Made available in DSpace on 2015-03-26T13:37:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 494315 bytes, checksum: ae779e1b9f8fc13a152740edf2e2b595 (MD5) Previous issue date: 2009-02-12 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The fusarium wilt caused by Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici (Fol), is one of the major problems in tomato cultivation especially in green house crop. The soil infestation with this pathogen can make the green house cultivation unviable, therefore periodic fumigation is recommended to maintain low inoculum level in soil. This study was done to evaluate the fumigant effect of the mustard essential oil (MEO), containing 90% allyl isothiocyanate, to control Fol. In vitro bioassays were done to determine its effect on mycelial growth, sporulation and germination of conidia and clamydospores, with use of a wild Fol and benomyl resistant mutant (Folm). The fungal cultures in Petri plates were fumigated with different concentration of the MEO for 24 or 48 h, and then incubated in MEO free atmosphere. For all fungal propagules, the estimated DE50 was lowest if the fumigation was done for 48 h. The mycelium and conidia of the Fol were more susceptible to MEO than chlamydospores. The MEO did not affect sporulation. Fumigation with MEO was also evaluated for eradication of the chlamydospores of Folm in soil. Initially, the interaction between dose (0, 50, 100 or 150μL/L) and exposure time was determined (2, 4, 6 or 8 days). The soil infested with 2000 ±200 chlamydospores/g was placed in flasks, and after adding the requited amount of MEO the flasks were hermetically sealed. After each exposure period, the inoculum density of the fungus was determined by plating the soil dilutions on benomyl enriched galactosenitrate agar. The regression equation revealed that at dose of 125μL/L an exposure period of 5.4 days was required to eradicate Folm. To determine the fumigant effect of MEO in the green house, 20L of soil infested with 4000 ±250 chlamydospores/g was placed in the plastic bags of 30L, and treated with 0, 50, 100 or 150μL/L of MEO. The bags were then sealed and stored. After 7-days exposure period, the soil was distributed into 4L-plastic pots, and one 20-day old tomato seedling was transplanted into each pot. At 15-day interval, soil from each pot was sampled at 15-day interval to follow the population dynamic of the fungus. The disease progress was accompanied by leaf chlorophyll analysis leaves, and the final severity was evaluated by use of a numerical at the end of 60 days. It was found that the soil fumigation with 150μL/L of MEO reduced the Folm inoculum density by 95% and the disease severity was less than 15%. / A murcha de fusário, causada por Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici (Fol), é um problema comum em campos de produção de tomate, especialmente quando o cultivo é realizado em ambiente protegido. Solos infestados por este patógeno podem inviabilizar a produção em estufas, sendo recomendada a fumigação periódica, visando à manutenção de um baixo nível de inóculo no solo. Este trabalho teve como objetivo avaliar o efeito fumigante do óleo essencial de mostarda, que é composto por 90% de isotiocianato de alila (ITCA), na redução de inóculo e no controle da murcha vascular causada por Fol. Foram realizados bioensaios in vitro de crescimento micelial, formação de conídios e germinação de conídios e de clamidósporos. Para os testes, foram utilizados um isolado selvagem (Fols) e um mutante resistente ao benomil (Folm), os quais foram fumigados com ITCA, em diferentes doses, dentro de recipientes plásticos vedados, por períodos de 24 ou 48 horas. Após a fumigação, as placas contendo as culturas foram incubadas na ausência dos vapores do produto até a avaliação. Os menores valores de DE50 foram estimados para o período de 48 horas de exposição, tanto para o bioensaio de crescimento micelial como para os de germinação de conídios e de clamidósporos. Verificou-se que os conídios foram os propágulos de Fol mais sensíveis ao produto e os clamidósporos os mais resistentes. O ITCA não afetou significativamente a formação de conídios pelos isolados. Avaliou-se também a eficiência do produto na erradicação de clamidósporos de Folm no solo. Inicialmente, foi estudada a interação entre doses (0, 50, 100 e 150μL/L) e tempo de exposição (2, 4, 6 e 8 dias) ao ITCA. Solo infestado com 2000 ±200 clamidósporos/g foi transferido para erlenmeyers, que receberam a dose desejada, sendo, em seguida, hermeticamente vedados. Após exposição, a população do fungo foi determinada por meio de plaqueamento de diluições em série em meio seletivo para F. oxysporum acrescido de benomil. A partir da equação de regressão gerada, pôde-se estimar que seria necessária uma fumigação de solo com 125μL/L por períodos superiores a 5,4 dias para erradicação de Folm no solo. Para determinar o efeito de ITCA em casa de vegetação, 20L de solo infestado com 4000 ±250 clamidósporos/g foram colocados em sacos de polietileno de 30L, os quais receberam as doses de 0, 50, 100 ou 150μL/L sendo, posteriormente, vedados, permitindo a fumigação por 7 dias. Decorrido este período, o solo foi transferido para vasos de 4L, os quais receberam uma muda de tomate com 20 dias de idade. As plantas foram cultivadas por 60 dias, sendo retiradas amostras quinzenais de solo para acompanhamento da dinâmica populacional do fungo no solo. Através de análise do conteúdo de clorofila nas folhas, acompanhou-se o desenvolvimento da doença e a severidade final foi avaliada por meio de escala de notas. Foi verificado que a fumigação com 150μL/L de ITCA reduziu em mais de 95% a população de Folm no solo e que a severidade da doença aos 60 dias foi inferior a 15%.