Made available in DSpace on 2015-05-14T12:59:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1623079 bytes, checksum: 1db342a9defb06c8f56de918c6d74da7 (MD5) Previous issue date: 2012-02-13 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Mimosa tenuiflora (Willd.) Poir., popularly known as Jurema preta, is a plant family Mimosaceae, found mainly in the states of Piauí, Ceará, Rio Grande do Norte, Paraiba, Pernambuco, Alagoas, Sergipe and Bahia, which this species is typical of semi-arid areas of Brazil. In folk medicine, the bark of the stem is the main part of the plant used to treat various ailments such as burns and inflammations. This study aimed to investigate the cytotoxicity and genotoxicity of crude ethanolic extract (BSE) and Mimosa tenuiflora in prokaryotic and eukaryotic cells in order to encourage later, safely, its use as a source of potentially therapeutic drugs or act as pharmacological tools. To this end, we evaluated the antimicrobial activity against Gram negative and Gram positive clinical importance, investigated the potential cytotoxic utilizing the hemolytic activity and osmotic fragility (anti-hemolytic), as well as potential antioxidant and anti-oxidant in human erythrocytes, there was observed the potential mutagenic and anti-mutagenic in bacterial cells through the Ames test and also evaluated the clastogenic and aneugenic potential using the micronucleus test in peripheral blood of mice in vivo. The results showed that the EEB and the tannins of M.tenuiflora had antibacterial activity against all strains of Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa and Escherichia coli tested and this was characterized as strong with MIC ranging from 62,5 to 250 μg.mL-1. In the investigation of cytotoxic of M.tenuiflora it was observed that the extract did not induce a significant degree of hemolysis and even protected the erythrocyte membrane against hemolysis. In tests of the oxidizing activity of M.tenuiflora, this plant did not cause oxidation of hemoglobin and tests of the extract antioxidant activity behaved as a powerful antioxidant. In the investigation of genotoxicity, we observed that M.tenuiflora was not mutagenic, or in vitro tests and in vivo. Thus, the extract of M.tenuiflora has no cytotoxic or genotoxic that compromise its use as a source of potentially therapeutic drugs. / Mimosa tenuiflora (Willd.) Poir., popularmente conhecida como jurema preta, é uma planta da familia Mimosaceae, encontrada principalmente nos estados do Piauí, Ceará, Rio Grande do Norte, Paraíba, Pernambuco, Alagoas, Sergipe e Bahia, sendo esta espécie típica das áreas semi-áridas do Brasil. Na medicina popular, a casca do caule é a principal parte da planta utilizada no tratamento de diversas enfermidades como infecções. O presente trabalho teve como objetivo investigar a citotoxicidade e a genotoxicidade do extrato etanólico bruto (EEB) da Mimosa tenuiflora em células procarióticas e eucarióticas com a finalidade posterior de incentivar, com segurança, a sua utilização como fonte de drogas potencialmente terapêuticas ou que atuem como ferramentas farmacológicas. Para tanto, avaliou-se a atividade antimicrobiana frente a bactérias Gram negativas e Gram positivas de importância clínica, investigou-se o potencial citotóxico utilizando como parâmetro a atividade hemolítica e a fragilidade osmótica (anti-hemolítica), assim como o potencial oxidante e antioxidante em eritrócitos humanos, observou-se o potencial mutagênico e antimutagênico em células bacterianas através do teste de Ames e também avaliou-se o potencial clastogênico e aneugênico através do teste do micronúcleo em sangue periférico de camundongos in vivo. Os resultados mostraram que o EEB e os taninos de M.tenuiflora tiveram atividade antibacteriana contra toda as linhagens de Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa e Escherichia coli testadas, e esta foi caracterizada como forte com CIM variando de 62,5 a 250 μg.mL-1. Na investigação citotóxica do EEB de M.tenuiflora observamos que o extrato não induziu um grau significativo de hemólise e ainda protegeu a membrana do eritrócito contra hemólise. Nos testes de atividade oxidante o EEB de M.tenuiflora não provocou oxidação da hemoglobina e nos testes de atividade antioxidante o extrato se comportou como um poderoso agente antioxidante. Já na investigação genotóxica, observamos que o EEB da M.tenuiflora não foi mutagênico, nem nos testes in vitro nem in vivo e apresentou efeito antimutagênico em algumas linhagens ensaiadas. Sendo assim, a baixa atividade citotoxicidade e genotoxicidade de M.tenuiflora não comprometem seu uso como fonte de droga potencialmente terapêutica.

