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Polimorfismo no grupo sanguíneo Duffy e anticorpos IgG naturalmente adquiridos contra a proteína de ligação em Duffy de Plasmodium vivax (PvDBP) na Amazônia rural brasileira. / Duffy blood group polymorphism and naturally acquired IgG antibodies to Plasmodium vivax Duffy binding protein (PvDBP) in rural Amazonians.

Vanessa Cristina Nicolete 30 November 2012 (has links)
A proteína de ligação em Duffy (PvDBP) dos merozoítos de P. vivax se liga a glicoproteínas de membrana, chamadas de grupo sanguíneo Duffy, conhecidas como DARC. Indivíduos DARC negativos são normalmente resistentes a infecção estágio sanguínea por P. vivax; portanto, PvDBP é um forte antígeno canditato a vacina. Aqui, investigamos respostas de anticorpos contra três proteínas derivadas de PvDBP e MSP119, em 343 indivíduos de uma região Amazônica brasileira. Anticorpos contra Sal III-His, OII-His, Sal III-IV-GST e MSP119-GST foram encontrados em 43,7%, 39,0%, 14,3% e 38,8% dos indivíduos. Os indivíduos FY*BESFY*BES foram os que menos apresentaram anticorpos contra PvDBP, porém encontramos proporções similares de respondedores entre indivíduos com outros genótipos. A análise de sequências revelou muitas variantes da região II de PvDBP em 41 isolados. A mais comum (encontrada em 28,8% dos isolados), difere de Sal I e PNG- O em seis codóns de aminoácidos. Nenhuma variante tipo Sal I, cujo protótipo de vacina está em teste clínico, foi encontrada nos parasitas locais. / The Duffy binding protein (PvDBP) of the P. vivax merozoites, which binds to a erythrocyte membrane glycoprotein known as Duffy blood group antigen for chemokines (DARC). DARC-negative individuals are usually resistant to blood-stage infection with P. vivax; therefore, PvDBP is a major vaccine candidate antigen. Here, we investigated antibody responses to three proteins derived from PvDBP and MSP119, in 343 subjects in the Amazon of Brazil. Antibodies to Sal III-His, OII-His, Sal III-IV-GST and MSP119-GST were found in 43,7 %, 39,0%, 14,3% and 38,8% of the subjects. FY*BESFY*BES individuals were less likely to have antibodies to PvDBP, but we found similar proportions of seropositive subjects with other genotypes. Sequence analysis revealed several region II PvDBP variants in 41 local P. vivax isolates. The most common of them (found in 28,8% isolates) differs from Sal I and PNG-O alleles in six amino acid codons. No Sal I-type variant, from which a PvDBP-based vaccine prototype currently under clinical testing has been derived, was found in local parasites.
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Caracterização e padronização de marcadores genéticos para o estudo de polimorfismos em Plasmodium vivax. / Characterization and standardization of genetic markers in the study of Plasmodium vivax polymorphisms.

Brandi, Michelle Cristina do Couto 24 May 2013 (has links)
Este trabalho teve como objetivo caracterizar e padronizar métodos para a tipagem molecular de marcadores genéticos, para futuro uso em estudos de genética populacional de Plasmodium vivax na Amazônia brasileira. As amostras sanguíneas utilizadas neste estudo foram colhidas no Brasil, Camboja, Sri Lanka e Estados Unidos. Foram selecionados polimorfismos de única base (SNPs) distribuídos ao longo de cromossomos distintos de P. vivax; para estes polimorfismos, sete ensaios de tipagem de SNPs foram padronizados com sucesso. Com a tipagem molecular, foi possível definir haplótipos que caracterizam cada amostra, assim como identificar infecções geneticamente mistas (co-ocorrência de clones distintos na mesma amostra). No entanto, com este conjunto de marcadores não foi possível agrupar amostras de acordo com sua localização geográfica, por estes marcadores não serem suficientemente informativos do ponto de vista genético. Os sete SNPs avaliados, quando comparados a 13 marcadores de DNA microssatélite, revelaram menor proporção de infecções geneticamente mistas e menor diversidade genética. / This study aimed to characterize and standardize methods for molecular typing of genetic markers to be used in the future in studies of population genetics of Plasmodium vivax population in the Brazilian Amazon. Blood samples used in this study were collected in Brazil, Cambodia, Sri Lanka and United States. Single nucleotide polymorphisms (SNPs), distributed over different P. vivax chromosomes were chosen and seven typing assays were sucessfully standardized. Molecular typing of polymorphisms allowed to define haplotypes that characterize each sample, as well as to identify genetically mixed infections (co-occurrence of different clones in the same sample). However, with this markers set, it was not possible to group samples according to their geographical location, because probably they are not sufficiently genetically informative. Compared to 13 microsatellite markers, these seven SNPs revealed a lower proportion of mixed-clone infections and lower genetic diversity.
