina e isoproterenol) y el agonista directo de EPAC-1 Me-AMPc. Nuestros resultados mostraron que en fibroblastos cardiacos forskolina y Me-AMPc aumentaron la adhesión celular, y este efecto fue menor con isoproterenol; mientras que en miofibroblastos se observó un aumento en la adhesión sólo con el agonista de la EPAC-1. Por otro lado, forskolina, isoproterenol y Me-AMPc, inducen una mayor migración de fibroblastos, mientras que en miofibroblastos no se observaron efectos con esos estímulos. Finalmente, en fibroblastos cardiacos no se observaron efectos sobre la contracción de geles de colágeno. Conclusión: EPAC regula diferencialmente la adhesión y migración de fibroblastos y miofibroblastos cardiacos, indicando que participa de manera muy importante en procesos asociados al remodelamiento cardiaco / The heart is composed of many cell types, of which 90% were cardiomyocytes and fibroblasts. Fibroblasts represent two thirds of the heart cell population and are mainly responsible for the turnover of extracellular matrix proteins. These cells have the capacity to respond to a variety of cytokines, growth factors and express their receptors indicating that they can respond in an autocrine manner; and by the action of TGF-1, they are differentiated into myofibroblasts, a cellular phenotype highly secreting of collagen and main cell involved of the healing process. On the other hand, there are numerous reports that show that in cardiac fibroblasts, the activation of signal transduction pathways leading to increased cAMP levels contributes to the reduction of cardiac fibrosis by regulating profibrotic processes including adhesion, migration and myofibroblastic differentiation. Recently has been described the protein EPAC-1 (exchange protein activated by cAMP), who through the small GTPases Rap 1 and 2, modulates secretion of collagen and migration. However, there is no data on whether EPAC-1 regulates cardiac fibroblasts and myofibroblasts adhesion and migration, and contraction of collagen gels. Therefore, in this work we studied in cardiac fibroblasts and myofibroblasts the expression levels of EPAC-1, and if EPAC-1 regulates the above mentioned processes. To do this, we used stimuli that increase cAMP (forskolin and isoproterenol) and direct agonist of EPAC-1 (Me-cAMP). Our results showed that in cardiac fibroblasts Me-cAMP and forskolin increased cell adhesion, and this effect was less with isoproterenol, while in myofibroblasts showed an increased adhesion only with the agonist of EPAC-1. Furthermore, forskolin, isoproterenol and Me-cAMP, induced an increased migration of fibroblasts, myofibroblasts whereas no effects were observed with these stimuli. Finally, cardiac fibroblasts showed no effects on collagen gel contraction. Conclusion: EPAC differentially regulates adhesion and migration of cardiac fibroblasts and myofibroblasts, indicating that it play an important role in processes associated with cardiac remodeling

Tesis presentada a la Universidad de Chile para optar al grado de Doctora en Farmacología / La fibrosis cardiaca se genera por un depósito exagerado de proteínas de matriz extracelular (MEC) producto de la activación de los fibroblastos (FC). Estas células, representan cerca de un 60 a 70% de las células del corazón, y en respuesta a un daño, son activadas por diversas citoquinas y factores de crecimiento (entre ellas, TGF-β1, Ang II, etc.), los que desencadenan en ellas un cambio estructural y funcional que las diferencia a miofibroblastos cardiacos (MFC). Los MFC tienen como principal función la de secretar proteínas de la MEC con el fin de contraer y reparar la zona dañada en el caso de un infarto al corazón. Así, el MFC juega un papel crucial en la respuesta frente a un daño en el tejido cardiaco. A pesar de ello, es muy poco lo que se sabe con respecto al comportamiento de este tipo celular frente al remodelado cardiaco. Además, se tiene un escaso conocimiento acerca de los receptores celulares que presenta este tipo celular, pudiendo ser piezas claves en la regulación de la secreción exacerbada de MEC y por tanto, de la generación de fibrosis del tejido. En la fibrosis cardiaca, adquiere gran importancia la participación del sistema calicreina-cinina. Se ha propuesto que la ausencia de los receptores de cininas es deletérea a nivel del tejido cardiaco, especialmente en la respuesta frente a una injuria. Dentro de este sistema, se encuentran bradicinina (BK) que actúa sobre el receptor B2 de cininas (B2R) y lis-des-Arg-BK (DAKD) que ejercen su acción sobre el receptor B1 (B1R). En FC se ha demostrado que, BK produce liberación de NO y de prostaglandinas, además de reducir la secreción de colágeno. Sin embargo, en MFC se desconocen que subtipos de receptores