Submitted by Aelson Maciera (aelsoncm@terra.com.br) on 2017-06-12T19:03:09Z No. of bitstreams: 1 TeseCFM.pdf: 6014577 bytes, checksum: 3206ee0e787d62e3dde8985abe54b0f3 (MD5) / Approved for entry into archive by Ronildo Prado (ronisp@ufscar.br) on 2017-06-12T19:44:35Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TeseCFM.pdf: 6014577 bytes, checksum: 3206ee0e787d62e3dde8985abe54b0f3 (MD5) / Approved for entry into archive by Ronildo Prado (ronisp@ufscar.br) on 2017-06-12T19:44:47Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TeseCFM.pdf: 6014577 bytes, checksum: 3206ee0e787d62e3dde8985abe54b0f3 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-12T19:49:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TeseCFM.pdf: 6014577 bytes, checksum: 3206ee0e787d62e3dde8985abe54b0f3 (MD5) Previous issue date: 2016-04-28 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Cancer is a group of diseases related to abnormal cell growth and ability to invade tissues. These skills result in the development of metastases, leading to death in many of the patients. During the process of invasion, the cells find a connective tissue rich in fibronectin and collagen in which they will have to go through in order to reach the blood vessels and then the metastatic site. Fibronectin adhesion receptors such as αvβ3 and α5β1 integrins are essential for cells to be able to move through the fibronectin fibers. Integrins bind to the extracellular matrix (ECM) proteins via the RGD motif present in fibronectin, making these cell types migration receptors a potential target for the study of cancer. Thus, the effect of DisBa-01, an RGD containing motif disintegrin, was investigated in two cell specialized on migration; fibroblasts (BJ) and oral squamous cell carcinoma (SCC25). DisBa-01 (1 and 2 μM) was able to reduce cancer cells migration speed and directionality, but not fibroblasts, on time-lapse experiments performed on fibronectin coated plates. In order to understand if the effect of DisBa-01 is associated with alterations in cellular adhesion, cells were plated on fibronectin and stained with anti-paxillin. Images acquired by confocal microscopy show changes in focal adhesions, which have become larger and more numerous. These data were confirmed, by time-lapse assays using Total Internal Reflection Fluorescence (TIRF) in cells transfected with paxillin. The expression of key fibronectin receptors, α5, β3 and αv is present similarly in both strains, while the β1 subunit is expressed in lower amounts in OSCC cells. To investigate the probable relationship of migration inhibition with integrin β3 level, this subunit was overexpressed in the OSCC cells and all parameters analyzed were restored. Taken together, these results demonstrate the ability of DisBa-01 to affect cell migration depending on integrin expression level and by modulating the dynamics of cell adhesions. / O câncer representa um conjunto de doenças relacionadas ao crescimento anormal de células e sua capacidade de invadir tecidos. Essas habilidades resultam no desenvolvimento de metástases, que levam muitos dos pacientes acometidos por essa doença, à morte. Durante o processo de invasão as células encontram um tecido conectivo rico em fibronectina e colágeno, o qual terão que atravessar a fim de chegar aos vasos sanguíneos e posteriormente ao sítio metastático. Receptores de adesão a fibronectica como a αvβ3 e α5β1 são essenciais para que as células sejam capazes de se movimentar sobre as fibras dessa protéína. A integrinas se ligam a fibronectina através do motivo RGD presente, fazendo desses receptores, potenciais alvos no estudo da migração celular durante o câncer. Assim, o efeito da DisBa-01, uma desintegrina com motivo RGD, foi investigado em duas células especializadas em migração; fibroblastos (BJ) e uma linhagem de carcinoma de células escamosas oral (SCC25). A DisBa-01 (1 e 2 μM) foi capaz de diminuir a velocidade de migração e a direcionalidade das células de câncer, mas não dos fibroblastos, em ensaios de time-lapse realizados em placas recobertas por fibronectina. Com o objetivo de entender se o efeito da DisBa-01 está relacionado com alterações na adesões celulares, as células foram plaqueadas sobre fibronectina e marcadas com anti-paxilina. Nas imagens adquiridas através de microscopia confocal é possível visualizar mudanças nas adesões, que se tornaram maiores e mais numerosas. Dados que foram confirmados em ensaios de time-lapse utilizando a microscopia de fluorescência de reflecção interna total (TIRF – Total Internal Reflection Fluorescence) em células transfectadas com paxilina. A expressão dos principais receptores de fibronectina, α5, αv e β3 está presente de forma similar nas duas linhagens, enquanto a subunidade β1 é expressa em quantidades menores nas células OSCC. Para investigar a provavel relação da inibição da migração com a expressão da integrina β3, a mesma foi superexpressa em nas células de OSCC e todos os parâmetros analizados foram normalizados. Em conjunto, esses resultados demonstram a capacidade da DisBa-01 de afetar a migração celular dependendo do nível de expressão de integrinas e através da modulação da dinâmica das adesões.

