Na agricultura moderna, formas alternativas de alcançar maior produtividade de modo sustentável são prioridades. Entretanto, o sucesso agrícola é ainda excessivamente dependente do emprego de fertilizantes químicos e de defensivos agrícolas. A severidade de algumas doenças é um fator preocupante na produção de várias culturas. Dentre alguns patógenos de planta, destaca-se o gênero Fusarium, o qual apresenta uma expressiva importância na agricultura por ser patógeno em várias culturas de interesse econômico.. Por outro lado, a utilização de microrganismos endofíticos como agentes de biocontrole vem se tornando cada vez mais atrativa, pois, surge como uma alternativa capaz de amenizar gastos excessivos com controle químico e danos ao meio ambiente. Dentre esses microrganismos, destaca-se o gênero Burkholderia, conhecidamente capaz de produzir uma vasta gama de antimicrobianos, com diferentes níveis de especificidade. Essas bactérias vivem em interações com diversos microrganismos e plantas, em um ambiente altamente competitivo, resultando em uma fonte de metabólitos secundários, bacteriocinas dentre outros pepitideos A linhagem TC3.4.2R3 Burkholderia seminalis, isolada endofiticamente de raízes de cana-de-açúcar, é capaz de controlar vários fungos e bactérias fitopatogênicas. Apartir dessa linhagem foi construída uma biblioteca de mutantes randômicos por meio de transposon. Assim, por meio dessa biblioteca, o objetivo do trabalho foi selecionar mutantes defectivos no controle de diferentes espécies de Fusarium, identificar e caracterizar os genes nocauteados, visando o melhor entendimento do controle da fusariose. Os resultados obtidos por meio da caracterização do teste de antagonismo demonstrou que a linhagem TC3.4.2R3 selvagem produz metabólitos capazes de inibir in vitro o crescimento de Fusarium spp. A partir da biblioteca de mutantes, foram obtidos 8 mutantes defectivos para o controle de Fusarium verticilioides FV-01-CTC que não apresentaram alta especificidade quando avaliados contra outros Fusarium spp. Dentre os genes nocauteados foram identificadas sequências codificadoras para a proteína glutamato sintase, TolB e FAD. Até o momento não foi encontrado relatos sobre o glutamato como um biocontrolador de patógenos, entretanto o uso de mutantes sítio dirigido para esse gene confirmou o papel do mesmo no controle de FV-01-CTC. TolB é uma proteína relacionada ao transporte de substâncais e pode ter seu papel de controle relacioanado à secreção de metabolítos secundários, visto que in silico, no genoma da TC3.4.2R3, foram encontrados 18 clusters resposáveis pela produção de metabólitos secundários. Assim, o presente trabalho abre novas perspectivas de estudo, visto que, os mecanismos de controle da fusariose por B. seminalis TC3.4.2R3 são amplos e sinergisticos. Há uma enorme perspectiva em desvendar o papel do glutamato e TolB no controle de fitopatógenos. Os mutantes caracterizados, pode ser fonte de novos estudos para o complexo entendimento da interação microrganismo-planta-patógeno, visto que há a possibilidade de verificar por exemplo o papel do glutamato proveniente da linhagem TC3.4.2R3 na promoção de crescimento vegetal. / In modern agriculture, alternative ways of achieving high productivity with sustainability are priority. However, agricultural success is still excessively dependent on the use of chemical fertilizers and pesticides. The severity of some diseases are worrying factor in the production of differents crops. Among plant pathogens, the genus Fusarium stands out, which has an important role in agriculture being disease causer in several crops such as: sugarcane, corn, passion fruit, tomato, banana, rice, and others. Fusarium can be found inhabiting soil in the most diverse geographical regions of the world, especially in tropical and subtropical climates. On the other hand, studies using endophytic microorganisms as biocontrol agents has become increasingly attractive, since they appear as an alternative to chemical control. Among these microorganisms, the genus Burkholderia stands out. This genis is able to produce a wide range of antimicrobials, with different levels of specificity. Moreover, Burkholderia has been received special attention because its potential plant growth promoter, bioremediation agents and recent studies aimed at biocontrol of diseases. These bacteria live in interactions with diverse microorganisms and plants in a highly competitive environment representing significant source of new bioactive secondary metabolites, bacteriocins among other pepitides. The B. seminalis strain TC3.4.2R3, endofitically isolated from sugarcane roots, is able to control diverse phytopathogenic fungi and bacteria. By Tn5 randomic mutations, it was obtained a library of TC3.4.2R3 mutantes. Thus, using this library, the objective of this work was select defective mutants to control of Fusarium spp., with the aimed the better understand the fusariose control by identificayion and characteriazation of knockouted genes. The results obtained through the characterization of the antagonism assays allowed us to conclude that wild-type TC3.4.2R3 produces many metabolites with antifungal activity under in vitro conditions, being able to control the growth Fusarium spp. From the mutants library we found 8 defectives mutants to control of F. verticilioides FV-01-CTC. Among the knockouted genes we found sequences enconding glutamato syntase, TolB and FAD. To date no reports have been found on glutamate as a pathogen biocontroller, however the use of mutant site directed to this gene confirmed the role of the same in the control of FV-01-CTC. TolB is a protein related to the transport of substances and may have its biocontrol role related to the secretion of secondary metabolites, since in silico analisys in the genome of TC3.4.2R3, 18 clusters were found as responsible for the production of secondary metabolites. Thus, the present work opens new perspectives of study, confirming that the mechanisms of control of fusariosis by B. seminalis TC3.4.2R3 are ample and synergistic. There is a huge prospect in unraveling the role of glutamate and TolB in controlling of plant pathogens. The characterized mutants may be the source of new studies for understanding the complex interaction among microorganism-plant-pathogen, since it is possible to verify, for example, the role of glutamate from the TC3.4.2R3 strain in the plant growth-promotion.

