Made available in DSpace on 2015-05-14T16:53:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-11-21Bitstream added on 2015-05-14T16:58:55Z : No. of bitstreams: 1 000827166.pdf: 2711198 bytes, checksum: 14a654bafad8ddebe5152c38e41bb114 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Associação Ibero-Americana de Pós-grados (AUIP) / O tumor venéreo transmissível – TVT é objeto de numerosas investigações, apesar disso, existem lacunas que necessitam estudos. Há TVTs com graus variados de agressividade, portanto, alguns não respondem aos protocolos terapêuticos convencionais. Dando a entender que há modificações progressivas do seu perfil biológico. Técnicas como cultura celular, citometria de fluxo e a biologia molecular oferecem subsídios para se identificar e quantificar essas modificações, inclusive predizer comportamento biológico de tumor. O objetivo foi quantificar a expressão dos genes BAX, BCL2, TP53 e MDR1 em células de TVT primário e in vitro antes e depois da vincristina, a fim de identificar modificações quanto à resistência a agressividade e o tratamento. Foram obtidas 18 amostras de TVT caninos, para se estabelecer 8 culturas primárias. Logo depois se realizou testes de citotoxicidade, sobrevivência, apoptose, curva de crescimento e análise de expressão dos genes BAX, BCL2, TP53 e MDR1. Quando se comparou as células de TVT tratadas com vincristina, com aquelas que não receberam o tratamento, houve diferença estatística em relação às taxas de citotoxicidade, sobrevivência, e fases do ciclo celular, G1, Sub G1 e S. Sobre a expressão do gene MDR-1 a mesma diferença foi observada quando se comparou grupos de células tratadas e não tratadas. Nessa situação, o que se espera encontrar seria a baixa expressão do gene TP53, entretanto, ocorreu o oposto, qual seja alta expressão do gene TP53. Nessa situação acredita-se que tenha ocorrido o mecanismo regulador de apoptose. Quanto aos genes BAX e BCL-2 não foram observadas diferença estatística entre os grupos. Nesse caso, parecer não ter ocorrido a regulação esperada, do BAX pelo TP53. Acredita-se que houve mutação do TP53. Dados pouco relatados em TVT. Apesar de dados iniciais, podem concluir que estão relacionados à malignidade do tumor e resistência a quimioterapia / Transmissible venereal tumor - TVT has been subject of numerous investigations, despite this, there are gaps that need studies. There TVTs with varying degrees of aggressiveness, so some do not respond to conventional treatment protocols. Implying that there is progressive alteration of their biological profile. Techniques such as cell culture, flow cytometry and molecular biology offer subsidies to identify and quantify these changes, including predicting the biological behavior of the tumor. The objective was to quantify the gene expression BAX, BCL2, TP53 and MDR1 in primary TVT cells and in vitro before and after vincristine, in order to identify changes regarding the aggressiveness and resistance to therapy. 18 samples of TVT canines were obtained to establish 8 primary cultures. After was performed cytotoxicity tests, survival, apoptosis, growth curve and analysis of expression of genes BAX, BCL2, p53 and MDR1. When comparing the TVT cells treated with vincristine, with those who did not receive treatment, there was statistical difference in relation to cytotoxicity rates, survival, and cell cycle phases, G1, Sub G1 and S. About the MDR-1 gene expression, the same difference was observed when comparing cells treated and untreated groups. In this situation, what would be expected at the low expression of the TP53 gene, however, was the opposite, in other words high expression of TP53 gene. In this situation it is believed that there has been a regulatory mechanism of apoptosis. In BAX and BCL-2 genes were not observed statistical difference between the groups, in this case, appears to have not occurred the regulation expected of BAX by TP53. It is believed that there TP53 mutation. Data low reported on TVT. Although initial, data may conclude that are related to tumor malignancy and chemotherapy resistance / FAPESP: 2012/19285-2

