A goiaba é o fruto da goiabeira, originária da América Tropical, e pertence à família Myrtaceae, gênero Psidium e espécie Psidium guajava L. Ela pode ser encontrada em todas as regiões do Brasil, sendo o Estado de São Paulo um dos principais produtores. Mundialmente o Brasil está entre os principais produtores, no entanto, sua participação no mercado internacional da fruta in natura ainda é inexpressiva. A goiaba é apreciada tanto fresca como processada industrialmente na forma de doces, compotas, geléias e sucos. Ela possui propriedades nutracêuticas devido a seus nutrientes, vitaminas e substâncias bioativas, como a vitamina C, além de possuir altos teores de carotenóides. Devido a crescente importância econômica da fruta, além do interesse em alimentos mais saudáveis, é importante conhecer os metabólitos presentes na goiaba, no intuito de promover seu consumo. Diferentes fatores podem influenciar na composição e qualidade da fruta, como tipo de solo, poda, fornecimento de água e adubação. Considerando a adubação, há poucos estudos no Brasil em relação aos níveis corretos para aumentar a produção sem afetar a qualidade do fruto. O objetivo desse trabalho foi avaliar características físicas e químicas da goiaba Paluma cultivada na região de Jaboticabal, submetida a diferentes doses de adubação nitrogenada, durante quatro diferentes estádios de desenvolvimento do fruto. As análises dos carboidratos e vitaminas foram realizadas por eletroforese capilar e dos carotenóides por cromatografia líquida em fase reversa, e os resultados avaliados por análise de componentes principais (PCA). Foi observada uma variação nos níveis de todos os metabólitos analisados em relação à quantidade de nitrogênio administrado, sendo que a concentração de glicose, frutose e sacarose na goiaba madura foram maiores nas amostras fertilizadas com duas doses de nitrogênio, assim como para o ácido ascórbico total e betacaroteno. Em geral, o nível de sacarose em relação à glicose e frutose diminuiu durante o desenvolvimento da fruta, enquanto o nível de betacaroteno aumentou para as amostras adubadas com uma e duas doses de nitrogênio. As análises de PCA permitiram diferenciar os estádios de desenvolvimento dos frutos, no entanto as diferentes doses de adubação não proporcionaram a formação de grupos distintos, indicando que cada variável foi influenciada diferentemente por cada nível de adubação. / The guava is the fruit from a guava tree, native from tropical America, belonging to the family of Myrtaceae, Psidium genus and Psidium guajava L. species. It can be found in all regions of Brazil, and the São Paulo State is one of the main producers. Globally, Brazil is among the main producers; however, its international market of the fresh fruit is still unimpressive. Guava is appreciated as both fresh and processed industrially as candies, jams, jellies, and juices. It has nutraceutical properties due to its nutrients, vitamins, and bioactive substances, such as vitamin C, besides having high levels of carotenoids. Due to the growing economic importance of this fruit and the interest in healthier foods, it is important to study the metabolites present in guava to promote their consumption. There are different factors that can influence the composition and quality of the fruit before harvesting, such as soil type, pruning, water supply, and fertilization. In relation to the fertilization, there are only a few studies in Brazil regarding the correct levels to increase the production of guava, maintaining the quality of the fruit. The aim of this study was to evaluate physical and chemical characteristics of guava Paluma from Jaboticabal region, under different nitrogen fertilizer levels during four stages of fruit development. The analyses of carbohydrates and vitamins were performed by capillary electrophoresis and the analyses of carotenoids were done by high performance liquid chromatography, and the results were evaluated by principal component analysis (PCA). It was observed a variation in levels of all metabolites in relation to nitrogen administered, being the concentration of glucose, fructose, and sucrose on the ripe guava higher on the samples fertilized with two doses of nitrogen, as well as for the total ascorbic acid and beta-carotene. In general, the levels o sucrose with respect to glucose and fructose decreased during the fruit development, whereas beta-corotene levels increased for the samples fertilized with one and two doses. The PCA data allowed differentiating among the stages of development, but the doses of nitrogen did not provide separate clusters, indicating that each variable was differently influenced by each fertilizer level.