Introdução: Os receptores ionotrópicos do glutamato, como o N-metil-D-Aspartato (NMDA), estão envolvidos em desordens psiquiátricas. NMDARs são complexos heteroméricos que incorporam tres diferentes subunidades: NR1, NR2 e NR3. Objetivos: quantificar os níveis plasmáticos das subunidades NR1 e NR2 NMDAR em pacientes em primeiro episódio psicótico (PEP), em comparação com os irmãos e controles saudáveis. Métodos: Este é um estudo transversal de PEP na região de Ribeirão Preto, Brasil, sendo o grupo controle composto por indivíduos saudáveis, pareados por idade, sexo e mesma área de abrangência dos casos. Foram coletados 5 mL de amostra de sangue próxima a data de diagnóstico de PEP. A quantificação plasmática das subunidades NR1 e NR2 foi realizada por ELISA. Os dados foram analisados por ANOVA (significante se p<0,05) e curva ROC. Resultados: Foram incluídos 166 pacientes em PEP (idade: x = 30,34 ± 12,2 anos; 64% homens), destes 84 com diagnóstico de psicose não afetiva, 51 com transtorno bipolar e 31 com transtorno depressivo. Foram tambem incluídos 76 irmãos e 166 controles saudáveis. Os níveis plasmáticos das subunidades NR1 e NR2 foram significativamente menores em pacientes com transtornos psicóticos (NR1: x = 71,0 ± 100,3 pg/mL, NR2: x = 2,5 ± 2 ng/ml), transtorno bipolar (NR1: x = 185,7 ± 319,5 pg/ml; NR2: x = 2,1 ± 2,2 ng/ml), transtorno depressivo (NR1: x = 83,2 ±185,0 pg/ml; NR2: x = 2,1± 2,1 ng/ml) em comparação com os irmãos (NR1: x = 140,6 ± 193,8 pg/ml; NR2: = 6,2 ± 1,5 ng/ml) e voluntários saudáveis (NR1: x = 146,7 ± 361,1 pg/ml; NR2: x = 4,8 ± 2,2 ng/ml) [NR1 e NR2, p < 0,001]. Indivíduos com valores plasmáticos de NR2 inferiores a 3,648 ng/mL apresentam um risco 14,72 vezes maior de estar doente (PEP) de quem não possui o NR2 abaixo deste valor. Conclusões: Este é o primeiro estudo relatando a quantificação e a redução das concentrações plasmaticas das subunidades NR1 e NR2 em transtornos psiquiátricos graves quando comparados aos irmãos e controles, podendo a subunidade NR2 ser um candidato a biomarcador plasmático em pacientes com PEP. / Background: Ionotropic glutamate receptors, such as N-Methyl-D-Aspartate (NMDA), are involved in pathophysiology of several psychiatric disorders. NMDARs are described as heteromeric complexes incorporating distincts subunits within a repertoire of three types: NR1, NR2 and NR3. Aim: to quantify the NR1 and NR2 subunits NMDAR plasma levels in patients with first episode psychosis (FEP), compared with siblings and healthy controls. Methods: This is a cross-sectional study of FEP conducted in Ribeirão Preto, Brazil. The control group were composed by healthy subjects matched for age, sex and same coverage area of cases. 5 ml of blood sample were collected next to the date of FEP diagnosis. NR1 and NR2 subunits plasmatic quantification was performed by ELISA. Data were analyzed by ANOVA (significant at p < 0.05) and ROC curve. Results: FEP sample comprised 166 patients (age: x = 30.34 ± 12.2 years; 64% men), of these 84 with a diagnosis of psychotic disorder, 51 with bipolar disorder and 31 with depressive disorder. It was also included 76 siblings and 166 healthy controls. NR1 and NR2 subunits plasma levels were significantly lower in patients with psychotic disorders (NR1: x = 71.0 ± 100.3 pg / ml, NR2: x = 2.5 ± 2 ng/ml), bipolar disorder (NR1: x = 185.7 ± 319.5 pg/mL; NR2: x = 2.1 ± 2.2 ng/ml), depressive disorders (NR1: x = 83.2 ± 185.0 pg/mL; NR2: x = 2.1 ± 2.1 ng/ml) compared with siblings (NR1: x = 140.6 ± 193.8 pg/mL; NR2: x = 6.2 ± 1.5 ng/ml) and healthy volunteers (NR1: x = 146.7 ± 361.1 pg / mL; NR2: x = 4.8 ± 2.2 ng/ml) [NR1 and NR2, p < 0.001]. Interestingly, individuals with NR2 plasma values less than 3.648 ng/ml present 14.72 times a higher risk to be in FEP than other patients. Conclusions: This is the first study reporting the measurement and reduction of NR1 and NR2 subunits plasma concentrations in severe psychiatric disorders when compared to siblings and controls. And highlighting that NR2 subunit can be a candidate for plasma biomarker in patients with FEP.

