A fração plasmática da lipoproteína de baixa densidade (LDL) é formada por partículas de diferentes tamanhos, carga e densidade. Baseada na diferença de carga das partículas, a LDL pode ser subfracionada em LDL nativa (nLDL) e LDL eletronegativa (LDL‾). A LDL‾ está presente no plasma e possui propriedades aterogênicas e pró-inflamatórias, assim como, possui menor concentração de antioxidantes lipossolúveis, maior concentração de dienos conjugados, alterações conformacionais da apoliproteína B-100 e menor afinidade para o receptor da LDL em comparação com a nLDL. Concentrações elevadas de LDL‾ têm sido observadas em pacientes com alto risco para o desenvolvimento de doenças cardiovasculares, incluindo hipercolesterolemia familiar, diabetes. Considerando-se que os mecanismos envolvidos na formação endógena da LDL‾ ainda não estão elucidados, neste estudo foi investigado o efeito da glicoxidação e da lipólise sobre a partícula LDL para avaliar a contribuição destes processos para a formação da LDL‾ in vitro e in vivo. As modificações químicas da LDL e da imunorreatividade com anticorpo monoclonal anti-LDL‾ foi analisada antes e depois da incubação do plasma com lipoproteína lipase (LPL) ou fosfolipase A2 (PLA2), assim como mimetizando-se a lipólise intravascular. Além disso, na lipólise in vivo foi monitorado no periodo pós-prandial em indivíduos normolipidêmicos para investigar a LDL‾ formada endogenamente. A contribuição da glicoxidação para a geração de LDL‾ foi avaliada in vitro pela incubação da LDL com glicose. O efeito da glicoxidação endógena foi monitorada pela medida, ex-vivo, dos os produtos de glicação avançada (AGEs) e LDL‾ no plasma de pacientes diabéticos tipo I (DM I), tipo II (DM II) e indivíduos intolerantes à glicose (IGT). O processo de glicação não enzimática, in vitro, resultou no aumento da concentração de LDL‾. Os indivíduos dos grupos DM I, DM II e IGT apresentaram concentrações plasmáticas elevadas de LDL‾ em relação aos seus respectivos controles, enquanto observou-se aumento de AGEs apenas nos grupos DM I e DM II. O processo de lipólise in vitro mediado pela LPL e PLA2, induziu aumento significante da concentração de LDL‾; entretanto, somente pela ação da LPL foi associada com modificações oxidativas. Em concordância, o processo de lipólise in vivo (pós-prandial) também promoveu aumento significativo da concentração de LDL‾ associado com modificações oxidativas. Conclusão, nossos dados mostram que, glicoxidação e de lipólise, poderiam contribuir na formação da LDL‾ in vivo. / The low density lipoprotein (LDL) fraction in blood plasma is formed by particles with different size, charge and density. Based on particle charge differences, LDL fraction may be separated into native (nLDL) and electronegative (LDL‾) subfractions. LDL‾ is present in blood plasma and has atherogenic and proinflammatory properties, as well as, lower concentrations of lipid soluble antioxidants, higher content of conjugated dienes, conformational alterations of apolipoprotein B-100 and lower affinity by LDL receptor in comparison to nLDL. Increased LDL‾ concentrations have been found in subjects with high risk for cardiovascular diseases, including those with familiar hypercholesterolemia, diabetes and hyperlipidemia. Considering that the mechanisms involved in the endogenous generation of LDL‾ are not yet well elucidated, in this study the effect of glucoxidation and lipolysis of LDL particles was investigated in order to evaluate their contribution to in vitro e in vivo LDL‾ formation. LDL chemical modifications and its reactivity towards a monoclonal anti-LDL‾ antibody were analyzed before and after incubation of either plasma or LDL with lipoprotein lipase (LPL) or phospholipase A2 (PLA2) as an in vitro lipolysis biomimetic system. Moreover, in vivo lipolysis was monitored at the post-prandial period in normolipidemic subjects to investigate LDL‾ endogenously formed. The contribution of glucoxidation to LDL‾ generation was evaluated in vitro by incubating LDL with glucose. The effect of endogenous glucoxidation was monitored by ex-vivo measurement of advanced glycation end products (AGES) and LDL‾ in blood plasma of type I (DM I) and II (DM II) diabetic patients, as well as, in subjects with glucose intolerance (IGT). The in vitro non-enzymatic glycation resulted in increased LDL‾ formation. The DM I, DM II and IGT groups showed higher LDL‾ concentrations than the respective control groups, while AGEs were increased only in DM I e DM II groups. The in vitro lipolysis mediated by LPL and PLA2 induced a significant increase of LDL‾; however, only LPL action was also associated to LDL oxidative modification. In accordance, in vivo lipolysis (post-prandial) also promoted a significant increase of LDL‾ levels associated to LDL oxidative modification. In conclusion, our data show that both, glycoxidation and lipolysis, could contribute to in vivo LDL‾generation.

