Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:34Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-10-24Bitstream added on 2014-06-13T20:30:24Z : No. of bitstreams: 1 ferreira_es_me_arafcf.pdf: 882918 bytes, checksum: 71dfc1d528fe8cffc1f69600f7a69766 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Um grande interesse tem sido reportado às proteínas vegetais, em particular as da soja, cujo consumo tem indicado alternativa promissora para prevenção da dislipidemia e aterosclerose. Este estudo investigou o efeito da proteína - conglicinina isolada da soja, frente à resposta de um fármaco hipolipemiante (fenofibrato), em animais submetidos a uma dieta hipercolesterolêmica. Cinquenta e quatro ratos machos Wistar foram divididos em 6 grupos (n=9). O grupo controle (STD) recebeu uma dieta de caseína, e os demais hipercolesterolêmicos (HC), - conglicinina de 200mg/kg (HC+7S1), e 300mg/kg (HC+7S2), fenofibrato de 30mg/kg (HC+FF) e -conglicinina 300mg/kg associada com fenofibrato 30mg/kg (HC+7S2+FF) receberam dieta de caseína suplementada com 1% de colesterol e 0,5% de ácido cólico. Não foram observadas, nos tratamentos, alterações no crescimento, tecido adiposo, consumo e eficiência alimentar. O fenofibrato provocou aumento do peso e da concentração de triglicerídeo hepático. A proteína - conglicinina mostrou reduzir significativamente os efeitos dislipidêmicos séricos e hepáticos provocados pela dieta hipercolesterolêmica; no entanto, não foi observada adição destes efeitos quando associada ao fenofibrato. Os resultados reportados neste estudo sugerem que esta proteína tenha importante ação na regulação do metabolismo lipídico. Tais efeitos podem estar associados a peptídeos desta proteína, muito embora os mecanismos envolvidos não permaneçam completamente esclarecidos. / A great interest has been reported about plant proteins, particularly those of soybean whose consumption has shown potential alternatives to dyslipidemia and atherosclerosis prevention. This study investigated the effect of -conglycinin protein isolated from soybean and its response to hypolipemiant drug (fenofibrate) in animals submitted to a hipercolesterolemic diet. Fifty four male Wistar rats were divided into 6 groups (n = 9). The control group (STD) had received casein diet and the others hypercholesterolemic (HC), -conglycinin of 200mg/kg (HC+7S1) and 300mg/kg (HC+7S2), fenofibrate 30mg/kg (HC+FF) and -conglycinin of 300mg/kg associated to fenofibrate of 30mg/kg (HC+7S2+FF) received casein diet supplemented with 1% of cholesterol and 0.5% of cholic acid. There was no change in growth, adipose tissue, consumption and efficiency food for all treatments. The fenofibrate showed increase in weight and hepatic triglycerides. The -conglycinin protein had showed significantly reduce the effects in dyslipidemic serum and liver caused by hypercholesterolemic diet, however; it was not observed some additional effects when associated with fenofibrate. The results reported in this study suggest that the protein has an important action in the regulation of lipid metabolism. These ones may be associated with their peptides although the mechanisms involved are not already completely understood.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:34Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-11-29Bitstream added on 2014-06-13T19:29:46Z : No. of bitstreams: 1 fassini_pg_me_arafcf.pdf: 613112 bytes, checksum: f00daa1b71f5ee79d5673101f5d6e0e8 (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A globulina 11S (glicinina) é a proteína predominante da soja e tem sido extensivamente caracterizada. Além das suas propriedades nutricionais, há evidências de sua participação na redução das concentrações lipídicas do soro. Por outro lado, o fármaco rosuvastatina tem suas ações demonstradas no metabolismo lipídico, por reduzir a fração LDL-colesterol, bloqueando a chave do processo de produção de colesterol hepático. Embora a eficiência do medicamento seja comprovada, é importante considerar a alimentação como uma possível ação somatória, tendo em vista os graves problemas ocasionados pelas alterações lipídicas no organismo. À vista do exposto, a presente pesquisa teve por objetivo estudar o efeito da glicinina isolada da soja em comparação ao fármaco rosuvastatina em animais submetidos à dieta hipercolesterolêmica. Foram elaboradas duas dietas, uma padrão, contendo caseína como proteína (AIN-93M), e outra hipercolesterolêmica, composta pela dieta padrão adicionada de 1% de colesterol e 0.5% de ácido cólico. A proteína glicinina de soja (300 mg/kg de peso corporal) e o fármaco rosuvastatina (10 mg/Kg de peso corporal), ambos solubilizados em solução salina, foram administrados por gavagem. Foram utilizados ratos machos Wistar mantidos em gaiolas individuais sob condições adequadas. Os animais foram separados em cinco grupos (n = 9): 1) grupo padrão (STD) recebeu a dieta padrão; 2) grupo hipercolesterolêmico (HC) recebeu apenas a dieta hipercolesterolêmica; 3) grupo (HC+11S) recebeu a dieta e a proteína glicinina da soja; 4) grupo (HC+ROS) recebeu a dieta e o fármaco; 5) grupo (HC+ROS+11S) recebeu a dieta, a proteína e o fármaco. Ao final de 28 dias os animais foram sacrificados e o sangue removido para análises bioquímicas de colesterol total (CT), HDL-colesterol (HDL-C) e triglicérides (TG) plasmático, CT e TG hepático... / The 11S globulin (glycinin) is the predominant protein of soybeans and has been extensively characterized. In addition to its nutritional properties there is evidence of its action in reducing serum lipid concentrations. Moreover, the drug rosuvastatin has demonstrated its effects on lipid metabolism, by reducing LDL cholesterol and blocking the key enzyme in the process of cholesterol production in the liver. Although the efficiency of the drug is proven, it is important to consider the sum of its action and that of food, in view of the serious problems caused by changes in body fat. In view of the foregoing, the aim of the present study was to investigate the effects of isolated soy glycinin, as compared to the drug rosuvastatin, in rats subjected to a hypercholesterolemic diet. Two diets were prepared, a standard diet, containing casein as protein (AIN-93M), and a hypercholesterolemic, consisting of the standard diet plus 1% cholesterol and 0.5% cholic acid. The glycinin (300 mg/kg body weight) and the rosuvastatin (10 mg/kg body weight), both dissolved in saline, were administered by gavage. Male Wistar rats were kept in individual cages under appropriate conditions. The animals were divided into five groups (n=9): 1) standard group (STD) received the standard diet; 2) hypercholesterolemic group (HC) received the hypercholesterolemic diet alone; 3) group HC+11S received the HC diet and the glycinin; 4) group HC+ROS received the HC diet and the drug; 5) group HC+ROS+11S received the HC diet, the protein and the drug. After 28 days, the animals were sacrificed and the blood removed for biochemical analysis of total plasma cholesterol (TC), HDL-cholesterol (HDL-C) and triglycerides (TG), and hepatic TC and TG. The results indicated that the experimental HC diet was able to induce hypercholesterolemia and that a single daily dose of the isolated protein was appropriate for a comparative... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:35Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-10-08Bitstream added on 2014-06-13T19:29:50Z : No. of bitstreams: 1 amaral_als_me_arafcf.pdf: 420922 bytes, checksum: 19cdc39a261be98c272866672668e9a9 (MD5) / Vários estudos têm demonstrado que proteínas de leguminosas como soja, grão de bico, lentilhas e alguns feijões possuem propriedades hipocolesterolêmicas e hipotrigliceridêmicas, embora o mais comum seja a utilização de fármacos nestes quadros. Em função da composição proteica do grão de bico e da possível homologia funcional com as demais proteínas de leguminosas, esse estudo teve por objetivo verificar a ação da proteína do tipo legumina (11S) do grão de bico administrada oralmente como suplemento em animais hipercolesterolêmicos induzidos pela dieta. Foram analisados crescimento ponderal, consumo alimentar, excreção fecal, concentração sérica e hepática de colesterol total, triglicerídeos, fração HDL e não-HDL além da excreção de lipídeos totais e colesterol. Houve diferença entre o aspecto dos fígados dos grupos estudados decorrente do consumo da dieta hipercolesterolêmica e ação do fármaco. A administração diária de 300 mg/kg de peso corpóreo da fração 11S do grão de bico apesar de não apresentar efeito sobre os níveis séricos de colesterol total provocou uma diminuição de 28,77% nos níveis de triglicerídeos e de 51,48% e 82,70% nas concentrações hepáticas de colesterol total e triglicerídeos, respectivamente. Esses resultados mostram que a fração 11S do grão de bico possui efeito hipotrigliceridêmico e que as globulinas 11S de leguminosas podem apresentar ações fisiológicas diferentes sobre o metabolismo lipídico / Several studies have shown that proteins of legumes like soybeans, chickpeas, lentils and beans have some hypocholesterolemic properties and hypotriglyceridemic, although the most common is the use of drugs in these situations. Devide to the protein composition of chickpea and possible functional homology with other legume proteins, this study aimed to verify the effect of protein type legumin (11S) of chickpeas administered orally as a supplement in animals induced hypercholesterolemic diet. We analyzed weight growth, food consumption, fecal excretion, serum and hepatic total cholesterol, triglycerides, HDL and non-HDL beyond the excretion of total lipids and cholesterol. There was a difference between the appearance of the livers of groups arising from the consumption of hypercholesterolemic diet and drug action. The daily administration of 300 mg / kg body weight fraction of 11S chickpea although not have an effect on serum total cholesterol caused a decrease of 28.77% in the levels of triglycerides and 82% to 51.48 70% liver concentrations of total cholesterol and triglycerides, respectively. These results show that the fraction of 11S chickpeas has effect hypotriglyceridemic and 11S globulins of legumes may have different physiological actions on lipid metabolism

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2017-05-23T04:21:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 345667.pdf: 5164258 bytes, checksum: a6d6e4f807243c1d227b1ae23222193a (MD5) Previous issue date: 2016 / A hipercolesterolemia familiar é uma doença do metabolismo das lipoproteínas causada principalmente por mutações no gene do receptor de lipoproteína de baixa densidade (LDL). A resultante perda da função do receptor de LDL (LDLr) tem como principal consequência o aumento das concentrações plasmáticas de colesterol. Estudos clínicos reportam, com certa frequência, a comorbidade entre a hipercolesterolemia e transtornos de humor, como a depressão. Além disso, aumento na permeabilidade da barreira hematoencefálica, redução na proliferação celular hipocampal adulta e prejuízos comportamentais de aprendizado e memória foram reportadas em camundongos LDLr-/- (nocautes para o LDLr, modelo animal de hipercolesterolemia familiar). O primeiro objetivo deste estudo foi verificar o comportamento de camundongos LDLr-/- em testes preditivos para a depressão. Sabendo que a neurogênese hipocampal adulta é importante para a manutenção do humor e da cognição, o segundo objetivo foi verificar se a comorbidade entre a hipercolesterolemia e a depressão envolve alterações na neurogênese hipocampal adulta. Nossos resultados demonstraram que os camundongos LDLr-/- apresentaram comportamento tipo-depressivo (anedonia, diminuição do auto-cuidado e da motivação) em testes preditivos para depressão. Este comportamento tipo-depressivo foi revertido pelo tratamento antidepressivo repetido (fluoxetina, 7 dias). Os camundongos LDLr-/- também apresentaram aumento na atividade da monoamina oxidase (MAO) A no córtex cerebral e no hipocampo. Neste estudo as análises comportamentais também revelaram comprometimento de função cognitiva dependente do giro denteado (GD) hipocampal, o que corroborou a redução na proliferação e neurogênese das células precursoras neuronais (CPNs) observada nesta estrutura. Em outra etapa experimental, em cultivo primário de CPNs isoladas do GD de camundongos C57BL/6 adultos, foi caracterizada uma maior expressão gênica de enzimas de síntese de colesterol e do LDLr no estágio proliferativo, enquanto os genes do LRP1 e de enzimas de degradação têm sua expressão aumentada durante a diferenciação celular. Corroborando os resultados obtidos em camundongos LDLr-/-, tanto a exposição destas células à LDL humana isolada, quanto o silenciamento gênico do LDLr (LDLr siRNA), reduziram a proliferação de CPNs. O tratamento com LDL também reduziu a diferenciação neuronal de CPNs, induziu acúmulo de gotículas lipídicas intracelulares e inibiu a expressão gênica de enzimas de síntese do colesterol e do LDLr. Por sua vez, o LDLr siRNA reduziu também os níveis de RNAm do LRP1. A análise de microarray revelou que a LDL inibiu fortemente processos celulares relacionados ao metabolismo do colesterol. O tratamento com siRNA alterou a expressão relativa de muitos genes, no entanto a análise de ontologia não revelou associação significativa destes genes com processos celulares específicos. Ainda, ambos os tratamentos aumentaram a capacidade de reserva das CPNs no teste de função mitocondrial. Em conjunto, estes resultados caracterizam o fenótipo tipo-depressivo e a redução da neurogênese hipocampal adulta em um modelo experimental de hipercolesterolemia familiar, sendo que a neurogênese parece ser influenciada tanto pela presença da LDL no nicho neurogênico quanto pela função do LDLr. Conjuntamente, estes dados destacam o papel do metabolismo do colesterol na neurogênese adulta e reforçam as observações clínicas que associam a hipercolesterolemia à depressão.<br> / Abstract : Familial hypercholesterolemia is a lipoprotein metabolism disorder caused primarily by mutations in the low-density lipoprotein receptor (LDLr) gene, causing loss of function of the LDLr and increased plasma cholesterol. Clinical studies frequently report comorbidity between hypercholesterolemia and depression. Supporting those observations, pre-clinical studies from our group have shown impairments in the CNS of LDLr-/- mice (knockout mice for the LDLr, a murine model of familial hypercholesterolemia). Increased blood brain barrier permeability, reduced hippocampal cell proliferation, and learning and memory impairments in behavioral tasks are some of the CNS abnormalities observed in these mice. The first aim in this study was to verify the behavior of LDLr-/- mice in predictive tasks for depression. Considering that adult neurogenesis is thought to play a role in both mood regulation and cognition, the following objective in this study aimed to avaluate if an impairment in proliferation and differentiation of hippocampal adult neural stem cells (aNSC) may be underlying the co-morbidity between hypercholesterolemia and depression. Endorsing this hypothesis, in the present study we show that LDLr-/- mice present a depressive-like behavior (anhedonia, reduction in self-care and motivational behavior). This depressive-like behavior was abolished by repeated antidepressant treatment (fluoxetine, 7 days). In addition, the LDLr-/- mice presented increased MAO-A activity in the cerebral cortex and hippocampus. Moreover, a deficit in dentate gyrus (DG)-dependent cognitive task was observed in these mice using a DG-dependent behavioral test, corroborating the reduction in DG cell proliferation and neurogenesis. Primary culture of aNSCs isolated from the DG of adult C57BL/6 mice demonstrated that the expression of enzymes involved in cholesterol synthesis (HMG-CoA reductase and squalene synthase) and of LDLr peaks during the proliferation stage of the neurogenic process. On the other hand, the expression of LRP1, cholesterol 24-hydroxylase, and sterol 27-hydroxylase is up-regulated during the differentiation stage. In agreement with the observations from the LDLr-/- mice, exposure