están presentes, así como las vías transduccionales que se activan tras la estimulación de ambos subtipos de receptores. En la presente tesis y de acuerdo con el contexto, se realizaron diversos experimentos para demostrar la existencia y funcionalidad de los receptores de cininas tanto en FC como en MFC. Por western blot (WB) se evidenció la presencia de ambos receptores tanto en FC como en MFC, no obstante, la expresión de B1R es mayor en MFC que FC; mientras que B2R permanece constante. La expresión de B1R aumentó tras el tratamiento de FC con TGF-β1, principal diferenciador a MFC. Además mediante las técnicas de inmunofluorescencia y ensayos de radioligando, se determinó que en FC el B1R se encuentra localizado principalmente a nivel intracelular, mientras que en MFC se localiza marcadamente en las membranas plasmáticas. Por otro lado, mediante el análisis de los movimientos de calcio intracelular, se demostró que B2R es funcional en ambos tipos celulares, mientras que B1R es funcional en MFC y no así en FC. Sin embargo, en FC la preincubación con el agonista de B1R (DAKD), y la posterior estimulación (30 min) con el mismo agonista, mostró que estos receptores son también funcionales. Mediante inmunofluorescencia se evidenció que tras la preincubación con el agonista existe una relocalización de B1R hacia las membranas plasmáticas, dónde son capaces de generar movimientos de calcio intracelular, demostrando que también son receptores activos. Además, en MFC se demostró que la activación de B1R y B2R por sus respectivos agonistas induce una reducción en la expresión de colágeno I (Col I). En FC, la activación de B2R induce la disminución en los niveles de Col I, mientras que la activación de B1R que provoca la reducción en la expresión de Col I, requiere de un estímulo previo que redistribuya este receptor hacia la membrana plasmática. Finalmente, el uso de distintos inhibidores permitió demostrar que en MFC, tanto la activación de B1R como B2R, conducen a la disminución en la expresión de Col I a través de la activación de una vía transduccional que es compartida por ambos receptores, y que corresponde a: PKC/PLA2/COX-2/PGI2/IPR. En resumen, los resultados de esta tesis sostienen que en MFC la activación de B1R y B2R conduce a la disminución de la expresión de Col I, lo cual se relaciona a los efectos antifibróticos de las cininas en el progreso de patologías como la fibrosis cardiaca / Cardiac fibrosis is generated by an excessive deposit of extracellular matrix proteins (ECM) product of fibroblast (CF) activation. These cells account for about 60 to 70% of the cells in the heart. In response to injury, fibroblasts are activated by various cytokines and growth factors (including TGF-β1, Ang II, etc.), which trigger in them structural and functional changes, differentiating to cardiac myofibroblasts (CMF). The main function of CMF is to secrete ECM proteins to repair the damaged area in the case of a heart attack. Thus CMF play a crucial role in the response to injury in the heart tissue. However, very little is known about the behavior of this cell type versus cardiac remodeling. Furthermore, the knowledge on the receptors present on this cell type is scarce, and they could be key elements in the regulation of the exacerbated secretion of MEC and therefore the generation of tissue fibrosis. In cardiac fibrosis, the participation of the kallikrein-kinin system is very important. It has been proposed that the absence of kinin receptors is deleterious for cardiac tissue, especially in response to an injury. Within this system are bradykinin (BK) which acts on the B2 kinin receptor (B2R) and lis-des-Arg-BK (DAKD) that exerts its action on the B1 receptor (B1R). In CF, it has been shown that BK induces NO release and prostaglandins production, which reduce collagen secretion. However, in CMF it is not known which kinin receptor subtype is present and what signal transduction pathways are activated by these receptors. In this thesis and in accordance with the context, various experiments were conducted to prove the existence and functionality of kinin receptors in both CF and CMF the presence of both receptors in both CF as MFC was observed by Western blot (WB), however, expression of B1R in CMF was greater than in FC, while B2R remained constant. B1R expression increased after treatment of CF with TGF-β1, the main differentiator to CMF. By immunofluorescence techniques and radioligand assays, it was determined that CF B1R was located primarily intracellularly, whereas CMF was markedly located in the plasma membranes. Moreover, by analyzing intracellular calcium movements, B2R was shown to be functional in both cell types, while B1R was functional in CMF, but not in