Os dentifrícios de baixa concentração de fluoreto têm sido sugeridos como alternativa para reduzir o risco de fluorose dentária, embora não haja consenso quanto a sua eficácia clínica, a qual pode ser aumentada quando o pH é ácido. Este estudo clínico randomizado teve como objetivo avaliar o efeito anti-cárie do pH e da concentração de fluoreto presente em dentifrícios líquidos, em crianças com diferentes status de atividade cariosa. Crianças de 2-4 anos de idade residentes em uma área fluoretada (0,6-0,8 ppm F), com (A) e sem (I) lesões de cárie ativa foram distribuídas aleatoriamente em três grupos de acordo com o tipo de dentifrício utilizado: Grupo 1 (n=48-A/56-I): 550 ppm F pH 4,5, Grupo 2 (n=56-A/48-I) 1100 ppm F pH 7,0, Grupo 3 (n=52-A/55-I): 550 ppm F pH 7,0. O número de lesões tornando-se ativas/cavidades ou inativas, respectivamente, foi avaliado clinicamente após 12 meses, podendo-se determinar se as lesões progrediram ou regrediram. Além disso, as lesões de mancha branca foram avaliadas através da técnica de quantificação de fluorescência induzida por luz (Quantitative Light-Induced Fluorescence - QLF) em uma subamostra de 75 crianças. A concentração de fluoreto nas unhas dos pés e no biofilme dentário também foi avaliada após 6 meses de uso dos dentifrícios. A progressão de cárie seguiu um padrão decrescente de acordo com o dentifrício utilizado (G3>G2>G1), independentemente da atividade de cárie da criança, mas diferenças significativas foram detectadas apenas para a progressão e o incremento de cárie (G1 < G3) no grupo de crianças cárie-ativas, quando avaliadas por inspeção visual. Para a regressão de cárie, os valores encontrados para os 3 grupos foram mais parecidos entre si, não havendo diferenças significativas entre osgrupos. Por outro lado, a análise com o QLF não detectou diferença significativa entre os Grupos 1 e 2, mas eles tiveram um desempenho significativamente melhor que o Grupo 3. Concentrações de fluoreto nas unhas significativamente mais baixas foram observadas quando as crianças usaram os dentifrícios fluoretados de baixa concentração de F, independente do pH. A concentração de F no biofilme foi significativamente maior para o grupo 2 quando comparado ao grupo 3 independente do tempo de coleta, enquanto o grupo 1 não diferiu significativamente do grupo 2, mas foi significativamente maior que o grupo 3, 60 minutos após a coleta. Os resultados reforçam os dados anteriores que mostraram um bom potencial do dentifrício líquido ácido de baixa concentração de F para prevenir lesões cariosas e ao mesmo tempo reduzir a ingestão de fluoreto. Assim, este dentifrício parece ser uma boa opção para as crianças na idade de risco para fluorose dentária, residentes em uma região fluoretada, independente da atividade de cárie. / Low-F dentifrices have been suggested as an alternative to reduce the risk of dental fluorosis, although there is no consensus on their clinical efficacy, which may be increased when the pH is acidic.The present randomized clinical trial evaluated the anticaries effect of low-F acidic liquid dentifrice in children at different caries activity status. Two-to-four-year-old schoolchildren living in a fluoridated area (0.6 0.8 ppm F), with (A) or without (I) active caries lesions were randomly allocated into 3 groups differing according to the type of dentifrice used over 12 months: Group 1 (n=48-A/56-I): 550 ppm F pH 4.5, Group 2 (n=56-A/48-I) 1100 ppm F pH 7.0, Group 3 (n=52-A/55-I): 550 ppm F pH 7.0. The number of lesions becoming active/cavities or inactive was clinically evaluated determining progression or regression. Additionally, the white spot lesions were evaluated by the quantitative light-induced fluorescence (QLF) method in a subsample of 75 children. Toenail and plaque fluoride concentration were also evaluated 6 months after the use of the dentifrices. Plaque samples were collected 5 and 60 minutes after the last use of the dentifrices. Caries net increment followed a decreasing pattern according to the dentifrice used (G3>G2>G1) regardless caries activity, but significant differences were detected only for caries progression and net increment (G1 < G3) for the cariesactive group when evaluated through visual inspection. For the regression, the values found for the three groups were more similar, without significant differences. QLF analysis detected no significant difference between Groups 1 and 2, but they performed significantly better than Group 3. Toenail fluoride concentration significantly lower was observed when children used the low-fluoride dentifrices. Plaque F concentration was significantly higher for Group 2 compared to group 3, egardless the time, while Group 1 did not significantly differ Group 2, but was significantly higher when compared to Group 3, 60 minutes after plaque collection. The results reinforce previous data that showed a good potential of the low-fluoride acidic LD to prevent caries and reduce fluoride intake. Thus, it seems to be a good option for children at the age of risk for dental fluorosis, living in a fluoridated area, regardless the risk for dental caries.

