Made available in DSpace on 2014-06-12T15:53:29Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo5141_1.pdf: 1650955 bytes, checksum: 86d4fc37a100ae729e8f3dc0238b95ef (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2005 / A avaliação da estrutura e função do cérebro do idoso, através de novas técnicas de neuroimagem, tem melhorado o conhecimento do substrato biológico do envelhecimento normal bem como de diferentes distúrbios cognitivos. No continuum entre envelhecimento normal e doença de Alzheimer (DA) situam-se pacientes com declínio cognitivo leve (DCL). O diagnóstico precoce e preciso destes pacientes é indispensável e tem sido assunto de muito interesse, com vários estudos mostrando muitas vezes resultados controversos. O objetivo da primeira parte deste trabalho foi estudar uma série de pacientes idosos (> 65 anos) com déficits de memória através de avaliação neuropsicológica e de neuroimagem, por ressonância magnética (volumetria e espectroscopia). No grupo de pacientes com DA leve os escores do mini-exame do estado mental (MEEM) e do teste de evocação de palavras foram significativamente menores (p < 0,05) quando comparados com o grupo com DCL. Observou-se, no grupo com DA leve, redução do volume hipocampal (~20%) em relação ao controle. Houve assimetria no volume hipocampal (direito > esquerdo), nos grupos controle e DCL. Foi observada correlação positiva entre o volume hipocampal e os escores do MEEM e do teste de evocação de palavras (p < 0,05). Os valores das relações metabólicas (NAA/Cr, mI/Cr, Co/Cr e mI/NAA) não foram diferentes nos grupos controle, DCL e DA leve. Como conclusão, na DA leve observou-se redução do volume hipocampal sem qualquer alteração na avaliação metabólica pela espectroscopia. A segunda parte deste trabalho se refere à avaliação de pacientes com os dois tipos mais freqüentes de cefaléias primárias: migrânea e cefaléia do tipo tensional. Um estudo XII retrospectivo foi realizado visando avaliar a freqüência de anormalidades encontradas durante a realização de estudo por tomografia computadorizada (TC), em 78 pacientes com migrânea ou cefaléia do tipo tensional. A TC foi normal em 61,5% dos pacientes examinados. Em um terço dos pacientes estudados foram detectadas anormalidades, como doença inflamatória dos seios paranasais (19,2%), cisticercose (3,9%), aneurisma cerebral não-roto (2,6%), impressão basilar (2,6%), lipoma intracraniano (2,6%), cisto aracnoideo (2,6%), sela vazia (2,6%), neoplasia intracraniana (2,6%) e outras afecções (2,6%). Nenhuma destas lesões era sintomática (achado incidental). Concluímos que o encontro fortuito de algumas anormalidades pela TC é freqüentemente mais elevado do que se prediz em pacientes com cefaléia primária. Nós discutimos brevemente alguns aspectos clínicos, epidemiológicos e da conduta terapêutica cirúrgica sobre algumas das anomalias diagnosticadas pela TC

Made available in DSpace on 2014-06-12T16:26:25Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo2151_1.pdf: 10414643 bytes, checksum: 6f935e65fc371d3afec0d8b9219be771 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A melhoria da solubilidade de compostos fracamente solúveis é um objetivo perseguido para os pesquisadores da química medicinal, porém mesmo havendo tal preocupação, a grande maioria dos compostos que demonstram atividade biológica possuem um entrave biofarmacêutico importante, a baixa solubilidade aquosa. A tecnologia farmacêutica por meio de sistemas como dispersões sólidas e a obtenção de complexos de inclusão utilizando ciclodextrinas surge como ferramenta útil no aumento de solubilidade de fármacos de baixa lipofílicos. Diante do exposto o objetivo deste trabalho foi a obtenção e caracterização do benznidazol, dispersões sólidas, de complexos de inclusão e multicomponentes no estado sólido visando o incremento da velocidade de dissolução do fármaco. Foram utilizados polímeros hidrofílicos, ciclodextrinas naturais (alfa, beta e gama) além de derivados da beta ciclodextrina tais como metilada e éter sulfobutílico. Malaxagem, rotaevaporação e liofilização foram os métodos utilizados na obtenção dos sistemas. Na caracterização foram utilizadas as ferramentas de IV, Raman, DSC, MEV, Raios-X e perfil de dissolução. Os sistemas obtidos (dispersões sólidas, complexos de inclusão e multicomponentes) no estado sólido apresentaram, via de regra, bom incremento de velocidade de dissolução frente ao BNZ isolado, fato confirmado nos cálculos da eficiência de dissolução, com destaque para os compostos obtidos pelos processos de rotaevaporação e liofilização. Pode-se concluir que a utilização da tecnologia farmacêutica para a obtenção desses sistemas com o BNZ é uma alternativa promissora para uma forma farmacêutica mais segura e eficaz para o combate a doença de Chagas

Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-06-21T19:15:33Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Antonio Victor Campos Coelho.pdf: 4460241 bytes, checksum: 7f4eae91de0754c21780d6ca3252c97b (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-21T19:15:34Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Antonio Victor Campos Coelho.pdf: 4460241 bytes, checksum: 7f4eae91de0754c21780d6ca3252c97b (MD5) Previous issue date: 2017-03-10 / CAPES / CNPQ / FACEPE / A infecção pelo HIV-1 ainda é um importante desafio de saúde-pública. Para contribuir na luta contra o vírus, foram abordados vários aspectos da história natural do HIV-1 por meio de análises genéticas com diferentes desenhos de estudo: (1) uma revisão sistemática com meta-análises e modelagem por séries temporais da prevalência de resistência primária aos antirretrovirais na América Latina e Caribe, que revelou que ainda aparenta estar baixa, mas devido à qualidade da evidência, os resultados podem estar subestimados em alguns casos; (2) um polimorfismo no gene ITPA foi associado à ocorrência de efeitos adversos sistêmicos decorrentes do uso de zidovudina, através de um estudo de caso-controle (p=0,03); (3) um polimorfismo no gene CNOT1 foi associado com resposta desfavorável a uma vacina terapêutica antiHIV-1 baseada em células dendríticas (p=0,0031) testada em um ensaio clínico de fase I com indivíduos brasileiros não-tratados com antirretrovirais, (4) uma revisão sistemática com meta-análise de protocolos de vacinas anti-HIV-1 terapêuticas baseadas em células dendríticas, que revelou onde esses protocolos podem melhorar e (5) um estudo de associação genética acerca da falha imunológica da terapia antiHIV-1 explorando polimorfismos em genes envolvidos em vias de farmacodinâmica de antirretrovirais e na homeostasia do sistema imune não encontrou associações significativas, suscitando novos estudos. Assim, a genética é uma ferramenta importante no acompanhamento de pacientes HIV-1 positivos, podendo guiar a otimização dos tratamentos disponíveis o desenvolvimento de novas vacinas terapêuticas. / The HIV-1 infection still is an important public health challenge. To contribute in the fight against the virus, we approached several aspects of HIV-1 infection natural history through genetic analyses, with different study designs: (1) A systematic review with meta-analysis and time series modeling of the prevalence of primary antiretroviral drug resistance in Latin America and the Caribbean, which revealed that it seems to be low, but it may be underestimated; due to the available evidence quality, (2) a polymorphism at ITPA gene was associated with AZT-related systemic adverse effects through a case-control study (p=0.03), (3) a polymorphism at CNOT1 gene was associated with poor response to a dendritic cell-based therapeutic vaccine (p=0.0031) resulting from a phase I clinical trial on untreated Brazilian patients, (4) a systematic review with metaanalysis of experimental anti-HIV-1 therapeutic vaccines protocols, which appointed improvements and (5) a genetic association study between polymorphisms in genes involved in antiretroviral drugs pharmacodynamic pathways and immune system homeostasis and antiretroviral therapy immunologic failure did not find significant associations during multivariate analysis, suggesting the need of further studies. Therefore, genetic analysis is a strong ally to be used in the follow-up of HIV-1 patients, having the potential to guide treatment optimization, as well to help the development of new therapeutic vaccines.

