Submitted by Cristhiane Guerra (cristhiane.guerra@gmail.com) on 2017-02-03T16:05:21Z No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 6455028 bytes, checksum: ad59284d305f31e21541e47aaeb18f12 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-03T16:05:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 6455028 bytes, checksum: ad59284d305f31e21541e47aaeb18f12 (MD5) Previous issue date: 2015-02-23 / Phytochemical studies with Xylopia langsdorffiana (Annonaceae), have described isolation of trachylobane, atisane, kaurane, and labdane diterpenes, from the leaves, fruits, stems and roots of the species. Maytenus distichophylla (Celastraceae), popularly known as espinheira santa – (sacred thorn bush), is used in folk medicine to treat stomach ulcers, and data from the literature report the isolation of triterpenoids friedelane, and pyrimidine sesquiterpene alkaloids. Computer aided drug design brings optimizing techniques that facilitate the discovery of new drugs, offering features that allow the connection of compounds to known proteins in three dimensions, and the resulting models are able to predict reliable experimental values for biologically active molecules, making the search for biologically active compounds more efficient. Our work associated experimental tests and computational investigations based on plants selected from the Paraiban flora: X. langsdorffiana, M. distichophylla, and other Maytenus species. We report the experimental tests performed with roots and stems of Maytenus distichophylla that enabled extraction and structural determination of flavonoids, steroids, and friedelane and lupane triterpenoids. Parallel studies were developed using computational docking, PLS, and hydrophobicity, with 15 triterpenoids isolated from Maytenus species (including M. distichophylla), and 17 diterpenes isolated from X. langsdorffiana. Further, we determined chemical compositions (by GC-MS and NMR), and modulation activity against multi-resistant bacteria. Essential oils of three X. langsdorffiana specimens were analyzed by Principal Component Analysis (PCA). Three compounds were isolated from stems of M. distichophylla by chromatographic techniques: 3-oxo-12α-hydroxyfriedelane, 30- hydroxyfriedelan-3one and 29-hydroxyfriedelan-3-one. Another four compounds were isolated from the roots: β-sitosterol, 11α-hydroxyglochidone, rigidenol and 4’-Omethylepigallocatechin, this being the first report in the species of the latter three. In the docking study, the diterpenes ent-atisan-7α-acetoxy-16α-ol, labdorfianic C acid e labdorfianic B acid had the lowest formation energy values when respectively complexed with cruzaine, CYP2C9, and COX. The triterpenoids with the lowest formation energy values when complexed with these enzymes were, 3β-hydroxy-9,12-en-ursane (cruzaine), 3,4-secofriedelan- 3-oic acid (CYP2C9) and 3-oxo-12α-hydroxyfriedelane (COX). In predicting antitumor activity, as calculated from the constructed PLS model, the diterpene labdorfianic C acid, and triterpene 3β-hydroxyfriedelane, showed the best predicted values. The majority compounds identified in the essential oils were: ent-atisan-16α-ol, germacrene D, limonene and β-pinene. The monoterpenes, β-pinene and limonene, were identified in all analyzed essential oils in different percentages. Through analysis of the essential oil of the X. langsdorffiana stem (specimen A), NMR (¹H and ¹³C) were able to identify ent-atisan-16α-ol, the first time reported for this species. Some essential oils from specimen A when modulated with oxacillin against S. aureus, decreased concentration of the antibiotic by 99%. Principal component analysis (PCA) performed with the essential oil of three X. langsdorffiana specimens allowed identifying a similarity between the chemical species A and B, and a difference in C compared to A and/or B. This result may be related to the age or size of the specimens, since they share the same geographic coordinates. The models obtained in the CADD studies of were satisfactory and generated predictive results. / Estudos fitoquímico com Xylopia langsdorffiana (Annonaceae), descrevem o isolamento de diterpenos do tipo traquilobano, atisano, caurano e labdano, das folhas, frutos, caule e raízes da espécie. Maytenus distichophylla (Celastraceae), conhecida popularmente como espinheira santa, é utilizada na medicina popular para o tratamento de ulceras estomacais, e dados da literatura relatam o isolamento de triterpenos do tipo friedelano e alcaloides sesquiterpênicos pirimidínicos. O planejamento de fármacos auxiliado por computador, vem otimizando técnicas que facilitam na descoberta de novos fármacos, oferecendo recursos que permitem o acoplamento de compostos à proteínas tridimensionalmente conhecidas e originando modelos capazes de predizer valores experimentais confiáveis para moléculas biologicamente ativas, tornando a busca por compostos biologicamente ativos mais eficiente. Este trabalho associou ensaios experimentais e investigações computacionais baseadas nas plantas extraídas da flora Paraibana: X. langsdorffiana, M. distichophylla, e outras espécies do gênero Maytenus. Reportaremos os testes experimentais realizados com raízes e caule de Maytenus distichophylla que possibilitaram a extração e determinação estrutural de flavonoide, esteroide e, triterpenos do tipo friedelano e lupano. Paralelamente realizamos estudos computacionais de docking, PLS e hidrofobicidade, com 15 triterpenos isolados de espécies do gênero Maytenus (incluindo M. distichophylla) e, 17 diterpenos isolados de X. langsdorffiana. Além disso, determinamos a composição química (por CG-EM e RMN), e atividade moduladora frente a bactérias multirresistentes. Os óleos essenciais das 3 espécimes de X. langsdorffiana foram analisadas pela Análise de Componente Principal (PCA). Três compostos foram isolados do caule de M. distichophylla por técnicas cromatográficas: 3-oxo-12α-hidroxifriedelano, 30-hidroxifriedelan- 3ona e 29-hidroxifriedelan-3-ona. Outros quatro compostos foram isolados das raízes: β- sitosterol, 11α-hidroxigloquidona, rigidenol e 4’-O-metilepigalocatequina, sendo os três últimos relatados pela primeira vez na espécie. No estudo de docking, os diterpenos ent-atisan- 7α-acetoxi-16α-ol, ácido labdorfiânico C e ácido labdorfiânico B apresentaram os menores valores de energia de formação quando complexados com a cruzaína, CYP2C9 e COX, respectivamente. Os triterpenos que apresentaram os menores valores de energia de formação complexados com essas enzimas foram, 3β-hidroxi-9,12-en-ursano (cruzaína), ácido 3,4-secofriedelan- 3-óico (CYP2C9) e 3-oxo-12α-hidroxifriedelano (COX). Na predição da atividade antitumoral, calculada a partir do modelo PLS construído, o diterpeno ácido labdorfiânico C, e o triterpeno 3β-hidroxifriedelano, apresentaram os melhores valores preditos. Os compostos majoritários identificados nos óleos essenciais foram: ent-atisan-16α-ol, germacreno D, limoneno e β-pineno. Os monoterpenos, β-pineno e limoneno, foram identificados em todos os óleos essenciais analisados, com diferentes porcentagens. Através da análise do óleo essencial do caule (espécime A) de X. Langsdorffiana, por RMN (¹H e ¹³C) foi possível identificar o entatisan- 16α-ol, relatado pela primeira vez na espécie. Alguns óleos essenciais do espécime A, quando modulados com oxacilina frente a S. aureus, diminuíram a concentração do antibiótico em 99%. A análise de componente principal (PCA) realizada com o óleo essencial de três espécimes de X. langsdorffiana, permitiu identificar uma similaridade química entre os espécimes A e B, e uma diferença em C, quando comparados com A e/ou B. Este resultado pode estar relacionado a idade ou porte dos espécimes, já que os mesmos se encontram na mesma coordenada geográfica. Os modelos obtidos nos estudos de CADD foram satisfatórios e geraram resultados preditivos.