A goiaba é o fruto da goiabeira, originária da América Tropical, e pertence à família Myrtaceae, gênero Psidium e espécie Psidium guajava L. Ela pode ser encontrada em todas as regiões do Brasil, sendo o Estado de São Paulo um dos principais produtores. Mundialmente o Brasil está entre os principais produtores, no entanto, sua participação no mercado internacional da fruta in natura ainda é inexpressiva. A goiaba é apreciada tanto fresca como processada industrialmente na forma de doces, compotas, geléias e sucos. Ela possui propriedades nutracêuticas devido a seus nutrientes, vitaminas e substâncias bioativas, como a vitamina C, além de possuir altos teores de carotenóides. Devido a crescente importância econômica da fruta, além do interesse em alimentos mais saudáveis, é importante conhecer os metabólitos presentes na goiaba, no intuito de promover seu consumo. Diferentes fatores podem influenciar na composição e qualidade da fruta, como tipo de solo, poda, fornecimento de água e adubação. Considerando a adubação, há poucos estudos no Brasil em relação aos níveis corretos para aumentar a produção sem afetar a qualidade do fruto. O objetivo desse trabalho foi avaliar características físicas e químicas da goiaba Paluma cultivada na região de Jaboticabal, submetida a diferentes doses de adubação nitrogenada, durante quatro diferentes estádios de desenvolvimento do fruto. As análises dos carboidratos e vitaminas foram realizadas por eletroforese capilar e dos carotenóides por cromatografia líquida em fase reversa, e os resultados avaliados por análise de componentes principais (PCA). Foi observada uma variação nos níveis de todos os metabólitos analisados em relação à quantidade de nitrogênio administrado, sendo que a concentração de glicose, frutose e sacarose na goiaba madura foram maiores nas amostras fertilizadas com duas doses de nitrogênio, assim como para o ácido ascórbico total e betacaroteno. Em geral, o nível de sacarose em relação à glicose e frutose diminuiu durante o desenvolvimento da fruta, enquanto o nível de betacaroteno aumentou para as amostras adubadas com uma e duas doses de nitrogênio. As análises de PCA permitiram diferenciar os estádios de desenvolvimento dos frutos, no entanto as diferentes doses de adubação não proporcionaram a formação de grupos distintos, indicando que cada variável foi influenciada diferentemente por cada nível de adubação. / The guava is the fruit from a guava tree, native from tropical America, belonging to the family of Myrtaceae, Psidium genus and Psidium guajava L. species. It can be found in all regions of Brazil, and the São Paulo State is one of the main producers. Globally, Brazil is among the main producers; however, its international market of the fresh fruit is still unimpressive. Guava is appreciated as both fresh and processed industrially as candies, jams, jellies, and juices. It has nutraceutical properties due to its nutrients, vitamins, and bioactive substances, such as vitamin C, besides having high levels of carotenoids. Due to the growing economic importance of this fruit and the interest in healthier foods, it is important to study the metabolites present in guava to promote their consumption. There are different factors that can influence the composition and quality of the fruit before harvesting, such as soil type, pruning, water supply, and fertilization. In relation to the fertilization, there are only a few studies in Brazil regarding the correct levels to increase the production of guava, maintaining the quality of the fruit. The aim of this study was to evaluate physical and chemical characteristics of guava Paluma from Jaboticabal region, under different nitrogen fertilizer levels during four stages of fruit development. The analyses of carbohydrates and vitamins were performed by capillary electrophoresis and the analyses of carotenoids were done by high performance liquid chromatography, and the results were evaluated by principal component analysis (PCA). It was observed a variation in levels of all metabolites in relation to nitrogen administered, being the concentration of glucose, fructose, and sucrose on the ripe guava higher on the samples fertilized with two doses of nitrogen, as well as for the total ascorbic acid and beta-carotene. In general, the levels o sucrose with respect to glucose and fructose decreased during the fruit development, whereas beta-corotene levels increased for the samples fertilized with one and two doses. The PCA data allowed differentiating among the stages of development, but the doses of nitrogen did not provide separate clusters, indicating that each variable was differently influenced by each fertilizer level.

