Introdução: P. aeruginosa é o principal agente causador de infecção hospitalar sendo a primeira causa de pneumonia nosocomial em hospitais brasileiros. Os carbapenêmicos são geralmente o tratamento empírico de escolha para infecções graves causadas por esta bactéria. Entretanto, seu uso tem sido limitado pelas elevadas taxas de resistência entre os isolados de P. aeruginosa principalmente os produtores de metalo-β-lactamases (Mβla). Objetivos: Caracterizar e avaliar a produção de metalo-β-lactamase em amostras de Pseudomonas aeruginosa resistentes a ceftazidima e/ou imipenem em dois hospitais universitários de Porto Alegre. Métodos: O método de disco difusão padronizado pelo NCCLS foi utilizado para avaliar o perfil de susceptibilidade aos antimicrobianos. Um teste de aproximação de discos utilizando ceftazidima com ácido 2-mercaptopropiônico foi utilizado para triagem de amostras produtoras de Mβla. A fita de Etest combinada imipenem com EDTA também foi utilizada como teste fenotípico. Os resultados destes dois testes foram comparados à PCR para pesquisa dos genes blaSPM-1, blaIMP-1 e blaVIM-2 .Os isolados produtores de Mβla foram submetidos a tipagem molecular pela técnica de macrorestrição de DNA seguida de pulsed-field gel electrophoresis (PFGE). O perfil de hidrólise para o imipenem foi avaliado nas amostras produtoras de Mβla através da variação de absorção medida a 298 nm. Resultados: Dos 92 isolados clínicos analisados, 33 foram positivos no teste de aproximação de discos. Destes, 18 foram produtores de SPM-1 e 5 de IMP-1. Todas as amostras produtoras de SPM-1 apresentaram razão de IP/IPI na fita combinada ≥ 8. Os 18 isolados de SPM-1 foram classificados como um único padrão de PFGE que foi o predominante. Seis isolados pertenciam a um segundo padrão de PFGE, sendo que cinco destes eram IMP-1. O perfil de hidrólise mostrou que os isolados produtores de SPM-1 degradam mais efetivamente o imipenem quando comparado aos produtores de IMP-1 e aos não produtores de Mβla. Conclusões: Há uma alta prevalência de Mβla entre isolados de P. aeruginosa resistentes a imipenem e/ou ceftazidima. O gene SPM-1 é o elemento genético mais prevalente entre as amostras de P. aeruginosa Mβla positivas e a disseminação clonal têm contribuído para os elevados níveis de resistência aos carbapenêmicos entre os isolados de P. aeruginosa nos hospitais deste estudo.

Resumo não disponível

A aplicação de uma diferença de potencial entre os extremos de um capilar de material dielétrico, preenchido com solução aquosa, provoca um fluxo eletroosmótico através deste. As moléculas, de um pequeno volume de uma amostra injetada neste fluxo, se separam umas das outras devido a diferença entre suas mobilidades eletroforéticas. Este método de separação é conhecido como Eletroforese Capilar. Ele tem se mostrado muito eficiente na separação de moléculas orgânicas complexas e é um método complementar à Cromatografia Líquida. Os sistemas de detecção mais comumente utilizados são do tipo eletroquímico ou ópticos, estes últimos podem ser de absorção ou fluorimétricos. Alta sensibilidade tem sido obtida com sistemas de detecção com fluorescência induzida a lazer, como o de Argônio, Hélio-Cádmio e de semicondutor. Neste trabalho testamos o desempenho de um laser ultravioleta pulsado, usando o mini-laser de N2 (337 nm), para induzir a fluorescência em moléculas marcadas com marcadores moleculares fluorogênicos apropriados. Para aminoácidos obtivemos limites de detecção da ordem de alguns attomóis(10-18 mol).Em condições otimizadas a quantidade mínima detectável de melatonina e serotonina, usando o marcador molecular fluorogênico isotiocianato de fluoresceÍna, foi de 150 attomóis, que corresponde a um limite de detecção em concentração de 50 nM. Os peptídeos bradicinina, lisil-bradicinina e metionil-lisil-bradicinina foram separados entre si e detectados no limite de detecção em concentração de 1,2 fmóis quando marcados com fluorescamina e a 90 attomóis quando com orto"ftaldialdeído. Do nosso conhecimento, esta é a primeira vez que um laser pulsado (N2) é usado num sistema de detecção de eletroforese capilar.