Submitted by Maike Costa (maiksebas@gmail.com) on 2017-09-11T13:17:28Z No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 2915806 bytes, checksum: 8e05efc416b7ae0bf16dc64a785206e4 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-11T13:17:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 2915806 bytes, checksum: 8e05efc416b7ae0bf16dc64a785206e4 (MD5) Previous issue date: 2014-12-01 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Rollinia leptopetala R. E. Fries species, popularly known as “pinha-brava”, “bananinha” and “pereiro”, and traditionally cited as digestive. From R. leptopetala leaves was extracted an essential oil (RL-OE) that showed tocolytic effect in carbachol- (CCh) and oxytocin-induced phasic contractions on rat uterus. Thus, we aimed characterize the mechanism of tocolytic action of RL-OE using by functional techniques. Since the mechanisms to induce the phasic contractions are distinct from the tonic ones, we decided to evaluate whether RL-OE would relax rat uterus pre-contracted with KCl or oxytocin. The essential oil relaxed pre-contracted with 60 mM KCl (EC50 = 22.4 ± 2.4 μg/mL) or 10-2 UI/mL oxytocin (EC50 = 4.1 ± 0.4 μg/mL). After, it was hypothesized that RL-OE would antagonize oxytocin receptors, and this hypothesis was confirmed since cumulative concentration-response curves to oxytocin were inhibited, shifted to the right, in a non-parallel manner and with Emax reduction, discarding a competitive antagonism. The participation of adrenergic receptors was also evaluated. For this, phentolamine (an antagonist of α-receptors) was used, but none change in RL-OE tocolytic potency was observed, being discarded the involvement of this receptor. Additionally, propranolol (an antagonist of β-receptors) was used and the relaxation curve induced by RL-OE, in the blocker presence, was shifted to the left, with potentiation of oil effect and rejecting the hypothesis of β-receptors activation. Other pathways that modulate the myometrium contractility are nitric oxide (NO) and Cyclooxygenase (COX) pathways. The involvement of them in tocolytic mechanism of RL-OE was investigated using L-NAME and indomethacin, inhibitors of NO and COX pathways, respectively. However, RL-OE effect was not altered in the presence of inhibitors, discarding their contribution. The participation of K+ channels was developed using non-selective and selective blockers of them. The tocolytic potency of RL-OE (EC50 = 4.1 ± 0.4 μg/mL) was reduced 2.2 fold in the presence of 5 mM CsCl (EC50 = 8.9 ± 1.1 μg/mL), a non-specific blocker K+ channels, indicating participation of these channels. To investigate which subtypes of K+ channels would be involved selective K+ channels blockers were used. In the presence of 1 mM TEA+, blocker of large conductance calcium-activated K+ channels (BKCa), apamin, blocker of small conductance calcium-activated K+ channels (SKCa) and glibenclamide, blocker of ATP-sensitive potassium channel (KATP) did not changed the tocolytic action of RL-OE, showing that BKCa, SKCa and KATP are not involved. Interestingly, the relaxation curve induced by RL-OE was shifted to the right in the presence of 4- aminopyridine, blocker of voltage-gated K+ channels (KV), with reduction of RL-OE potency (EC50 = 10 ± 0.6 μg/mL), indicating KV participation in the mechanism of tocolytic action of RL-OE on rat uterus. Therefore, the tocolytic mechanism of RL-OE involves the positive modulation the K+ channels, in special KV subtypes, that indirectly blockade of voltage-gated Ca2+ channels (CaV) leading to uterine smooth muscle relaxation. / A espécie Rollinia leptopetala R. E. Fries, conhecida popularmente como “pinha-brava”, “bananinha” e “pereiro”, é utilizada tradicionalmente como digestiva. Das folhas dessa espécie foi extraído o óleo essencial (RL-OE), que, em estudos anteriores, apresentou atividade tocolítica frente às contrações fásicas induzidas por carbacol (CCh) ou ocitocina em útero isolado de rata. Assim, o objetivo desse trabalho foi caracterizar o mecanismo de ação tocolítica do RL-OE, por meio de metodologias funcionais. Como os mecanismos para indução da contração fásica são diferentes dos que mantém a tônica, decidiu-se verificar se o RL-OE relaxaria o útero pré-contraído com KCl ou ocitocina. O óleo relaxou o útero pré-contraído com 60 mM de KCl (CE50 = 22,4 ± 2,4 μg/mL) ou com 10-2 UI/mL de ocitocina (CE50 = 4,1 ± 0,4 μg/mL), sendo mais potente para ocitocina. Em seguida, hipotetizou-se que o RL-OE estaria antagonizando os receptores de ocitocina, sendo essa hipótese confirmada, uma vez que, observou-se a inibição das curvas concentrações-resposta cumulativas à ocitocina, desviando-as para a direita, de maneira não paralela e com redução do seu Emax, descartando-se um antagonismo do tipo competitivo. A participação dos receptores adrenérgicos foi avaliada. Para isso, utilizou-se a fentolamina, um antagonista dos receptores α, entretanto não houve alteração da potência tocolítica do RL-OE, sendo descartado o antagonismo desse receptor. Também utilizou-se o propranolol, um antagonista dos receptores adrenérgicos β, constatando-se que a curva de relaxamento, na presença do bloqueador, foi desviada para a esquerda, com potencialização do RL-OE, descartando a ativação desses receptores. Outras vias que modulam a função contrátil do miométrio uterino são as vias do óxido nítrico (NO) e da ciclo-oxigenase (COX). Investigou-se a participação dessas vias no mecanismo de ação do óleo essencial utilizando L-NAME e