A literatura registra que a distribuição do zinco no organismo é diferente entre indivíduos obesos e indivíduos eutróficos. Com o objetivo de avaliar se a orientação nutricional para diminuição de peso teria influência nessa distribuição, foi estudado um grupo de 15 adolescentes do sexo feminino entre 14 a 18 anos, apresentando Percentil de índice de Massa Corpórea (PIMC) >85, atendidas no Centro de Atendimento e Apoio ao Adolescente (CAAA) da Universidade Federal de São Paulo/Escola Paulista de Medicina. A orientação dietética foi realizada com ênfase em uma dieta normocalórica utilizando a pirâmide dos alimentos. Os itens do consumo alimentar que resultaram em diferença significativa em p<0.05 foram: proteínas, frutas, carnes e ovos e leite e derivados. Os parâmetros bioquímicos analisados para avaliar o estado nutricional relativo ao zinco foram: plasma, eritrócitos, sedimento salivar e urina de 24 horas. Como suporte para esses dados foram avaliadas também a insulina sérica, superóxido-dismutase intraeritrocitária (SOD) e a creatinina urinária. As variáveis bioquímicas que apresentaram significância de p<0.05 foram o zinco e a SOD intraeritrocitarios, assim como estas também tiveram correlação com p<0.05. Os resultados indicam que a mudança no padrão alimentar durante 4 meses foi efetiva para aumentar significantemente o zinco intraeritrocitário. / There are significant differences on the zinc distribution between obese and non-obese individuals. A fifteen female adolescents group, with a PIMC >85th, has been studied in order to evaluate the influence on the zinc distribution of a nutritional orientation for weight loss. Normochaloric diet based on the food pyramid was introduced. The items that presented more significant difference on p<0,05 were proteins, fruits, meat and eggs, and milk and milk products. Zinc biochemical parameters assessment were plasma, erythrocytes, salivary sediment and 24 hours urine, SOD and urinary creatinine. Results show that changes on alimentary pattern during 4 months is significantly effective for increasing intraerythrocytic zinc.

Os antiinflamatórios não-esteróides (AINEs) estão entre os fármacos mais prescritos e utilizados do mundo. Estes fármacos inibem as ciclooxigenases, enzimas responsáveis pela transformação do ácido araquidônico em prostaglandinas flogísticas, pela ação da fosfolipase A2. A síntese de compostos antiinflamatórios contendo núcleo pirrólico em suas estruturas vem sendo um tópico muito atrativo e bastante estudado, que somado ao conhecimento do sítio de interação do fármaco ao receptor possibilita o planejamento de estruturas de novas substâncias candidatas a protótipos de novos fármacos, por meio da modificação molecular. Nesse contexto, o presente trabalho teve como objetivo o planejamento, síntese e avaliação biológica de derivados pirrólicos com potencial atividade antiinflamatória, com base nas estruturas da indometacina, protótipo da classe dos derivados de ácido arilalcanóico e dos diarilheterociclos (COXIBES). Sendo assim, foram obtidos cinco compostos em rendimentos satisfatórios, a partir de acetoacetato de etila, via metodologia de Hantzsch e ciclofuncionalização, utilizando ultrassom, que resultou na redução do tempo de reação e do consumo de solvente, seguindo os princípios da Química Verde. Os compostos 5a e 5b mostraram-se promissores, a partir de ensaios \"in vitro\". / The nonsteroidal antiinflammatory drugs (NSAIDs) are among the most prescribed and used drugs in the world. These drugs inhibit the cyclooxygenases, enzymes responsible for conversion of arachidonic acid into phlogistic prostaglandins, by the action of phospholipase A2. The synthesis of compounds containing pyrrole nucleus in their structures has been a topic very attractive and well studied, that knowledge added to the site of interaction of the drug to the receptor enables the planning of new structures of substances candidates for prototypes of new drugs through of molecular modification. In this context, this work aimed at the design, synthesis and biological evaluation of pyrrole derivatives with potential antiinflammatory activity, based on the structures of indomethacin, the prototype of arylalkanoic acid class and diarylheterocycles (coxibs). Thus, five compounds were obtained in good yields from ethyl acetoacetate, route of Hantzsch and cyclofunctionalization methods, using ultrasound, which resulted in the reduction of the reaction time and consumption of solvent, following the principles of Green Chemistry. The 5a and 5b compounds were shown to be promising, from tests in vitro.