Resumo: Modernos sistemas de producao combinados ao planejamento e organizacao, fazem do Brasil o maior exportador e o terceiro maior produtor de carne de frango e seus derivados. Avancos significativos foram alcancados nas ultimas decadas, especialmente para caracteristicas como a conversao alimentar, periodo ate o abate, taxa de crescimento e porcentual de gordura. A elevada taxa de crescimento, no entanto, deixou mais evidente a necessidade de programas de melhoramento que aliem caracteristicas relacionadas ao crescimento e bem estar animal, a uma maior eficiencia e rendimento. Um dos problemas observados diz respeito a ma formacao ossea, consequencia de uma taxa de crescimento corporal que e desproporcional em relacao ao desenvolvimento osseo. Medidas para reduzir perdas envolvendo problemas osseos vem sendo estudadas. O uso de marcadores moleculares, em especial SNPs (polimorfismos de nucleotideo unico), tem sido uma das alternativas propostas. Neste trabalho foram sequenciados fragmentos dos genes calbidina, fator de transcricao "runt-related", osteopontina, osteoprotegerina, proteina morfogenetica ossea dois, sialoproteina ossea e sosteopontina, em dez amostras de DNA de aves de uma linhagem de corte e cinco amostras de uma linhagem de postura, pertencentes ao programa de melhoramento da Embrapa Suinos e Aves. Os polimorfismos foram identificados pela analise nos programas Standen Pakage, Clustal e Phred/Phrap/Consed/Polyphred. Foram identificados 92 SNPs e um Indel (Insercao-Delecao). Dois polimorfismos do tipo SNP, um no gene osteoprotegerina (OPG G217C) e outro na sialoproteina ossea (IBSP A211G) foram selecionados e genotipados por PCR-RFLP em quinhentas e dez aves de uma populacao referencia desenvolvida para estudos na area de genomica de aves. Os resultados da genotipagem foram avaliados pela analise de associacao no programa QxPaK v. 4.1 com oitenta caracteristicas de desempenho, carcaca e estrutura ossea. O SNP OPG G217C apresentou associacao significativa para o peso ao nascer (P=0.107 E-10), peso aos 21 (P=0.004), aos 35 (P=0.04) e aos 42 dias (P=0.01). Tambem foi observada associacao com o peso das asas (P=0.005), peso do osso do peito (P=0.02) e resistencia a flexao da tibia (P=0.05). Ja o SNP IBSP A211G demonstrou resultados significativos para o peso aos 41 dias (P=0.03), peso do file do peito (P=0.006), peso das asas (P=0.01), peso do osso do peito (P=0.008) e espessura da tibia (P=0.005). Alem destas, outras caracteristicas de desempenho e carcaca demonstraram resultados significativos para os SNPs OPG G217C e IBSP A211G. Novas investigacoes poderao ser feitas em futuros trabalhos, para que estes e outros SNPs sejam usados como marcadores geneticos na selecao de aves com melhor estrutura ossea.