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Avaliação da resposta de anticorpos em indivíduos expostos ao Plasmodium vivax contra um antígeno recombinante correspondente a Proteína de Ligação ao grupo sanguíneo Duffy / Evaluation of antibody response in individuals exposed to Plasmodium vivax against a recombinant antigen corresponding to the duffy blood group binding protein

Rodrigues, Karina Martinelli 19 December 2005 (has links)
No presente estudo, avaliamos a resposta de anticorpos, por ELISA, contra um recombinante bacteriano baseado no domínio 11 da Proteína Ligação ao Duffy (DBP-RII) em indivíduos naturalmente expostos Plasmodium vivax. Amostras de soro de 160 pacientes com malária vivax, procedentes de duas áreas endêmicas do Estado do Pará (Belém e São Jorge), foram utilizadas neste estudo. Estes soros foram também testados contra outras duas proteínas recombinantes derivadas de merozoítas de P. vívax, para efeito de comparação da resposta de anticorpos: AMA-1 (Antígeno 1 Membrana Apical) e MSP119 (região C-terminal de 19 kDa da Proteína 1 Superfície do Merozoíta). A freqüência de indivíduos que apresentaram anticorpos IgG específicos contra as proteínas recombinantes DBP-RII, AMA-1 e MSP119 foi de 15,6% 50% e 93,1%, respectivamente. Observamos que a proporção de indivíduos que apresentaram anticorpos contra DBP-RII e AMA-1 aumentou de acordo com o maior número de exposições prévias ao P. vivax, enquanto que resposta de anticorpos contra a MSP119 desenvolveu-se rapidamente após uma única exposição ao parasita. A persistência da resposta de anticorpos contra DBP-RII, AMA-1 MSP119 foi avaliada em amostras de soro coletadas durante a infecção patente e dois ou nove meses após o tratamento. Observamos que, durante este período, não houve uma diminuição significativa das freqüências respondedores contra DBP-RII e AMA-1. Por outro lado, a freqüência respondedores contra a MSP119, diminuiu significativamente nove meses após o tratamento. Não observamos diferença significativa entre os títulos anticorpos obtidos contra DBP-RII e AMA-1, durante a infecção e dois ou nove meses após o tratamento, indicando que a resposta de anticorpos se manteve. Por outro lado, os títulos de anticorpos para MSP119 foram significativamente maiores durante a infecção patente do que nove meses após o tratamento. / In the present study, we evaluated by ELISA the antibody immune response to a recombinant protein based on the domain II of the Duffy Binding Protein (DBP-RII) in individuals naturally exposed to Plasmodium vivax. Serum samples from 160 patients with vivax malaria were collected in two endemic areas of State of Pará (Belém and São Jorge). For purposes of comparison, ELISA were also performed using two other recombinant proteins representing antigens derived from P. vivax merozoites: AMA-1 (Apical Membrane Antigen-1) and MSP119 (19kDa C-terminal region of Merozoite Surface Protein-1). The frequency of individuals who presented IgG antibodies specific to the recombinant proteins DBP-RII, AMA-1 or MSP119 were 15.6%, 50% or 93.1 respectively. We observed that the proportions of individuals who presented antibodies against DBP-RII or AMA-1 increased according to the number malaria episodes, while the antibodies response to MSP1 19 developed quickly after a single contact with the parasite. The persistence of antibodies response to DBP-RII, AMA-1 or MSP119 was compared in serum samples during patent infection or two and nine months following treatment. We observed that during this period the frequency responders to DBP-RII and AMA-1 remained similar. In contrast, the frequency of responders to MSP119 dropped significantly nine months after treatment. No difference was observed when we compared the antibody titers obtained DBP-RII or AMA-1 during the infection or after treatment. These results established that the antibodies response to DBP-RII or AMA-1 remained similar two or nine months after treatment. In contrast, the antibody titers to MSP119 were significantly lower nine months after treatment when compared to patent infection.