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:37:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 330706 bytes, checksum: 9be020e5be4feef0a4967a862388b2b0 (MD5) Previous issue date: 2009-10-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / To base the cultivation of Cylindrocladium pteridis and inoculation of the fungus under controlled conditions, was evaluated in this study sporulation in culture, conidial germination, mycelial growth and defoliation of eucalyptus at different temperatures. In preliminary experiments, we evaluated the effect of light and incubation time on germination of conidia. The presence of continuous light significantly reduced germination, resulting in higher germination of conidia in the dark. In assessing the germination under different incubation periods, it was observed that the germination of C.pteridis is very fast, and obtained 100% conidia germinated after 4 h of incubation. In assessing the germination under different temperatures, the optimum for germination was 25 ° C (84.6%). The mycelial growth also varied with temperature, and the maximum was 25 ° C. Aiming to solve the problem of low production of conidia in vitro were evaluated three methods of sporulation of C. pteridis in culture. We compared three methods, and the method of scraping the aerial mycelium followed by flood water was the most sporulation in media AVDA, MEA, PDA and GAA, after 10 days of incubation. We obtained the greatest number of conidia on PDA, with an average of 14.13 x 104 conidia / mL. With half SNA was no significant difference between the methods studied. Subsequently, to study the effect of temperature on leaf eucalyptus, is inoculated plants were kept in a moist chamber at 18, 26, 28 and 30 º C. After 48 h, were transferred to a greenhouse (25 ± 5 º C). The temperature significantly influenced the leaf classes in the base of the crown 50 days after inoculation, and the highest percentage of defoliation occurred at 26 º C. / A fim de embasar o cultivo de Cylindrocladium pteridis e a inoculação do fungo em condições controladas, avaliou-se neste trabalho a esporulação em cultura, a germinação de conídios, o crescimento micelial e a desfolha causada em eucalipto sob diferentes temperaturas. Em experimentos preliminares, avaliou-se o efeito da luminosidade e o tempo de incubação na germinação de conídios. A presença de luz contínua reduziu significativamente a germinação, obtendo-se maior germinação de conídios no escuro. Ao avaliar a germinação sob diferentes períodos de incubação, observou-se que a germinação de C.pteridis é muito rápida, sendo obtido 100% de conídios germinados após 4 h de incubação. Ao avaliar a germinação sob diferentes temperaturas, o ótimo para germinação foi 25 °C (84,6%). O crescimento micelial também variou com a temperatura, e o máximo foi a 25 ºC. Objetivando-se solucionar o problema da baixa produção de conídios in vitro, avaliaram-se três métodos de esporulação de C. pteridis em cultura. Compararam-se três métodos, e com o método de raspagem do micélio aéreo seguido de inundação em água obteve a maior esporulação do fungo nos meios AVDA, MEA, BDA e GAA, após 10 dias de incubação. Obteve-se a maior produção de conídios em BDA, com média de 14,13 x 104 conídios/mL. Com o meio SNA não houve diferença significativa entre os métodos estudados. Posteriormente, para se estudar o efeito da temperatura na desfolha em eucalipto, inocularam-se plantas que foram mantidas em câmara úmida a 18, 26, 28 e 30 ºC. Após 48 h, foram transferidas para casa de vegetação (25±5 ºC). A temperatura influenciou significativamente a desfolha em ramos da base da copa aos 50 dias após inoculação, e o maior percentual de desfolha ocorreu a 26 ºC.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:37:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1569948 bytes, checksum: 47e985324f875fabdd3773a51785089b (MD5) Previous issue date: 2010-02-24 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The root-knot nematodes, belonging to Meloidogyne spp., represent a restraint factor to the Brazilian coffee crop because they cause too many losses. There is only some information on the occurrence of these nematodes, especially in coffee plantations in Espírito Santo State (ES), thus it was aimed to study the distribution of Meloidogyne spp. in Coffea spp. in this State and to complement the investigation in Zona da Mata in Minas Gerais (MG). Samples of soil and roots were collected from 18 municipalities on ES and 5 municipalities on the region of Zona da Mata of MG. The identification of species of Meloidogyne spp. was performed through esterase phenotype and differential host test. On ES, different species of Meloidogyne spp. were detected in the analyzed samples. Meloidogyne incognita, I1 and I2 phenotypes, was found in 18% of the sampled farm estates, and in 81.25% of these infested farms C. canephora was cultivated. This species of root-knot nematodes is present in 55.5% of the sampled municipalities, and it is found mainly in the mountain region and in the north of the State. This species was found in a mixture with M. exigua in a coffee crop in Brejetuba, and it was found in a mixture with M. paranaensis in Sooretama. Meloidogyne exigua, E1 phenotype, was detected in 43.6% of the farms and only in C. arabica crops. This species was found in all sampled municipalities in the southern region and in 66% of the sampled municipalities in the mountain region where arabica coffee is grown in large scale. In the north of the state, M. paranaensis, P1 phenotype, was detected in the sampled municipalities and it is reported by the first time in the state of Espírito Santo. The species M. arenaria, A2 phenotype, and M. javanica (J3) were detected in Laranja da Terra parasitizing weeds in the area, but not in coffee trees. However, in Zona da Mata in Minas Gerais, it was found only M. exigua, E1 phenotype, parasitizing coffee trees in all the municipalities where collection was performed, except in Paula Cândido municipality, where no species of Meloidogyne was found. The populations were tested by differential host plants in order to determine physiological races. It was found M. incognita and M. exigua races 1 and 2 in Espírito Santo, and M. exigua race 2 in Zona da Mata in Minas Gerais. Nematodes from genus Tylenchus, Helicotylenchus, Rotylenchulus, Pratylenchus, Aphelenchoides, Aphelenchus, Xiphinema, Mesocrinonema, Psilenchus, Hemicriconemoides, Discocriconemella, Ditylenchus, Rotylenchus, were associated to coffee tree rizosphere. / Os nematoides das galhas pertencentes ao gênero Meloidogyne spp. representam um fator limitante à cafeicultura brasileira por causarem grandes perdas. Devido às escassas informações sobre a ocorrência desses nematoides, principalmente