Orientador: Maria Luiza Silveira Mello / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-13T07:52:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Barberio_Agnes_D.pdf: 1536569 bytes, checksum: b0e9b0bcd32d35ac2c8d2729b86b741b (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Uma das principais fontes de poluição dos ecossistemas de água doce se refere aos resíduos de efluentes industriais e urbanos. Os esgotos não tratados e excrementos humanos são considerados causa importante na deterioração da qualidade da água de países em desenvolvimento. Os poluentes ambientais têm causado uma diminuição da qualidade da água, induzindo efeitos deletérios nos organismos que estão em contato direto ou indireto com os mesmos. O efeito da exposição dos organismos a qualquer substância potencialmente tóxica, depende de sua concentração e do tempo de exposição. Um dos efeitos, freqüentemente observado pelos agentes ambientais é a alteração química do DNA. Tais modificações são prejudiciais às células, uma vez que podem afetar processos vitais, como a duplicação e a transcrição do DNA, a regulação gênica e a divisão celular, e levar ao desenvolvimento de processos patogênicos e/ou à morte celular. Nesse contexto, testes biológicos de toxicidade e genotoxicidade são indispensáveis para a avaliação das reações dos organismos vivos à poluição ambiental, como também para a identificação dos efeitos sinérgicos potenciais de vários poluentes. O rio Paraíba do Sul é um dos integrantes da bacia do rio Paraíba do Sul, de importância para a região sudeste do Brasil, pois serve ao abastecimento urbano, à irrigação, à geração de energia, e à assimilação de despejos urbanos, industriais e agrícolas nessa região. No presente trabalho foram pesquisados efeitos citotóxicos e genotóxicos em raízes de Allium cepa expostas a amostras de água do rio Paraíba do Sul, coletadas em agosto de 2005, 2006 e 2007, em pontos localizados nas cidades de Tremembé e Aparecida (SP). Foram utilizados para investigação parâmetros anátomo-morfológicos (crescimento das raízes), índices mitóticos (IM), índices de fases da divisão celular (IF), freqüência de micronúcleos (MN) e anomalias cromossômicas (AC). O comprimento das raízes de cada bulbo foi acompanhado, diariamente, ao longo de 24 a 120 h. Somente as raízes tratadas com amostras de água coletadas em 2005, na cidade de Tremembé, apresentaram um decréscimo em taxa de crescimento. Entretanto, nesse mesmo ano, houve redução no IM das raízes tratadas com água coletada em Tremembé e Aparecida. Considerando-se os dados de crescimento de raiz e especialmente os valores de IM, admite-se que em 2005 a água do rio Paraíba do Sul nas regiões de Tremembé e Aparecida tenha tido potencial citotóxico. Por outro lado, ainda nesse mesmo ano, a freqüência de MN não se mostrou alterada, o que indica que a água do rio, nos pontos mencionados, não apresentaria potencial genotóxico. Em 2007 não houve diferença no crescimento das raízes assim como os valores de IM nas raízes tratadas com água de ambos os pontos de coleta não diferiram dos valores do controle negativo. As freqüências das fases da mitose (IF) diferiram de modo significativo dos respectivos controles; as freqüências de prófase e anáfase das raízes tratadas com as águas coletadas em Tremembé e em Aparecida foram maiores e a freqüência de telófases menor do que as dos controles negativos. As freqüências de metáfase foram maiores para as raízes tratadas por água coletada em Aparecida. Foram constatados aumentos significativos de MN e de AC em raízes tratadas com água das duas regiões de coleta. A freqüência de c-mitose foi significantemente maior após tratamento com a água proveniente de Tremembé, enquanto a freqüência de pontes cromossômicas foi maior para as raízes tratadas por água coletada em Aparecida. Considerando-se a freqüência de MN, AC e IF, admite-se efeito citotóxico e genotóxico para A. cepa tratada com as amostras de água do rio Paraíba do Sul das regiões de Tremembé e Aparecida, no ano de 2007. O teste Allium mostrou ser uma ferramenta sensível na detecção de citotoxicidade e genotoxicidade promovidas pela água do rio Paraíba do Sul nos pontos nomeados. / Abstract: One of the main sources of pollution of fresh water ecosystems refers to the discharge of industrial and urban wastes. Untreated sewage is considered an important cause to the deterioration of water quality in developing countries. Environmental pollutants have caused a decrease in water quality, inducing harmful effects in organisms which are in direct or indirect contact with them. The effect of exposure of organisms to any potentially toxic substance depends on its concentration as well as exposure time. One of the effects frequently observed by environmental agents is the chemical alteration of the DNA affecting vital processes, like DNA duplication and transcription, gene regulation and cell division, and leading cells to pathologic processes and/or cell death. In this context, toxicity and genotoxicity biological tests are mandatory for the evaluation of reactions of living organisms to environmental pollution, as well as for the identification of potential synergetic effects of several pollutants. The Paraíba do Sul river is one of the components of the Paraíba do Sul basin, of importance to the southeast region of Brazil, as it serves for urban supply, irrigation, generation of energy, and assimilation of urban, industrial and agricultural discharges in the mentioned region. This work aimed at researching cytotoxic and genotoxic effects in Allium cepa roots exposed to water samples collected from the Paraíba do Sul river in August 2005, 2006 and 2007, at sites located in the cities of Tremembé and Aparecida. Anatomo-morphologic parameters (root growth), mitotic indices (MI), cell division phase indices (PI), frequency of micronuclei (MN) and chromosome anomalies (CA) were investigated. Root lengths from each bulb were evaluated daily along 24 to 120 h. Only in the roots treated with the water samples collected at Tremembé in 2005, a decrease in root growth rate was found. However, in the same year, there was reduction in the MI of the roots treated with water collected at Tremembé and Aparecida. Considering the root growth data and especially the MI values, it is assumed that the water of the Paraíba do Sul river in the regions of Tremembé and Aparecida had a cytotoxic potential in 2005. On the other hand, still in the same year, no change in MN frequency was detected, which indicates that the water at the mentioned river points had probably no genotoxic potential. In 2007, there was no difference in root growth, as the MI values for roots treated with the water collected at both sites did not differ from the values of the negative control. The frequencies of the mitosis phases differed significantly from the respective controls; the frequencies of prophases and anaphases for roots treated with water collected at Tremembé and Aparecida were higher and the frequency of telophases were lower than those of the negative controls. Frequencies of metaphases were higher for roots treated with water collected in Aparecida. A significant increase in MN and CA was found for the roots treated with water