to both human LDL as well as silencing of the LDLr (using an LDLr siRNA) reduced cell proliferation and/or neuronal differentiation of aNSCs monolayers. LDL treatment was also associated with an increase in the number of lipid droplets and a down-regulation of mRNA levels of the LDLr and enzymes involved in cholesterol synthesis, whereas LDLr siRNA also reduced LRP1 gene expression. Microarray analysis showed that LDL down-regulated cholesterol metabolism. On the other hand, LDLr siRNA altered the relative expression of hundreds of genes, however a gene ontology analysis failed to define a clear relationship with cellular functions. In addition, both treatments increased the reserve capacity of aNSCs to respond to mitochondrial stress. Altogether, this study describes the depressive-like phenotype and deficits in adult hippocampal neurogenesis in an experimental model of familial hypercholesterolemia. These deficits may result from LDL being present in the neurogenic niche and from compromised LDLr function. In conclusion, the present data implicate cholesterol metabolism as a modulator of adult hippocampal neurogenesis and support the observed co-morbidity between hypercholesterolemia and depression.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Neurociências, Florianópolis, 2013. / Made available in DSpace on 2014-08-06T17:38:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 321926.pdf: 5018655 bytes, checksum: 99c33611d4b6e07eb4220bbf382d48cd (MD5) Previous issue date: 2013 / Evidências acumuladas ao longo das duas últimas décadas sugerem umaassociação positiva entre a hipercolesterolemia e o desenvolvimento dadoença de Alzheimer esporádica. Estudos prospectivos demonstraramque esta relação parece ser idade-dependente, sendo ahipercolesterolemia um possível fator de risco para o desenvolvimentoda doença de Alzheimer décadas após. A hipercolesterolemia familiar éuma doença genética do metabolismo das lipoproteínas cujo modo deherança é autossômico codominante e que se caracteriza por níveismuito elevados de colesterol plasmático. O fenótipo clínico dehipercolesterolemia familiar é geralmente decorrente de defeitos no geneLDLR, que codifica o receptor de lipoproteínas de baixa densidade(LDL). Recentemente, um estudo prospectivo demonstrou que pacientescom hipercolesterolemia familiar de meia-idade apresentam umaelevada incidência de comprometimento cognitivo leve em comparaçãoa indivíduos sem hipercolesterolemia familiar. Neste contexto, acaracterização do comprometimento cognitivo leve em modelosexperimentais de hipercolesterolemia familiar torna-se imperativa,visando tanto o desenvolvimento de abordagens terapêuticas epreventivas, quanto o entendimento de mecanismos molecularesresponsáveis pelo declínio cognitivo associado com ahipercolesterolemia. Os resultados desta tese demonstram quecamundongos nocaute para o receptor de LDL (LDLr-/-) de quatorzemeses (?meia-idade?), um modelo experimental de hipercolesterolemiafamiliar, apresentaram prejuízos cognitivos em testes de memóriaoperacional, de referência espacial e de procedimento. Também foiobservado um desequilíbrio no sistema antioxidante dependente daglutationa (GSH) e um aumento na atividade da enzimaacetilcolinesterase (AChE) no córtex pré-frontal dos camundongosLDLR-/- de ?meia-idade?. O fármaco hipolipemiante probucol e oexercício físico voluntário (rodas de correr) diminuíram de modosignificativo os níveis de colesterol plasmático de camundongos LDLr-/-,todavia, apenas o exercício físico voluntário foi capaz de atenuar osprejuízos cognitivos dos camundongos LDLr-/-. Por outro lado, aexposição a uma dieta hipercolesterolêmica (1,25 % de colesterol) pordois meses também induziu déficits cognitivos em camundongos Swiss,bem como aumentou significativamente a atividade da enzima AChE nocórtex pré-frontal e hipocampo. De modo interessante, a exposição decélulas de neuroblastoma humano da linhagem SH-5Y6Y à LDLtambém induziu um aumento na atividade da enzima AChE. Ademais,foi demonstrado que camundongos LDLr-/- parecem apresentar umamaior susceptibilidade a insultos neurotóxicos, como à neurotoxicidadeinduzida pela exposição crônica ao metilmercúrio (MeHg). Emconjunto, os achados do presente estudo caracterizam principalmente apresença de comprometimento cognitivo leve em camundongos LDLr-/-de ?meia-idade?, tal como observado em pacientes comhipercolesterolemia familiar de meia-idade. Os resultados deste estudoencorajam estudos adicionais para investigar o valor terapêutico doexercício físico regular no controle do comprometimento cognitivo leveem pacientes com hipercolesterolemia familiar, bem como a associaçãode fármacos hipolipemiantes com inibidores da enzima AChE notratamento da doença de Alzheimer. <br> / Abstract : Accumulating evidence over the past decades compellingly argues thatpeople with high serum cholesterol concentration in midlife have asignificantly higher risk of Alzheimer?s disease (AD) in later life.Familial hypercholesterolemia (FH) is an inherited metabolic disordercharacterized by high levels of plasma low density lipoproteins (LDL).FH remains the most common monogenic disorder of lipoproteinmetabolism, and it is mainly due to mutations in the LDL receptor(LDLr) gene that leads to the plasma accumulation of cholesterol esterladenLDL particles. It was recently showed that middle age patientswith FH show a particularly high incidence of mild cognitiveimpairments (MCI). Thus, the characterization of MCI in experimentalmodels of FH aimed at developing therapeutic and preventiveapproaches for the cognitive decline associated withhypercholesterolemia is imperative. The results presented herein showthat middle-aged low-density lipoprotein receptor-deficient (LDLr-/-)mice, an experimental model of FH, exhibit working, spatial reference,and procedural memory impairments, which were associated with theoccurrence of antioxidant imbalance, oxidative damage, and putativedecrease of cholinergic signaling in the prefrontal cortex. The lipidloweringdrug probucol and physical exercise (voluntary running wheel)similarly decreased total plasma cholesterol levels in LDLr-/- mice,however, only physical exercise mitigated the spatial memory deficits ofLDLr-/- mice. Moreover, mild hypercholesterolemia was modeled inSwiss mice (high fat/cholesterol diet) in order to evaluate primarybiochemical events linked to hypercholesterolemia-induced cognitiveimpairments. An impaired short-term object location memory wasobserved in hypercholesterolemic mice, which was associated with anincreased acetylcholinesterase (AChE) activity within the prefrontalcortex and hippocampus. Notably, LDL cholesterol significantlyincreased in a dose-dependent manner the activity of AChE in SHSY5Yhuman neuroblastoma cells. Finally, hypercholesterolemic LDLr-/- mice were more susceptible to methylmercury (MeHg)-inducedcerebellar glial activation, suggesting that hypercholesterolemia in itselfmay pose a risk factor in MeHg-induced neurotoxicity. Overall, thisstudy corroborated previous clinical data regarding the observation ofMCI in FH patients. The present findings may have importantimplications, since they provide an opportunity for clinical interventionssuch as control of vascular risk factors that minimize, arrest, or evenreverse cognitive deterioration.