Submitted by Lara Oliveira (lara@ufersa.edu.br) on 2017-08-08T21:47:01Z No. of bitstreams: 1 EliezerFSF_DISSERT.pdf: 825442 bytes, checksum: 4e1f858f4401bb5bd1feb35cb8a2ae1e (MD5) / Approved for entry into archive by Vanessa Christiane (referencia@ufersa.edu.br) on 2017-08-17T22:39:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1 EliezerFSF_DISSERT.pdf: 825442 bytes, checksum: 4e1f858f4401bb5bd1feb35cb8a2ae1e (MD5) / Approved for entry into archive by Vanessa Christiane (referencia@ufersa.edu.br) on 2017-08-17T22:41:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 EliezerFSF_DISSERT.pdf: 825442 bytes, checksum: 4e1f858f4401bb5bd1feb35cb8a2ae1e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-17T22:41:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 EliezerFSF_DISSERT.pdf: 825442 bytes, checksum: 4e1f858f4401bb5bd1feb35cb8a2ae1e (MD5) Previous issue date: 2015-02-11 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / How do Genus Species Ipomoea station included between as weeds commonly found in cultivated areas, especially Ipomoea asarifolia (salsa) reported as a toxic plant species and causes que neurological disorders. There is little studies on the toxicity quantity make consumer cellular and genetic level these plants nos production animals semi-arid region. It was assessed a toxic capacity, cytotoxic and mutagenic of the aqueous extract of species leaves I. asarifolia (Convolvulaceae) about growth roots in Allium cepa bulbs; and about the frequency of micronucleated erythrocytes in bone marrow cells in vivo rodent (micronucleus test). Also it enrolled a median lethal dose (LD50) and studied the effect of weight in males and females and analyzed the behavior of animals (Hippocratic screening). Aqueous extracts of dried leaves (EFS) and Fresh (EFF) of I. asarifolia not presented toxic effects or cytotoxic in Allium cepa bulbs roots strain. Were observed allelopathic effects nos growth of roots. Aqueous extracts of dried leaves showed sublethal effects 5mg/L concentration and 300 mg/L. And the fresh leaves showed stimulatory effects all as concentrations studied. The aqueous extract of dried leaves and fresh not caused toxic effects and cytotoxic. There is not cytotoxic effect or in mutagenic rodent cells. The LD50 was found 754.26 mg/kg. From: No influence of gender (male and female) on the toxic effect, but at concentrations of 300 mg/kg and 600 mg/kg of weight was lost. The results against knowledge producers qua not like dry leaves not harm the production of animals / As espécies do gênero Ipomoea estão inclusas entre as plantas daninhas comumente encontradas em áreas de cultivo, especialmente Ipomoea asarifolia (salsa) relatada como uma espécie vegetal tóxica e que causa distúrbios neurológicos. Existe pouca quantidade de estudos sobre a toxicidade do consumo a nível celular e genético dessas plantas nos animais de produção da região do Semiárido. Foi avaliada a capacidade tóxica, citotóxica e mutagênica do extrato aquoso de folhas da espécie I. asarifolia (Convolvulaceae) sobre crescimento de raízes em bulbos de Allium cepa; e sobre a frequência de eritrócitos micronucleados em células da medula óssea de roedores in vivo (teste do micronúcleo). Também foi obtida a Dose Letal Mediana (DL50) e foi estudado o efeito do peso em machos e fêmeas e analisado o comportamento dos animais (screening hipocrático). Os extratos aquosos de folhas secas (EFS) e frescas (EFF) de I. asarifolia não apresentaram efeitos tóxicos nem citotóxicos em raízes de bulbos de Allium cepa. Foram observados efeitos alelopáticos nos crescimentos de raízes. Os extratos aquosos de folhas secas apresentaram efeitos subletais nas concentrações de 5mg/L e 300mg/L. E o das folhas frescas apresentaram efeitos estimulatórios em todas as concentrações estudadas. O extrato aquoso de folhas secas e frescas não provocou efeitos tóxicos e citotóxicos. Não houve efeito citotóxico nem mutagênico nas células de roedores. A DL50 encontrada foi 754,26 mg/Kg. Não houve influência do gênero (Macho e fêmea) sobre o efeito tóxico, mas nas concentrações de 300 mg/Kg e 600 mg/Kg houve perda de peso. Os resultados vão de encontro ao conhecimento dos produtores no qual as folhas secas não prejudicam o animal de produção / 2017-08-08