indometacina, inibidores das vias do NO e da COX, respectivamente. Entretanto, o efeito do RL-OE não foi alterado na presença dos inibidores, descartando a participação dessas vias no seu mecanismo de ação tocolítica. Outra via investigada foi o modulação dos canais de K+. Para isso, utilizou-se bloqueadores não-seletivo e seletivos desses canais. A potência tocolítica do RL-OE (CE50 = 4,1 ± 0,4 μg/mL) foi reduzida 2,2 vezes na presença de 5 mM de CsCl (CE50 = 8,9 ± 1,1 μg/mL), bloqueador não seletivo desses canais, confirmando a participação dos canais de K+ no efeito tocolítico do RL-OE. Para verificar qual(is) canal(is) de K+ estariam envolvidos usou-se bloqueadores seletivos desses canais. O fato do TEA+ 1 mM, bloqueador dos canais de K+ de grande condutância ativados por cálcio (BKCa); da apamina, um bloqueador dos canais de K+ ativados por Ca2+ de pequena condutância (SKCa) e da glibenclamida, bloqueador dos canais de K+ sensíveis ao ATP (KATP) não alterarem o efeito tocolítico do RL-OE indica que os BKCa, SKCa e os KATP não estariam envolvidos em seu mecanismo de ação. Entretanto, a curva concentrações-resposta de relaxamento induzida pelo RL-OE foi desviada para direita na presença de 4-aminopiridina, bloqueador dos canais de K+ dependentes de voltagem (Kv), com redução da potência tocolítica do RL-OE (CE50 = 10 ± 0,6 μg/mL), sugerindo o envolvimento dos Kv no mecanismo de ação tocolítica do RL-OE em útero de rata. Conclui-se que o RL-OE exerce efeito tocolítico modulando positivamente os canais de K+, especificamente os Kv, que bloqueariam de modo indireto os canais de cálcio dependentes de voltagem (CaV), resultando no relaxamento da musculatura lisa uterina

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:37:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 275601 bytes, checksum: 8dc4b9237b3474a70a7b5c112c54fb7d (MD5) Previous issue date: 2009-02-13 / Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / The occurrence of bacterial wilt is one of the main restrictions to the tomato production in tropical areas, mainly due to the lack of effective methods of control. The research had the objective to evaluate the efficiency of the essential oil of mustard in the treatment of the soil for the suppression of the population of Ralstonia solanacearum. Initially, different selective mediums were evaluated for the detection and quantification of the bacterial population in the soil. Among the appraised mediums, only two mediums showed appropriate sensibility for the detection of the bacteria, and the South Africa Selective Medium - Elphinstone (SMSA-E) showed the highest recovery tax of the bacteria in the soil, the lowest repression index to the R. solanacearum and highest suppression index of background microorganisms. In the evaluation of the EOM gaseous effect against R. solanacearum, this was capable to inhibit it in vitro development completely. The bacterial colonies that were exposited to the EOM gaseous increased the linkage of cellular metabolites. Anaerobic and gram-positive bacterias were less sensitivity to the product than R. solanacearum. The recovery of the bacteria was not observed with the selective medium SMSA-E, after substratum fumigation for seven days with EOM in concentrations over 100µL of ITCA/L of soil. The tomato plants cultivated in the substratum submitted to this same treatment had not present symptoms of bacterial wilt after 45 days of the transplant. / A ocorrência de murcha bacteriana é um dos principais fatores limitantes ao cultivo de tomate em regiões tropicais, principalmente devido à falta de métodos efetivos de controle. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a eficiência do óleo essencial de mostarda no tratamento do solo para a supressão da população de Ralstonia solanacearum. Inicialmente, avaliaram-se diferentes meios seletivos para a detecção e monitoramento da população da bactéria no solo. Dos meios avaliados, apenas dois apresentaram sensibilidade adequada para a detecção da bactéria, sendo que, o meio South Africa Selective Medium Elphinstone (SMSA-E) possibilitou a maior taxa de recuperação da bactéria no solo, com baixo índice de repressão ao patógeno alvo e alto índice de supressão à microrganismos contaminantes. Quanto ao efeito dos vapores do EOM sobre R. solanacearum, estes foram capazes de inibir completamente o seu desenvolvimento in vitro. A exposição das colônias bacterianas aos vapores do EOM ocasionou aumento do extravasamento de metabólitos celulares. Bactérias anaeróbicas facultativas e/ou gram-positivas foram menos sensíveis ao produto que R. solanacearum. Após fumigação por sete dias do substrato com EOM em concentrações a partir de 100µL de ITCA/L de solo, não se observou a recuperação da bactéria com o meio seletivo SMSA-E. As plantas de tomate cultivadas no substrato submetido a este mesmo tratamento não apresentaram sintomas de murcha bacteriana após 45 dias do transplante.