Dissertação (mestrado) - Univesidade Federal de Santa Catarina. Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia. / Made available in DSpace on 2012-10-22T08:08:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 226335.pdf: 502374 bytes, checksum: 32a6f66613c813a4d2eb00a1aa2abf71 (MD5) / A ostra Crassostrea rhizophorae vem sendo amplamente utilizada como um organismo sentinela em programas de biomonitoramento marinho. Biomarcadores de contaminação são ferramentas importantes para a avaliação dos efeitos provocados por contaminantes em organismos expostos. No entanto, são necessários estudos que visem uma melhor compreensão, caracterização e padronização do uso destas respostas bioquímico-moleculares para que as mesmas possam ser utilizadas em estudos Ecotoxicológicos. A família das GST é comumente utilizada como biomarcador de exposição a xenobióticos. Estas enzimas desempenham importante papel nos processos de detoxificação celular, catalisando algumas das principais reações de conjugação da Fase II de biotransformação. O objetivo do presente estudo foi purificar e caracterizar GSTs de brânquias de ostras do mangue C. rhizophorae. Extratos de brânquias foram submetidos à cromatografia de afinidade em coluna GSH-agarose. A atividade da GST das frações eluídas foi testada utilizando-se os substratos 1-cloro, 2,4-dinitrobenzeno (GST-CDNB) e ácido etacrínico (GST-ETA). As frações que apresentaram atividade foram analisadas através de eletroforese bidimensional e ensaios cinéticos utilizando os substratos CDNB e GSH. A atividade da GST no pico de eluição da coluna de afinidade foi 14,1 e 7,5 U/ mg de proteína para os substratos CDNB e ETA, respectivamente. A massa molecular aparente foi de 26,09 kDa, sendo que foram observados seis spots de pI diferentes (pI 7,6-5,4), sugerindo a presença de diferentes sub-unidades. Os valores de Km determinados foram Km CDNB = 1,37 mM e Km GSH = 0,77 mM. Os resultados obtidos foram similares aos observados previamente em estudos com GSTs de diferentes espécies de organismos aquáticos. A elevada atividade da GST-ETA sugere a presença de isoformas da classe Pi, e que esta é, possivelmente, a mais representativa isoforma de GST em brânquias de ostras C. rhizophorae. No entanto, estudos subseqüentes deverão ser realizados visando identificar outras isoformas de GST presentes nesta espécie. Mangrove oyster Crassostrea rhizophorae has been extensively used as a sentinel organism in marine monitoring programs. Biomarkers of contamination are important tools to understand the effects elicited by contaminants in exposed organisms. However, studies aiming the understanding, characterization and standardization of these biochemical-molecular responses in ecotoxicological studies are still required. The GST family is commonly used as biomarkers of exposure to xenobiotics. These enzymes play an important role in cell detoxification, catalyzing one of the major Phase II biotransformation reactions. The aim of this study was to purify and to characterize the GSTs from gills of C. rhizophorae. Gill extracts were submitted to affinity chromatography using GSH-agarose column. The GST activity was analyzed in the eluted fractions using 1-chlorine,2,4-dinitrobenzene (GST-CDNB) and ethachrinic acid (GST-ETA). The fractions containing the peaks of GST activity were submitted to 2D electrophoresis and kinetics analysis, using CDNB and GSH. The activity detected in the elution peaks was 14,1 and 7,5 U/ mg protein for CDNB and ETA, respectively. The apparent molecular mass was 26,09 kDa and six spots with pI values ranged from 7,6 to 5,4 were observed, suggesting the presence of different GST subunits. The Km values were Km CDNB = 1,37 mM and Km GSH = 0,77 mM. These findings are in agreement with those observed for GSTs in similar studies carried out in different species of aquatic organisms. The elevated GST-ETA suggests the presence of GST Pi class isoform and that is, possibly, the most abundant GST isoform in the gills of C. rhizohorae. Moreover, subsequent studies need to be carried out to identify other GST isoforms in this specie.