Nos últimos anos a eletroforese capilar tem substituído a eletroforese em gel e está sendo usada para uma ampla variedade de aplicações forenses, incluindo tipagem de DNA. A fim de superar as desvantagens com relação à análise simultânea de amostras que a eletroforese em gel oferece, equipamentos com arranjos de capilares foram idealizados, assim como a possibilidade de análises multiplexadas em um único capilar por meio da utilização de corantes intercaladores. Neste trabalho foi otimizada a metodologia para amplificação de DNA pela reação em cadeia da polimerase para sete primers correspondentes a sete regiões padronizadas e legalmente aceitas para testes de paternidade. Três casos foram avaliados por eletroforese em microchip, indicando que um método mais reprodutível e de maior resolução deveria ser utilizado, fato que levou ao desenvolvimento de um método para separação de um padrão de tamanho de DNA de 25 pares de base por eletroforese capilar em soluções poliméricas em um equipamento comercial. Este método foi aplicado à separação do mesmo padrão intercalado a um corante dimérico em um equipamento de eletroforese capilar lab-made miniaturizado, com detecção espectrofotométrica na região visível, sugerindo a possibilidade de o equipamento desenvolvido ser utilizado para análises genéticas multiplexadas com custo e tempo minimizados. / In recent years capillary electrophoresis has substituted slab gel electrophoresis and has been used in a variety of forensic applications, such as DNA typing. In order to overcome the disavantages regarding the simultaneous samples analysis that slab gel offers, equipments with capillary arrays were developed, as well as the possibility of multiplex analysis in a single capillary by using intercalating dyes. In this work the metodology to amplify DNA by polimerase chain reaction was studied to seven primers corresponding to seven standardized and legaly accepted regions in paternity tests. Three cases were evaluated by microchip electrophoresis, indicating the need for a more reproductive and with better resolution method has to be used. This fact lead to the development of a method to separate a 25 base pairs DNA ladder by gel capillary electrophoresis in a comercial equipment. In the sequence, this method was apllied to the separation of the same ladder intercalated to a dimeric dye in a lab-made miniaturized capillary electrophoresis system with spectrophotometric detection at visible region, suggesting that the developed equipment can be used for multiplexed genetic analysis with reduced cost and time.

As ataxias espinocerebelares (SCAs) são doenças neurodegenerativas com herança autossômica dominante que apresentam grande heterogeneidade clínica e genética. O diagnóstico é realizado pela detecção da mutação no gene causador, que, na sua maioria, é uma expansão de repetições trinucleotídicas CAG. O objetivo deste estudo foi analisar os polimorfismos de repetições trinucleotídicas nos genes associados as SCAs tipo 1, tipo 2, tipo 3 e tipo 6 através de PCR-multiplex e eletroforese capilar, visando a melhoria do diagnóstico molecular e a determinação da distribuição das regiões polimórficas nos alelos normais. As análises foram realizadas em 124 pacientes não-aparentados que apresentavam sintomas de ataxia. Nessa amostra, foram identificados 10 pacientes com SCA2, 39 pacientes com SCA3 e 2 pacientes com SCA6. Não encontramos amostras com uma expansão CAG no gene SCA1. Os polimorfismos de cada loci foram estudados nos cromossomos normais desses pacientes (n=209-248). A freqüência dos alelos normais grandes no locus SCA1 (>32 repetições CAG) foi estabelecida em 0,05 e no locus SCA2 (>22 repetições CAG) foi 0,11, enquanto que no locus SCA3 (alelos >28 repetições) a freqüência foi 0,11. A freqüência de alelos normais grandes para o locus SCA6 (>13 repetições) foi 0,04. Concluindo, este estudo proporcionou a primeira análise detalhada da distribuição de repetições CAG nos loci SCA1, SCA2, SCA3 e SCA6 por amplificação multiplex e eletroforese capilar em pacientes brasileiros. A freqüência dos alelos