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-10-05T10:47:19Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2110632 bytes, checksum: 4bac3585ac28b41ab8e74293c80c0767 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-05T10:47:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2110632 bytes, checksum: 4bac3585ac28b41ab8e74293c80c0767 (MD5) Previous issue date: 2002-08-05 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Produtos fermentados por fungos, em especial o “ang-kak” (arroz fermentado por fungos do gênero Monascus) são tradicionalmente usados na culinária asiática como corantes e condimentos. Estes fungos produzem uma substância denominada mevinolina, utilizada na redução da concentração do colesterol sérico. Essa substância inibe a enzima hidroximetilglutaril coenzima A redutase (HMG-CoA redutase), enzima chave na biossíntese do colesterol. Foi realizada a caracterização do arroz fermentado analisando as concentrações de proteínas, lipídios, carboidratos, cinzas e umidade. Posteriormente, foram realizados dois ensaios biológicos com o objetivo de avaliar os efeitos hipolipidêmicos e toxicológicos do arroz fermentado pelo fungo Monascus ruber. Utilizaram-se 36 coelhos machos da raça Nova Zelândia Branco, com hiperlipidemia induzida por colesterol 1% administrado na ração juntamente com o arroz fermentado que foi seco e triturado e adicionado nas concentrações de 1, 5 e 10%. Da análise do arroz fermentado verificou-se que houve um aumento nas concentrações de proteínas, lipídios e redução na concentração de carboidratos. O arroz fermentado na concentração de 10% foi mais eficaz no controle da hiperlipidemia, promovendo redução de colesterol total (37,14%), LDL-c (37,73%), VLDL-c (51,44%), triacilgliceróis (51,44%). O arroz fermentado a 10% promoveu aumento da lipoproteína HDL em 33,85% . O segundo ensaio foi realizado com a finalidade de avaliar a toxicologia aguda deste produto. Foram dosados as concentrações de creatinina, proteínas totais, albumina, bilirrubina total, bilirrubina direta, ácido úrico, fosfato, ferro, cloro, cálcio, e as atividades de gama glutamil-transferase (gama-GT), transaminase glutâmico- pirúvica (TGP), transaminase glutâmico-oxaloacética (TGO) e fosfatase alcalina no 1 o , 15 o , 30 o dias do experimento. No estudo toxicológico não foi observada variação significativa nos parâmetros bioquímicos analisados. No estudo histopatológico constatou-se que a adição de arroz fermentado na dieta dos animais não alterou a morfologia das células do coração. Quando adicionou-se o arroz fermentado juntamente com o colesterol, verificou-se que esse arroz impediu a formação de áreas extensas de lesões decorrentes da adição de colesterol. Quanto ao fígado, devido às características inerentes desse órgão em coelhos, o efeito da adição do arroz fermentado na dieta dos animais não levou a resultados conclusivos. O arroz fermentado por Monascus ruber se mostrou, promissor na modulação dietética de lipídios sanguíneos, embora estudos em outros modelos animais e humanos sejam necessários para resultados mais conclusivos. / Products fermented by fungus, especially the “ang-kak” (fermented rice by fungus of gender Monascus) are used traditionally in the Asian cookery as colorings and condiments. These fungus produce a substance denominated mevinoline, used in the reduction of the concentration of blood cholesterol. That substance inhibits the enzyme 3-hidroxy – 3- metilglutaryl coenzime A reductase (HMG-CoA reductase), the principal enzyme in the biosynthesis of cholesterol. The characterization of the fermented rice was accomplished investigating concentrations of proteins, fat, carbohydrates, ash and moisture. Biological assays were carried out with the objective of evaluating the hypolipidemic and toxicological effects of fermented rice by fungus Monascus ruber. Thirty six male rabbits of New Zealand White strain were used, with hyperlipidemia induced by 1% cholesterol administered in the animals feed, together with the fermented rice that was dryed and triturated and added in the concentrations of 1, 5 and 10%. It was verified an increase in the concentrations of proteins, fat and reduction in the carbohydrates concentration. The rice fermented in the concentration of 10% was more effective in the control of the hyperlipidemia, lowering total cholesterol by 37,14%, LDL-c 37,73%, VLDL-c 51,44% and triglycerides 51,44%. The 10% fermented rice promoted an increase of 33,85% on the level of HDL-c. The second assay was accomplished with the purpose of evaluating the sharp toxicological of this product on the levels of creatinine, total proteins, albumin, total bilirubin, direct bilirubin, uric acid, phosphate, iron, chlorine, calcium, glutamil gamma transferase (gama-GT), alanine aminotransferase (GPT), aspartate aminotransferase (GOT) and alkaline fosfatase in the 1 st , 15 th and 30 th days of the experiment. For the constituents any significant variation was not observed. Heart histopathology showed that the addition of fermented rice in the diet of the animals didn't alter the morphology of the its cells. When the rice was added fermented together with the cholesterol, it was verified that that rice reduced the lesions promoted by cholesterol addition. In relation to the liver, due to the inherent characteristics of that organ of the rabbits, the effect of the addition of the fermented rice in the diet of the animals was not conclusive. The fermented rice with Monascus ruber was shown in that study to be an alternative choice in the dietary modulation of blood lipids / Dissertação copiada do Alexandria

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-10-05T17:05:44Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2950208 bytes, checksum: 5451d1e74091b023241758a46d8b125d (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-05T17:05:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2950208 bytes, checksum: 5451d1e74091b023241758a46d8b125d (MD5) Previous issue date: 2004-08-17 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Realizaram-se 4 ensaios biológicos e 1 in vitro com a finalidade de se avaliar as ações farmacológicas de flavonóides e corantes naturais sobre o metabolismo lipídico. Inicialmente, avaliou-se qual espécie animal, entre coelhos da variedade Nova Zelândia, ratos machos da variedade Wistar e Cobaias (Cavia porcellus), seriam melhores para a indução da hiperlipidemia, através da administração de ácido cólico e colesterol juntamente com a ração específica para cada espécie e água ad libitun. O sangue foi coletado aos 30 e 60 dias após o início do tratamento e analisados os teores de colesterol, colesterol-HDL, triacilgliceróis e glicose no soro desses animais. Após o término dos experimentos, foram coletadas amostras de fígado e arco aórtico dos animais, numa repetição de quatro amostras para cada grupo, escolhidos ao acaso, a fim de proceder à análise histopatológica. Neste ensaio, a indução mais eficiente em provocar a hiperlipidemia foi conseguida nos coelhos, mostrando níveis séricos extremamente altos em um curto intervalo de tempo, o que o faz ser um dos animais mais procurado atualmente para trabalhos com esta finalidade. Em posse dos resultados, montou-se o segundo ensaio biológico, optando-se então por utilizar coelhos da raça Nova Zelândia na determinação da melhor via de administração dos flavonóides e corantes naturais, que são utilizados atualmente no estudo de seus efeitos farmacológicos como agentes hipolipidêmicos. De acordo com o que foi observado e pela praticidade na administração, optou-se por administrar as substâncias a serem testadas, pela via oral, nos outros experimentos. Um terceiro ensaio biológico foi realizado no intuito de se determinar a melhor concentração na qual os flavonóides e corantes atuam como fármacos hipolipidêmicos. Os tratamentos foram constituídos por dois grupos controles, sendo um grupo alimentado só com ração e o outro com ração + colesterol + ácido cólico (RCA), e por outros 16 grupos que receberam as seguintes substâncias: quercetina, rutina, morina e naringenina, nas doses e 5 mg, 10 mg, 15 mg e 30 mg. A administração destas substâncias foi pela via oral, sendo ministradas em cápsulas tendo o talco farmacêutico como veículo. As melhores reduções conseguidas na diminuição do nível do colesterol total em relação ao grupo hiperlipidêmico foram observadas nos tratamentos com quercetina e rutina na dose de 5 mg e naringenina na dose de 10 mg, sendo estas variações de 56,42%, 55,00% e 54,04%, respectivamente, sendo significativo pelo teste de Dunnett. O melhor tratamento encontrado na redução dos níveis triglicêmicos foi o com quercetina a 10 mg, sendo que este tratamento abaixou o nível de triacilglicerol destes animais em 77,51% quando comparado com o grupo hipertriglicêmico. Em relação ao colesterol-HDL, foi considerada mais eficiente a substância