ROCHA, T. M. Efeito anti-inflamatório e antinociceptivo de alcaloides imidazólicos de Pilocarpus microphyllus: estudo in vitro, in vivo e in silico. 2017. 96 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Universidade Federal do Caerá, Fortaleza, 2017. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-02-14T14:02:28Z No. of bitstreams: 1 2017_dis_tmrocha.pdf: 1223846 bytes, checksum: 63fb693b9125cae2e1b45e528b5ba44c (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-02-14T14:02:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_dis_tmrocha.pdf: 1223846 bytes, checksum: 63fb693b9125cae2e1b45e528b5ba44c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-14T14:02:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_dis_tmrocha.pdf: 1223846 bytes, checksum: 63fb693b9125cae2e1b45e528b5ba44c (MD5) Previous issue date: 2017-02-07 / Medicinal plants have been shown to be promising as a source of alternative therapies to modulate the inflammatory response, including inflammatory pain. Pilocarpus microphyllus, popularly known as jaborandi, is a species native to the Northeast and widely exploited by the pharmochemical industry for the extraction of pilocarpine, a cholinergic imidazole alkaloid. Its leaves also have other alkaloids, such as epiisopilosine (EPIL) and epiisopiloturine (EPIT), obtained from industrial waste. Preliminary studies determined the anti-inflammatory and antinociceptive action of epiisopiloturine in mice. On the above, the aim of the present study was to investigate the anti-inflammatory and antinociceptive potential of the alkaloids EPIT and EPIL. For this, experimental models of inflammation in human neutrophils, mechanical hyperalgesia induced by carrageenan in mice (Von Frey electronic) and in silico study were used. In assessing the anti-inflammatory potential, both EPIT as EPIL (1 - 100 μg/mL) inhibited neutrophils degranulation (5 x 106 cells/mL) measured by myeloperoxidase activity in activated neutrophils by 1 μM fMLP (CI40 = 45.2 and 62.3 μg / mL, respectively) or 0.1 μM PMA (CI40 = 14.3 and 29.5 μg / mL, respectively). This effect was related to the modulation of the oxidative metabolism, in which EPIT and EPIL inhibited up to 44 and 74%, respectively, the production of reactive oxygen species (ROS) determined by chemiluminescence - luminol probe. In addition, it was observed that EPIT and EPIL also reduced the Ca2+ influx in the cell by 46 and 55%, respectively, and inhibited the phosphorylation of the cytosolic NF-κB, thus preventing its translocation to the nucleus. It is noteworthy that the anti-inflammatory and antioxidant actions of EPIT and EPIL occurred without affecting cel viability (MTT test and lactate dehydrogenase enzyme activity). In the study of antinociceptive activity, EPIT and EPIL (0.3 and 1 mg / kg, i.p.) inhibited carrageenan-induced inflammatory hypernociception (300 μg / paw) in mice and significantly reduced MPO levels by up to 87 and 74%, respectively, an indirect measure of neutrophil migration. Pretreatment of mice with EPIT (1 mg / kg, i.p.) and EPIL (0.3 mg / kg, i.p.) reduced the expression of COX-2 in subplantar carrageenan-induced tissue in mice. EPIT and EPIL were able to establish strong interactions with amino acid residues considered essential for binding to the COX-1 and COX-2 isoforms. The results obtained suggest that the anti-inflammatory and antinociceptive activity of imidazole alkaloids, EPIT and EPIL, are related, at least in part, to a modulation in the activation and accumulation of the innate immune system cells (neutrophils) in inflammatory focus, possibly by reducing intracellular calcium influx, activation of NF-кB and COX-2 expression. / As plantas medicinais têm se mostrado promissoras como fonte de novos fármacos para modular a resposta inflamatória, incluindo a dor inflamatória. Pilocarpus microphyllus, conhecida popularmente como jaborandi, é uma espécie nativa do Nordeste e amplamente explorada pela indústria farmoquímica para a extração da pilocarpina, um alcaloide imidazólico colinérgico. Suas folhas também possuem outros alcaloides, como epiisopilosina (EPIL) e epiisopiloturina (EPIT), obtidos de resíduo industrial. Estudos preliminares determinaram a ação anti-inflamatória e antinociceptiva da epiisopiloturina em camundongos. Diante do exposto, o objetivo do presente estudo foi investigar o potencial anti-inflamatório e antinociceptivo dos alcaloides EPIT e EPIL com determinação do possível mecanismo de ação. Para tanto, foram empregados modelos experimentais de inflamação em neutrófilos humanos, hiperalgesia mecânica induzida por carragenina em camundongos (Von Frey eletrônico) e estudo in silico. Na avaliação do potencial anti-inflamatório, foi observado que tanto EPIT quanto EPIL (1–100 μg/mL) inibiram a degranulação de neutrófilos (5x106 células/mL) determinada pela liberação de mieloperoxidase (MPO) induzida por PMA 0,1μM (CI40 = 14,3 e 29,5 μg/mL, respectivamente) ou fMLP 1μM (CI40 = 45,2 e 62,3 μg/mL, respectivamente). Esse efeito mostrou-se relacionado com a modulação do metabolismo oxidativo, no qual EPIT e EPIL inibiram em até 44 e 74%, respectivamente, a produção de espécies reativas de oxigênio (EROs) determinada por quimioluminescência – sonda luminol. Ademais foi observado que EPIT e EPIL também reduziram o influxo de Ca2+ na célula em 46 e 55%, respectivamente e inibiram a fosforilação do NF-κB citosólico, impedindo assim sua translocação para o núcleo. Destaca-se que as ações anti-inflamatória e antioxidante de EPIT e EPIL ocorreram sem afetar a viabilidade celular (teste do MTT e atividade da enzima lactato desidrogenase). No estudo da atividade antinociceptiva, EPIT e EPIL (0,3 e 1 mg/kg, i.p.) inibiram a hipernocicepção inflamatória induzida por carragenina (300 µg/pata) em camundongos e reduziram significativamente os níveis de MPO em até 87 e 74%, respectivamente, uma medida indireta da migração neutrofílica. O pré-tratamento dos camundongos com EPIT (1 mg/kg, i.p.) e EPIL (0,3 mg/kg, i.p.) reduziu a expressão de COX-2 em tecido subplantar induzida por carragenina em camundongos. EPIT e EPIL estabeleceram fortes interações com resíduos de aminoácidos considerados essenciais para a ligação com as isoformas COX-1 e COX-2. Os resultados obtidos sugerem que a atividade anti-inflamatória e antinociceptiva dos alcaloides imidazólicos, EPIT e EPIL, está relacionada, pelo menos em parte, a uma modulação na ativação e no acúmulo de células do sistema imune inato (neutrófilos) no foco inflamatório, possivelmente por redução do influxo de cálcio intracelular, ativação do NF-кB e expressão de COX-2.