CF. However, when CF were preincubated with the B1R agonist (DAKD) and subsequently stimulated (30 min) with the same agonist, these receptors were also functional. By Immunofluorescence it was shown that after preincubation with the agonist the B1R was relocated to plasma membranes, where they were able to generate intracellular calcium movements, showing they are active receptors. Furthermore, it was demonstrated that B1R and B2R activation in CMF by their respective agonists, induces a reduction in the expression of collagen I (Col I). In contrast in CF, B2R activation induced a decrease in Col I levels, whereas a previous stimulus that redistributes B1R receptor to the plasma membrane is required to induce a reduction in Col I expression after B1R stimulation. Finally, the use of various inhibitors shows that CMF allowed both B1R activation and B2R, leading to a decrease in Col I expression through activation of a signal transduction pathway which is shared by both receptors, and that is mediated by PKC/PLA2/COX-2/PGI2/IPR. In summary, the results of this study argue that B1R and B2R activation in CMF leads to decreased expression of Col I, which is related to antifibrotic effects of kinins in the progress of diseases such as cardiac fibrosis / Conicyt Fondecyt

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2015-11-17T15:31:33Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1790744 bytes, checksum: f9ee2408e0dc25bc8460ac7a1ac69566 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-17T15:31:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1790744 bytes, checksum: f9ee2408e0dc25bc8460ac7a1ac69566 (MD5) Previous issue date: 2015-02-20 / O carcinoma de células escamosas (CCE) é uma neoplasia epitelial maligna que acomete cães e diversas outras espécies, incluindo a humana. O CCE afeta vários sítios anatômicos e pode desenvolver metástase. Este trabalho teve como objetivo proporcionar informações sobre fatores de risco, manifestação clínica, diagnóstico, tratamento e prognóstico, assim como a caracterização das fibras colágenas tipo I e III no estroma de CCE cutâneo em cães. Este estudo utilizou 44 amostras de pele incluídas em parafina, provenientes de dois serviços de diagnóstico em patologia veterinária, com prévio diagnóstico de CCE cutâneo. As amostras foram avaliadas histologicamente utilizando coloração de hematoxilina e eosina para classificação segundo o grau de diferenciação tumoral e, por Picrosirius Red sob luz polarizada para quantificação da expressão de colágenos tipos I e III. O colágeno tipo III mostrou maior expressão nos CCE cutâneos bem diferenciados, porém, isto só foi evidente quando as amostras foram classificadas em apenas dois graus de diferenciação: bem diferenciadas ou pouco diferenciadas. Considerando a distribuição dos tipos de colágeno segundo a região do corpo, o colágeno tipo I não apresentou diferença estatística entre cabeça, tronco e membros. Entretanto, para o colágeno do tipo III, a análise revelou que a quantidade expressa no tronco é significativamente maior que no membro. O papel do colágeno do tipo III nas neoplasias não está bem esclarecido e outros fatores além do grau de diferenciação celular podem estar envolvidos em sua expressão e determinar sua importância na biologia tumoral. / Squamous cell carcinoma (SCC) is a malignant epithelial tumor that affects dogs and several other species, including human. The SCC occurs in various anatomical sites and can develop metastasis. This study aimed to provide information about risk factors, clinical presentation, diagnosis, treatment and prognosis, as well as the characterization of collagen type I and III in SCC stroma in dogs. This study used 44 canine skin biopsies paraffin-embedded previously diagnosed with cutaneous SCC from two veterinary pathology diagnostic services. The samples were evaluated histologically with hematoxylin and eosin staining to evaluate the degree of cell differentiation, and with Sirius Red staining under polarized light to quantify the expression of collagen types I and III. Type III collagen expression was higher in well-differentiated SCC, however, it was only evident when samples were classified into only two degrees of differentiation: well differentiated or poorly differentiated. Considering the distribution of collagen types according to body region, type I collagen showed no statistical difference between head, trunk and limbs. However, for type III collagen, the analysis showed that the quantity expressed in the trunk is significantly larger than the member. The role of type III collagen in cancer is not very clear and factors other than cell differentiation degree may be involved in its expression and determine its importance in tumor biology.