Submitted by MARIANA RILLO SATO null (marillosato@gmail.com) on 2016-02-22T18:19:25Z No. of bitstreams: 1 Dissertação FINAL - COM FICHA.pdf: 2624639 bytes, checksum: 73f8b5a016f99a538e050ac383d48e8e (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2016-02-24T14:12:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 sato_mr_me_arafcf_par.pdf: 1019774 bytes, checksum: ef4be326766e21e326047c976e98d864 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-24T14:12:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 sato_mr_me_arafcf_par.pdf: 1019774 bytes, checksum: ef4be326766e21e326047c976e98d864 (MD5) Previous issue date: 2016-02-03 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Tuberculosis (TB) is known worldwide as the leading infectious disease of chronic evolution in which the abandonment of treatment before the recommended period tends to cause the development of more severe disease, such as the appearance of resistant strains. Copper interacts with biologically active ligands developing copper(II) complex with activities antimicrobial. Nanostructured lipid carriers (NLCs) have gained prominence in the pharmaceutical field, since they have the ability to compartmentalize efficiently lipophilic drugs and modify their properties and behavior in the biological environment. The aims of this study was to evaluate the potential of copper(II) complexes-loaded NLCs applicable in the study against Mycobacterium tuberculosis. Copper(II) complexes containing isoniazid binder were obtained and they were entitled C1, C2, and C3 where they have co-binders anionic chloride, cyanate and thiocyanate, respectively. NLCs were obtained by fusion-emulsification technique, formulations were obtained by Ultra turrax at 5000 rpm for 10 minutes followed by sonicator at 8% amplitude for 20 minutes to obtain stable NLCs, those were incorporated of 3.50% and 0.50% to surfactant poloxamer 407 and cetrimonium bromide, respectively, and 2.07%, 2.50% and 0.88% of polyoxyethylene stearate lipids, triglycerides of capric acid/caprylic and ethoxylated hydrogenated castor oil 40 OE (F32) or castor oil (F38), respectively. Copper(II) complexes were incorporated into NLCs (F32.OE.C1, F32.OE.C2, F32.OE.C3 and F38.OR.C1, F38.OR.C2, F38.OR.C3) and characterized by diameter (Dmn) , polydispersivity index (PDI) and zeta potential (ZP) for 1, 15, 30, 45 and 60 days, which revealed homogeneous dispersion and excellent physical stability over the same period; the atomic force microscopy confirmed that developed NLCs are spherical particles dispersions at nanometer scales; differential scanning calorimetry revealed that the constituents used in the formulations interacted in the systems and confirmed that copper(II) complexes were incorporated in the NLCs. The antimicrobial activity of the complexes against M. tuberculosis H37Rv was determined by the resazurin microdilution assay demonstrated potential anti-TB when complexes were incorporated into NLCs. Cytotoxicity assay in murine macrophage-like cells J774A.1 (ATCC TIB-67) e MRC-5 (ATCC-CCL-171) for 24 h and acute toxicity of the complex against Artemia salina L (Artemiidae) showed the formulations have toxicity in all tested concentrations; although published reports indicated the safety of the components used of the formulations, studies should be conducted in animal models to assess the acute toxicity. These results suggest that NLCs have potential application in the study against Mycobacterium tuberculosis. / A Tuberculose (TB) é mundialmente conhecida como a principal doença infecto-contagiosa de evolução crônica, em que o abandono do tratamento antes do período recomendado tende a ocasionar o desenvolvimento de casos mais graves da doença, gerando o aparecimento de cepas resistentes. O cobre interage com ligantes biologicamente ativos desenvolvendo complexos de cobre(II) com ações antimicrobiana. Carreadores lipídicos nanoestruturados (CLNs) vêm se destacando na área farmacêutica, pois apresentam a capacidade de compartimentalizar, de maneira eficiente fármacos lipofílicos e de modificar suas propriedades e comportamento em meio biológico. O objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial de CLNs acrescidos de complexos de cobre(II) aplicáveis no estudo frente ao Mycobacterium