que promoveu um maior aumento no nível deste constituinte no soro, que foi conseguido pelo tratamento com a morina nas dosagens de 10 e 15 mg, obtendo-se um aumento de 10,79% e 9,00%, respectivamente, em relação ao grupo hiperlipidêmico. Em um último ensaio biológico, comparou-se os efeitos dos flavonóides baicaleína, morina, naringenina, naringina, quercetina, rutina, crisina, luteolina e apigenina, os corantes naturais do extraídos do urucum norbixina e bixina e o medicamento comercial hipolipidêmico colestiramina na dosagem de 10 mg/Kg de peso corporal, por via oral, em cápsula, utilizando o talco como veículo. Sendo esta forma de mais fácil manejo, menos sacrificante para o animal e com uma maior garantia das concentrações ingeridas. A indução da hiperlipidemia foi através do ácido cólico e colesterol, colocados na ração diária dos animais. Esta forma de indução é mais próxima da real e menos sacrificante para o animal. Todas as substâncias reduziram os teores de colesterol no soro sanguíneo dos coelhos, sendo que as melhores reduções foram observadas nas substâncias naringenina, 54,04%, naringina, 49,26%, quercetina, 49,78%, rutina, 48,89%, crisina, 55,56%, luteolina, 52,58% e apigenina, 49,88. Todos os flavonóides estudados e o corante bixina reduziram os níveis de colesterol a valores inferiores ao do medicamento colestiramina e sua média foi estatisticamente diferente a médias deste medicamento, pelo teste de Tukey. Estes resultados mostram que as substâncias estudadas podem ser mais eficientes no combate a hipercolesterolemias dos que os medicamentos atualmente no mercado, com a vantagem de serem menos tóxicos que estes. Os melhores efeitos observados na redução do triacilglicerol plasmático foram conseguidos pelos flavonóides baicaleína, quercetina e crisina. A baicaleína e a rutina diminuíram os níveis de triacilglicerol a valores inferiores ao do grupo controle alimentado apenas com ração, sendo que os valores conseguidos pela baicaleína (-56,91%) foram estatisticamente diferente deste grupo controle pelo teste de Dunnett. A maior parte dos flavonóides aqui estudados teve um melhor efeito sobre o triacilglicerol do que o medicamento colestiramina. As substâncias que promoveram um maior aumento no nível de colesterol-HDL foram os flavonóides baicaleína, apigenina, morina e luteolina e o medicamento colestiramina. Estas substâncias tiveram um efeito hipercolesterolêmico para esta fração lipídica do colesterol, que foram de 122,21%, 281,63%, 10,79%, 21,14% e 37,26%, respectivamente. De uma maneira geral, pode-se observar que as substâncias estudadas apresentaram uma ação farmacológica bastante acentuada no metabolismo lipídico de coelhos hiperlipidêmicos sem, sobretudo, causar efeitos de toxicidade, aparentemente. No ensaio in vitro, procurou-se caracterizar o efeito das substâncias estudadas sobre a atividade da lipase, variando-se a concentração dos modificadores, sendo que todos eles aumentaram esta atividade. Este trabalho demonstrou os efeitos benéficos de alguns flavonóides e corantes naturais sob o metabolismo lipídico de coelhos, sendo que um dos mecanismos para explicar os níveis reduzidos de triacilgliceróis é o aumento da atividade da lipase por essas substâncias, porém, novas pesquisas devem ser realizadas para que estes compostos possam ser utilizados como medicamento e testados no homem. / Four biological assays were realized and 1 in vitro to evaluated the pharmacological action of flavonoids and natural coloring about the lipid metabolism. Initially, was evaluated which animal sort, between rabbits of the race New Zealand, male mouse of the race Wistar and guinea-pig (Cavia porcellus), would be better for the induction of the hyperglycemia, through of the administration of colic acid and cholesterol jointly with the feed specifies for each species and water ad libitun. The blood was collected 30 and 60 days after the beginning of the treatment and the levels of cholesterol, cholesterol – HDL, triacylglicerols and glucose in the serum of those animals were analyzed. After at the end of the experiments, were collected samples of liver and aortic arch of the animals, in a repetition of four samples for each group, choose at random, in order to proceed to the hystopatologic analysis. In this assays the induction more efficient in provoke to hyperlipidemia was obtained us rabbits, showing levels consecutives extremely loud in a short break of time, what is going to be one of the animals more found nowadays for works with this purpose. In possession of the results, was prepared the second biological assays, opting then by utilize rabbits of the race New Zealand in the determination of the best way of administration of the flavonoids and natural coloring, that are utilized nowadays in the study of her pharmacologicals effects how hypolipidemics agents. In agreement with what was observed in the administration, opted by administer the substances it will be tested, by the oral way, in the others experiments. In the third biological assay was realized in the intention of be determined the better concentration in the which the flavonoids and natural coloring like hypolipidemics pharmacs. The treatments were constituted by two groups of controls, being an alone group fed with feed and another with feed + cholesterol + colic acid (RCA), and by others 16 groups that received the following substances: quercetin, rutin, morin and naringenin, in the dose and 5 mg, 10 mg, 15mg and 30 mg. The administration of these substances was by oral way, being administered in capsule having the pharmaceutical talc as vehicle. The best reductions obtained in the diminution of the level of the total cholesterol regarding the group hyperlipidemic were observed us treatment with quercetin and rutin in the dose of 5 mg and naringenin in the dose of 10 mg, being this variation of 56,42%, 55,00% and 54,04%, respectively, being significant by the test of Dunnett. The best reduction found in the decrease of the levels triglycemics was with quercetin to 10 mg, being that this treatment lowered the level of triacylglicerol of these animals in 77,51% when was compared with the group hypertriglycemic. Regarding the cholesterol – HDL, was considered more efficient the substance that promoted the most greatest increase in the level of this constituent in the serum, that was obtained by thetreatment with the morin in the dosages of 10 and 15mg, obtaining itself an increase of 10,69% and 9,00%, respectively, regarding the group hyperlipidemic. In a last biological assays, compared the effects of the flavonoids baicalein, morin, naringenin, naringin, quercetin, rutin, cricin, luteolin and apigenin, the natural coloring extracted of the aurum norbixin and bixin and the commercial medicine hypolipidemic colestiramin in the dosage of 10mg/kg of corporal weight, by oral way, in capsule, utilizing the talc as vehicle. Being this forms of easier management, less sacrificial for the animal and with a bigger guarantee of the concentrations ingested. The induction of the hyperlipidemia was through of the colic acid and cholesterol, put in the daily feed of the animals. This form of induction is more near to the real one in less sacrificant for the animal. All the substances reduced the levels of cholesterol, in the blood serum of the rabbits, being that the best reductions were observed in the substances naringenin, 54,04%, naringin, 49,26%, quercetin, 49,78%, rutin, 48,89%, crisin, 55,56%, luteolin, 52,58% and apigenin, 49,88. All of the flavonoids studied and coloring bixin reduced the levels of cholesterol to lower values to the of the medicine colestiramin and his medium was statistics peculiar on average of this medicine, by test of Tukey. These results show that the substances studied can be more efficient in the combat to hypercholesterolemias than the medicines at present in the market, with the advantage of will be less toxic than these. The best effects observed in the reduction of the triacylglicerol plasmatic were obtained by the flavonoids baicalein, quercetin and crisin. The baicalein and to