SILVA, A. A. V. Estudo comparativo das ações vasodilatadoras de (+)-Óxido rosa, β-Citronelol e Geraniol em aorta de rato. 2017. 60 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2017. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-03-27T16:20:34Z No. of bitstreams: 1 2017_dis_aavsilva.pdf: 1313833 bytes, checksum: 79490ce67b12562ba8a4d3c371215227 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-03-27T16:20:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_dis_aavsilva.pdf: 1313833 bytes, checksum: 79490ce67b12562ba8a4d3c371215227 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-27T16:20:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_dis_aavsilva.pdf: 1313833 bytes, checksum: 79490ce67b12562ba8a4d3c371215227 (MD5) Previous issue date: 2017-02-09 / (+)-Rose oxide (OR), β-citronellol (BC) and geraniol (GE) are chemically related monoterpenes found naturally in several essential oils, such as in bulgarian rose and geranium oil. While the pharmacological actions of OR are still scarce, some reports show that BC and GE act potentially as inhibitors of Ca2+ channels in vascular smooth muscle. As chemically related molecules, the objective of this study was to compare the effects of OR, BC and GE on aortic contractility isolated from rats. Isometric records were obtained from aortic rings through a data acquisition system. In aortic rings with intact endothelium, OR, BC and GE (1 - 3000 μM) relaxed the contraction induced by phenylephrine with EC50 values [I.C. 95%] of 1715.9 [1386.6-2123.4], 342.6 [110.2-1065.8] and 930.8 [758.8-1141.7] μM, respectively. Already in KCl induced contraction (60 mM) the OR had EC50 of 550.6 [245.6-1234.4] μM, BC of 98.3 [42.8 - 225.7] μM and GE of 217,5 [156.4-302.5] μM. The vasorelaxant effects of monoterpenes on contractions induced by phenylephrine or KCl were not significantly (P> 0.05, Mann-Whitney) altered by endothelial removal, treatment with L-NAME or tetraethylammonium. The EC50 values of the monoterpenes in phorbol ester pre-contracted preparations (973.6 [389.7-2432.2] μM for OR, 77.8 [14.4-419.2] μM for BC and 151, 2 [46.21 - 494.6] μM for GE) and U46619 (533.6 [212.4-1340.8] μM for OR, 106.7 [53.6 - 212.1] μM for BC and 386,8 [207.1 - 722.4] μM for GE), were significantly lower (p <0.01, Mann-Whitney) than the values obtained in pre-contraction induced by phenylephrine in the aorta. In Ca2+-free medium in the presence of KCl (60 mM), contractions caused by the addition of Ca2+ were significantly reduced by OR, BC and GE (from 600μM), but when phenylephrine was added instead of K+, there was no decrease in the magnitude of the contractile response. The present study suggests that the vasorelaxant activity of these monoterpenes in rat aorta involves inhibition of voltage-operated calcium channels in the following order of pharmacological potency: BC > GE > OR. / (+)-Óxido rosa (OR), β-citronelol (BC) e geraniol (GE) são monoterpenos quimicamente relacionados naturalmente encontrados em diversos óleos essenciais, como na rosa búlgara e óleo de gerânio. Enquanto as ações farmacológicas do OR são ainda escassas, alguns relatos preliminares apontam que BC e GE agem potencialmente como inibidores de canais de Ca2+ no músculo liso vascular. Por isso, o objetivo deste estudo foi comparar os efeitos do OR, BC e GE na contratilidade da aorta isolada de ratos. Registros isométricos foram obtidos a partir de anéis de aorta através de sistema de aquisição de dados. Em anéis de aorta com endotélio intacto, OR, BC e GE (1 – 3000 µM) relaxaram a contração induzida por fenilefrina com valores de CE50 [I.C. 95%] de 1715,9 [1386,6 – 2123,4], 342,6 [110,2 – 1065,8] e 930,8 [758,8 – 1141,7] µM, respectivamente. Já em contração induzida por KCl (60 mM), OR teve CE50 de 550,6 [245,6 – 1234,4] µM, BC de 98,3 [42,8 – 225,7] µM e GE de 217,5 [156,4 – 302,5] µM. Os efeitos vasorrelaxantes dos monoterpenos sobre as contrações induzidas por fenilefrina ou KCl não foram significativamente (P > 0,05, Mann-Whitney) alterados pela remoção do endotélio, tratamento com L-NAME ou tetraetilamônio. Os valores de CE50 dos monoterpenos nas preparações pré-contraídas com éster de forbol (973,6 [389,7 – 2432,2] µM para OR; 77,8 [14,4 – 419,2] µM para BC e 151,2 [46,21 – 494,6] µM para GE) e U46619 (533,6 [212,4 – 1340,8] µM para OR, 106,7 [53,6 – 212,1] µM para BC e 386,8 [207,1 – 722,4] µM para GE), foram significantemente menores (p < 0,01, Mann-Whitney) do que os valores obtidos na pré-contração induzida por fenilefrina em aorta.Em meio sem Ca2+ na presença de KCl (60 mM), as contrações provocadas pela adição de Ca2+ foram significativamente reduzidas por OR, BC e GE (a partir de 600µM), mas quando fenilefrina foi adicionada em lugar de K+, não ocorreu diminuição da magnitude da resposta contrátil. O presente estudo sugere que a atividade vasorrelaxante desses monoterpenos em aorta de rato envolve inibição de canais de cálcio operados por voltagem na seguinte ordem de potência farmacológica: BC > GE > OR.