na cafeicultura capixaba, objetivou-se estudar a distribuição de Meloidogyne spp. em Coffea spp. no Estado do Espírito Santo e complementar os levantamentos na Zona da Mata de Minas Gerais. Amostras de solo e raízes foram coletadas em 18 municípios no Estado do Espírito Santo e em 5 municípios na Zona da Mata de Minas Gerais. A identificação das espécies de Meloidogyne spp. foi realizada pelo fenótipo da isoenzima esterase e pela gama de hospedeiros. No Estado do Espírito Santo foram detectadas diversas espécies de Meloidogyne nas amostras analisadas. Meloidogyne incognita, fenótipo I1 e I2, foi encontrada em 18% do total das propriedades amostradas, sendo que em 81,25% das propriedades infestadas se plantava C. canephora. Esta espécie está presente em 55,5% dos municípios amostrados sendo encontrada principalmente na região Serrana e Norte do Estado. Em uma propriedade do município de Brejetuba, ela foi encontrada em mistura com M. exigua, e no município de Sooretama, em mistura com M. paranaensis. Meloidogyne exigua, fenótipo E1, foi detectada em 43,6% das propriedades e apenas em lavouras de C. arabica. Esta espécie foi encontrada em todos os municípios amostrados da Região Sul e em 66,6% dos municípios amostrados da Região Serrana, regiões onde o café arábica é cultivado em larga escala. Meloidogyne paranaensis, fenótipo P1, foi detectado em todos os municípios amostrados da região Norte do Estado, e é relatada pela primeira vez no Estado do Espírito Santo. As espécies M. arenaria, fenótipo A2, e M. javanica (J3) foram detectadas em Laranja da Terra parasitando plantas daninhas presentes na área, mas não em cafeeiros. Já na Zona da Mata de Minas Gerais foi encontrada apenas M. exigua, fenótipo E1, parasitando as plantas de cafeeiro arábica em todos os municípios coletados exceto no município de Paula Cândido, onde nenhuma espécie de Meloidogyne foi encontrada. As populações foram submetidas ao teste com plantas hospedeiras diferenciadoras para determinação das raças fisiológicas. Foram encontradas as raças 1 e 2 de M. incognita e M. exigua no Estado do Espírito Santo, e a raça 2 de M. exigua na Zona da Mata de Minas Gerais. Nematoides dos gêneros Tylenchus, Helicotylenchus, Rotylenchulus, Pratylenchus, Aphelenchoides, Aphelenchus, Xiphinema, Mesocrinonema, Psilenchus, Hemicriconemoides, Discocriconemella, Ditylenchus, Rotylenchus, estavam associados com a rizosfera do cafeeiro.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:37:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 372194 bytes, checksum: 1ce7a898936fa3c0ddc79d75753c89e2 (MD5) Previous issue date: 2009-07-27 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The main objectives of this work were to identify the causal agent of the maize White Spot, to obtain preliminary information on the disease dispersal in the field and to characterize the reaction of maize hybrids and inbreds to the disease. For the etiological studies, isolations were performed from white spot lesions the anasarca phase, resulting in the development of bacterial colonies. Maize hybrids BRS2022, BRS1010, 1D2195, BRS1040, BRS1035, BRS1031, BRS3025, BRS1030, 2B710 e P30F35 and inbred lines L3, L228-3, 521274, 521236 e 262841-1-4-1 were evaluated under natural epidemic in a randomized block design with three replications. Cultivars were planted in single row plots, separated by two rows of the resistant hybrid BRS1010. Spreader rows were formed by planting the susceptible genotype DAS657 0,5 m apart and in front of each block. Disease severity was evaluated at a weekly internal starting 60 days after planting, through a 1 to 9 scale of disease severity where 1= no disease and 9= 100% of leaf area affected. Ratings were taken at three different locations within each plot: 1, 2, 3, 4, 5 and 6 meters inoculum source. Data were used for the calculation of the area under disease progress curve (AUDPC), disease severity at 50% of epidemic development (Y50), disease severity at the end of the epidemic, and the rate of disease progress. Inoculations on the susceptible hybrid DAS657, in the greenhouse, reproduced the typical symptoms of the disease. Re-isolations from theses lesions confirmed the presence of the same bacteria isolated from the field, which identified as Pantoea ananatis, confirming previous reports on the involvement of this bacteria in the initial lesions of this disease. No disease gradient was observed based on the disease severity observed in each point of evaluation within each plot. A better distinction between the level of resistance of maize genotypes was obtained through AUDPC and Ymáx values. Maize hybrids BRS1030, BRS1035 and BRS1010 and inbreds L3, and L228-3 were the most resistant genotypes. These inbred lines may be useful in breeding programs for resistance to maize white spot. / Este trabalho objetivou confrimar o agente causal da mancha-branca do milho, obter informações preliminares sobre a dispersão do patógeno e caracterizar a reação de genótipos de milho a doença. Para o estudo etiológico, isolados foram obtidos de lesões de manchabranca em fase de anasarca, resultando em desenvolvimento de colônias bacterianas. Híbridos de milho, BRS2022, BRS1010, 1D2195, BRS1040, BRS1035, BRS1031, BRS3025, BRS1030, 2B710 e P30F35 e as linhagens L3, L228-3, 521274, 521236 e 262841-1-4-1 foram avaliados sob epidemia natural em delineamento de blocos ao acaso e três repetições. Os cultivares foram plantados em fileiras de cinco metros, separadas por uma linha do híbrido resistente BRS1010. A cortina suscetível (fonte de inóculo) formada pelo híbrido DAS657, foi plantada na parte frontal de cada bloco, afastada 0,5 m. A severidade da doença foi avaliada em intervalos semanais a partir dos 60 dias do plantio, utilizando uma escala de 1 a 9, onde: 1= sem doença e 9= 100% de área foliar afetada. As avaliações foram realizadas em 6 pontos dentro da parcela afastados 1, 2, 3, 4, 5 e 6 metros da fonte de inóculo. Os dados de severidade foram usados para o calculo da área abaixo da curva de progresso da doença (AACPD), severidade da doença na metade da epidemia (Y50), severidade da doença no final da epidemia (Ymáx), e taxa de progresso da doença. Com inoculações em híbrido suscetível DAS657, em casa de vegetação, foi possível reproduzir os sintomas típicos da doença. Reisolamento a partir dessas lesões confirmou a presença da mesma bactéria isolada do campo, identificada como Pantoea ananatis, corroborando relatos do envolvimento desta bactéria nos sintomas iniciais da doença. Não foi observada a formação de um gradiente de dispersão baseado na severidade da doença observada em cada ponto de avaliação dentro da parcela. A melhor distinção entre os níveis de resistência de genótipos de milho foi obtida pelos valores de AACPD e Ymáx. Os híbridos de milho BRS1030, BRS1035 e BRS1010 e as linhagens L3, e L228-3 foram os genótipos mais resistentes. Essas linhagens podem ser usadas em programas de melhoramento visando resistência a mancha-branca.