Orientadora : Profª Drª Maria Luiza Petzl-Erler / Sem cópia digital / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Genética. Defesa: Curitiba, 27/07/2015 / Inclui referências / Resumo: O pênfigo foliáceo (PF) é uma doença autoimune da pele, caracterizada pela presença de anticorpos principalmente contra a desmogleína 1, uma molécula presente nos desmossomos. O PF ocorre de forma esporádica no mundo todo, mas é endêmico no Brasil. No PF, ocorre o rompimento da ligação entre os queratinócitos, processo conhecido por acantólise, que ocorre na camada mais superficial da epiderme, levando à formação de bolhas. Em outra forma de pênfigo, o pênfigo vulgar (PV), as bolhas ocorrem numa camada mais profunda da epiderme e também em mucosas. No presente trabalho o objetivo foi estudar a importância de variantes de genes que codificam moléculas coestimuladoras de linfócitos na susceptibilidade diferencial ao PF endêmico (PFE). Os genes em questão são BAFF, APRIL, BAFFR, BCMA e TACI. A molécula BAFF tem expressão elevada em diversas doenças autoimunes, inclusive no PFE. BAFF e a proteína homóloga APRIL compartilham os receptores BCMA e TACI, enquanto que BAFFR é receptor exclusivo de BAFF. Além de procurar associações de variantes destes genes com a susceptibilidade ao PFE, também investigamos sua expressão em células mononucleares de sangue periférico (PBMC) de pacientes de PFE, pacientes de PV e indivíduos clinicamente saudáveis. Níveis dos autoanticorpos anti-desmogleína (anti-DSG) 1 e 3 também foram verificados em pacientes de PF e de PV e em indivíduos controle. Foram genotipados 51 SNPs, dos quais quatro estão associados com a susceptibilidade diferencial ao PFE: rs11552708 (APRIL), rs13332630 (BCMA), rs12938073 (TACI) e rs4421862 (BAFF). Apenas rs11552708 já havia sido encontrado associado com outras doenças autoimunes, sendo que para os outros três esta é a primeira descrição de uma associação. A expressão dos genes em PBMC, feita por PCR quantitativa (qPCR), mostrou pequenas variações para os genes APRIL, BCMA e BAFFR, mas as diferenças de expressão não puderam ser explicadas pelos genótipos dos SNPs associados. Os níveis de autoanticorpos foram medidos por ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) no soro de 68 pacientes de PFE, 20 pacientes de PV e 48 indivíduos controle. Como esperado, anti-DSG1 foi mais comum em PFE e anti-DSG3 mais comum em PV. Pacientes em remissão e um indivíduo controle que habitava área endêmica foram positivos, indicando que deve haver cautela na utilização destes anticorpos no diagnóstico. No presente trabalho evidenciamos a importância da variabilidade genética de coestimuladores de linfócitos na susceptibilidade ao PFE. Palavras-chave: pênfigo foliáceo; autoimunidade; coestimuladores de linfócitos; BAFF; APRIL; BCMA; TACI; BAFFR. / Abstract: Pemphigus foliaceus (PF) is an autoimmune disease, characterized by skin blisters caused by acantholysis, the detachment between keratinocytes. Sporadic cases of PF occur worldwide, but in Brazil PF is endemic (EPF). Patients have auto antibodies specially against desmoglein 1, a protein found in desmosomes. In PF, the blisters are found in a superficial layer of the epidermis, while in another form of pemphigus, pemphigus vulgaris (PV), blisters are found in the suprabasal layer of the epidermis, as well as in mucous membranes. In the present work, we aimed at analyzing genetic variants of genes encoding lymphocyte costimulators regarding the differential susceptibility to EPF. The chosen genes were: BAFF, APRIL, BAFFR, BCMA and TACI. BAFF expression is elevated in many autoimmune diseases, including EPF. BAFF and the homologous protein APRIL share the receptors BCMA and TACI, and BAFFR is an exclusive receptor for BAFF. Additionally to searching for association of genetic variants of these genes with EPF, their expression in peripheral blood mononuclear cells (PBMC) was analyzed in EPF and PV patients, and in clinically healthy individuals. Anti-desmoglein (anti-DSG) 1 and 3 levels were also measured in EPF and PV patients and in controls. Of the 51 SNPs genotyped, four were associated with differential susceptibility to EPF: rs11552708 (APRIL), rs13332630 (BCMA), rs12938073 (TACI) and rs4421862 (BAFF). Previous associations have been described only for rs11552708, while for the other three this is the first report of association with a disease. Small differences were observed in the expression of APRIL, BCMA and BAFFR, as analyzed by quantitative PCR (qPCR) in PBMC. However, the differences in the expression could not be related to the genotypes of the respective genes associated with EPF. Antibody levels were measured by ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) in the serum o 68 EPF patients, 20 PV patients and 48 controls. As expected, anti-DSG1 was more prevalent among EPF patients, while anti-DSG3 was more prevalent among PV patients. Patients under remission as well as one control individual from the endemic area were positive, indication that caution should be taken when using these antibodies for diagnosis. In the present work, we highlighted the importance of genetic variants of lymphocyte costimulators in the differential susceptibility to EPF. Key-words: pemphigus foliaceus; autoimmunity; lymphocyte costimulators; BAFF; APRIL; BCMA; TACI; BAFFR.

