Made available in DSpace on 2014-06-12T15:52:41Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4549_1.pdf: 1671770 bytes, checksum: c5d987dfca24d06cae7f83b502cb6758 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2007 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A lectina ligadora de manose (MBL), membro das lectinas tipo-C, apresenta capacidade de se ligar através de múltiplos sítios a várias estruturas de carboidratos e promover a ativação do complemento. Os baixos níveis da MBL estão relacionados com a maior susceptibilidade as várias doenças infecciosas. Diferentes ensaios utilizados para a determinação da lectina não têm sido eficazes na identificação das várias formas moleculares da MBL presentes na circulação. Este trabalho tem como objetivo avaliar o perfil molecular da MBL no soro de pacientes com hepatite C usando um método de purificação com base em microplacas cobertas com discos de nitrocelulose, seguida a identificação protéica por ensaios de imuno-reconhecimento, SDS-PAGE (redutora e não-redutora) e análise por Western blot. Os resultados do método de purificação mostraram uma boa eficiência de ligação da membrana coberta com manana e a identificação da MBL foi confirmada para todos os genótipos por DOT-ELISA convencional. No geral, poucas bandas foram visualizadas nas amostras submetidas ao ensaio de purificação, os quais podem estar correlacionadas com a quantidade muito pequena de proteína presente. As bandas revelaram algumas diferenças para o padrão de bandeamento entre os genótipos avaliados AA, AO e OO, mostrando marcações acentuadas nas faixas de 50-90 kDa e 180 kDa, sendo equivalentes a variantes estruturais de baixa massa molecular e estruturas de alta massa molecular, respectivamente. Na análise por SDS-PAGE não-redutora, foram visualizadas uma larga faixa de massas moleculares, tais como as formas triméricas (3x3), dímeros, e bandas de subunidades estruturais da MBL identificadas em algumas amostras, sobretudo nos indivíduos com genótipo tipo selvagem AA. No Western blot, foi confirmado a presença das formas de baixa e alta massas semelhantemente ao observado nos géis de eletroforese, com destaque na detecção de formas de 128 e 32 kDa. Estes resultados sugerem um método para purificação protéica simplificado e de baixo custo para a MBL, o qual foi possível avaliar um perfil diferenciado das formas moleculares presentes no soro de pacientes infectados pelo vírus HCV. Vale ressaltar que este é um importante passo para uma maior elucidação da relação estrutura/genótipo e função da MBL em relação a hepatite C e que pode ser de fundamental importância na resposta ao tratamento

Orientador: Jose Francisco Hofling / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-22T20:20:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rosa_EdvaldoAntonioRibeiro_M.pdf: 2805077 bytes, checksum: f558f6ce6d2669a1a59612ad83c9aa8c (MD5) Previous issue date: 1997 / Resumo: O emprego de diferentes metodologias na extração de proteínas intracelulares de leveduras isoladas da cavidade oral de humanos, para aplicação em SDS-PAGE, foi avaliado. As proteínas foram obtidas por disrrupção com pérolas de vidro, pela ação do ácido tricloroacético, por sonicação, por um tampão de amostra e por criofratura celular através do uso de nitrogênio líquido, e posteriormente aplicadas em SDS-PAGE. Os perfis individuais foram analisados por densitometria de integralização de área e mostraram que a extração por criofratura e sonicação apresentaram os melhores resultados, seguidos pelos métodos de extração por tampão de amostra e pérolas de vidro. O ácido tricloroacético não se demonstrou satisfatório na obtenção de proteínas separáveis por SDS-PAGE. As proteínas intracelulares totais das espécies Cândida albicans, Cândida krusei, Cândida parapsitosis, Cândida tropicalis e Cândida guilliermondii, obtidas pelo método de" criofratura celular, foram submetidas à SDS-PAGE, em sistema descontínuo, e analisadas por densitometria. Os valores relativos de migração (Rfs) foram convertidos em dados binários e forneceram, após processamento computadorizado, as similaridades fenéticas entre as diferentes linhagens de uma mesma espécie e entre as diferentes espécies do gênero. Os resultados obtidos permitiram, ainda, agrupar as diferentes linhagens e espécies em função de suas similaridades fenéticas, gerando "clusters" compostos por linhagens de uma mesma espécie. Esse resultado sugere que a análise numérica de características baseadas em eletroforegramas de proteínas intracelulares totais de leveduras