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:37:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 243315 bytes, checksum: 054bf30c4a50c22bf027493817fb918f (MD5) Previous issue date: 2008-03-10 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Besides increasing production fees, the indiscriminate used of nematicidal chemicals may threaten farmers and consumers health, as well as contaminate the environment. Consequently, alternative methods for management of nematodes are preferred, such as the use of nematophagous fungi allied to organic matter incorporation to the soil. The objectives of this work were: 1- to evaluate the minimum effective dose of papaw seed's flour (FSM) with and without biofumigation, for the control of M. javanica; 2- to evaluate the effect of Pochonia chlamydosporia, applied in the form of chlamydospore or colonized coconut fiber, together with different doses of FMS against M. javanica and 3- to evaluate the effect of fungi and bacteria, isolated from soils treated with FSM, over M. javanica. The collective and accumulative effect of the toxic gasses released during the FSM decomposition, together with the high temperatures, conferred a considerable reduction in the quantity of FSM to be incorporated to the soil, especially if the soil was immediately covered after incorporation. Evaluating the applying of P. chlamydosporia fungi, it was determined that colonized coconut fiber was not efficient as a method for the introduction of this microorganism. Soil application of P. chlamydosporia must be done on infested soil and a period of more than seven days has to be held before planting, in order to allow fungi establishment and its activity over the initial nematode inoculum, with a consequent reduction in penetration, number of root knots and number of eggs at end of the nematode's life cycle. No antagonistic activity against nematodes was observed in bacteria isolated from soils where FSM was incorporated. Only one isolate of the fungi Trichoderma sp. resulted in nematode control, and only when introduced in the soil together with the host planting, 15 days before nematode eggs introduction. This period of exposition was not proportioned in the experiment from where the fungi was isolated, thus it was impossible to determine the role of such isolate in the control of the nematode. / O uso indiscriminado de nematicidas, além de onerar o custo de produção, pode colocar em risco a saúde dos aplicadores, dos consumidores e contaminar o meio ambiente. Desta forma, métodos alternativos para o manejo de nematóides são cada vez mais desejáveis, tais como o uso de fungos nematófagos aliado à incorporação de matéria orgânica. Os objetivos do presente trabalho foram avaliar a dose mínima efetiva de farinha de sementes de mamão (FSM) em biofumigação ou não, para o controle de M. javanica; testar o efeito de Pochonia chlamydosporia, aplicado na forma de clamidósporos ou de fibra de coco colonizada, juntamente com diferentes doses de FSM sobre M. javanica e verificar o efeito de fungos e bactérias, isolados de solos tratados com FSM sobre M. javanica. O efeito conjunto e cumulativo dos gases tóxicos liberados durante a decomposição da FSM, aliado às elevadas temperaturas proporcionou uma considerável redução da quantidade de FSM a ser incorporada no solo, principalmente se o solo for coberto imediatamente após a incorporação desse material. Ao se avaliar a forma de aplicação do fungo P. chlamydosporia constatou-se que a fibra de coco colonizada não foi efetiva como método de introdução deste microrganismo. A aplicação de P. chlamydosporia deve ser feita em solo infestado e deve-se aguardar um período maior do que uma semana antes do plantio para que o fungo possa se estabelecer e atuar sobre o inóculo inicial do nematóide, o que reduz a penetração e os números de galhas e ovos no final do ciclo de vida do nematóide. Bactérias isoladas de solo onde havia sido incorporado FSM não apresentaram atividade antagônica ao nematóide. Somente um isolado do fungo Trichoderma sp. resultou em controle do nematóide e apenas quando introduzido no solo no plantio com o hospedeiro, isto é, 15 dias antes da introdução dos ovos do nematóide. Este período de exposição não foi proporcionado noexperimento de onde este fungo foi isolado, portanto não é possível determinar o papel desse isolado no controle do nematóide.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:37:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 611413 bytes, checksum: d8119b46b042a6c0388e233d2daa1dcc (MD5) Previous issue date: 2010-02-23 / Looking for promising microorganisms for the control of coffee leaf rust, caused by Hemileia vastatrix, were isolated phylloplane residents from coffee leaves healthy by simply washing the sheet or by using ultrasound, with subsequent dilution. Were also selected bacteria capable of forming endospores, yielding a total of 217 isolates. After isolation were carried out four tests for selection of these organisms as biocontrol agents of rust. The first test conducted was the germination of urediniospores of H. vastatrix on glass slide, comparing the germination in distilled water and germination when a drop of each of the isolates obtained was deposited, from this experiment we selected 33 isolates with an inhibitory effect on germination. Subsequently, isolates were tested on leaf discs, as its capacity to suppress disease progression. The 33 isolates were sprayed on leaves of coffee plants at three different times in relation to inoculation