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:37:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2701343 bytes, checksum: b9c5cc5b07f66e4816776e04f12b0511 (MD5) Previous issue date: 2010-08-27 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Considering the importance of Meloidogyne enterolobii (= M. mayaguensis) to the culture of guava and the potential of Essential Oil of Mustard (EOM) on nematode control, was aimed to evaluate the efficiency of EOM on control of these nematodes in the field, on a orchard of plants uprooted and cut off at 0.3 m from soil level or in intact plants in production. An orchard of guava trees naturally infested with M. enterolobii, in Viçosa, MG, was selected. EOM was applied on soil at 100 μg/mL, by strips of cardboard in the rhizosphere of intact plants, or by irrigating the cultivation area with EOM diluted in water after the plants have been cut off or uprooted. Samples were collected over 140 days after the product application and evaluated on the number of J2 in soil and number of galls and eggs in roots of tomato plants in the bioassay. The J2 population in soil underwent rapid reduction, regardless of treatment, and was configured as an unreliable variable. By the bioassay, was obtained a reduction of 71%, 81% and 99% for number of galls and 60%, 80% and 83% for number of eggs at 45, 75 and 140 days after application, respectively, for plots treated with EOM, in uprooted or cutted plants. The terbuphos only reduced the number of galls during 45 days. The biological evaluation at 140 days revealed a general trend of population reduction, considering the number of galls and eggs. In intact plants, there was no control of nematodes, as the average variations of J2, galls and eggs did not differ significantly between treatments. In conclusion, the EOM was effective in controlling M. enterolobii at the field in the absence of the host. / Considerando a importância de Meloidogyne enterolobii (= M. mayaguensis) para a cultura da goiabeira e o potencial do óleo essencial de mostarda (OEM) no controle de nematoides, objetivou-se avaliar a eficiência do OEM no controle do nematoide no campo, em pomares de plantas arrancadas, recepadas ou em produção. Selecionou-se um pomar de goiabeiras naturalmente infestado por M. enterolobii, em Viçosa, MG. O OEM foi aplicado no solo a 100 μg/mL, por meio de tiras de papelão na rizosfera de plantas intactas ou irrigando a área de cultivo com OEM diluído em água, após as plantas serem recepadas ou arrancadas. Em amostras coletadas ao longo de 140 dias após aplicação do produto, avaliou-se o número de J2 no solo e número de galhas e ovos em raízes de tomateiros, no teste biológico. Como a população de J2 no solo sofreu rápida redução, independente do tratamento, ela foi considerada uma variável pouco confiável para a avaliação. Pelo teste biológico, obteve-se uma redução de 71%, 81% e 99% para número de galhas e 60%, 80% e 83% para número de ovos aos 45, 75 e 140 dias após a aplicação, respectivamente, para as parcelas tratadas com OEM, em plantas arrancadas ou recepadas. O terbufós reduziu apenas o número de galhas aos 45 dias, o qual voltou a aumentar posteriormente. Aos 140 dias, houve tendência generalizada de redução da população, considerando-se o número de galhas e ovos. Nas plantas intactas não houve controle do nematoide, pois as médias das variações de J2, galhas e ovos não diferiram significativamente entre os tratamentos. Em conclusão, o OEM foi eficiente em controlar M. enterolobii no campo na ausência do hospedeiro.

Submitted by Isabela Jacob Moro null (isabela.jm87@gmail.com) on 2016-07-22T18:18:24Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao de Isabela Jacob Moro_corrigida.pdf: 4133116 bytes, checksum: e046f271d663b557edcdc98a5fc6eb8f (MD5) / Rejected by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo a orientação abaixo: O arquivo submetido não contém a folha de aprovação e está sem a ficha catalográfica. A versão submetida por você é considerada a versão final da dissertação/tese, portanto não poderá ocorrer qualquer alteração em seu conteúdo após a aprovação. Corrija esta informação e realize uma nova submissão contendo o arquivo correto. Agradecemos a compreensão. on 2016-07-22T20:15:50Z (GMT) / Submitted by Isabela Jacob Moro null (isabela.jm87@gmail.com) on 2016-07-22T20:54:52Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao de Isabela Jacob Moro_corrigida.pdf: 4201818 bytes, checksum: 6037a407d0b6213632ec0c0218c59ecc (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-07-28T19:24:20Z (GMT) No. of bitstreams: 1 moro_ij_me_arafcf.pdf: 4201818 bytes, checksum: 6037a407d0b6213632ec0c0218c59ecc (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-28T19:24:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 moro_ij_me_arafcf.pdf: 4201818 bytes, checksum: 6037a407d0b6213632ec0c0218c59ecc (MD5) Previous issue date: 2016-06-23 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Produtos derivados de fontes vegetais tem demonstrado seu potencial no combate a diversas doenças, inclusive o câncer, à exemplo dos alcaloides derivados de Catharantus roseus (L.)G. Don, vincristina e vimblastina. A diversidade estrutural das moléculas encontradas em espécies vegetais concebem perspectivas de uso in natura bem como servem de inspiração para o desenvolvimento de outras entidades químicas que serão destinadas ao combate de doenças. O material de estudo pertence a espécie Baccharis trimera (Less.) DC, popularmente conhecida como carqueja e com amplo uso tradicional, principalmente para o alívio de afecções digestivas. O estudo teve por objetivo o fracionamento cromatográfico de derivados vegetais de partes aéreas de B. trimera e a avaliação da citotoxicidade e estudo de morte em linhagens de células humanas normal e tumorais tratadas com o OE, suas frações e componentes, além da flavona eupatorina isolada do extrato acetato de etila. O potencial citotóxico foi avaliado através do método da sulforrodamina B e os estudos de morte através de ensaios de Anexina-V, Hoechst/iodeto de propídeo e ativação de caspase-3. As