rutin diminished the levels of tryglicerids to lower values the of the group control feeding just with feed, being that the values obtained by the baicalein (- 56, 91%) were statistics unlike this control group by the test of Dunnett. Most of the flavonoids here studied had a better effect about the triacylglicerol than the medicine colestiramin. The substances that promoted a bigger increase in the level of cholesterol – HDL were the flavonoids baicailen, apigenin, morin and luteolin and the medicine colestiramin. These substances had the effect hypercholesterolemic for this part of the lipid of the cholesterol, that were of 122, 21%, 281,63%, 10,79%, 21,14% and 37,26% respectively. In general way, is able to be observed that the substances studied presented an pharmacological action enough accentuated in the lipid metabolism of rabbits hyperlipidemics without, above all, cause effects of toxicity, apparently. In assays in vitro, found be characterized the effect of the substances studied about the activity of the lipase, varying the concentration of the modifier, being that all they increased this activity. This presentation showed the beneficial effects of some flavonoids and natural coloring in the lipid metabolism of rabbits, being that one of the mechanisms for explain the limited levels of triacylglicerols and increase of the activity of the lipase by those substances, however, new researches should be realized for that these composed can be utilized like medicine and tested in the man. / Tese importada do Alexandria, autor sem CPF

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Neurociências, Florianópolis, 2017. / Made available in DSpace on 2018-01-09T03:22:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 348742.pdf: 2862420 bytes, checksum: fbf57c59c857570eee967431317e8d56 (MD5) Previous issue date: 2017 / O colesterol é uma molécula vital do corpo humano. Sua estrutura apresenta características peculiares que lhe conferem diversas funções fisiológicas, desde componente fundamental das membranas plasmáticas, como percursor de hormônios esteroides, sais biliares e da vitamina D, além de, possuir papel chave em mecanismos de aprendizagem e memória, tais como a plasticidade sináptica. A hipercolesterolemia (HC) é um estado encontrado em humanos que apresentam níveis altos de colesterol plasmático. Esta condição é caracterizada por uma desregulação na homeostase do colesterol, portanto sendo considerado o principal fator de risco para o desenvolvimento e progressão da aterosclerose e doenças cardiovasculares (DCV). Estudos mostram que a HC induz comprometimento vascular e essa disfunção vascular pode causar doenças cerebrovasculares, como a demência vascular. A doença de Alzheimer (DA) é uma doença multifatorial que afeta tanto o sistema nervodo central (SNC) quanto o sistema periférico. Os indivíduos com DA exibem um severo prejuízo de memória e outros comprometimentos cognitivos. No entanto, as causas do desenvolvimento da DA ainda são desconhecidas. A hipótese vascular para a DA postula que a diminuição do fluxo sanguíneo encefálico (FSE), devido a um comprometimento neurovascular, seria o evento inicial dos processos de neurodegeneração. Reforçando essa hipótese, fatores de riscos associados às doenças vasculares, como a hipercolesterolemia, estão envolvidos no desenvolvimento e progressão da DA. Nesse sentido, a hipótese de trabalho é que prejuízos cognitivos, sinápticos e neurovasculares observados na DA, seriam exacerbados pela hipercolesterolemia induzida por uma dieta enrriquecida com colesterol (DC). Para esse fim, alimentamos por 8 semanas triplo transgênicos para estudar a DA (3xTg-DA) e camundongos não transgênicos (NTg), de ambos os sexos, com DC. Os resultados desta tese demonstram que a ingestão de DC induziu hipercolesterolemia em ambos os genótipos sem ganho no peso corporal. Além disso, a DC causou prejuízos de memória espacial e de reconhecimento nos animais NTg que foram similares aos 3xTg-DA. Os NTg que receberam a DC apresentaram alterações no comportamento exploratório e aversivo, e exibiram um aumento na locomoção. Já os camundongos 3xTg-DA não apresentaram uma intensificação nos prejuízos cognitivos, já observados nesse modelo,induzido pela ingestão de DC. Em seguida buscamos elucidar os mecanismos pelos quais a ingestão de DC induz prejuízos cognitivos em animais NTg. A ingestão de DC induziu uma diminuição na biodisponibilidade de ?NO e uma diminuição na taxa de consumo de O2 mitocondrial em fatias hipocampais de ambos os genótipos. Finalmente, observamos que a dieta causou um comprometimento na BHE alterando componentes com a aquaporina-4 (AQP-4) nos NTg e a lectina de tomate nos 3xTg-DA. Em conjunto, esses dados encorajam estudos sobre fatores de risco modificáveis, ou seja, uma melhora nos hábitos de vida, principalmente na ingesta alimentar, para indivíduos sem predisposição genética pode trazer benefícios que resultaram em uma melhor qualidade de vida durante o avanço da idade. / Abstract : Cholesterol is a vital component of the human body. This compound has peculiar characteristics that give it several physiological functions, such as a component of the plasma membranes, as a precursor of steroid hormones, bile salts and vitamin D, moreover, as a key role in mechanisms of learning and memory, such as synaptic plasticity. Hypercholesterolemia (HC) is a human?s condition which the subjects display a high plasma cholesterol levels. This status is characterized by deregulation of cholesterol homeostasis, therefore, has been considered the main risk factor for the development and progression of atherosclerosis, and it?s the leading cause of death from cardiovascular diseases (CVD). Studies shown that HC induces vascular impairment, and this vascular dysfunction may to cause cerebrovascular diseases, such as vascular dementia. Alzheimer's disease (AD) is a multifactorial disease that affects both the central nervous system (CNS) and peripheral system. Individuals with AD exhibit severe memory impairment and other cognitive impairments. However, the causes of AD development are still unknown. The vascular hypothesis for AD postulates that the reduction of the cerebral blood flow (CBF), due to a neurovascular uncoupling, for example, would be the initial event of the neurodegeneration processes. Reinforcing this hypothesis, risk factors associated with vascular diseases, as hypercholesterolemia, are involved in the development and progression of AD. In this sense, the hypothesis of this work is that cognitive, synaptic and neurovascular damages observed in AD, would be exacerbated by hypercholesterolemia induced by a high cholesterol diet. To this end, we fed for 8 weeks a triple transgenic mouse (3xTg-AD) and non-transgenic mice (NTg), of both sexes, with a diet enriched in fat/cholesterol (HFCD). Herein, our results show that the ingestion of HFCD induced hypercholesterolemia in both genotypes without body weight gain. In addition, HFCD induced spatial and recognition memory impairment in NTg mice similar to 3xTg-DA mice. NTg HFCD-fed displayed changes in exploratory and aversive behavior, and exhibited increase in locomotion. 3xTg-AD mice did not display an intensification on HFCD-induced cognitive impairments, already observed in this model. Next, we seek to elucidate the mechanisms by which HFCD induces cognitive impairments in NTg mice. The ingestion of HFCD induced a decrease in the ?NO bioavailability and a decrease in the rate of mitochondrial O2consumption in hippocampal slices of both genotypes. Finally, we observed that the HFCD induces an impairment in BBB altering components as aquaporin-4 (AQP-4) in NTg mice and tomato lectin in 3xTg-DA mice. Together, the results of the present study reinforce the vascular hypothesis for the development of AD. Thus, these data encourage studies on modifiable risk factors, in other words, an improvement in life habits, especially in food intake, for individuals without genetic predisposition may bring benefits that resulted in a better quality of life during the advancement of the age.