collected from both sites. The frequency of c-mitosis significantly increased after treatment with the river water collected at Tremembé, whereas the frequency of chromosome bridges increased for roots treated with water collected at Aparecida. By considering the frequencies of MN, CA and PI, a cytotoxic and genotoxic effect is supposed for A. cepa treated with the water collected from the river Paraíba do Sul at sites of Tremembé and Aparecida, in 2007. The Allium test has proved to be a sensitive tool for detecting cytotoxicity and genotoxicity effects promoted by the Paraíba do Sul water in the mentioned sites. / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Domingos da Silva Leite / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-15T09:38:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Niemann_FernandaSoares_M.pdf: 1512099 bytes, checksum: db41f8402852d861b0bf574aeef40677 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Estudos das propriedades de virulência de Escherichia coli associadas às infecções intestinais são importantes para compreender seus mecanismos diarreiogênicos. Em um trabalho anterior, realizado em nosso laboratório descrevemos um fator de virulência no sobrenadante de E. coli isoladas de água de consumo na cidade de Ouro Preto, MG, com atividades enterotóxica e citotóxica. Este fator foi denominado enterotoxina termo-estável ST-like (ST-L). A ST-L foi purificada a partir dos sobrenadantes de cultura de amostras de E.coli cultivadas em meio CAYE modificado, fracionado com sulfato de amônio e por ultrafiltração e concentrado por liofilização. Este material foi submetido às cromatografias de exclusão molecular e fase reversa, em sistema HPLC. A ST-L purificada mostrou, pela análise eletroforética em 2D, ponto isoelétrico (pI) em 6,19 e massa molecular de aproximadamente 2kDa. A atividade biológica pelos tratamentos com enzimas tripsina, proteinase K, ribonuclease ou pepsina. A citotoxicidade da ST-L manteve-se inalterada sob variações de pH (3 a 9) e tratamento com solventes orgânicos. A toxina resistiu ao aquecimento à 100ºC mostrando ser termoestável. A caracterização biológica da ST-L mostrou que várias linhagens celulares foram sensíveis aos seus efeitos citotóxicos, sofrendo alterações celulares e nucleares, em até 24h, com a formação de vacúolos citoplasmáticos e morte celular, conforme verificado pelos testes de viabilidade celular dos lisossomos, mitocôndrias, membranas celulares e quantificação da população celular das linhagens HEp-2, Vero, CaCo-2 e HT-29. A ST-L não induziu acúmulo de fluídos no teste de alça ligada em intestino de coelhos induzindo, contudo, acúmulo de fluidos intestinais no teste de camundongos recém-nascidos (Dean). Foi possível determinar que a toxina STL encontra-se codificada num plasmídeo e apresenta uma região conservada de alta similaridade com estA2, o que justifica a presença de efeito enterotóxico no teste de Dean. No entanto, não foi possível determinar a região ativa para a atividade citotóxica da ST-L. Em função das características apresentadas sugere-se a toxina ST-L seja uma variante do grupo das enterotoxinas termoestáveis (ST) com atividade citotóxica produzida por E. coli diarreiogênicas. / Abstratc: Studies on the virulence properties of Escherichia coli associated with intestinal infections are important for the understanding of diarrheic diseases mechanisms. In a previous work we have described a factor presenting enterotoxic and cytotoxic activities in the culture supernatants of E. coli isolated from drinking water in the city of Ouro Preto, MG. This factor was called as thermo stable enterotoxin - like (ST-L) and it was purified from cultured supernatants produced with modified CAYE medium, fractionated with ammonium sulfate, being subsequently ultrafiltrated, subjected to molecular exclusion chromatography and then to reversed-phase chromatography in HPLC-system. The ST-L showed to be pure by the electrophoretic analysis in the bidimensionl electrophoresis (2D), being the isoelectric point (pI) of 6.19 and the molecular mass of approximately 2kDa. The toxin can not be inactivated by enzimes like trypsin, proteinase K, ribonuclease or pepsin. The cytotoxic activity of ST-L does not change whith pH variations (3 - 9), does not change after treatment with organic solvents and resists heating treatments of 100°C showing it to be heat-stable. Biological characterization of the toxin showed, through the tests of cell viability with the ST-L, that several cell lines were sensitive to the cytotoxin action, with major cellular and nuclear changes observed within 24 hour assays, presenting cytoplasmic vacuoles and cell death, what was verified by tests of cell viability of lysosomes, mitochondria, cell membranes and quantification of the cell population on cell lines like HEp-2, Vero, CaCo-2 and HT-29. The rabbits ileal intestinal loop tests, performed with the ST-L, did not show positive results, but the toxin acts by inducing intestinal fluid accumulation into the newborn mice test (Dean). Through molecular characterization tests, we found that the gene enconding for the toxin ST-L is in a plasmid and has a conserved region with high similarity to estA2, what justifies the presence of the positive enterotoxic result in the Dean test. However, it was not possible to determine the fragment responsible for cytotoxic activity of ST-L. According to the characteristics presented we suggest that the toxin-ST-L is a variant group of the heat-stable enterotoxin (ST) with cytotoxic activity produced by the diarrheagenic E. coli. / Mestrado / Microbiologia / Mestre em Genética e Biologia Molecular

Os modelos de reconstrução do microambiente são úteis para investigar as propriedades biológicas dos melanócitos humanos com a matriz e como plataforma para testes de novos fármacos. Existe uma demanda crescente para a utilização de pele e derme reconstruídas em laboratório, em ensaios in vitro de citotoxicidade, viabilidade celular, crescimento celular, irritabilidade e avaliação dos constituintes da matriz extracelular. Caracterizamos, em equivalente dérmico, alguns mecanismos de viabilidade e invasão de melanoma metastático humano quando na presença da matriz, a fim de ampliar o conhecimento a respeito de novas terapias contra o melanoma e entender os mecanismos que favorecem seu potencial invasivo, mimetizando com mais fidelidade o que ocorre in vivo. Através da validação deste modelo, constatamos que ele é essencial para resgatar a fisiopatologia do tumor, pois o melanoma, na presença de equivalente dérmico, torna-se capaz de evadir mecanismos de morte e aumentar a secreção de metaproteinases e citocinas que favorecerão a evolução tumoral. Avaliamos também as propriedades antineoplásicas do ácido clorogênico, que já foram relatadas em um grande número de tumores, porém os mecanismos que levam à sua ação antitumoral ainda não foram bem elucidados. Diante dos trabalhos enfatizando o efeito quimioprotetor dos polifenóis, referentes à sua ação antioxidante em células neoplásicas e com potencial metastático, não há na literatura estudos que comprovem a eficácia do ácido clorogênico sobre células de melanoma metastático humano. Portanto, este estudo visou recriar a estrutura dérmica in vitro e, a partir disso, comparar a resposta de fármacos em células de melanoma cultivada em equivalente dérmico, a fim de avaliar se há modulação diferencial nesse substrato, sugerindo, portanto, um protocolo mais eficaz para a prospecção de fármacos antimelanoma. / The microenvironment reconstruction models are useful for investigating the biological properties of human melanocytes onto the matrix and as platform for testing new drugs. There is a growing demand for the use of reconstructed skin and dermis in the laboratory for in vitro assays of cytotoxicity, viability, cell growth, irritability, and evaluation of the extracellular matrix. We characterize in dermal equivalent some mechanisms for cell viability and invasion of human metastatic melanoma in the presence of matrix, the order to increase knowledge about new therapies against melanoma and to understand the mechanisms that favor its invasive potential, to more closely mimic what occurs in vivo. By means of this model, we find that it is essential to rescue the tumor physiopathology as melanoma, in the presence of dermal equivalent, it is able to evade death mechanisms and increase the expression of metalloproteinases and cytokines which favor the tumor evolution. We also evaluated the antineoplastic properties of chlorogenic acid, that have been reported in a large number of tumors, but the mechanisms that lead to its antitumor action has not been well elucidated. Before the work emphasizing the chemoprotective effect of polyphenols related to its antioxidant action in neoplastic cells and with metastatic potential, there is no literature studies confirming the effectiveness of chlorogenic acid on human metastatic melanoma cells. Therefore, this study aims to rebuild the dermal structure in vitro, and from this, to compare the response to drugs in melanoma cells dermal equivalent cultured in order to evaluate whether modulation differential on the substrate, thus suggesting a protocol more effective for prospecting antimelanoma drugs.

Submitted by Alisson Mota (alisson.davidbeckam@gmail.com) on 2015-07-17T19:42:06Z No. of bitstreams: 1 Dissertação - Lidiam Maia Leandro.pdf: 7558907 bytes, checksum: 4dd15817ba882dd32549da94c60308e6 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-07-20T13:22:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Lidiam Maia Leandro.pdf: 7558907 bytes, checksum: 4dd15817ba882dd32549da94c60308e6 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-07-20T13:26:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Lidiam Maia Leandro.pdf: 7558907 bytes, checksum: 4dd15817ba882dd32549da94c60308e6 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-07-20T13:26:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação - Lidiam Maia Leandro.pdf: 7558907 bytes, checksum: 4dd15817ba882dd32549da94c60308e6 (MD5) Previous issue date: 2011-04-18 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Eperua is a genus of the Fabaceae-Caesalpinioideae, endemic to the Central Amazon. The oilresin of E. oleifera, E. purpurea e E. falcata is used in folk medicine in order analogous to “copaiba”, as a healing agent antifungal and bactericide. In general, two class substances have been isolated from this species: terpenes and flavonoids. Despite the species E. glabriflora and E. duckeana are common in the Amazon, have never been studied chemically and pharmacologically. This study aimed to evaluate the chemical composition of extracts of bark of trunk and leaves and to determine the antioxidant, antibacterial, antifungal, antiprotozoal and cytotoxic activity against tumor cells, and analyzing the chemical composition of essential oils from leaves and stems of these species. The plant material was collected in Ducke Reserve near Manaus and the bark and leaves were dried at room temperature and later crushed. The extracts were prepared by maceration with solvent in order of increasing polarity (hexane, ethyl acetate and methanol) were obtained twelve crude extracts. The non-polar extracts of bark of trunk were analyzed by gas chromatography coupled with mass spectrometry (GC-MS) and flame ionization detector (GC-FID). It was identified fourteen substances among them: six fatty acids (hexadecanoic acid, 9,12-octadecadienoic acid, 9- octadecenoic acid, octadecanoic acid, tetracosanoic acid and hexacosanoic acid); four diterpene acids (cativic acid, 3-hydroxylabd-7,13-dien-15-oic acid, 3-cleroden-15-oic acid and one isomer); one hydrocarbon (squalene); one vitamin (α-tocopherol); and two sterols (stigmasterol and β-sitosterol). The latter two substances were isolated in mixture and identified by spectrometric methods. From ethyl acetate extract of bark of trunk E.glabriflora was isolated from 3-O-glycoside-flavanonol, engeletin also present in the extract of E. duckeana, but in lower concentration. Other flavonoid was isolated from M+ 476 u.ma. Essential oils were obtained by hydrodistillation in Clevenger apparatus changed during 4h, then dried with sodium sulfate and analyzed by GC-FID and GC-MS. We identified 35 constituents in essential oils, and the β-caryophyllene and germacrene D the major constituents. Essential oils from leaves and stems showed cytotoxic activity against tumor cell lines of breast cancer (MDA/MB-435), colon (HCT8) and central nervous system (SKF-295) with inhibitions of growth of approximately 100%. The extracts tested showed weak or no trypanosoma cruzi or leishmania activity and antibacterial and antifungal activity, except the hexane extract of the bark of E. glabriflora that showed significant activity against grampositive bacterium Bacillus subtilis (MIC = 62.5 μg /mL). With respect to antioxidant potential, the highest activity of free radical sequestration was presented by the extracts in ethyl acetate and methanol of bark of trunk (IC50 10.5 -17.8 mg / mL) in both species. The results of this study contribute to the knowledge of chemical and biological of two species from Amazonian biodiversity. / Eperua é um gênero da família Fabaceae, endêmico da Amazônia Central. O óleo exsudado das espécies Eperua oleifera, Eperua purpurea e Eperua falcata é utilizado na medicina popular de modo análogo ao da copaíba, como cicatrizante, antifúngico e bactericida. De modo geral, duas classes de substâncias têm sido isoladas de espécies desse gênero: terpenos e flavonóides. Apesar das espécies Eperua glabriflora e Eperua duckeana serem comuns na Amazônia, nunca foram estudadas química ou farmacologicamente. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a composição química dos extratos obtidos das cascas do tronco e folhas e determinar as atividades antioxidantes, antibacteriana, antifúngica, antiprotozoária e citotoxicidade em células tumorais, além de analisar a composição química dos óleos essenciais das folhas e talos dessas espécies. O material vegetal foi coletado na Reserva Ducke em Manaus e as cascas e folhas foram secas à temperatura ambiente e posteriormente trituradas. Os extratos foram preparados por maceração com solvente em ordem crescente de polaridade (hexano, acetato de etila e metanol). Foram obtidos doze extratos brutos. Os extratos apolares das cascas foram analisados por Cromatografia à Gás acoplada ao Espectrômetro de Massas (CG-EM) e ao Detector de Ionização de Chama (CG-DIC). Foram identificadas quatorze substâncias, sendo essas: seis ácidos graxos (ácido hexadecanóico, ácido 9,12-octadecadienóico, ácido 9-octadecenóico, ácido octadecanóico, ácido tetracosanóico e ácido hexacosanóico); quatro ácidos diterpênicos (ácido catívico, ácido 3- hidroxi-labda-7,13-dieno-15-óico, ácido 3-clerodeno-15-óico e um isômero dele); um hidrocarboneto (esqualeno); uma vitamina (α-tocoferol); e dois esteróis (estigmasterol e β- sitosterol). As duas últimas substâncias foram isoladas em mistura e identificadas por métodos espectrométricos. Do extrato obtido em acetato de etila das cascas de E. glabriflora foi isolado um 3-O-glicosil-flavanonol conhecido como engeletina, presente também no extrato da E. duckeana, porém, em menor concentração; e um flavonóide de M+ 476. Os óleos essenciais foram obtidos por hidrodestilação, em aparelho clevenger modificado durante 4h, e seco com sulfato de sódio e analisados por CG-DIC e CG-EM. Foram identificados nos óleos essenciais 35 constituintes, sendo o β-cariofileno e o germacreno D os constituintes majoritários. Os óleos essenciais das folhas e talos apresentaram atividade citotóxica em linhagens de células tumorais de câncer de mama (MDA/MB-435), cólon (HCT8) e sistema nervoso central (SKF-295) com inibições de crescimento de aproximadamente 90%. Os extratos testados apresentaram fraca ou nenhuma atividade antileishmania, trypanosoma cruzi, antifúngica e antibacteriana, exceto para o extrato obtido em hexano das cascas de E. glabriflora que apresentou significativa atividade contra a bactéria gram-positiva Bacillus subtilis (CIM= 62,5 μg/mL). Com relação ao potencial antioxidante, a maior atividade de seqüestro de radical livre DPPH• foi apresentada pelos extratos obtidos em acetato de etila e metanol das cascas (CI50 10,5 -17,8 μg/mL) e ambas espécies. Os resultados obtidos neste trabalho contribuem para o conhecimento químico e biológico de duas espécies da biodiversidade amazônica.

Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2014-11-10T15:39:39Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Elizabeth Gomes Paulino Menezes - 2009.pdf: 1425255 bytes, checksum: 6aa32c741dbfa1d3e72e004f919b5326 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2014-11-10T15:39:55Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Elizabeth Gomes Paulino Menezes - 2009.pdf: 1425255 bytes, checksum: 6aa32c741dbfa1d3e72e004f919b5326 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-10T15:39:56Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Elizabeth Gomes Paulino Menezes - 2009.pdf: 1425255 bytes, checksum: 6aa32c741dbfa1d3e72e004f919b5326 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2009-11-03 / In this study the antileukemic potential of grandisin, a neolignan extracted from Piper solmsianum, was investigated against K-562 lymphocytic genealogy, which demonstrates a phenotype of resistance to new drugs. The cytotoxicity of grandisin (0.018 to 2.365 μMol) was evaluated in K-562 and in normal peripheral blood lymphocytes by using Blue of Trypan and MTT({[3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium] bromide}) methods. In the cytotoxic activity research about grandisin on K-562 cells and lymphocytes during 24 hours by the Blue of Trypan method, the grandisin got IC50 (inhibitory concentration to fifty percent) of 1.075 and 0.375 μMol to lymphocytes and K-562, respectively. After 48 hours, the cytotoxicity in normal cells remained themselves and we noticed there was an increase in IC50 leukemic cells of 0.198 μMol and 0.200 μMol in K-562 and lymphocytes, respectively. For the MTT test, results were similar to those found during the previous experiment (IC50K-562 11,98 μMol IC50lymphocytes 0,425 μMol for a period of 24 hours and IC50K-562 0,685 IC50lymphocytes 0,851 μMol for a period of 48 hours). The research about cell death mechanisms showed the treatment in K-562 cells joined to 0.036 μMol of grandisin during 24 hours, induces to an increase of cells population in G1 stage of cell cycle and it also induces to a decline of cells population in G2 stage and S, respectively. These factors also indicate that the grandisin was induced to a cell cycle standstill in G1 stage, which is proportionated to the most antileukemic agents existing. Cell death with apoptosis signs was showed by the research about these cells morphology. Moreover, the treatment of leukemic cells with 0.072, 0.036, 0.018 μMol of grandisin during 24 hours has promoted exposure of annexin V, wich is a first indicator of apoptosis. In these cells, the activity research of 3, 6 and 9 caspases and cell death mediators Bcl2 and Bax showed that cell death happens in dependent-caspase way and with balance induction between Bcl2 and Bax. Collectively, these results introduce a new model able to induce apoptosis in a leukemic cell genealogy with important features of resistance to the process of programmed cell death. / Neste estudo, o potencial antileucêmico da grandisina, uma neolignana extraída de Piper solmsianum, foi investigado contra a linhagem leucêmica K-562, a qual apresenta fenótipo de resistência a fármacos. A citotoxicidade da grandisina (0,018 – 2,365 μMol) foi avaliada em K-562 e em linfócitos do sangue periférico normal utilizando os métodos de Azul de Tripano e MTT({brometo de [3-(4,5-dimetiltiazol-2-yl)-2,5-difeniltetrazolio]}). Na investigação da atividade citotóxica da grandisina sobre células K-562 e linfócitos por 24 horas pelo método azul de tripano, a grandisina apresentou IC50 (concentração inibitória para cinqüenta porcento) de 1,075 μMol e 0,375 μMol para linfócitos e K-562, respectivamente. Após 48 horas a citotoxicidade para as células normais se manteve e observamos aumento para as células leucêmicas IC50 0,198 μMol e 0,200 μMol para K-562 e linfócitos, respectivamente. Para o teste de MTT os resultados foram semelhantes aos encontrados no ensaio anterior (IC50K-562 11,98 μMol IC50linfócitos 0,425 μMol para 24 horas e IC50K-562 0,685 μMol IC50linfócitos 0,851 μMol para 48 horas ). A investigação dos mecanismos de morte celular demonstrou que o tratamento das células K-562 com 0,036 μMol de grandisina por 24 horas induz ao aumento da população de células em fase G1 do ciclo celular e uma diminuição da população de células em fase G2 e S, respectivamente, indicando que a grandisina induziu parada do ciclo celular em fase G1, o que condiz com a maioria dos antileucêmicos existentes. A investigação da morfologia destas células indicou morte celular com sinais de apoptose. Além disto, o tratamento das células leucêmicas com 0,072, 0,036, 0, 018 μMol de grandisina por 24 horas promoveu a externalização da anexina V, um indicador primário de apoptose. Nestas células, a investigação da atividade das caspases 6, 8 e 9 e dos mediadores do processo de morte celular Bcl2 e Bax demonstrou que a morte celular ocorre via caspase-dependente e com indução de modulação entre Bcl2 e Bax. Coletivamente estes resultados introduzem um novo modelo capaz de induzir apoptose em uma linhagem celular leucêmica com importantes características de resistência ao processo de morte celular programada.

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-06-08T20:01:21Z No. of bitstreams: 1 Dissertação - Julie Marie Martins Monteiro.pdf: 996366 bytes, checksum: 7736bdc6fce423bd155ddb42d5bb7df9 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-06-08T20:01:34Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Julie Marie Martins Monteiro.pdf: 996366 bytes, checksum: 7736bdc6fce423bd155ddb42d5bb7df9 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-06-08T20:03:17Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Julie Marie Martins Monteiro.pdf: 996366 bytes, checksum: 7736bdc6fce423bd155ddb42d5bb7df9 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-08T20:03:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação - Julie Marie Martins Monteiro.pdf: 996366 bytes, checksum: 7736bdc6fce423bd155ddb42d5bb7df9 (MD5) Previous issue date: 2015-05-29 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / Phytochemical investigations led to the isolation and characterization of biflorin that among the compounds already isolated from Capraria biflora, showed promise with a powerful antimicrobial and antitumor activity. Therefore, the aim of this study was to evaluate the antimicrobial activity of biflorin on the oral cavity microorganisms and cytotoxic activity on cancer cell lineage of the oral cavity. The screening of antimicrobial activity biflorin was performed by diffusion technique in agar with the microorganisms Streptococcus mutans ATCC25175, Streptococcus salivarius ATCC7073, Streptococcus oralis ATCC10557 and Lactobacillus paracasei ATCC335. The quantification of the antimicrobial activity was performed by broth microdilution technique to determine the minimum inhibitory concentration (MIC). To evaluate the cytotoxicity of cancer lineage of the oral cavity was used cell line CAL-27 and the Alamar blue assay. In the agar diffusion test, biflorin presented antimicrobial activity against all evaluated microorganisms. The greatest antimicrobial activity was observed in trials with Lactobacillus paracasei and lower in trials with Streptococcus salivarius. Whereas biflorin was active against all tested micro-organisms, it determined the minimum inhibitory concentration. In the microdilution test biflorin showed lower MIC against Streptococcus mutans (MIC = 0,70μg/mL) and Streptococcus salivarius (MIC 3,125 μg/mL). While the 2% chlorhexidine was effective in its lower dilution (0,015%) of all tested bacteria. In Alamar blue cytotoxicity assay, the IC50 value of biflorin on the CAL 27 in 72 hours was 3.69 (3.17 to 4.30μM/mL) and Doxorubicin (control) was 0.039 (0.036- 0.088 μM/mL).The results suggest that biflorin can be incorporated in dental applications and products for the treatment of cancers of the oral cavity, but it is necessary to continue the research in this area with this substance / Investigações fitoquímicas levaram ao isolamento e caracterização da Biflorina que dentre os compostos já isolados da Capraria biflora, mostrou-se promissora com uma potente atividade antimicrobiana e antitumoral. Portanto, o objetivo deste estudo foi avaliar a atividade antimicrobiana da biflorina sobre micro-organismos da cavidade bucal e atividade citotóxica sobre linhagem de célula cancerígena da cavidade bucal. A triagem da atividade antimicrobiana da biflorina foi realizada através da técnica de difusão em ágar com os microorganismos Streptococcus mutans ATCC25175, Streptococcus salivarius ATCC7073, Streptococcus oralis ATCC10557 e Lactobacillus paracasei ATCC335. A quantificação desta atividade antimicrobiana foi realizada pela técnica de microdiluição em caldo para determinação da concentração inibitória mínima (CIM). Para avaliação da citotoxicidade sobre linhagem cancerígena da cavidade bucal foi utilizada a linhagem celular CAL-27 e o ensaio de Alamar blue. No teste de difusão em ágar, a biflorina apresentou atividade antimicrobiana frente atodos os micro-organismos avaliados. A maior atividade antimicrobiana foi observada nos ensaios com o Lactobacillus paracasei e a menor nos ensaios com Streptococcus salivarius. Considerando que a biflorina foi ativa frente a todos os micro-organismos testados, determinou-se a concentração inibitória mínima. No teste de microdiluição a biflorina apresentou menor CIM frente ao Streptococcus mutans (MIC=0,70 μg/mL) e Streptococcus salivarius (MIC 3,125 μg/mL). Enquanto a clorexidina a 2% foi eficaz em sua menor diluição (0,015%) sobre todas as bactérias testadas. No teste de citotoxicidade do Alamar blue, o valor da IC50 da Biflorina sobre a CAL-27 em 72 horas foi de 3.69 (3.17 – 4.30μM/mL) e a Doxorrubicina (controle) foi 0.039 (0.036-0.088μg/mL). Os resultados sugerem que a biflorina pode ser incorporada a produtos de uso odontológico e para o tratamento de neoplasias da cavidade oral, porém é necessário dar continuidade aos estudos com esta substância nesta área

Made available in DSpace on 2014-07-29T16:11:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Paula R Nunes.pdf: 2497503 bytes, checksum: 2a22fb8d4cdc25835230841f6fc7b21d (MD5) Previous issue date: 2012-02-28 / The complex of gold K[Au(CN2)], for example, was introduced at the beginning of the twentieth century for the treatment of tuberculosis and then replaced for the gold thiolates (I), which were used in the decade of 30 for the treatment of Rheumatoid Arthritis. The exploration of gold complexes for the use as an anti-cancer agent, in an attempt to find a drug less toxic that cisplatin. The current study aimed to evaluate potential cytotoxic and genotoxic, as well as the mechanism of cell death of three new gold-based compounds, which is bioactive substance of synthetic origin, using different cell lines in vitro. In the cytotoxicity assay the effects of the three gold complexes were evaluated in four tumor cell lines (B16-F10, K562 and A20) and in two normal lines (L-929, MRC-5) through MTT test, the compounds at different concentrations (0.2, 2, 20, 50, 100, 200 μM) per 48 hours of treatment. The study was conducted to test electrophoresis on agarose gel at concentrations corresponding to IC50 of the strains tested. Were also performed cell cycle analysis and comet test. In statistical analysis for comparison between treated groups and control them, was used Anova, in a single criterion and Dunnet's Post-test (GraphPad Prism 3.02). The results obtained with MTT assay the tested strains MRC-5, L-929, B-16-F10, A20, K562, for the Spar Au compound was (104, 65.1, 45, 48.3, 61 2, respectively) for the Au Levo compound was (52.8, 181, 28.8, 48.9, 50, respectively) and the Au Nor compound was (65.1, 79.2, 26 6, 24.9, 55, respectively). After the screening of compounds, more specific tests were performed only with some strains that showed more promising results. For K562 cells and B16-F10 treated with Au Levo and Au Spar, respectively, observed that the test showed no degradation of DNA by apoptosis in the tests performed with 48 hours of treatment with the compounds. The line B16-F10 treated with the compound Au Spar did not significantly alter cell cycle kinetics and no reported significant damage to DNA after 48 hours of treatment. More specific tests have to be made in order to deepen the mechanism of cell death, since the tests were not enough to demonstrate how the compound is acting. / O complexo de ouro K[Au(CN)2], por exemplo, foi introduzido na virada do século XX para o tratamento da tuberculose e logo após substituído pelos tiolatos de ouro (I), que foram usados nos anos 30 para o tratamento da artrite reumatóide. A exploração de complexos de ouro para uso como agente anticâncer foi iniciada na tentativa de se obter uma droga menos tóxica que a cisplatina. O presente trabalho teve como objetivo avaliar o potencial citotóxico e genotóxico, assim como o mecanismo de morte celular de três novos compostos a base de ouro, que tem como substância bioativa de origem sintética utilizando diferentes linhagens celulares in vitro. No ensaio de citotoxicidade os efeitos dos três complexos de ouro foram avaliados frente quatro linhagens tumorais (B16-F10, K562 e A20) e duas linhagens normais (L-929 e MRC-5) através do teste de MTT, em diferentes concentrações dos compostos (0,2; 2; 20; 50; 100; 200 μM) por 48 horas de tratamento. Foi realizado para o estudo o ensaio de eletroforese em gel de agarose nas concentrações correspondentes a IC50 das linhagens testadas (Sambrook, 2001), foram realizados também análises de ciclo celular e teste cometa. Análise estatística para comparação entre os grupos tratados e controle foi utilizado Anova segundo um único critério e pós-teste Dunnet s (software GraphPad Prism V4). Os resultados obtidos através do ensaio de MTT frente às linhagens testadas MRC-5, L-929, B16- F10, A20 e K562 para o composto Au Spar foi (104; 65,1; 45; 48,3; 61,2, respectivamente) para o composto Au Levo foi (52,8; 181; 28,8; 48,9; 50, respectivamente) e para o composto Au Nor foi ( 65,1; 79,2; 26,6; 24,9; 55, respectivamente). Após a triagem dos compostos, testes mais específicos foram realizados apenas com algumas linhagens que apresentaram resultados mais promissores. Para a linhagem K562 e B16-F10 tratadas com Au Levo e Au Spar respectivamente, observou-se que no ensaio de degradação de DNA não apresentaram padrão de degradação por apoptose nos ensaios realizados com 48 h de tratamento com os compostos. A linhagem B16-F10 tratada com o composto Au Spar não alterou significativamente a cinética celular, além de não apresentar danos significativos ao DNA após 48 h de tratamento. Testes mais específicos devem ser realizados com a finalidade de aprofundar no mecanismo de morte das células, visto que os testes realizados não foi o bastante para demonstrar qual é a via pelo qual o composto está agindo.

Submitted by Marlene Santos (marlene.bc.ufg@gmail.com) on 2016-08-30T17:41:02Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Júlia Martins Ulhôa Ferreira - 2016.pdf: 3148442 bytes, checksum: fc17d72cc71fdebb2a4ec57487e7cd21 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-08-31T13:05:08Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Júlia Martins Ulhôa Ferreira - 2016.pdf: 3148442 bytes, checksum: fc17d72cc71fdebb2a4ec57487e7cd21 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-31T13:05:08Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Júlia Martins Ulhôa Ferreira - 2016.pdf: 3148442 bytes, checksum: fc17d72cc71fdebb2a4ec57487e7cd21 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-08-16 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The study of biotransformation is important in the evaluation of safety and efficacy and for developing of new drug candidates. The "microbial models of mammalian metabolism", in which microbial biotransformation is used for the purpose of predict and obtaining human metabolites, is an alternative method to the use of animals for this study. Several advantages such as lower cost, a greater quantity and variety of derivatives produced, using mild conditions of reaction and decreasing the use of toxic volatile organic solvents are observed. The aim of this study was to produce derivatives of diacerein (1,8-diacetoxy-3-carboxyanthraquinone) by biotransformation using filamentous fungi and to evaluate the cytotoxicity of the main derivatives obtained given the resurgence of interest in this class of compounds. The diacerein is an anthraquinone with a wide range of biological activities, like as anti-osteoarthritis, analgesic, anti-inflammatory, antipyretic, prevention of vascular disease, insulin resistance treatment, anticancer. Analytical methodologies have been developed for monitoring the production of derivatives by thin layer chromatography and high-performance liquid chromatography (HPLC). After screening with seventeen fungal strains, Aspergillus ochraceus ATCC 1009 and Cunninghamella echinulata ATCC 9245 were selected for incubation in semipreparative scale. Of these incubations rhein (the main human metabolite) was obtained, which was characterized using the techniques Nuclear Magnetic Resonance (NMR) 1H e 13C, High Resolution Mass Spectrometry (MS), spectrometry in the UV region and analysed by HPLC. Another derivative was obtained by incubation with Aspergillus ochraceus ATCC 1009 and characterized by MS and analyzed by HPLC being, possibly, glycosylated diacerein. The influence of the addition of cytochrome P450 inhibitor in the production of metabolites was performed and inhibited the production of rhein about 41%, which may indicate the involvement of CYP1A1 and CYP1A2 in the deacetylation reaction. The cytotoxic potential of diacerein and rhein was evaluated by the tetrazolium reduction method (MTT) assay using murine fibroblast cells 3T3 and tumor cell line B16F10 (melanoma). Both the rhein, as diacerein, have demonstrated cytotoxic potential against B16F10 cells. / O estudo da biotransformação é de fundamental importância na avaliação da segurança e eficácia e para o desenvolvimento de novos candidatos a fármacos. O “Modelo microbiano do metabolismo animal”, no qual a biotransformação microbiana é utilizada com a finalidade de prever e obter metabólitos humanos, representa um método alternativo ao uso de animais para esse estudo, uma vez que são observadas diversas vantagens como menor custo, maior quantidade e variedade de derivados produzidos, utilização de condições brandas de reação e redução da utilização de solventes orgânicos voláteis tóxicos. O objetivo deste estudo foi produzir derivados da diacereína (1,8-diacetoxi-3-carboxiantraquinona) por biotransformação, utilizando fungos filamentosos e avaliar a citotoxicidade dos principais derivados obtidos, em função do ressurgimento do interesse desta classe de compostos. A diacereína é uma antraquinona com ampla gama de atividades biológicas - antiosteoartrósica, analgésica, anti-inflamatória, antipirética, prevenção de doenças vasculares, tratamento de resistência à insulina, anticâncer. Metodologias analíticas foram desenvolvidas para o monitoramento da produção dos derivados por cromatografia em camada delgada e cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). Após triagem com dezessete cepas fúngicas, Aspergillus ochraceus ATCC 1009 e Cunninghamella echinulata ATCC 9245 foram selecionadas para incubações em escala semipreparativa. Dessas incubações obteve-se reína (o principal metabólito humano), a qual foi caracterizada utilizando as técnicas Ressonância Magnética Nuclear de 1H e 13C, Espectrometria de Massas de Alta Resolução (EM), Espectrometria na região do ultravioleta/visível e analisada por CLAE. Outro derivado foi obtido da incubação com Aspergillus ochraceus ATCC 1009 e caracterizado por EM e analisado em CLAE, sendo, possivelmente, a diacereína glicosilada. A influência da adição de inibidor do citocromo P450 na produção dos metabólitos foi realizada e inibiu a produção de reína em cerca de 41%, o que pode indicar o envolvimento do CYP1A1 e CYP1A2 na reação de desacetilação.O potencial citotóxico da diacereína e da reína foi avaliado pelo método de redução do tetrazólio (MTT) utilizando células de fibroblasto murino 3T3 e da linhagem tumoral B16F10 (melanoma). Tanto a reína, quanto a diacereína, demonstraram potencial citotóxico contra células B16F10.

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-11-29T13:03:50Z No. of bitstreams: 1 Dissertação - Márcia de Jesus A. Silva.pdf: 2397176 bytes, checksum: 10d2601e2d4c7bb5bd425131e63a0ebc (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-11-29T13:04:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Márcia de Jesus A. Silva.pdf: 2397176 bytes, checksum: 10d2601e2d4c7bb5bd425131e63a0ebc (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-11-29T13:04:27Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Márcia de Jesus A. Silva.pdf: 2397176 bytes, checksum: 10d2601e2d4c7bb5bd425131e63a0ebc (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-29T13:04:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação - Márcia de Jesus A. Silva.pdf: 2397176 bytes, checksum: 10d2601e2d4c7bb5bd425131e63a0ebc (MD5) Previous issue date: 2016-04-29 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Inflammation is a physiological process that begins in response to infection or tissue damage. It is a mechanism focusing on tissue repair after injury and consists of a cascade of cellular and microvascular events that aims to remove damaged tissue and generation of new ones. In this cascade is observed an increasing in microvascular permeability, followed by adhesion and cell infiltration at the site of injury, apoptosis, and growth of new tissue and blood vessels. The nitrostyrene is a group of compounds consisting of an aromatic ring linked to a chain of the nitro group (NO2). It has been studied by having various biological activities such as anti-apoptotic, anti-platelet or anti-microbial, although few studies have been made for the anti-inflammatory activity of these compounds. The aim of this study was to evaluate anti-inflammatory activity of four new compounds from the class of nitrostyrene (NPA, 7B, 7D and 7E) in in vitro/in vivo assays. Initially, the compounds were submitted to in vitro testing in a murine macrophages model activated by lipopolysaccharide (LPS) and MRC5 human lung fibroblast in order to assess the cytotoxic potential of such compounds. Shortly thereafter, they were evaluated for inhibition of nitric oxide (NO·), for dosage of the cytokine TNF-α and evaluation of the expression of proteins involved in the inflammatory process. To evaluate the acute inflammatory process in vivo was performed edema induction by carrageenan tests on zebrafish model of LPS-induced pleurisy in mice. The four new compounds tested showed cytotoxic activity on J774A.1 and MRC5 cell when tested in the concentrations (3.12-25 μg/ml). For THP-1 cytotoxic activity was starting concentration of 10 μg/ml. All compounds inhibited nitric oxide production by macrophages activated by LPS but only the NPA showed a possibly significant concentration-response at the concentrations of 10 and 20 μg/ml. This same compound also reduced TNF-α, NF-B and ERK 1/2 levels in THP-1 cells. The NPA possibly also inhibited the carrageenan-induced edema in Zebrafish fish and leukocyte migration into the pleural cavity of mice by inhibiting the intracellular signaling pathways NF-B and ERK 1/2 in in vivo assays. In conclusion, compounds tested in this study not only presented significant cytotoxic activity, as also showed an excellent in vitro/in vivo anti-inflammatory potential, most likely by acting in the inhibition of NF-B and ERK 1/2 pathways. Data were important to explore the biological activity of these novel compounds and their possible application in the treatment of inflammatory diseases. / A inflamação é um processo fisiológico que se inicia em resposta a uma infecção ou dano aos tecidos. É um mecanismo direcionado ao reparo tecidual após a lesão e consiste em uma cascata de eventos celulares e microvasculares que tem como objetivo a remoção de tecidos danificados e a geração de outros novos. Nessa cascata é observado o aumento da permeabilidade microvascular, seguido pela adesão e infiltração de células no local da lesão, apoptose celular e crescimento de novos tecidos e vasos sanguíneos. Os nitroestirenos são um grupo de compostos constituído por anel aromático ligado a uma cadeia do grupo nitro (NO2). Eles têm sido estudados por apresentar diversas atividades biológicas tais como anti-apoptótica, antiplaquetária e antimicrobiana, entretanto poucas pesquisas têm sido realizadas quanto à atividade anti-inflamatória desses compostos. O objetivo deste estudo foi avaliar atividade anti-inflamatória de quatro novos compostos da classe dos nitroestirenos (NPA, 7B, 7D e 7E) em ensaios in vitro/in vivo. Inicialmente, os compostos foram submetidos a ensaio in vitro em modelo de macrófagos murino ativados por lipopolissacarídeo (LPS) e fibroblastos de pulmão humano MRC5, a fim de avaliar a capacidade citotóxica desses compostos. Logo em seguida, foram avaliados quanto à inibição de óxido nítrico (NO·), dosagem da citocina TNF-α e avaliação da expressão de proteínas envolvidas com o processo inflamatório. Para avaliar o processo anti-inflamatório agudo in vivo foi realizado ensaios de indução do edema por carragenina em peixe Zebrafish e o modelo de pleurisia induzido por LPS em camundongos. Os quatro novos compostos testados apresentaram atividade citotóxica em célula J774A.1 e MRC5 quando testados nas concentrações (3.12-25 μg/mL). Para THP-1 a atividade citotóxica foi apartir da concentração 10 μg/mL. Todos os compostos inibiram a produção de óxido nítrico em macrófago ativado por LPS, entretanto somente NPA apresentou uma possível concentração-resposta significativa nas concentrações de 10 e 20 μg/mL. Este mesmo composto também reduziu os níveis de TNF-α, NF-B e ERK 1/2 em células THP-1. O NPA também possivelmente inibiu o edema induzido por carragenina em peixe Zebrafish e a migração de leucócitos na cavidade pleural de camundongos através da inibição das vias de sinalização intracelular NF-B e ERK 1/2 em ensaios in vivo. Em conclusão, compostos testados neste estudo nao somente apresentaram atividade citotóxica significativa, como também demonstraram um excelente potencial anti-inflamatório in vitro e in vivo, provavelmente por atuação de inibição das vias NF-B e ERK 1/2. Os dados obtidos foram importantes para exploração da atividade biológica destes novos compostos e sua possível aplicação na terapêutica de doenças inflamatórias.

Para a avaliação do potencial irritante de substâncias aplicadas topicamente tem-se utilizado metodologias que baseiam nos estudos de Draize, onde preconiza-se o uso de animais. Devido à forte oposição a estes testes, intensa tem sido a busca por métodos alternativos visando diminuir ou eliminar a utilização de animais. Este estudo avaliou o potencial irritante de diversas substâncias através de duas metodologias: o teste in vivo , empregando metodologia oficial do Food and Drug Administration (FDA), onde utiliza-se coelhos e o teste de citotoxicidade in vitro - método de difusão em camada de agar sobreposta à monocamada de células - empregando as linhagens celulares He La e NCTC L 929 e o corante vital vermelho neutro. As amostras de produto acabado abrangeram colírios, testados sem diluição e xampus de uso adulto e infantil testados puros e diluídos a 25%, 5%, 1% e 0,1%. As matérias-primas compreenderam tensoativos aniônicos, não-iônicos e anfóteros testados após diluição. O material de acondicionamento foi representado por frascos de polietileno para colírios, testados através dos seus extratos em solução de NaCI 0,9%. Os resultados obtidos com as amostras de colírios e frascos de acondicionamento foram negativos quanto à irritação ocular em coelhos e comprovaram ausência de citotoxicidade nas duas linhagens celulares. As amostras de xampus apresentaram boa correlação dos resultados quando testadas sem diluição ou diluídas a 1,0% e 0,1 %. Foi calculada a correlação de Spearman entre os dados obtidos com as duas linhagens celulares sendo o valor do coeficiente r = 0,950 indicando uma correlação direta entre os resultados obtidos com as duas células. Os resultados demonstram a possibilidade de desenvolvimento de metodologias alternativas, sujeitas à validação, que resultem em procedimentos sensíveis, reprodutíveis, não sujeitos a critérios subjetivos de interpretação, visando assim, num primeiro estágio diminuir o uso de animais pelo emprego destas metodologias em avalições prévias do potencial irritante de substâncias químicas. / To evaluate the irritability potential of toppically laid on substances, some methodologies based on Draize\'s study where the use of animals is demanded, have been used. Due to the strong opposition of society and scientific comunity, the search for alternative methods having in view the reduction or even the elimination of animals have been intense, either through the use of volunteers or of in vitro methodologies. The present study has evaluated the irritability of several substances including finished products, raw materials and packagíng materials through two methodologies: the in vivo test which makes use of official methodology from Food and Drug Administration (FDA), where rabbits are employed and the citotoxicity in vitro test - method of diffusion in agar layer added to the monolayer of cells - using He La and NCTC L 929 cells lines and neutral red. The samples of the finished products embraced eye drops, tested without dilution, and shampoos for adults and children use both concentrated and diluted to 25%, 5%, 1% and 0.1 %. Raw materiais included anionis, non-anionic and amphoteric surfactants tested after dilution. The packaging material, represented by eye drops polyethylene bottles, was tested through its extracts in a NaCI 0,9% solution. The results obtained with the samples of eye drops and packaging materials were negative as for ocular irritation in rabbits and confirmed the absence of cytotoxicity in both cells lines. The samples of shampoos presented good correlation of results when tested without dilution or diluted to 1% and 0.1 %. It has been calculated Spearman correlation considering dates obtained with two cells lines, with value of coefficient r = 0,950 showing a direct correlation between results obtained with two cells. The results obtained with this study are likely to lead to sensitive and reproductive procedures, which won\'t arise subjective criteria of interpretation. Thus, the elimination of the use of animals will be possible at a first stage of previous evalution, and once a posterior validation of this methodology is done, the rational use of a smaller number of animais will be a reality.