A ativação excessiva dos receptores NMDA tem sido descrita no disparo da morte neuronal que ocorre em doenças, como o glaucoma. É possível que a combinação de subunidades (NR2A-D) possa ativar vias de sinalização intracelulares que resultam na morte ou sobrevivência. Nosso objetivo foi investigar o envolvimento de subunidades NR2 e Rac1, membro da família Rho GTPase, na morte de neurônios da retina. A morte induzida por glutamato in vitro foi reduzida após a inibição de Rac1 e bloqueio de NR2B, mas não das subunidades NR2C/D. Resultados semelhantes foram obtidos in vivo após injeção intravítrea NMDA, e a detecção de Rac1 ativo, principalmente, nos processos de glia de Müller foi inibida pelo bloqueio NR2B. Além disso, a produção de TNF-<font face=\"Symbol\">&#945; após a injeção de NMDA foi reduzida pelo bloqueio de NR2B e Rac1. Assim, nossos resultados sugerem que a excitotoxicidade via receptores NR2B/NMDA ativa Rac1 em células da glia de Müller, que por sua vez controla a produção de TNF-<font face=\"Symbol\">&#945 possível responsável pela morte de células ganglionares da retina. / Overactivation of NMDA receptors has been described to trigger neuronal death that occurs in diseases such as glaucoma. It is possible that the combination of subunits (NR2A-D) activate intracellular signaling pathways that result in death or survival. Our aim was to investigate the involvement of NR2 subunits and Rac1, a member of Rho GTPase family, in retinal neuronal death. Glutamate-induced neuronal death in vitro was reduced after Rac1 inhibition and by NR2B blocking, but not NR2C/D subunits. Similar results were obtained in vivo after NMDA intravitreous injection, although active Rac1 was mainly detected in Müller glia processes, and it was inhibited by NR2B blockade. In addition, TNF-<font face=\"Symbol\">&#945 level after NMDA injection were reduced by NR2B blocking and Rac1. Thus, our results suggest that excitotoxicity via NR2B/NMDA receptors activate Rac1 in Müller glia cells, which in turn controls the TNF-<font face=\"Symbol\">&#945 production that triggers retinal ganglion cell death.

As células T exercem papel crucial nas respostas imunes adaptativas e em doenças autoimunes, como a esclerose múltipla. O glutamato, neurotransmissor mais abundante no SNC, age por meio de duas famílias de receptores: metabotrópico e ionotrópico. As células T são alvo do glutamato durante a ativação e apresentação de antígenos, pois está presente nas sinapses imunológicas, porém, pouco se sabe a respeito de seu papel na função das células T. Nós estudamos o papel do NMDAR nas respostas mediadas por células T. In vitro, o uso do antagonista MK801 reduziu a linfoproliferação e a síntese de IFN-&#947; e IL-17A, bem com o NMDA reduziu a proliferação e produção de IFN-&#947; e IL-17A. In vivo, o MK801 reduziu a gravidade da EAE, resultado da menor infiltração de linfócitos Th1 e Th17 no SNC. Além disso, o MK801 reduziu a expressão de Rorc, Il17a, Stat4, Ccr4, Ccr6 e Ifna2 no SNC. Em suma, esses dados confirmam que o NMDAR exerce papel nas funções mediadas por células T, indicando que as células T são alvos do excesso do glutamato via NMDAR em doenças neuroinflamatórias. / T cells play a crucial role in adaptive immune responses and autoimmune diseases, such as multiple sclerosis. Glutamate is the most abundant neurotransmitter in the CNS, and it acts through two receptor families: metabotropic and ionotropic. T cells are target of glutamate during activation and antigen presentation, because glutamate is also present in the immunological synapses, however, little is known about its role on T cell functions. We investigated the role of NMDAR in immune-mediated T cell responses. In vitro, the use of the antagonist MK801 reduced T cell proliferation and cytokine production (IFN-&#947; e IL-17A), as well as NMDA reduced lymphocyte proliferation and IFN-&#947; e IL-17A production, in a dose dependent manner. In vivo, MK801 diminished severity of EAE, result of the minor Th1 and Th17 infiltration in the CNS. In addition, MK801 reduced Rorc, Il17a, Stat4, Ccr4, Ccr6 and Ifna2 expression in the CNS. In short, our data confirm that the NMDAR play a role in T cell-mediated functions, indicating that T cells are target of glutamate excess via NMDAR in neuroinflammatory diseases.