Nanoemulsões catiônicas têm sido recentemente propostas como sistemas carreadores de DNA. O presente trabalho teve por objetivo avaliar a influência de diferentes fosfolipídeos sobre propriedades dos complexos formados entre nanoemulsões e pDNA (pTracerTMCMV2). Em uma primeira etapa, nanoemulsões catiônicas constituídas de triglicerídeos de cadeia média, estearilamina, lecitina de gema de ovo ou fosfolipídeos isolados (DSPC, DOPC, DSPE ou DOPE), glicerol e água foram preparadas através do procedimento de emulsificação espontânea. Independente do tipo de fosfolipídeo empregado, esse procedimento conduziu à obtenção de nanoemulsões catiônicas monodispersas com diâmetro de gotícula e potencial zeta de cerca de 250 nm e +50 mV, respectivamente. A complexação do pDNA com as nanoemulsões catiônicas, avaliada através do retardamento de migração do pDNA em gel de agarose por eletroforese, foi total quando o complexo apresenta uma relação de cargas [+/-] ≥ 1,0. Nestas condições, os complexos formados foram protegidos da degradação pela enzima DNase I. Em uma segunda etapa, a citotoxicidade das nanoemulsões e dos complexos com o pDNA sobre células Hep G2 foi avaliada, através do ensaio de MTT. Os resultados obtidos demonstraram que a adição de quantidades crescentes das nanoemulsões, conduz a uma toxicidade progressiva sobre as células, independente do pH do meio. Dentre as formulações estudadas, aquelas estabilizadas pelos fosfolipídeos DSPC e DSPE, de elevada temperatura de transição de fases, foram marcadamente menos tóxicas, em comparação com as formulações obtidas com lecitina, DOPC e DOPE. Essa mesma tendência foi detectada para os complexos formados com o pDNA. Em uma última etapa, foi realizado um estudo preliminar de transferência gênica em células Hep G2, utilizando a técnica de PCR em tempo real. Dentre as diferentes formulações testadas, a maior quantidade de DNA de GFP detectada parece ser para a formulação obtida com o fosfolipídeo DSPC, ilustrando as potencialidades de uso das nanoemulsões desenvolvidas como reagentes de transfecção de pDNA em células Hep G2. Em conclusão, o conjunto dos resultados obtidos demonstra o efeito dos fosfolipídeos empregados sobre propriedades físico-químicas, complexação, estabilidade, citotoxicidade e transfecção de nanoemulsões catiônicas como sistemas carreadores de pDNA. / Cationic nanoemulsions have been recently considered as potential delivery systems for DNA. The aim of the present work was to evaluate the influence of different phospholipids on the properties of complexes formed between nanoemulsions and pDNA (pTracerTM-CMV2). First, cationic nanoemulsions composed of medium chain triglycerides, stearlyamine, egg lecithin or isolated phospholipids (DSPC, DOPC, DSPE or DOPE), glycerol and water were prepared through spontaneous emulsification process. Independently of the type of phospholipid used this procedure results in monodisperses cationic nanoemulsions with droplet size and zeta potential of about 250 nm and +50 mV, respectively. The complexation of pDNA with cationic nanoemulsions, analyzed by agarose gel retardation assay was total when the complex possesses a charge relation [+/-] ≥ 1.0. In these conditions the complexes were protected from enzymatic degradation by DNase I. After that, the cytotoxicity of the nanoemulsion and the complexes with pDNA in Hep G2 cells was evaluated through MTT assay. The results showed that the addition of increasing amount of nanoemulsion leads to a progressive toxicity on the cells independently of the media’s pH. Among the studied formulations the ones stabilized with the phospholipids DSPC and DSPE, that have elevated phase transition temperatures, were much less cytotoxic in comparison with the formulations obtained with lecithin, DOPC and DOPE. This same trend was detected for the complexes formed with pDNA. Finally a preliminary study of gene transfer to Hep G2 cells was performed using real-time PCR technique. Among the different formulations tested, the major quantity of reporter DNA detected seems to be for the formulation obtained with the DSPC phospholipid. This shows the potentialities of the use of nanoemulsions as transfection reagents of pDNA in Hep G2 cells. In conclusion, the overall results show the effect of the phospholipids on physicochemical properties, complexation, stability, cytotoxicity and transfection of cationic nanoemulsions as delivery systems for pDNA.