Submitted by Jos? Henrique Henrique (jose.neves@ufvjm.edu.br) on 2018-03-23T20:57:00Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) dayana_barbosa_cruz.pdf: 3792008 bytes, checksum: ccf297a5a3923b0c17236ccee6687c49 (MD5) / Approved for entry into archive by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2018-03-29T13:28:53Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) dayana_barbosa_cruz.pdf: 3792008 bytes, checksum: ccf297a5a3923b0c17236ccee6687c49 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-29T13:28:53Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) dayana_barbosa_cruz.pdf: 3792008 bytes, checksum: ccf297a5a3923b0c17236ccee6687c49 (MD5) Previous issue date: 2017 / Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri (UFVJM) / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (Capes) / As plantas medicinais t?m sido utilizadas pela humanidade, desde seus prim?rdios, com finalidades terap?uticas. Atualmente, cerca de 25% dos medicamentos s?o obtidos de esp?cies vegetais. Considerando a enorme biodiversidade do nosso pa?s destaca-se o potencial para a descoberta de novas mol?culas bioativas oriundas de produtos naturais. Esp?cies radicalares s?o produzidas continuamente em processos metab?licos fisiol?gicos, no entanto o desequil?brio entre agentes pr?-oxidantes e defesas antioxidantes provoca o aumento de esp?cies reativas circulantes conduzindo ao estresse oxidativo relacionado a etiologia de doen?as cardiovasculares, inflamat?rias, imunol?gicas, e relacionadas ao processo de envelhecimento como o Alzheimer e Parkinson. Para prevenir esse processo e as consequ?ncias ao organismo, tem-se aumentado a busca de compostos antioxidantes. Assim, o presente trabalho teve como objetivo avaliar o potencial antioxidante de cinco extratos etan?licos brutos de partes a?reas ou ra?z de esp?cies vegetais j? utilizadas na medicina popular da regi?o. Estas esp?cies foram: Gomphrena arborescens L.f. e Gomphrena virgata Mart. (Amarantaceae),Miconia ferruginata DC. (Melastomataceae) e Vochysia elliptica Mart. (Vochysiaceae), coletadas no munic?pio de Diamantina ? MG e regi?es subjacentes. Utilizando a metodologia de Folin-Ciocalteau pode-se observar que todos os extratos, exceto G. virgata ra?z, apresentaram teores de compostos fen?licos totais (CFT) com destaque para V. elliptica e M. ferruginata (792,36 e 561,89 mg EAG/g extrato, respectivamente). A atividade redutora dos extratos avaliada pela captura de radicais DPPH? e ABTS?+ demonstrou maior captura para os extratos com maior teor de CFT, sendo esta correla??o forte e positiva. Realizou-se ainda, avalia??o da interfer?ncia dos extratos na atividade sequestradora de radicais gerados em um sistema HRP/Luminol/H2O2 e tamb?m os efeitos sobre o burst oxidativo de neutr?filos humanos isolados, ativados com PMA. Apenas os extratos de V. elliptica e M. ferruginata foram testados, apresentando atividade protetora frente as esp?cies radicalares produzidas tanto pelo sistema, quanto pelo burst oxidativo. A avalia??o da viabilidade celular de neutr?filos em cultura na presen?a de todos os extratos sem est?mulos exteriores demonstrou que estes n?o s?o citot?xicos mesmo na maior concentra??o testada (1000 ?g/mL), tendo a V. elliptica apresentado poss?vel atividade citoprotetora nesta concentra??o. / Disserta??o (Mestrado) ? Programa de P?s-gradua??o em Ci?ncias Farmac?uticas, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, 2017. / Medicinal plants have been used by mankind since its beginnings for therapeutic purposes. Currently, about 25% of medicines are obtained from plant species. Considering the enormous biodiversity of our country stands out the potential for the discovery of new bioactive molecules coming from natural products. Radical species are continuously produced in physiological metabolic processes, however the imbalance between pro-oxidant agents and antioxidant defenses causes the increase of circulating reactive species leading to oxidative stress related to the etiology of cardiovascular diseases, inflammatory, immune, and related to the aging process such as Alzheimer?s and Parkinson's. To prevent this process and the consequences to the body, the search for antioxidant compounds has increased. Thus, the present work had as objective to evaluate the antioxidant potential of five crude ethanolic extracts of aerial parts or root of vegetal species already used in the popular medicine of the region. These species were: Gomphrena arborescens L.f. and Gomphrena virgata Mart. (Amarantaceae), Miconia ferruginata DC. (Melastomataceae) and Vochysia elliptica Mart. (Vochysiaceae), collected in the municipality of Diamantina - MG and subjacent regions. Using the methodology of Folin-Ciocalteau it can be observed that all extracts except G. virgata roots, presented total phenolic compounds (CFT), with emphasis on V. elliptica and M. ferruginata (792.36 and 561.89 mg EAG / g extract, respectively). The reductive activity of the extracts evaluated by the DPPH? and ABTS?+radical capture showed higher capture for extracts with higher CFT content, being this correlation strong and positive. We also evaluated the interference of the extracts in the sequestering activity of radicals generated in an HRP/Luminol/H2O2 system and also the effects on the oxidative burst of isolated human neutrophils activated with PMA. Only the extracts of V. elliptica and M. ferruginata were tested, presenting protective activity against the radical species produced by both the system and the oxidative burst. The evaluation of the cell viability of neutrophils in culture in the presence of all the extracts without external stimuli, demonstrated that they are not cytotoxic even at the highest concentration tested (1000 ?g / mL), and V. elliptica presented possible cytoprotective activity at this concentration.