with H. vastatrix (24 hours before, simultaneously and 24 hours later). Four isolates were considered capable of reducing the severity of the disease in the conditions of the experiment. These four isolates were tested on detached leaves to confirm the results, again observing reductions in disease severity compared to control, which contained only distilled water. The last experiment was conducted in green-house, comparing the four isolates with the controls (sprayed only with distilled water and with the systemic fungicide epoxiconazol). The four isolates provided the level of disease control similar to that obtained by the use of fungicide (approximately 100%). The identification based on fatty acid profile of the isolates identified UFV 025, UFV UFV 033 and 080 as Bacillus cereus, isolate UFV and 070 as Bacillus sphaericus. With the results of the experiments we can conclude that resident bacteria in the phylloplane of coffee can be isolated and selected as potential biocontrol agents of rust. / Procurando-se microorganismos promissores para o controle da ferrugem do cafeeiro, causada por Hemileia vastatrix, foram isolados residentes do filoplano de folhas de café sadias por simples lavagem de folha ou por utilização de ultra-som, com posterior diluição. Também foram selecionadas bactérias capazes de formar endósporos, obtendo-se um total de 217 isolados. Após o isolamento foram realizados quatro ensaios para seleção destes organismos como agentes de biocontrole da ferrugem. O primeiro ensaio realizado foi de germinação de urediniósporos de H. vastatrix em lâmina de vidro, comparando-se a germinação em água destilada e a germinação quando foi depositada uma gota de cada um dos isolados obtidos, deste experimento foram selecionados 33 isolados com efeito inibitório na germinação. Posteriormente os isolados foram testados, em discos de folhas, quanto a sua capacidade em suprimir o avanço da doença. Os 33 isolados foram atomizados em folhas de cafeeiro em três diferentes tempos em relação à inoculação de H. vastatrix (24 horas antes, simultaneamente e 24 horas depois). Quatro isolados foram selecionados e considerados capazes de reduzir a severidade da doença nas condições do experimento. Esses quatro isolados foram testados em folhas destacadas para confirmação dos resultados, novamente observando-se redução na intensidade da doença em relação à testemunha, que continha apenas água destilada. O último experimento foi conduzido em casa-de-vegetação, comparando-se os quatro isolados com as testemunhas (pulverização apenas com água destilada e com o fungicida sistêmico epoxiconazol). Os quatro isolados proporcionaram o nível de controle da doença similar ao obtido pelo uso do fungicida (aproximadamente 100%). A identificação baseada no perfil de ácidos graxos identificou os isolados UFV 025, UFV 033 e UFV 080 como Bacillus cereus, e o isolado UFV 070 como Bacillus sphaericus. Com os resultados dos experimentos podemos concluir que bactérias residentes do filoplano de cafeeiro podem ser isoladas e selecionadas como potenciais agentes de biocontrole de ferrugem

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:37:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2275895 bytes, checksum: d1f4e8c4d24b299b4ddf661a62268693 (MD5) Previous issue date: 2011-02-17 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Biodiversity is one of the most valuable resources in the earth and in order to its maintenance and best use, there is a need of its profound knowledge on the basis of taxonomic and ecological works. The studies of the nematodes communities in soils under cultivation or native vegetation is becoming an area of growing interest in recent years. In relation to communities of nematodes in natural ecosystems, the studies are justified by the great representative of the Nematoda phylum and by the need to understand the nematodes' ecology in their original setting, since the agricultural important species, that have adapted in the cultivated areas, originated from natural ecosystems. The aim was to identify longidorid species associated with natural vegetation in Atlantic Forest, Savannah and in growing areas in Minas Gerais. Complementarily intended determine and compare the richness and diversity of phytonematodes communities in these areas. Seven species of Xiphinema (X. brasiliense, X. diffusum, X. elongatum, X. ensiculiferum, X. krugi, X. variegatum,and X. surinamense) and two species of Xiphidorus (X. cf. parthenus and X. amazonensis) were found, and beyond two new species to science, Xiphinema sp. and Xiphidorus sp., not yet identified. Populations of X. krugi, X. elongatum, X. ensiculiferum and Xiphidorus cf. parthenus showed great morphometric variability. Because of the great morphometric and morphological variabilities reported in the literature, the morphometric data of X. krugi populations were subjected to principal component analysis with standards population available in the literature. This analysis indicated that variations in morphometric characters may reflect differences in these genotypes, whereas they were grouped with three of these standards. Three populations appear to represent a new genotype not yet characterized. The phytonematodes communities associated with cover crops from Savannah and Atlantic Forest showed greater diversity and richness. The highest abundance and richness were present in Atlantic Forest communities and the greater diversity in the communities associated with Savannah. The genera with significant populations were Discocriconemella spp. Macroposthonia spp. Meloidogyne spp. and Rotylenchus spp. in Atlantic Forest, Rotylenchulus spp. and Rotylenchus spp. in Savannah, and Helicotylenchus spp. Meloidogyne spp. and Rotylenchulus spp. in growing areas. / A biodiversidade é um dos recursos mais valiosos da Terra e, para a sua manutenção e melhor aproveitamento, há a necessidade de que seja conhecida em maior profundidade com base em trabalhos taxonômicos e ecológicos. Conhecer as comunidades de nematoides em solos sob cultivo ou vegetação natural, vem se tornando uma área de interesse crescente, nos últimos anos. Em relação às comunidades de fitonematoides em ecossistemas naturais, os estudos se justificam pela grande representatividade