Orientador: Prof. Dr. Helio Afonso G. Teive / Anexo cd-rom / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Medicina Interna. Defesa : Curitiba, 09/11/2013 / Inclui referências / Resumo: A distonia é um distúrbio do movimento caracterizado por contrações musculares sustentadas ou intermitentes, causando posturas, movimentos, ou posturas e movimentos, anormais e frequentemente repetitivos. A apresentação mais comum é a distonia cervical (DC), que afeta a musculatura do pescoço de forma localizada ou associada a outras partes do corpo. O presente estudo tem como objetivos identificar os aspectos clínicos dos pacientes com DC, comparando-se os casos esporádicos aos casos com história familiar de distonia, e as suas correlações com mutações nos genes DYT1 e DYT6. Foram selecionados 88 pacientes com DC nos ambulatórios de Toxina Botulínica e Distúrbios do Movimento do Hospital de Clínicas da Universidade Federal do Paraná (HC-UFPR), entre maio de 2008 e agosto de 2009, e submetidos à avaliação clínica, laboratorial, neuroimagem e genética. O DNA foi extraído do sangue periférico e análises para mutações nos genes DYT1 e DYT6 foram realizadas por PCR, conforme protocolos previamente estabelecidos. A relação masculino:feminino foi de 1:1,75. A média de idade de início dos sintomas de pacientes com distonia focal (41,05±16,87 anos) e distonia segmentar (35±23,14 anos) foram maiores que a encontrada em pacientes com distonia generalizada, 12,36±9,10 anos (p<0,001). Houve uma tendência linear de diminuição da incidência de casos de distonia generalizada com o aumento da idade. Vinte e três pacientes apresentaram história familiar de distonia. Nos casos com história familiar, houve maior prevalência de distonia generalizada que distonia focal (relação 2,2:1), ocorrendo relação inversa nos casos esporádicos (1:1,83). Os casos de distonia focal em pacientes com história familiar foram menos graves (p<0,05) e menos dolorosos (p<0,05) que os casos esporádicos. Os casos esporádicos de distonia generalizada referiram menos dor que os pacientes com distonia generalizada e história familiar de distonia. Dois pacientes com história familiar de distonia, distonia generalizada, iniciada nos membros inferiores (MMII), com idade de 6 e 12 anos, apresentaram a mutação c.907GAGdel no gene DYT1. Três pacientes apresentaram a inédita mutação nonsense c.289A>G (p.Gln97X) no gene DYT6. Um paciente não tinha história familiar de distonia e teve seus sintomas iniciados pelos membros superiores (MMSS) aos 22 anos, com posterior generalização. As duas outras pacientes com a mutação eram de uma mesma família. Uma apresentou quadro iniciado aos 18 anos no MSD, permanecendo com distonia segmentar (crânio-cervical e MMSS). A outra paciente apresentava também a mutação missense c.506G>A (p.Arg169Gln). Ela iniciou com os sintomas aos 6 anos e evolui com generalização associada a alterações de fala. Esses achados estão em conformidade com os relatos de baixa penetrância à grande variabilidade fenotípica dos pacientes com distonia DYT6, independente da mutação encontrada. Em relação à associação com outros distúrbios do movimento, não foram encontradas alterações nos genes DYT1 e DYT6 de quatro pacientes com mioclonias e três com parkinsonismo. Podemos afirmar, em concordância com estudos prévios, que a análise para mutações no gene DYT1 em pacientes com distonia cervical deve ser realizada nos pacientes com quadros generalizados e com história familiar de distonia. Também em conformidade com estudos anteriores, a análise para o gene DYT6 pode ser realizada em pacientes com distonia cervical independentemente da distribuição, ou da história familiar. Palavras-chaves: Distonia. Distonia cervical. Genética. DYT1. DYT6. / Abstract: Dystonia is a movement disorder characterized by sustained or intermittent muscle contraction causing abnormal, often repetitive, movements, postures, or both. Cervical dystonia (CD) affects the musculature of the neck in a focal way or associated to other parts of the body. CD is the most common form of dystonia. The present study objectives to obtain clinical and genetic information of patients with CD. Eighty-eight patients with CD were recruited in Botulinum Toxin Clinic and Movement Disorders Clinic of Hospital de Clinicas of the Federal University of Paraná (HC-UFPR) between May of 2008 and August of 2009. They were submitted the clinical, laboratorial, neuro-imaging and genetic evaluation. DNA was extracted from periferic blood and submitted at analysis to DYT1 and DYT6 mutations by PCR according to standard protocols. The male:female ratio was 1:1.75. The average ages at onset for focal dystonia (41.05±16.87 years) and for segmental dystonia (35±23.14 years) were larger than