Dissertação (mestrado) - Pontifícia Universidade Católica do Paraná, Curitiba, 2009. / Bibliografia: 110-127. / Nos últimos quarenta anos, estreptococos do grupo B (EGB) têm sido descrito como relevante patógeno em infecções invasivas neonatais, e atualmente, em pacientes senis ou com condições debilitantes. A terapia antimicrobiana intraparto continua sendo a prin / In the last forty years, group B streptococci (GBS) have been described as an important pathogen in neonatal invasive infections, and currently, in elderly or adults with underlying medical conditions. Intrapartum hemoprophylaxis remains the main measure

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-08-21T13:30:25Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1093430 bytes, checksum: 2520b94dfb2f5365593144a9fb89ce97 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-21T13:30:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1093430 bytes, checksum: 2520b94dfb2f5365593144a9fb89ce97 (MD5) Previous issue date: 2017-02-15 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Neste trabalho, utilizando a técnica de eletroforese em gel de agarose, foi possível estudar o revestimento de complexos DNA- fármacos pelo polipeptídeo C4K12 , assim como determinar a competição da intercalação dos fármacos Brometo de Etídio e Doxorrubicina ao DNA. Com o intuito de estudar tal comportamento, medimos a intensidade da fluorescência do complexo DNA 3000 pares de base - Brometo de etídio, usado como parâmetro de intensidade de fluorescência a várias concentrações de Doxorrubicina por par de bases do DNA. Observou-se que o aumento da concentração de Doxorrubicina implica na expressiva diminuição da intensidade de fluorescência do Brometo de Etídio já intercalado ao DNA, resultado do deslocamento do Brometo de Etídio devido à intercalação da Doxorrubicina. Outro fator relevante observado é a invariabilidade da fluorescência do complexo DNA - fármacos ao acrescentar a proteína C4K 2 às mesmas concentrações de Doxorrubicina, implicando o revestimento do complexo, pela proteína / In this work, using the technique of agarose gel electrophoresis, it was possible to study the coating of DNA-drug compound by the C4K12 polypeptide, a well as determining the competition of the intercalation of the drugs Ethidium Bromide and Doxorubicin to the DNA. In order to study such behavior, we measured the fluorescence intensity of the DNA 3000 bp - Ethidium Bromide compound, used as a parameter of fluorescence intensity at various concentrations of Doxorubicin per base pair of DNA. It was observed that the increase of this Doxorubicin concentration implies in the expressive decrease in the fluorescence intensity of the Ethidium Bromide already intercalated to the DNA, resulting from the displacement of the Ethidium Bromide due to the intercalation of Doxorubicin. Another relevant factor observed is the invariability of the fluorescence of the DNA-drug compound when adding the C4K12 protein to the same concentrations of Doxorubicin, implying the coating of the compound by the protein.

MARTINS, Maria Gleiciane De Queiroz. Bioprospecção de proteínas da esponja marinha Aaptos sp. por análise proteômica. 2015. 67 f. : Tese (doutorado) - Universidade Federal do Ceará, Centro de Ciências Agrárias, Departamento de Engenharia de Pesca, Fortaleza-CE, 2015 / Submitted by Nádja Goes (nmoraissoares@gmail.com) on 2016-07-27T14:14:45Z No. of bitstreams: 1 2015_tese_mgqmartins.pdf: 1676608 bytes, checksum: 5949b16ede3a943dff4e0208ea167426 (MD5) / Approved for entry into archive by Nádja Goes (nmoraissoares@gmail.com) on 2016-07-27T14:15:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_tese_mgqmartins.pdf: 1676608 bytes, checksum: 5949b16ede3a943dff4e0208ea167426 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-27T14:15:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_tese_mgqmartins.pdf: 1676608 bytes, checksum: 5949b16ede3a943dff4e0208ea167426 (MD5) Previous issue date: 2015 / Marine sponges are a rich reserve of natural substances, many of them of immense biotechnological interest. They comprise a promising group in providing bioactive compounds for humanity. Thus, research on new drugs from natural sources suggest that marine sponges have important bioactive compounds ponteciais: pharmacological, antimicrobial; antitumor; antiviral; anti-inflammatory; immunosuppressive; cardiovascular; neurosupressor; muscle relaxant and pollution biomarker. Analysis of expressed proteins is an important approach to determine the function of these molecules in a given organism. This study aimed to bioprospect proteins expressed by the marine sponge Aaptos sp. collected in Icarai de Amontada, Ceará, who may have biotechnological potential. For the realization of this approach were used as strategies the two-dimensional electrophoresis (2-DE) and bioinformatics. The 2-DE is a