do filo Nematoda e pela necessidade de compreender a ecologia desses em seu ambiente original, uma vez que as espécies de importância agrícola originaram-se de ecossistemas naturais que se adaptaram às áreas cultivadas. Assim, objetivou-se identificar espécies de longidorídeos associados à vegetação natural de Mata Atlântica, Cerrado e em área de cultivo em municípios de Minas Gerais, além de determinar e comparar a riqueza e diversidade das comunidades de fitonematoides presentes nessas áreas. Encontraram-se sete espécies de Xiphinema (X. brasiliense, X. diffusum, X. elongatum, X. ensiculiferum, X. krugi, X. variegatum e X. surinamense) e duas espécies de Xiphidorus (X. cf. parthenus eX. amazonensis), além de duas novas espécies para a ciência, Xiphinema sp. e Xiphidorus sp., ainda não identificadas. Populações de X. krugi, X. elongatum, X. ensiculiferume Xiphidorus cf. parthenus apresentaram grande variabilidade morfométrica. Em vista da grande variabilidade morfométrica e morfológica relatada na literatura, os dados morfométricos obtidos das populações de X. krugi, foram submetidos a análise de componente principal juntamente com populações padrões, disponíveis na literatura. Essa análise indicou que as variações nos caracteres morfométricos podem refletir diferenças nos genótipos dessas, visto que se agruparam com três desses padrões. Três populações pareceram representar um novo genótipo ainda não caracterizado. As comunidades de fitonematoides associadas às coberturas vegetais de Cerrado e Mata Atlântica apresentaram maiores diversidade e riqueza. A maior abundância e riqueza estavam presentes nas comunidades de Mata Atlântica e a maior diversidade nas comunidades associadas ao Cerrado. Os gêneros com populações mais expressivas foram Discocriconemella spp., Macroposthonia spp. Meloidogyne spp. e Rotylenchus spp. em Mata Atlântica, Rotylenchulus spp. e Rotylenchus spp. no Cerrado, e em área de cultivo, Helicotylenchus spp., Meloidogyne spp. e Rotylenchulus spp.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:37:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 4648060 bytes, checksum: 02f10a0cc1d0bf768aa16e7168f46ef9 (MD5) Previous issue date: 2010-02-23 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Nowadays, Brazil is the largest producer of papaya and the third largest exporter of fruit in the world. Papaya can be affected by various diseases that prevent them from being marketed and, consequently, the exportation of the fruit. Among the fungal diseases, smallpox, or blight, caused by Asperisporium caricae, is one of the diseases that affect the orchards in all regions. This disease interferes directly in the profitability and viability of the production. Beyond its incidence on leaves, it can also cause lesions on the fruit surface, making them unsuitable for marketing. It s almost impossible to find publications related to the biology of the fungus and to the phylogenetic position of the species. A. caricae is considered by many authors as a biotrophic pathogen, based on the difficulty of cultivation and sporulation in vitro. Some aspects of the taxonomic genus Asperisporium are controversial, such as proving Mycosphaerella as a teleomorph organism, the phylogenetic relationships with other genera of the complex cercosporoidal and the separation of the genus Asperisporium from Passalora. Other authors relate M. caricae to the anamorph Phoma caricae-papaya (= Ascochyta caricapapaya), causal agent of stalk rot. However, through the manual identification the genera Phoma and Ascochyta are related to the teleomorph Didymella. The differences between the genders Didymella and Mycosphaerella is the presence of pseudo paraphyses in the last one. This feature is difficult to visualize in histological sections under a light microscope, thus being liable to misunderstand at the time of identification. The aims of the study were the isolation of A. caricae in pure culture, examining the growth and sporulation of the isolates in seven different media and make a morphological characterization of isolates. Beyond these, other aim was to verify the relationship between Asperisporium caricae and Mycosphaerella caricae by comparing nucleotides of three DNA regions (ITS rDNA, LSU and mtSSU) and the phylogenetic relationships with other genera of the complex cercosporoidal, by comparing the sequences obtained to sequences published in databases. It was possible to cultivate A. caricae in all tested media. The culture medium potato dextrose agar, supplemented or not with amino acids, were those who presented the best source to the fungus. Moreover, the species produced spores in vitro in all tested media, except in the medium consisting of papaya leaves. Through the molecular data and clusters obtained, it can be concluded that A. caricae belongs to the family Mycosphaerellaceae grouping it with species of true Passalora and Mycosphaerella. M. caricae was grouped with species of the genus Phoma, Ascochyta and Didymella, representatives of the order Pleosporales. Thus, it is possible that M. caricae is a species of Didymella and teleomorph of Phoma carica-papaya. / O Brasil é o maior produtor mundial de mamão e o terceiro maior exportador da fruta. O mamoeiro pode ser afetado por diversas doenças que inviabilizam a sua comercialização e, consequentemente, a exportações de frutos. Dentre as doenças fúngicas, a varíola, ou pinta preta, causada por Asperisporium caricae, é uma das doenças que afetam os pomares em todas as regiões produtoras. Interfere diretamente na rentabilidade e viabilidade da produção, pois, além de incidir em folhas, pode também causar lesões na superfície dos frutos, tornando-os inadequados para a comercialização. Trabalhos referentes à biologia do fungo são quase inexistentes, bem como sobre o posicionamento filogenético da espécie. A. caricae é considerado por muitos autores como biotrófico, baseado na dificuldade de cultivo e esporulação in vitro. Alguns aspectos taxonômicos do gênero Asperisporium são controversos, como a comprovação de Mycosphaerella como teleomorfo, o relacionamento filogenético com os demais gêneros do complexo cercosporóide e a separação de Asperisporium do gênero Passalora. Outros autores relacionam M. caricae ao anamorfo Phoma