orais, é um recurso importante na identificação e discriminação de isolados clínicos e nos estudos com ênfase em Taxonomia, Sistemática e biodiversidade / Abstract: This work aimed to evaluate distincts methodologies for whole-cell proteins extraction of yeasts isolated from oral cavity, for application in polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). Such proteins were obtained by disruption with glass beads, trichloroacetic acid action, loading sample buffer action, sonication and cellular cryofracture by liquid nitrogen and applied in polyacrylamide gel electrophoresis. The profiles were analised by area integralization densitometry and showed that the best electrophoretic profile for proteins were obtained by cellular cryofracture and sonication. Glass beads and loading sample buffer showed less satisfactories results and the trichloroacetic acid method was not able to disclose applicable proteins bands to be used in studies of relationships of Candida species. The experimental results let to the observation that the species studied by using liquid nitrogen (cellular cryofracture method) showed the best electrophoretic profiles when compared to other metodologies. At the second part of this work, the whole-cell proteins were obtained by cellular cryofracture, separated by SDS-PAGE in a discontinous gel system and analised by densitometry of peaks detection. The migration distance values (Rfs) were converted in binominal data that after computer-process, gave the phenetic similarities among the different strains within the same species and among the different species within the same genera. The results obtained alowed to cluster the different strains and species by their phenetic similarities, giving clusters composed uniquely by specimen of the same species. This result suggests that the numerical analysis of characteristics based on electrophoregrams of whole-cell proteins of oral yeasts is a tool with great discriminately potential in studies of identification, sistematics and biodiversity / Mestrado / Biologia e Patologia Buco-Dental / Mestre em Ciências

Orientador: Jose Francisco Hofling / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-26T02:56:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rodrigues_JanainaAparecidadeOliveira_M.pdf: 11814842 bytes, checksum: 131ebe5dbb1bb898e4f87e20dfe60fa3 (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: O projeto de pesquisa teve como objetivo a avaliação de métodos bioquímicos e sorológicos na caracterização de espécies de Candida isoladas da cavidade bucal de humanos, com ênfase na Taxonomia, Sistemática e estudos epidemiológicos. As linhagens empregadas são representativas de 5 espécies de Candida: 97-a, F-72, E-37, 17-b e CBS-562T (C. albicans), FCF405 e FCF-152 e CBS-566T (C. guilliermondii), 21-c, 7-a e CBS-604T (C. parapsilosis), 1M-90, 4-c e CBS-573T (C. krusei), 1-b, FCF-430, Ct-4 e CBS-94T (C. tropicalis). Como controle negativo foi empregada a linhagem IZ-1339 (Kluyveromyces marxianus). Os métodos bioquímicos e sorológicos utilizados, se basearam no cultivo em meio cromogênico CHROMagar Candidaâ, ensaio imunoenzimático (ELISA indireto) e eletroforese de proteínas SDS-P AGE. Os resultados obtidos nos testes com CHROMagar Candida@ revelaram especificidade para as espécies C. albicans, C. tropicalis e C. krusei; as espécies C. guilliermondii e C. parapsilosis apresentaram coloração rosa e creme respectivamente, o que não é especifico para essas espécies. O método SDS- P AGE revelou diferenças significativas nos perfis eletroforéticos dos extratos protéicos intracelulares obtidos, apresentando diminuição no número de bandas protéicas em relação ao aumento do tempo de centrifugação. Os ensaios imunoenzimáticos (ELISA) não revelaram diferenças na reatividade para os extratos, expressa em densidade ótica (D. O.), quando comparados. Em ordem decrescente de especificidade o SDSP AGE mostrou-se mais eficiente na caracterização dos isolados agrupando-os em espécies, seguida do uso do CHROMagar Candidaâ que apresentou maior especificidade para C. albicans, C. tropicalis e C. krusei, mas não para as demais espécies. O método de ELISA utilizando anticorpos policlonais, se mostrou pouco efetivo na identificação das espécies por apresentar um alto grau de reação cruzada com outras leveduras / Abstract: This work had the purpose to evaluate biochemistry and serological methods to characterize Candida species from human oral cavity, emphasizing taxonomy, systematic and epidemiological studies. The strains used represent the