generalized dystonia (12.36±9.10 years). There was a direct decreased of incidence of generalized dystonia with the age. Twenty-three patients had cases of CD in the family. In these cases there were more prevalence of generalized dystonia than focal dystonia (ratio 2.2:1), in opposition of sporadic cases (ratio 1:1.83). The focal dystonia in patients with familiar history of dystonia was less severe and less painful than sporadic cases (p<0.05). The generalized sporadic cases complained less painful than familiar generalized cases. Two patients, with familiar and generalized dystonia beginning in legs with 6 and 12 years old, had c.907GAGdel mutation on DYT6 gene. Three patients had the unprecedent c.289 (p.Gln97X) DYT6 gene nonsense mutation. One of them had no familiar history of dystonia. This patient started his symptoms by arms at 22 years old, and he had secondary generalization. The other two patients were from the same family. The first opened the symptoms at 18 years old by right arm keeping segmental dystonia (cranial-cervical and arms). The second had the c.506G>A (p.Arg169Gln) missense mutation plus. She has started the symptoms at 6 years old and sprayed the dystonia for generalizations associated with speech disorders. These findings are in line with the low penetrance and great phenotypic variability related in DYT6 patients, independent of mutation found. Regarding the association with other movement disorders, DYT1 and DYT6 mutations were not found in four patients with myoclonic movements and in three patients with Parkinsonism. We can state, in agreement with previous studies, that analysis for DYT1 mutations in patients with cervical dystonia should be performed in patients with generalized and familiar dystonia. The DYT6 analysis can be performed in patients with cervical dystonia regardless the distribution or the familiar history. Key words: Dystonia. Cervical dystonia. Genetic. DYT1. DYT6.

Made available in DSpace on 2016-09-27T13:40:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-07-31. Added 1 bitstream(s) on 2016-09-27T13:45:14Z : No. of bitstreams: 1 000868844_20170731.pdf: 356252 bytes, checksum: 38bf2107cf66a4b3cb426b24a0184a36 (MD5) Bitstreams deleted on 2017-08-07T14:09:10Z: 000868844_20170731.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2017-08-07T14:10:14Z : No. of bitstreams: 1 000868844.pdf: 8016009 bytes, checksum: a5ffc89b1b5a01ff1b019ba237d0b05e (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / CAPES: 3127-14-1 / CNPq: 151697/2001-6 / FAPESP: 13/04533-3

Orientador: Paulo Eduardo Martins Ribolla / Banca: Guilherme Loureiro Werneck / Banca: Elisa Cupolillo / Banca: Hiro Goto / Banca: Celso Luis Marino / Resumo: A leishmaniose é uma doença parasitária causada por protozoários do gênero Leishmania, e transmitida através da picada de fêmeas de mosquitos da família Plebotomidae. As formas clínicas da leishmaniose são particularmente variadas tendo como forma mais grave a leishmaniose visceral (LV) ou calazar. No Brasil a LV é causada pelo protozoário L.infantum chagasi e transmitida pelo flebotomíneo Lutzomyia longipalpis, os principais reservatórios que participam do ciclo zoonótico são canídeos selvagens e cães domésticos. O fato de as leishmanioses, de uma maneira geral, apresentarem um amplo espectro no que diz respeito à sintomatologia da doença, aliado a grande diversidade das espécies de hospedeiros infectados, sugere a presença de variantes genéticas do parasita. No caso da leishmaniose visceral, por exemplo, variantes genotípicas de L.infantum chagasi interagindo com diferentes espécies de hospedeiros podem ter papel fundamental na dinâmica de transmissão e virulência de possíveis epidemias. O presente estudo teve como meta identificar possíveis variantes genotípicas de L. infantum chagasi presentes na área endêmica de Teresina no Estado do Piauí, e comparar com os genótipos encontrados em Campo Grande no Estado de Mato Grosso do Sul e Bauru no Estado de São Paulo, visto que a história natural da doença nessas regiões é muito mais recente do que no Estado do Piauí. O estudo utilizou marcadores microssatélites já descritos na literatura, seqüenciamento de regiões gênicas codificantes e não-codificantes e também a técnica de PCR-RFLP do DNA do cinetoplasto (kDNA) do parasita, para a obtenção de perfis genéticos que possibilitem relacionar as diferenças genotípicas com as diferentes origens geográficas dos parasitas isolados como um primeiro passo para a eleição e aplicação de um marcador molecular robusto para o estudo populacional... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Leishmaniasis is a parasitary disease caused by Leishmania protozoans and transmitted by female Phebotomidae sandflies. Clinical manifestations are particularly diverse, being visceral leishmaniasis (VL) the most severe form. In Brazil VL is caused by Leishmania infantum chagasi and transmitted by Lutzomyia longipalpis sandfly; the main zoonotic reservoirs are dogs and wild canids. Due to a broad range of disease manifestations and great variety of host species infected, Leishmania parasites are thought to possess great genotypic variability. This is of major significance in epidemiological features and in disease transmission. The aim of this study is to identify different genotypic strains of L. infantum chagasi in endemic areas of Teresina, Piauí State; Campo Grande, Mato Grosso do Sul State and Bauru, São Paulo State, and after that, select an appropriate molecular marker in order to study population genetics of L. infantum chagasi in Brazil. Microsatellites markers, sequencing of DNA coding and non-coding regions and PCR-RFLP of kinetoplast DNA (kDNA) were used in order to compare genetic profiles in parasites from different geographical origins. Among all this techniques, kDNA PCRRFLP has shown greater performance, and was able to detect a clear distinction in Teresina isolates when compared to Campo Grande and Bauru isolates / Doutor

Orientador: José Fernando Garcia / Coorientador: Marc Roger Jean Marie Henry / Coorientador: Marcos Vinícius Gualberto Barbosa da Silva / Coorientador: Vera Fernanda Martins Hossepian de Lima / Banca: Jose Bento Sterman Ferraz / Banca: Heidge Fukumasu / Banca: Roberto Carvalheiro / Banca: Joaquim Mansano Garcia / Resumo: Estudo de Associação Genômica (GWAS - Genome Wide Association Study) foi conduzido para identificar regiões cromossômicas relacionadas à capacidade de criotolerância espermática em bovinos da raça Nelore, empregando os fenótipos: diferença entre a motilidade do sêmen fresco e descongelado (DMD) e diferença entre a motilidade do sêmen fresco e pós-teste de termo-resistência (DMT), com o intuito de compreender melhor os fenômenos que regem tal característica. O perfil de SNP (SNP - Single Nucleotide Polymorphism) de cento e vinte e cinco touros foi determinado com o auxílio de micro-arranjo de alta densidade de SNP (BovineHD Illumina®). As estimativas dos valores genéticos dos touros (EBV - Estimated Breeding Value) (Experimento 1) e as médias das medidas fenotípicas (Experimento 2) foram calculadas para as características em questão. As metodologias estatísticas GRAMMAR e EIGENSTRAT foram utilizadas para a realização do teste de associação fenótipo / genótipo após procedimento de controle de qualidade dos dados. A análise de enriquecimento funcional foi realizada com auxílio do software DAVID. Essa análise apontou a família de genes Serpina (inibidores de proteases), reguladores de cAMP e componentes do citoesqueleto celular como o grupo de genes que apresentam maior importância funcional para as características avaliadas. Todas as metodologias testadas demonstraram-se capazes de identificar regiões genômicas associadas aos fenótipos DMD e DMT, destacando-se os cromossomos 1, 16 e 19 / Abstract: Genome Wide Association Study (GWAS) was performed in order to identify chromosomal regions related to sperm cryotolerance capacity in Nellore cattle for the phenotypes: difference between fresh and post-thaw semen motility (DMD) and difference between fresh and post thermal resistance test semen motility (DMT), aiming to better understand the phenomena governing this characteristic. SNP (Single Nucleotide Polymorphism) profile of one hundred and twenty five Nellore bulls were determined using high density SNP chip (BovineHD Illumina®). Estimated Breeding Values - EBV (Experiment 1) and phenotypic measures means (Experiment 2) were calculated for the evaluated traits. The statistical methodologies GRAMMAR and EIGENSTRAT were used to test the phenotype / genotype association after data quality control. Functional enrichment analysis was performed using DAVID software. These analyses pointed out to Serpine (protease inhibitor), cAMP metabolism control and cytoeskeletal components gene families as the most important functional gene groups for the evaluated traits. All the methods tested shown to be able to identify genomic regions associated with phenotypes DMD and DMT, especially chromosomes 1, 16 and 19 / Doutor