normais grandes nos genes SCA3 e SCA6 nessa amostra reflete a prevalência destas duas doenças na nossa população, concordando com a hipótese que alelos patogênicos podem ser originados pela expansão de alelos normais grandes. / Spinocerebellar ataxias (SCAs) are neurodegenerative disorders inherited as an autosomal dominant trait that present large genetic and clinical heterogeneity. An accurate diagnosis relies on mutation detection in a specific causative gene, which is typically an abnormal number of CAG trinucleotide repeats. The aim of this study was to analyze polymorphic regions of trinucleotide repeats in SCA1, SCA2, SCA3, and SCA6 associated genes through multiplex PCR and capillary electrophoresis, aiming the improvement of molecular diagnosis and distribution of CAG repeats number in normal alleles. Analyses were carried out in 124 unrelated Brazilian patients who presented symptoms of progressive ataxia. To date, we identified 10 patients with SCA2, 39 patients with SCA3, and 2 patients with SCA6. No alleles were identified with a CAG expansion tract in the SCA1 gene. Normal CAG repeats length range was established using data from normal chromosomes (n=209-248). Frequency of large normal alleles in SCA1 locus (>32 CAG repeats) was determined to be 0.05. Frequency of large normal alleles at the SCA2 locus (>22 CAG repeats) was shown to be 0.11 while at the SCA3 locus (>28 CAG repeats) frequency of large normal alleles was 0.11. At the SCA6 locus, frequency of large normal alleles (>13 CAG repeats) was found to be 0.04. Moreover, this study provides the first detailed analysis, to our knowledge, of the distribution of CAG repeats at the SCA1, SCA2, SCA3, and SCA6 loci by multiplex-PCR and automated capillary electrophoresis in Brazilian patients. Frequency of large normal alleles in SCA3 and SCA6 genes established in this sample reflects the prevalence of these two diseases in our population, supporting the hypothesis that disease alleles emerge from expansion of large normal alleles.

O hiperadrenocorticismo é uma das endocrinopatias mais comuns em cães, sendo caracterizado pela exposição excessiva de glicocorticóides secretados pelas adrenais. A hipercortisolemia crônica pode promover várias complicações, incluindo hipertensão sistêmica e glomerulonefrite. A glomerulonefrite pode desencadear variáveis graus de proteinúria e uma tendência de evolução para doença renal crônica. A perda de proteínas na urina, principalmente da albumina, é uma característica das doenças glomerulares e a determinação de variáveis laboratoriais, como a razão proteína:creatinina urinária (RPC), albuminúria (teste de ELISA) e eletroforese das proteínas urinárias, são recomendadas para a elucidação do diagnóstico. Assim, o objetivo do estudo é avaliar a relação entre proteinúria e hipertensão arterial sistêmica em cães com hiperadrenocorticismo e verificar, pela avaliação da albuminúria e do peso molecular das proteínas urinárias, o segmento do néfron que foi comprometido ou lesado. Foram avaliados 30 cães com diagnóstico de hiperadrenocorticismo, subdivididos em 13 cães com hipertensão arterial sistêmica (grupo I) e 17 cães normotensos (grupo II). Foram determinados a razão proteína:creatinina urinária (RPC); a albuminúria pela avaliação da albumina normalizada e razão albumina: creatinina urinária (RAC) e a eletroforese de proteínas pela técnica em gel de poliacrilamida, contendo dodecil sulfato de sódio (SDS - PAGE). Os resultados foram comparados com os dados obtidos de 30 cães clinicamente saudáveis e foi constatado que não houve influência da hipertensão arterial sistêmica nos cães com hiperadrenocorticismo em relação à quantificação da albuminúria, determinada pelo método ELISA, e nem na qualidade e quantidade das bandas de proteínas de baixo (< 60 kDa) e de alto peso molecular (> 60 kDa) determinada pela eletroforese. No entanto foi determinado que cães com hiperadrenocorticismo podem desenvolver lesões glomerulares e tubulares, caracterizadas pela presença de albuminúria e de proteínas de alto e de baixo pesos moleculares, independentemente