tool used to separate proteins from different organisms. Knowing the proteins expressed in the study sponge can be established Protein patterns characteristic of the species under study. Based on the above, this study used 2DE to investigate the expressed protein Aaptos sp. In order to make the extraction of total proteins was performed using 400 mg of the marine sponge Aaptos sp. For qualitative and quantitative analysis of proteins was used the method of Bradford and SDS-PAGE, respectively. From the total protein extract was determined the two-dimensional reference map for marine sponge in the study. The adjustment of images of two-dimensional gels, the protein spot detection and evaluation of data to determine apparent molecular weight (MW) and isoelectric point (pI) of the spots was made by the ImageMaster software 7. Expressed proteins were identified using the values of pI and MM spot against a UniProt protein database available on the ExPASy server. The average number of protein spots of replicas of the gels 2DE was 124. The highest abundance proteins was observed in 2DE gels in the pH range of 4 to 6.7 and with MM between 13 to 119.67 kilodalton (kDa). From the 2DE reference gel was identified 122 proteins of which 61, 46 and 15 belong to the Cnidaria taxon deuterostomia and Porifera, respectively. The proteins identified Porifera belong to functional category: ATP binding, structural component of the ribosome, catalytic activity, GTP binding, calcium ion binding and disulfide oxidoreductase activity. The functional category binding of ATP and GTP with more spots. Adicionadamente, was expressed proteins with important molecular functions already hued in the literature but not in Aaptos sp., thus indicating the importance of these marine sponges as a source of protein information that may be studied in the future for their potential use as biotechnological tools in several areas and can be used in studies to elucidate the metabolic pathways and the development of drugs against possible pathologies. / As esponjas marinhas constituem uma rica reserva de substâncias naturais, muitas delas de imenso interesse biotecnológico. Elas compreendem um grupo promissor no fornecimento de compostos bioativos para a humanidade. Desta forma, pesquisas de novas drogas de fontes naturais sugerem que as esponjas marinhas possuem importantes compostos bioativos com ponteciais: farmacológico, antimicrobiano; antitumoral; antiviral; antiinflamatório; imunossupresor; cardiovascular; neurosupressor; relaxante muscular bem como biomarcador de poluição. A análise de proteínas expressas é uma abordagem importante para determinar a função dessas moléculas em um determinado organismo. Esse trabalho teve como objetivo bioprospectar proteínas expressas pela esponja marinha Aaptos sp. coletada no Icaraí de Amontada, Ceará, que possam apresentar potencial biotecnológico. Para a realização dessa abordagem, foram utilizadas como estratégias a eletroforese bidimensional (2-DE) e a bioinformática. A 2-DE é uma ferramenta utilizada para separar proteínas de diversos organismos. Conhecendo-se as proteínas expressas na esponja estudada pode-se estabelecer padrões protéicos característicos da espécie em estudo. Com base no exposto, neste estudo foi utilizado 2DE para investigar as proteínas expressas de Aaptos sp. A fim de fazer a extração de proteínas totais foi realizada a partir de 400 mg da esponja marinha Aaptos sp. Para análise quantitativa e qualitativa das proteínas foi utilizado o método de Bradford e SDS-PAGE, respectivamente. A partir das proteínas totais extraídas foi determinado o mapa bidimensional de referência para a esponja marinha em estudo. O ajuste das imagens dos géis bidimensionais, a detecção de spots protéicos e a avaliação dos dados para determinação massa molecular aparente (MM) e ponto isoelétrico (pI) dos spots foi feito pelo programa ImageMaster 7. Proteínas expressas foram identificadas utilizando os valores de pI e MM do spot contra um banco de dados de proteínas UniProt disponível no servidor ExPASy. O número médio de spots protéicos das replicas dos géis 2DE foi de 124. A maior abundância de proteínas foi observada nos géis 2DE na faixa de pH de 4 a 6,7 e com MM entre 13 a 119,67 quilodalton (kDa). A partir do gel 2DE de referencia foi identificado 122 proteínas das quais 61, 46 e 15 pertencem aos táxon cnidária, deuterostomia e porífera, respectivamente. As proteínas identificadas de porífera pertencem a categoria funcional: ligante de ATP, componente estrutural do ribossomo, atividade catalítica, ligante de GTP, ligante de íon de cálcio e atividade dissulfeto oxidoredutase. Sendo a categoria funcional ligante de ATP e de GTP com maior número de spots. Adicionadamente, houve proteínas expressas com importantes funções moleculares já relada na literatura, porém não em Aaptos sp., assim indicando a importância destas esponjas marinhas como fonte de informação proteica que poderão ser estudadas no futuro quanto ao seu potencial uso como ferramentas biotecnológicas em diversas áreas, podendo ser empregadas em estudos que possam elucidar as vias metabólicas bem como o desenvolvimento de fármacos contra possíveis patologias.