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Estudo do microcultivo in vitro para o isolamento de Leishmania sp no estado do Pará

CASTRO, Nádile Juliane Costa de 29 September 2010 (has links)
Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2013-05-20T22:17:06Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_EstudoMicrocultivoVitro.pdf: 1242833 bytes, checksum: 363f0049b2f5b69a5ad4d1659a3c2635 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva(arosa@ufpa.br) on 2013-05-22T17:07:46Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_EstudoMicrocultivoVitro.pdf: 1242833 bytes, checksum: 363f0049b2f5b69a5ad4d1659a3c2635 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-05-22T17:07:46Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_EstudoMicrocultivoVitro.pdf: 1242833 bytes, checksum: 363f0049b2f5b69a5ad4d1659a3c2635 (MD5) Previous issue date: 2010 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Os parasitas do gênero Leishmania apresentam uma variabilidade de espécies na região Amazônica e para sua correta identificação é necessário o isolamento dos mesmos. Atualmente para o isolamento do parasita e posterior diagnóstico da doença têm se utilizado a técnica de microcultivo in vitro. O objetivo de nosso trabalho foi otimizar a técnica de microcultivo in vitro para o isolamento de Leishmania sp. Para o isolamento, além do microcultivo, foi analisado a técnica de vácuo-aspiração adaptada e a viabilidade do parasita a temperaturas abaixo de 25ºC. No total foram utilizados 18 hamsters, infectados com amostras de casos clínicos de Leishmaniose tegumentar americana, sendo 3 de Leishmania.(Leishmania) amazonensis e 2 de Leishmania.(Viannia) braziliensis o qual foram realizados 56 cultivos por vácuo-aspiração em meio NNN, 12 em microtubos e 23 por microcapilares com RPMI suplementado, mantidos entre 25º e 31ºC. Para a segunda etapa, participaram 7 pacientes, totalizando 6 culturas por vácuo-aspiração e 42 por microcapilares. Conservou-se a baixa temperatura 7 tubos com NNN que foram mantidas a 5ºC. Foi observado que os isolamentos por vácuo-aspiração de amostras de L. (L.) amazonensis e L. (V.) braziliensis em hamsters foram sensíveis a adaptação da técnica, diferente das amostras de pacientes. A positividade variou entre 2 a 8 dias e 4 e 5 dias respectivamente. Os microtubos apresentaram positividade para as mesmas amostras de hamsters no período de 5 a 8 dias. Para as amostras dos pacientes, 2/12 tubos por vácuo-aspiração foram positivos e para isolamento em microcapilares 6/42, valores inferiores aos encontrados na literatura. A amostras conservadas a 5ºC apresentaram viabilidade até o 30º dia. Com estes resultados foi observado que o microcultivo é viável para uso dentro de nossa região, entretanto se mostrou limitado para o isolamento de amostras provenientes de pacientes. Devem-se utilizar outros meios de cultivo, de modo a observar o comportamento do parasito e também aperfeiçoar a coleta do material da lesão a fim de melhorar os resultados de isolamento. / Leishmania parasites have variability of species in the Amazon region and its correct identification is necessary to isolate them. Currently for the isolation of the parasite and subsequent diagnosis of the disease have used the technique of in vitro microculture. Hence, the aim of our study was to optimize the in vitro microculture technique for isolation of Leishmania sp. to contribute to the identification of Leishmania (Leishmania) amazonensis and Leishmania (Viannia) braziliensis circulating in the state of Pará For isolation beyond the microculture was analysed the technique of vacuum aspiration adapted, and parasite viability at temperatures under 25°C. Was used 18 hamsters infected with samples from clinical cases of CL, 3 L. (L). amazonensis 2 and L. (V). braziliensis which held 56 culture by vacuumaspiration in NNN media, 12 in microtubes and 23 in microcapillaries with RPMI media supplemented with 10% fetal bovine serum and 1% Penicillin-Gentamicin maintained between 25°C and 31°C. For the second stage, participated in seven patients, a total of 6 cultures by vacuum aspiration and 42 by microcapillary. It was remained at low temperature 7 tubes with NNN which were kept at 5°C. It was observed that the isolates by vacuumaspiration samples of L. (L.) amazonensis and L. (V.) braziliensis in hamsters were susceptible to adaptation of the technique, differently of samples of patients. The positivity ranged between 2-8 days and 4 and 5 days respectively. The microtubes were positive for the same samples of hamsters in the period 5-8 days. For samples of patients, 2/12 tubes by vacuum-aspiration were positive for isolation and in microcapillaries 6/42 less than the values found in literature. The samples stored at 5°C showed viability until 30º day. Thus, we find that the microculture is viable for use within our region.
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Atividade repelente e carrapaticida de extratos e óleos essenciais de plantas sobre o carrapato bovino Rhipicephalus microplus / Repellent and carrageenan activity of extracts and essential oils of plants on the bovine tick Rhipicephalus microplus

Lima, Aldilene da Silva 26 February 2014 (has links)