Orientador: Alexandre Magno Sebbenn / Banca: Mario Luiz Teixeira de Moraes / Banca: Rinaldo Cesar de Paula / Resumo: O conhecimento sobre o potencial evolutivo das populações naturais é fundamental para garantir a sobrevivência das espécies. A estimativa da herdabilidade é necessária para analisar quanto da variação fenotípica de caracteres estão sobre controle genético. O objetivo desse estudo foi investigar o controle genético de caracteres de crescimento nas fases iniciais de desenvolvimento de populações fragmentadas de Copaifera langsdorffii, utilizando marcadores microssatélites. Para tanto, foram utilizadas duas populações de C. langsdorffii, uma localizada no parque municipal em São José do Rio Preto (SJRP) e uma na Estação Ecológica de Assis (EEA), ambas no Estado de São Paulo, Brasil. O modelo para estimar o coeficiente de herdabilidade consiste no método de regressão de uma medida de similaridade fenotípica e uma estimativa de parentesco entre pares de indivíduos, executado no programa Mark. Ambos coeficientes de parentesco e herdabilidade foram estimados para três classes de distância (10, 20 e 30 m) dentro das populações. As estimativas de herdabilidade foram baixas (máximo de 0,146) para todos os caracteres, variando entre valores positivos para os indivíduos regenerantes da população SJRP e entre negativos a positivos para os juvenis da população EEA. Em termos evolutivos, estes resultados indicam poucas chances de alterar a média populacional dos caracteres estudados pela seleção natural, sendo os efeitos ambientais aleatórios mais fortes para alterar esta média. Este resultado, associado à tendência observada de redução no coeficiente de herdabilidade para altura entre indivíduos regenerantes para indivíduos juvenis também indica que este controle genético reduz com o desenvolvimento das plantas, ou seja, a seleção natural em populações naturais é mais forte em fases iniciais de desenvolvimento das plantas. Em suma, os resultados sugerem que não existem diferenças nos níveis de ... / Abstract: The knowledge about the evolutionary potential of natural populations is critical to ensure the survival of the species. Heritability estimates are necessary to analyze how much of the phenotypic variation of traits are about genetic control. The aim of this study is to investigate the genetic control of growth traits in the initial phases of developing fragmented populations Copaifera langsdorffii, using microsatellite markers. Therefore, two populations of C. langsdorffii were used a municipal park located in São José do Rio Preto (SJRP) and at Assis Ecological Station (AES), both in the state of São Paulo, Brazil. The model to estimate the heritability coefficient is the method of regression of a measure of phenotypic similarity and an estimate of kinship between individuals, run the Mark programs. The coefficients of relatedness and heritability were estimated for three classes of distance (10, 20 and 30 m) within populations. Estimates of heritability were low (maximum 0.146) for all traits, ranging from positive values for regenerating individuals of the population SJRP and from negative to positive for the juvenile population AES. In evolutionary terms, these results indicate little chance of changing the population mean of the characters studied by natural selection, with the strongest environmental random effects to change this average. This result, coupled with the trend of reduction in the coefficient of heritability for height between regenerating juveniles individuals indicates also that the genetic control reduces the development of plants, in other words, natural selection in natural populations is stronger in the early stages of plant development. In short, the results suggest that there are no differences in the levels of heritability between the two populations and that the heritability for growth traits is low in both populations / Mestre

Orientador: Paulo Eduardo Martins Ribolla / Banca: Alexandre Afrânio Peixoto / Banca: Newton Goulart Madeira / Resumo: O fungo termo dimórfico, Paracoccidioides brasiliensis é o agente etiológico da Paracoccidioidomicose (PCM), a micose sistêmica mais prevalente da América Latina. Este fungo vem sendo frequentemente isolado de amostras clínicas, tecidos de tatu (Dasypus novemcinctus) e recentemente foi também isolado de cão. Este trabalho avaliou a transição de micélio para levedura (M-L), a termo tolerância e o perfil de virulência em nove isolados de P. brasiliensis (quatro de pacientes humanos, quatro de tatus e um de cão), bem como a sua relação com a seqüência parcial e expressão do gene hsp70 (Heat Shock Protein 70) através de Real Time RT-PCR. Tanto os dados morfológicos como moleculares se mostraram variáveis dentre os diferentes isolados. Alguns destes dados, como sequenciamento e morfologia leveduriforme corroboram com a divisão de nossos isolados nas duas espécies crípticas simpátricas previamente propostas por Matute et al (2006). Nossos resultados confirmam que a HSP70 pode ser um importante fator de virulência por estar associado à termo tolerância, mas sua expressão parece não ser diretamente associada a altos padrões de