caricae-papaya (=Ascochyta caricae-papayae), agente etiológico da podridão peduncular. Contudo, por meio dos manuais de identificação os gêneros Phoma e Ascochyta estão relacionados ao teleomorfo Didymella. A distinção entre os gêneros Didymella e Mycosphaerella está na presença de pseudoparáfises neste último, sendo esta característica dificilmente visualizada em cortes histológicos em microscópio de luz, deste modo, sendo passível o equívoco no momento da identificação. Os objetivos do trabalho foram: realizar o isolamento de A. caricae em cultura pura, analisar o crescimento e a capacidade de esporulação dos isolados em sete diferentes meios de cultura e proceder a caracterização morfológica dos isolados; verificar a relação entre Asperisporium caricae e Mycosphaerella caricae por meio da comparação de nucleotídeos de três regiões do DNA (ITS do rDNA, LSU e mtSSU), assim como o relacionamento filogenético com os demais gêneros pertencentes ao complexo cercosporóide, por meio da comparação das sequências obtidas com as sequências publicadas em bancos de dados. Foi possível o cultivo de A. caricae em todos os meios de cultura testados, sendo que os meios de cultura batata-dextrose-ágar, suplementado ou não com aminoácidos, foram os que proporcionaram melhor desenvolvimento ao fungo. Além disso, a espécie produziu esporos in vitro em todos os meios de cultura testados, exceto no meio composto por folhas de mamão. Por meio dos dados moleculares e dos agrupamentos obtidos, pode-se concluir que A. caricae pertence à família Mycosphaerellaceae, agrupando com espécies de Passalora verdadeiras e de Mycosphaerella. M. caricae agrupou-se com espécies pertencentes ao gênero Phoma, Didymella e Ascochyta, representantes da ordem Pleosporales. Com isso, é possível que M. caricae seja uma espécie de Didymella, e teleomorfo de Phoma caricae-papayae.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:37:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 992783 bytes, checksum: 865bebc902b66a9a2f40688ff9d50a96 (MD5) Previous issue date: 2012-02-17 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Brazil is the second world soybean producer. Currently, the main limiting factor in this crop production is the Asian soybean rust (ASR) whose etiologic agent is the fungus Phakopsora pachyrhizi. The rust fungi are obligate parasites that during their interaction with the plant, they secrete effector proteins that manipulate host metabolism and interfere with their defense responses. Some of these effector proteins, called Avr proteins, are recognized by encoded proteins by resistant R genes, which usually trigger a hypersensitivity response (HR) and resistance phenotype. At least, there are five described R genes (Rpp1 to Rpp5) that confer resistance to ASR and several genes that encode secreted proteins by this fungus were recently identified. However, the effector proteins (Avr) recognized by encoded proteins by Rpp genes were not identified yet. Since there is not a transformation assay protocol for P. pachyrhizi, a strategy to identify this fungus Avr proteins is the transient expression of R proteins in resistant varieties cytoplasm and the observation of a possible HR response. Thus, the specific objectives of this work were: to try to establish a methodology for transient expression in soybean by agroinfiltration using the gene GUSPlus as reporter gene; to establish a protocol for translocation of effector proteins by the type III secretion system (SST3) of Pseudomonas syringae pv. glycinea race 4 (Psg4), and also to evaluate the effector activity of candidate genes in soybean resistant genotypes to the isolate PPUFV02 of P. pachyrhizi. There was no expression of the gene GUSPlus in Agrobacterium tumefaciens strain EHA105 infiltrated soybean leaves, while using the same inoculum preparation and concentration of bacterial cells, there was a consistent expression of the gene GUSPlus in tobacco. This result derailed the use of agroinfiltration in the functional study of candidate genes in soybean effectors. All soybean genotypes evaluated were susceptible to Psg4, demonstrating that the viability to use this bacterial on functional analysis of candidate effector proteins mediated by SST3. Better symptoms reproducibility was observed with inoculation by vacuum infiltration of Psg4 in a bacterial concentration of OD600 = 0,01, for allowing a gradually symptoms analysis. The encoded protein by avrB gene is recognized by the RPG1 gene product, which is present in some genotypes of soybean. The construction pVSP61-avrB was able to induce HR in the genotype Williams 82, that contains the corresponding gene RPG1 and to induce it in the genotypes Conquista and PI 459025. This result allowed the use of this construction as a positive control for functional analysis of P. pachyrhizi putative effector proteins. Because of this, 12 sequences were cloned into vector pEDV6. This vector allows the expression of proteins of interest fused to secretion signal sequences by SST3, aiming its subsequent translocation into the cytosol. Nine from the constructions with pEDV6-PHPA_RSP transformed into Psg4 were submitted to functional analysis. The inoculated plants varied in severity of observed symptoms and no HR phenotype was observed. Instead, it was observed reduction, increase or absence of a significant change in the symptoms evolution of genotype-dependent manner in treated plants. These studies allowed a first screening of P. pachyrhizi effector candidates, selecting the candidates PHPA_RSP_71 and PHPA_RSP_78 as the most promising candidates for further detailed analysis. / O Brasil é o segundo maior produtor mundial de soja. Atualmente, o principal fator limitante na produção desta cultura é a ferrugem asiática da soja (FAS), cujo agente etiológico é o fungo Phakopsora pachyrhizi. Os fungos causadores das ferrugens são parasitas obrigatórios que durante sua interação com a planta secretam proteínas efetoras que manipulam o metabolismo do hospedeiro e interferem com suas respostas de defesa. Algumas dessas proteínas efetoras, denominadas proteínas Avr, são reconhecidas pelas proteínas codificadas por genes de resistência R, o que desencadeia a resposta de hipersensibilidade (HR) e fenótipo de resistência. Já