Background. As a result of the AIDS pandemic, many people areimmuno compromised andopportunistic fungal infections (OFIs) such as candidiasis are common. Despite the widespread use of medicinal plants in South Africa, there is a dearth of knowledge regarding the use of such plants in the management of these infections. This study evaluates three South African medicinal plants (Arctotis arctotoides, Pittosporum viridiflorum, and Gasteria bicolor) traditionally used in the treatment of OFIs in HIV/AIDS patients, in the Eastern Cape Province, South Africa. Materials and methods. A six-stage process of documentation, evaluation and analysis of results was conducted: (1) Selection of medicinal plants most frequently used in the treatment of OFIs through ethnomedical studies and the survey of specialised literature; (2) Collection and preparation of the extract of each plant; (3) Antifungal evaluation of the crude plant extracts. (4) Phytochemical and antioxidant evaluation of the active crude plant extracts; (5) Cytotoxicity evaluation of the bioactive extracts using the Chang liver cell line, and (6) Statistical analysis of the results. Ethnobotanical information was obtained through interviews with traditional healers and AIDS patients with the aid of semi-structured questionnaires, direct observations and by reviewing studies reported in the literature. Following the approval from the University of Fort Hare‘s Ethics Committee, 101 HIV/AIDS patients were recruited through convenience sampling into an anonymous cross-sectional questionnaire study. The agar diffusion and micro-dilution methods were used to determine the antifungal activities of the hexane, acetone and aqueous extracts of A. arctotoides, G. bicolor and P. viridiflorum against 10 opportunistic fungi.

A conformação de dispositivos médicos implantáveis a partir de uma blenda exige o desenvolvimento de um produto com propriedades próximas do comportamento ideal, combinando propriedades térmicas e mecânicas e boa resposta tecidual. O Poli (ácido láctico-co-glicólico) (PLGA) e o Poli (isopreno) (IR) foram escolhidos como componentes da blenda com finalidade de promover boa biocompatibilidade e características mecânicas especificas. As blendas foram obtidas por dissolução dos polímeros em solvente orgânico, seguida de secagem. Para determinar a influência do teor de IR sobre as propriedades da blenda, foram realizados ensaios de espectroscopia na região de infravermelho por transformada de Fourier (FTIR), calorimetria diferencial de varredura (DSC), análise dinâmico-mecânica (DMA), microscopia óptica por luz polarizada (POM), análise de dureza, ensaio de tração e análise de viabilidade celular. A presença de IR na blenda provocou alteração na estrutura molecular semi-cristalina do PLGA, bem como influenciou o comportamento mecânico analisado a partir da curva tensão-deformação do material. A blenda se mostrou biocompativel em ambiente celular e em ensaios preliminares em animais, apresentando potencial para aplicação como biomaterial. / The conformation of an implantable medical device from a polymeric blend requires the development of a product with properties as close as possible of ideal behavior with the combination between thermal and mechanical properties and good tissue response. The poly (lactic-co-glycolic acid) (PLGA) and the poly (isoprene) (IR) were chosen as the blend components to promote good biocompatibility and specific mechanical characteristics. The blends were obtained by dissolution of polymers in organic solvent, followed by drying. In order to determine the IR content influence over the blend properties, Fourier transform infrared spectroscopy (FTIR), differential scanning calorimetry (DSC), dynamic mechanical analysis (DMA), polarized light optical microscopy (POM), hardness analysis, tensile test and cell viability test were carried out. The IR presence caused changes in semi-crystalline molecular structure of PLGA, as well as actuated over the mechanical response analyzed on material’s stress-strain curve. The blend showed itself biocompatible at cellular environment and at preliminary animal tests, presenting potential for application as biomaterial.