Submitted by Maykon Nascimento (maykon.albani@hotmail.com) on 2016-04-19T19:29:13Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertacao Brunelli da Ros Peruch.pdf: 2030986 bytes, checksum: e3a8a297af1545064ffae36bc7953baa (MD5) / Approved for entry into archive by Patricia Barros (patricia.barros@ufes.br) on 2016-06-27T18:02:41Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertacao Brunelli da Ros Peruch.pdf: 2030986 bytes, checksum: e3a8a297af1545064ffae36bc7953baa (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-27T18:02:41Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertacao Brunelli da Ros Peruch.pdf: 2030986 bytes, checksum: e3a8a297af1545064ffae36bc7953baa (MD5) / FAPES / Introdução. O acidente vascular encefálico (AVE) é classicamente caracterizado como um déficit neurológico atribuído a uma lesão focal aguda do sistema nervoso central (SNC), por causa vascular, sendo uma das principais causas de invalidez e morte mundial. De todos os casos, 87% são de origem isquêmica. Os principais fatores de risco associados são idade, raça, aterosclerose, hiperlipidemia, tabagismo e outros. Até a presente data a terapia medicamentosa aprovada pela Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA) e pelo Food and Drug Administration (FDA) para o tratamento do AVE isquêmico agudo é a utilização da classe dos agentes trombolíticos ativadores da fibrinólise. Várias citocinas parecem desempenhar um papel na neurogênese e/ou regeneração neuronal. Recentemente, estudos demonstraram que o fator estimulador de colônias de granulócitos (G-CSF) possui efeitos neuroprotetores em camundongos submetidos à isquemia cerebral, porém seus efeitos frente ao aumento do estresse oxidativo e à hipercolesterolemia/aterosclerose, uma das principais causas de AVE, ainda é desconhecido e foi o objeto deste estudo. Métodos. Foram utilizados camundongos knockout para a apolipoproteína E (ApoE-/-) e C57BL/6 machos, adultos jovens, com idade variando entre 12-14 semanas e pesando em média 28 g divididos em três grupos: controle ApoE-/-, tratado G-CSF ApoE-/- e controle C57BL/6. Todos os animais foram submetidos a oclusão das artérias carótidas comuns direita (temporária) e esquerda (permanente) seguida de administração de solução glicosada 5% (controles) e G-CSF 100μg/kg/dia (tratado) logo após e 24h depois da cirurgia. No terceiro dia após a oclusão os animais foram sacrificados e foi obtido o peso úmido do baço, coletada amostra de sangue e extraído o cérebro. As comparações estatísticas foram realizadas por teste t de Student e ANOVA de 1 via, seguida do post hoc de Fisher. Resultados e Discussão. A contagem de leucócitos circulantes no grupo G-CSF ApoE-/- apresentou-se estatisticamente superior (6661±1059 céls/mm3) quando comparado ao grupo controle ApoE-/- (4044±610 céls/mm3) e ao grupo controle C57BL/6 (3965±409 céls/mm3) evidenciando o efeito sistêmico do G-CSF no recrutamento e maturação de granulócitos sanguíneos. Na dosagem do colesterol total plasmático o G-CSF não reverteu a hipercolesterolemia dos animais ApoE-/-. A área macroscópica de infarto cerebral foi significativamente menor no grupo ApoE-/- tratado com G-CSF (0,03±0,01 cm2) quando comparado com o grupo ApoE-/- controle (0,18±0,03 cm2). Observou-se ainda diferença significativa quando comparamos a área de infarto do grupo controle C57BL/6 (0,08±0,02 cm2) com o grupo controle ApoE-/-. A força muscular, medida através do teste do agarre (grip force), estava significativamente diminuída nos animais controle ApoE-/- 48h pós-cirurgia quando comparados aos controles pré-cirúrgicos (de 97,9±9,8g para 70,69±10,62g), enquanto que no grupo G-CSF ApoE-/- a força registrada antes da cirurgia foi preservada no pós-cirúrgico. No ensaio para o estresse oxidativo plasmático o tratamento com G-CSF não alterou os parâmetros nos grupos ApoE-/- (controle = 23,76 ± 3,36 vs G-CSF = 23,0 ± 3,20 μMC-T/mg) que estavam estatisticamente aumentados quando comparados ao grupo controle C57BL/6 (3,97 ±1,22 μMC-T/mg). O teste do TUNEL (TdT-mediated-dUtp Nick End Labeling), para evidenciar a morte celular tecidual mostrou relação de células positivas/negativas menor no grupo tratado ApoE-/- quando comparado ao grupo controle ApoE-/-. A imunomarcação de neurônios e receptores de G-CSF mostrou estimulo a sobrevivência neuronal e maior presença de receptores no grupo tratado quando comparado ao controle. Conclusão. Nossos achados estão de acordo com a literatura e contribuem para evidenciar o efeito neuroprotetor do G-CSF, fortemente ligado a propriedade antiapoptótica, em modelo de isquemia cerebral global mesmo na presença do principal fator de risco para o AVE, a aterosclerose/hipercolesterolemia, e do aumento do estresse oxidativo. / Introduction. The stroke is classically characterized as a neurological deficit attributed to an acute focal lesion of the central nervous system (CNS), for vascular cause, and a major cause of disability and death worldwide. In all cases, 87% are ischemic. The main risk factors are age, race, atherosclerosis, hyperlipidemia, smoking, and others. To date drug therapy approved by the National Health Surveillance Agency (ANVISA) and the Food and Drug Administration (FDA) for the treatment of acute ischemic stroke is the use of the class of thrombolytic agents activators of fibrinolysis. Several cytokines appear to play a role in neurogenesis and /or neuronal regeneration. Recent studies have demonstrated that granulocyte colony stimulating factor (G-CSF) has neuroprotective effects in mice subjected to cerebral ischemia, but its effects opposite to increased oxidative stress and hypercholesterolemia/atherosclerosis, a major cause of stroke, although is unknown and was the object of this study. Methods. Were used apolipoprotein E knockout (ApoE-/-) and C57BL/6 mice, male, young adults, aged between 12-14 weeks and weighing on average 28 g divided into three groups: control ApoE-/-, treated G-CSF ApoE-/- and control C57BL/6. All animals underwent occlusion of common carotid arteries (temporary) and left (standing) then administration of glucose solution 5% (controls) and G-CSF 100μg/kg/day (treated) just after and 24 hours following surgery. On the third day after occlusion the animals were sacrificed and the wet weight was obtained from the spleen, blood sample collected and extracted the brain. Statistical comparisons were performed by test t Student's and ANOVA 1 way, followed by Fisher's post hoc. Results and discussion. The count of circulating leukocytes in the G-CSF ApoE-/- group was statistically higher (6661 ± 1059 cells/ mm3) compared to the control ApoE-/- group (4044 ± 610 cells/mm3) and the control C57BL/6 group (3965 ± 409 cells/mm3) highlighting the systemic effect of G-CSF in the recruitment and maturation of blood granulocytes. In the measurement of plasma total cholesterol G-CSF did not reverse the hypercholesterolemia in ApoE-/- animals. The macroscopic area of cerebral infarction was significantly lower in group ApoE-/- treated with G-CSF (0.03 ± 0.01 cm2) compared with the group ApoE-/- control (0.18 ± 0.03 cm2). There was also significant difference in the infarcted area of control C57BL/6 group (0.08 ± 0.02 cm2) with the control ApoE-/- group. Muscle strength, measured by the grip test, was significantly reduced in ApoE-/- control animals 48 hours after surgery compared to preoperative controls (97.9 ± 9.8g for 70.69 ± 10,62g), while the group G-CSF ApoE-/- force recorded before surgery was preserved after surgery. In the assay for oxidative stress plasma treatment with G-CSF did not change the group parameters in ApoE-/- (control = 23,76±3,36 vs G-CSF = 23,0±3,20 μMC-T/mg) which was statistically increased compared to the C57BL/6 control group (3.97 ± 1.22 μMC-T/mg). The test TUNEL (TdT-mediated dUTP Nick End Labeling), to show the tissue cell death was related to positive cells/negative less in the group treated ApoE-/- as compared to the control group ApoE-/-. The immunostaining of neurons and G-CSF receptor showed stimulation for neuronal survival and increased presence of receptors in the treated group compared to the control. Conclusion. Our findings are in agreement with the literature and contribute to highlight the neuroprotective effect of G-CSF, strongly linked to antiapoptotic property in global cerebral ischemia model even in the presence of the major risk factor for stroke, atherosclerosis/hypercholesterolemia, and of increased oxidative stress.