linhagens celulares humanas utilizadas foram de câncer de mama (MCF-7), hepatocarcinoma (HepG2) e a linhagem de mama normal (MCF-10). As amostras avaliadas foram o óleo essencial, suas frações e componentes (α-humuleno, trans-cariofileno e óxido de cariofileno), além da eupatorina. Os constituintes majoritários do óleo essencial identificados por CG-EM foram: trans-cariofileno(18,9 %), biciclogermacreno (15,6 %), germacreno D (10,5 %) e δ-cadineno (6,6 %); α-humuleno (2,3 %) e óxido de cariofileno (2,9 %) também foram identificados. As frações do óleo essencial foram obtidas por cromatografia em coluna (sílica gel) e analisadas por CG-DIC e CG-EM, tendo apresentado composições químicas distintas. A flavona eupatorina (pureza em 250 nm de 96 % m/m) foi isolada a partir do extrato acetato de etila utilizando cromatografia em camada delgada preparativa (sílica gel) e identificada por técnicas espectrométricas (EM, UV, RMN de 1H e 13C). Verificou-se o maior potencial de redução de sobrevida com o OE em HepG2 (CI50= 10,40 μg/mL), α-humuleno e trans-cariofileno em MCF7 (CI50 de 7,59 e 11,52 μg/mL, respectivamente) enquanto que a eupatorina mostrou-se mais citotóxica em MCF10A com valor de CI50 pouco distante do encontrado para MCF7 (5,08 e 6,73 μg/mL, respectivamente). Grande parte das frações do OE foi citotóxica às linhagens e foram necessárias concentrações mais altas para atingir o CI50. As amostras apresentaram morte mista em todas as linhagens ocorrendo tanto apoptose quanto necrose. Não houve significância estatística no ensaio de ativação da via de apoptose por caspase-3. Constatou-se a eficiência das técnicas cromatográficas no tocante à identificação e separação de constituintes químicos, das técnicas espectrométricas para a identificação e determinação estrutural da substância eupatorina, bem como o potencial de morte celular, e até mesmo antitumoral, de amostras analisadas neste trabalho. / Natural products diversity is an important source to find potential treatments against various diseases, including cancer. Vincristine and vimblastine, alkaloids derived from Catharantus roseus (L.) L. Don, are some of the examples. The structural diversity of molecules from plant species allow the in natura usage and also the development of other chemical entities that will be used to diseases control. Baccharis trimera (Less.) DC., popularly known as carqueja, has an extensive traditional use, especially for digestive disorders. The aims of this study were the chromatographic fractionation of aerial parts from carqueja, in vitro evaluation of the cytotoxic potential through sulforhodamine B assay and cellular death by Annexin-V assay, Hoechst/propidium iodide method and caspase-3 activation, in normal and tumor cell lines treated with essential oil, its fractions and components, and the flavone eupatorin isolated from ethyl acetate extract. The cell lines used were human breast cancer (MCF-7), hepatocellular carcinoma (HepG2) and normal breast line (MCF-10a). The evaluated samples were: essential oil, its fractions and components (α-humulene, β- caryophyllene and caryophyllene oxide) and eupatorin. The major constituents of the essential oil identified by GC-MS were: β-caryophyllene (18.9%), bicyclogermacrene (15.6%), germacrene D (10.5%), δ-cadinene (6.6%). Other components of the essential oil, such as α-humulene (2.3%) and caryophyllene oxide (2.9%) were also identified. The essential oil fractions were obtained by column chromatography (silica gel) and analyzed by GC-FID and GC-MS, presenting different chemical compositions. The flavone eupatorin (96% purity in 250 nm; w/w) was isolated from ethyl acetate extract using preparative thin layer chromatography (silica gel) and identified by spectrometric methods (MS, UV, 1H and 13C NMR). The largest decrease in cell viability for HepG2 was observed with essential oil (IC50 = 10.40 μg / mL); α-humulene and trans-caryophyllene for MCF7 cells (IC50 7.59 and 11.52 μg / mL, respectively) and eupatorin for MCF10A (IC50= 5.08 μg / mL). IC50 for eupatorin in MCF7 cells was 6.73 μg / mL. Most of the essential oils fractions were cytotoxic to the cell lines and higher concentrations were required to achieve IC50. There was not a cell death standard since apoptosis and necrosis occurred as well. Statistical significance was not found in caspase-3 assay. Chromatographic techniques were efficient for compounds identification and separation, and spectrometry techniques for structural determination of eupatorin. The results from this research shown therapeutic potential against cancer for the studied samples. / FAPESP: 2014/10552-3

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The aim of this work was to characterize the chemical diversity of the essential oil from Varronia curassavica plants collected in Sergipe, to evaluate the effect of microwave extraction (MI) and hydrodistillation (HD) of essential oil from Varronia curassavica Jacq. on its chemical composition and antifungal activity and to evaluate the antiprotozoal activities of the essential oil and major compounds against Ichthyophthirius multifiliis, fish parasite. High chemical diversity was observed among the V. curassavica plants, which are distributed within the chemical groups, regardless of the collection site, probably due to genetic differences between plants studied. The compounds found in higher contents in the essential oils of the plants were tryciclene, camphene, E-caryophyllene, β-sesquiphelandrene, α-zingiberene, 