O presente estudo teve por objetivo avaliar o efeito de um biomaterial vitrocerâmico (Biosilicato®) no desempenho clínico de restaurações posteriores em resina composta. 92 cavidades Classe I e Classe II com lesão de cárie (no terço meio da dentina) foram selecionadas e distribuídas aleatoriamente em quatro grupos segundo o protocolo adesivo: 1- Biosilicato / sistema adesivo convencional de dois passos, 2- Controle / sistema adesivo convencional de dois passos, 3- Biosilicato / sistema adesivo autocondicionante de dois passos e 4- Controle / sistema adesivo autocondicionante de dois passos. Dois operadores realizaram os protocolos adesivos e restauraram as cavidades com uma resina composta nanohíbrida (IPS Empress, Ivoclar) usando a técnica incremental. Os participantes foram remarcados após uma semana, 6, 12 e 18 meses para avaliação clínica realizada por dois examinadores, cegados e calibrados de acordo com os critérios FDI. Os dados foram analisados com o teste não paramétrico de Kruskal-Wallis e o teste de Dunn de comparação múltipla, com nível de significância de 5%. Os resultados revelaram que não houve diferença estatisticamente significante (p > 0.05) entre os grupos experimentais e os respectivos controles em nenhuma avaliação, entretanto, houve diferença estatisticamente significativa (p < 0.05) entre os grupos controles (2 x 4) para o critério forma anatômica (1 semana) e adaptação marginal (18 meses). O grupo 2 foi estatisticamente diferente do grupo 3 (p < 0.05), para o critério fratura do material/retenção (18 meses) e adaptação marginal (1 semana), onde o grupo 2 apresentou melhor desempenho. O uso do Biosilicato no protocolo restaurador de dentina afetada por cárie não alterou o desempenho clinico de restaurações em resina composta no período de 18 meses de acompanhamento. A associação entre o sistema adesivo autocondicionante de dois passos e o Biosilicato gerou desempenho clínico inferior, comparado ao sistema adesivo convencional (controle), em termos de adaptação marginal e fratura do material/retenção. / The aim of this study was to evaluate the effect of a bioactive glass-ceramic (Biosilicate®) on clinical performance of posterior resin composite restorations. A total of 92 restorations in Class I and Class II cavities with carious lesion (medium third of dentin) were selected and assigned randomly into four groups according to the adhesive protocol used: 1- Biosilicate / Two-step etch and rinse system, 2- Control / Two-step etch and rinse system, 3- Biosilicate / Two-step self-etching system and 4- Control / Two-step self-etching system). Two operators carried out the adhesive protocols and restored the cavities with a nano-hybrid resin composite (IPS Empress, Ivoclar) using the incremental technique. Participants were recalled at one week, 6, 12 and 18 months for clinical evaluation performed by two blinded examiners and calibrated according to FDI criteria. Data were analyzed using Krusall-Wallis non-parametric test and multiple comparison Dunn test with a significance level of 5%. Results showed no statistical difference (p > 0.05) between the experimental groups and their respective controls; however, there were statistical difference between control groups (2 x 4) (p < 0.05) for anatomical form (1 week) and marginal adaptation (18 months). Group 2 was statistically different from Group 3 (p < 0.05), for fracture of material/retention (18 months) and marginal adaptation category (1 week), where Group 2 showed the better performance. The use of Biosilicate, in a restorative protocol for caries-affected dentin, did not alter the clinical performance of posterior resin composite restorations. The association between Biosilicate and two-step self-etching adhesive system showed an inferior clinical performance, compared to the conventional adhesive system (control), in terms of marginal adaptation and fracture of material/retention.