tuberculosis. Foram obtidos 3 complexos de cobre(II), intitulados C1, C2 e C3 que contem o ligante isoniazida e os co-ligantes aniônicos cloreto, tiocianato e cianato, respectivamente. Os CLNs foram obtidos pela técnica de fusão-emulsificação, testando-se diversas formulações por Ultra turrax a 5000 rpm por 10 minutos e por sonicador com amplitude 8% por 20 minutos até a obtenção de CLNs estáveis, que foram constituídos de 3,50% e 0,50 % de poloxamer 407 e brometo de cetrimônio, respectivamente, e de 2,07%, 2,50% e 0,88% de estearato de polioxietileno, triglicérides do ácido cáprico/caprílico e óleo de rícino hidrogenado e etoxilado 40 (F32) ou óleo de rícino (F38), respectivamente. Os complexos de cobre(II) foram incorporados nos CLNs (F32.OE.C1, F32.OE.C2, F32.OE.C3, e F38.OR.C1, F38.OR.C2, F38.OR.C3), e caracterizados por diâmetro hidrodinâmico médio (Dnm), índice de polidispersidade (IPD) e potencial zeta (PZ) por 1, 15, 30, 45 e 60 dias, revelando homogeneidade da dispersão e excelente estabilidade física; a microscopia de força atômica confirmou que os CLNs tratam-se de dispersões de partículas esféricas em escalas nanométricas; a calorimetria exploratória diferencial revelou que os componentes utilizados nas formulações interagiram para formação do sistema e que os complexos de cobre(II) foram incorporados nos CLNs. A atividade antimicrobiana dos complexos, frente ao M. tuberculosis H37Rv determinada pelo ensaio de microdiluição com Resazurina evidenciaram potencialização da ação anti-TB pela incorporação dos complexos nos CLNs. Os ensaios de citotoxicidade frente à linhagem de macrófagos J774A.1 (ATCC TIB-67) e de MRC-5 (ATCC-CCL-171) em 24 h e a toxicidade aguda dos complexos frente à Artemia salina L., mostraram que as formulações apresentaram toxicidade em todas as concentrações testadas; apesar de relatos da literatura indicarem a segurança dos componentes das formulações, estudos devem ser realizados em modelos animais para avaliar a toxicidade aguda. Os resultados sugerem que os CLNs apresentam aplicação potencial no estudo frente ao Mycobacterium tuberculosis.

Orientador: Vera Lucia Borges Isaac / Coorientador: Marcos Antonio Corrêa / Banca: Hérida Regina Nunes Salgado / Banca: André Rolim Baby / Resumo: O aumento da expectativa de vida tem provocado grande demanda por produtos que auxiliem na prevenção do envelhecimento da pele. O ácido hialurônico (AH) está sendo muito utilizado em formulações antienvelhecimento por se acreditar que ele possa atenuar os efeitos que o tempo produz na pele. Porém, para o desenvolvimento de um cosmético, é necessário avaliar o risco potencial dos ingredientes que compõem a formulação, que devem estar em concentração que apresente margem de segurança adequada, sendo importante a realização de teste de absorção, estudo do potencial de risco irritativo e testes de mutagenicidade. O objetivo deste estudo foi desenvolver um gel de ácido hialurônico com alta massa molecular e incorporar ácido hialurônico de massas moleculares menores, realizar o controle microbiológico dos géis, avaliar a toxicidade dérmica aguda e a citotoxicidade, determinar o comportamento reológico das formulações, analisar seu perfil de liberação, permeação e retenção cutânea in vitro. Foi preparado como gel base, a mistura de água e AH de alta massa molecular e, posteriormente, neste gel formado foram incorporados os AHs de menores massas moleculares. O controle de qualidade microbiológico foi realizado de acordo com a Farmacopeia Brasileira (2010), a avaliação da toxicidade dérmica aguda foi realizada utilizando-se 25 ratos wistar, que foram divididos em 5 grupos com 5 animais em que cada grupo recebeu a aplicação de um dos géis para posterior analise dos resultados. Para a avaliação da citotoxicidade utilizou-se o método colorimétrico 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)2,5-difenil brometo de tetrazoilium (MTT) descrito por MOSMANN, utilizando-se linhagens celulares de HepG2 (Human Epidermoide Cancer Cells) e HaCaT. As amostras tiveram seu comportamento reológico avaliado em reômetro HAAKE. O estudo de liberação, permeação e retenção cutânea... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Increased life expectancy has caused a great demand for products that help in the prevention of skin aging. Hyaluronic acid is being used in anti-aging formulations because it is expected that it can decrease the effects of time in the skin. However, for the development of a cosmetic it is necessary to evaluate the potential risk of the ingredients in the formulation that should be with adequate concentration to provide a margin of safety, being important to carry out absorption test, studies of the potential risk of irritating the skin and mutagenicity tests. The aim of this study was to develop a gel of hyaluronic acid with high molecular weight and incorporate hyaluronic acid with small molecular weights in it, analyze the microbiological control of the gels, evaluate the acute dermal toxicity and cytotoxicity, determine rheological characteristics, analyze the release profile, skin permeation and retention in vitro. It was prepared like gel base, the mixture of water and AH of high molecular weight, and after was incorporate AH of smaller molecular weight. The quality control microbiological was accomplished in agreement with Brazilian Pharmacopoeia (2010), the evaluate the acute dermal toxicity was made with 25 rat wistar, that were divided in 5 groups with 5 animals in each group received the application from one of the gels for subsequent analyzes of the results. For the evaluation of the cytotoxicity was used the method colorimeter 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)2,5-difenil tetrazoilium bromide (MTT) described by MOSMANN (1983), being used cellular lineages of HepG2 (Human Epidermoide Câncer Cells) and HaCaT. The samples had its behavior rheological characteristics. The analyze the release profile, skin permeation and retention were accomplished using cells of Franz modified. The microbiological was in agreement... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Submitted by Andresa Graciutti Botan (andresabotan@yahoo.com.br) on 2018-06-06T18:58:46Z No. of bitstreams: 1 Dissert Andresa G Botan.pdf: 1532972 bytes, checksum: af162b8b131f0fd6e440d9ae810290fc (MD5) / Approved for entry into archive by Silvana Alvarez null (silvana@ict.unesp.br) on 2018-06-06T19:37:16Z (GMT) No. of bitstreams: 1 botan_ag_me_sjc.pdf: 1532972 bytes, checksum: af162b8b131f0fd6e440d9ae810290fc (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-06T19:37:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 botan_ag_me_sjc.pdf: 1532972 bytes, checksum: af162b8b131f0fd6e440d9ae810290fc (MD5) Previous issue date: 2018-05-03 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / As plantas medicinais e seus extratos têm sido utilizados na medicina tradicional para fins terapêuticos e como uma atrativa fonte de pesquisa em diversas vertentes ciêntíficas, dentre elas, a atividade anti-inflamatória. O objetivo deste estudo foi analisar a citotoxicidade e ação anti-inflamatória in vitro dos extratos glicólicos das plantas medicinais Morus nigra (amora), Ziziphus joazeiro (juá) e Vitis vinifera (uva) em macrófagos de camundongo RAW 264.7. A citotoxicidade dos extratos foi analisada pelo teste de viabilidade celular MTT em dois períodos de tratamento, 5 min e 24 h. A ação anti-inflamatória dos extratos foi avaliada em macrófagos RAW 264.7 estimulados pelo lipopolissacarídeo (LPS) por meio da quantificação das citocinas pró-inflamatórias fator de necrose tumoral (TNF-α) e interleucina-6 (IL-6) pelo teste imunoenzimático (ELISA), e da quantificação do óxido nítrico pela reação de Griess. Os valores obtidos foram submetidos à análise estatística ANOVA ou Kruskal-Wallis com comparação múltipla de Tukey ou Dunn, com nível de significância de 5%. Concentrações não citotóxicas foram observadas após exposição por 5 min e 24 h, respectivamente, para os extratos de M. nigra (≤ 50 mg/mL e ≤ 1,56 mg/mL), Z. joazeiro (≤ 6,25 mg/mL e ≤ 3,12 mg/mL) e V. vinifera (≤ 25 mg/mL e ≤ 3,12 mg/mL). Em relação à resposta anti-inflamatória, 0,78 e 1,56 mg/mL do extrato de M. nigra e 3,12 mg/mL de V. vinifera apresentaram inibição significativa na produção da citocina TNF-α, e o extrato de Z. joazeiro suprimiu de modo significativo a expressão da citocina TNF-α (3,12 mg/mL) e do óxido nítrico (1,56 e 3,12 mg/mL). O presente trabalho demonstrou que os extratos glicólicos de M. nigra, Z. joazeiro e V. vinifera apresentaram concentrações não citotóxicas