da presença de hipertensão arterial sistêmica. Concluindo que os métodos laboratoriais, a eletroforese de proteína urinária em gel de poliacrilaminda associada à avaliação quantitativa da proteína total, como a determinação quantitativa da albuminúria, são passíveis de serem empregadas para a avaliação dos segmentos dos néfrons comprometidos que causaram as perdas de proteínas na urina. / Hyperadrenocorticism is a common endocrinopathie in dogs characterized by excessive glucocorticoid expousure secondary to adrenal secretion. Chronic hypercortisolemia may promote several complications, including sistemic hypertension and glomerulonephritis. Glomerulonephritis may lead to different proteinuria degrees and chronic renal disease. Urine protein loss, specially albumin, is characteristic in glomerular diseases. Laboratorial determination by the urinary protein/creatinin ratio (PCR), albuminuria (ELISA test) and urinary protein electrophoresis are recommended for diagnosis. The aim of this study is to evaluate the relationship between proteinuria and sistemic arterial hypertension in dogs with hyperadrenocorticism and to identify the nephron injured segment by evaluating albuminuria and urinary protein molecular weight. Thrithy dogs with hyperadrenocorticism were subdivided in 2 groups as following: 13 dogs with sistemic arterial hypertension (group I) and 17 normal dogs (group II). Urinary protein/creatinin ratio (PCR); albuminuria using the evaluation of normalized albumin and urinary albumin/creatinin ratio (ACR); and protein electrophoresis using polyacrylamide gel with sodium dodecil sulfate (SDS - PAGE) were performed. Results were compared with data of 30 clinically healthy dogs. No influence of sistemic arterial hypertension in dogs with hyperadrenocorticism was noticed in albuminuria magnitude using the ELISA method, nor in the quality and quantity of low (<60 kDa) and high (> 60 kDa) molecular weight bands observed in electrophoresis. However, dogs with hyperadrenocorticism can develop glomerular and tubular lesions, characterized by albuminuria and by the presence of high and low molecular weight proteins in urine independently of sistemic arterial hypertension. Furthermore, urinary protein electrophoresis in polyacrylaminde gel associated to quantitative evaluation of total protein such as the quantitative determination of the albuminuria, may be used in evaluating committed nephrons segments that caused urine protein loss.

O presente trabalho teve como objetivo caracterizar o desenvolvimento da semente de Araucaria angustifolia através da proteômica comparativa, buscando compreender as alterações fisiológicas e metabólicas que ocorrem durante esse processo. Inicialmente, foram avaliados três diferentes metodologias de extração de proteínas. A metodologia composta por solução de extração contendo 7 M de uréia, 2 M de tiouréia, 1% de ditiotreitol, 2% de Triton-100, 1 mM de fluoreto de fenilmetilsulfonil e 5 µM de pepstatina, seguido de precipitação em 20% de ácido tricloroacético apresentou géis de maior resolução e reprodutibilidade, tendo sido escolhida como metodologia de extração protéica para o estudo das alterações no proteoma da semente de A. angustifolia. Uma dificuldade associada ao estudo do proteoma de espécies não sequenciadas é a baixa representatividade nos bancos de dados protéicos, resultando em identificações baseadas em homologia. Estratégias proteômicas baseadas em fracionamento em gel resultam em grandes contaminações por fragmentos de queratina. Sendo assim, foi desenvolvido um programa de remoção de espectros de baixa qualidade para utilização em proteômica baseada em homologia. As análises mostraram que o programa reduz o tempo de busca, melhora a qualidade dos alinhamentos e não resulta em perda de identificações positivas. Finalmente, utilizando as metodologias descritas, foram estudadas as alterações no proteoma durante o desenvolvimento da semente de A. angustifolia. Noventa e seis proteínas foram identificadas e agrupadas de acordo com sua função biológica e padrão de detecção. Os resultados obtidos permitiram o estabelecimento de marcadores protéicos no início e final do desenvolvimento embrionário. A análise das proteínas abundantes no início da embriogênese indica um maior controle no metabolismo oxidativo em relação aos estádios finais. Contrariamente, o final da embriogênese é caracterizado por um alto metabolismo de assimilação de carbono e acúmulo de proteínas de reserva. As implicações dos resultados obtidos no controle e melhoramento de sistemas de embriogênese somática na espécie também foram discutidas. / The aim of the present work was to characterize the seed development of Araucaria angustifolia through proteomics in order to understand the physiological and biochemical changes during this process. For that, initially, three different protein extraction methods were evaluated. The extraction based on protein solubilization in 7 M urea, 2 M thiourea, 1% dithiothreitol, 2% Triton-100, 1 mM phenylmethylsulphonyl fluoride, 5 µM pepstatin, followed by 20% trichloroacetic acid precipitation showed the highest gel resolution and reprodutivity and, thus, was chosen to be used in the analysis of the proteome of A. angustifolia seeds. One aspect that hampers the proteome study of unsequenced species is the low protein representativity in databases. So, protein identification is usually carried out through homology. Strategies based on 2-DE result in high keratin contamination. In the present work a spectra filtering software was developed and evaluated for use in homology driven proteomics. The software reduced the time of search, improved alignment quality and did not result in lost of positive identifications. Finally, using the described strategies, the changes in the proteome of A. angustifolia seeds were studied. Ninety six proteins were identified and classified according to their biological functions and expression profiles during seed development. The identified proteins may be used as protein markers of early and late embryogenesis. Proteins involved in the control of oxidative metabolism were highly expressed during the early stages of seed development; while, carbon metabolism and storage proteins were highly expressed in late stages. Considerations on the improvement and control of somatic embryogenesis through medium manipulation and protein markers screening using data generated are also discussed.

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:02Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-17Bitstream added on 2015-04-09T12:48:27Z : No. of bitstreams: 1 000814326.pdf: 359070 bytes, checksum: 6c4f05f013b9c86649717ad6dd9be440 (MD5) / As proteínas de fase aguda são glicoproteínas sintetizadas pelos hepatócitos e surgem precocemente na circulação sanguínea durante processos inflamatórios. Assim, o estudo objetivou identificar, diferenciar, quantificar, avaliar e comparar as proteínas séricas de fase aguda em equinos com cólica de ocorrência natural e naqueles submetidos à obstrução intestinal experimental e correlacioná-las com o leucograma destes animais. Utilizaram-se 27 equinos adultos, 12 animais atendidos junto ao Hospital Veterinário Governador Laudo Natel (FCAV/Unesp) no período de julho de 2010 à julho de 2013 para tratamento de abdômen agudo, sobreviventes ou não, e 15 animais submetidos a obstrução intestinal experimental de intestino delgado ou grosso. Foram colhidas amostras de sangue total com anticoagulante, para realização do leucograma, e sem anticoagulante para realização do eletroforetograma em SDS-PAGE imediatamente antes da laparotomia (M0), após o procedimento cirúrgico (M1) e, diariamente, até o sétimo dia pós-operatório, com exceção do sexto dia (M2, M3, M4, M5, M6 e M7). Para análise dos dados utilizou-se o método estatístico multivariado com análise de fatores. Os equinos com cólica natural apresentaram padrão de resposta inflamatória mais intensa que os equinos submetidos à obstrução experimental. Os equinos submetidos à obstrução experimental apresentaram, ainda, resposta inflamatória ao modelo de obstrução instituído. As proteínas de fase aguda tiveram maior participação na variabilidade da resposta inflamatória que o leucograma e, somente quando avaliou-se a influência do tempo em cada grupo, observou-se correlação entre as proteínas de fase aguda e o leucograma. As proteínas de fase aguda alfa-1 glicoproteína ácida, haptoglobina e ceruloplasmina mostraram-se eficientes marcadores da resposta inflamatória e suas alterações podem ser utilizadas como indicadores prognósticos e do ... / The acute phase proteins are glycoproteins synthesized by hepatocytes and appear early in the bloodstream during inflammatory processes. The study aimed to identify, differentiate, measure, evaluate and compare the acute phase serum proteins in horses with naturally occurring colics and those undergoing experimental intestinal obstruction and correlate them with the leukon count in these animals. From the 27 adult horses studied 12 were treated in the Veterinary Hospital Governor Laudo Natel (FCAV / UNESP) from July 2010 to July 2013 for acute abdomen, survivors or not, and 15 animals were subjected to experimental small or large intestinal obstruction. Samples were obtained from whole blood with anticoagulant, to perform the WBC, and without anticoagulant to perform the SDS-PAGE electrophoretogram immediately before laparotomy (MO), after surgery (M1), and daily until the seventh day after surgery, except the sixth day (M2, M3, M4, M5, M6 and M7). For data analysis the multivariate statistical method with exploratory factor analysis was used. The horses with naturally occurringg colic showed intense inflammatory patterns that horses undergoing experimental intestinal obstruction. The horses undergoing experimental intestinal obstruction had also inflammatory obstruction established the model. The acute phase proteins had greater participation in the variability of the inflammatory response than the WBC and only when the influence of time in each group was evaluated there was a correlation between acute phase proteins and WBC. The acute phase protein alpha 1-acid glycoprotein, haptoglobin and ceruloplasmin were effective markers of the inflammatory response and its changes can be used as prognostic and time course indicators of acute abdomen in horses

Resumo não disponível.

As ataxias espinocerebelares (SCAs) são doenças neurodegenerativas com herança autossômica dominante que apresentam grande heterogeneidade clínica e genética. O diagnóstico é realizado pela detecção da mutação no gene causador, que, na sua maioria, é uma expansão de repetições trinucleotídicas CAG. O objetivo deste estudo foi analisar os polimorfismos de repetições trinucleotídicas nos genes associados as SCAs tipo 1, tipo 2, tipo 3 e tipo 6 através de PCR-multiplex e eletroforese capilar, visando a melhoria do diagnóstico molecular e a determinação da distribuição das regiões polimórficas nos alelos normais. As análises foram realizadas em 124 pacientes não-aparentados que apresentavam sintomas de ataxia. Nessa amostra, foram identificados 10 pacientes com SCA2, 39 pacientes com SCA3 e 2 pacientes com SCA6. Não encontramos amostras com uma expansão CAG no gene SCA1. Os polimorfismos de cada loci foram estudados nos cromossomos normais desses pacientes (n=209-248). A freqüência dos alelos normais grandes no locus SCA1 (>32 repetições CAG) foi estabelecida em 0,05 e no locus SCA2 (>22 repetições CAG) foi 0,11, enquanto que no locus SCA3 (alelos >28 repetições) a freqüência foi 0,11. A freqüência de alelos normais grandes para o locus SCA6 (>13 repetições) foi 0,04. Concluindo, este estudo proporcionou a primeira análise detalhada da distribuição de repetições CAG nos loci SCA1, SCA2, SCA3 e SCA6 por amplificação multiplex e eletroforese capilar em pacientes brasileiros. A freqüência dos alelos normais grandes nos genes SCA3 e SCA6 nessa amostra reflete a prevalência destas duas doenças na nossa população, concordando com a hipótese que alelos patogênicos podem ser originados pela expansão de alelos normais grandes. / Spinocerebellar ataxias (SCAs) are neurodegenerative disorders inherited as an autosomal dominant trait that present large