7-cyclodecen-1-ona, 7-methyl-3-methylene-10-(1-propyl) and turmerone, which defined the formation of five groups according to the chemical composition and differentiation by means of cluster analysis. By cluster analysis, there was formation of five chemical groups. The essential oil of the plants from the clusters 2, 4 and 5 inhibited approximately 75% of the mycelial growth of Lasiodiplodia theobromae, after 96 hours of incubation. The essential oil from V. curassavica access VCUR-201 was extracted by HD and MI. To HD method were tested 3 extraction times (100, 120 and 140 minutes) and 3 volumes of water (1.0; 1.5 and 2.0 L). To MI method, 3 powers were tested (500, 600 and 700W), 3 times (20, 30 and 40 minutes) and 3 volumes of water (0, 25 and 50 mL). The optimal essential oil contents for the extraction methods were 700W for 40 min. without water (MI) (3.28%), and 120 min. with 1.0 L of water per flask (HD) (3.34%). The most abundant compounds for MI (700W for 40 min. without water) and HD (120 min. with 1.0 L of water/flask) were shyobunol (26.53 and 24.00%) and germacrene D-4-ol (3.60 and 10.23%). Micrographs of the surface of leaves, obtained by scanning electron microscopy (SEM), after essential oil extraction, showed that both extraction methods caused destruction of glandular trichomes. The essential oils (0.5%) obtained by MI2 (700W for 40 min. with 50 mL of water per sample) and HD1 (100 min. with 1.0 L of water per flask) resulted in 80.3% and 79.7% of inhibition of mycelial growth of C. musae, respectively. The essential oils from three V. curassavica access VCUR-001, VCUR-509 and VCUR-601, the majority compounds α-pinene, sabineno and the mixture E-caryophyllene more viridiflorol exhibited toxicity against I. multifiliis trophont and tomont phases. It was possible to confirm that the majority compounds tested are mainly responsible for the antiprotozoal activity displayed by the essential oils that contains them. Damage caused to the integrity of the membrane in trophonts and rupture of the cyst wall in tomonts seems to be the leading cause of death from protozoans incubated with essential oils of V. curassavica and isolated compounds. The essential oil of V. curassavica features potential for the control of phytopathogenic fungi and fish parasites. In the future it may be used in formulations for use in agriculture. / O objetivo deste trabalho foi caracterizar quimicamente os óleos essenciais de plantas de erva-baleeira coletadas no Estado de Sergipe, avaliar o efeito da extração do óleo essencial por micro-ondas (MI) e hidrodestilação (HD) sobre a composição química e atividade antifúngica e avaliar a atividade antiprotozoária do óleo essencial e de compostos majoritários contra o parasita de peixes Ichthyophthirius multifiliis. Alta diversidade química foi observada entre as plantas de Varronia curassavica estudadas. Os compostos encontrados em maiores teores foram tricicleno, canfeno, E-cariofileno, β-sesquifelandreno, α-zingibereno, 7-ciclodecen-1-ona, 7-metil-3-metileno-10-(1-propil) e turmerona, que definiram a formação de cinco grupos de acordo com a composição química e análise de agrupamento. O óleo essencial das plantas pertencentes aos grupos II, IV e V inibiu aproximadamente 75% do crescimento micelial de Lasiodiplodia theobromae, após 96 horas de incubação. O óleo essencial do acesso de V. curassavica VCUR-201 foi extraído por HD e MI. Para HD foram testados 3 tempos de destilação (100, 120 e 140 minutos) e 3 volumes de água (1,0; 1,5 e 2,0L). Para MI foram testados 3 potências (500, 600 e 700W), 3 tempos (20, 30 e 40 minutos) e 3 volumes de água (0, 25 e 50 mL). O óleo essencial obtido de dois tratamentos de HD (100 min., 1,0L de água e 140 min., 2,0L de água) e dois tratamentos de MI (500W, 20 min., 0 água e 700W, 40 min. e 50mL de água) foram utilizados no ensaio de atividade antifúngica contra Colletotrichum musae. Os maiores valores para teor de óleo essencial para os métodos de extração foram 700W por 40 min. sem água para MI (3,28%) e 120 min. com 1,0 L de água para HD (3,34%). Os compostos mais abundantes para MI (700W, 40 min. sem água) e HD (120 min. com 1,0 L de água/balão) foram shyobunol (26,53 e 24,00%) e germacreno D-4-ol (3,60 e 10,23%). Micrografias da superfície das folhas, obtidos por microscopia eletrônica de varredura após a extração do óleo essencial, mostraram que ambos os métodos de extração causou a destruição de tricomas glandulares. Os óleos essenciais (0,5%), obtidos por MI2 (700W durante 40 min., com 50 ml de água por amostra) e HD1 (100 min. com 1,0 L de água) resultou em 80,3% e 79,7% de inibição do crescimento micelial de C. musae, respectivamente. Os óleos essenciais de três acessos de V. curassavica: VCUR-001, VCUR-509 e VCUR-601 e os compostos majoritários α-pineno, sabineno, e a mistura E-cariofileno mais viridiflorol exibiram toxicidade contra I. multifiliis nas fases trofonte e tomonte. Foi possível confirmar também que os compostos majoritários testados são os principais responsáveis pela atividade antiparasitária exibida pelos os óleos essenciais que os contém. Danos causados à integridade da membrana nos trofontes e rompimento da parede do cisto nos tomontes parece ser a principal causa de morte dos protozoários incubados com os óleos essenciais de V. curassavica e compostos isolados. O óleo essencial de V. curassavica apresenta potencial para o controle de fungos fitopatogênicos e parasitas de peixes. Futuramente poderá ser utilizado em formulações para uso na agropecuária.