Orientador: Pedro Duarte Novaes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-22T06:39:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_KarlaRovarisda_M.pdf: 5383756 bytes, checksum: f46eb2dfd48068a21c19841f2e4d3581 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Os efeitos adversos da radioterapia sobre os tecidos orais vêm sendo estudados com intuito de, cada vez mais, entender como esta age sobre o organismo, bem como para o desenvolvimento de métodos ou substâncias que visem à minimização dessas sequelas. Dentre os tecidos que estão na área de exposição, está o ligamento periodontal, que se afetado, pode ocasionar a perna dentária que impreterivelmente interfere na qualidade de vida do indivíduo. Este trabalho teve como objetivo avaliar o efeito da radiação ionizante sobre o ligamento periodontal do dente incisivo de rato albinus wistar, por meio da microscopia de polarização e do teste de força. A amostra constituiu-se de 30 ratos albinus wistar machos divididos em dois grupos, o grupo controle (15) e o grupo irradiado (15). O grupo irradiado foi submetido à sessão única de radioterapia com dose de 15Gy e após 14 dias todos os animais foram sacrificados. Um animal de cada grupo foi perdido durante a execução do trabalho. Desta forma, sete animais de cada grupo foram submetidos ao teste de resistência do ligamento periodontal e os sete restantes tiveram a organização do colágeno avaliada através da microscopia de polarização. Os resultados mostraram que ambos os testes apresentaram diferença estatisticamente significante entre os grupos (p<0,001). Através dos coeficientes de correlação de Pearson encontrou-se também uma forte correlação entre os resultados dos testes (resistência/polarização) de cada grupo (controle/irradiado) (R = 0,683; p < 0,001). Portanto, concluiu-se que a radioterapia pode levar à diminuição da resistência à força de intrusão e provocou a desorganização do colágeno no ligamento periodontal / Abstract: The adverse effects of radiotherapy on oral tissues have been studied in order to increasingly understand how it works on the body, as well as for the development of methods and substances aimed at minimizing these sequelae. Among the tissues that are in the exposition area, is the periodontal ligament which, when affected, can lead to tooth loss, that unfailingly interferes with quality of life. This study had as purpose to evaluate the effect of ionizing radiation over the periodontal ligament of the incisive tooth of the albinus wistar rat, trough the polarizing microscope and the strength test. The sample was composed of 30 albinus wistar male rats, separated into two groups, the control group (15) and the irradiated one (15). The irradiated group was subjected to an only session of radiotherapy, with a 15Gy dose, and after 14 days all the animals were sacrificed. One animal in each group was lost during the study's execution. Hence, seven animals of each group were subjected to the periodontal's ligament resistance test, and the seven remaining had their collagen organization evaluated trough the polarizing microscopy. The results showed that both tests exhibited statistically significance difference between the groups (p<0,001). Using the Pearson correlation coefficients a strong correlation was also found between the tests results (resistance/polarizing) of each group (control/irradiated) (R = 0,683; p<0,0001). Thereby, the conclusion was that radiotherapy can lead to a diminished resistance to the intrusion strength and to a disorganization of the periodontal's ligament collagen / Mestrado / Radiologia Odontologica / Mestra em Radiologia Odontológica