Submitted by Maurílio Figueiredo (maurilioafigueiredo@yahoo.com.br) on 2013-08-29T22:06:21Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_CaracterizaçãoHistológicadaEsteatose.pdf: 1451884 bytes, checksum: b7d6e461b8d9d6ea641d530ad487e694 (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2013-10-10T15:33:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_CaracterizaçãoHistológicadaEsteatose.pdf: 1451884 bytes, checksum: b7d6e461b8d9d6ea641d530ad487e694 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-10-10T15:33:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_CaracterizaçãoHistológicadaEsteatose.pdf: 1451884 bytes, checksum: b7d6e461b8d9d6ea641d530ad487e694 (MD5) Previous issue date: 2013 / A doença hepática gordurosa não alcoólica (DHGNA) é uma doença caracterizada pelo acúmulo de gordura no fígado de pacientes sem história de abuso de álcool. É a doença hepática mais comum no mundo ocidental, e sua prevalência está aumentando. A DHGNA é classificada em dois tipos: esteatose, na qual ocorre somente a deposição de gordura nos hepatócitos e esteato-hepatite não alcoólica (EHNA), na qual ocorre, além da esteatose, necroinflamação. A hipótese mais comumente aceita para explicar a progressão da esteatose à EHNA é a hipótese “Two-hit”, o primeiro “hit” refere-se aos fatores que podem promover esteatose hepática e o segundo “hit” refere-se aos fatores que podem agravar a esteatose hepática levando à esteato-hepatite. O estresse oxidativo, definido como um desequilíbrio entre a produção de espécies reativas e a capacidade dos sistemas de defesa antioxidante em neutralizá-las e prevenir seus efeitos deletérios, é um fator responsável pelo segundo “hit”. Elucidar os mecanismos de lesão induzida por estresse oxidativo no fígado é essencial para a compreensão da patogênese da doença. Assim, nossos objetivos foram determinar se a dieta hipercolesterolemiante provoca alterações histológicas no fígado de ratas e verificar se a mesma dieta induz alterações no status antioxidante por meio da expressão de mRNA da NADPH oxidase e das enzimas antioxidantes; da atividade das enzimas catalase, SOD Cu-Zn, glutationa total; e do marcador de peroxidação lipídica (TBARS). Ratas Fischer foram divididas em dois grupos de oito animais de acordo com o tratamento recebido, Controle (C) e Hipercolesterolêmico (H), sendo aquelas do grupo C alimentadas com dieta padrão (AIN-93M) e aquelas do grupo H alimentadas com dieta hipercolesterolemiante (25% de óleo de soja e 1% de colesterol). Ao final de oito semanas, os animais foram anestesiados e eutanasiados. Os dados paramétricos foram avaliados por teste T de Student e os não paramétricos por Mann-Whitney. A dieta hipercolesterolemiante não alterou o peso corporal, mas resultou em acúmulo de lipídios no fígado, aumentando os níveis séricos das aminotransferases e de colesterol. A expressão de mRNA de subunidades da NADPH oxidase estava aumentada no fígado de animais do grupo H e alterações na atividade e expressão de enzimas antioxidantes e de TBARS foram observadas. Esses resultados sugerem que a dieta hipercolesterolemiante induziu esteatose hepática em ratas, constituindo-se, portanto, em um bom modelo para o estudo de esteatose. __________________________________________________________________________________________ / ABSTRACT: The Nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD) is a disease characterized by the accumulation of fat in the liver of patients with no history of alcohol abuse. It is the most common liver disease in the Western world, and its prevalence is increasing. NAFLD is classified into two types: steatosis, which occurs only fat deposition in hepatocytes and non-alcoholic steatohepatitis (NASH), which occurs, in addition to steatosis, necroinflamation. The most commonly accepted hypothesis to explain the progression of steatosis to NASH is the hypothesis "Two-hit", the first "hit" refers to factors that may promote hepatic steatosis and the second "hit" refers to factors that can intensify hepatic steatosis leading to steatohepatitis. Oxidative stress, defined as an imbalance between the production of reactive species and the capacity of antioxidant defense systems to neutralize them and prevent their harmful effects, is a factor responsible for the second "hit". Elucidating the mechanisms of injury-induced oxidative stress in the liver is essential for understanding the pathogenesis of the disease. Thus, our aims were to determine whether the hypercholesterolemic diet causes histological changes in the liver of rats and verify if the same diet induces changes in antioxidant status through the mRNA expression of NADPH oxidase and antioxidant enzymes, the activity of catalase, SOD-Cu/Zn, total glutathione, and the marker of lipid peroxidation (TBARS). Fischer rats were divided into two groups of eight animals according to treatment received, control (C) and hypercholesterolemic (H), those in group C were fed with standard diet (AIN-93M) and those of the H group were fed with hypercholesterolemic diet (25% soybean oil and 1% cholesterol). At the end of eight weeks, the animals were anesthetized and euthanized. Parametric data were analyzed by Student's t test and the nonparametric by Mann-Whitney test. The hypercholesterolemic diet did not affect body weight, but resulted in accumulation of lipids in the liver, increased serum levels of aminotranferases and cholesterol. The mRNA expression of subunits of the NADPH oxidase was increased in the liver of animals from group H and alterations in activity and expression of antioxidant enzymes and TBARS were observed. These results suggest that the hypercholesterolemic diet induced hepatic steatosis in rats constituting, therefore, a good model for the study of steatosis.