Orientador: Samira Esteves Afonso Camargo / Banca: Luana Marotta Reis de Vasconcelos / Banca: Jonatas Rafael de Oliveira / Resumo: A matriz de hidrogel é um biomaterial de nanofibra peptídica tridimensional que induz o crescimento, migração e proliferação celular, assim favorecendo a regeneração tecidual. O objetivo deste trabalho foi avaliar a biocompatibilidade e a atividade antimicrobiana da matriz de hidrogel associado ao extrato romã e ao antimicrobiano ciprofloxacino. Para isso, foram realizadas análises microbiológicas sobre Enterococcus faecalis (ATCC 4083) em cultura planctônica, por meio d ensaio de microdiluição em caldo e em biofilme pelo teste de MTT. Para os ensaios da biocompatibilidade, foi utilizada cultura de macrófagos (RAW 264.7). A citotoxicidade foi avaliada pelo ensaio de MTT e a genotoxicidade foi realizado pelo teste de micronúcleo. A análise estatística foi realizada pelos testes ANOVA e Tukey, adotando o nível de significância 5%. Os resultados demonstraram que a matriz de hidrogel associado ao extrato de romã não apresentou atividade antimicrobiana para a cultura planctônica como para o biofilme de E. faecalis. Porém, não foi citotóxico e genotóxico para RAW 264.7. Por outro lado, o antimicrobiano ciprofloxacino apresentou atividade antimicrobiana sobre E. faecalis,além de ter apresentado efeitos citotóxico e genotóxico para os macrófagos. Com isso, foi possível concluir que o extrato de romã associado ou não a matriz de hidrogel apresenta ausência de citotóxico, genotóxico e efeito antimicrobiano / Abstract: The hydrogel matrix is a three-dimensional peptide nanofiber biomaterial that induces cell growth, migration and proliferation, thus favoring tissue regeneration. The objective of this work was to evaluate the biocompatibility and antimicrobial activity of the hydrogel matrix associated with the pomegranate extract and the antimicrobial ciprofloxacin. For this, microbiological analyzes on Enterococcus faecalis (ATCC 4083) were carried out in planktonic culture, by means of the microdilution test in broth and in biofilm by the MTT test. For the biocompatibility assays, macrophage culture (RAW 264.7) was used. Cytotoxicity was assessed by the MTT assay and genotoxicity was performed by the micronucleus test. Statistical analysis was performed by the ANOVA and Tukey tests, adopting the significance level 5%. The results showed that the hydrogel matrix associated with the pomegranate extract did not show antimicrobial activity for the planktonic culture as for the E. faecalis biofilm. However, it was not cytotoxic and genotoxic for RAW 264.7. On the other hand, the antimicrobial ciprofloxacin showed antimicrobial activity on E. faecalis, besides having cytotoxic and genotoxic effects for the macrophages. With this, it was possible to conclude that the pomegranate extract associated or not with the hydrogel matrix shows absence of cytotoxic, genotoxic and antimicrobial effect / Mestre

A irradiação de alimentos já foi aprovada e vem sendo utilizada em diversos países para aplicações e finalidades de uma ampla variedade de alimentos. Seus benefícios abrangem o aumento do prazo de validade, melhoria de higiene dos alimentos e consequentemente menor deterioração e perdas se comparado com alimentos que não sofrem radiação. Além disto, os alimentos após irradiados apresentam-se seguros em termos nutritivos e de redução de patógenos. Porém, alimentos que contem de médio a alto teor de gordura induzem a formação de um subproduto denominado 2-Alcilciclobutanonas, a qual sabemos que parte destes compostos ingeridos são normalmente excretados através das fezes, porém parte permanece depositada nos tecidos adiposos. Trabalhos realizados com estes compostos anteriormente apresentaram efeitos citotóxicos e genotóxicos em células de cólon. Desta forma, o objetivo do presente trabalho foi investigar os efeitos citotóxicos realizados em testes de viabilidade celular, testes genotóxicos em micronúcleo e testes mutagênicos com a técnica de Ames em condições experimentais in vitro dos compostos 2-dDCB e 2-tDCB. Para isso, o fígado foi o órgão de escolha para avaliar os possíveis efeitos destes compostos, uma vez que este órgão é geralmente acometido pelo acumulo de gordura. Foram utilizadas três linhagens hepáticas: HepG2, BRL3A e HTC. A análise dos resultados