genetic and clinical heterogeneity. An accurate diagnosis relies on mutation detection in a specific causative gene, which is typically an abnormal number of CAG trinucleotide repeats. The aim of this study was to analyze polymorphic regions of trinucleotide repeats in SCA1, SCA2, SCA3, and SCA6 associated genes through multiplex PCR and capillary electrophoresis, aiming the improvement of molecular diagnosis and distribution of CAG repeats number in normal alleles. Analyses were carried out in 124 unrelated Brazilian patients who presented symptoms of progressive ataxia. To date, we identified 10 patients with SCA2, 39 patients with SCA3, and 2 patients with SCA6. No alleles were identified with a CAG expansion tract in the SCA1 gene. Normal CAG repeats length range was established using data from normal chromosomes (n=209-248). Frequency of large normal alleles in SCA1 locus (>32 CAG repeats) was determined to be 0.05. Frequency of large normal alleles at the SCA2 locus (>22 CAG repeats) was shown to be 0.11 while at the SCA3 locus (>28 CAG repeats) frequency of large normal alleles was 0.11. At the SCA6 locus, frequency of large normal alleles (>13 CAG repeats) was found to be 0.04. Moreover, this study provides the first detailed analysis, to our knowledge, of the distribution of CAG repeats at the SCA1, SCA2, SCA3, and SCA6 loci by multiplex-PCR and automated capillary electrophoresis in Brazilian patients. Frequency of large normal alleles in SCA3 and SCA6 genes established in this sample reflects the prevalence of these two diseases in our population, supporting the hypothesis that disease alleles emerge from expansion of large normal alleles.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Ciência dos Alimentos, Florianópolis, 2011 / Made available in DSpace on 2012-10-26T05:21:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 296622.pdf: 2046189 bytes, checksum: a4aa4947a2a95d0ee24588d46690cee5 (MD5) / Técnicas de análise não-alvo têm sido sugeridas como análise complementar de segurança em plantas geneticamente modificadas (GM), na detecção de efeitos inesperados. Neste contexto, proteínas apresentam interesse especial como ferramenta na avaliação de culturas alimentares geneticamente modificadas, pois podem ser toxinas, antinutrientes ou alérgenos. No presente trabalho, plantas de oito variedades brasileiras de milho, sendo quatro variedades MON810 (DKBYG 240, DKBYG 330, DKBYG 350, AGYG 6018) e quatro isolinhas não GM (DKB 240, DKB 330, DKB 350 e AG 6018), foram cultivadas lado a lado, por 10 dias, em condições ambientais controladas. O experimento foi realizado em dois anos, 2010 e 2011. Parâmetros fisiológicos (peso, comprimento das folhas, clorofila e teor de proteína total) foram comparados e não foram observadas diferenças consistentes. Os perfis proteômicos das folhas foram analisados usando gel de eletroforese bidimensional com posterior espectrometria de massas. Para cada variedade foram extraídas proteínas de um pool contendo cinco plantas, as extrações foram feitas em triplicata em 2010 e em 2011. Cada um dos extratos originou um gel 2DE, totalizando seis géis para cada cultivar. Para análise proteômica considerou-se spot exclusivo aquele presente em todos os seis géis da variedade e ausente nos seis géis da sua correspondente. A cultivar DKB 240 apresentou 6 spots exclusivos, enquanto a cultivar DKBYG 240 apresentou apenas 1 spot exclusivo, quando comparadas entre si. A cultivar DKB 350 apresentou 4 spots exclusivos, enquanto DKBYG 350 apresentou 1 spot exclusivo, quando comparadas entre si. Os 12 spots foram identificados por espectrometria de massa. As variedades AGYG 6018 e DKBYG 350 não apresentaram spots exclusivos, quando comparadas com suas isolinhas não GM. No presente estudo, as proteínas exclusivas foram observadas em duas das quatro variedades MON810, e tais proteínas são específicas para cada variedade. Neste trabalho a presença exclusiva de spots não foi constante para as quatro variedades, indicando que as diferenças encontradas nos perfis avaliados não estão relacionadas ao evento MON810.