CALOU, I. B. F. Avaliação dos efeitos comportamentais, neuroquímicos e imunohistoquímicos de Myracrodruon urundeuva Fr. All em modelo experimental de doença de Parkinson. 2013. 168 f. Tese (Doutorado em Farmacologia) - Faculdade de Farmácia, odontologia e e Enfermagem, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2013. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-04-11T16:58:55Z No. of bitstreams: 1 2013_tese_ibfcalou.pdf: 6564502 bytes, checksum: 573ba3e96b31151c0a56f3bf65fbc346 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-04-11T16:59:04Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_tese_ibfcalou.pdf: 6564502 bytes, checksum: 573ba3e96b31151c0a56f3bf65fbc346 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-11T16:59:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_tese_ibfcalou.pdf: 6564502 bytes, checksum: 573ba3e96b31151c0a56f3bf65fbc346 (MD5) Previous issue date: 2013-08-09 / Parkinson's disease (PD) is the second most common neurodegenerative disorder being characterized by dopaminergic depletion in the nigrostriatal pathway. The pharmacological treatment of PD is palliative care, besides presenting a disabling adverse reaction profile. Neuroinflammation and oxidative stress (OE) are involved in the pathophysiology of PD and are important targets for treatments through neuroprotection. Myracrodroun urundeuva (MU) has secular and widespread use in the Brazilian northeast due to its remarkable anti-inflammatory and antioxidant properties. In the present study, we evaluated the effect of the liquid hydralcohol extracts (EHAMU: 5, 10, 20 and 40mg / kg) and dry (ESMU: 10 and 20 mg / kg) MU for 15 days orally in the experimental model of induced PD By unilateral striatal injection of 6-Hydroxydopamine. In the open field test, no changes were observed in the animal movement, however, in the Rota Rod test, an improvement in the motor coordination was observed in animals submitted to striatal lesion and treated with EHAMU at doses of 10, 20 and 40 mg / kg And with ESMU at doses of 10 and 20 mg / kg. In the apomorphine-induced rotational test, EHAMU and ESMU at a dose of 20mg / kg reduced the number of contralateral rotations in animals with unilateral striatal lesion by 77.8% and 86.2%, respectively, in the same dose as the liquid and dry extracts Were able to revert the striatal dopaminergic depletion by 71.7% and 100%, respectively, indicating an optimal neuroprotective effect of the plant, which was confirmed by Nissl staining and by immunocytochemistry for tyrosine hydroxylase performed on the injured striatal tissue. The antioxidant effect of the drug was evidenced in the in vitro test of DPPH where the dry extract at 25μg / ml had a similar effect to the control (vitamin E). We observed that the antioxidant effect of the extracts tested was not related to the ability to sequester superoxide oxidase by the in vitro superoxide dismutase test. The anti-inflammatory and antinociceptive potential of the extracts were also clearly observed in the paw edema models induced by carrageenan and Hargreaves, respectively, with significant results at doses of 10 and 20mg / kg. We also evaluated its action on neuroinflammation by means of immunohistochemistry for COX-2, iNOS, TNF-α in the cortex, striatum and CA1, CA3 regions to verify the neuroprotection mechanism of EHAMU (20 and 40mg / kg, vo - 15 days) And hippocampal parahippocampal gyrus, with the exception of the CA1 region, a significant decrease in tissue marking for these inflammation markers indicating a neuroprotection mechanism for both the striatal dopaminergic neurons and cortical and hippocampal neurons involved in dementia presented by patients with The disease in more advanced stages. In the striatal tissue, we also observed a dramatic decrease in NF-κB transcription factor labeling in animals treated with EHAMU (20 and 40mg / kg, v.o-15 days). We observed that EHAMU at a dose of 40mg / kg decreased the microglial activation by means of a marked decrease in the marking for OX-42, as well as the decrease in astrogliosis observed by the GFAP insipient marking in the striatum submitted to the lesion. MU therefore represents a viable and efficient option of neuropathy, presenting results that encourage clinical studies so that a new therapeutic strategy emirates not as a mere palliative but as a therapy that decreases or at least slows the progression of the disease . / A Doença de Parkinson (DP) é o segundo distúrbio neurodegenerativo mais comum sendo caracterizado pela depleção dopaminérgica na via nigroestriatal. O tratamento farmacológico da DP é meramento paliativo além de apresentar um perfil de reações adversas incapacitante. A neuroinflamação e o estresse oxidativo (EO) estão envolvidos na fisiopatologia da DP sendo alvos importantes para tratamentos por meio da neuroproteção. A Myracrodroun urundeuva (MU) tem uso secular e bastante difundido no nordeste brasileiro por suas propriedades antiinflamatórias e antioxidantes marcantes. Nesta pesquisa, avaliamos o efeito dos extratos hidralcoólicos líquido (EHAMU: 5, 10, 20 e 40mg/kg) e seco (ESMU:10 e 20 mg/kg) da MU por 15 dias, via oral, no modelo experimental de DP induzido pela injeção estriatal unilateral de 6-Hidroxidopamina. No teste do campo aberto não foi observa qualquer alteração na movimentação animal, não obstante, no teste do Rota Rod foi observado uma melhora na coordenação motora nos animais submetidos à lesão estriatal e tratados com EHAMU nas doses de 10, 20 e 40 mg/kg e com ESMU nas doses de 10 e 20 mg/kg. No teste rotacional induzido por apomorfina, o EHAMU e o ESMU na dose de 20mg/kg reduziram 77,8% e 86,2%, respectivamente o número de rotações contralaterais em animais com lesão estriatal unilateral, na mesma dose os extratos líquido e seco conseguiram reverter a depleção dopaminérgica estriatal em 71,7% e 100% respectivamente indicando um ótimo efeito neuroprotetor da planta, que foi confirmado pela coloração de Nissl e pela imunhistoquímica para Tirosina hidroxilase realizadas no tecido do estriado lesionado. O efeito antioxidante da droga foi evidenciado no teste in vitro do DPPH onde o extrato seco na concentração de 25μg/ml teve efeito similar ao controle (vitamina E). Observamos que o efeito antioxidante dos extratos testados não está relacionado com a capacidade de seqüestrar radiacais superóxido pelo teste in vitro da superóxido dismutase. O potencial anti-inflamatório e antinociceptivo dos extratos também foram observados com clareza nos modelos de edema de pata induzido por carragenina e Hargreaves, respectivamente com resultados significativos nas doses de 10 e 20mg/kg. Para verificar o mecanimso de neuroproteção do EHAMU (20 e 40mg/kg, v.o – 15 dias) também avaliamos sua ação sobre a neuroinflamação por meio de imunohistoquímica para COX-2, iNOS, TNF-α no córtex, estriado e regiões CA1, CA3 e Giro parahipocampal do hipocampo onde observamos, com exceção da região CA1, uma diminuição siginificativa da marcação tecidual para estes marcadores de inflamação indicando um mecanimso de neuroproteção tanto para os neurônios dopaminérgicos estriatais como para os neurônios corticais e hipocampais envolvidos na demência apresentada pelos pacientes com a doença em estágios mais evoluídos. No tecido estriatal verificamos ainda, nos animais tratados com o EHAMU (20 e 40mg/kg, v.o – 15 dias) diminuição drástica na marcação para o fator de transcrição NF-κB. Observamos que o EHAMU na dose de 40mg/kg diminui a ativação microglial por meio da diminuição acentuada da marcação para o OX-42 asssim como a diminuição da astrogliose observadas pela marcação insipiente de GFAP no estriado submetido à lesão. A MU representa, portanto uma opção viável e eficiente de neuroptoteção, apresentando resultados que encorajam os estudos clínicos para que uma nova estratérgia terapêutica emirja não como mero paliativo, mas como uma terapia que diminúa ou, pelo menos, torne mais lenta a progressão da doença.