Submitted by Fernanda Rodrigues de Lima (fernanda.rlima@ufpe.br) on 2018-07-09T20:04:46Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Lívia Bandeira Costa.pdf: 7587037 bytes, checksum: 5852f9ada72b6f79f15f213c3df29a36 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-09T20:04:46Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Lívia Bandeira Costa.pdf: 7587037 bytes, checksum: 5852f9ada72b6f79f15f213c3df29a36 (MD5) Previous issue date: 2015-08-21 / CAPES / As diversas formas de Leishmanioses e a doença de Chagas apresentam grande impacto na qualidade de vida dos indivíduos acometidos. Não existem vacinas para humanos disponíveis para essas enfermidades e as drogas utilizadas no tratamento apresentam efeitos adversos e eficácia limitada. Neste contexto, compostos orgânicos vêm sendo testados como alternativa terapêutica. Dentre esses, destacam-se as hidrazonas, moléculas que possuem ação antiparasitária entre outras atividades farmacológicas. A triagem de compostos, utilizando a metodologia atual de ensaios de alto rendimento (High-throughput screening-HTS), possibilita avaliar uma grande quantidade de moléculas candidatas com eficiência, baixo custo e confiabilidade. No presente trabalho, foram avaliadas as atividades leishmanicida, tripanocida e citotóxica de 50 hidrazonas (tiossemicarbazonas, tiazolinonas e tiazóis), através do método HTS. Os resultados demonstraram que 43 compostos não apresentaram citotoxicidade frente às células HepG2 (células de hepatoma humano). Entre esses, sete compostos apresentaram atividade leishmanicida no ensaio de infecção, além de serem inativos no teste de citotoxicidade em células THP-1 (linhagem celular da leucemia humana aguda monocítica). De acordo com os critérios de seletividade, o composto LpQM-15 foi o mais ativo contra Leishmania sp. sendo, por essa razão utilizado para estudos posteriores sobre os seus possíveis mecanismos de ação no parasito. A análise ultraestrutural da atividade desse composto em promastigotas de Leishmania chagasi foi realizada por microscopia eletrônica de transmissão. Com objetivo de analisar alterações morfofisiológicas causadas pelo LpQM-15, parasitos tratados e controles foram submetidos a marcação com Anexina V, Iodeto de Propídio e Rodamina 123, e analisados por microscopia confocal e citometria de fluxo. A análise ultraestrutural relevou aumento do volume da mitocôndria, perfis de membrana mitocondrial concêntricos, inchaço das cisternas do complexo de Golgi e do retículo endoplasmático, ruptura da membrana celular, desorganização das organelas e a forte presença de inclusões lipídicas. O LpQM-15 foi capaz de induzir alterações no potencial de membrana mitocondrial. Além disso, os dados mostraram que este composto, nas concentrações testadas, induziu um mecanismo de morte celular sugestivo de apoptose nos parasitos. Das 43 moléculas não tóxicas frente às linhagens HepG2 e NIH-3T3 (fibroblastos), 12 apresentaram atividade tripanocida. Entretanto, três moléculas exibiram melhores resultados (LpQM-19, LpQM-28 e LpQM-31), corroborados através do modelo de relação quantitativa entre estrutura e atividade (QSAR). Adicionalmente, os compostos selecionados com atividade tripanocida não afetaram a viabilidade de células THP-1. Esses resultados sugerem que as moléculas bioativas frente à Leishmania sp. (LpQM-15) e ao T. cruzi (LpQM-19) são promissoras, apontando-as como candidatas a fármacos contra leishmaniose e doença de Chagas. / The several forms of Leishmaniasis and the Chagas disease are illness that cause a great health impact to the life quality of infected individuals. No human vaccines are available for these diseases and the currently used therapy shows serious adverse effects and limited efficacy. Therefore, the development of new therapeutic strategies is needed. In this regard, several organic compounds have been tested as an alternative therapy. Among these compounds, the hydrazones have been recognized for having a potential antiparasitic activity. The screening of compounds using HTS (high-throughput screening) allows to evaluate a big set of molecules with efficiency, quickness, low costs, and reliability, in a standardized way. In the present work the leishmanicidal, trypanocidal and cytotoxic activities of 50 hydrazones (thiosemicarbazones, thiazolinones and thiazoles) were evaluated using HTS assay. Of the 50 compounds analyzed, 43 did not show cytotoxicity against HepG2 (human hepatocellular liver carcinoma cell line). Among these compounds, seven showed