Acredita-se que quantidades elevadas de glutamato estejam relacionadas à neurobiologia da depressão e trabalhos recentes indicam que a quantidade de glutamato cortical está aumentada em pacientes depressivos quando comparada a indivíduos sadios. Dentre as estruturas corticais, o córtex pré-frontal medial ventral (CPFMv), dividido em infralímbico (IL) e pré-límbico (PL), tem sido mais frequentemente implicado no desenvolvimento de transtornos mentais, como a depressão. Considerando evidências de que o IL e o PL podem agir de forma diferente quanto ao controle emocional em resposta ao estresse, o presente trabalho visou avaliar a hipótese de participação da neurotransmissão glutamatérgica do CPFMv, IL e PL, no desenvolvimento das respostas comportamentais ao estresse de nado forçado, um modelo preditivo de efeitos antidepressivos. Para tal, investigamos os efeitos induzidos pela administração no IL ou no PL, de LY 235959, um antagonista dos receptores glutamatérgicos do tipo NMDA, em três momentos diferentes, em animais submetidos ao teste do nado forçado. A administração de LY 235959, no IL ou PL, produziu efeitos do tipo antidepressivo, sendo esse efeito sensível ao tempo de administração da droga em relação à exposição ao nado forçado. Sendo assim, foi observado efeito antidepressivo quando o bloqueio glutamatérgico no PL ocorreu imediatamente após o nado ou antes da re-exposição ao estresse; enquanto no IL, o tratamento promoveu efeito antidepressivo apenas quando administrado antes da re-exposição ao nado. Portanto, os resultados sugerem que a neurotransmissão glutamatérgica mediada por receptores NMDA no CPFMv contribui para o desenvolvimento de consequências comportamentais do estresse, de modo que o bloqueio desses receptores facilitaria a adaptação ao estresse e induziria efeitos do tipo-antidepressivo. Os resultados sugerem, ainda, que o PL e o IL participam de maneira semelhante na modulação desses processos. / It is believed that high amounts of glutamate are related to the neurobiology of depression. Recent studies indicate that the amount of cortical glutamate is increased in depressed patients compared to healthy subjects. Among the cortical structures, the ventral medial prefrontal cortex (CPFMv), divided into infralimbic (IL) and prelimbic (PL) has been most often implicated in the development of mental disorders, such as depression. Considering that IL and PL play different roles on the emotional control in response to stress, this study was aimed to evaluate the hypothesis that the activation of glutamate NMDA receptors within the CPFMv, IL and PL, would facilitate the development of forced swimming-induced behavioral responses, an animal model predictive of antidepressants effects. To this end, we investigated the effects induced by the administration in the PL or the IL of LY 235959, an antagonist of NMDA receptors, at three different times, in animals submitted to the forced swimming test. The administration of LY 235959, in the IL or PL, produced antidepressant-like effects, and this effect is sensitive to moment of drug administration in relation to exposure to forced swimming. Thus, the antidepressant-like effect was observed when blocking the NMDA blockade into the PL occurred immediately after swimming or before re-exposure to stress, whereas in the IL, such treatment promoted antidepressant-like effect only when administered before re-exposure to swimming. Therefore, the results suggest that the glutamatergic neurotransmission mediated by NMDA receptors in the CPFMv contributes to the development of behavioral consequences of stress, so that blocking these receptors would facilitate the adaptation to stress and induce antidepressant-like effects. The results also suggest that PL and IL may be similarly involved in modulating these processes.

Made available in DSpace on 2017-07-21T19:59:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PALLOMA HOCAYEN.pdf: 1571020 bytes, checksum: 2b66eed389dee29aecb38d9310ca585e (MD5) Previous issue date: 2012-05-09 / In recent years diabetes has been gaining huge proportions, due to changes in the habits of life, poor diet and physical inactivity are key factors in disease development. To this end, various species of plants have been used etnofarmacologicamente or in clinical trials or to treat and combat the symptoms of Diabetes Mellitus. The present study used the methanol extract of the plant Bracharis dracunculifolia (rosemary field) belonging to the Asteraceae family, with the objective of evaluating the effect of his administration on hypothalamic obesity in animal model of MSG. The methodology was based on the preparation of the extract metabolic B. dracunculifolia by means of drying processes, spraying, orbital agitation of the extract in methanol, filtration and addition of rotaevaporação toxicity test of the extract in the brine shrimp. To obtain MSG animals, were used in newborn animals still injection of monosodium glutamate (MSG) for five consecutive days at a dose of 4 mg / g body weight to induce obesity. Treatment with methanol extract was carried out on animals at 180 days of life, for 30 days. Weight was evaluated, consumption of water and feed throughout the experiment. And after the animals have been sacrificed held in the isolation of pancreatic islets which were incubated with increasing concentrations of glucose (5.6 mM, 8.3 mM, 16.7 mM). The results obtained in the study demonstrated low toxicity of the extract of B. dracunculifolia. The MSG animals had proven by induction of obesity increased Lee index, and higher levels of visceral and subcutaneous fat compared to controls. The MSG animals weighed less, consumed less water and less food and had impaired glucose tolerance. The biochemical parameters did not obtain significant differences, except for triglycerides which showed to be higher in MSG animals, not having succeeded in