ASSEF, A. N. B. Meio condicionado de macrófagos ativados por polissacarídeos sulfatados da alga parda Dictyota caribaea inibe a proliferação de melanoma metastático In vitro. 2017. 87 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceara, Fortaleza, 2017. / Submitted by Farmacologia Pós-Graduação (posgfarmacologia@gmail.com) on 2017-08-07T22:02:56Z No. of bitstreams: 1 2017_dis_anbassef.pdf: 2693690 bytes, checksum: 383c9eb9c2aeb8aaa7466ce9c480c742 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-08-08T12:55:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_dis_anbassef.pdf: 2693690 bytes, checksum: 383c9eb9c2aeb8aaa7466ce9c480c742 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-08T12:55:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_dis_anbassef.pdf: 2693690 bytes, checksum: 383c9eb9c2aeb8aaa7466ce9c480c742 (MD5) Previous issue date: 2017-07-24 / Cancer refers to a set of diseases related to uncontrolled proliferation and invasion of neoplastic cells into distant tissues. The tumoral tissue is complex and consists of several non-tumor cells that contribute, together with the tumor cells, to the formation of the tumor microenvironment (MIT). MIT favors the growth and development of the tumor and increase the aggressiveness of the disease. Among the non-tumor cells present in MIT, macrophages (MΦ) have prominent role. MΦ have high phenotypic plasticity, and may show anti-tumor action when activated classically (M1 phenotype) or pro-tumor, when tumor-associated MΦ undergo alternative activation (M2-like phenotype). TAMs are often related to a worse prognosis for the patient. Modulation from M0 MΦ (unstimulated) to M1 or re-education from TAM to M1 are strategies aimed at assisting in the treatment of malignant tumors. Sulfated polysaccharides (SP) from algae can act as modifiers of the biological response by regulating the activation of MΦ and potentiate the immune response against tumor cells. The objective of this work was to evaluate the immunostimulatory and antitumor potential of sulfated polysaccharides extracted from brown algae Dictyota caribaea (DCA) in vitro. Samples of DCA and conditioned medium of macrophage stimulated with DCA (CM) were initially evaluated for cytotoxicity in murine metastatic melanoma (B16-F10 cell line) by the SRB assay and activation of murine macrophages (RAW264.7 cell line) by the Griess assay. Although samples, including crude extract and fractions, were not cytotoxic, all of them activated the MΦ. Additionally, the supernatants of macrophages treated with DCA (CM DCA) were able to inhibit B16-F10 cells growth approximately 25%. The DCA F9 fraction was chosen for additional studies using CM DCA F9 due to their high yield (~40%) and better antiproliferative effect among the other fractions. In addition to increasing nitric oxide production, treatment of macrophages with DCA F9 also increased the release of TNF-α and IL-10 cytokines as measured by ELISA. Treatment of melanoma with CM DCA F9 caused a reduction on cell counting and induced morphological changes without compromising membrane integrity. In relation to the morphology, it was observed an increasing of the population percentage of shrink cells (~10%) and granularity cells (~15%). CM DCA F9 treatment also changed B16-F10 cell cycle profile. It decreased the G2/M phase. Since nitrite did not inhibit the growth of B16 F10, the antiproliferative effects observed are due to other cytotoxic substances produced by RAW264.7, e.g. TNF-α. When associated with the chemotherapeutic doxorubicin (DOX), DCA F9 but not CM DCA F9, potentiated tumor cell inhibition in vitro. In conclusion PS of D. caribaea activated MΦ for anti-tumor phenotype. Further studies are needed to improve phenotypic characterization of MΦ, as well as the antitumor effect and respective pathways related to these effects. / O câncer se refere a um conjunto de doenças relacionadas à proliferação descontrolada e invasão células neoplásicas para tecidos distantes. O câncer faz parte de um sistema complexo, constituído por diversas células não tumorais que contribuem, junto com as células tumorais, para a formação do microambiente tumoral (MIT). Por sua vez, o MIT favorece o crescimento e desenvolvimento do tumor e aumento da agressividade da doença. Dentre as células não-tumorais presentes no MIT, os macrófagos (MΦ) possuem papel destacado. Os MΦ possuem alta plasticidade fenotípica, podendo exibir ação anti-tumoral quando ativados classicamente (fenótipo M1) ou pró-tumoral, quando sofrem ativação alternativa (fenópito M2). Os MΦ associados ao tumor (TAM) apresentam fenótipo M2 peculiar e a sua presença está frequentemente relacionada a um pior prognóstico para o paciente. A modulação de MΦ M0 (não estimulados) para M1 ou reeducação de TAM para M1 são estratégias que visam auxiliar no tratamento de tumores malignos. Polissacarídeos sulfatados (PS) de algas podem atuar como modificadores da resposta biológica regulando a ativação de MΦ e potencializar a resposta destes últimos contra células tumorais. O objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial antitumoral in vitro de macrófagos ativados por PS extraídos da alga parda Dictyota caribaea (DCA). DCA e o meio condicionado de macrófagos estimulados (MC) pela DCA foram avaliadas inicialmente quanto sua citotoxicidade em melanoma metastático (linhagem murina B16-F10) in vitro pelo ensaio do SRB. Para avaliação do efeito imunoestimulante de macrófagos (linhagem murina RAW264.7) ativados pela DCA foi realizadoo ensaio de Griess. Embora nenhum PS, incluindo extrato bruto e frações, tenha sido citotóxico, todos ativaram MΦ. Os MC com DCA (MC DCA) 100 e 250 µg/mL foram capazes de inibir aproximadamente 25% do crescimento tumoral in vitro. A fração DCA F9 foi escolhida para estudos adicionais com MC DCA F9 devido ao seu alto rendimento (~40%) e destacado efeito antiproliferativo em relação as demais. Além de aumentar a produção de óxido nítrico, o tratamento de macrófagos com DCA F9 também provocou aumento da liberação das citocinas TNF-α e IL-10 medidas por ELISA. O tratamento de melanoma com MC DCA F9 nas concentrações de 100 e 250 µg/mL causou redução da contagem de células e alterações na morfologia, mas a membrana plasmática permaneceu íntegra. Em relação à morfologia, observou-se aumento das populações de células com tamanho reduzido (~10%) e com granulosidade aumentada (~15%). Além disso, MC DCA F9 alterou o perfil do ciclo celular da B16-F10. Observou-se diminuição de células em G2/M. Uma vez que o nitrito não inibiu o crescimento da B16-F10, os efeitos antiproliferativos observados se devem a outras substâncias citotóxicas produzidas pela RAW264.7, como p.ex. TNF-α. Quando associados com o quimioterápico doxorrubicina (DOX), DCA F9, mas não MC DCA F9, foi capaz de potencializar a inibição tumoral da DOX in vitro. Desta forma, concluímos que os PS de D. caribaea ativaram MΦ para perfil antitumoral. Mais estudos são necessários para complementar a caracterização fenotípica de MΦ, bem como do efeito antitumoral e respectivas vias relacionadas a estes efeitos.