five Candida species: 97-a, F-72, E-37, 17-b and CBS-562T (C. albicans), FCF-405 and FCF-152 and CBS-566T (C. guilliermondii), 21-c, 7-a and CBS604T (C. parapsilosis), IM-90, 4-c and CBS-573T (C. krusei), l-b, FCF-430, Ct-4 and CBS-94T (C. tropicalis). As negative control the strain IZ-1339 (Kluyveromyces marxianus) were used. The biochemical and serological methods used were based upon the growth in cromogenic medium CHROMagar Candidaâ, ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) and protein electrophoresis (SDS-PAGE). The method CHROMagar Candidaâ showed specificity for the C. albicans, C. tropicalis and C. krusei species but it was not able to identify the C. guilliermondii e C. parapsilosis species, since it showed rose and vanilla color, respectively, which is not specific for these two species. The SDS-PAGE showed significative differences in the electrophoretic pattems from the proteic cellular extracts, showing a decrease of the number of bands compared to the increase of the centrifugation time. The ELISA could not present differences among the cell extracts, expressed in O.D., when compared. In an increasing order of specificity, the SDS-PAGE seemes to be the more efficient for the strains characterization being able to group the species, followed by the CHROMagar Candidaâ which showed specificity for the C. albicans, C. tropicalis and C. krusei, but not for the remaining species studied. The ELISA using polyclonal antibodies was ineflective to identify species due to the high level of cross-reaction / Mestrado / Mestre em Biologia Buco-Dental

Orientador: Jose Francisco Hofling / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-26T17:30:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Boriollo_MarceloFabianoGomes_M.pdf: 3800617 bytes, checksum: 80d09e21425e702b4878942993acc893 (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: Um total de setenta e cinco amostras de Cândida albicans isoladas da cavidade oral de escolares saudáveis, do município de Piracicaba, estado de São Paulo, região sudeste do Brasil, com idades variando entre seis e nove anos, provenientes de cinco classes socioeconômicas e oito escolas, foram estudadas. Com base nos dados da literatura, o propósito da presente pesquisa foi analisar os graus de associação (similaridade) entre esses isolados, através da técnica de eletroforese de proteínas intracelulares em gel de poliacrilamida, em sistema descontínuo (SDS-PAGE), com ênfase nos estudos de caracterização epidemiológica desses microrganismos. As amostras foram inoculadas em 50 mL de meio de cultura YPD. Decorrido o tempo de incubação, as amostras foram centrifugadas a 3.000 x g, por 5 minutos. Os sedimentos obtidos foram ressuspensos em água destilada gelada, lavados e fracionados em alíquotas de 0,5mL, os quais foram submetidos ao processo de extração de proteínas por pérolas de vidro. As concentrações de proteínas das amostras foram padronizadas para 800ug/500uL, as quais foram mantidas a - 75 °C até o momento de uso. Os extratos celulares obtidos, foram submetidos à técnica de SDS-PAGE. Após a corrida eletroforética os géis foram revelados. As bandas de proteínas, indicativas do perfil eletroforético de cada amostra, receberam valores 1 (um) para a presença de bandas e 0 (zero) para a ausência das mesmas, numa comparação entre os "lanes". O conjunto desses dados permitiu a confecção de matrizes de dados binários com intervalo de confiança de ±1,245, as quais foram plotadas no pacote estatístico NTSYS-pc 1.70 aplicando o coeficiente de associação (similaridade) de Dice. Essas matrizes de similaridade foram tratadas pelo algoritmo UPGMA, que gerou os dendrogramas que possibilitaram as análises dos graus de similaridade existentes entre os isolados de Cândida albicans. Os resultados obtidos mostraram a formação de vários "clusters", presentes nos dendrogramas UPGMA, com características heterogêneas, contendo as amostras de escolares provenientes de diferentes classes socioeconômicas e escolas. Essa heterogeneidade sugere a existência de polimorfismo nessa espécie. A aplicação de proteínas intracelulares para análise numérica de Cândida albicans, permite a determinação preliminar dos agrupamentos desses isolados, independentemente de suas origens. A diversidade e heterogeneidade dos "clusters", detectáveis nos diversos dendrogramas, obtidos pela análise do perfil eletroforético dos extratos proteicos dessa espécie, sugerem que a caracterização infraespecífica mais apurada deve envolver marcadores menos sujeitos a interferências de expressão, como