restoring the extract this parameter. In the isolation of pancreatic islets, MSG animals that received the extract of B. dracunculifolia showed a significant secretion of insulin by the islets isolated, noting that the concentration of 8.3 mM and 16.7 mM was obtained increased secretion of insulin. It is concluded that the methanol extract of B. dracunculifolia obtained significant effect on insulin secretion in pancreatic islet cell isolation, noting the results obtained in the group MSG (MP), which were hyperinsulinemia because of a possible enhancement of oxidative stress, especially the high antioxidant content present in the extract B. dracunculifolia used in the study. / Nos últimos anos o Diabetes vem ganhando grandes proporções, devido a mudanças nos hábitos de vida das pessoas, má alimentação e sedentarismo, que são fatores centrais no desenvolvimento da doença. Para tanto, várias espécies de plantas vêm sendo utilizadas etnofarmacologicamente ou em ensaios clínicos para tratar e ou combater os sintomas do Diabetes Mellitus. O presente estudo utilizou o extrato metanólico da planta Bracharis dracunculifolia (alecrim do campo), pertencente a família Asteraceae, com o objetivo de avaliar o efeito de sua administração na obesidade hipotalâmica em modelo de animais MSG. A metodologia se baseou na preparação do extrato metabólico de B. dracunculifolia, por meio de processos de secagem, pulverização, agitação orbital do extrato em metanol, filtragem e rotaevaporação além do teste de toxicidade do extrato frente a Artemia salina. Para a obtenção de animais MSG, foram aplicados nos animais ainda neonatos injeção de glutamato monossódico (MSG), durante cinco dias consecutivos, na dose de 4mg/g de peso corporal, para indução da obesidade. O tratamento com o extrato metanólico foi realizado nos animais aos 180 dias de vida, durante 30 dias. Foi avaliado o peso, consumo de água e ração durante todo o experimento. E após os animais terem sido sacrificados realizou-se o isolamento de ilhotas pancreáticas, que foram incubadas em concentrações crescentes de glicose (5,6mM; 8,3mM; 16,7mM). Os resultados obtidos no estudo demonstraram baixa toxicidade do extrato de B. dracunculifolia. Os animais MSG obtiveram indução da obesidade comprovada pelo aumento do Índice de Lee, e maior teor de gorduras viscerais e subcutânea em relação aos controles. Os animais MSG apresentaram menor peso, consumiram menos água e menos ração e apresentaram intolerância a glicose. Os parâmetros bioquímicos não obtiveram diferenças significativas, com exceção dos triglicerídeos que apresentou-se maior nos animais MSG, não tendo o extrato conseguido restaurar este parâmetro. No isolamento de ilhotas pancreáticas, os animais MSG que receberam o extrato de B. dracunculifolia apresentaram uma secreção significativa de insulina pelas ilhotas isoladas, ressaltando que na concentração de 8,3mM e 16,7mM foi obtida maior secreção de insulina. Conclui-se que o extrato metanólico de B. dracunculifolia obteve efeito significativo da secreção de insulina, no isolamento de ilhotas pancreáticas, ressaltando os resultados obtidos no grupo MSG (MP), que se apresentaram hiperinsulinêmicos, devido a uma possível melhora do stress oxidativo, destacando-se o alto teor antioxidante presente no extrato de B. dracunculifolia utilizado no estudo.

Os Transtornos psiquiátricos acompanham a história da humanidade. Classificados em categorias distintas podemos observar que dentre todas as patologias que constituem os transtornos mentais e de comportamento, as doenças mais prevalentes são as doenças de Ansiedade e de Transtorno Depressivo Maior (TDM). Mesmo com muitos avanços nas neurociências, assim como na terapêutica (psicofarmacologia), ainda hoje a fisiopatologia e o desenvolvimento farmacológico são áreas que necessitam intenso estudo. Avanços recentes tem sugerido que drogas capazes de modular os sistemas glutamatérgico e purinérgico possuem potencial efeito neuromodulador, sendo promissores candidatos para o desenvolvimento de novas drogas com ação ansiolítica e/ou antidepressiva. Dessa maneira, o objetivo desta tese foi investigar o potencial efeito ansiolítico da guanosina (GUO) em modelos animais preditivos para o estudo da potencial atividade ansiolítica de novos compostos, assim como seu potencial efeito antidepressivo no modelo animal de depressão da Bulbectomia Olfatória Bilateral (OBX). Inicialmente, nossos resultados demonstram que a administração de GUO foi capaz de produzir um consistente efeito ansiolítico modulando os níveis de adenosina (ADO) e glutamato cerebral. Ainda, pela primeira vez, foi observado que a GUO per se promoveu uma diminuição da liberação de glutamato em preparações de sinaptosomas de hipocampo, um efeito dependente da ativação dos receptores A1 de ADO. Após a caracterização do potencial efeito ansiolítico da GUO, nosso objetivo foi avaliar o potencial efeito antidepressivo da GUO em um modelo animal com validade de face e de constructo, como o modelo da OBX. Contudo, após revisão da literatura em estudos que utilizaram o modelo da OBX, observou-se a necessidade de uma investigação a longo prazo, das principais alterações comportamentais e neuroquímicas induzidas pela OBX. Nossos resultados, mostram pela primeira vez, que camundongos submetidos a OBX apresentaram simultaneamente alterações comportamentais e neuroquímicas transitórias e de longa duração. Ademais, as evidências indicam que o hipocampo possui alta susceptibilidade aos danos induzidos pela OBX, visto que uma sinaptotoxicidade transitória, acompanhada de um duradouro desequilíbrio redox e aumento da resposta inflamatória foram observados. Por fim, o tratamento crônico com GUO foi capaz de reverter a maioria das alterações identificadas previamente como duradouras nos parâmetros comportamentais e neuroquímicos no modelo da OBX. Considerando os resultados neuroquímicos obtidos pelos