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2017. / Made available in DSpace on 2018-01-16T03:20:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 349408.pdf: 2288129 bytes, checksum: a4fc05044f64736707c58e4fd7f5672f (MD5) Previous issue date: 2017 / A esclerose múltipla (EM) é uma doença autoimune inflamatória do sistema nervoso central caracterizada pela desmielinização axonal dos neurônios presentes no cérebro e medula espinhal. Dentre as terapias modificadoras da doença disponíveis para o tratamento da EM, destaca-se o interferon-beta (IFN-ß). O IFN-ß é uma citocina da família dos interferons (IFNs) do tipo I com características atividades antivirais, antiproliferativas e imunomodulatórias. O IFN-ß têm sido utilizado para o tratamento da EM há mais de 20 anos, mas apesar dos comprovados benefícios promovidos por sua utilização, o tratamento com IFN-ß pela via subcutânea promove o desenvolvimento de dor e edema em pacientes com EM. Esses efeitos adversos apresentam significativo impacto sobre os pacientes com EM por promoverem redução na qualidade de vida assim como na adesão dos pacientes ao tratamento. Os mecanismos responsáveis por mediar a dor e o edema produzidos pela administração subcutânea do IFN-ß são desconhecidos até hoje, e não existe descrito na literatura nenhum modelo animal que possa ser utilizado para investigar como o IFN-ß induz tais efeitos adversos. Considerando o exposto, o presente estudo objetivou caracterizar um modelo animal de nocicepção e edema induzidos pela injeção subcutânea do IFN-ß no qual se possa investigar os possíveis mecanismos responsáveis por mediar esses efeitos adversos. Animais machos adultos das linhagens C57BL/6-UFSC e A129S2/SvPas (Selvagem e IFN-aßR1-/-) foram utilizados, e os experimentos foram conduzidos em blocos com a utilização de estratégias de randomização e cegamento. O IFN-ß, assim como o IFN-a, foi avaliado quanto à sua capacidade de produzir efeitos hiperalgésicos (Limiares mecânicos e escores de guarda da pata pós-teste de von Frey) e edematogênico (aferição de espessura da pata injetada) após sua administração subcutânea em diferentes doses (1x10², 3x10², 1x10³ UI/sítio). Em comparação com o grupo veículo, animais que receberam IFN-ß (1x10³ UI/sítio) desenvolveram hiperalgesia e edema de forma rápida e prolongada, enquanto o IFN-a promoveu os mesmos efeitos, mas de forma intermitente e menos intensa. Animais selvagens e IFN-aßR1-/- também desenvolveram hiperalgesia e edema após a administração do IFN-ß. Com exceção do inibidor de JAK1 (PF-04965842), que apresentou efeito anti-hiperalgésico parcial, as demais estratégias farmacológicas utilizadas (antagonistas TRPV1 e TRPA1, ablação de fibras TRPV1+/TRPA1+ com resiniferatoxina, inibidor de PKC, antagonista NMDAR, inibidor de canais HCN e estabilizador de mastócitos) não foram eficazes em prevenir os efeitos hiperalgésicos e edematogênico induzidos pela administração subcutânea do IFN-ß. Conjuntamente, esses dados demonstram a padronização de um modelo animal que pode ser utilizado para o estudo dos mecanismos responsáveis por mediar os efeitos adversos locais (dor e edema) promovidos pelo IFN-ß administrado via subcutânea. / Abstract : Multiple sclerosis (MS) is a central nervous system autoimmune inflammatory disease characterized by the axonal demyelination of neurons present in the brain and spinal cord. IFN-ß stands out among the disease-modifying therapies available for the treatment of MS. IFN-ß is a cytokine belonging to the type I interferons (IFNs) family, which presents hallmark antiviral, antiproliferative and immunomodulatory activities. IFN-ß has been used for the treatment of MS for more than 20 years, but despite the proven benefits from its use, IFN-ß-based treatment through subcutaneous injection promotes the development of both pain and edema in MS patients. These adverse effects have a significant impact on MS patients as they reduce quality of life as well as compliance of patients to the IFN-ß-based treatment. The mechanisms responsible for underlying the development of pain and edema upon subcutaneous injection of IFN-ß remain unknown, and there is no animal model described in the literature that could be used to investigate how IFN-ß promotes such adverse effects. Taking this into consideration, the present study aimed to characterize an animal model of both nociception and edema induced by the subcutaneous injection of IFN-ß, in which the mechanisms responsible for mediating such adverse effects can be assessed. Adult male mice from the C57BL/6-UFSC and A129S2/SvPas (Wild-type and IFN-aßR1-/-) lineages were used, and experiments were conducted in blocks with utilization of both randomization and blinding strategies. IFN-ß, likewise IFN-a, was assessed regarding its potential to induce hyperalgesic effects (Mechanical threshold and paw guarding behavior score post-von Frey test) and edema following its subcutaneous injection in different doses (1x10², 3x10², 1x10³ IU/site; s.c.). When compared to the vehicle group, animals that received IFN-ß (1x10³ IU/site) developed rapid and long-lasting hyperalgesia and edema, whilst IFN-a promoted the same effects, but in an intermittent and less intense fashion. Wild-type and IFN-aßR1-/- animals also developed hyperalgesia and edema upon IFN-ß administration. Except for the JAK1 inhibitor (PF-04965842), which produced a partial anti-hyperalgesic effect, other pharmacological strategies used (TRPV1 and TRPA1 antagonists, TRPV1+/TRPA1+ positive fibers with resiniferatoxin, PKC inhibitor, NMDAR antagonist, HCN channels inhibitor, mast cell stabilizer) were not able to prevent the hyperalgesic and edematogenic effects induced by the subcutaneous injection of IFN-ß. Collectively, these data depict the standardization of an animal model that can be used for the study of the underlying mechanism responsible for mediating the local adverse effects (pain and edema) promoted by subcutaneously administered IFN-ß.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2017. / Made available in DSpace on 2018-01-16T03:22:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 349411.pdf: 1902362 bytes, checksum: 59a7aa46435b1e0653c50e2f470ca064 (MD5) Previous issue date: 2017 / A sepse continua sendo a principal causa de mortalidade em Unidades de Terapia Intensiva (UTI). Embora progressos significativos na compreensão da sua fisiopatologia tenham sido conquistados, a capacidade de intervir e alterar a trajetória da doença tem sido apenas parcialmente bem sucedida. A produção exacerbada de óxido nítrico (NO) durante a sepse tem sido relatada como um dos principais contribuintes para a disfunção cardiovascular sepse. Um dos mecanismos pelos quais o NO exerce alguns de seus efeitos é através da reação com grupos tiol de resíduos de cisteína (sulfidrilas) em um processo chamado S-nitrosilação, produzindo S-nitrosotióis. Níveis aumentados de proteínas nitrosiladas participam na patogênese do choque séptico. O objetivo do presente estudo foi mostrar que a desnitrosilação de proteínas pode contribuir para a melhora dos parâmetros hemodinâmicos e para a maior sobrevivência de animais sépticos. Ratas Wistar foram tratadas com DTNB (ácido 5 5-ditiobis(2-nitrobenzóico, um agente oxidante de grupamentos sulfidrila) 30 min antes, 4 h ou 12 h após a indução da sepse (ligadura e punção cecal; CLP). Vinte e quatro horas após a cirurgia foi obtidos os seguintes dados: reatividade à fenilefrina em anéis de aorta isolada, pressão arterial média, resposta pressórica à fenilefrina, marcadores bioquímicos de disfunção de órgãos, parâmetros glicêmicos e hematológicos, perfil de sobrevivência e S-nitrosilação de proteínas da aorta, particularmente, de canais de potássio sensíveis ao cálcio. A sepse causou diminuição substancial na pressão arterial média e na resposta vascular à fenilefrina, aumento da frequência cardíaca, aumento nos níveis