Submitted by Rosivalda Pereira (mrs.pereira@ufma.br) on 2017-06-22T19:03:02Z No. of bitstreams: 1 AldileneSilvaLima.pdf: 13164666 bytes, checksum: cd1c6e1b366f76a72539ecddec6062e4 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-22T19:03:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AldileneSilvaLima.pdf: 13164666 bytes, checksum: cd1c6e1b366f76a72539ecddec6062e4 (MD5) Previous issue date: 2014-02-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Rhipicephalus microplus is an ectoparasite of major economic importance to cattle. The control cattle tick has difficult by resistance of populations to synthetic acaricides. Plant bioactive molecules can be an alternative to control this ectoparasite. The aim of this study was to evaluate the repellent and acaricide effect of extracts and essential oils from plants on the cattle tick R. microplus. Hexane, ethyl ether, ethanolic, and methanolic extracts was obtained of P. tuberculatum fruits. After extraction, all of the extracts were dried. Essential oil from L. alba was obtained by hydrodistillation, all oil essential of Citrus ssp. were extracted by cold pressing fruits and all the identification of the major compounds of essential oils was performed by gas chromatography coupled to mass spectrometry (GC-MS) and gas chromatography flame ionization detector (GC-FID). Monoterpenes was obtained commercially. All the extracts was use larval packet tests and Adult immersion tests. Oil essential was used to repellency test. All extracts showed highest larvicidal activity against R. microplus. Hexane extract showed a CL50 of 0.04 mg/mL, CL50 ethyl ether of 0.08 mg/mL and ethanolic LC50 of 2.73 mg/mL. P. tuberculatum fruit extracts were also effective against engorged females R. microplus. Genotypes LA-13 and LA-57 of L. alba showed repellent activity against larvae of R. microplus more than 40 hours at concentration of 6.88 mg/cm². Monoterpenes showed lower repellent activity. Oil essenctial of Citrus aurantium var. dulcis showed repellent activity more than 30 hours at concentration of 6.88 mg/cm². Other essential oils tested showed a time of repellency lower 5 hours. Ours results reported than plants contains bioactive compounds with great potential acaricides, and they can be commercial products for the control of R. microplus. / O Rhipicephalus microplus é um ectoparasita de maior importância econômica à bovinocultura. O controle do carrapato bovino tem sido dificultado pela resistência de populações aos acaricidas sintéticos. Compostos bioativos de plantas podem ser uma alternativa para o controle deste ectoparasita. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito repelente e carrapaticida de extratos e óleos essenciais de plantas sobre o carrapato bovino R. microplus. Extratos da planta Piper tuberculatum foram obtidos com hexano, éter etílico, etanólico e metanólico. Depois todos os extratos foram rotoevaporado. Os óleos essenciais de Lippia alba foram obtidos por hidrodestilação, os de Citrus ssp. por prensagem a frio dos frutos e todos os componentes dos óleos essenciais foram analisados por Cromatografia Gasosa acoplada a espectrometria de massa (CG-MS). Os monoterpenos utilizados foram obtidos comercialmente. Todos os extratos foram utilizados no teste de larvas e imersão de fêmeas Ingurgitadas. Os óleos essenciais foram utilizados no teste de repelência. Todos os extratos demonstraram uma alta atividade sobre larvas de R. microplus. O extrato Hexânico de frutos de P. tuberculatum apresentou uma CL50 de 0,04 mg/mL, seguido de éter etílico com CL50 de 0,08 mg/mL, etanólico com CL50 de 2,73 mg/mL. O extrato éter etílico de frutos de P. tuberculatum também demonstrou uma alta atividade sobre fêmeas Ingurgitadas. Os genótipos LA-13 e LA-57 de Lippia alba apresentaram uma alta atividade repelente sobre larvas de R. microplus por mais de 40 horas numa concentração de 6,88 mg/cm². Os monoterpenos apresentaram baixa atividade repelente. O óleo essencial de Citrus aurantium var. dulcis apresentou uma alta atividade repelente com mais de 30 horas de repelência na concentração de 6,88mg/cm². Os demais óleos testados apresentaram um tempo de repelência menor que 5 horas. Nossos resultados demonstraram que as plantas possuem compostos ativos com alto potencial acaricida, e que podem vir a serem utilizados em produtos de uso comercial para o controle do carrapato bovino.
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ENTEROPARASITOSES E FATORES ASSOCIADOS EM QUILOMBOLAS DA COMUNIDADE ILHA DE SÃO VICENTE NO NORTE DO ESTADO DO TOCANTINS / Enteroparasitosis and associated factors in quilombolas from the São Vicente Island community in the northern área of Tocantins state.

Figueredo, Priscila Gonçalves Jacinto 28 November 2017 (has links)
Submitted by admin tede (tede@pucgoias.edu.br) on 2018-05-03T19:15:46Z No. of bitstreams: 1 Priscila Gonçalves Jacinto Figuerêdo (2).pdf: 1928842 bytes, checksum: e66c296592d0e4d12b86b6dd0b149758 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-03T19:15:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Priscila Gonçalves Jacinto Figuerêdo (2).pdf: 1928842 bytes, checksum: e66c296592d0e4d12b86b6dd0b149758 (MD5) Previous issue date: 2017-11-28 / Intestinal parasitosis are one of the determining indicators of the socioeconomic development of a country. Minority populations as quilombolas are included in the risk groups that present high rates of health problems, among them, the enteroparasitosis, related mainly to cultural and geographic isolation. A study was performed to investigate the occurrence of enteroparasitosis and associated factors in quilombolas from São Vicente Island community in the north part of the state of Tocantins. The experimente was a cross-sectional, descriptive study with a quantitative approach. It was carried out in April and May 2017, through the collection of stool samples for parasitological analysis and application of a questionnaire from the Brazilian Association of Research Institutes, additioned with socioeconomic, environmental and sanitary factors of the community. The data were analyzed with Statistical Package of Social Sciences (SPSS, 23.0) adopting a level of significance of 5% (p <0.05). From a total of 86 individuals surveyed, 39 (45.3%) presented intestinal parasites, nine (23.1%) of which were infested with two different intestinal worms. The geohelminths Ascaris lumbricoides and Trichuris trichiura were the most prevalent among pathogens, with 8 (16.6%) and 6 (12.5%) infested individuals, respectively. Regardless of the place of residence (urban or rural), risk factors such as: precarious or nonexistent basic sanitation, associated with the adoption of inadequate hygiene measures and low socioeconomic levels, exposed the quilombola community to intestinal parasitosis. Ensuring the improvement of environmental sanitation, housing habitability, facilitation of the availability of antiparasitics, accessibility to health services and information that mitigates health problems are important measures to reduce the prevalence of enteroparasites in the quilombola community. / As parasitoses intestinais se configuram um dos indicadores determinantes do desenvolvimento socioeconômico de um país. Populações minoritárias como quilombolas estão inclusas nos grupos de risco que apresentam elevados índices de agravos à saúde, entre eles, as enteroparasitoses, relacionadas principalmente ao isolamento cultural e geográfico. O estudo objetivou investigar a ocorrência de enteroparasitoses e fatores associados em quilombolas da comunidade Ilha de São Vicente no norte do Estado do Tocantins. Trata-se de um estudo observacional transversal, descritivo com abordagem quantitativa. Realizou-se nos meses de abril e maio de 2017, através da coleta de amostras de fezes para análise parasitológica e aplicação do formulário da Associação Brasileira de Empresas de Pesquisas acrescido de fatores socioeconômicos, ambientais e sanitários da comunidade. Os dados foram analisados com pacote estatístico Statistical Package of Social Sciences (SPSS, 23.0) adotando um nível de significância de 5% (p <0,05). Dos 86 indivíduos pesquisados, 39 (45,3%) apresentaram positividade para parasitos intestinais. Destes, 9 (23,1%) tiveram biparasitismo. Os geohelmintos Ascaris lumbricoides e Trichuris trichiura foram os mais prevalentes entre os patogênicos, com respectivamente 8 (16,6%) e 6 (12,5%). Independente do local de moradia (zona urbana ou rural) dos quilombolas, fatores de risco como: Saneamento básico precário ou inexistente, associado a adoção de medidas de higiene inadequadas e níveis socioeconômicos baixos, expuseram a comunidade quilombola às parasitoses intestinais. Garantir a melhoria do saneamento ambiental, habitabilidade das residências, facilitação na oferta de antiparasitários, acessibilidade aos serviços de saúde e informações mitigadoras dos agravos à saúde, são medidas importantes para diminuição da prevalência de enteroparasitoses na comunidade quilombola.
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Control perspectives of the Cattle Tick Rhipicephalus microplus and hemoparasites Babesia bovis and Anaplasma marginale / Perspectivas de controle do carrapato do boi Rhipicephalus microplus e dos hemoparasitos Babesia bovis e Anaplasma marginale

Forero Becerra, Elkin Gustavo 10 February 2017 (has links)
Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-03-28T13:39:39Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 14234774 bytes, checksum: 47bb074ba73e29750ddfef0ea6c3e59b (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-28T13:39:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 14234774 bytes, checksum: 47bb074ba73e29750ddfef0ea6c3e59b (MD5) Previous issue date: 2017-02-10 / Recently, R. microplus has extended its distribution to higher altitudes in Colombia. Proper identification of acaricide resistance mechanisms is required, as well as tick- borne diseases diagnosis and vaccine candidates for Babesia bovis and Anaplasma marginale. Patent restrictions and the scholarship funding requirements established three separated, but related, chapters for the DSc thesis. Chapter 1: Detection of genes to synthetic pyrethroids resisntance and Babesia spp. in Rhipicephalus microplus and cattle blood samples from Colombia. Samples of R. microplus (engorged females and larvae) and cattle blood were collected from selected farms in 8 municipalities in Colombia. A PCR screening for mutations on CzEst 9 and IIIS6 genes that confer synthetic pyrethroid resistance showed all tick samples had a heterozygous genotype to CzEst9 and most of the samples had an IIIS6 susceptible genotype. A nested PCR screening for detection of B. bovis rra and B. bigemina rap-1c genes resulted in unexpected bands prevented conclusive evidence. Chapter 2: Transformation process of Pichia pastoris KM71 with the synthetic gene H1Bbo23290 derivative from Babesia bovis RAP-1 protein. The transformation process of Pichia pastoris KM71 with H1Bbo23290 (a promising vaccine candidate against bovine babesiosis) was unsuccessful. Plasmid DNA extraction and subsequent linearization were the major obstacles. Chapter 3: Bovine immune response produced by oMP7, oPM8, and oMP9 Outer Membrane proteins from Anaplasma marginale St. Maries strain in confined experimental immunized animals. OMP7, OMP8, and OMP9 proteins were used to test potential conserved sequences containing CD4 T-cell epitopes. Using in vitro T-cell proliferation assays to test recombinant A. marginale and A. centrale OMP7, OMP8, and OMP9, and their overlapping peptides spanning each protein, conserved immunogenic T-cell epitopes were been identified in some peptides. / Recentemente, R. microplus tem ampliado a sua distribuição a altitudes maiores na Colômbia. A identificação dos mecanismos de resistência a acaricidas é requerida, e também do diagnóstico e dos candidatos a vacina dos patógenos transmitidos Babesia bovis e Anaplasma marginale. Restrições devidas a patentes e requerimentos da bolsa de doutorado estabeleceram três capítulos a tese de DSC. Capitulo 1: Deteção de genes de resistência a piretróides sintéticos e de Babesia spp. em amostras de Rhipicephalus microplus e sangue bovino da Colômbia. Amostras de Rhipicephalus microplus (teleoginas e larvas) e de sangue bovino foram coletadas de fazendas selecionadas em 8 municípios na Colômbia. Uma triagem por PCR procurando mutações nos genes CzEst9 e IIIS6, os quais conferem resistência a piretróides sintéticos, mostrou que todas as amostras de carrapatos foram heterozigóticas para CzEst9 e a maioria mostraram suscetibilidade para IIIS6. Uma triagem por nested PCR para a deteção dos genes rra de Babesia bovis e rap-1c de B- bigemina resultou em bandas adicionais evitando evidência