positive activity on the intramacrophage assay besides not presenting cytotoxicity against THP-1 (human monocytic leukemia cell line). According to the selectivity criteria, the LpQM-15 compound was the most effective against Leishmania sp., and in this regard, it was used for further studies on its putative action mechanisms on this parasite. The ultrastructural analysis of Leishmania chagasi promastigotes treated with LpQM-15 revealed an increase in the mitochondrial volume, presence of concentric membranous profiles inside the mitochondrion, the swelling of the Golgi apparatus cisternae and endoplasmic reticulum, disruption of plasma membrane, cellular disorganization and the presence of a number of lipid inclusions. Aiming to evaluate the effects of LpQM-15 on the cell viability and mitochondrial membrane potential treated and untreated cells were submitted to annexin-V/propidium iodide and Rhodamin 123 labelling, respectively and analyzed by confocal microscopy and flow cytometry. LpQM-15 caused alterations in the mitochondrial membrane potential. Furthermore, our results suggest that LpQM-15, at tested concentrations, induced an apoptosis-like death in parasites. In Chapter 2, the trypanocidal and cytotoxic activities of compounds were evaluated. Of the 43 non-toxic compounds against HepG2 and NIH-3T3 (fibroblasts), 12 showed trypanocidal activity. The LpQM-19 LpQM-28 and LpQM-31 compounds showed to be the most effective against T. cruzi, being their trypanocidal activities corroborated by the quantitative structure-activity relationship model (QSAR). The most effective selected compounds against Leishmania sp. and T. cruzi showed no effect on the viability of THP-1. Taken together, our results point the LpQM-15 and LpQM-19 as drug candidates against leishmaniasis and Chagas disease, respectively.

Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-07-12T20:37:29Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Arthur Tenório Ribeiro Clark.pdf: 4721510 bytes, checksum: 77c32bc787cef13bf2d3a0fa3ee2312c (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-07-13T22:34:01Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Arthur Tenório Ribeiro Clark.pdf: 4721510 bytes, checksum: 77c32bc787cef13bf2d3a0fa3ee2312c (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-13T22:34:01Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Arthur Tenório Ribeiro Clark.pdf: 4721510 bytes, checksum: 77c32bc787cef13bf2d3a0fa3ee2312c (MD5) Previous issue date: 2016-12-16 / Considerado um problema de saúde pública, o câncer tem tido um grande impacto em toda a comunidade, seja em países desenvolvidos ou em países em desenvolvimento. Em mulheres, destacam-se os cânceres de mama e útero, sendo o primeiro o de maior incidência entre as mulheres. Uma detecção precoce desses dois tipos de câncer pode significar um aumento da sobrevida do paciente e de sua cura. Uma das áreas de pesquisa voltada para o estudo do câncer é a busca por biomarcadores que possam ser úteis em sua detecção e/ou tratamento. É de notório conhecimento que uma expressão alterada de glicoconjugados de superfície celular podem contribuir para o fenótipo maligno em eventos oncogênicos. Entre os glicanos desses glicoconjugados, a polilactosamina (poliLacNAc) tem sido alvo de diversos estudos devido ao seu potencial papel em diversas eventos oncogênicos, em especial um envolvimento com o potencial metastático. Assim, a expressão de poliLacNAc e outros carboidratos (GlcNAc) foram avaliados, através de histoquímica com lectinas, em amostras normais e transformadas de colo uterino e mama em diferentes estágios de transformação. Também foram verificados a expressão, utilizando imunohistoquímica, de glicosiltransferases (MGAT5, β3GnT2 e β3GnT3) que podem alterar a expressão das poliLacNAc e galectina-3 (Gal-3), uma proteína que tem afinidade por polilactosaminas que também tem sido associada a eventos oncogênicos, incluído a metástase. Nas amostras de tumores de colo uterino foi observado a presença de cadeias de poliLacNAc foi observada mais expressas nas amostras com maior grau de transformação (carcinomas) quando comparado com as outras amostras normais e pré-malignas, além de que uma expressão nuclear também foi observada significantemente nesse tipo de amostra. Nas amostras de tecidos de mama as poliLacNAc foram pouco expressas em todos as amostras. No entanto, uma expressão de MGAT5, uma enzima que pode regular a expressão de poliLacNAc e que também associada à metástase foi mais observada nas