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-06-13T16:49:11Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2589446 bytes, checksum: 488587dd7434b0b05eec49788b376b0b (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-13T16:49:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2589446 bytes, checksum: 488587dd7434b0b05eec49788b376b0b (MD5) Previous issue date: 2010-02-18 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Entre os fatores abióticos que limitam a produtividade das plantas destaca-se a disponibilidade hídrica do solo. Compreender os mecanismos como plantas respondem ao estresse hídrico é crucial para prever os impactos das alterações climáticas sobre a produtividade das culturas e dos ecossistemas. O presente trabalho teve por objetivo identificar proteínas cuja alteração de sua expressão esteja associada à maior tolerância a seca em soja e que permita fornecer evidencias sobre mecanismos moleculares e fisiológicos envolvidos na resposta ao deficit hídrico em soja, caracterizando fisiologicamente os genótipos contrastantes. As plantas foram avaliadas em condições de plena irrigação (controle) e sob deficit hídrico imposto pela suspensão da irrigação até que as plantas atingissem um potencial hídrico na antemanhã (ψ am ) de -1,0 MPa (moderado) e -1,5MPa (severo). As plantas do cultivar BRS 16 (sensível à seca) alcançaram o ψ am com uma média de atraso de dois dias para ambos os níveis de deficit em relação ao cultivar Embrapa 48 (tolerante à seca). Estes resultados são consistentes com uma melhor economia hídrica no cultivar tolerante. As análises de trocas gasosas e fluorescência da clorofila a mostraram que estes cultivares exibem mecanismos diferenciais em resposta às condições de deficit hídrico. Sob estresse moderado, a fotossíntese (A) foi maior no cultivar tolerante, embora não fosse detectada diferença em condutância estomática (gs) e na razão Ci/Ca entre os cultivares. A redução proporcional da transpiração (E) sob estresse hídrico progressivo sempre foi menor no cultivar tolerante, contribuindo para que o mesmo tenha tido sempre um maior nível de eficiência do uso da água. Na ausência de estresse e sob deficit hídrico moderado, houve um paralelismo entre a redução da A e a ETR, mostrando sempre o cultivar tolerante as maiores taxas. Quando sob condições de deficit hídrico, ambos os cultivares apresentaram um aumento na fração de luz absorvida que não é dissipada termicamente e nem utilizada na fase fotoquímica do FSII (P E ). Analisando a fração de luz absorvida que é dissipada termicamente (D), o cultivar tolerante Embrapa 48 apresentou menores valores de D, quando comparados ao cultivar sensível BRS 16, tanto em condições irrigadas, quanto sob deficit. Entretanto este aparente excesso de energia não foi traduzido em dano oxidativo, sugerindo que os mecanismos antioxidativos teriam uma maior atividade frente a maior geração de espécies reativas de oxigênio no cultivar sensível. As proteínas diferencialmente expressas de folhas de soja foram analisadas através de géis bidimensionais associados a identificação por espectrometria de massas (MALDI-TOF-TOF). Os dados da análise proteômica diferencial dos cultivares contrastantes revelam que existe uma modulação na expressão de proteínas com destaque para proteínas do metabolismo, como as de síntese de aminoácidos e fotossintéticas, as quais mostraram-se mais abundantes no cultivar tolerante tanto na condição irrigada como sob deficits, sendo que sob estresse severo houve uma redução na expressão de proteínas Fe-SOD relacionadas ao estresse oxidativo, o que confirma os dados de maior atividade enzimática desta enzima no cultivar sensível, nestas condições. O estudo do proteoma diferencial no cultivar tolerante apresentou somente duas proteínas com possíveis funções na sinalização da resposta ao estresse hídrico. Uma delas é a anexina 1, expressa em maiores níveis sob estresse moderado. A outra proteína de sinalização induzida no cultivar Embrapa 48 sob estresse hídrico é uma proteína da classe do fator transcricional MYB R2R3. Este trabalho ilustra o valor do uso combinado de estudos fisiológicos associados à análise do proteoma diferencial. Melhor encadeamento de evidencias é obtido, e uma seleção mais clara de mecanismos de tolerância potenciais pode ser realizada, apesar do limitado numero de proteínas de função conhecidas identificadas como diferencialmente expressas. / Among the abiotic factors that limit plant productivity stands out the soil water availability. Understanding the mechanisms how