virulência. / Abstract: The thermo dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis is the etiological agent of Paracoccidioidomycosis (PCM), the most prevalent systemic mycosis in Latin America. The previous phylogenetic species recognition proved the existence of, at least, three cryptic species in this pathogen. In this work we evaluated the mycelia to yeast (M-Y) transition, thermo tolerance and virulence profiles of nine isolates of P. brasiliensis, (including members of two of the three species) as well as its relation to the partial sequence and expression of hsp70 gene. It was observed a large phenotypic variability concerning the M-Y transition. The isolates Bt84 and T10 took more time to convert to the yeast form. These same isolates presented stretched yeast cells at 36°C, instead of the typical round cells. It was also observed arthroconidia production during the M-Y transition for some of the nine isolates studied. The hsp70 expression showed to be variable among our isolates. The partial sequencing of hsp70 gene resulted in a Neighbour Joining tree that divided our isolates in two main groups. Conclusions: Our data confirm that hsp70 gene might be an important virulence factor, associated with the thermo tolerance, but its expression does not seem to be directly related to high virulence profiles. We also presented some preliminary results about mycological characters that could be important candidates for morphologic markers for species recognition, as well as the partial sequencing of one member of the hsp70 gene family that allowed the separation of our isolates in two clusters, that correspond to the two sympatric cryptic species that occur in our PCM hyper endemic area (Botucatu, SP, Brazil). / Mestre

Orientador: Heraldo César Gonçalves / Banca: Francisco de Assis Fonseca de Macedo / Banca: Simone Fernandes / Resumo: Foram utilizadas as carcaças de 78 cabritos, abatidos com média de 120 dias de idade, de cinco grupos raciais: Alpina (A), ½ Boer + ½ Alpina (½ BA), ½ Anglo Nubiano + ½ Alpino (½ ANA), ¾ Boer + ¼ Alpino (¾ BA), e ¼ Boer + ¼ Alpino + ½ Anglo Nubiano (tricross - TC), machos não castrados e fêmeas e dois sistemas de terminação (ST1 - cabrito com a mãe em pastagem e ST2 - cabrito desmamado e confinado, a partir dos 60 dias de idade). As carcaças foram cortadas ao meio, a metade esquerda dividida nos cortes paleta, perna, costela, lombo e pescoço, e esses cortes foram dissecados, separados em músculo, osso, gordura e outros tecidos. O grupo racial, gênero e sistema de terminação influenciaram os rendimentos de gordura e osso na carcaça. O rendimento de músculo foi influenciado apenas pelo sistema de terminação, e o rendimento de outros tecidos, influenciado pelo gênero. A primeira geração de cruzamento da raça Alpina com a Boer aumentou a deposição de gordura e diminuiu a de ossos, contribuindo para melhorar o acabamento da carcaça. As fêmeas apresentaram maior proporção de gordura e menor de ossos que os machos. Houve correlação significativa entre músculo, gordura e osso da carcaça com esses mesmos tecidos nos cortes. Devido à elevada relação entre os componentes constituintes da carcaça com os cortes costela e perna, e proporcionarem equações de predição com os maiores coeficientes de determinação, são os cortes que devem ser utilizados para esse propósito / Abstract : Were used the 78 carcasses of kids, slaughtered with an average of 120 days old, of five racial groups: Alpine (A), ½ Boer + ½ Alpine (½BA), ½ Alpine + ½ Anglo Nubian (½ ANA), ¾ Boer + ¼ Alpine (¾ BA), ¼ Boer + ¼ Alpine + ½ Anglo Nubian (Tricross - TC), not castrated males and females and two finishing systems (ST1 - kid with mother goat in pasture and ST2 - kid weaned and confined, from 60 days old). The carcasses were split down the dorsal midline. The left side was divided into five primal cuts: shoulder, leg, rib, loin and neck. After, each cut was separated into dissectible muscle, bone, fat and other tissues. The racial group, gender and finishing system affected the income of fat and bone in the carcass. The income of muscle was influenced only by termination system, and the income of other tissues influenced by gender. The first generation of the crossing of breed Alpine with Boer increased fat deposition and decreased the bone, helping to improve the finish of the carcass. Females had a higher proportion of fat and less bone than males. There was significant correlation between muscle, fat and bone carcass with these same tissues in cuts. Due to the high relationship between the constituent components of the carcass with the rib and leg cuts, and provide prediction equations with the highest coefficients of determination, the cuts are to be used for this purpose / Mestre