Resumo: Atualmente, Lychnophora pinaster, encontra-se classificada na categoria de plantas vulneráveis, ou seja, os "taxa" cujas populações encontram-se em risco de extinção. Suas folhas e flores são aromáticas e utilizadas na medicina popular sob a forma de extrato alcoólico, como antinflamatório, anestésico e cicatrizante. O presente estudo objetivou realizar a caracterização genética, via marcador molecular microssatélite, e a química dos óleos essenciais de populações de Lychnophora pinaster Mart, visando sua preservação, uso sustentável e estudos futuros de melhoramento genético vegetal. Para tal, foram amostradas quatro populações da espécie coletadas no Estado de Minas Gerais. O estudo da variabilidade populacional realizou-se pela análise de polimorfismo do DNA com marcadores microssatélite e a química, por meio da análise da composição química dos óleos essenciais das folhas das populações nativas e cultivadas. Os óleos essenciais foram extraídos por hidrodestilação e analisados em cromatógrafo a gás acoplado a espectrômetro de massas (Shimadzu, QP-5000). Pelo agrupamento UPGMA, as populações nativas foram divididas em dois grupos, sendo um composto por Estrada Real, Estrada Real 1 e Antena, e o outro representado por Poço Bonito. Pela análise de componentes principais, quimicamente as populações foram, também, divididas em dois grupos, um composto por Estrada Real, Estrada Real 1 e Poço Bonito, tendo como principal constituinte do óleo essencial o trans-cinamato de metila, e, o outro, representado pela população Antena, tendo como o outro principal constituinte o cedr-8-(15)-en-9-alfa-ol. As populações quando cultivadas não tiveram diferenças no perfil químico, tendo como constituinte majoritário o trans-cinamato de metila ...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Currently, Lychnophora pinaster is considered an endangered species, that is, it belongs to the taxa whose native populations are risking extinction. Its leaves and flowers are aromatic and used in popular medicine in the form of alcohol extracts as anti-inflammatory, anesthetic and curative agent in wounds. Therefore, the present study aimed to characterize the genetic diversity, using microsatellite molecular markers, and the chemical composition of the essential oil from Lychnophora pinaster Mart populations, so that it can be preserved, sustainably used and be incorporated into further studies of genetic breeding. In order to do so, four native populations of the species were sampled from the state of Minas Gerais. Population variability studies were performed by DNA polymorphism analyses using microsatellite molecular markers and the chemical characterization was performed by analyzing the composition of the essential oil from leaves obtained from native and cultivated populations. Essential oils were extracted by hydro-distillation and analyzed by gas-chromatography mass spectrometry (Shimadzu, QP- 5000). The native populations formed two clusters by UPGMA grouping; one of them consisting of the populations from Estrada Real, Estrada Real 1 and Antena, and the other one consisting of the population from Poço Bonito. Chemically, the populations were also clustered in two groups according to the major compounds analyses; the first one comprising Estrada Real, Estrada Real 1 and Poço Bonito, that had methyl trans-cinnamate as major compound and the second one, represented by Antena population that had cedr-8- (15)-en-9-alpha-ol as major component...(Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Márcia Ortiz Mayo Marques / Coorientador: Edivaldo Domingues Velini / Banca: Maria Imaculada Zucchi / Banca: João Domingos Rodrigues / Banca: Maria das Graças Cardoso / Banca: Marcos Aparecido Gimenes / Banca: Luís Vitor Silva do Sacramento / Doutor

Resumo: O presente trabalho teve por objetivo geral o estudo de populações de Ocimum selloi Benth. sob o ponto de vista da biologia reprodutiva, da variabilidade genética e química dos óleos essenciais, visando fornecer informações para seu uso inequívoco como planta medicinal e aromática em estudos futuros de melhoramento genético vegetal, cultivo e preservação da espécie. O material vegetal utilizado foi coletado na região de Piquete e Apiaí, estado de São Paulo, em Colombo, estado do Paraná e em Camanducaia, estado de Minas Gerais. O estudo da variabilidade populacional foi realizado pela análise de polimorfismo do DNA do tipo RAPD e a química por meio da análise da composição química dos óleos essenciais das folhas das populações naturais e cultivadas por cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massas. Os resultados revelaram uma forte estrutura genética entre as populações avaliadas, que também pôde ser verificada pelas diferenças observadas nos perfis químicos das plantas. O estudo da biologia reprodutiva revelou a existência predominante de autopolinização explicando o fato das análises da variabilidade genética das quatro populações (Apiaí/SP; Piquete/SP; Colombo/SP e Camanducaia/MG), demonstrarem que a diversidade está localizada entre as populações (variabilidade interpopulacional). A composição química dos óleos essenciais revelou divergências na proporção relativa das substâncias mais abundantes, onde para a população nativa de Piquete/SP, a substância mais abundante foi o germacreno D (26,22%), enquanto que plantas da mesma região cultivadas em Campinas/SP apresentaram elemicina (38,70%, 35,46% e 26,22%) na 1ª, 3ª e 4ª colheita, respectivamente, e transbergamoteno (21,13%) na 2ª colheita como principal composto. Para a população nativa de Apiaí/SP e para as plantas cultivadas em Campinas/SP ...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The general goal of the present study was to investigate Ocimum selloi Benth. populations from the standpoints of reproductive biology, genetic and essential oil chemical variability; in order to provide information for its safe use as medicinal and aromatic plant, for future breeding studies, the species cultivation and its preservation. Plant material was collected from the regions of Piquete and Apiaí, in the state of São Paulo; Colombo, state of Paraná and Camanducaia, state of Minas Gerais. The population variabiliy was studied by DNA polymorphism analysis using RAPD markers and the chemical diversity was investigated through composition analyses of the essential oils from leaves of natural and theis corresponding cultivated populations, using gas chromatography-mass spectrometry. The results revealed a strong genetic structure among the populations, so that it agrees with the differences in the chemical profile of the plants. Reproductive biology studies revealed the predominance of self-pollination, in accordance to the genetic variation data from the four populations (Apiaí/SP; Piquete/SP; Colombo/SP e Camanducaia/MG); therefore demonstrating that the diversity is among the populations (interpopulation variability). The chemical composition of the essential oils was divergent in the relative proportion of the major compounds; the native population in Piquete/SP exhibited germacrene D (26.22%) as the most abundant component, whereas its corresponding individuals grown in Campinas/SP presented elemicine (38.70%, 35.46% and 26.22%) at the 1st, 3rd and 4th harvesting season and trans- - bergamotene (21.13%) at the 2nd harvesting season as main compounds. The native population from Apiaí/SP and its corresponding cultivated plants in Campinas/SP presented elemicine (22.68%, 28.70% and 32.90%, respectively) as the ...(Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Márcia Ortiz Mayo Marques / Coorientador: Carlos Augusto Colombo / Banca: Carmen Silvia Fernandes Boaro / Banca: Vera Maria Quecini / Banca: Maria Imaculada Zucchi / Banca: Maria das Graças Cardoso / Doutor