Nanoemulsões catiônicas têm sido recentemente propostas como sistemas carreadores de DNA. O presente trabalho teve por objetivo avaliar a influência de diferentes fosfolipídeos sobre propriedades dos complexos formados entre nanoemulsões e pDNA (pTracerTMCMV2). Em uma primeira etapa, nanoemulsões catiônicas constituídas de triglicerídeos de cadeia média, estearilamina, lecitina de gema de ovo ou fosfolipídeos isolados (DSPC, DOPC, DSPE ou DOPE), glicerol e água foram preparadas através do procedimento de emulsificação espontânea. Independente do tipo de fosfolipídeo empregado, esse procedimento conduziu à obtenção de nanoemulsões catiônicas monodispersas com diâmetro de gotícula e potencial zeta de cerca de 250 nm e +50 mV, respectivamente. A complexação do pDNA com as nanoemulsões catiônicas, avaliada através do retardamento de migração do pDNA em gel de agarose por eletroforese, foi total quando o complexo apresenta uma relação de cargas [+/-] ≥ 1,0. Nestas condições, os complexos formados foram protegidos da degradação pela enzima DNase I. Em uma segunda etapa, a citotoxicidade das nanoemulsões e dos complexos com o pDNA sobre células Hep G2 foi avaliada, através do ensaio de MTT. Os resultados obtidos demonstraram que a adição de quantidades crescentes das nanoemulsões, conduz a uma toxicidade progressiva sobre as células, independente do pH do meio. Dentre as formulações estudadas, aquelas estabilizadas pelos fosfolipídeos DSPC e DSPE, de elevada temperatura de transição de fases, foram marcadamente menos tóxicas, em comparação com as formulações obtidas com lecitina, DOPC e DOPE. Essa mesma tendência foi detectada para os complexos formados com o pDNA. Em uma última etapa, foi realizado um estudo preliminar de transferência gênica em células Hep G2, utilizando a técnica de PCR em tempo real. Dentre as diferentes formulações testadas, a maior quantidade de DNA de GFP detectada parece ser para a formulação obtida com o fosfolipídeo DSPC, ilustrando as potencialidades de uso das nanoemulsões desenvolvidas como reagentes de transfecção de pDNA em células Hep G2. Em conclusão, o conjunto dos resultados obtidos demonstra o efeito dos fosfolipídeos empregados sobre propriedades físico-químicas, complexação, estabilidade, citotoxicidade e transfecção de nanoemulsões catiônicas como sistemas carreadores de pDNA. / Cationic nanoemulsions have been recently considered as potential delivery systems for DNA. The aim of the present work was to evaluate the influence of different phospholipids on the properties of complexes formed between nanoemulsions and pDNA (pTracerTM-CMV2). First, cationic nanoemulsions composed of medium chain triglycerides, stearlyamine, egg lecithin or isolated phospholipids (DSPC, DOPC, DSPE or DOPE), glycerol and water were prepared through spontaneous emulsification process. Independently of the type of phospholipid used this procedure results in monodisperses cationic nanoemulsions with droplet size and zeta potential of about 250 nm and +50 mV, respectively. The complexation of pDNA with cationic nanoemulsions, analyzed by agarose gel retardation assay was total when the complex possesses a charge relation [+/-] ≥ 1.0. In these conditions the complexes were protected from enzymatic degradation by DNase I. After that, the cytotoxicity of the nanoemulsion and the complexes with pDNA in Hep G2 cells was evaluated through MTT assay. The results showed that the addition of increasing amount of nanoemulsion leads to a progressive toxicity on the cells independently of the media’s pH. Among the studied formulations the ones stabilized with the phospholipids DSPC and DSPE, that have elevated phase transition temperatures, were much less cytotoxic in comparison with the formulations obtained with lecithin, DOPC and DOPE. This same trend was detected for the complexes formed with pDNA. Finally a preliminary study of gene transfer to Hep G2 cells was performed using real-time PCR technique. Among the different formulations tested, the major quantity of reporter DNA detected seems to be for the formulation obtained with the DSPC phospholipid. This shows the potentialities of the use of nanoemulsions as transfection reagents of pDNA in Hep G2 cells. In conclusion, the overall results show the effect of the phospholipids on physicochemical properties, complexation, stability, cytotoxicity and transfection of cationic nanoemulsions as delivery systems for pDNA.