Orientador: Eliana Aparecida de Rezende Duek / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Mecânica / Made available in DSpace on 2018-08-18T15:18:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mas_BrunaAntunes_M.pdf: 4024365 bytes, checksum: 4922b258d265a9070576f02830e45d40 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: Polímeros biorreabsorvíveis são amplamente empregados como arcabouços na engenharia tecidual. No entanto, devido à natureza hidrofóbica, técnicas de modificação de superfície embasadas na enxertia de grupos químicos funcionais e imobilização de moléculas bioativas são desenvolvidas no intuito de promover a biofuncionalização da superfície desses polímeros, ocasionando uma melhora significativa da interação célula /polímero. Este estudo teve por objetivo desenvolver e caracterizar uma superfície biomimética em arcabouços do copolímero poli (L-co-D,L ácido lático)- PLDLA, através da enxertia de grupos (-COOH) e imobilização de colágeno tipo I. Os arcabouços de PLDLA 70/30 foram obtidos pela técnica de lixiviação de porógenos e submetidos ao método de fotopolimerização oxidativa da superfície do material, seguido da copolimerização enxertiva do ácido acrílico (PLDLA-AAc) e imobilização do colágeno tipo I (PLDLA-Col). A superfície das amostras foi caracterizada por Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV), Microscopia de Força Atômica (MFA), Espectroscopia de Reflectância Total Atenuada (FTIR-ATR), Espectroscopia de Fotoelétrons Excitados por raios-X (XPS) e ângulo de contato. As imagens da MFA e fotomicrografias da MEV demonstraram a formação de poros e rugosidade na superfície dos arcabouços de PLDLA-AAc e, deposição do colágeno com formação de uma estrutura fibrilar em pontos inespecíficos da superfície dos arcabouços do PLDLA-Col, resultando no aumento da rugosidade superficial de 149.5nm (PLDLA puro) para 295nm (PLDLA-Col). Os espectros de FTIR-ATR do PLDLA, PLDLA-AAc e PLDLA-Col confirmaram a presença dos mesmos picos de absorção para todos os tratamentos e, a presença dos picos em 1662 e 1559cm-1, típicos de amida I e II nas amostras de PLDLA-Col. A citocompatibilidade dos arcabouços foi avaliada através do cultivo de células osteoblásticas primárias submetidas aos ensaios de citotoxicidade e adesão celular inicial, síntese de colágeno e observação da morfologia celular, obtidas pela MEV. Os resultados obtidos mostraram que a superfície biomimética dos arcabouços de PLDLA-Col melhora, significantemente, a taxa de adesão e proliferação celular bem como estimula a síntese de colágeno (p<0,01). Estes resultados são indicativos de que o método de modificação de superfície utilizado no presente estudo pode ser usado no desenvolvimento de arcabouços bioativos e biomiméticos com potencial aplicação na engenharia tecidual / Abstract: Bioreabsorbable polymers are widely used as scaffolds in tissue engineering. However, due to their hydrophobic nature, modification techniques based on graft of chemical functional groups and immobilization of bioactive molecules have been developed, in order to promote biofuncionalization of material surface, causing better interaction between cell / polymer. This study aimed at developing and characterizing a biomimetic surface on scaffolds of the copolymer poly (L-co-D, L lactic acid) (PLDLA 70/30), by grafting of chemical functional groups and immobilized with collagen type I. The scaffolds were obtained by porogen leaching, and submitted to photo-oxidation method of the material surface followed by grafting polymer polymerization of the acrylic acid solution (PLDLA-Acc) and immobilization of the type I collagen (PLDLA-Col). The sample surfaces were characterized by Scanning Electron Microscopy (SEM), Atomic Force Microscopy (AFM) , Attenuated Total Reflectance Infrared Spectroscopy (ATR-FTIR), X-ray Photoelectron Spectroscopy (XPS) and contact angle. AFM images and SEM electromicrographs exhibited porous formation and roughness on the PLDLA-AAc surfaces and collagen deposition with net-like fibrillar structure in non-specific areas of the PLDLA-Col scaffolds, resulting an increase in surface roughness from 149.5 nm (PLDLA pure) to 295nm (PLDLA-Col). ATR-FTIR spectra of PLDLA, PLDLA-AAc and PLDLA-Col exhibited the same absorption peaks for all samples, as well as peaks of 1662 and 1559cm-1 , typical of amide I and II in PLDLA-Col samples. Scaffolds cytocompatibilty was evaluated