plasmáticos de marcadores de disfunção de órgãos, hipoglicemia, alterações hematológicas, mortalidade de 60% e aumento de S-nitrosilação de proteínas na aorta. O tratamento com DTNB 12 h após a indução da sepse melhorou a pressão arterial média, a frequência cardíaca, reverteu a perda de resposta dos anéis da aorta e da pressão arterial ao vasoconstritor, reduziu o dano de órgãos, melhorou a glicemia e parâmetros hematológicos, resultando no aumento da sobrevivência de animais sépticos. Além disso, causou uma redução substancial de proteínas nitrosiladas na aorta, nomeadamente canais de potássio dependentes de cálcio. Nossos resultados mostram que a S-nitrosilação de proteínas contribui para a disfunção cardiovascular e para o dano de órgãos induzida pela sepse. Contudo, a contribuição chave do presente trabalho é mostrar que a desnitrosilação de proteínas induzida por DTNB melhora a condição do hospedeiro mesmo depois que todas as respostas fisiológicas alteradas pela sepse estarem em pleno curso. / Abstract : Sepsis remains the leading cause of death in Intensive Care Units (ICUs). Although significant progress in understanding its pathophysiology has been achieved, the ability to intervene and change the course of the disease has been only partially successful. Nitric oxide (NO) overproduction during sepsis has been reported as one of the main contributors to the sepsis cardiovascular dysfunction. One of the mechanisms whereby NO exerts some of its effects is the reaction with thiol groups of cysteine residues (sulphydryls) in a process called S-nitrosylation, producing S-nitrosothiols. It has been reported that increased levels of S-nitrosylated proteins contribute to the pathogenesis of septic shock. The aim of the present study was to show that the denitrosylation of proteins contribute to the improvement in hemodynamic parameters and to the higher survival of septic animals. To better understand the role of protein S-nitrosylation/denitrosylation in sepsis, we used DTNB [5,5'-dithio-bis-(2-nitrobenzoic acid)], an oxidizing agent of sulfhydryl groups. Female Wistar rats were treated with DTNB 30 min before or 4 and 12 h after sepsis induction. Twenty-four hours after surgery the following data was obtained: aorta response to phenylephrine, mean arterial pressure, vascular reactivity to phenylephrine, biochemical markers of organ damage, glycaemic and hematological parameters, survival and aorta protein nitrosylation profile, among them, calcium-dependent potassium channels. Sepsis caused substantial decreases in blood pressure and in the response of aorta rings and of blood pressure to phenylephrine, as well as increased plasma levels of organ damage markers, heart rate, hypoglycaemia and haematological changes, mortality of 60% and S-nitrosylation of aorta proteins. Treatment with DTNB 12 h after sepsis induction improved mean arterial pressure, heart rate, reversed the loss of response of aorta rings and blood pressure to vasoconstrictors, reduced organ damage, improved hypoglycaemia and hematological parameters, decreased protein nitrosylation and increased survival to 80%. Our results show that S-nitrosylation of protein contributes to cardiovascular dysfunction and to organic injury induced by sepsis. However, the key finding of the present report is that DTNB-induced protein denitrosylation improves the host condition even after all physiological responses deranged by sepsis are in full course.

Nos últimos 50 anos houve uma redução significativa na fertilidade de animais selvagens. Estudos revelam que as alterações morfológicas e fisiológicas sobre os órgãos reprodutivos de animais e também de seres humanos podem ser conseqüência da exposição a contaminantes ambientais. Vários pesticidas presentes no ambiente têm sido apontados como substâncias capazes de afetar o sistema endócrino, incluindo efeitos sobre a reprodução (COLBORN et al., 1993). Inúmeros fatores contribuem para que o Brasil seja um dos maiores consumidores de pesticidas do mundo. E, neste país, os herbicidas são os pesticidas líderes em vendas. O Roundup® é o herbicida mais utilizado, sendo comercializado em preparação contendo 36% de glifosato e 18% de polioxietilenamida (POEA) (ANVISA, 2002a e 2002b). Estudos de toxicidade reprodutiva realizados com o glifosato técnico referem a possibilidade de efeito sobre o sistema reprodutivo (WHO, 1994). Entretanto a literatura carece de estudos sobre os efeitos do POEA e dos produtos comerciais que o contém associado ao glifosato (DALLEGRAVE, 2002). Sendo assim, o presente trabalho objetivou verificar a influência do herbicida glifosato-Roundup® sobre a fertilidade e o desenvolvimento de ratos Wistar e a possibilidade deste desregular o sistema endócrino. Foram avaliados os efeitos do herbicida glifosato Roundup (lote BS 1096/98) sobre a reprodução de ratos Wistar, incluindo os efeitos teratogênicos (segmento II), sobre fertilidade e performance reprodutiva de machos e fêmeas (segmento I) e sobre animais expostos pré e perinatalmente (segmento III). As concentrações desejadas foram elaboradas mediante adição de água destilada. As progenitoras do ensaio de teratogenicidade foram tratadas, por via oral, com 500, 750 ou 1000mg/kg de glifosato (Roundup) ou água destilada (10ml/kg), do 6° ao 15° dia de gestação. Os animais da geração paterna (segmento I) foram tratados diariamente, por via oral, com 50, 150 ou 450mg/kg de glifosato (Roundup) ou água destilada (10ml/kg). Os machos foram tratados por 70 dias no pré-acasalamento e por 15 dias consecutivos na fase de acasalamento. As fêmeas foram tratadas por 15 dias no pré-acasalamento, de 1 a 15 dias na fase de acasalamento, por 21 a 23 dias durante a gestação, e aquelas que foram deixadas parir, por mais 21 dias referente ao período de lactação. A segunda geração (segmento III) foi exposta apenas durante a gestação e a lactação (fêmeas do segmento I). Os resultados do ensaio de teratogênese mostraram sinais de toxicidade materna com 50% de letalidade para as fêmeas tratadas com 1000mg/kg e sinais de retardo de desenvolvimento do esqueleto dos fetos. Os machos da geração paterna mostraram sinais de toxicidade sistêmica, com aumento na massa relativa de fígado e rins, acompanhado de alterações histopatológicas, e de toxicidade reprodutiva, caracterizada por alterações histopatológicas nos testículos, redução na concentração de espermatozóides, na produção diária de espermatozóides, na concentração de testosterona e aumento no percentual de espermatozóides anormais. As fêmeas da geração paterna não apresentaram sinais de toxicidade sistêmica e/ou reprodutiva nas variáveis avaliadas. Os machos expostos durante as fases pré e perinatal manifestaram sinais de toxicidade reprodutiva, caracterizados por alterações histopatológicas nos testículos, como degeneração das espermátides em ambas as fases, aumento no percentual de espermatozóides anormais na puberdade e redução na concentração de espermatozóides na fase adulta. As fêmeas expostas durante as fases pré e perinatal não apresentaram sinais de toxicidade sistêmica e/ou reprodutiva nas variáveis avaliadas, como também a prole das mesmas não manifestou alterações de desenvolvimento ponderal ou geral. Este estudo revelou que o herbicida glifosato-Roundup provocou um retardo no desenvolvimento esquelético dos fetos expostos durante a fase de organogênese. Afetou ainda o sistema reprodutivo masculino de indivíduos tratados na fase adulta e expostos durante as fases pré e perinatal, interferindo nas variáveis de fertilidade masculina em puberdade e fase adulta. Também houve sinais de toxicidade sistêmica nas fêmeas do ensaio de teratogênese (segmento II) e nos machos do ensaio de fertilidade e performance reprodutiva (segmento I), em doses muito inferiores aquelas referidas na literatura (WHO, 1994) para o glifosato grau técnico. Conclui-se que o glifosato-Roundup manifestou maior grau de toxicidade sistêmica, reprodutiva masculina e de desenvolvimento esquelético fetal, do que o referido na literatura para o glifosato grau técnico. E, frente à toxicidade reprodutiva masculina evidenciada neste estudo, pode-se sugerir que o glifosato- Roundup® manifestou efeitos de modulação endócrina e conseqüentemente, potencial desregulador endócrino.