Submitted by Ana Hilda Fonseca (anahilda@ufba.br) on 2013-04-09T15:57:22Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Alessandra (4).pdf: 2685859 bytes, checksum: 5365f2b719ecbda7464c4a77b11585ec (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Hilda Fonseca(anahilda@ufba.br) on 2013-04-18T17:37:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação Alessandra (4).pdf: 2685859 bytes, checksum: 5365f2b719ecbda7464c4a77b11585ec (MD5) / Made available in DSpace on 2013-04-18T17:37:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação Alessandra (4).pdf: 2685859 bytes, checksum: 5365f2b719ecbda7464c4a77b11585ec (MD5) Previous issue date: 2009 / CAPES / O presente trabalho é uma contribuição à pesquisa de plantas medicinais, e descreve o estudo farmacognóstico das espécies Averrhoa bilimbi e Poiretia bahiana no que diz respeito aos aspectos botânicos, fitoquímicos e à avaliação de atividade biológica. As folhas e frutos da espécie A. bilimbi foram caracterizados pelos aspectos morfoanatômicos, e apenas de seus frutos foram realizadas extrações com metanol, seguido de fracionamento para obtenção dos extratos brutos hexânico, clorofórmio e acetato de etlia. Estes extratos foram avaliados quanto ao potencial citotóxico através do bioensaio com o microcrustáceo Artemia salina. Os extratos brutos clorofórmio e acetato de etila foram submetidos ao fracionamento e isolamento de substâncias através de técnicas cromatográficas. A identificação das substâncias isoladas foi realizada através de métodos espectroscópicos, tais como RMN de 1H e 13C. Para a espécie P. bahiana, o estudo envolveu a caracterização anatômica de suas folhas e obtenção de extratos brutos hexânico, clorofórmio, acetato de etlia e hidroalcoólico através de técnicas cromatográficas. Os extratos obtidos foram avaliados quanto ao potencial citotóxico frente a A. salina, e a capacidade seqüestradora de radical livre, medida pelo método DPPH (2,2-difenilpicril- hidrazil). Os resultados apresentados no estudo farmacobotânico das espécies A. bilimbi e P. bahiana permitiram levantar características muito peculiares nos aspectos morfoanatômicos. A espécie A. bilimbi apresentou um elevado potencial citotóxico, evidenciado pela morte de 100% dos microcrustáceos em todos os extratos avaliados. A partir do fracionamento e isolamento das substâncias presentes nos extratos acetato de etila e clorofórmio da espécie A. bilimbi foram isoladas as substâncias 3β-O-β-D-glicopiranosil sitosterol e 3,5-dimetoxi-benzaldeído, até então não descritas para a espécie. Já a espécie P. bahiana apresentou apenas citotoxicidade nos extratos hexânico e clorofórmio, entretanto foi observada atividade antioxidante dos extratos hidroalcoólico, clorofórmio e acetato de etila através do teste com o DPPH, demonstrando ter potencial como fonte de substâncias antioxidantes. / Salvador

Aves domésticas são um dos principais alvos da contaminação alimentar com micotoxinas. O que contribui para o aumento dos prejuízos da indústria avícola devido a problemas como: alta mortalidade, redução do ganho de peso, alteração da conversão alimentar, imunossupressão, anormalidades embrionárias e morte embrionária precoce. Além disso, o acúmulo residual de micotoxinas na carne é uma preocupação da Saúde Pública. Diversos métodos são utilizados para a avaliação da citotoxicidade induzida por agentes tóxicos, incluindo a inibição do crescimento celular, a avaliação da capacidade celular de sintetizar macromoléculas necessárias para a replicação e da capacidade desse agente tóxico para induzir a peroxidação lipídica. Sendo assim, o objetivo geral do presente estudo foi avaliar os efeitos in vitro de ocratoxina A, deoxinivalenol e zearalenona sobre o sistema