by osteoblastic-like cell culture, submitted to cytotoxicity and initial cell adhesion assays, collagen synthesis and observation of cell morphology obtained by SEM. The result showed that biomimetic surface of PLDLA-Col scaffolds significantly improves adhesion and cell proliferation rates, as well as stimulates collagen synthesis (p<0,01). These results indicate that the surface modification method in the present study can be used in the development of bioactive and biomimetic scaffold with potential application in tissue engineering / Mestrado / Materiais e Processos de Fabricação / Mestre em Engenharia Mecânica

Orientador: Luiz Andre Freire Pimenta / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-24T01:11:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Saboia_VicentedePauloAragao_M.pdf: 3642627 bytes, checksum: 3810c206c50b67463e5e76e570894df6 (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: O objetivo deste trabalho foi verificar os efeitos remoção do colágeno na resistência ao cisalhamento de dois sistemas adesivos de frasco único e examinar a micromorfologia da dentina, antes e após o teste de cisalhamento, em lupa estereoscópica e MEV. Foi usado como substrato dentina planificada de terceiros molares recém-extraídos e armazenados em formal a 10% (pH neutro). Foram usados os adesivos Prime & Bond 2.1 (PB-Dentsply) e Single Bond (SB-3M). Nos grupos controle (1 e 3), após aplicação da ácido fosfórico a 37%, os adesivos foram aplicados de acordo com as instruções do fabricante, enquanto que nos grupos experimentais (2 e 4), após o condicionamento ácido, foi aplicada uma solução de hipoclorito de sódio a 10% (H), por 1 minuto, para remover o colágeno exposto pelo condicionamento ácido. Foram cqnfeccionados cilindros de 3 mm de diâmetro por 5 mm de altura com resina composta Z-100 (3M). Após 24 horas em ambiente úmido a 37 °e, foi realizado o teste mecânico de cisalhamento com velocidade de 0,5 mm/min. Os resultados explorátórios e do Teste de Kruskal-Wallis podem ser observados na tabela abaixo. ... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: The purpose of this study was to evaluate the effect of removing collagen using Single Bond-3M (SB) according to the manufacturer's to four groups and on the shear bond strength for two single-bottle adhesives systems and to examine the dentin surfaces after shear test. The buccal and lingual surfaces of 80 extracted human third molars were ground to expose dentin, then polished with 320, 400 and 600-grit aluminum oxide. Teeth were randomly assigned received the following treatments: group 1, samples were conditioned with 37% phosphoric acid , rinsed and left moist, Prime & Bond 2.1-Dentsply (PB) adhesive was applied according to manufacturer's directions, and restorative Z100 (3M) composite resin was bonded to the dentin surface; group 2, the same procedures were followed as for group 1 except the surfaces were treated with 10% NaOCI for 1 minute, after acid conditioning; group 3, the same technique was followed as for group 1 , recommendations; group 4, the same procedure was followed for group 2, using Single Bond. The specimens were stored. in humidity at 37°C for 24 hours and tested in a shear mode at a crosshead speed of 0,5 mm/minute. The median of results were: G2=21,84, G3=15,99, G1=15,02 and G4=13,82. The Kruskal-Wallis test and multiple comparisons were used for statistical analysis of the data. A 1 minute exposure of dentin to 10% NaOCI following acid conditioning resulted in significant increase on the dentin shear bond strength for Prime & Bond 2.1 (group 2). The same treatment for Single Bond (group 4) resulted in significant reduction on the values of adhesion. Groups 1 and 3 were not statistically different from each other. Group 2 showed more dentin-cohesive failures than the other groups. Under SEM observations, there were morphological differences between the groups treated with NaOCI and those that did not received this treatment / Mestrado / Dentística / Mestre em Clínica Odontológica