por exemplo, aqueles que exploram o polimorfismo de ácidos micléicos / Abstract: A total of seventy five samples of Candida albicans, isolated from the oral cavities of healthy scholars living in Piracicaba city, São Paulo state, southeast area of Brazil, with ages varying from six to nine year-old, and coming from five distinct socioeconomic levels and eight schools, were studied. Based on the literature data, the purpose of the present research was to analyze the association (similarity) degrees existing among those isolates, through the whole-cell polyacrylamide gel electrophoresis technique (SDS-PAGE), with emphasis in to ascertain the possible epidemiological relationships among such microorganisms. The samples were inoculated in YPD culture medium, and after the incubation, they were centrifuged at 3,000 x g for 5 minutes. The obtained sediments were washed in cold distilled water and the whole-cell proteins were extracted by disruption with glass beads. The protein concentration of the samples was standardized for 800mg/500mL, which were maintained at -75°C, until the moment of use. The obtained cell extracts were submitted to SDS-PAGE technique. After the electrophoresis, the gels were revealed and the protein bands received values 1 for the presence of bands and 0 for the absence of the same ones, in a lanes' comparison. The collection of those data allowed the confection of several binary data matrices with a confidence interval of ±1,245, which were plotted on the NTSYS-pc 1.70 version statistical package applying the association coefficient of Dice, which generated similarity (So) matrices. Those similarity matrices were treated by the UPGMA algorithm, that allowed the analyses of similarity levels among Candida albicans isolates by dendrograms. The results showed the formation of several clusters with heterogeneous composition, including samples not related to their respective socioeconomic levels or schools. These heterogeneity suggests the high degree of polymorphism in such species. The application of whole-cell proteins for Candida albicans numerical analysis allows the preliminary determination of groupings of those isolates, independently of their origins. The clusters' diversity and heterogeneity detected in the several dendrograms suggest that, a more accurate infraspecific characterization should involve markers less subject to expression interference, as for example, those that explore the nucleic acids' polymorphism / Mestrado / Mestre em Biologia e Patologia Buco-Dental

FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / A graviola (Annona muricata L.) à uma fruta bastante utilizada na alimentaÃÃo, pois fornece vitaminas, carboidratos, proteÃnas, lipÃdios, fibras e outras molÃculas para nutriÃÃo humana. Nos Ãltimos anos a graviola (fruto tropical exÃtico) tem apresentado uma posiÃÃo de destaque na economia brasileira, principalmente para Estados do Nordeste como CearÃ, Alagoas, Bahia e Pernambuco. A alta produÃÃo do fruto de graviola no Nordeste se dà principalmente pela floraÃÃo ocorrer durante o ano todo, contudo estima-se que a perda pÃs-colheita chega a 50% da produÃÃo, como ocorre com outros frutos nativos ou exÃticos. Tal perda pÃs-colheita do produto se deve à acelerada taxa de desenvolvimento e senescÃncia do fruto. Apesar de haver alguns estudos sobre graviola, o entendimento bioquÃmico e molecular do processo de amadurecimento à muito limitado tornando-se importante avanÃar nesses conhecimentos a fim de desenvolver estratÃgias para o aumento da vida de prateleira desse fruto. No presente trabalho, buscou-se por um melhor protocolo de extraÃÃo de proteÃnas da polpa de graviola para gerar mapas bidimensionais e identificaÃÃo de possÃveis proteÃnas envolvidas no amadurecimento pÃs-colheita do fruto. Os frutos de graviola no estÃdio prÃ-climatÃrico foram colhidos e deixados amadurecer a temperatura de 25 C por atà 8 dias. Amostras da polpa do fruto foram coletadas nos tempos 0, 2, 4, 6 e 8 dias pÃs-colheita e usadas para a extraÃÃo de proteÃnas e estabelecimento de gÃis bidimensionais (2D). Dois diferentes mÃtodos de extraÃÃo de proteÃnas foram testados e o que apresentou melhor rendimento e spots com boa resoluÃÃo em gÃis bidimensionais foi escolhido para anÃlise de proteÃnas. Os gÃis bidimensionais foram analisados atravÃs do programa Image Master para a identificaÃÃo de spots especÃficos e ou diferenciais, bem como determinaÃÃo de seus pontos isoelÃtricos (pIs) e de respectivas massas moleculares (MM). Os dados de pI e MM foram usados para rastrear