conclusiva. Capitulo 2: Processo de transformação de Pichia pastoris KM71 com o gene sintético H1Bbo23290 derivado da proteína RAP-1 de Babesia bovis. O processo de transformação de Pichia pastoris KM71 com H1Bbo23290 (um candidato vicinal promissório contra a babesiose bovina) não foi bem sucedido. A extração de DNA plasmidial e a sua posterior linharização foram os maiores obstáculos. Capitulo 3: Resposta immune bovina produzida pelas proteínas da membrana externa de Anaplasma marginale OPM7, OMP8, e OMP9 da cepa St. Maries em novilhos experimentais confinados e imunizados. As proteínas OMP7, OMP8, e OMP9 de A. marginale e A. centrale foram usadas para testar a presença de potenciais sequências conservadas. As proteínas recombinates e seus peptídeos superpostos periodicamente foram usados em ensaios de proliferação de células T. Epítopes de células T, imunogênicos e conservados foram identificados.
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Novos peptídeos e antígeno recombinante de Taenia saginata no diagnóstico da cisticercose bovina / New peptides and recombinant antigen from Taenia saginata for diagnosis of bovine cysticercosis

Peixoto, Rafaella Paola Meneguete dos Guimarães 28 September 2016 (has links)
Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-11-29T18:34:51Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1306405 bytes, checksum: 1458047941be6c1d95930520f19df28c (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-29T18:34:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1306405 bytes, checksum: 1458047941be6c1d95930520f19df28c (MD5) Previous issue date: 2016-09-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A cisticercose bovina é uma doença de caráter zoonótico que acarreta prejuízos tanto de ordem sanitária quanto de ordem econômica. Tradicionalmente seu diagnóstico é realizado durante a inspeção post mortem em matadouros-frigoríficos sob fiscalização sanitária, e consiste basicamente na visualização macroscópica através de cortes realizados em grupos musculares preditos como preferenciais para a implantação dos cisticercos. Ressalta-se que este método apresenta deficiências de desempenho, deixando passar despercebidas formas discretas da doença. Essa pesquisa foi desenvolvida com a meta de aprimorar o diagnóstico da cisticercose bovina, e sobretudo, dos testes sorológicos atualmente desenvolvidos, aumentando a confiabilidade do diagnóstico. A pesquisa caracterizou-se pela seleção de oito peptídeos sintéticos e desenvolvimento de uma proteína quimera recombinante com alto potencial no diagnóstico da cisticercose bovina. Foram selecionadas três diferentes proteínas de Taenia saginata (GenBank) (18 kDa oncosphere antigen [Taenia saginata]; Antigen TSA16 [Taenia saginata]; Antigen TSA36 [Taenia saginata] Heat shock protein 20 homolog [Taenia saginata]), e realizada a predição de oito peptídeos (EP1-EP8) selecionados por diferentes programas de bioinformática. Após sintetização e análise do desempenho dos peptídeos pelo ELISA, foram selecionados os três peptídeos que alcançaram melhores resultados (EP1, EP4 e EP6) para compor uma proteína recombinante quimérica, que posteriormente foi denominada de rqTSA-25. A proteína rqTSA-25 obteve as seguintes taxas de desempenho no ELISA: sensibilidade de 88% (IC=76-94%), especificidade de 96% (IC=84-99%), valor preditivo positivo 96% (IC=86-99%), valor preditivo negativo 87% (IC=74-94%) e acurácia de 92%, sendo que, ao submeter diferentes amostras de soro grupo controle ao teste imunoblot, não foi verificada nenhuma reação falso positiva ou falso negativa. Dessa forma, destaca-se a inovação na produção da proteína rqTSA-25 e seu alto desempenho relatado, sendo um importante aliado na melhoria do teste diagnóstico sorológico para o diagnóstico da cisticercose bovina. / Bovine cysticercosis is a zoonotic disease that causes losses both for health and economic order. Traditionally the diagnosis is performed during the post-mortem inspection in slaughterhouses under sanitary inspection, and consistent basically in macroscopic visualization by means of cuts carried out in predicted muscle groups such as preferred for the implementation of cysticercosis. It is emphasized that this method has performance deficiencies, leaving pass unnoticed discrete forms of the disease. This research was developed with the goal of improving the performance of the diagnosis of bovine cysticercosis and serologic tests currently developed, allowing the presence of cysticercosis in live animals and increasing the reliability of the diagnosis. The research was characterized by the selection of synthetic peptides and development of a recombinant chimera protein with high potential for diagnosis of bovine cysticercosis. First, three different proteins were selected from Taenia saginata (GenBank) (18 kDa oncosphere antigen [Taenia saginata]; Antigen TSA16 [Taenia saginata]; Antigen TSA36 [Taenia saginata] Heat shock protein 20 homolog [Taenia saginata]), being carried out the prediction of eight peptides (EP1-EP8) with antigenic power by different bioinformatic programs. After synthesis and performance analysis of peptides by ELISA test, we selected three peptides that have reached the best performance rates (EP1, EP4 and EP6) to compose a chimeric recombinant protein, subsequently named rqTSA-25, which was inserted into pET 29a (+) for subsequent expression in bacterial system. The rqTSA-25 protein allowed the following performance ratios by ELISA: sensitivity 88% (CI = 76- 94%), specificity 96% (CI = 84-99%), positive predictive value 96% (CI = 86- 99%), negative predictive value 87% (CI = 74-94%) and 92% accuracy, and subjecting different samples of serum control group to immunoblotting, it was not found any false positive reaction or false negative. Thus, first it stands out of innovation in the production of rqTSA-25 protein and its reported performance, combined with important improvement in in the serologic test for the diagnosis of bovine cysticercosis.