diferentes protocolos de tratamento realizados neste estudo, novas hipóteses de mecanismos de ação exercidos pela GUO foram apresentadas, e mecanismos já estabelecidos foram reproduzidos. Por fim, de uma maneira geral os dados apresentados nesta tese reforçam a hipótese do envolvimento do sistema purinérgico nos transtornos psiquiátricos, e sugerem que a GUO apresenta uma potencial ação terapêutica para o tratamento destas doenças, abrindo assim novas perspectivas para elucidação dos mecanismos envolvidos na fisiopatologia da ansiedade e TDM. / Psychiatric disorder had accompanied the course of human history. Mental and behavioral disorders are classified in different categories and among all different psychiatric disorders; anxiety and major depressive disorder (MDD) are the most prevalents. Despite the substantial advances in our knowledge on the neurobiological bases of both anxiety and MDD, as well as in the therapeutic area (psychopharmacology), even today, the pathophysiology of these disorders as well as pharmacological development are still under investigation. Recent advances have suggested that drugs able to modulate glutamatergic and purinergic systems present a potential neuromodulatory effect, and are promising candidates for the development of new drugs with both anxiolytic and antidepressant effects. Thus, the aim of this work was to investigate the potential guanosine (GUO) anxiolytic-like effects in predictive animal models largely used to elucidate anxiolytic properties of new compounds, as well as investigate the potential GUO antidepressant effect in Olfactory Bulbectomy (OBX) model of depression. Initially, our results demonstrate that acute GUO administration was able to induce a consistent anxiolytic-like effect, by modulating the adenosine and glutamate cerebrospinal levels. Here, for the first time, it was observed that GUO per se was able to decrease the glutamate release in hippocampal synaptosome. After characterizing the potential anxiolytic-like effect promoted by GUO, our second goal was to evaluate the potential GUO antidepressant-like effect in an animal model with recognized face and construct validity as the OBX model of depression. However, given the lack of studies in the literature considering the time course of the behavioral and neurochemical changes after the depressive-like behavior onset induced by OBX we firstly characterize some important features regarding the OBX model. Collectively, mice submitted to the OBX model of depression and followed up to 8 weeks simultaneously presented transient and long-lasting deleterious effects in behavioral and neurochemical parameters. The evidences pointed that hippocampus was the most affected brain structure, since a transient hippocampal-related synaptotoxicity, accompanied by a long-lasting hippocampal imbalance in redox and inflammatory homeostasis were observed. Additionally, the neurochemical effects seem to strengthen our behavioral findings. Finally, chronic GUO treatment, similarly to the classical tricyclic antidepressant imipramine, was able to improve the long-term behavioral phenotype impairment induced by OBX, specifically improving behavioral performances that require cognitive functions, accompanied by reversion of hippocampal redox imbalance parameters, as well as in peripheral and central anti-inflammatory IL-10 release. Thus, in present study, the pre-clinical evaluation of GUO as a potential drug for treatment of the most prevalent psychiatric disorders (anxiety and MDD) presented promising results. Furthermore, additional GUO mechanisms of action were evidenced and new perspectives were established. Thus, the data presented in this thesis support the hypothesis of the involvement of the purinergic system in mood disorders, and suggest that GUO has a potential therapeutic activity for the treatment of psychiatric disorders.

Os receptores glutamatérgicos metabotrópicos (mGluRs) estão envolvidos nos processos de plasticidade, neurodegeneração e neuroproteção. Avaliamos a expressão de mGluRs no sistema visual de ratos e pintos em diferentes tempos após enucleação ocular. Os animais foram avaliados pelo método de imuno-histoquímica, immunoblotting e RT-PCR, para detecção dos receptores mGluR1,2/3,5 e 7. Foi observado aumento da imunorreatividade (IR) de mGluR1, 5 e 7 no colículo superior, porém não foi observada diferença no núcleo geniculado lateral. Houve aumento na expressão protéica para mGluR1, 5 e 7 e aumento da expressão gênica para mGluR1,5 e 7; por outro lado, ocorreu uma diminuição de mGluR3. No TeO, foi observado aumento da IR para mGluR1 e 5 e diminuição para mGluR2/3. As análises de immunoblotting confirmaram o aumento observado de mGluR1 e diminuição de mGluR2/3. Os resultados indicam uma modulação diferencial na expressão gênica e protéica dos mGluRs, sugerindo a participação desses receptores em processos plásticos decorrentes de lesões no sistema visual adulto. / The metabotropic glutamate receptors (mGluRs) are involved in neuronal plasticity and neuroprotection. We analyzed the expression of mGluRs in the visual system of rats and chicks in several periods after ocular enucleation. The localization and expression of mGluR1, 5, 2/3 and 7 receptors were evaluated by standard immunoperoxidase, immunoblotting and real-time PCR protocols. The immunorreativity, protein and gene expression of mGluR1, 5 and 7 receptors in the superior colliculus showed an increase, whereas no changes were seen in the lateral geniculate nucleus. For mGluR3, gene expression was decreased. In the TeO, mGluR1 and 5 increased for all survival periods analyzed. Immunoblotting analyses confirmed the increases for mGluR1 and 5, decreases for mGluR2/3. These results indicate that the expression of mGluRs is regulated by the glutamatergic retinal input, and add data on a possible role of these receptors in neuroplasticity in adult animals.