proteÃnas homÃlogas em angiospermas atravÃs de buscas nos bancos de dados UniProtKB/Swiss-Prot e UniProtKB/TrEMBL dispondo de mais de 16 milhÃes de informaÃÃes depositadas. GÃis 2D inicialmente produzidos na faixa de pH de 3 a 10 revelaram proteÃnas concentradas na regiÃo de pHs mais Ãcidos. Tal fato determinou que a faixa de pH de 4 a 7 fosse usada para melhor separaÃÃo dos spots em anÃlises seguintes. ApÃs anÃlise dos gÃis bidimensionais 21 spots especÃficos e 6 spots diferenciais foram selecionados. As anÃlises em bancos de dados possibilitaram inferir sobre 26 proteÃnas. Entre essas proteÃnas, vÃrias estavam relacionadas com o amadurecimento de frutos em outras espÃcies tais como: proteÃnas com expressÃo regulada pelo etileno, proteÃnas relacionadas com o estabelecimento das caracterÃsticas organolÃpticas do fruto e proteÃnas do metabolismo energÃtico. Com relaÃÃo ao metabolismo enegÃtico proteÃnas da via glicolÃtica, ciclo de Krebs e CTE foram inferidas. Estudos prÃvios sobre a participaÃÃo da via alternativa de elÃtrons no amadurecimento climatÃrico da graviola foram reforÃados. Entretanto, nesse trabalho foi observado que alÃm da oxidase alternativa (AOX), outros componentes podem participar da regulaÃÃo dessa via. Os resultados obtidos revelam possÃveis proteÃnas alvo para o desenvolvimento de estratÃgias bioquÃmicas e ou moleculares no controle do amadurecimento pÃs-colheita da graviola. / The soursop (Annona muricata L.) fruit is widely used in food, because it provides vitamins, carbohydrates, proteins, lipids and other molecules for human nutrition. In recent years, soursop (exotic tropical fruit) has had a prominent position in the Brazilian economy, especially for northeastern states such as, Ceara, Alagoas, Bahia and Pernambuco. The high production of soursop fruit is mainly in the Northeast by flowering occurs throughout the year, however it is estimated that the post-harvest losses reach 50% of production, as with other native or exotic fruits. Such post-harvest losses of the product are due to the accelerated rate of development and senescence of the fruit. Although some studies on Graviola, biochemical and molecular understanding of the maturation process is very limited making it important to move forward on this knowledge to develop strategies for increasing the shelf life of fruit. In this study, we sought a better protocol for protein extraction from soursop pulp to generate two-dimensional maps and identification of potential proteins involved in post-harvest ripening of the fruit. The soursop fruit in pre-climacteric stage were collected and allowed to ripen at 25  C for up to 8 days. Samples of the fruit pulp were collected at 0, 2, 4, 6 and 8 days post-harvest and used for protein extraction and establishment of two-dimensional gels (2D). Two different protein extraction methods were tested and the best one concerning performance and spots with good resolution in two-dimensional gel was chosen for protein analysis. The two-dimensional gels were analyzed using the Image Master for the identification of specific or differential spots, as well as determination of their isoelectric points (IPs) and their molecular masses (MM). The pI and MM data were used to track homologous proteins in angiosperms through searches on databases UniProtKB / Swiss-Prot and UniProtKB / Tremble featuring more than 16 million deposited information. 2D gels initially produced in the pH range 3 to 10 revealed the protein concentrated in the more acidic pHs. This fact determined the pH range 4-7 was used for better separation of spots in the following analysis. After two-dimensional gel analysis of 21 specific spots and 6 differential spots were selected. The analysis in databases allowed inferences about 26 proteins. Among these proteins, several were related to fruit ripening in other species such as proteins with expression regulated by ethylene, protein related to the establishment of the organoleptic characteristics of the fruit and proteins of energy metabolism. With respect to the metabolism of proteins glycolytic pathway, Krebs cycle and ETC were inferred. Previous studies on the participation of the alternative pathway of electrons in the ripening of climacteric graviola have been strengthened. However, this study also showed that in addition to the alternative oxidase (AOX), other components may participate in the regulation of this pathway. The results reveal possible protein targets for the development of strategies and biochemical and molecular control of postharvest ripening of soursop.