A proteína de fase aguda, amilóide sérica A (SAA), exerce função importante na resposta inflamatória, estimulando a expressão e a liberação de TNF-&#945;, IL-8 e IL-1&#946; em neutrófilos e células mononucleares (1, 2, 3, 4). Visando obter mais informação sobre o processo, estudamos as vias de sinalização envolvidas na liberação dessas citocinas, após as células serem estimulas com SAA. Para tal, avaliamos o efeito de alguns inibidores da cascata de sinalização e evidenciamos indiretamente a participação das proteínas quinases ativadas por mitógenos (MAPK) e da fosfatidil inositol 3 quinase (PI3K) (2, 3). Com a utilização de inibidores específicos, observamos que há inibição da liberação de IL-8 quando utilizamos um antagonista da proteína Gi e observamos também a participação do fator de transcrição, NF-KB na liberação de IL-8 e TNF-&#945; promovida por SAA. Utilizando pacientes deficientes no sistema NADPH oxidase, ou seja, portadores da doença granulomatosa crônica (DGC) mostramos que não havia a participação desse sistema na síntese e liberação dessas citocinas, visto que observamos hiper-sensibilidade nos neutrófilos desses pacientes, com uma maior produção de TNF-&#945; e de IL-8, tanto em células estimuladas e não estimuladas (5). As concentrações séricas de SAA e IL-8 nos pacientes estudados apresentaram-se também aumentados em relação ao grupo controle. Adicionalmente SAA apresenta outro efeito pró-inflamatório, demonstramos que ela é capaz de tornar neutrófilos mais responsivos a estímulo opsonizado (6). Este conjunto de dados nos levou a acreditar na possibilidade da SAA exercer uma função importante na progressão de doenças crônicas, que se caracterizam pelo aumento permanente da SAA sérica. Neste sentido estudamos o efeito da SAA no diabetes mellitus tipo 2 e mostramos que neutrófilos e células mononucleares desses pacientes quando estimuladas por SAA têm um aumento na liberação de IL-8 e IL-1&#946; e um aumento na quimiotaxia quando comparadas com células do grupo controle. Desta forma acreditamos que SAA contribua na manutenção do estado inflamatório crõnico no diabetes e no aparecimento de complicações vasculares. / We previously described that the acute phase protein serum amyloid A (SAA) is a potent stimulus for the expression and release of TNF-&#945;, IL-8 and IL-1&#946;(1, 2, 3, 4). The signaling involved in this process was here studied through the effect of signaling inhibitors. The participation of MAPK, PI-3K pathways, Gi protein coupled receptors and the NF-kB on the signaling cascade was indirect evidenced (2, 3). The NADPH oxidase system seems to be not required in the release of cytokines promoted by SAA because neutrophils from patients with Chronic Granulomatous Disease (CGD - NADPH system deficiency) also responded to SAA. Indeed neutrophils from CGD patients release larger amounts of IL-8 and TNF-&#945; than neutrophils from control individuals, under basal and stimulated conditions (5). Moreover SAA showed to be a priming agent rendering the neutrophils more responsive to opsonized particles (6). These data reinforce our hypothesis that SAA has a participation in the progression of chronic diseases in wich the serum concentration of this protein is permanently increased. To evaluate the proinflammatory character of SAA we choosen diabetes mellitus type 2. This study makes the novel observation that neutrophils and mononuclear cells of diabetics were more responsive to SAA in the induction of the proinflammatory cytokine IL-1&#946; and the proangiogenic and chemotactic protein IL-8 secretion. Cell migration wa also increased. It is well known that patients with diabetes mellitus have an increased prevalence of vascular disease and correlation exists between the increased prevalence of vascular disease and cytokine production. Thus, we believe that the hyperresponsivity of leukocytes to SAA may be relevant to the proinflammatory conditions associated to vascular complications in diabetic patients.