Submitted by Rosivalda Pereira (mrs.pereira@ufma.br) on 2017-06-14T17:28:23Z No. of bitstreams: 1 CarolineVale.pdf: 4135607 bytes, checksum: d26bf0afb2078fe97033389d010e9282 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-14T17:28:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CarolineVale.pdf: 4135607 bytes, checksum: d26bf0afb2078fe97033389d010e9282 (MD5) Previous issue date: 2016-12-13 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPQ) / Fundação de Amparo à Pesquisa e ao Desenvolvimento Científico e Tecnológico do Maranhão (FAPEMA) / Metabolic syndrome (MS) is defined as a set of interrelated risk factors that contribute to type 2 diabetes mellitus (T2DM) and cardiovascular disease (CVD). SM also causes harmful effects on the reproductive system, especially for women, as it reducies ovulatory rates, increasies the number of abortions and late pregnancy complications, which increase the risk of infertility. As a form of treatment approaches are adopted both non-pharmacologic and pharmacologic. In this context, the use of alternative therapies with natural products has emerged as a safer and less associated with worsening of MS risk factors. Syzygium cumini (jambolan) is a species of Asian origin, but cultivated and used throughout the world for its anti-hyperglycemic, anti-hiperlipemiantes and antioxidants. Through these actions, we sought to investigate whether the hydroalcoholic extract of the leaves of S. cumini (EHSyz) improves the metabolic changes and consequently, changes in reproductive function in rats with induced obesity L-monosodium glutamate (MSG) a dose 4g/Kg/day. Wistar female rats were divided into the following groups: CTRL group (treated with NaCl 0.9% 0.1 ml / 100g / day v.o,); MSG group (treated with NaCl 0.9% 0.1 ml / 100g / day V.O.); EHSyz obese group (treated with EHSyz at a dose of 500mg / kg / day, V.O.), each for 60 days. The administration EHSyz promoted with retention of weight gain, reduction Lee index and improved glycolipid profile, with reduced serum triglyceride levels by 60.7% and 29.7% compared to cholesterol total.O EHSyz even avoided introduction resistance table in the treated rats. However, despite the improvement in oligociclicidade, the extract was not able to improve reproductive impairment of the treated rats. Thus, we conclude that treatment with EHSyz produced marked effects on metabolic parameters in obese rats without interfering with the reproductive capacity of the same. / A síndrome metabólica (SM) é definida como um conjunto de fatores de risco interrelacionados que contribuem para o diabetes mellitus tipo 2 (DM2) e doenças cardiovasculares (DCV). A SM também provoca efeitos deletérios sobre o sistema reprodutor, especialmente feminino, com redução de taxas ovulatórias, aumento do número de abortos, complicações tardias da gravidez, que elevam o risco de infertilidade. Como forma de tratamento, são adotadas abordagens tanto não farmacológicos quanto farmacológicas. Nesse contexto, o uso de terapias alternativas com produtos naturais tem se destacado como uma forma menos associada ao agravamento dos fatores de risco da SM. Syzygium cumini (jambolão) é uma espécie vegetal de origem asiática, porém cultivada e utilizada em todo o mundo por suas propriedades anti-hiperglicemiantes, anti-hiperlipemiantes e antioxidantes. Mediante tais ações, buscamos investigar se o extrato hidroalcoólico das folhas de S. cumini (EHSyz) melhora as alterações metabólicas e, consequentemente, as alterações da função reprodutiva de ratas com obesidade induzida por L-glutamato monossódico (MSG) na dose 4g/Kg/dia. Fêmeas Wistar foram divididas nos seguintes grupos: grupo CTRL (tratado com NaCl 0,9% 0,1mL/100g/dia v.o,); grupo MSG (tratado com NaCl 0,9% 0,1mL/100g/dia v.o.); grupo obeso EHSyz (tratado com EHSyz na dose de 500mg/kg/dia, v.o.), todos durante 60 dias. A administração com EHSyz promoveu manutenção do ganho de peso, redução do índice de Lee e melhora do perfil glicolipídico, com redução dos níveis séricos de triglicérides em 60,7 % e 29,7 % em relação ao colesterol total. O EHSyz evitou ainda a instauração do quadro de resistência nas ratas tratadas. Entretanto apesar da melhora na oligociclicidade, o extrato não foi capaz de melhorar o comprometimento reprodutivo das ratas tratadas. Desta forma, concluímos que o tratamento com EHSyz produziu efeitos acentuados sobre parâmetros metabólicos de ratas obesas sem interferir na capacidade reprodutiva das mesmas.