foram descritos pelo menos cinco genes R (Rpp1 a Rpp5) que conferem resistência a FAS e vários genes que codificam proteínas secretadas por esse fungo foram recentemente identificados. Todavia, ainda não foram identificadas as proteínas efetoras (Avr) reconhecidas pelas proteínas codificadas pelos genes Rpp. Como não existe ainda um sistema de transformação para P. pachyrhizi, uma estratégia para identificar as proteínas Avr desse fungo é a expressão transiente das proteínas efetoras candidatas no citoplasma de variedades resistentes e a observação do possível desencadeamento de resposta de HR. Desta forma, os objetivos específicos deste trabalho foram tentar estabelecer uma metodologia de expressão transiente em soja via agroinfiltração utilizando como gene repórter o gene GUSPlus; estabelecer um protocolo de translocação de proteínas efetoras via sistema de secreção tipo III (SST3) de Pseudomonas syringae pv. glycinea raça 4 (Psg4), e também avaliar a atividade efetora de genes candidatos em genótipos de soja resistentes ao isolado monopustular PPUFV02 de P. pachyrhizi. Não se observou a expressão do gene GUSPlus em folhas de soja agroinfiltradas com Agrobacterium tumefaciens estirpe EHA105, enquanto que utilizando do mesmo preparo de inóculo e concentração de células bacterianas, observou-se a expressão consistente do gene GUSPlus em tabaco. Este resultado invibializou o uso de agroinfiltração no estudo funcional de genes efetores candidatos na soja. Todos os genótipos de soja avaliados foram suscetíveis a Psg4, demonstrando a vialibilidade do uso desta bactéria na análise funcional de proteínas candidatas a efetores mediada por SST3. Melhor reprodutibilidade de sintomas foi observada com a inoculação por infiltração a vácuo de Psg4 numa concentração bacteriana de OD600=0,01, por permitir uma análise dos sintomas de forma gradual. O produto do gene avrB é reconhecido pela produto do gene RPG1, presente em alguns genótipos de soja. A construção pVSP61-avrB, foi capaz de induzir HR no genótipo Williams 82, que contêm o gene RPG1 correspondente, e nos genótipos Conquista e PI 459025. Este resultado permitiu o uso desta construção como controle positivo para a análise funcional de proteínas efetoras putativas de P. pachyrhizi. Assim, 12 sequências foram clonadas no vetor pEDV6. Este vetor permite a expressão de proteínas de interesse fusionadas a sequências-sinais de secreção via SST3, visando a sua posterior translocação para o citosol. Nove das construções com pEDV6-PHPA_RSP transformadas em Psg4 foram submetidas à análise funcional. As plantas inoculadas variaram quanto à severidade dos sintomas observados e não foi constatado fenótipo de HR. Ao invés disso, nos tratamentos foi observado redução, aumento ou ausência de alteração significativa na evolução dos sintomas, de maneira genótipo-dependente. Esses estudos permitiram uma primeira triagem de candidatos a efetores de P. pachyrhizi, selecionando os candidatos PHPA_RSP_71 e PHPA_RSP_78 como os mais promissores para estudos futuros mais detalhados.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:37:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1056837 bytes, checksum: 147af3aea5c0fd4d6961921a210a152c (MD5) Previous issue date: 2012-02-10 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Cowpea mild mottle virus (CpMMV), the causal agent of stem necrosis disease, has drawn attention of soybean producers in recent years due to productivity losses in the main producing regions of Brazil. The disease was first recorded in the Midwest region of Brazil in the 2000/01 soybean season and rapidly spread throughout the country in the following years. CpMMV is usually hard to diagnose due to its wide range of symptoms while the occurrence of asymptomatic soybean cultivars complicates genotypic selection in breeding programs. Serological methods for viral detection require the use of an antiserum of good quality to achieve specificity and sensitivity. The entire coat protein sequence of a Brazilian CpMMV isolate was cloned into a bacterial expression vector and transformed into Escherichia coli BL21::DE3 for in vitro expression. The coat protein, fused to a 6 His-tag, was purified under denaturing conditions by affinity chromatography using a Ni-NTA resin. After renaturation, the integrity and identity of purified recombinant protein was confirmed by SDS-Page and MALDI-ToF/Tof mass spectrometer analyses. New Zealand rabbits were immunized with increasing amounts of the recombinant protein. The specificity and sensitivity of the antisera was shown by Western blot and indirect ELISA assays. The polyclonal antisera raised against recombinant coat protein proved to be a reliable tool for CpMMV detection. / O Cowpea mild mottle virus (CpMMV), agente causal da necrose da haste, tem chamado a atenção dos produtores de soja nos últimos anos devido às perdas de produtividade geradas nas principais regiões produtoras do Brasil. A doença foi relatada pela primeira vez na região Centro-Oeste do Brasil, na safra de 2000/01, e rapidamente se espalhou por todo o país nos anos seguintes. Além disso, tem sido relatada a ocorrência de cultivares de soja assintomáticas, o que dificulta a seleção de genótipos para programas de melhoramento. Os métodos sorológicos para a detecção viral requerem o uso de um antissoro de boa qualidade para alcançar especificidade e sensibilidade. A sequência completa da capa proteica de um isolado brasileiro de CpMMV (Bahia) foi clonado em um vetor de expressão bacteriano e transformado em Escherichia coli BL21: DE3 para expressão in vitro. A proteína capsidial ligada a uma cauda de histidina foi purificada sob condições desnaturantes através de cromatografia de afinidade, utilizando uma resina Ni-NTA. Depois da renaturação, a integridade e a identidade da proteína recombinante purificada foi confirmada por SDS-PAGE e análise de espectrometria de massa (MALDI-ToF/ToF). Dois coelhos da raça Nova Zelândia foram imunizados com quantidades crescentes da proteína recombinante. A especificidade e sensibilidade do antissoro foram avaliadas por Western blot e ELISA indireto. O antissoro policlonal a partir da proteína recombinante da capa proteica provou ser uma ferramenta confiável e eficiente para a detecção CpMMV.