amostras com grau de transformação mais elevado. Essas observações reforçam o potencial envolvimento das cadeias de poliLacNAc e de enzimas chaves que regulam sua expressão, como a MGAT5, durante os eventos de transformação oncogênica. / A public health problem, cancer has a major impact n the entire community, in developed countries or in developing countries. In women, breast and uterine cancers are the most prevalent, being breast cancer the first. An early detection of both cancer can allow an increasing of patient survival and rate of health. One of the goals of cancer science is the biomarker research to use them at detection and/or treatment. It is known that an altered expression of glycoconjugates of cell surface can contribute to the malignant phenotype at oncogenic events. Among these glycans, polylactosamine (polyLacNAc) has been target of many studies for its potential role in many oncogenic events, in especial at the metastatic potential. Thus, the expression of polyLacNAc and others carbohydrates (GlcNAc) was evaluated, using lectin histochemistry, in normal and transformed samples of uterine and breast tissue at different stages. It was also evaluated the expression, by immunohistochemistry, of glycosyltrasnferases (MGAT5, β3GnT2 e β3GnT3) which could regulate polyLacNAc chains and of galectin-3 (Gal-3), a binding protein for polyLacNAc which has been correlated to oncogenic events, including metastasis. At uterine samples, was observed the presence of polyLacNAc chains at high levels in samples which higher degree of transformation (carcinoma) when compared to the normal and pre-malignant samples, and was observed a significant nuclear expression at these samples. In breast samples, polyLacNAc was observed at lower levels at all samples. Besides, MGAT5 expression was observed at higher levels in samples which higher transformation degree. These findings reinforces the potential involvement of polyLacNAc chains and the enzymes involved in its expression, like MGAT5, at oncogenic events.

Made available in DSpace on 2018-08-01T21:35:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_12341_Tese - Rafaella Papalino Lopes Magnago.pdf: 2456867 bytes, checksum: 0d56ae4a042d5a3fc8a197c70db05e0f (MD5) Previous issue date: 2018-03-12 / O envelhecimento é um fenômeno mundial já estabelecido na América do Norte, Europa e em franco crescimento em países em ascenção econômica como o Brasil India e China. A doença de Alzheimer é o tipo de demência mais prevalente, cerca de 60% das demências são do tipo Alzheimer, o desenvolvimento deste estudo em busca de elucidar sua patogênese das demências levou os dados da doença de Alzheimer como base de discussão. O presente trabalho, teve como objetivo reconhecer dados epidemiológicos e biológicos diretamente ligados à demência. Realizou-se a busca na comunidade da grande vitória, de idosos portadores ou não de perda cognitiva. A população foi dividida em dois grupos, controle (GC) e caso (SHAZ), de acordo com análise de dois testes preditivos de demência (MEEM e CDR). A partir de então, foram analisados dados clínicos, buscando a prevalência de doenças crônicas, o lipidograma de exames recentes dos indivíduos, um exame físico de índices preditivos de obesidade como peso, percentual de gordura, IMC, perimetria, força de preenção manual e medida de capacidade funcional. Junto feita coleta de sangue para análises de DNA e presença de polimorfismos dos genes ApoE, ERS1 para receptor de estrogênio &#945; e PON1 (rs622 e rs705379). Os resultados obtidos sugeriram que doenças crônicas como a dislipidemia e hipertensão são fatores de risco no desenvolvimento de demência, bem como a idade. O IMC pode ser considerado abaixo do padrão para correlacionar com a doença. Já a capacidade funcional é dependente direta do fator cognição e a atividade física pode retardar o aparecimento da doença. A presença de fatores genéticos ligados a fatores ambientais existem e prescisam ser ainda melhor elucidados. O alelo E3 e E4 da ApoE são alelos diretamente relacionados com a doença e sugere-se que sejam dependentes do fator idade e possíveis marcadores de vulnerabilidade. A sinergia entre o alelo E4 de ApoE com os polimorfimos de ER&#945; (PP, pp) e PON 1(rs622-AA1 e rs705379- AG2 e GG2) podem ser sugeridos como biomarcadores, aumentando entre 3,2 a 5 vezes mais as chances de desenvolvimento da mesma, coeexistindo múltiplos fatores que tem importância na patogênese desta doença cada vez mais prevalente na população idosa mundial.