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2013. / Made available in DSpace on 2014-08-06T17:52:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 324040.pdf: 1666991 bytes, checksum: f0f379f61038f36b606060b82191a55a (MD5) Previous issue date: 2013 / A pancreatite aguda (PA) é uma doença pancreática comum, causada principalmente pela obstrução do ducto pancreático por cálculos biliares. A infecção secundária do tecido pancreático necrosado é uma complicação que acomete mais de 50% dos pacientes, sendo que o benefício de antibióticos sistêmicos na prevenção desta infecção é controverso, exigindo estudos adicionais. O objetivo deste trabalho foi de avaliar o efeito do tratamento com o antibiótico meropenem na PA induzida pela obstrução do ducto biliopancreático em camundongos. Os resultados obtidos demonstraram que a obstrução do ducto biliopancreático em camundongos C57Bl/6 resultou em 100% de mortalidade; aumento nas concentrações séricas de amilase, lipase, fosfatase alcalina e bilirrubina direta; alterações histológicas pancreáticas como edema, infiltrado inflamatório e necrose; bacteremia e presença de bactérias no lavado peritoneal 24 h após a indução da doença, assim como recrutamento de leucócitos para a cavidade peritoneal. Tanto o pré- como pós-tratamento com meropenem (100 mg/kg, i.p. 12/12h por 3 dias), acelerou a mortalidade dos camundongos com PA quando comparados aos animais com PA não-tratados. No pré-tratamento, onde a antecipação da mortalidade foi mais evidente, os animais apresentaram bactérias no sangue e lavado peritoneal. Analisando as bactérias encontradas nas amostras sanguíneas, identificamos o Enterococcus gallinarum, uma bactéria Gram-positiva multirresistente a antibióticos, que se demonstrou ser patogênica e capaz de ativar o sistema imune. Em conclusão, nossos resultados demonstram que o tratamento com meropenem não foi eficaz na prevenção da infecção e favoreceu a disseminação de um patobionte multirresistente a antibióticos durante a pancreatite aguda experimental <br> / Abstract : Acute pancreatitis (AP) is a common pancreatic disease, mainly caused by obstruction of the pancreatic duct by gallstones. Secondary infection of pancreatic tissue necrosis is a disorder that affects more than 50% of patients, and the benefit of systemic antibiotics in the prevention of this infection is still controversial, requiring further studies. The aim of this study was to evaluate the effect of treatment with the antibiotic meropenem in experimental AP in mice. The results showed that the obstruction of biliopancreatic duct in C57Bl/6 mice resulted in a 100% of mortality; increased of serum concentrations of amylase, lipase, alkaline phosphatase and direct bilirubin; pancreatic histological changes such as edema, inflammatory infiltrate and necrosis; bacteremia and bacterial in the peritoneal lavage, as well as, recruitment of leukocytes to the peritoneal cavity. When compared to non-treated AP mice, both pre- and post-treated AP mice with meropenem (100 mg/kg, i.p. 12/12h for 3 days), presented faster mortality. In the pre-treatment, where accentuation of mortality was more evident, the animals had bacteria in the blood and peritoneal fluid. Analyzing the bacteria found in the blood samples, we identified it as Enterococcus gallinarum, a Gram-positive bacteria multiresistant to antibiotics, which proved to be pathogenic and able to induced immune system activation. In conclusion, our results showed that the meropenem treatment was not effective in preventing infection and induced the spreading of a multidrug-resistant pathobiont during experimental acute pancreatitis.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2014. / Made available in DSpace on 2014-08-06T18:09:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 326969.pdf: 3104173 bytes, checksum: 5d02a0f655863a8fa851c60dbe174ee1 (MD5) Previous issue date: 2014 / A dipirona foi introduzida na prática clínica em 1922. Entretanto, apesar dos mais de 90 anos de uso, o seu mecanismo analgésico ainda não foi completamente elucidado. Como já foi demonstrado que a febre induzida por ET-1 é bloqueada pelo tratamento sistêmico com dipirona, neste trabalho avaliamos a capacidade da dipirona e dos seus metabólitos, 4-AA e 4-MAA, de atenuar a nocicepção aguda e hiperalgesia mecânica induzidas pela administração de ET-1. Camundongos receberam uma injeção de ET-1 (10 pmol) na pata traseira direita e, por 30 min, foi cronometrado o tempo gasto lambendo a pata injetada como índice de nocicepção declarada. Em seguida, os animais foram eutanaziados e as patas, coletadas para determinação do edema. Em outro experimento, os animais foram avaliados entre 30 min e 5 h após a injeção de ET-1 através do número de reações de retirada da pata após 10 aplicações do filamento de Von Frey (0,6 g) em intervalos de 30 s, com o objetivo de determinar a hiperalgesia mecânica. O tratamento com a dipirona e seus metabólitos foi feito pelas via sistêmica (i.p., 30 min antes da ET-1), local (s.c. na pata, 20 min antes da ET-1) ou central (i.t.; 15 min antes da ET-1). Foi realizada determinação da atividade da MPO, contagem de células inflamatórias e quantificação dos níveis das citocinas IL-1ß e IL-10 na pele da pata dos animais 15 min ou 4 h após a administração de ET-1. Na nocicepção aguda, todas as substâncias foram efetivas, mas apenas através das vias i.p. e i.t., sendo que a administração de doses semelhantes dos dois metabólitos sugere que a 4-AA é mais efetiva que a 4-MAA. Nenhum tratamento apresentou efeito anti-edematogênico. Na hiperalgesia mecânica o tratamento pelas vias i.p., s.c. e i.t. mostrou efeito anti-hiperalgésico, mas apenas a dipirona e a 4-MAA foram efetivas. A administração de ET-1 não provocou aumento da atividade de MPO ou induziu migração de células inflamatórias para o sítio da administração, mas aumentou os níveis de IL-1ß apenas 4 h após a administração do peptídeo, mostrando sua importância para o estabelecimento da hiperalgesia mecânica, mas não da nocicepção aguda. Os níveis de IL-10, contudo, não foram alterados. O pré-tratamento i.p. com dipirona ou 4-MAA reduziu esses níveis, mas a 4-AA não surtiu efeito. Portanto, o efeito antinociceptivo da dipirona e de seus metabólitos na nocicepção aguda induzida por ET-1 é principalmente central, enquanto que o efeito anti-hiperalgésico é resultante de fatores centrais e locais que envolvem a ação de IL-1ß, provavelmente de células locais e residentes.