plants respond to drought stress is crucial for predicting the impacts of climate change on crop productivity and ecosystem. This study aimed to identify proteins whose change in expression is associated with greater tolerance to drought in soybean and that can provide evidence about physiological and molecular mechanisms involved in the response to water deficit in soybean, characterizing physiologically contrasting genotypes. The plants were evaluated under full irrigation (control) and under water deficit imposed by suspending irrigation until the plants reached a water potential at predawn (ψ am ) of -1.0 MPa (moderate) and -1.5 MPa (severe ). Plants of the cultivar BRS 16 (sensitive to drought) ψ am reached with an average delay of two days for both levels of deficit in relation to cultivar Embrapa 48 (drought tolerant). These results are consistent with improved water economy in the tolerant cultivar. The analysis of gas exchange and chlorophyll fluorescence showed that these cultivars exhibit differential mechanisms in response to water deficits. Under moderate stress, photosynthesis (A) was higher in tolerant cultivar, though not detect any difference in stomatal conductance (g s ) and Ci/Ca between the cultivars. The proportional reduction in transpiration (E) under progressive water stress was always lower in the tolerant cultivar, contributing to it has always had a higher level of efficiency of water use. In the absence of stress and under moderate water deficit, there was a parallelism between the reduction of A and ETR, always showing the highest rates tolerant cultivar. When under water deficits, both cultivars showed an increase in the fraction of light absorbed that heat is not dissipated and not used in phase photochemistry of PSII (PE). Looking at the fraction of light absorbed that is dissipated thermally (D), the tolerant cultivar had lower values of D, when compared to the sensitive cultivar, both in irrigated conditions, and under deficit. However, this apparent excess energy has not been translated into oxidative damage, suggesting that the mechanisms would have a higher antioxidant activity against higher generation of reactive oxygen species in sensitive genotype. The proteins differentially expressed in soybean leaves were analyzed by two-dimensional gels associated with identification by mass spectrometry (MALDI-TOF-TOF). Data from the differential proteomic analysis of contrasting cultivars show that there is a modulation in the expression of proteins with emphasis on protein metabolism, such as amino acid synthesis and photosynthesis, which were more abundant in both the tolerant cultivar under irrigated condition as deficits, and under severe stress there was a reduction in the expression of Fe-SOD proteins related to oxidative stress, which confirms the data of higher enzyme activity of this enzyme in sensitive genotype under these conditions. The study of proteome differential tolerant cultivar showed only two proteins with potential roles in signaling in response to water stress. One is annexin 1, expressed at higher levels under moderate stress. The other signaling protein induced in Embrapa 48 under water stress protein is a class of R2R3 MYB transcription factor. This work illustrates the value of combined use of physiological studies related to analysis of proteome differential. Best chain of evidence is obtained, and a lighter selection of potential mechanisms of tolerance can be achieved despite the limited number of proteins of known function identified as differentially expressed. / Dissertação antiga

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Ciência dos Alimentos, Florianópolis, 2014. / Made available in DSpace on 2014-08-06T18:09:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 326784.pdf: 1093397 bytes, checksum: d5fe885986005e2177ba5352625f8dd2 (MD5) Previous issue date: 2014 / Este estudo propõe um método rápido e inovador para determinação simultânea de nitrato e nitrito em amostras de alimentos infantis utilizando eletroforese capilar de zona (CZE) com um procedimento simples de preparo de amostra. As condições de preparo de amostra foram otimizadas a partir de planejamento fatorial 23 com ponto central. O eletrólito de corrida foi constituído por 10 mmol L-1 de ácido perclórico e 40 mmol L-1 ß-alanina, pH 3,96, selecionados com o auxílio do software Peakmaster®. As separações foram realizadas em um capilar de sílica fundida (32 cm x 8,5 cm x 50 µm d.i.) com amostras e padrões injetados hidrodinamicamente (50 mbar/3 s) pela extremidade do capilar mais próxima do detector, com tensão de -30 kV e detecção direta em 210 nm, utilizando tiocianato como padrão interno (I. S.). O método proposto foi validado e posteriormente aplicado na análise de quatorze amostras de alimentos infantis. Uma das amostras analisadas atingiu níveis de nitrato superior ao permitido pela legislação brasileira (250 mg kg-1) e em todas, a concentração de nitrito estava abaixo do limite de detecção. O bom desempenho analítico verificado para este método indica que este pode ser considerado adequado para implementação em laboratórios de rotina e fiscalização, como alternativa ao método normalizado da AOAC.