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Avaliação histopatológica e imunoistoquímica de fígados de bovinos cronicamente infectados por Fasciola hepatica

Trivilin, Leonardo Oliveira 10 February 2010 (has links)
Made available in DSpace on 2016-08-29T15:37:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_3357_Leonardo Trivilin.pdf: 4373003 bytes, checksum: ba83755888aa4df53774474f30563d8c (MD5) Previous issue date: 2010-02-10 / A fasciolose é uma doença causada pelo parasito trematodeo Fasciola hepatica que acomete o fígado e vias biliares de muitas espécies de animais. Objetivou-se com esta proposta realizar uma avaliação microscópica de fígados bovinos com fasciolose crônica por meio de alterações histopatológicas causadas pela presença do parasito e realização da imunofenotipagem da resposta imune na espécie bovina, avaliando o grau de resposta e sua influência no desenvolvimento da lesão. Além disso, propôs-se uma classificação do grau da lesão crônica no parênquima hepático conforme a evolução da infecção. Utilizou-se 100 fígados condenados por fasciolose no matadouro frigorífico de Atílio Vivácqua, ES. Coletou-se um fragmento de cada lobo hepático (direito e esquerdo) de cada fígado, que sofreu processamento histotécnico e coloração com hematoxilina-eosina e Tricômico de Masson, além da aplicação da imunoistoquímica com os anticorpos anti-CD3, anti-CD79α e anti-IgG. Avaliou-se diferentes graus e intensidade das lesões inflamatórias e fibróticas, sendo classificadas as amostras em Grau I, II e III. As lesões fibróticas se mostraram mais intensas em relação as inflamatórias e a proposta de categorização histopatológica das lesões hepáticas por fasciolose crônica em bovinos mostrou-se um método valioso de avaliação microscópica, uma vez que permite estabelecer o quadro evolutivo dessa enfermidade. Em relação à lesão fibrótica, no lobo direito e esquerdo as lesões foram mais importantes no espaço porta, sendo mais intensa no lobo esquerdo. Lesão fibrótica vascular foi marcante nas artérias que nas veias e sinusóides, principalmente no lobo esquerdo. Em relação à imunoistoquímica, houve marcação pelos anticorpos CD3+, CD79α+ e IgG+ tanto no lobo direito quanto no lobo esquerdo. A técnica de imunoistoquímica mostrou-se eficaz na caracterização do tipo celular presente na inflamação causada pela infecção por Fasciola hepatica, tornando-se importante no estudo da dinâmica da resposta inflamatória pelos bovinos. Palavras-chave: histopatologia, categorização, imunofenotipagem, fasciolose, ruminantes
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Efeito da Mentha piperita L. durante a infecção experimental por Schistosoma mansoni

Zaia, Mauricio Grecco 27 February 2015 (has links)
Made available in DSpace on 2016-06-02T20:21:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 6726.pdf: 4882223 bytes, checksum: 2e2b430474775e416438826a841565ab (MD5) Previous issue date: 2015-02-27 / Financiadora de Estudos e Projetos / Schistosomiasis is a parasitic disease caused by several species of trematode worms and it is believed that more than 249 million people are affected worldwide, with 700 million people living in risk areas. In Brazil, only the Schistosoma mansoni is found as the etiologic agent of schistosomiasis, responsible for more deaths than dengue, visceral leishmaniasis and malaria in the country. Currently, there is only one drug indicated for the treatment of schistosomiasis (Praziquantel) and the development of new drugs has become essential due to parasite resistance risk against this drug. Thus, this study aimed to evaluate the parasitological, immunological and histological profile in infected mice with Schistosoma mansoni, after treatment with an herbal business, consisting of menthol (30-55%) and menthone (14-32%), prepared from the leaves of Mentha piperita L. In addition, we evaluated the possible genotoxic effect of the herbal in cells of adult worms recovered from these treated animals using the comet assay technique. Female BALB/c mice were divided into 6 groups: Negative Control, Positive Control, Mentha 15, Mentha 60, PZQ and Cremophor. Each animal was infected with 80 cercariae of Schistosoma mansoni and treated 60 or 15 days with the herbal test. Single dose of 400 mg/kg of Praziquantel to PZQ group was administered. The animals were killed 61 days after the infection, in which were evaluated the cellular profile (total and differential counts of blood leukocytes and peritoneal cavity lavage), immune profile (IL-10, IL-4 and IFN -&#612; measurement by ELISA) and histological profile of liver and intestine of treated mice. Kato-Katz's