imunológico de frangos de corte, utilizando como parâmetros, a viabilidade celular, a atividade enzimática e o estresse oxidativo. Realizou-se cultivo primário de linfócitos das aves e o seu isolamento através da técnica de centrifugação por gradiente de densidade. Cada micotoxina foi adicionada ao meio celular, em uma confluência de 80%, em diferentes concentrações (0,001; 0,01; 0,1 e 1 μg/mL), analisando-se viabilidade celular, atividade de ecto-adenosina desaminase e acetilcolinesterase por ensaios colorimétricos e peroxidação lipídica através dos níveis de malondialdeído mensurados pela técnica de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico. Todos esses parâmetros foram analisados em 24, 48 e 72 h, em triplicata e os resultados expressos como média e erro padrão da média, utilizando nível de significância P<0,05. Os resultados obtidos demonstraram que tanto ocratoxina A como deoxinivalenol induziram proliferação linfocitária e baixa atividade de adenosina desaminase, enquanto zearalenona também induziu proliferação, mas nenhuma alteração na atividade da respectiva enzima. Quanto à avaliação da peroxidação lipídica, demonstrou-se a seguinte relação crescente de citotoxicidade: deoxynivalenol> ocratoxina A> zearalenona; enquanto que na avaliação da atividade de acetilcolinesterase esta relação foi inversamente proporcional. Este é o primeiro estudo in vitro realizado com ocratoxina A, deoxinivalenol e zearalenona sobre o cultivo primário de linfócitos de frangos de corte na avaliação desses parâmetros. / Poultry is one of the main targets of food contamination with mycotoxins. This contributes to the increase in the poultry industry losses due to problems such as high mortality, reduced body weight gain, change in feed conversion, immunosuppression, embryonic abnormalities and early embryonic death. Furthermore, the residual accumulation of mycotoxins in the meat is a public health concern. Various methods are used to assess the cytotoxicity induced by toxic agents, including inhibition of cellular growth, the evaluation of cell ability to synthesize macromolecules necessary for replication and the ability of this toxic agent to induce lipid peroxidation. Thus, the general objective of this study was to evaluate the in vitro effects of ochratoxin A, deoxynivalenol and zearalenone on the immune system of broiler chickens using as parameters, cell viability, enzymatic activity and oxidative stress. It was realized a primary culture of lymphocytes of birds and their isolation through density gradient centrifugation technique. Each mycotoxin has been added to the cell medium, at 80% confluence, at different concentrations (0.001, 0.01, 0.1 and 1 μg/ mL), analyzing cell viability, ecto-adenosine deaminase and acetylcholinesterase activity by colorimetric assays and lipid peroxidation through the malondialdehyde levels measured by thiobarbituric acid-reactive species test. All these parameters were evaluated at 24, 48 and 72 h, in triplicate and the results expressed as mean and standard error of the mean, using P<0.05 as significance level. The results showed that both ochratoxin A and deoxynivalenol induced lymphocyte proliferation and low adenosine deaminase activity, while zearalenone also induced proliferation, but no change in their enzyme activity. The assessment of lipid peroxidation demonstrated the following increasing cytotoxicity relation: deoxynivalenol>ochratoxin A>zearalenone; while in the evaluation of acetylcholinesterase activity this relationship was inversely proportional. This is the first in vitro study performed with ochratoxin A, deoxynivalenol and zearalenone on the primary culture of broiler chicken lymphocytes evaluating these parameters.