O objetivo principal deste trabalho foi a caracterização e quantificação da variabilidade isoenzimática observada no germoplasma de mandioca (M. esculenta) na agricultura autóctone do sul do estado de São Paulo. A técnica utilizada foi a de eletroforese de isoenzimas em gel de penetrose 30 à 13%. Foram determinados e estudados 12 locos isoenzimáticos, sendo 9 polimórficos, pertencentes a cinco sistemas: malato desidrogenase (MDH - E.C. 1.1.1.37), leucina aminopeptidase (LAP - E.C. 3.4.11.1), xiquimato desidrogenase (SKDH - E.C. 1.1.1.25), alfa-esterase (Alfa-EST - E.C. 3.1.1.1) e aspartato aminotransferase (AAT - E.C. 2.6.1.1). O sistema da peroxidase (PER - E. C. 1. 1 1 .1.7) foi descartado por não apresentar polimorfismo de bandas. O polimorfismo isoenzimático observado nas populações estudadas é função da distribuição geográfica, uma vez que as populações do Litoral sul de São Paulo apresentam maior variabilidade que as populações do Vale do Ribeira. Nas análises dos dados foram estimados os parâmetros de variabilidade entre e dentro de populações, índice de similaridade genética pelos métodos de"Simple Matching"e"Jaccard", obtendo feno gramas pelo método de agrupamento U.P.G.M.A. (Unweighted pair-group method average), entre outros. O sistema de agricultura autóctone praticado pelos agricultores das comunidades negras e caiçaras matem e amplifica o nível de variabilidade intraespecífica, através de processos de hibridação introgressiva, troca de material entre agricultores, fluxo gênico, recombinação, introdução de variedades novas e mutação. Entre as principais conclusões destacam-se as seguintes: Os parâmetros de heterozigosidade média estimados demostraram altos níveis de variação genética para as roças de mandioca (Ho=O,242), sendo superiores à média de dados observados na literatura (Ho=O,225). Os resultados mostraram maior grau de variabilidade dentro das roças, sendo a roça 1 (roça Pedrinhas-1) a mais polimórfica (75,0% de variabilidade ). A diversidade intraespecífica está diretamente relacionada com a estrutura sócio-cultural do local. As etnovariedades foram agrupadas em quatro grupos fenéticos, sendo que a de número 27 (Gema de ovo) formou um único grupo. As etnovariedades pertencentes às populações do litoral apresentaram maior variabilidade do que as populações do vale. Nas análises dos dados foram estimados os parâmetros de variabilidade entre e dentro de populações, índice de similaridade genética pelos métodos de"Simple Matching"e"Jaccard", obtendo fonogramas pelo método de agrupamento U.P.G.M.A., entre outros. As etnovariedades foram agrupadas em quatro grupos fenéticos. O sistema AAT mostrou-se um bom marcador bioquímico para a identificação das etnovariedades. Parâmetros heterozigosidade média estimados demonstraram altos níveis de variação genética para as roças de mandioca (Ho=0,242), sendo superiores ao da literatura (Ho=0,225). A diversidade intraespecífica está diretamente relacionada com a estrutura sócio-cultural-local . As etnovariedades foram agrupadas em quatro grupos fenéticos, sendo que a de número 27 (Gema de ovo) formou um único grupo. Dados de isoenzimas servem para auxiliar os melhoristas nas estratégias de melhoramento genético da mandioca nas roças de agricultura autóctone, no sentido de detectar a distribuição da variabilidade genética presente nas populações. / not available

Visando caracterizar e aglomerar variedades em grupos de diversidade, foram avaliadas as variações quantitativas nas proteínas de grão, separadas por SDS-PAGE entre 67 germoplasmas de arroz (Oryza sativa L.) (59 brasileiros e 8 japoneses). A avaliação quantitativa foi desenvolvida através de análise densitométrica dos padrões eletroforéticos. Os dados obtidos permitiram determinação de distância genética entre pares de variedades, utilizando-se a distância euclidiana média e a formação de 10 grupos de diversidade (método de Tocher) e um dendograma (método do vizinho mais próximo). Foi observado, que em termos gerais, o gradiente de diferenciação está relacionado com a procedência dos materiais e com o nível de melhoramento das variedades. A análise de função discriminante confirmou que é possível uma clara discriminação entre variedades brasileiras e japonesas. Entretanto, a diferenciação entre variedades melhoradas e não melhoradas não foi tão manifesta. As técnicas estatísticas aplicadas aos componentes proteicos mencionados indicam que o conhecimento das proteínas de semente permite a avaliação da afinidade genética entre variedades e facilita a formação de grupos de diversidade e a diferenciação entre variedades de backgrounds genéticos similares / Variation among 67 rice cultivars (Oryza sativa L.) was evaluted comparing their soluble grain proteins profiles on SDS-PAGE gels. The protein fractions were quantitatively analysed by densitometric scanning of the gels. Utilizations of this methodology allowed