A lipase lipoprotéica é a principal enzima responsável pela hidrólise dos triglicérides das lipoproteínas ricas em triglicérides, os quilomícrons e VLDL. A freqüência do polimorfismo S447X da lipase lipoproteíca na população varia de 17 a 22% e está associado a menores concentrações plasmáticas de triglicérides e proteção contra doença arterial coronária (DAC). Os objetivos desse estudo foram avaliar os efeitos desse polimorfismo sobre os lípides plasmáticos em controles e em pacientes com DAC prematura e verificar o comportamento metabólico dos quilomícrons em indivíduos saudáveis portadores desse polimorfismo. Foram estudados 313 pacientes com DAC prematura e 150 indivíduos controle que foram genotipados para esse polimorfismo. Os lípides plasmáticos, colesterol total, frações e triglicérides foram determinados nesses pacientes. O metabolismo dos quilomícrons foi avaliado por uma injeção endovenosa de uma emulsão de quilomícrons artificiais com dupla marcação radioisotópica. A cinética plasmática dos triglicérides radioativos (3H-Tg) avalia os mecanismos relacionados à lipólise: remoção da partícula parcialmente lipolisada e remoção dos ácidos graxos livres. A cinética plasmática do éster de colesterol radioativo (14C-CE) avalia a remoção das partículas dos quilomícrons e remanescentes. O metabolismo dos quilomícrons artificiais foi avaliado em 12 pacientes normolipidêmicos que apresentaram o polimorfismo S447X da lípase lipoprotéica e pareados com 13 indivíduos que não apresentavam esse polimorfismo e tinham a mesma idade e sexo. A frequência desse polimorfismo foi de 18% no grupo com DAC prematura e de 23% no grupo controle. No sexo masculino do grupo DAC a presença do polimorfismo foi associada a menores concentrações plasmáticas de triglicérides. As taxas fracionais de remoção do 14C-CE da emulsão foram similares nos indivíduos com e sem o polimorfismo. Também não houve diferença nas taxas fracionais de remoção dos 3H-Tg entre os indivíduos com e sem o polimorfismo. A presença do polimorfismo S447X não alterou o catabolismo intravascular dos quilomícrons avaliado pelo método de quilomícrons artificiais. / Lipoprotein lipase catalyzes the hydrolysis of the triglycerides contained in both very-Iow-density lipoproteins and chylomicrons for storage in both hepatic and dietary origin fat adipose tissue and muscle. The S447X lipoprotein lipase is the most common polymorphism of the enzyme, affecting roughly 20% of the population and is accompanied by normal or diminished fasting triglycerides and perhaps lower incidence of coronary artery disease (CAD). Delay in the removal of chylomicron and remnant is now an established CAD risk factor. The objective of this study was to clarify whether the presence of this polymorphism is related to the plasma lipids profile and the presence of CAD. Total cholesterol and fractions and triglycerides were determined in two groups: 313 patients with premature (< 55 years old) CAD and in 150 control subjects without CAD. The chylomicron metabolism was evaluated in 12 normolipidemic subjects with the S447X and in 13 age and sex-paired control subjects without the mutation. The doubly labeled chylomicron-like emulsion method was used to evaluate chylomicron metabolism. The emulsions labeled with cholesteryl-oleate (14C-CE) and triglycerides (3H-Tg) were injected intravenously. The decay curves of the labels were then determined by blood sampling over 60 min followed by radioactive counting. The S447X polymorphism was present in 18% of CAD patients and in 23% the control subjects. There was no auteration in total cholesterol, fractions or triglycerides in the presence of this polymorphism. Male patients with CAD and with the polymorphism had lower triglycerides concentrations than male CAD patients without the polymorphism. The was no difference of the fractional clearance rate (FCR, min-1) of the labels in the S447X carriers compared to the noncarriers. In the studied population, the S447X polymorphism showed no protection against premature CAD or although it was related with lower triglycerides in the male sex. The chylomicron intravascular lipolysis monitored by the (3H-Tg) emulsion and the remnant removal monitored by the (14C-CE) emulsion were not altered by the presence of this polymorfhism of great populational impact.