Charles University Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Pharmacology & Toxicology Student: Lucia Šinaľová Supervisor: RNDr. Jakub Hofman, Ph.D. Title of diploma thesis: Testing of the cytotoxicity of potential drugs in the cell lines together with the measurement of their passage through the blood brain barrier by the PAMPA method This master thesis focuses on the prediction of tacrine derivatives permeability through blood- brain barrier and their cytotoxicity. We studied tacrine-benzothiazole and tacrine- thiaquinazoline derivates as potential drugs for treatment of Alzheimer's disease. The reason of testing new tacrine derivates was effort to find substances with same effect and lower toxicity, for which was the tacrine discarded from clinical practice. The probable permeability of the studied substances was determined in vitro by the PAMPA method. Based on the permeation coeficient values we have identified that tacrine-benzothiazole derivates A-D (Pe= 8,31- 16,9×10-6 cm/s) and tacrine-thiaquinazoline derivates 1, 3, 4 (Pe= 8,59-14,9×10-6 cm/s) were permeable through blood-brain barrier, tacrine-thiaquinazoline derivate 2 (Pe= 3,79×10-6 cm/s) had uncertain permeability and tacrine-thiaquinazoline derivate 5 (Pe= 2,0×10-6 cm/s) was not permeable. In the pre-clinical evaluation of...

Muitas espécies de pimentas vermelhas do gênero Capsicum são utilizadas em práticas medicinais tradicionais. Essas plantas são empregadas em algumas preparações para tratar uma variedade de doenças, incluindo infecções. Algumas bactérias produzem biofilme como um importante fator de virulência, pois a estrutura do biofilme intermedia a adesão bacteriana a superfícies, como em dispositivos implantados, sondas e cateteres além de promover proteção física contra os antibióticos ou as respostas do sistema imunológico. Dessa maneira, este estudo investigou a capacidade do extrato e de produtos isolados das sementes de Capsicum baccatum como agentes antibiofilme. Este estudo demonstra, pela primeira vez, que um extrato de C. baccatum apresentou importante atividade antibiofilme contra Staphylococcus epidermidis e Pseudomonas aeruginosa. A fração ativa foi obtida através de ensaios bioguiados e analisada por HPLC-DAD-MS, MALDI-TOF MS e MALDI-MS/MS, identificando-a como peptídeos da proteína 2S sulfur-rich seed storage protein 2-like. Estes peptídeos (2mg/ml) foram potentes no controle da formação de biofilme de S. epidermidis (>96%) em solução e adsorvidos em lâminas de Permanox® recobertas. De modo interessante, não inibiram o crescimento bacteriano, indicando que a inibição do biofilme é independente da morte celular bacteriana. Ainda, esses peptídeos foram capazes de preservar eritrócitos, bem como a integridade de linfócitos humanos após 24 e 48 horas de exposição, demonstrando que o fracionamento do extrato de C. baccatum potencializou a sua atividade antibiofilme e reduziu significativamente a sua citotoxicidade. Nossos resultados corroboram com a pesquisa de novas estratégias não antibióticas para combater microrganismos com reduzida possibilidade para o desenvolvimento de resistência. / Many species of Capsicum red peppers are used in traditional medicinal practices. These plants are utilized in a number of preparations to treat a variety of illnesses including infections. Some bacteria produce biofilm as an important virulence factor, due to this its structure mediates the adhesion to surfaces as implanted devices, probes, catheters and also promotes physical protection against the antibiotics or the immune system response. Accordingly, this study investigated the ability of the extract and isolated products from seeds of Capsicum baccatum as anti-biofilm agent. This study demonstrates by the first time that an extract from C. baccatum presented relevant anti-biofilm activity against Staphylococcus epidermidis and Pseudomonas aeruginosa. The active fraction was obtained by bio-guided assays and analyzed by HPLC-DAD-MS, MALDI-TOF MS and MALDI-MS/MS, identifying it as peptides from 2S sulfur-rich seed storage protein 2-like. It strongly controlled (2mg/ml) the S. epidermidis biofilm formation (>96%) when the compound was in solution and adsorbed on Permanox™ slides. Interestingly, it did not inhibit the growth of this bacterium, indicating the inhibition of biofilm is independent of bacterial cell death. Moreover, this peptides preserved human erythrocytes and lymphocytes integrity after 24-48 h of exposure, suggesting the fractionation potentiated the anti-biofilm activity of the C. baccatum crude extract while absolutely reduced its cytotoxicity. Our results corroborate to the search of new non-antibiotic strategies to combat microorganisms with a reduced pressure for resistance development.