<br> / Abstract : Dipyrone was introduced into the clinical practice in 1922. However, despite of being used for over 90 years, the mechanism of its analgesic action still has not being completely elucidated. As it was already shown ET-1-induced fever is blocked by systemic pre-treatment with dipyrone, in this study we evaluated the ability of dipyrone and its main metabolites, 4-AA, and 4-MAA, to attenuate ET-1-induced acute nociception and mechanical hyperalgesia Mice received an s.c. ET-1 injection (10 pmol) into the right hindpaw and the time spent licking the injected paw was determined throughout a period of 30 min. By the end of the test the animals were euthanized and the paws were collected for oedema determination. In another set of experiments, animals were evaluated from 30 min up to 5 h after ET-1 administration for mechanical hyperalgesia through the number of paw withdrawal after 10 applications of a von Frey filament (0,6 g) in 30 s intervals. Pre-treatment with dipyrone and its metabolites was done through the systemic (i.p., 30 min before ET-1), local (s.c., 20 min before ET-1) or central (i.t., 15 min before ET-1) routes. Inflammatory cells migration was determined through histology with HE colouring and quantification MPO activity. The quantification of the cytokines IL-1ß and IL-10 was also performed. In the acute nociception all the drugs were effective, but only the i.p. and i.t. routes. The administration of similar doses of the metabolites suggests that 4-AA is more effective than 4-MAA. No treatment showed anti-oedematogenic effects. Mechanical hyperalgesia was attenuated through all the treatment routes, but only dipyrone and 4-MAA were effective. ET-1 did not cause increase in MPO activity or induced inflammatory cell migration, but increased IL-1ß levels (only 4 h after ET-1, which shows that this cytokine is important for the establishment of mechanical hyperalgesia). IL-10 levels remained unaffected. The IL-1ß levels were diminished only in animals pre-treated with i.p. dipyrone or 4-MAA. Therefore, the antinociceptive effect of dipyrone and its metabolites in acute nociception induced by ET-1 results mainly from central action, while the anti-hyperalgesic effects appeared from a combination of central and local components, involving IL-1ß liberation, most likely from local and resident cells. Thus, we showed evidences that indicate a new mechanism through which dipyrone may act as an analgesic drug.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2014. / Made available in DSpace on 2015-02-05T20:47:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 327975.pdf: 2061560 bytes, checksum: 1f8fc421cb149307a73a725a0422077e (MD5) Previous issue date: 2014 / A dor clínica possui um caráter multidimensional, mas a sua dimensão afetiva é pouco explorada nos testes de nocicepção. Sendo assim, o presente trabalho objetivou comparar os modelos de nocicepção persistente cutânea e articular, através da observação comportamental e da manipulação farmacológica (morfina, midazolam e pentilenotetrazol), buscando um modelo mais preditivo para o desenvolvimento de fármacos analgésicos. Para tanto, foram utilizados ratos Wistar machos (250-300 g), submetidos à administração intraplantar ou intra-articular de formalina 2%. Foram mensurados comportamentos nocifensivos e demais comportamentos habituais afetados pela nocicepção ? o interesse pelo ambiente, evidenciado pela exploração vertical, e o interesse por si próprio, evidenciado pela autolimpeza. Um perfil distinto de respostas nocifensivas foi observado nos dois modelos. O lamber/morder de pata foi o comportamento induzido pela formalina intraplantar que demonstrou maior semelhança temporal com o levantar sustentado do membro, induzido pela formalina intra-articular. A formalina intraplantar suscitou comportamento proativo, enquanto a formalina intra-articular produziu comportamento passivo. Ainda, a formalina intra-articular promoveu maior redução da exploração vertical, enquanto que ambos os estímulos atenuaram a expressão da autolimpeza de maneira semelhante. A morfina (1,0 e 4,0 mg/kg) reduziu a expressão dos comportamentos de lamber/morder a pata (modelo intraplantar) e levantar sustentado de membro (modelo intra-articular) em ambas as fases do teste da formalina. Além disso, a morfina reduziu a exploração vertical nos animais do modelo intraplantar (0,4, 1,0 e 4,0 mg/kg) e intra-articular (4,0 mg/kg), além da autolimpeza nos animais de ambos os modelos (4,0 mg/kg). O midazolam (0,5 mg/kg) e pentilenotetrazol (15 mg/kg) atenuaram somente a resposta nocifensiva de lamber/morder a pata, enquanto que a autolimpeza e a exploração vertical foram atenuadas, respectivamente, apenas no modelo intraplantar. Assim, este estudo sugere que a formalina intra-articular pode se correlacionar melhor com a dor clínica em humanos, por induzir comportamento mais relacionado à depressão e, portanto, poderia ser uma plataforma mais preditiva para o desenvolvimento de fármacos analgésicos. Sugerimos que a restauração dos comportamentos normais de atenção ao ambiente e consigo próprio seriam propriedades desejáveis em um analgésico, porém, nenhum fármaco utilizado aqui restaurou estes comportamentos. Curiosamente, o analgésico padrão ? morfina ? acentuou o efeito depressivo da nocicepção sobre estes comportamentos.<br> / Abstract : Clinical pain has a multidimensional character, but its affective dimension of pain is underexplored in nociceptive tests. Therefore, this study aimed to refine the models of persistent cutaneous and articular nociception through behavioral and pharmacological (morphine, midazolam and pentylenetetrazole) approaches seeking a more predictive model for the development of analgesic drugs. For this purpose, male Wistar rats (250-300 g) were subjected to administration of formalin 2% in to the hindpaw or knee-joint. Subsequently, nocifensive behaviors, as well as ordinary behaviors affected by nociception  the attention to the environment, as evidenced by the rearing, and the attention to itself, as evidenced by the grooming. A distinct profile of nocifensive responses was observed in the two models. The licking/biting behavior induced by formalin in the hindpaw showed temporal similarity to the lifting of hindlimb induced by formalin in the knee-joint. Further, animal undergoing paw injection of formalin exhibited a proactive coping behavior, while the ones receiving knee-jointinjection showed a passive coping behavior. The knee-joint formalin administration determined a greater reduction of rearing, while both kinds of stimuli reduced similarly the grooming expression. The administration of morphine (1.0 and 4.0 mg/kg) reduced both the expression of licking/biting paw (hindpaw model) and sustained lifting of hindlimb behaviors (knee-joint model) in both phases of the formalin test. Furthermore, the morphine reduced the rearing differently between animals of the hindpaw (0.4, 1.0 and 4.0 mg/kg) and knee-joint models (4.0 mg/kg) besides reducing the grooming similarly in animals of both models (4.0 mg/kg). Both, midazolam (0.5 mg/kg) and pentylenetetrazole (15 mg/kg), attenuated the licking/biting behavior, but each reduced grooming and rearing, respectively, in hindpaw model only. Thus, these results suggest that knee-joint model may be a better correlate to the human pain and could be a more predictive model for the development of analgesic drugs. We also suggest that the restoration of normal attentional behaviors either to the environment or to itself, are desirable properties for a painkiller, however, no drug used herein restored these behaviors. Interestingly, the standard analgesic morphine accentuated the depressive effect of nociception on these behaviors.