Polimorfismos nos genes da n-acetiltransferase 2 (NAT2), CYP2E1 e glutationa S-transferase (GST) têm sido associados a diferenças na resposta ao tratamento da tuberculose. O papel de variantes dos genes NAT2, CYP2E1 e GSTM1/GSTT1, no perfil de segurança do tratamento da tuberculose, foi avaliado em 99 pacientes com tuberculose, sem co-infecção por HIV ou vírus da hepatite, tratados por 6 meses. Amostras de sangue foram colhidas antes e durante o tratamento para avaliação de marcadores de lesão hepatocelular (ASLT e AST), colestase (ALP, GGT e bilirrubinas) e função renal (creatinina). O DNA genômico foi extraído de sangue colhido em EDTA pelo método precipitação salina. Os polimorfismos NAT2 foram analisados por PCR-RFLP e seqüenciamento de DNA. Os polimorfismos da região promotora do CYP2E1 foram detectados por PCR-RFLP e para a análise dos genótipos nulos de GSTM1 (GSTM1*0) e GSTT1 (GSTT1*0) foi utilizada a PCR multiplex. Durante o tratamento, 59,6% dos pacientes apresentaram reações adversas aos medicamentos (RAM) e alterações nos marcadores de lesão hepatocelular e colestase, com aumento de 1 a 4 vezes o limite superior de referência. Foi observada forte relação entre RAM e alterações nos marcadores séricos (p< 0,05) e também com o uso de medicação concomitante (p< 0,001). As freqüências dos alelos NAT2*4 e NAT2*6 foram maiores e menores, respectivamente, quando comparadas com outros estudos na população brasileira. O perfil de acetilador lento (alelos NAT2*5, NAT2*6 e NAT2*7) foi associado com manifestação de RAM e hepatotoxicidade. Os portadores dos genótipos NAT2*4/*5 e NAT2*5/*5 apresentaram, respectivamente, risco 2,4 e 5,0 vezes maior de RAM que os portadores dos demais genótipos NAT2 (p< 0,05). O genótipo funcional GSTM1*1/GSTT1*1 foi associado com alterações acentuadas de ALT, AST e ALP (p< 0,05). Enquanto que as variantes da CYP2E1 não foram associadas a alterações no perfil bioquímico ou com risco de RAM ou hepatotoxicidade. Em conclusão, o perfil de acetilação lenta de NAT2 e o genótipo funcional de GSTM1/GSTT1 aumentam a susceptibilidade de lesão hepatocelular e outras RAM induzidas pelos antimicobacterianos utilizados no tratamento da tuberculose. / Polymorphisms in N-acetiltransferase 2 (NAT2), CYP2E1 and glutatione S-transferase (GST) have been associated with differences in response to antituberculosis drugs. The role of the NAT2, CYP2E1 and GSTM1/GSTT1 variants on safety profile of the anti-tuberculosis therapy was evaluated in 99 tuberculosis patients, without co-infection by HIV or hepatitis virus, treated during 6 months. Blood samples were collected before and after the therapy to evaluate serum markers for hepatocelullar damage (ASLT and AST), cholestasis (ALP, GGT and bilirrubin) and kidney function (creatinine). Genomic DNA was extracted from EDTA-blood samples by salting-out method. NAT2 polymorphisms were analyzed by PCR-RFLP and DNA sequencing. CYP2E1 promoter region polymorphisms were detected by PCR-RFLP and for analysis of the null genotypes GSTM1 (GSTM1*0) e GSTT1 (GSTT1*0) PCR multiplex technique was used. During the therapy, 59.6% of the patients had adverse drug reactions (ADR) and alterations on hepatocellular damage and cholestasis serum markers, with increase of 1 to 4 times the upper limit reference level. There was a significant relationship between ADR and serum markers alterations (p< 0,05), as well as, the concomitant medicine (p< 0,001). The frequencies of the NAT2*4 and NAT2*6 alleles were higher and lower, respectively, when compared to other studies in the Brazilian population. The slow acetilator profile (NAT2*5, NAT2*6 and NAT2*7 alleles) was associated with ADR and hepatotoxicity manifestations. The NAT2*4/*5 and NAT2*5/*5 genotypes carriers had, respectively, 2.4 and 5.0 times higher risk for ADR than those carrying the other NAT2 genotypes (p< 0,05). The functional genotype GSTM1*1/GSTT1*1 was associated with enhanced variations on ALT, AST and ALP (p< 0.05). No relationship was found between CYP2E1 variants and variations on biochemical profile or risk for ADR or hepatotoxicity. In conclusion, the NAT2 slow acetilator profile and the GSTM1/GSTT1 functional genotype increase the susceptibility to hepatocellular damage and other ADR induced by antibiotics used in tuberculosis therapy.

Este trabalho teve como meta principal ampliar o estudo anteriormente relatado por Mercuri em 2000, agora com a caracterização química e termoanalítica de cálculos biliares e as biles vesiculares humanas, especificamente, de pacientes do sexo masculino. Para ambos os tipos de caracterização foram utilizadas várias técnicas, como: (a) Análise Elementar (AE), para determinação de teores de C, H e N. (b) Espectroscopia no infravermelho com transformada de Fourier (FTIR), com o objetivo de verificar as bandas de absorção no IV e assim identificar algumas substâncias que fazem parte desses materiais. (c) Difratometria de Raios X (DRX), para identificar formações cristalinas de espécies presentes nas amostras de cálculos biliares. (d) Espectrometria de Absorção Atômica (AAS), para a determinação do teor de alguns metais como por exemplo: Cd, Pb e Cu. (e) Ressonância Magnética Nuclear (RMN), para ratificar a presença de colesterol e afastar a hipótese de ter-se ergosterol na amostra e (f) TG/DTG e DSC aplicadas para o estudo do comportamento térmico das amostras de cálculos biliares e biles. Este trabalho permitiu concluir que: alguns tipos de cálculos biliares do universo de pacientes do sexo masculino que foram estudados puderam ser inseridos na classificação proposta anteriormente, no entanto, cinco dessas amostras não se encaixaram em nenhum desses grupos, sugerindo, com isso, a adição de novos grupos. Verificou-se, também, que a porcentagem de cálculos biliares formados por