da viabilidade celular, revelou que as 2-dDCBs apresentaram discreto efeito citotóxico na concentração de 500 μM e as 2-tDCBs apresentaram danos baixos a partir de 100 μM e maiores em 500 μM, mostrando ser dose dependentes. Nos resultados de mutagenicidade, os compostos não apresentaram quaisquer efeitos mutagênicos nas concentrações e doses utilizadas, detectados pelo teste de Ames. Por fim, o ensaio de micronúcleo correspondeu às expectativas não demonstrando efeitos genotóxicos na linhagem, doses e tempos testados. Com base nos resultados atingidos, as 2 ACBs podem ser consumidas com relativa segurança, sob a ótica de possíveis efeitos mutagênicos e genotóxicos nas concentrações avaliadas. / Food irradiation has already been approved and has been used in several countries for applications and purposes of a wide variety of foods. Its benefits include increased shelf life, improved food hygiene and consequently less deterioration and losses compared to foods that do not undergo into radiation. In addition, food after irradiation is safe in terms of nutrients and pathogen reduction. However, foods that contain medium to high fat levels, induce the formation of a by-product called 2-Alkylcyclobutanones, which we know that part of these ingested compounds are normally excreted through the feces, but part remains deposited in the adipose tissues. Work performed with these compounds previously showed cytotoxic and genotoxic effects on colon cells. Thus, the objective of the present work was to investigate the cytotoxic effects performed in cell viability tests, genotoxic tests in micronucleus and mutagenic tests with Ames technique under in vitro experimental conditions of 2-dDCB and 2-tDCB compounds. Hence, the liver was the chosen organ to evaluate the possible effects of these compounds, since this organ is usually affected by accumulation of fat. Three hepatic cell lines were used: HepG2, BRL3A and HTC. Analysis of the cell viability results revealed that the 2-dDCBs presented a discrete cytotoxic effect at the concentration of 500 μM and the 2-tDCBs presented low damages from 100 μM and larger at 500 μM, showing to be dose dependent. In the mutagenicity results, the compounds did not show any mutagenic effects at the concentrations and doses used, detected by the Ames test. Finally, the micronucleus test corresponded to expectations demonstrating no genotoxic effects in the cell line, doses and times tested. Based on the results achieved, the 2 ACBs can be consumed with relative safety, from the perspective of possible mutagenic and genotoxic effects in the evaluated concentrations.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:56Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-02-25Bitstream added on 2014-06-13T20:36:38Z : No. of bitstreams: 1 cardoso_apf_me_botfm.pdf: 463235 bytes, checksum: f5c3dd035d2b9e83db6356001aa70012 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Diuron [3-(3,4-dichlorophenyl)-1,1-dimethylurea] is a herbicide that in a previous longterm study with Wistar rats fed at 2,500 ppm concentration showed high incidence of urothelial tumors in both genders. Accordingly, USEPA categorized Diuron as a “known/likely” human carcinogen. The accepted non-genotoxic mode of action (MOA) of Diuron encompasses urothelial necrosis induced by direct cytotoxicity, followed by regenerative cell proliferation and sustained urothelial hyperplasia that may favor neoplasia development. Scanning electron microscopy (SEM), light microscopy and labeling index are essentials tools for identification and classification of cytotoxic and proliferative changes in the bladder. The present study evaluated the dose-response of Diuron regarding urothelial lesions. Sixty male Wistar rats were fed Diuron for 20 weeks mixed in the diet at 0, 60, 125, 500, 1,250, or 2,500 ppm. Simple hyperplasia was significantly increased in the Diuron 1,250 and 2,500 ppm groups, and the cell proliferation at 2,500 ppm group. By SEM, the incidences and severity of lesions were significantly greater in the 500 and 1,250 ppm. Although numerically increased, the incidence of lesions in the 2,500 ppm group did not differ significantly from the control. The present study documented a doseresponse influence of Diuron on the rat urothelium, with a no observed effect level (NOEL) of 125 ppm.