Made available in DSpace on 2017-07-10T14:17:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Josineia Coradini.pdf: 1285807 bytes, checksum: bfae8484a476d39e0d4df7db2833f2c3 (MD5) Previous issue date: 2014-02-10 / Currently, obesity is considered a common nutritional disorder. It's one of the most relevant public health problems in modern society and a possible risk factor for carpal tunnel syndrome, the pathology that is most closely related to compression of the median nerve. This experimental study with a quantitative and qualitative approach aimed to evaluate the influence of the exercise of swimming on peripheral nerve regeneration in control and obese rates submitted to compressive lesion of the median nerve. Wistar neonates rats along their first 5 days of life received MSG subcutaneous injections (4g/Kg from their body weight at the day). The control group received hyperosmotic saline solution. 48 Wistar rats were used, divided into 6 groups: G1 (control), G2 (control with lesion), G3 (control with lesion + swimming), G4 (obese), G5 (obese with lesion) and G6 (obese with lesion + swimming). The nerve compression was induced through a surgical procedure. The treatment with swimming started on the 3rd day after surgery, and was applied 5 times per week with progressive durations. Before the lesion, the animals were submitted to nociceptive and strength assessments. These tests were repeated on the 3rd postoperative day and also during treatment on the 7th, 14th and 21st day. At the end of treatment, the animals were anesthetized and the median nerve was removed, processed for embedment in paraffin and prepared for protein analysis of BDNF and GAP-43. The data revealed that the pain threshold in the medial region, near the nerve compression, was lower in the second and third assessment when compared to the other assessments, and that groups G5 and G6 were the ones that showed lower nociceptive thresholds in the assessments. In the analysis of grip strength at the first evaluation, all groups are equal, but in the other reviews the G1 and G4 show themselves significantly different from the others. The G1 and G4 groups present organized structures, with myelin sheaths marked by osmium tetroxide. The other groups have a large tissue disorganization, with considerable loss of myelin sheath, however, it was possible verify recovery areas of the nerve fiber, by the the myelin sheath formation in groups G3 and G6. BDNF protein expression is higher in groups G3 and G6 when compared to G1 and G4 groups. The GAP-43 protein was only higher in G3 when compared to G1 and G4 groups. The exercise of swimming was able to enabling the axon regeneration process both in control rats and in obese ones, without difference between these groups, but It was not effective in improving the functionality of the affected limb as well as in the increase of the proteins studied / Atualmente a obesidade é considerada uma desordem nutricional comum, sendo um dos mais relevantes problemas de saúde pública na sociedade moderna e um possível fator de risco para síndrome do túnel do carpo, a qual é a patologia mais relacionada à compressão do nervo mediano. Esta pesquisa é de caráter experimental com abordagem quantitativa e qualitativa tendo como objetivo avaliar a influência do exercício de natação como terapia na regeneração nervosa periférica de ratos controles e obesos, submetidos à lesão compressiva do nervo mediano. Ratos Wistar neonatos durante os primeiros cinco dias de vida receberam injeções subcutâneas de MSG.(4g/kg de peso corporal ao dia). O grupo controle recebeu solução salina hiperosmótica. Foram utilizados 48 ratos machos da linhagem Wistar, divididos em 6 grupos: G1 (controle), G2 (controle com lesão), G3 (controle com lesão + natação), G4 (obesos), G5 (obesos com lesão), G6 (obesos com lesão + natação). A compressão nervosa foi realizada por meio de procedimento cirúrgico. O tratamento com natação iniciou no 3º dia de pós- operatório, sendo realizado 5 vezes por semana com duração progressiva. Anteriormente à lesão, os animais foram submetidos a uma avaliação nociceptiva e de força, que se repetiu no 3º dia de pós-operatório e também durante o tratamento no 7º, 14º e 21º dia. Ao fim do tratamento, com os animais anestesiados, o nervo mediano foi retirado e processado para emblocamento em parafina e preparado para análise proteica do BDNF e GAP-43. O limiar de dor na região medial, próximo a compressão nervosa, foi menor na segunda e na terceira avaliação quando comparadas as demais avaliações, e os grupos G5 e G6 apresentaram menor limiar nociceptivo nas avaliações. Na análise da força de preensão no momento da primeira avaliação todos os grupos foram iguais entre si, porém nas outras avaliações os grupos G1 e G4 mostraram-se significativamente diferentes dos demais. Os grupos G1 e G4 apresentaram as estruturas de forma organizada, com bainhas de mielinas marcadas pelo tetroxido de ósmio. Já os demais grupos apresentaram uma grande desorganização tecidual, com diminuição considerável da bainha de mielina, entretanto, foi possível verificar áreas de recuperação da fibra nervosa, pela formação da bainha de mielina nos grupos G3 e G6. A expressão proteica de BDNF foi maior nos grupos G3 e G6 quando comparado aos grupos G1 e G4. A proteína GAP-43 somente foi maior no grupo G3 quando comparado aos grupos G1 e G4. O exercício de natação foi capaz que potencializar o processo de regeneração axonal tanto em ratos controle quanto em ratos obesos, não ocorrendo distinção entre estes grupos, porém não foi eficaz na melhora da funcionalidade do membro acometido como também no aumento das proteínas estudadas