colesterol é menor para essa classe de pacientes. Em duas amostras de cálculos biliares encontrou-se CaCO3 cristalizado como aragonita, outra indicou a presença de fosfato de cálcio e em duas dessas amostras foram encontrados um alto teor de chumbo. No caso das biles, seis amostras indicaram a presença de NaCl (halita) e uma delas indicou, também, a presença de colesterol. / This work had as goal main to enlarge the study previously related for Mercuri in 2000, now with the chemical and thermoanalytical characterization of gallstones and the human vesicular bile, specifically, of patient of the masculine sex. For both the kinds of characterization were used several techniques, as: (a) Elementary analysis (AE), for contents determination of C, H and N. (b) Fourier Transform Infrared Spectroscopy (FTIR), with objective of verifying the absorption bands in the IV and thus identify some substances that do part of these materials. (c) X-rays diffraction (DRX), to identify present crystalline species formations in the gallstones sample. (d) Atomic Absorption Spectrometry (AAS), for some metals content determination such as: Cd, Pb and Cu. (e) Nuclear Magnetic resonance (RMN), to ratify the cholesterol presence and to remove the hypothesis of have ergosterol in the sample and (f) TG/DTG and DSC applied to the gallstones and bile samples thermal behavior study. This work allowed to conclude that: some universe gallstones kinds of patient of the masculine sex that were studied could be inserted in the proposed classification previously, however, five of these samples did not case in none of these groups, suggesting, with that, the addition of new groups. It verified, also, that the gallstones percentage formatted for cholesterol is smaller for this class of patient. In two gallstones samples were found CaCO3 crystallized as aragonite, other indicated the calcium phosphate presence and in two of these samples were found a Pb high content. In the biles case, six samples indicated presence of NaCl (halita) and their one indicated, also, the cholesterol presence.

Introdução: o desenvolvimento de uma vacina contra a esquistossomose será um importante avanço no controle desta doença crônica e muitas vezes debilitante, afetando milhões de pessoas em todo o mundo. Neste trabalho, descrevemos o uso da subunidade B da toxina colérica (CTB) geneticamente fusionada com Sm14 - uma proteína ligadora de ácidos graxos de Schistosoma mansoni - como uma tentativa de desenvolver uma vacina antiesquistossomose. Métodos: proteínas recombinantes foram expressas em um sistema procariótico, purificadas por diferentes métodos cromatográficos e caracterizadas tanto por métodos imunoquímicos como por métodos espectroscópicos. Experimentos de imunização foram realizados em camundongos fêmeas, da linhagem BALB/c e a eficácia da vacina determinada através da análise da carga parasitária após o desafio com cercárias de S. mansoni e através da análise histopatológica das reações granulomatosas ao redor dos ovos aprisionados no tecido hepático dos camundongos. Resultados: a administração subcutânea de Sm14 reduziu em 27% a carga parasitária nos animais vacinados. Por outro lado, a vacinação intranasal apenas demonstrou uma redução estatisticamente significativa quando CTB esteve presente na formulação. Além disso, a co-administração de CTB e Sm14 reduziu em média 30% a área das lesões granulomatosas hepáticas. Conclusão: o uso de CTB demonstrou ser um importante adjuvante de mucosas; contudo, quando utilizada juntamente com a proteína Sm14, esta molécula não resultou em níveis satisfatórios de redução parasitária em um modelo murino para infecção esquistossomótica. / Introduction: developing a vaccine against schistosomiasis would be an important advance on the control of this chronic and debilitating disease which afflicts millions of people worldwide. Herein we describe the use of the non-toxic B subunit of cholera toxin (CTB) genetically fused to Sm14 - a fatty-acid binding protein from Schistosoma mansoni - as an attempt to the development of an antischistosomiasis vaccine. Methods: recombinant proteins were expressed on a prokaryotic system, purified by different chromatographic methods and both immunochemically and spectroscopically characterized. Immunization experiments were made on females BALB/c mice and vaccines efficacy was assessed by analyzing the worm-burden after challenge infection with S. mansoni cercariae and by analyzing its effect on the hepatic granulomatous reactions around trapped eggs. Results: subcutaneous administration of Sm14 reduced in 27% the worm burden on animals. On the other hand, intranasally vaccination only displayed a statistically significant reduction when CTB was added to the formulation. Furthermore, coadministrating CTB and Sm14 reduces in 30% the area of hepatic granulomas. Conclusion: the use of CTB may be an important tool for mucosal adjuvanticity; however it did not provide, together with Sm14, satisfactory levels of protection on a murine model for Schistosomiasis infection.