em ambos os tempos de tratamento e exerceram efeito anti-inflamatório em macrófagos de camundongo RAW 264.7. / Medicinal plants and theirs extracts have been used in traditional medicine for therapeutic purposes and as a source of research in several scientific aspects, e.g. the anti-inflammatory activity. This study aimed to analyze the in vitro cytotoxicity and anti-inflammatory action of the glycolic extracts of the medicinal plants Morus nigra (black mulberry), Ziziphus joazeiro (juá) and Vitis vinifera (grape) in mouse macrophages cells RAW 264.7. The cytotoxicity of the extracts was analyzed by MTT cell viability assay in two periods, 5 min and 24 h. The anti-inflammatory action of the extracts was evaluated in lipopolysaccharide (LPS) stimulated RAW 264.7 cells by quantifying the pro-inflammatory cytokines tumor necrosis factor (TNF-α) and interleukin-6 (IL-6) by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and nitric oxide by Griess reagent. The values obtained were submitted to statistical tests ANOVA or Kruskal-Wallis with post-test Tukey or Dunn multiple comparisons with the significance level of 5%. After exposure for 5 min and 24 h, respectively, non-cytotoxic concentrations were observed for M. nigra (≤ 50 mg/mL and ≤ 1.56 mg/mL), Z. joazeiro (≤ 6.25 mg/mL and ≤ 3.12 mg/mL) and V. vinifera (≤ 25 mg/mL and ≤ 3.12 mg/mL) extracts. Concerning the anti-inflammatory response, 0.78 and 1.56 mg/mL of M. nigra extract and 3.12 mg/mL of V. vinifera extract showed significant inhibition of TNF-α cytokine production. Z. joazeiro extract suppressed significantly the TNF-α cytokine (3.12 mg/mL) and the nitric oxide (1.56 and 3.12 mg/mL) expression. In conclusion, the glycolic extracts of M. nigra, Z. joazeiro, and V. vinifera presented non-cytotoxic concentrations in both treatment periods and showed an anti-inflammatory effect in RAW 264.7 cells.

A conformação de dispositivos médicos implantáveis a partir de uma blenda exige o desenvolvimento de um produto com propriedades próximas do comportamento ideal, combinando propriedades térmicas e mecânicas e boa resposta tecidual. O Poli (ácido láctico-co-glicólico) (PLGA) e o Poli (isopreno) (IR) foram escolhidos como componentes da blenda com finalidade de promover boa biocompatibilidade e características mecânicas especificas. As blendas foram obtidas por dissolução dos polímeros em solvente orgânico, seguida de secagem. Para determinar a influência do teor de IR sobre as propriedades da blenda, foram realizados ensaios de espectroscopia na região de infravermelho por transformada de Fourier (FTIR), calorimetria diferencial de varredura (DSC), análise dinâmico-mecânica (DMA), microscopia óptica por luz polarizada (POM), análise de dureza, ensaio de tração e análise de viabilidade celular. A presença de IR na blenda provocou alteração na estrutura molecular semi-cristalina do PLGA, bem como influenciou o comportamento mecânico analisado a partir da curva tensão-deformação do material. A blenda se mostrou biocompativel em ambiente celular e em ensaios preliminares em animais, apresentando potencial para aplicação como biomaterial. / The conformation of an implantable medical device from a polymeric blend requires the development of a product with properties as close as possible of ideal behavior with the combination between thermal and mechanical properties and good tissue response. The poly (lactic-co-glycolic acid) (PLGA) and the poly (isoprene) (IR) were chosen as the blend components to promote good biocompatibility and specific mechanical characteristics. The blends were obtained by dissolution of polymers in organic solvent, followed by drying. In order to determine the IR content influence over the blend properties, Fourier transform infrared spectroscopy (FTIR), differential scanning calorimetry (DSC), dynamic mechanical analysis (DMA), polarized light optical microscopy (POM), hardness analysis, tensile test and cell viability test were carried out. The IR presence caused changes in semi-crystalline molecular structure of PLGA, as well as actuated over the mechanical response analyzed on material’s stress-strain curve. The blend showed itself biocompatible at cellular environment and at preliminary animal tests, presenting potential for application as biomaterial.

Orientador: Márcia Carneiro Valera / Banca: Idomeo Bonetti Filho / Banca: Carlos Henrique Ribeiro Camargo / Resumo: A proposta deste trabalho foi avaliar a citotoxicidade do peróxido de hidrogênio liberado por agentes clareadores, utilizados para clareamento de dentes tratados endodonticamente, sobre cultura de fibroblastos provenientes do tecido gengival humano (FMM1). As células foram cultivadas em DMEM e quando apresentaram-se em quantidade suficiente e entre a quinta e décima passagens foram plaqueadas em placas de 96 poços onde receberam os meios de cultura condicionados de acordo com os grupos experimentais (n=12): G1- Perborato de Sódio + água; G2- Perborato de sódio + Peróxido de Carbamida 20%; G3- Peróxido de Carbamida 20%; G4- Perborato de Sódio + Peróxido de Hidrogênio 35%; G5- Peróxido de Hidrogênio 35%. O grupo controle (n=12) correspondeu à curva de crescimento e viabilidade celular, onde as células não receberam tratamento. O ensaio com MTT foi realizado nos períodos de 24 e 48 horas para avaliar a viabilidade celular. Paralelamente, mediu-se em espectrofotômetro a quantidade de peróxido de hidrogênio liberado nas condições experimentais. Os dados foram analisados através dos testes de ANOVA e Tukey. Todos os grupos experimentais apresentaram diferença significativa em relação ao controle. O tempo de avaliação mostrou diferença estatística, exceto para o G1 (PS + H2O). Concluiu-se que: todos os agentes clareadores testados foram citotóxicos, diminuindo significantemente o metabolismo e viabilidade celular; a associação do perborato de sódio com água destilada foi o agente clareador mais tóxico e o peróxido de carbamida 20% o menos tóxico. / Abstract: The propose of this study was to evaluate the cytotoxicity from five bleaching agents, used for the technique of intracanal bleaching, on human gingival fibroblasts (FMM1). The cells were cultivated in DMEM and when they were presented in enough amount and between the fifth and tenth passages they were placed in plates of 96 wells; where they received the conditional culture according to the experimental groups (n=12): G1- SP + H2O; G2- SP + CP20%; G3- CP20%; G4- SP + HP35%; G5- HP35%. The control group (n=12) corresponded to the curve of cell growth and viability, where the cells didn't receive any treatment. The MTT assay was carried through in the periods of 24 and 48 hours to evaluate the cellular viability. The amount of set free hydrogen peroxide in the experimental conditions was also measured in a spectrophotometer. The data were submitted to statistical analysis of variance and Turkey's test. All the experimental groups presented significant difference in comparison to the control. The evaluation time showed statistical difference, except for the G1 (SP + H2O). Conclusion: all the bleaching agents had showed cytotoxicity effects, reducing significantly the cell metabolism and viability; the association of sodium perborate with distilled water was the most toxic bleaching agent and carbamide peroxide 20% the least. / Mestre

Orientador: Christiane Pienna Soares / Banca: Mary Rosa Rodrigues de Marchi / Banca: Eliana Aparecida Varanda / Resumo: A combustão incompleta da biomassa de cana-de-açúcar gera compostos orgânicos ricos em hidrocarbonetos policíclicos aromáticos, os quais são os mais importantes poluentes mutagênicos e carcinogênicos. O objetivo do presente estudo foi avaliar a citotoxicidade e a apoptose induzida pelos compostos orgânicos de partículas em suspensão na atmosfera durante as estações de safra e entressafra de cana-de-açúcar. A citotoxicidade celular na linhagem celular A549 foi determinada usando o ensaio de MTT; e a morte celular (apoptose e necrose) foi analisada usando os corantes Hoechst 33342 por microscopia de epifluorescência e AnexinaV FITC/ iodeto de propídeo por citometria de fluxo. De acordo com o teste de citotoxicidade, foi observada uma curva dose-resposta, demonstrando maior citotoxicidade induzida por extratos orgânicos extraídos durante a estação de safra. Ambos os ensaios de coloração Anexina V e Hoechst 33342 demonstraram alta porcentagem de mortes celulares por apoptose em ambos os períodos (safra e entressafra) (p<0,0001). No tratamento com partículas totais em suspensão, uma maior porcentagem de mortes celulares induzidas por apoptose precoce foi observada. Além disso uma viabilidade celular maior foi encontrada durante a entressafra nos ensaios de Anexina V e Hoechst 33342 (p<0,001). Nossos resultados indicam que os extratos orgânicos obtidos do particulado total em suspensão demonstram um importante efeito tóxico celular induzindo apoptose precoce... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The incomplete combustion of sugar cane biomass generates organic compounds rich in polycyclic aromatic hydrocarbons, which are the most important mutagenic and carcinogenic pollutants. The aim of the present study was to evaluate the citotoxicity and apoptosis induced by the organic extracts of suspended particles from sugar cane harvesting and non-harvesting seasons. The cellular cytotoxicity to A549 cell line was determined using the MTT assay and the cell death (apoptosis and necrosis) was analyzed using the dyes Hoechst 33342 by epifluorescence microscopy and Annexin VFITC/ propidium iodide by flow cytometry. According to the cytotoxicity test, it was observed a dose-response curve, demonstrating a higher cytotoxicity induced by the organic extract from the harvesting season. Both staining assays Annexin V and Hoechst 33342 demonstrated a high percentage of cell death by apoptosis in both harvesting and non-harvesting seasons (p<0.0001). However, the extracts isolated during the harvest induce more apoptosis than the non-harvest season. In the treatment with total suspended particle, a higher percentage of cell deaths induced by early apoptosis in harvesting and non-harvesting seasons were observed. Moreover, a higher cellular viability was found in non-harvesting, in Annexin V and Hoechst 33342 assays, (p<0.001). Our results indicate that the organic extracts isolated from total suspended particulate demonstrate an important toxic effect in cell, inducing early apoptosis in harvesting and non-harvesting season. / Mestre

Cette thèse s’inscrit dans le cadre de la thématique du laboratoire de Pharmacognosie de l’UFR Pharmacie, au sein de l’Université de Bourgogne. Elle vise essentiellement la recherche de molécules d’origine végétale issue de la biodiversité tropicale dotées d’une activité antitumorale, dont principalement les saponines. Ce sont des glycosides triterpéniques ou stéroïdiques connus pour leurs nombreuses propriétés pharmacologiques. L’étude de 6 espèces végétales appartenant à 3 familles à savoir Acanthophyllum elatius, A. lilacinum, A. sordidum et Arenaria montana (Caryophyllaceae), Securidaca welwitschii (Polygalaceae) et Allium schoenoprasum (Alliaceae) a conduit à l’isolement et à la caractérisation de 24 glycosides naturels. Il s’agit de 13 saponines triterpéniques parmi lesquelles 10 sont de structure nouvelle ainsi que 11 saponines stéroïdiques dont 7 nouvelles. Les structures ont été élucidées principalement par l’utilisation de la RMN 2D ainsi que la spectrométrie de masse. 10 des 24 molécules isolées ont été testées en vue d’évaluer leurs activités cytotoxiques sur deux lignées cellulaires cancéreuses coliques (HT-29 et HCT 116). Nos résultats montrent que 9 d’entre elles possèdent une activité cytotoxique significative. Des relations structure/activité ont été ainsi proposées. / This thesis was realized in the laboratory of Pharmacognosy, in the Pharmacy section of the Bourgogne University. The main theme of this laboratory is the research of natural saponins from the tropical biodiversity, with antitumoral activities. These molecules are triterpenic or steroidic glycosides, well known for their various pharmacological activities. The study of 6 species belonging to 3 different families : Acanthophyllum elatius, A. lilacinum, A. sordidum and Arenaria montana (Caryophyllaceae), Securidaca welwitschii (Polygalaceae) and Allium schoenoprasum (Alliaceae), led to the isolation and characterization of 24 natural glycosides. Among them, 13 were triterpenic saponins with 10 new structures and 11 were steroidic saponins with 7 new structures. The spectral analysis was achieved using mainly 2D NMR and mass spectrometry. The cytotoxic activities of 10 isolated compounds were evaluated on 2 strains of human colon cancer cells (HT-29 et HCT 116) and 9 were active ones. Structure/activity relationships were also proposed.

Cette thèse s’inscrit dans le cadre de la thématique du Laboratoire de Pharmacognosie de l’UFR Pharmacie, au sein de l’Université de Bourgogne. Elle vise essentiellement la recherche de molécules d’origine végétale principalement des saponines biologiquement actives issues de la biodiversité tropicale. Dans ce contexte l’étude de plantes malgaches, Polycarpaea corymbosa Lamk. (CARYOPHYLLACEAE), Pittosporum verticillatum Bojer subsp. verticillatum (PITTOSPORACEAE), Solanum incanum L. et S. heteracanthum Dunal. (SOLANACEAE) a conduit à l’isolement de quinze glycosides naturels par les techniques de chromatographie solide-liquide, de chromatographie liquide à moyenne pression, de flash chromatographie, et de chromatographie liquide sous vide. Les structures ont été élucidées principalement par les techniques spectroscopiques de RMN-1D et -2D, et de spectrométrie de masse. Il s’agit de neuf saponines triterpéniques de type oléanane, parmi lesquelles sept sont des nouveaux composés naturels, ainsi que cinq saponines stéroïdiques de type spirostane et furostane, dont une nouvelle, et un glycoalcaloïde stéroïdique connu. Treize molécules isolées ont été testées en vue d’évaluer leurs activités cytotoxiques sur six lignées cellulaires cancéreuses humaine et animale. Nos résultats montrent que quatre d’entre elles possèdent une cytotoxicité significative sur les lignées HT-29, HCT 116, SW480, DU145, EMT6, et H9c2. / This thesis was carried out in the Laboratory of Pharmacognosy, in the Pharmacy section of the University of Burgundy. The principal theme of this laboratory is the research of natural compounds from tropical biodiversity, mainly saponins. In this context, the study of Malagasy plants, Polycarpaea corymbosa Lamk. (CARYOPHYLLACEAE), Pittosporum verticillatum Bojer subsp. verticillatum (PITTOSPORACEAE), Solanum incanum L. and S. heteracanthum Dunal. (SOLANACEAE) led to the isolation of fifteen natural glycosides by column chromatography, medium pressure liquid chromatography, flash chromatography, and vacuum liquid chromatography. The structures were elucidated mainly by the use of spectroscopic techniques, NMR-1D and -2D, and mass spectrometry. The compounds were characterized as nine triterpene saponins of the oleanane type, among them seven are new natural compounds, five steroid saponins of the spirostane or furostane type, among them one new, and one known steroid glycoalkaloid. Thirteen of compounds were tested for cytotoxicity against six human and animal cancer cell lines. Our results show that four of them have significant cytotoxicity on cell lines HT-29, HCT 116, SW480, DU145, EMT6, and H9c2.

Made available in DSpace on 2016-08-15T20:31:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MairaCJSL_DISSERT.pdf: 420836 bytes, checksum: 822f4cc895779b5cc7c308d8152a664d (MD5) Previous issue date: 2011-02-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / This study aimed to evaluate the spontaneous cases of poisoning in goats, rats and toxicity in vitro cytotoxicity of Aspidospema pyrifolium. In all spontaneous cases studied, the plant is ingested and the abortion cases occurred exclusively in goats. Most cases of abortion occurred during the dry season and early rainy season, and experienced the goats were less affected than the young goats. We used male and female rats of Wistar strain. The extract of the plant A. pyrifolium was administered in females at day 15 of gestation or from the 15th to the 17th day of gestation, which showed reduced fetal weight and strong evidence of maternal toxicity. Rats subjected to intraperitoneal injection of the extract of A. pyrifolium showed motor dysfunction and death, male rats were more resistant than females. The administration of atropine, diazepam and xylazine did not help in preventing the effects of toxicity. The evaluation of osmotic fragility of red blood cells was performed with the plant extract in different concentrations. In addition, we used larvae from a day of brine shrimp, which were incubated with different concentrations of the extract. It was found that the extract of A. pyrifolium promoted hemolysis and was lethal to A. saline. These in vitro tests may be useful as adjunct tests for further studies with this plant. / O presente trabalho teve por objetivo avaliar casos espontâneos de intoxicação em caprinos, toxicidade em ratos e citotoxicidade in vitro da Aspidospema pyrifolium. Em todos os casos espontâneos estudados, a ingestão da planta e os casos de aborto ocorreram exclusivamente em caprinos. A maioria dos casos de aborto ocorreu durante a estação seca e início da estação chuvosa, e as cabras experientes eram menos afetadas do que as cabras jovens. Foram utilizados ratos machos e fêmeas da linhagem Wistar. O extrato obtido da planta A. pyrifolium foi administrado nas fêmeas no 15º dia de gestação ou a partir do 15º ao 17º dia de gestação, que apresentaram redução do peso fetal e fortes indícios de toxicidade materna. Ratas submetidas a injeção intraperitoneal do extrato da A. pyrifolium apresentaram distúrbios motores e morte; ratos machos foram mais resistentes do que as fêmeas. A administração de atropina, xilazina e diazepam não auxiliou na prevenção dos efeitos de toxicidade. A avaliação da fragilidade osmótica das células vermelhas do sangue foi realizada com o extrato da planta em diferentes concentrações. Além disso, utilizou-se larva de um dia de Artemia salina, que foram incubadas com diferentes concentrações do extrato. Verificou-se que o extrato de A. pyrifolium promoveu hemólise e foi letal para A. salina. Estes testes in vitro podem ser úteis como testes adjuntos de mais estudos com esta planta.