Espécies reativas de oxigênio (ERO) são produzidas através da respiração aeróbica e durante processos inflamatórios. Além disso, agressões externas como radiações, poluição, estresse, alcoolismo e tabagismo aumentam a sua produção. Altos níveis de ERO podem ocasionar dano oxidativo à lipídios, proteínas e DNA, comprometendo a função normal da célula, podendo estar envolvidos na patogênese e agravamento de diversas doenças. Há evidências que sugerem que antioxidantes naturais presentes em alimentos conferem benefícios adicionais à saúde, atuando como anticarcinogênicos, antiinflamatórios ou agentes antimutagênicos. O orégano (Oreganum sp) é uma especiaria mediterrânea usada como condimento na alimentação e pela medicina popular para diversos tipos de moléstias. O óleo possui forte ação antimicrobiana, devido ao elevado conteúdo de monoterpenos, sendo os principais o carvacrol, o timol e o para-cimeno. O carvacrol (5-isopropil-2metilfenol) é um fenol monoterpênico, com sabor picante e odor característico e tem sido amplamente usado na indústria de alimentos como aditivo seguro para aumentar a vida útil dos alimentos, como aromatizante em produtos assados, doces, bebidas e gomas de mascar, e/ou agente antimicrobiano com atividades contra bactérias, fungos e leveduras. Estudos têm relatado efeito antidepressivo e ansiolítico do carvacrol em camundongos, assim como proteção contra a radiação UVB diminuindo a peroxidação lipídica, estresse oxidativo e danos no DNA em células linfocitárias humanas e atividade antioxidante em diferentes sistemas de lipídios. Nós avaliamos a viabilidade celular e parâmetros de citotoxicidade do carvacrol em células de neuroblastoma humano SH-SY5Y. Este parece modificar levemente a morfologia das células, sem modificar significativamente a biomassa celular, parecendo ser tóxico na concentração de 100 μg/mL. Nas demais concentrações (1 a 50 μg/mL) não houve citotoxicidade. No ensaio de DCFH-DA o carvacrol reduziu a produção de ERO intracelular e diminui significativamente a produção de radicais peroxil no ensaio TRAP. Esses dados reforçam a ideia do carvacrol ser um potencial antioxidante, sendo necessários mais estudos para avaliar o mecanismo de ação deste composto. / Reactive oxygen species (ROS) are produced through aerobic respiration and during inflammation. Besides, external aggressions such as radiation, pollution, stress, alcoholism and smoking increase their production. Elevated levels of ROS can cause oxidative damage to lipids, proteins and DNA, compromising the normal cell function, and may be involved in the pathogenesis and progression of several diseases. There is suggesting that natural antioxidants found in foods provide additional health benefits, acting as anticarcinogenic, anti-inflammatory agents or antimutagenic. Oregano (Oreganum sp) is a Mediterranean spice used in food as a condiment and in popular medicine to treat several types of diseases. The essential oil has strong antimicrobial activity, due to the high content of monoterpenes, the main ones being carvacrol, thymol and para-cymene. Carvacrol (5-isopropyl-2metilfenol) is a phenol monoterpene with spicy taste and odor and has been widely used in food industry as additive to preserve foods, as flavoring agent in baked goods, candy, drinks and chewing gums, and/or antimicrobial agent with activity against bacteria, fungi and yeasts. Studies have reported antidepressant and anxiolytic effects of carvacrol in mice, as well as protection against UVB radiation, decreased lipid peroxidation, oxidative stress and DNA damage in human lymphocyte cells, and antioxidant activity in different lipid systems. We evaluated cell viability and cytotoxicity parameters of carvacrol in human neuroblastoma cells SH-SY5Y. Carvacrol induced morphology changes in cells without significant modification of the cellular biomass content and it was toxic at the concentration of 100 μg/mL. In other concentrations (1-50 μg/mL) it showed no cytotoxicity. In DCFH-DA assay carvacrol reduced the intracellular ROS production and significantly decreased the production of peroxyl radicals in the TRAP assay. These data reinforce the idea of carvacrol as a potential antioxidant and more research is needed to evaluate the mechanism of action of this compound.