an evaluation of genetic distances among pairs of cultivars by estimation of the mean distances. Ten groups of diversity were formed by the Tocher's method of conglomeration analysis, which were confirmed by the dendrogram of afinity relations (single linkage method). In general, the results showed that differentiation grades were related to the origin of the materials and their level of improvement. Graphic analysis of discriminant function showed a clear discrimination between brazilian and japonese cultivars. However, differenciation between improved (M) and non improved (O) cultivars was not so clear, showing a transition range between them. Statistical techniques applied to protein components indicate that knowledge of seed proteins allows to evaluate the genetic affinity among varieties and enables to from diversity groups and to discriminate them with similar genetic backgroung

Orientador :Carol Hollingworth Collins / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-15T09:07:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Valente_AntonioLuizPires_M.pdf: 5016165 bytes, checksum: 5d18533805db38c1b04503721043d127 (MD5) Previous issue date: 1980 / Mestrado

Orientadores : Candido Pereira Pinto Ricardo, Avelino Rodrigues de Oliveira / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-18T20:47:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gouvea_CibeleMarliCacaoPaiva_D.pdf: 6464931 bytes, checksum: e3c55e63e6a09d2433e994255bc6ac09 (MD5) Previous issue date: 1993 / Resumo: Foram analisadas alterações nos padrões de proteínas e compostos de fósforo e carbono em folhas de pepino e tomate infectadas pelos vírus do mosaico amarelo da abobrinha-de-moita (VMAA) e do mosaico do pepino (VMP), através de eletroforese e ressonância magnética nuclear (RMN). As extrações de proteínas foram feitas 48 h e aos 5,10, 15 e 20 dias após a inoculação dos vírus. Foi detectado aparecimento de proteína com PM 39.000 Da na fração microssomal de pepino com VMAA e de tomate com VMP. Foi observado que a infecção de pepino e tomate por TMV não induz aparecimento dessa proteína na fração microssomal. A metodologia utilizada para caracterização parcial revelou que a proteína de PM 39.000 Da não é glicosilada, é uma proteína periférica das membranas microssomais, não está presente no fluido intercelular e na parede celular. A eletroforese bidimensional mostrou que a proteína acumulada em pepino e tomate possui a mesma carga elétrica e o mesmo número de isoformas. Assim, é possível que esta seja uma proteína relacionada ao processo de patogênese (proteína PR) e seu aparecimento reflete alterações no metabolismo da planta hospedeira. Foi ainda observado aumento de atividade peroxidásica nas plantas infectadas. Através dos estudos de RMN foi observado acúmulo de sacarose, diminuição de açúcares fosfato e aumento de fosfato inorgânico nas folhas infectadas. Isto indica uma provável alteração no metabolismo de carboidratos, devido à infecção virótica. Foi, ainda, detectado aumento de glicolato em pepino infectado sugerindo uma possível interferência do processo infeccioso sobre a atividade de oxigenase da ribulose 1,5 bisfosfato carboxilase-oxigenase. Nos tomateiros infectados foi observado aumento de compostos aromáticos / Abstract: The changes in the leaf protein pattern, phosphorus and carbon coumpounds from cucumber and tomato infected with zucchini yellow mosaic virus (ZYMV) and cucumber mosaic virus (CMV) were analysed by gel electrophoresis and nuclear magnetic resonance (NMR). The leaf proteins were extracted 48 hr and 5, 10, 15 and 20 days after virus inoculation. A MW 39,000 Da protein was induced in the microsomal fraction from cucumber infected with ZVMV and tomato with CMV. The partial characterization of the MW 39,000 Da revealed that it was not glycoprotein, but a peripheral protein from microsomal membranes and not present in the intercellular fluid and cell wall. The bidimensional electrophoresis analysis revealed the same characteristics of the protein induced in both infected plants. Thus, is possible that the protein is a pathogenesis related (PR protein) and its accumulation in infected plants reflects changes in host plant metabolism. The NMR studies showed sucrose accumulation, sugar phosphate decrease and inorganic phosphate increase. These findings indicate a probable change in host plant carbohydrate metabolism. An increase was observed in glycolate level in infected cucumber. It suggests a change on Rubisco oxigenase activity. An increase was detected in aromatic compounds in infected tomato plants / Doutorado / Biologia Vegetal / Doutor em Ciências