Orientador: Norberto da Silva / Banca: Lin Chau Ming / Banca: Eduardo Pagani / Banca: Joaquim Adelino de Azevedo Filho / Banca: Walter José Siqueira / Resumo: Este trabalho avaliou agronômica e quimicamente 37 progênies de meios irmãos de Cordia verbenacea DC., espécie nativa de importância medicinal por causa de sua ação antiinflamatória. O objetivo desta pesquisa foi o de identificar progênies e indivíduos de C. verbenacea com boas características agrícolas e químicas, iniciando assim o processo de domesticação da espécie, visando promover seu cultivo, de modo a oferecer uma nova opção agrícola aos produtores rurais, contribuindo para a preservação da espécie e para utilização dos seus benefícios terapêuticos. Através de um ensaio agrícola em blocos casualizados, com 4 repetições, foram avaliadas o comportamento de progênies de meios irmãos em três colheitas. As características analisadas foram: a produção de biomassa verde, de folhas secas, o índice de colheita, a produção de óleo essencial e a produção de alfa humuleno. A partir dos dados obtidos foi estimada a variabilidade disponível para o melhoramento, a herdabilidade das características analisadas, o progresso esperado com a seleção, a eficiência do método de seleção empregado e as correlações genéticas, ambientais e fenotípicas entre as características analisadas. Concluiu-se que as progênies possuíam ampla variação genética e que esta variação poderia ser explorada para fins de melhoramento. As herdabilidades calculadas para massa de folhas secas, porcentagem de óleo essencial e massa de óleo essencial foram de 0,52, 0,69 e 0,78 respectivamente, considerando-se as três colheitas. Calculando-se os ganhos por seleção, concluiu-se que podem ser esperados ganhos expressivos selecionando-se as melhores plantas dentro das melhores progênies. O método de seleção entre e dentro de progênies de meios irmãos empregado neste trabalho mostrou-se significantemente mais eficiente que os métodos de seleção entre progênies... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This dissertation evaluated agronomically and chemically 37 progenies of half-sib families of Cordia verbenacea DC., a native medicinal species important for its anti-inflammatory action. The objective of this research was to identify C. verbenacea individuals with good agricultural and chemical characteristics to start a domestication process, aiming at promoting cultivation and offering a new agricultural option to rural producers, thus contributing to preserve the species and to the use of its therapeutic properties. An agricultural experimental design of randomized blocks with four repetitions evaluated the behavior of half-sib families in three harvests. The characteristics analyzed were: fresh biomass and dry leaves production, harvest index, essential oil production, and alpha humulene production. The available variability for breeding, the heritability of the analyzed characteristics, the progress expected from selection, the efficiency of the chosen selection method, and the genetic, environmental, and phenotypic correlations between the characteristics analyzed were estimated from the collected data. It was concluded that the progenies had a broad genetic variability that could be explored for breeding. The heritabilities calculated for dried leaf biomass, essential oil percentage, mass of essential oil were, respectively, 52%, 0,69% and 0,78%, considering the three harvests. On estimating the gain from selection, the conclusion was that significant gain can be expected from the selection of the best plants between and within the best progenies. The selection method between and within half-sib families employed in this research proved to be considerably more efficient than methods such as selection between progenies, and mass and stratified mass selection. The correlations study shows that oil and alpha humulene production is closely related to biomass production, demonstrating... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Resumo: A produção orgânica é um sistema que permite alcançar bons níveis de produtividade, evitando ao mesmo tempo os riscos de contaminação química do agricultor, dos consumidores e do meio ambiente. Pelo fato da planta de jambu ser bastante utilizada como medicamento alternativo e por indústrias de cosméticos, vem aumentando o interesse devido às suas características físico-químicas. No entanto, as pesquisas sobre essa cultura ainda são muito incipientes. Existem poucos trabalhos e uma insuficiente diversidade de análises físico-químicas que possam caracterizar e diferenciar os tipos de cultivo em relação ao jambu. Assim, o objetivo do presente estudo foi analisar o óleo essencial e os compostos antioxidantes em diferentes partes de jambu (folha e inflorescência) cultivado sob adubação orgânica e mineral, além de caracterizar os minerais no solo e nas plantas, nos diferentes tipos de cultivo. O experimento foi conduzido na Fazenda Experimental São Manuel (São Manuel-SP), pertencente à Faculdade de Ciências Agronômicas - UNESP, campus de Botucatu) e na mesma época. O delineamento estatístico foi em blocos casualizados em esquema fatorial (2 x 6), duas fontes de adubação (orgânica e mineral) e seis doses de esterco de curral e uréia, com quatro repetições para todas as análises efetuadas, exceto para as características de potencial antioxidante e espilantol, que foram utilizadas três repetições. Os experimentos realizados apresentaram como tratamentos seis doses de adubação mineral (0, 30, 60, 90, 120, 150 g m-2 de uréia), aplicadas parceladas em duas vezes e seis doses de adubação orgânica (0, 2, 4, 6, 8 e 10 kg m-de esterco de curral), aplicadas no plantio. As características avaliadas foram teores de nutrientes na parte aérea, altura de plantas, massa fresca e seca, composição química do óleo essencial, teor de acido ascórbico; potencial... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The organic production it is a system that will achieve good levels of productivity, while avoiding the risk of chemical contamination of farmers, consumers and the environment. Because the plant jambu be widely used as alternative medicine and cosmetic industries, has been increasing interest due to their physical and chemical characteristics. However, the researches on this crop are still very incipient. There is little work and an insufficient variety of physical and chemical analysis that can characterize and differentiate the types of cultivation on the jambu.The purpose of this study was to analyze the essential oil and the antioxidant compounds in different parts of jambu (leaf and inflorescence) grown under organic and mineral fertilizer, and characterize the minerals in soil and plants in different types of cultivation. The experiment was conducted led in (Experimental Farm São Manuel (São Manuel-SP), belonging to the Faculty of Agricultural Sciences - UNESP, campus of Botucatu) and at the same time. The statistical design was factorial (2 x 6), two sources of fertilizer (organic and mineral) and six doses of the kraal manure and urea, with four replications for all analysis performed, except for the characteristics of potential antioxidant and spilantol, which were used three repetitions. The experiments presented treatments as six doses of conventional fertilization (0, 30, 60, 90, 120, 150 g m-2, urea), applied in two split doses of fertilizer and six non-conventional (0, 2, 4, 6, 8 and 10 kg m-2 of the kraal manure), applied at planting. The characteristics were nutrient content in shoot, plant height, fresh and dry weight, chemical composition of essential oil, ascorbic acid content, antioxidant potential, and presence of pesticides. The results show that the compounds were present in this study were trans-caryophyllene, germacrene D, L-dodecene and espatulenol and... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Giuseppina Pace Pereira Lima / Coorientador: Rumy Goto / Banca: Márcia Ortiz Mayo Marques / Banca: Atila Francisco Mogor / Mestre