<br> / Abstract : This study proposes a fast and innovative method for simultaneous nitrate and nitrite determination in baby food samples by capillary zone electrophoresis (CZE) with a simple sample preparation procedure. The sample preparation procedure was optimized using factorial design 23 with triplicate on the central point. The background electrolyte was composed of 10 mmol L-1 perchloric acid and 40 mmol L-1 ß-alanine at pH 3.96, the conditions were chosen with Peakmaster® software. Separations were conducted in an uncoated fused-silica capillary (32 cm × 50 µm i.d.), standards and samples were introduced with hydrodynamic pressure (50 mbar/ 3 s) into the capillary using the short-end injection, separation voltage applied was -30 kV and direct UV detection set at 210 nm, thiocyanate was used as internal standard (I.S.). The proposed method was validated and applied for analysis of fourteen baby food samples. One sample had nitrate levels above that permitted by Brazilian legislation (250 mg kg-1) and in all samples the nitrite concentrations were under the limit of detection. The good analytical performance verified for this method indicates that it is suitable for implementation in food laboratories for the routine determination of nitrate and nitrite as an alternative to the AOAC official method.

Made available in DSpace on 2015-02-05T21:21:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 331103.pdf: 1619905 bytes, checksum: 083bd2d2e884edeec88e8b5cddb5e931 (MD5) Previous issue date: 2014 / A intensa busca por novos biomarcadores de doenças com intuito de melhorar o diagnóstico e acompanhar a evolução da doença tem feito os pesquisadores reavaliar compostos antes ignorados, como a citrulina. Este aminoácido não proteico que faz parte do ciclo da ureia ganhou destaque nos últimos anos como marcador da função intestinal, auxiliando na rejeição ao transplante. A citrulina quando associada com outros marcadores também tem sido utilizada para acompanhar o desenvolvimento de algumas doenças, dentre elas a sepse e falência renal. Apesar de bastante avaliada, não há uma padronização metodológica para análise desse aminoácido, havendo necessidade do desenvolvimento de metodologias que sejam simples, baratas e que possam ser implementadas em exames de rotina. O presente trabalho teve por objetivo desenvolver e validar metodologias por cromatografia líquida e alta eficiência (CLAE) e eletroforese capilar (EC), capazes de identificar e quantificar o aminoácido citrulina em plasma. Foi possível desenvolver métodos para quantificar a citrulina por CLAE e EC sem a utilização de agentes de derivatização. Ambas as metodologias atenderam os parâmetros de precisão, com coeficiente de variação inferior a 4%, e exatidão, respectivamente, de 75 e 95%. A faixa de linearidade obtida apresentou coeficientes de determinação de 0,9905 e 0,996, e limites de detecção de 4,07 e 2,25 µg.mL-1 e quantificação de 12,34 e 6,88 µg.mL-1, respectivamente, para CLAE e EC. A quantificação da citrulina por ambas as técnicas mostrou ser possível, porém, a EC apresentou resultados mais promissores.<br> / Abstract: The intense search for new biomarkers of disease with the aim of improving diagnosis and monitor disease progression has made researchers reevaluate compounds previously ignored, such as citrulline. This non-protein amino acid that is part of the urea cycle has gained prominence in recent years as a marker of intestinal function, aiding in transplant rejection. Citrulline when associated with other markers have also been used to monitor the development of some diseases such as sepsis and renal failure. Despite being fairly analyzed there is no standardization for the analysis of this amino acid, there is need to develop methodologies that are simple, cheap and can be implemented in routine analysis. This study aimed to develop and validate methodologies for HPLC and CE can identify and quantify citrulline in plasma. It was possible to develop methods for quantifying citrulline by HPLC and CE without the use of derivatizing agents. Both methodologies met the precision data with a coefficient of variation less than 4%, the accuracy found was 75 and 95%. The range of linearity obtained exhibited correlation coefficients of 0.9905 and 0.996 and detection limits 4.07 and 2.25 µg/mL and quantification of 12.34 and 6.88 mg/mL, respectively for HPLC and CE. The quantification of the citrulline showed to be possibleby both techniques, but CE was the technique that showed more promising results.