technique was performed for quantifying eggs/gram at 45 and 60 days after infection and carried out adult worms recovered by perfusion of the hepatic portal system. Statistical analysis was performed using GraphPad Prism 5 (2005), using the non-parametric test (One-way ANOVA) through the analysis of variance (Tukey), considering p<0.05. The results showed that both groups treated with the herbal alter the behavior of the infection. The longer treatment with herbal (Mentha 60) decreased the number of S. mansoni eggs in the feces, liver and intestine of mice and reduced the number of hepatic granulomas, when compared to the Positive Control. In the same group was observed a reduction of blood eosinophils (84%) and a decrease the IL-4 and IL-10 levels when compared to the Positive Control, indicating a probable immunomodulation in this experimental infection model. Treatment with herbal medicine has no genotoxic effect on adult worms of S. mansoni in this model. Therefore, it is suggested that treatment with the herbal medicine for a long time, consisting of menthol and menthone, prepared from leaves of Mentha piperita L., has an immunomodulatory and anti-inflammatory action in this experimental model of murine schistosomiasis mansoni, contributing to the decrease in pathological effects caused by infection with S. mansoni. / A esquistossomose é uma doença parasitária causada por várias espécies de vermes trematódeos e acredita-se que mais de 249 milhões de pessoas são afetadas em todo o mundo, sendo 700 milhões de pessoas em área de risco. No Brasil, apenas o Schistosoma mansoni é encontrado como agente etiológico da esquistossomose, responsável por mais óbitos que a dengue, leishmaniose visceral e a malária no país. Atualmente, existe apenas um medicamento indicado para o tratamento da esquistossomose mansônica (Praziquantel) e o desenvolvimento de novos fármacos se tornou imprescindível devido ao risco de resistência do parasito frente a este fármaco. Sendo assim, este estudo teve como proposta avaliar o perfil parasitológico, imunológico e histológico em camundongos infectados com Schistosoma mansoni após o tratamento com o fitoterápico comercial, composto por mentol (30-55%) e mentona (14-32%), preparado a partir das folhas de Mentha piperita L., e avaliar o possível efeito genotóxico do fitoterápico frente a células de vermes adultos recuperados desses animais tratados utilizando a técnica de Ensaio Cometa. Camundongos fêmeas, Balb/c foram divididos em 6 grupos: Controle Negativo, Controle Positivo, Mentha 15, Mentha 60, PZQ e Cremophor. Os animais foram infectados com 80 cercarias de Schistosoma mansoni e submetidos a 60 ou 15 dias de tratamento com o fitoterápico teste. Foi administrada única dose de 400 mg/kg de Praziquantel ao grupo PZQ. Os animais foram eutanasiados 61 dias após a infecção, na qual foi avaliado o perfil celular (contagem total e diferencial de leucócitos sanguíneos e do lavado da cavidade peritoneal (LCP), perfil imunológico (dosagem de IL-10, IL-4 e IFN-&#612;) por ELISA e o perfil histológico de fígado e intestino dos camundongos submetidos ao tratamento. Foi realizada a técnica de Kato-Katz para quantificação de ovos/grama no 45º e 60º dia após a infecção e realizada a contagem de vermes adultos recuperados do sistema porta-hepático por perfusão. A análise estatística foi feita pelo programa GraphPad Prism 5 (2005), usando o teste não paramétrico (One-way ANOVA) por meio da análise da variância (Tukey), considerando-se p<0,05. Os resultados demonstraram que ambos os grupos tratados com o fitoterápico alteraram o comportamento da infecção. O tratamento mais prolongado com o fitoterápico (Mentha 60) apresentou redução no número de ovos de S. mansoni nas fezes, fígado e intestino dos camundongons, além de reduzir o número de granulomas hepáticos, quando comparado ao Controle Positivo. Neste mesmo grupo, a redução de eosinófilos sanguíneos chegou a 84%, além de diminuir os níveis de IL-4 e IL-10 significativamente quando comparado ao Controle Positivo, indicando uma provável imunomodulação neste modelo de infecção experimental. O tratamento com o fitoterápico não possui efeito genotóxico sobre vermes adultos de S. mansoni neste modelo. Portanto, sugere-se que o tratamento com o fitoterápico por tempo prolongado, composto por mentol e mentona, preparado a partir de folhas da Mentha piperita L., possui uma ação imunomoduladora e antiinflamatória neste modelo experimental de esquistossomose mansônica murina, podendo contribuir para a diminuição dos efeitos patológicos ocasionados pela infecção por S. mansoni.

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