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:02:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 6576.pdf: 2966508 bytes, checksum: 60d9666ae228bda42b9fc4a21dae76c6 (MD5) Previous issue date: 2014-11-28 / Universidade Federal de Sao Carlos / Microorganisms, such as those belonging to the groups of Penicillium, Bacillus, Paenibacillus, represent represent an important source for the production of bioactive metabolites with varied applications. The production of these substances is directly related to the culture media, as well as the available carbon and nitrogen sources, conditions of pH, temperature and agitation (gas exchange). Among the microbial groups most studied about the production of various interest metabolites are the fungi and bacteria that inhabit the interior of plants, the endophytics. Thus, the present study aimed to isolate and identify endophytics microorganisms from leaves of four species of Tabebuia spp. and Hymenaea courbaril and study the production of interest metabolites by the lineages found. The microbial activities were studied: antibiotic capability against Gram positive and Gram negative bacteria, antifungal, antibiotic resistance, enzyme production, antitumor activity and pigment production. Microorganisms that stood out due to production of antibiotics, cytotoxicity against tumor cells and pigment production. This study selected microorganisms based on their most relevant production, in this case, it was the antibiotics production, pigments production and cytotoxicity, they were cultured in larger scale aiming at the improvement of the production of metabolite chosen according to the results. The selected microorganisms were a bacterium identified as Paenibacillus terrae and a fungus identified as Penicillium minioluteum/Talaromyces minioluteus complex. The P. terrae proved producing bioactive metabolites against Staphylococcus aureus, Escherichia coli and Candida albicans, in addition to novel cytotoxic activity against HTC, and OVCAR8 SF295 tumor cells. This bacterium also showed unprecedented anti-Leishimania activity, acting against the promastigote form of the parasite. The isolated fungus proved producing a red pigment, in large quantities without cytotoxic, antifungal or antibacterial activity, favoring its industrials applications. Both selected microorganisms demonstrated potential for biotechnological and industrial applications, suggesting the viability of promising continuity of the work performed. / Os microrganismos, como os pertencentes ao grupo dos Penicillium, Bacillus, Paenibacillus, representam uma fonte importante para produção de metabólitos bioativos com diversas aplicações. A produção destas substâncias está diretamente relacionada ao cultivo em meios de cultura assim como as fontes de carbono e nitrogênio disponíveis, condições de pH, temperatura e trocas gasosas. Dentre os grupos microbianos que mais se destacam nas pesquisas para produção de diversos metabólitos encontram-se os fungos e bactérias que habitam o interior de plantas, os microrganismos endofíticos. Desta forma, o presente trabalho teve como objetivo isolar e identificar microrganismos endofíticos do cerrado a partir de folhas de quatro espécies de Tabebuia spp. e um exemplar de Hymenaea courbaril e estudar a produção de metabólitos de interesse biotecnológico das linhagens encontradas. As atividades microbianas estudadas foram: capacidade antibiótica contra bactérias Gram positivas e Gram negativas, atividade antifúngica, resistência a antibióticos, produção enzimática, atividade antitumoral e produção de pigmentos. Os microrganismos que se destacaram devido a produção de antibióticos, citotoxicidade contra células tumorais e produção de pigmentos foram selecionados e cultivadas em maior escala objetivando o melhoramento da produção do metabólito escolhido por testes bioguiados. Selecionou-se Paenibacillus terrae e Penicillium complexo minioluteum/Talaromyces complexo minioluteus. O P. terrae mostrou-se produtor de metabólitos bioativos contra bactérias Gram positivas, Gram negativas e fungos leveduriformes, além da inédita atividade citotóxica contra células HTC, SF295 e OVCAR8. Esta bactéria apresentou também inédita atividade anti-Leishimania, atuando contra a forma promastigota do parasita. O fungo produziu pigmento de coloração vermelha em grande quantidade e foi selecionado devido à ausência de atividade citotóxica, antifúngica e antibacteriana. Ambos microrganismos selecionados demonstraram potencial de aplicações biotecnológicas e industriais, sugerindo a viabilidade promissora da continuidade dos trabalhos desenvolvidos.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:44Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-08-30Bitstream added on 2014-06-13T18:51:17Z : No. of bitstreams: 1 monfre_erm_me_arafcf.pdf: 1147104 bytes, checksum: 534bfc5215b124d9a99b52e9e8577b57 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O câncer cervical é um problema de saúde pública mundial, especialmente nos países em desenvolvimento representando 12% de todos os tipos de neoplasias malignas que acometem as mulheres, configurando a segunda neoplasia ginecológica mais freqüente no mundo. Estudos epidemiológicos e moleculares demonstram a forte associação entre a etiologia do câncer cervical associado à infecção pelo HPV, especialmente para os tipos de alto risco oncogênico (HP-V16 e HPV-18). A cancerologia experimental, utilizando cultura de células, é de grande valia para se estudar os diversos aspectos relacionados aos processos neoplásicos cervicais. Alguns fármacos usados na quimioterapia são oriundas de espécies vegetais ou derivadas de um protótipo natural. Os produtos naturais têm contribuído intensamente para o desenvolvimento da terapêutica moderna. A quimioprevenção envolve o uso de substâncias naturais ou sintéticas para reduzir o risco de desenvolvimento de câncer. Por esta razão, o presente estudo foi inserido no Projeto de Bioprospecção BIOTA-FAPESP para a avaliação de dois compostos isolados da planta Pterogyne nitens, uma planta com conhecida atividade citotóxica, antioxidante e antifúngica que está distribuída do sudeste ao sul do Brasil, principalmente na Mata Atlântica e no Cerrado. No presente estudo, o potencial inflamatório, antitumoral e quimiopreventor de pteroginina e pteroginidina foram estudados em cultura de células normais e tumorais de câncer cervical (HeLa, SiHa e C33A), queratinócito normal de pele (HaCaT), corioncarcinoma (JEG-3), hepatocarcinoma murino (Hepa1c1c7) e hepatocarcinoma murino mutado (TAOc1BPrc1). Portanto foram realizados ensaios de citotoxicidade por MTT, de determinação de citocinas: IL1-β, IL-4, IL-6, TNF-α e IFN-γ por ELISA, da atividade antitumoral... / Cervical cancer is a public health problem worldwide, mainly in developing countries, representing 12% of all types of malignancies that affect women, and the second common gynecologic malignancy in the world. Molecular and epidemiological research showed a strong association between infection, with HPV, especially high-risk HPV, and the etiology and progression of cervical cancer. Cell culture based on experimental oncology is valuable for study of various features of neoplasic processes. Several drugs used in chemotherapy were isolated from plants species or derived from a natural prototype. Natural products have contributed to the development of modern therapeutics. Chemoprevention involves the use of natural or synthetic substances to reduce the risk of developing cancer. Thus, this study, Bioprospecting Project BIOTA-FAPESP was aimed at assessing two compounds from Pterogyne nitens, a plant with known antiinflammatory and antioxidant activities, is distributed from southeast to southern Brazil, mainly in the Forest Atlantic and Cerrado biomes. The anti-inflammatory, antitumor and quimiopreventor potentials of the compounds pterogynine and pterogynidine was studied in normal and tumor cell lines: cervical cancer (HeLa, SiHa and C33A), normal skin keratinocytes (HaCaT), chorioncarcionoma (JEG-3), murine hepatocellular carcinoma (Hepa 1c1c7) and mutated murine hepatocellular carcinoma (TAOc1BPrc1). These compounds were assesmet for of cytotoxicity (MTT), determination of inflammatory cytokines IL1-β, IL-4, IL-6, TNF-α and IFN-γ (ELISA), antitumor activity with sHLA-G molecule (ELISA) and chemoprevention with quinone reductase (QR). The results showed that both tested compounds exhibited high concentration-dependent cytotoxicity to the three cervical carcinoma cell... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:44Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-12-04Bitstream added on 2014-06-13T19:30:16Z : No. of bitstreams: 1 silva_ic_me_arafcf_prot.pdf: 8377321 bytes, checksum: ec680d06975c6ece3d90e2ca62431f8a (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A combustão incompleta da biomassa de cana-de-açúcar gera compostos orgânicos ricos em hidrocarbonetos policíclicos aromáticos, os quais são os mais importantes poluentes mutagênicos e carcinogênicos. O objetivo do presente estudo foi avaliar a citotoxicidade e a apoptose induzida pelos compostos orgânicos de partículas em suspensão na atmosfera durante as estações de safra e entressafra de cana-de-açúcar. A citotoxicidade celular na linhagem celular A549 foi determinada usando o ensaio de MTT; e a morte celular (apoptose e necrose) foi analisada usando os corantes Hoechst 33342 por microscopia de epifluorescência e AnexinaV FITC/ iodeto de propídeo por citometria de fluxo. De acordo com o teste de citotoxicidade, foi observada uma curva dose-resposta, demonstrando maior citotoxicidade induzida por extratos orgânicos extraídos durante a estação de safra. Ambos os ensaios de coloração Anexina V e Hoechst 33342 demonstraram alta porcentagem de mortes celulares por apoptose em ambos os períodos (safra e entressafra) (p<0,0001). No tratamento com partículas totais em suspensão, uma maior porcentagem de mortes celulares induzidas por apoptose precoce foi observada. Além disso uma viabilidade celular maior foi encontrada durante a entressafra nos ensaios de Anexina V e Hoechst 33342 (p<0,001). Nossos resultados indicam que os extratos orgânicos obtidos do particulado total em suspensão demonstram um importante efeito tóxico celular induzindo apoptose precoce... / The incomplete combustion of sugar cane biomass generates organic compounds rich in polycyclic aromatic hydrocarbons, which are the most important mutagenic and carcinogenic pollutants. The aim of the present study was to evaluate the citotoxicity and apoptosis induced by the organic extracts of suspended particles from sugar cane harvesting and non-harvesting seasons. The cellular cytotoxicity to A549 cell line was determined using the MTT assay and the cell death (apoptosis and necrosis) was analyzed using the dyes Hoechst 33342 by epifluorescence microscopy and Annexin VFITC/ propidium iodide by flow cytometry. According to the cytotoxicity test, it was observed a dose-response curve, demonstrating a higher cytotoxicity induced by the organic extract from the harvesting season. Both staining assays Annexin V and Hoechst 33342 demonstrated a high percentage of cell death by apoptosis in both harvesting and non-harvesting seasons (p<0.0001). However, the extracts isolated during the harvest induce more apoptosis than the non-harvest season. In the treatment with total suspended particle, a higher percentage of cell deaths induced by early apoptosis in harvesting and non-harvesting seasons were observed. Moreover, a higher cellular viability was found in non-harvesting, in Annexin V and Hoechst 33342 assays, (p<0.001). Our results indicate that the organic extracts isolated from total suspended particulate demonstrate an important toxic effect in cell, inducing early apoptosis in harvesting and non-harvesting season.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:24:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-07-29Bitstream added on 2014-06-13T20:31:48Z : No. of bitstreams: 1 fernandes_amm_me_sjc.pdf: 332962 bytes, checksum: f4c47a3efef5e5b260cbd7ef4a2f1c60 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A proposta deste trabalho foi avaliar a citotoxicidade do peróxido de hidrogênio liberado por agentes clareadores, utilizados para clareamento de dentes tratados endodonticamente, sobre cultura de fibroblastos provenientes do tecido gengival humano (FMM1). As células foram cultivadas em DMEM e quando apresentaram-se em quantidade suficiente e entre a quinta e décima passagens foram plaqueadas em placas de 96 poços onde receberam os meios de cultura condicionados de acordo com os grupos experimentais (n=12): G1- Perborato de Sódio + água; G2- Perborato de sódio + Peróxido de Carbamida 20%; G3- Peróxido de Carbamida 20%; G4- Perborato de Sódio + Peróxido de Hidrogênio 35%; G5- Peróxido de Hidrogênio 35%. O grupo controle (n=12) correspondeu à curva de crescimento e viabilidade celular, onde as células não receberam tratamento. O ensaio com MTT foi realizado nos períodos de 24 e 48 horas para avaliar a viabilidade celular. Paralelamente, mediu-se em espectrofotômetro a quantidade de peróxido de hidrogênio liberado nas condições experimentais. Os dados foram analisados através dos testes de ANOVA e Tukey. Todos os grupos experimentais apresentaram diferença significativa em relação ao controle. O tempo de avaliação mostrou diferença estatística, exceto para o G1 (PS + H2O). Concluiu-se que: todos os agentes clareadores testados foram citotóxicos, diminuindo significantemente o metabolismo e viabilidade celular; a associação do perborato de sódio com água destilada foi o agente clareador mais tóxico e o peróxido de carbamida 20% o menos tóxico. / The propose of this study was to evaluate the cytotoxicity from five bleaching agents, used for the technique of