Orientador: Humberto de Araujo Rangel / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-21T05:53:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Verinaud_LianaMariaCardoso_D.pdf: 10390596 bytes, checksum: 66a15d762e79aa27cddaf2c35dcd05d1 (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: A manutenção de formas sanguícolas do Trypanosoma cruzi nos laboratórios que desenvolvem pesquisas com o parasita é realizada através de repiques de sangue do hospedeiro previamente infectado. Entretanto, até recentemente estes animais eram criados de modo convencional, ou seja, em condições favoráveis à infecção com diferentes patógenos naturais, inclusive vírus de difícil detecção e controle. Com a implantação do CEMIB-UNICAMP, capaz de fornecer animais controlados do ponto de vista genético e sanitário, resolvemos investigar se algum destes patógenos murinos, estaria sendo transmitido junto com o parasita e se algumas características da Doença de Chagas experimental estariam sendo alteradas por este(s) contaminante(s). MAP testes realizados com soro de animais infectados com Trypanosoma cruzi indicaram a presença de coronavírus em estoques do parasita mantidos exclusivamente por passagem de animal para animal. Estoques previamente mantidos em meios de cultura de células ou em meios axênicos não indicaram a presença de contaminantes. Os resultados obtidos mostraram que camundongos infectados com o estoque contaminado apresentavam níveis de parasitemia e taxa de mortalidade mais elevados que os animais infectados os estoques não contaminados. Além disso, o plasma filtrado de animais infectados com o estoque contaminado foi capaz de elevar os níveis de parasitemia e de mortalidade de animais infectados com os estoques não contaminados. O fator, presente no plasma dos animais infectados com o estoque contaminado era sem dúvida um vírus, denominado vírus X, uma vez que podia ser seriadamente transferido de animal para animal, era completamente inativado quando aquecido a 56° C por 45 minutos e tinha sua virulência aumentada provocando a morte de animais de quatro semanas de idade após a transferência seriada. Anticorpos anti-X, preparados com a décima passagem seriada do vírus, ou anticorpos anti-MHV3 (Murine Virus Hepatitis-3) foram capazes de proteger os animais jovens da morte, quando estes eram desafiados com o vírus X, e de diminuir a parasitemia quando os animais eram infectados com o estoque contaminado. Estes dados indicavam que cepas de Trypanosoma cruzi, mantidas apenas por transferência de animal para animal, poderiam estar contaminadas com um vírus capaz de aumentar a patogenicidade do parasita ou de alterar a resposta imune do hospedeiro. Animais infectados com o estoque contaminado ou com o vírus isolado, apresentaram uma marcada linfopenia, no segundo dia após a infecção, enquanto que nenhuma alteração foi observada nos animais infectados com os outros estoques do parasita. Experimentos de neutralização, utilizando anticorpos anti-X, mostraram que esta linfopenia podia ser completamente abolida. Alterações do peso e da celularidade de diferentes órgãos linfóides também foram observadas, sendo evidenciada perda da arquitetura tímica e alterações no processo de maturação de células da medula óssea quando os animais eram infectados com o estoque de parasitas contaminado ou com o vírus isolado. As populações de células, apresentando marcadores específicos para linfócitos B e T, mostraram alterações em diferentes tecidos linfóides. Observou-se uma profunda queda na porcentagem de células T e B, quando os animais eram infectados com o vírus isolado ou com o estoque do parasita contendo este contaminante. Estes resultados confirmam e estendem, também para a Doença de Chagas experimental, os dados obtidos na literatura de que este vírus é capaz de alterar as respostas do hospedeiro, através da imunomodulação, e indicam que alguns dados obtidos com a infecção experimental pelo Trypanosoma cruzi devem ser interpretados com cautela / Doutorado / Imunologia / Doutor em Ciências Biológicas