Orientador: Jose Francisco Hofling / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-19T08:38:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Verlengia_Rozangela_M.pdf: 3969224 bytes, checksum: e0f965d8c6467d623c5f5304232ca940 (MD5) Previous issue date: 1994 / Resumo: Aspectos imunológicos de camundongos portadores do tumor de Ehrlich, linhagens 1-G e 2-S, foram avaliados através do emprego de técnicas de eletroforese. O soro dos animais utilizados nos testes foi colhidos nos períodos de 7 e 13 dias após a inoculação de 2,0 x '10 POT. 6' células tumorais da linhagem 1-G na cavidade peritoneal e da mesma concentração de células das linhagens 1-G ou 2-S no coxim plantar de camundogos. O fenômeno de imunidade concomitante relacionado a esse tipo de tumor foi investigado reinoculando-se os camundongos no coxim plantar esquerdo 12 dias após o implante do tumor primário (coxim plantar direito), com uma concentração de 1,0 x '10 POT. 6' células tumorais das linhagens 1-G ou 2-S. Os resultados da eletroforese em agarose do soro de camundongos inoculados com as células tumorais das linhagens 1-G e 2-S mostraram uma diminuição na concentração de albumina e um aumento nas concentrações das frações de alfa-2 e beta globulina. Usando-se a écnica de gel de poliacrilamida, o perfil eletroforético do soro de camundongos inoculados com células tumorais da linhagem 1-G revelou a ocorrência de proteínas com Rm 0,88 após 7 dias de desenvolvimento do tumor. Soro de animais com 13 dias de desenvolvimento do tumor, mostrou a presença de bandas protéicas com Rm 0,11, 0,12 e 0,31. Com o I desenvolvimento do tumor, uma elevação na concentração de IgG e uma diminuição do omplemento foram observados através da imunodifusão radial, e eletroforese em foguete, respectivamente. O crescimento das células tumorais das linhagens 1-G e 2-S, na forma sólida, demonstrou um desenvolvimento contInuo e dependente do número de células inoculadas. As células tumorais 2-S demonstraram ser mais proliferativas, uma vez que o inóculo de 5,0 x '10 POT. 5' células promoveu o crescimento do tumor em 100% dos camundongos, enquanto que resultados semelhantes somente foram conseguidos após o inóculo de 1,0 x '10 POT. 6' células da linhagem 1-G. As medidas da espessura da pata, revelaram que o desenvolvimento do tumor de Ehrlich, na forma sólida, apresentou um crescimento exponencial inicial, quando as concentrações de 1,0 x '10 POT. 7' e 5,0 x '10 POT. 6' células da linhagem 1-G e 2,5 x '10 POT. 6' e 1,0 x '10 POT. 6' células da linhagem 2-5 foram inoculadas. Concentrações inferiores de células apresentaram um crescimento inicial moderado. Camundongos portadores do tumor de Ehrlich, linhagens 1-G ou 2-S, testados para imunidade concomitante, demonstraram não serem capazes de rejeitar um segundo inóculo das mesmas células doze dias apos o inoculo primário. Com relação ao número de cromossomos, as análises citológicas revelaram que as linhagens 1-G e 2-5 representam diferentes clones das células do tumor de Ehrlich, com um número modal de 62 e 78 cromossomos, respectivamente / Abstract: Immunological aspects of mice bearing Ehrlich's carcinoma, lines 1-G and 2-S, were evaluated by using electrophoresis technics. The serum was collected 7 and 13 days after the inoculation of 2.0 x '10 POT. 6' tumor cells, line 1-G, in the peritoneal cavity and the same concentration of tumor cells, lines 1-G and 2-S, in the footpad. The concomitant immunity phenomenon was investigated by reinoculating 1.0 x '10 POT. 6' of either 1-G or 2-S tumor cells 12 days after the implant of the primary tumor. Electrophoresis in agarose showed that both cell types induced a decrease of albumin and an increase of alpha 2 and beta globulins levels. Using polyacrilamide gel electrophoresis the serum of mice inoculated with tumor cells line 1-G revealed proteins bands with Rm 0.88 at 7 and 13 days of tumor development. Afier 13 days of tumor growth the serum also showed the presence of proteins barids with Rm 0.11, 0.12 and 0.31. The increase of IgG levels with tumor development and a decrease in complement levels were observed in radial immunodiffusion and rocket electrophoresis respectively. The growth of tumor cells, lines 1-G and 2-S, in solid form, was continuous and dose dependent. The 2-S tumor cells were more invasive, since the inoculation of 5.0 x '10 POT. 5' cells promoted 100% of growth, while to achieve similar results with 1-G it was necessary the inoculation of 1.0 x '10 POT. 6', cells. The measurement of the degree of swelling of the footpad, when 1.0 x '10 POT. 7' and 5.0 x '10 POT. 6' cells of 1-G line were inoculated, revealed an exponencial growth in the begining of tumor development. Lower concentrations of cells showed only moderate growth. Mice with Ehrlich's tumor either, from lines 1-G or 2-S, tested for concomitant immunity, did not reject a second inoculum of the same cells 12 days after the first inoculum. The cytological analysis showed that 1-G and 2-S lines represent different clones of Ehrlich's carcinoma, displaying a modal number of 62 and 78 cromosomes respectively / Mestrado / Biologia e Patologia Buco-Dental / Mestre em Odontologia