intracanal bleaching, on human gingival fibroblasts (FMM1). The cells were cultivated in DMEM and when they were presented in enough amount and between the fifth and tenth passages they were placed in plates of 96 wells; where they received the conditional culture according to the experimental groups (n=12): G1- SP + H2O; G2- SP + CP20%; G3- CP20%; G4- SP + HP35%; G5- HP35%. The control group (n=12) corresponded to the curve of cell growth and viability, where the cells didn’t receive any treatment. The MTT assay was carried through in the periods of 24 and 48 hours to evaluate the cellular viability. The amount of set free hydrogen peroxide in the experimental conditions was also measured in a spectrophotometer. The data were submitted to statistical analysis of variance and Turkey’s test. All the experimental groups presented significant difference in comparison to the control. The evaluation time showed statistical difference, except for the G1 (SP + H2O). Conclusion: all the bleaching agents had showed cytotoxicity effects, reducing significantly the cell metabolism and viability; the association of sodium perborate with distilled water was the most toxic bleaching agent and carbamide peroxide 20% the least.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:24:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-08-01Bitstream added on 2014-06-13T19:52:05Z : No. of bitstreams: 1 oliveira_tr_me_sjc.pdf: 620321 bytes, checksum: e26df581da35d3b46846dc2f7153d000 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Objetivo deste estudo foi avaliar a citotoxicidade e a genotoxidade de quatro cimentos endodônticos: AH Plus (Dentsply De Trey, Alemanha); Endo Rez (Ultradent, USA); RoekoSeal (Coltene Whaledent, Alemanha) e o Cimento experimental à base de óleo-resina de Copaiba (Brasil). A avaliação foi realizada em três diferentes tempos após manipulação: 0h, 12h e 24h. Os espécimes foram preparados, deixados por 12 e 24h em estufa (37 °C a 100% umidade a 5% de CO2) e colocados em contato com meio de cultura (82,4 mm2 superfície/ml) por 24 h. Células V79 foram expostas à diferentes diluições dos cimentos por 24 h e a viabilidade celular foi mensurada pelo teste de MTT em espectrofotômetro. Para o teste de genotoxicidade os extratos que apresentaram concentrações de citototoxicidade média foram selecionados para o teste cometa após 24 h de exposição. A viabilidade celular e o dano ao DNA foram comparados aos grupos controles e analisados pelos testes de Kruskal-Wallis e Dunn (p<0,05). No teste de citotoxicidade, todos os cimentos apresentaram diferença significativa em relação ao controle, com exceção do RoekoSeal. A viabilidade celular de acordo com cimento utliizado pode ser classificada da maior toxicidade para a menor seguindo: EndoREZ > AH Plus > Copaíba > RoekoSeal. O dano ao DNA verificado no teste cometa pode ser classificado do maior para o menor em: EndoREZ > RoekoSeal > AH Plus > Copaíba. Conclui-se que o cimento EndoREZ é citotóxico e genotóxico nos tempos e diluições estudadas / The aim of this study was to evaluate cytotoxicity and the genotoxicity of four different root canal sealers, AH Plus (Dentsply De Trey, Germany); Endo REZ (Ultradent, USA); RoekoSeal (Coltene Whaledent, Germany) and the experimental root canal sealer based on Copaiba oil-resin sealer (Brazil). The evaluation of the materials was performed after three different times of manipulation: 0h, 12h and 24h. The specimens were prepared, incubated in a humidified incubator (37°C with 5% CO2 in air for 12h and 24h) and them put in contact with the culture medium (82,4 mm2surface/ml) during 24h. V79 cells were exposed at different dilutions of the sealers during 24h and the cell’s viability was measured by the MTT test in a spectrophotometer. For the genotoxicity tests, the extracts from the concentrations with medium citotoxicity were selected for the comet assay after 24h of exposure. The cellular viability and the DNA damage were compared with the control groups and analyzed by the tests of Kruskal-Wallis and Dunn (p<0,05). The citotoxicity test showed that all root canal sealers showed a statistically significant difference when compared with the control group, with the exception of the RoekoSeal. The ranking of cell’s viability according with sealer utilized from the most to the least toxicic material was: EndoRez > AH Plus > Copaíba > RoekoSeal. The ranking of DNA damage verified at the comet assay, from the most to the least was: EndoREZ > RoekoSeal > AH Plus > Copaíba. It was conclude that, at the times and dilutions studied, the EndoREZ sealer is genotoxic and citotoxic