Orientador: Claudio Lucio Rossi / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-22T01:18:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Partel_ClaudiaDambroski_M.pdf: 1594290 bytes, checksum: e86f411daa6a16b26e173461e10bb358 (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: A Doença de Chagas, infecção causada pelo parasita Trypanosoma cruzi, em pessoas imunocompetentes é, geralmente, assintomática ou se apresenta associada com manifestações clínicas leves e não específicas. Os pacientes com infecção crônica podem apresentar anormalidades cardíacas e/ou digestivas severas, mas estas manifestações clínicas são, usualmente, precedidas por muitos anos de infecção assintomática. Deste modo, a suspeita clínica da infecção, além de levar em consideração aspectos epidemiológicos, deve ser confirmada por dados laboratoriais. O diagnóstico da fase crônica da infecção chagásica é, geralmente, baseado na presença de níveis significativos de anticorpos específicos, desde que a detecção de parasitas circulantes é, frequentemente, dificil, em consequência dos baixos níveis de parasitemia. O presente estudo teve como objetivo o desenvolvimento de uma técnica imunoenzimática (ELISA) rápida e quantitativa para o imunodiagnóstico da Doença de Chagas. Considerando que o desempenho de uma técnica imunológica depende, em grande parte, da preparação antigênica utilizada, o extrato bruto de T.cruzi foi fracionado por cromatografias de afinidade (Sepharose 4B-Ientil-Iectina) e de troca iônica (DEAESephacel), na tentativa de se encontrar frações com alta atividade antigênica específica e baixa reatividade cruzada. Uma fração do parasita obtida por cromatografia em DEAESephacel foi selecionada com base na reatividade apresentada com soros de pacientes com Doença de Chagas e leishmaniose. A técnica ELISA foi padronizada utilizando um sistema comercial para reações imunoenzimáticas - "falcon assay screening test" (FAST -ELISA). Este sistema é constituído por placas apropriadas para todos os pàssos da reação, incluindo uma placa que possui uma tampa de plástico onde estão fixadas 96 esferas de poliestireno que se encaixam nos orificios de placas de microtitulação. Na realização do teste, a tampa com esferas revestidas com a preparação antigênica de T.cruzi foi transferi da., sucessivamente, após as lavagens necessárias, para as placas contendo as amostras de soros sendo testadas, o conjugado (anti-IgG humana marcada' com peroxidase) e o sistema substrato (tetrametilbenzidina/peróxido de hidrogênio). Nas incubações com os soros, conjugado e substrato (5 minutos cada, à temperatura ambiente) as placas foram colocadas sobre um aparelho com movimentos orbitais e agitadas continuamente. As absorbâncias das reações foram medidas a 630 nm na placa contendo o substrato. Em todos os ensaios, foram inclui dos soros padrões contendo concentrações conhecidas de anticorpos anti-T.crozi, em termos de unidades de atividade por ml (V/ml). Cada soro foi testado em triplicata e a absorbância média foi transformada em U/ml utilizando a curva padrão. Em um estudo comparativo, anticorpos IgG anti-T.crozi foram pesquisados com as técnicas de ELISA e IFI em 50 pacientes chagásicos crônicos, 58 pacientes com infecções heterólogas e em 20 pessoas sadias. A técnica ELISA apresentou sensibilidade de 98% e especificidade de 99%, enquanto que a sensibilidade e a especificidade obtidas com a reação de IFI foram, respectivamente, 92% e 96%. O bom desempenho, em termos de sensibilidade e especificidade, mais a simplicidade e rapidez, evidenciam que a técnica de ELISA, por nós desenvolvida, pode ser de grande utilidade para o imunodiagnóstico da Doença de Chagas / Abstract: Chagas' disease, an infection caused by the parasite Trypanosoma crnzi, is generally asymptomatic or is associated with mild, non-specific clinical manifestations in immunocompetent subjects. Severe cardiac and/or digestive system abnorrnalities may develop in chronically infected patients, but these clinical manifestations are usually preceded by many years of asymptomatic infection. For this reason, the clinical diagnosis should always be considered in an epidemiological context and confirrned by laboratory data. The diagnosis of chronic Chagas' disease is generally based on detecting specific antibodies, since the detection of circulating parasites is often difficult in view of the low levels of parasitemia. The purpose of this study was to develop a rapid and quantitative enzymelinked immunosorbent assay (ELISA) for the immunodiagnosis of Chagas' disease. Considering that the perforrnance of an immunological technique is highly dependent on the antigen used, a T.crnzi crude extract was fractionated by affinity chromatography (Sepharose 4B-lentil lectin) and ionic exchange chromatography (DEAE-Sephacel) in an attempt to identify fractions with both a high specific antigenic activity and a low cross reactivity. One fraction of the parasite extract obtained by chromatography on DEAE Sephacel was selected for further study based.on its reactivity with sera from patients with Chagas' disease and leishmaniasis. The ELISA procedure was standardized using the Falcon assay screening test (FAST-ELISA / Mestrado / Clinica Medica / Mestre em Clinica Medica

Orientador: Nelson Eduardo Duran Caballero / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-22T19:17:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fernandes_AnnaMariaAlvesdePiloto_M.pdf: 1840150 bytes, checksum: 0aff6011fffecb965f2404ee6d9ed22a (MD5) Previous issue date: 1997 / Mestrado

Orientador: Marcelo de Carvalho Ramos / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-26T21:28:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fissore_AndreaCarla_M.pdf: 2517669 bytes, checksum: f5d656b5d5b9dead6673ba7e34c73aed (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: Objetivo: Deternllnar a freqüência do alelo recessivo ccr-5 em população de indivíduos infectados pelo HIV -1. Material e Métodos: Foram estudados 187 pacientes, que freqüentam os ambulatórios da Disciplina de Moléstias Infecciosas do Hospital das Clínicas da UNICAMP. Foram selecionados pacientes de ambos os sexos com testes positivos para o anti-HIVl por ELISA e Westem-Blot, em qualquer fase clínica da doença. Para amplificação foram utilizados os seguintes primers: 5'-CCTGGCTGTCGTCCATGCTG-3' e 5'CTGATCTAGAGCCATGTGCACAACTCT-3'. Após a desnaturação a 94°C por 5min, seguiram-se 34 ciclos de: 94°C por lmin; 57°C por lmin; 72°C por lmin e extensão final a 72°C por 7min. A seguir, foi realizada a digestão enzimática com 1 J.lg de cada amostra, incubadas por 60min à 37°C com 10U de EcoRI. Foram também deternllnadas a carga viral pela técnica do NASBA e deternllnação de subpopulações linfocitárias por citometria de fluxo (Ortho Diagn.). Resultados e Conclusões: Do total de 187 indivíduos analisados, 15 apresentaram padrões de restrição do produto de PCR compatíveis com heterozigose para a deleção delta 32 (freqüência=8,02%). Essa freqüência é semelhante à encontrada em populações caucasianas européias. Com respeito à carga viral e quantidade de células CD4 e CD8, os dados foram prejudicados pela administração de medicação antiretroviral na maioria desses indivíduos. Todos os pacientes que apresentavam a mutação e que pud~ram ser classificados clinicamente possuíam estadiamento B2 ou maior / Abstract: Previous studies have shown a relationship between a 32-base-pair deletion within the J3-chemokine receptor 5 (ccr5) gene and the acquisition and progression of the Acquired Human Immunodeficiency Syndrome (AIDS). Several. populations have been tested concerning this deletion, and it was found that Caucasians have a higher probability of bearing this defect, whereas in black and japanese populations it is virtually absent. In Brazil, no studies have been done to estimate this frequency in HIV infected populations, so faro In an urban brazilian population 93% of individuaIs tested showed normal CCR-5 anele and 7% were heterozygous CCRS/ ~ccr5. In this study 187 HIV-infected persons were tested to determine the prevalence of this mutation. Genomic DNA samples were amplified using primers producing a 735bp fragment, which was submmited to c1eavage with EcoRl. Normal homozygous aneles showed two fragments of 332 and 403 bp, and in heterozygous aneles an additional371 bp fragment was found. No homozygous individuaIs were found in this population, and the frequency ofheterozygous CCR5/~ccr5 was found to be 8,02% / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica