Introdução: Anormalidades nos supressores tumorais p14, p16 e p53 são relatadas em diversos tipos de câncer em humanos. Na carcinogênese ovariana, p16 e p53 foram extensivamente estudados, mas p14 foi analisado somente em carcinomas. Objetivo: O estudo visa determinar a expressão imuno-histoquímica de p14, p16 e p53 em tumores ovarianos epiteliais benignos, borderline e malignos. Método: Estudo transversal utilizando imuno-histoquímica em amostras de tumores epiteliais ovarianos emblocados em parafina do Hospital de Clínicas de Porto Alegre. Resultados: p14 foi positivo em 93% dos tumores benignos, 94% dos borderline e 60% dos malignos. A perda de expressão foi estatisticamente associada com carcinomas. p16 foi positivo em 94,6% dos carcinomas, 75% dos tumores borderline e 45,7% dos benignos. p53 foi positivo em 29,7%, 16,7% e 2,9% dos tumores malignos, borderline e benignos, respectivamente. Os subtipos de carcinoma não mostraram diferenças de expressão. Conclusão: Nosso estudo foi o primeiro a descrever a expressão de p14 em tumores benignos e borderline. Ela permanece estável nos benignos e borderline, enquanto os carcinomas exibem uma perda de expressão significativa. Isso pode indicar que anormalidades de p14 acontecem tardiamente na carcinogênese. As taxas de expressão de p16 e p53 foram semelhantes a estudos anteriores. Estudos futuros devem investigar anormalidades genéticas nas sequencias codificadoras de p14 e incluir todos os tipos de tumor epitelial ovariano. / Background: Abnormalities in tumor suppressors p14, p16 and p53 are reported in several human cancers. In ovarian carcinogenesis, p16 and p53 have been extensively studied, but p14 was only analyzed in carcinomas. Aim: This study seeks to determine p14, p16 and p53 immunohistochemical expression in benign, borderline and malignant ovarian epithelial tumors and correlate them with survival and clinical variables. Methods: Cross-sectional study utilizing immunohistochemical staining of p14, p16 and p53 in paraffin-embedded tissue samples from ovarian epithelial tumors obtained from Hospital de Clinicas de Porto Alegre. Results: p14 was positive in 93% of benign, 94% of borderline and 60% of malignant tumors. Loss of expression was statistically associated with carcinomas. p16 was positive in 94.6% of carcinomas, 75% of borderline and 45.7% of benign tumors. p53 was positive in 29.7%, 16.7% and 2.9% of malignant, borderline and benign tumors, respectively. Carcinoma subtypes showed no difference in expression. Conclusions: To our knowledge, this is the first description of p14 expression in benign and borderline tumors. It remains stable in benign and borderline tumors, while carcinomas show a significant absence of staining. This may indicate p14 abnormalities occur later in carcinogenesis. p16 and p53 expression rates show similar results to previous reports. Future studies should investigate genetic abnormalities in p14 coding sequences and include all types of ovarian epithelial tumors.

O câncer de pulmão é responsável por aproximadamente 13% do total de casos de neoplasias malignas e por cerca de 1.4 milhões de mortes por ano em todo mundo. Esta neoplasia apresenta-se sob dois principais subtipos: câncer de pulmão de pequenas células (CPPC) e câncer de pulmão de não-pequenas células (CPNPC). Cerca de 85% dos casos de câncer de pulmão são do tipo CPNPC. Os sinais e sintomas são secundários ao crescimento do tumor primário, ao comprometimento lobo-regional, à disseminação à distância, ou são secundários às síndromes paraneoplásicas. Essas características refletem diretamente sobre as taxas de mortalidade; de cada 100 novos casos, 80 são inoperáveis e a maioria morre dentro de 3 anos. Isso significa que, apesar dos diversos avanços no diagnóstico e tratamento, o prognóstico do câncer de pulmão permanece sendo extremamente ruim, com sobrevida média de 10 meses, e cumulativa total em 5 anos de aproximadamente 12%. Atualmente, o prognóstico e a decisão terapêutica de pacientes com câncer de pulmão é baseada no TNM, Embora esse seja o procedimento considerado padrãoouro entre os profissionais de saúde, ele não leva em consideração características biológicas do tumor. Nesse contexto, a identificação de biomarcadores para câncer pode agregar importantes informações ao já estabelecido sistema TNM e resultar em tratamentos mais eficientes e em menores taxas de mortalidade. Existem 5 fases distintas que conceitualizam o desenvolvimento de um biomarcador tumoral. Através dessas fases consecutivas, é possível que se desenvolvam ferramentas úteis para triagem populacional, capazes de serem implementadas na rotina clínica para predição de desfecho do paciente, resposta terapêutica e monitoramento da doença. O presente projeto avaliou o valor prognóstico dos principais genes citados na literatura como potenciais biomarcadores para CPNPC, e verificou-se que nenhum deles apresentou significância na correlação estatística que indica poder prognóstico. Além disso, identificamos e validamos o papel prognóstico da cofilina-1 por meio de dados de microarranjo e quantificação de seu imunoconteúdo em biópsias de CPNPC. Para tanto, fizemos uso de meta-análise de bancos de dados e análise densitométrica das reações imuno-histoquímicas, seguida de correlação com dados de grau de diferenciação tumoral, classificação histológica, sexo, idade e desfecho relativo a cada caso. Além disso, desenvolvemos um método de baixo custo, fácil execução e ampla aplicação e reproducibilidade, capaz de quantificar a proteína em amostras biológicas, com potencial para ser implementado na rotina clínica e aplicamos esse método em uma coorte restrospectiva de CPNPC. Confirmamos assim o papel prognóstico da cofilina-1. Estes achados seguem a lógica das fases de desenvolvimento de um biomarcador e representam um grande passo no seu processo de validação. / Lung cancer accounts for approximately 13% of all malignant tumor cases and for about 1.4 million deaths per year worldwide. This cancer has two main subtypes: Small Cell Lung Cancer (SCLC) and Non-Small Cell Lung Cancer (NSCLC). About 85% of cases of lung cancer are NSCLC type. The signs and symptoms are secondary to the primary tumor growth, to regional lobe commitment and distant spread, or are secondary to paraneoplastic syndromes. These features reflect directly on mortality rates; 80 in every 100 new cases are inoperable and most die within 3 years. This means that, despite many advances in diagnosis treatment, the prognosis of lung cancer remains extremely poor, with median survival of 10 months, and total cumulative survival in 5-year of approximately 12%. Currently, prognosis and therapeutic decisions in patients with lung cancer is based on TNM. Although this procedure is considered gold standard among health professionals, it does not take into account the biological characteristics of the tumor. In this context, the identification of cancer biomarkers may add important information to the already established TNM system and result in better treatments and lower mortality rates. There are five distinct phases that conceptualize a tumor biomarker development of. Through these successive phases, it is possible to develop useful tools for population screening, capable of implementation in clinical practice for prediction of patient outcome, therapeutic response and disease monitoring. This project evaluated the prognostic value of major genes mentioned in literature as potential biomarkers for NSCLC and found that none of them showed statistical significance in the correlation that indicates prognostic power. It also identified and validated the prognostic role of cofilin-1 by microarray data and quantification of their immunocontent in biopsies of NSCLC. For this purpose, we used data metaanalysis and immunohistochemical reactions densitometric analysis, followed by correlation with data from tumor grade, histological classification, sex, age and outcome for each case. In addition, we developed a low-cost protocol, of easy implementation and wide application and reproducibility, able to quantify the protein in biological samples, with the potential to be implemented in clinical practice. We applied this method in a retrospective cohort of NSCLC and confirm the prognostic role of cofilin-1. These findings follow the logical phases of biomarker development and represent a major step in its validation process.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-04-28T10:57:56Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 8375227 bytes, checksum: 55dfde271f45ab327a73b5c840bc894d (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-28T10:57:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 8375227 bytes, checksum: 55dfde271f45ab327a73b5c840bc894d (MD5) Previous issue date: 2014-02-18 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O uso da biotecnologia, especialmente com a utilização de técnicas da cultura de tecidos, proporciona uma forma alternativa de propagação das plantas, além de ser importante ferramenta para o melhoramento e conservação dos recursos genéticos. As espécies desse estudo, bastão-do-imperador [Etlingera elatior cv. Porcelana (Zingiberaceae)] e antúrio [Anthurium andraeanum cv. Eidibel (Araceae)] têm elevada importância econômica na floricultura tropical mundial, sendo fundamentais o domínio e o aprimoramento de técnicas biotecnológicas aplicadas à propagação in vitro. Nesse tipo de propagação, de modo especial aplicada às ornamentais, prima-se pela otimização dos sistemas de propagação em larga escala. Na propagação in vitro convencional, o sistema de vedação dos frascos restringe, entre outros fatores, as trocas gasosas, além de dificultar a absorção de água e nutrientes, aumentando as perdas do material vegetal durante a aclimatização. No presente trabalho, para bastão-do-imperador, realizou-se a propagação fotoautotrófica associada ao enriquecimento da atmosfera dos frascos com CO2, com o intuito de rustificar as vitroplantas ainda em condições in vitro, com grandes benefícios à sobrevivência, com o aumento da tolerância aos estresses impostos às plantas na fase de aclimatização, aproximando-as daquelas produzidas em condições de campo. Para o antúrio, o desenvolvimento de técnicas eficientes de propagação in vitro proporcionou perspectivas novas e promissoras para o melhoramento do antúrio, capazes de ampliar a produção comercial e o abastecimento do mercado brasileiro e mundial. Dentre essas técnicas destaca-se a embriogênese somática, pois pode ser aplicada com sucesso na produção de plantas em larga escala, além de ser um modelo para estudos anatômicos, estruturais e moleculares envolvidos na aquisição de competência embriogênica e de grupos de genes especificamente expressos durante a embriogênese somática. O presente trabalho contribuiu para a geração de conhecimentos a cerca da propagação in vitro das espécies a partir das técnicas de propagação fotoautotrófica, em bastão-do-imperador, caracterizando as respostas morfofisiológicas das plantas submetidas a condições de crescimento heterotrófico, fotomixotrófico e fotoautotrófico; e da propagação in vitro do antúrio via embriogênse somática, abordando alterações estruturais e o acúmulo de reservas envolvidas durante a ontogênese dos calos embriogênicos, além de caracterizar e analisar a expressão do gene SERK nessa espécie. / The use of biotechnology, particularly with the use of tissue culture techniques, provides an alternative way of plant propagation, as well as being an important tool for breeding and genetic resources conservation. The species of this study, torch ginger [Etlingera elatior cv. Porcelana (Zingiberaceae)] and anthurium [Anthurium andraeanum cv. Eidibel (Araceae)] present a high economic importance in the global tropical floriculture, being fundamental the domain and enhancement of biotechnological techniques applied to in vitro propagation. This kind of propagation, especially applied to ornamentals, stands out for the optimization of large-scale propagation. In conventional in vitro propagation, the flasks sealing system restricts, among other things, gas exchange, and hinders water and nutrients absorption, increasing losses in the plant material during acclimatization. In the present study, with torch ginger, the photoautotrophic propagation was performed associated with CO2- enriched atmosphere flasks, with the aim of hardening the plantlets even in vitro, with great benefits to survival and increase tolerance to stresses imposed on plants during the acclimatization phase, approaching those produced in the field. To anthurium, the development of efficient in vitro propagation techniques provided new and promising perspectives for the breeding of this specie, able to expand commercial production and supply Brazilian and worldwide market. Among these techniques highlights the somatic embryogenesis, which can be successfully applied in plant production system for large- scale, besides being an ideal system for anatomical, structural and molecular studies involved in the acquisition of embryogenic competence and clusters of genes specifically expressed during somatic embryogenesis. This work contributed to the generation of knowledge about in vitro propagation of the species from photoautotrophic propagation techniques, in torch ginger, characterizing the morphophysiological responses of plants submitted to heterotrophic, photomixotrophic and photoautotrophic growth conditions; and in vitro propagation of anthurium via somatic embryogenesis, addressing structural changes and the accumulation of reserves involved during ontogeny of embryogenic callus, besides characterizing and analyze the expression of SERK gene in this species.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-10-13T18:06:17Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 6005359 bytes, checksum: 39958402bf811acd10edfc44f666e1d3 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-13T18:06:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 6005359 bytes, checksum: 39958402bf811acd10edfc44f666e1d3 (MD5) Previous issue date: 2004-02-20 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O gênero Lippia (Verbenaceae) possui importância econômica devido aos diferentes usos do óleo essencial presente em suas espécies, que ocorrem em grande número no Brasil. Lippia filifolia Mart. & Schau. é endêmica da Cadeia do Espinhaço, em Minas Gerais, e está ameaçada de extinção. Plantas estabelecidas in vitro demonstraram que a espécie é sensível à mudanças de ambiente, durante o processo de aclimatação. O primeiro objetivo deste trabalho foi avaliar o cultivo in vitro de L. filifolia, analisando a influência de níveis de irradiância e de meios de cultivo suplementados com diferentes reguladores de crescimento, visando subsidiar a produção de plantas mais tolerantes à aclimatação. Ápices caulinares foram cultivados nos meios MSO, MS + ANA (0,1 mg L -1 ), MS + BAP (0,5 mg L -1 ), MS + ANA (0,1 mg L -1 ) + BAP (0,5 mg L -1 ) e, submetidos aos níveis de irradiância 40, 104 e 172 μmol m -2 s -1 . Interações significativas entre as variáveis níveis de irradiância e meios de cultivo foram obtidas para as características concentração de carotenóides, crescimento em altura, número de brotações e área foliar. As clorofilas a, b e totais foram influenciadas somente pela irradiância, diminuindo a concentração de acordo com o aumento da irradiância. O fator meio de cultivo influenciou o número e o tamanho das raízes, o peso de matéria fresca da parte aérea e a concentração de antocianinas. Não houve interação para as características peso de matéria fresca e seca do sistema radicular e peso de matéria seca da parte aérea, no entanto, os fatores irradiância e meio de cultivo, analisados isoladamente, foram significativos para tais características. Os níveis de irradiância e os meios de cultivos utilizados influenciaram no desenvolvimento da parte aérea, mas, não comprometendo a sobrevida da planta no decorrer do experimento. As variações nos níveis de irradiância não influenciaram a biossíntese de antocianinas, demonstrando que as condições a que L. filifolia foi submetida, não induziram elevados níveis de estresse para as plantas. O segundo objetivo deste trabalho foi caracterizar anatomicamente, mediante microscopia de luz e eletrônica de varredura, a folha de L. filifolia cultivada in vitro, e identificar por técnicas histoquímicas, as principais substâncias presentes no órgão. As avaliações histoquímicas foram conduzidas em material fresco e em amostras incluídas em resina sintética. A estrutura foliar segue o padrão descrito para outras espécies do gênero, todavia, apresentando características anatômicas, geralmente, relacionadas às plantas cultivadas in vitro, como cutícula delgada, grandes espaços intercelulares, ausência de tecidos de sustentação e folhas finas. Em ambas as superfícies epidérmicas ocorrem um grande número de tricomas tectores e secretores. Três tipos de tricomas secretores foram observados: o tipo I, caracterizado por 1-2 células basais, pedículo de 2-3 células e uma cabeça secretora elíptica, constituída por 4-8 células; o tipo II, possui base e pedículo unicelular e cabeça bicelular globular; e o tipo III possui base, pedículo e cabeça esférica todos unicelulares. Os testes histoquímicos confirmaram a presença de óleos essenciais nos tricomas secretores e por todo o mesofilo; de polissacarídeos no tricoma glandular tipo II; e sugere a presença de proteínas na substância secretada pelos tricomas glandulares. As reações para detectar alcalóides, compostos fenólicos, amido e ligninas foram negativas. A presença de substâncias lipofílicas, dentre elas os óleos essenciais e as oleoresinas, evidencia a grande importância do gênero. A estrutura foliar segue os padrões relatados para a família, contudo, apresentando as características anatômicas relacionadas ao cultivo in vitro. Estes resultados podem contribuir para melhor compreensão do comportamento da espécie durante o processo de aclimatação. / The genus Lippia (Verbenaceae) has great economical importance due to different applications of the essential oils present in several species occurring in Brazil. Lippia filifiolia Mart. & Schau. is an endemic species of the “Serra do Espinhaço”, Minas Gerais State, Brazil, and is considered as an endangered species. Following to the establishment and in vitro propagation of the species, it proved to be sensitive to the environmental changes that acclimatization process brings about. This way, the present study was conducted to evaluate histological and histochemical aspects of in vitro grown plants, and the influence of irradiance levels and growth regulators on in vitro culture performance of L. filifolia, aiming to obtain plants more tolerant to the acclimatization process. For anatomical studies leaf samples were characterized under photonic and scanning electron microscopy. The histochemical analyses were carried out using both fresh and hystoresin embedded samples. Apical segments were cultured onto a semi-solid MS-based medium supplemented with either NAA (0.1 mg L -1 ), BAP (0.5 mg L -1 ), and NAA (0.1 mg L -1 ) plus BAP (0.5 mg L -1 ), and submitted to three irradiance levels (40, 104, and 172 μmol m -2 s -1 ). Significant interactions between irradiance levels and culture were achieved for carotenoid content, plant height, average shoot number and leaf area. The contents of chlorophylls ‘a’ and ‘b’ were affected only by irradiance, lessening their concentrations with increasing irradiance levels. The growth regulator composition influenced the number and average size of the roots, the fresh mass of the aerial parts, and the anthocyanin concentration. For fresh and dry root weight and aerial fresh weight there was no interaction between irradiance levels and growth regulator combinations, although when analyzed isolated they influenced the measured characteristics. The irradiance levels did not affect carotenoid biosynthesis as revealed by carotenoid contents with increasing irradiance levels, suggesting that the species tolerates higher irradiance levels without any prejudice to the development, and may reflect possible positive effects during acclimatization. The leaf structure fits on the previously described pattern for the family, however, presenting thin cuticle and mesophyll size, large intercellular spaces, absence of supporting tissue, though consistent with those induced by in vitro conditions. In both epidermis surfaces there are a great number of tector and secretory trichomes. The latter presented three types: type I, formed by 1-2 basal cells, 2-3 pedicel cells, and an elliptical secretory head with 4-8 cells; type II, posses unicellular base and pedicel, and a globular bicellular head; type III, has base, pedicel, and a spherical head, all unicellular. The histochemical tests confirmed the presence of essential oils within secretory trichomes and spread throughout the mesophyll; polysaccharides in glandular trichomes type II; and suggest the presence of proteins in the secreted substance by glandular trichomes. The specific reactions for alkaloids, phenolic compounds, starch and lignins were negative. The presence of lypophilic substances, among them, essential oils and oleoresins, evidenced the great importance of the genus. The results may contribute for further work on acclimatization attempts of the species. / Dissertação importada do Alexandria

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:13Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-09-30. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:58Z : No. of bitstreams: 1 Publico-11857a.pdf: 776003 bytes, checksum: 706bab397cf90eafbc8d7328214672da (MD5). Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:59Z : No. of bitstreams: 2 Publico-11857a.pdf: 776003 bytes, checksum: 706bab397cf90eafbc8d7328214672da (MD5) Publico-11857b.pdf: 2062339 bytes, checksum: 8d0ca9b3ac4476504ad8de27d8b090d1 (MD5). Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:59Z : No. of bitstreams: 3 Publico-11857a.pdf: 776003 bytes, checksum: 706bab397cf90eafbc8d7328214672da (MD5) Publico-11857b.pdf: 2062339 bytes, checksum: 8d0ca9b3ac4476504ad8de27d8b090d1 (MD5) Publico-11857c.pdf: 120525 bytes, checksum: 614bb713dcd2fcace0a691958c4f8ae7 (MD5) / Objetivos: C-kit é uma proteína tirosina–quinase transmembrana que possui importante papel na tumorogênese. Com o desenvolvimento de um novo composto, o mesilato de imatinibe, que inibe especificamente os receptores tirosina quinases, o C-kit passou a ser um importante alvo terapêutico. Nosso objetivo é estudar as características histopatológicas do retinoblastoma, a expressão imuno-histoquímica do C-kit neste tumor e correlacionar esta expressão com os principais fatores prognósticos do retinoblastoma. Material e Métodos: Oitenta e quatro blocos de parafina foram selecionados do arquivo do laboratório de patologia ocular Henry C. Witelson, Montreal, Canada. A imunohistoquímica do C-kit foi realizada de modo automatizado e os resultados foram correlacionados com a idade dos pacientes por ocasião do diagnóstico, grau de diferenciação tumoral e presença ou não de invasão de coróide e nervo óptico. O valor de p menor que 0.05 foi considerado estatisticamente significante. Resultados: A expressão imuno-histoquímica do C-Kit foi observada em 33/63 (52.38%) dos espécimes analisados. Apenas 2 dos 13 (15.4%) tumores que não apresentaram invasão de nervo óptico ou coróide foram positivos para C-kit. Por outro lado, a expressão do C-kit foi observada em 31 (62%) dos 50 tumores que apresentaram algum tipo de invasão seja para coróide ou nervo óptico , 26 dos 44 espécimes com envolvimento de coróide (59.9%), e 20 dos 29 com invasão de nervo óptico (68.96%). Quatorze dos 25 espécimes (56%) moderadamente ou bem diferenciados e 19 dos 38 (50%) pouco diferenciados apresentaram positividade para o C-kit. Dos 41 espécimes provenientes de pacientes com idade superior a 1 ano, e dos 14 (42.80%) com idade até 1 ano a expressão do C-kit foi observada em 21 (51,21%) e 6 (42.80%) espécimes respectivamente. Conclusões: Mais da metade dos retinoblastomas estudados expressaram o C-kit . A expressão do C-kit apresenta correlação estatisticamente significante com a a invasão de nervo óptico. / Purpose: C-kit is a transmembrane tyrosine kinase protein thought to play an important role in tumorigenesis. With the development of the compound Imatinib Mesylate which specifically inhibits tyrosine kinase receptors, C-kit has emerged as a potential therapeutic target. This study aims to determine the immunoexpression of C-kit in retinoblastoma and correlate this expression with histopathological prognostic features. Methods: Eighty-four paraffin-embedded enucleation globes of retinoblastoma were collected from the archives of the Henry C. Witelson Ocular Pathology Registry. C-kit immunostaining was used according to the protocol provided by Ventana Medical System Inc., Arizona. Immunoreactivity was correlated with the presence or absence of invasion into the choroid and optic nerve and the degree of tumour defferentiation. Odds ratios were calculated to quantify differences in C-kit expression between tumours with different patterns of invasion. Results: C-kit expression was identified in 33/63 specimens analysed (53.8%).Two of 13 tumours without choroidal or optic nerve invasio (15.4%) were positive for C-kit. C-kit expression was seen in 31 of the 50 tumours with extraretinal invasion (62%, p<0.01), 26 of 44 specimens with choroidal involvement (59.9%, p<0.02), and 20 of the 29 with optic nerve involvement (68.96%, p<0.02). Fourteen of 25 moderate or well-diferentiated specimens (56%) and 19 of 38 undifferentiated specimens (50%) displayed positivity for C-kit (p>0.5). Conclusions: More than half of Retinoblastomas in this study expressed C-kit. The expression of Ckit in these retinoblastomas strongly correlated with histopathological features of worse prognosis including optic nerve and choroidal invasion. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Esse estudo descreve casos de “morte súbita” em bovinos associados com a ingestão de Amorimia (Mascagnia) exotropica em seis propriedades rurais localizadas na região metropolitana de Porto Alegre e da serra gaúcha. Os bovinos intoxicados foram encontrados mortos sem história de sinais clínicos prévios, ou apresentaram tremores musculares, quedas bruscas, movimentos de pedalagem, opistótono, respiração ofegante e decúbito lateral, quando induzidos ao movimento poucos minutos antes da morte. Registrou-se maior número de casos entre os meses de maio e agosto. Nove bovinos foram necropsiados e os principais achados macroscópicos observados foram mucosa oral levemente cianótica (3/9), hidropericárdio leve a moderado (3/9), petéquias e equimoses no epicárdio (5/9), coágulo no interior do ventrículo esquerdo (4/9), edema pulmonar (5/9) e mucosas vermelhas no abomaso e no intestino delgado (6/9). Histologicamente havia necrose de coagulação no miocárdio (9/9) caracterizada por retração celular, aumento da eosinofilia do citoplasma com perda das estriações, núcleos em picnose e ocasionais núcleos em cariorrexia e cariólise. No coração, edema intersticial (3/9) e infiltrado inflamatório intersticial, predominantemente, mononuclear (7/9) também foram observados. Nos rins de três bovinos havia degeneração hidrópicovacuolar multifocal das células epiteliais dos túbulos contorcidos distais associada com núcleos picnóticos deslocados para periferia da célula. As lesões cardíacas desses bovinos foram demonstradas através da imuno-histoquímica para troponina cardíaca C (cTnC). Nos corações dos bovinos intoxicados ocorreu diminuição acentuada de cTnC no citoplasma de grupos dos cardiomiócitos com características microscópicas de degeneração e necrose e, em algumas áreas havia perda total de imunomarcação. Raras fibras musculares cardíacas sem alteração histológica apresentaram perda de imunomarcação. Nos demais cardiomiócitos dos bovinos intoxicados sem lesões histológicas observou-se intensa marcação citoplasmática. / This study describes cases of sudden death in cattle that were associated with the consumption of Amorimia (Mascagnia) exotropica and occurred in six ranches located in the mountainous region of Rio Grande do Sul and the metropolitan region of Porto Alegre, Brazil. Affected cattle were found dead with no history of previous clinical signs, or showed muscular tremors, falls, paddling, opistotonus, panting, and lateral recumbence after being induced to move, few minutes before death. Most cases were recorded between May and August. Nine cattle were necropsied and main gross findings were oral mucosa slightly cyanotic (3/9), mild to intermediate hydropericardium (3/9), epicardial petechiae and ecchymoses (5/9), clot within the left ventricle (4/9), lung edema (5/9), apart of abomasal and small intestinal reddened mucosa (6/9). Histologically, there was myocardial coagulation necrosis (9/9), which was characterized by cellular retraction, enhanced cytoplasmic eosinophilia, lack of cytoplasmic striations and occasional nuclear karyorrhexis and karyolysis. There also were interstitial edema (3/9) and interstitial inflammatory infiltrate (mainly mononuclear) (7/9) in the heart. Apart of multifocal vacuolar-hydropic degeneration in the epithelial cells of the distal convoluted tubules associated with pyknotic and eccentric nuclei in the kidneys of three cattle. The cardiac lesions of these cattle were demonstrated by immunohistochemistry for cardiac troponin C (cTnC). In the hearts of cattle intoxicated was severe reduction of the cTnC in the cytoplasm of cardiomyocytes groups with microscopic features of degeneration and necrosis, and in some areas with complete loss of immunoreactivity. Rare cardiac muscle fibers showed no histological abnormality loss of immune-marking. In the remaining cardiomyocytes in cattle poisoned histological lesions were absent, but an intense cytoplasmic staining in these cells was observed.

Introdução: Anormalidades nos supressores tumorais p14, p16 e p53 são relatadas em diversos tipos de câncer em humanos. Na carcinogênese ovariana, p16 e p53 foram extensivamente estudados, mas p14 foi analisado somente em carcinomas. Objetivo: O estudo visa determinar a expressão imuno-histoquímica de p14, p16 e p53 em tumores ovarianos epiteliais benignos, borderline e malignos. Método: Estudo transversal utilizando imuno-histoquímica em amostras de tumores epiteliais ovarianos emblocados em parafina do Hospital de Clínicas de Porto Alegre. Resultados: p14 foi positivo em 93% dos tumores benignos, 94% dos borderline e 60% dos malignos. A perda de expressão foi estatisticamente associada com carcinomas. p16 foi positivo em 94,6% dos carcinomas, 75% dos tumores borderline e 45,7% dos benignos. p53 foi positivo em 29,7%, 16,7% e 2,9% dos tumores malignos, borderline e benignos, respectivamente. Os subtipos de carcinoma não mostraram diferenças de expressão. Conclusão: Nosso estudo foi o primeiro a descrever a expressão de p14 em tumores benignos e borderline. Ela permanece estável nos benignos e borderline, enquanto os carcinomas exibem uma perda de expressão significativa. Isso pode indicar que anormalidades de p14 acontecem tardiamente na carcinogênese. As taxas de expressão de p16 e p53 foram semelhantes a estudos anteriores. Estudos futuros devem investigar anormalidades genéticas nas sequencias codificadoras de p14 e incluir todos os tipos de tumor epitelial ovariano. / Background: Abnormalities in tumor suppressors p14, p16 and p53 are reported in several human cancers. In ovarian carcinogenesis, p16 and p53 have been extensively studied, but p14 was only analyzed in carcinomas. Aim: This study seeks to determine p14, p16 and p53 immunohistochemical expression in benign, borderline and malignant ovarian epithelial tumors and correlate them with survival and clinical variables. Methods: Cross-sectional study utilizing immunohistochemical staining of p14, p16 and p53 in paraffin-embedded tissue samples from ovarian epithelial tumors obtained from Hospital de Clinicas de Porto Alegre. Results: p14 was positive in 93% of benign, 94% of borderline and 60% of malignant tumors. Loss of expression was statistically associated with carcinomas. p16 was positive in 94.6% of carcinomas, 75% of borderline and 45.7% of benign tumors. p53 was positive in 29.7%, 16.7% and 2.9% of malignant, borderline and benign tumors, respectively. Carcinoma subtypes showed no difference in expression. Conclusions: To our knowledge, this is the first description of p14 expression in benign and borderline tumors. It remains stable in benign and borderline tumors, while carcinomas show a significant absence of staining. This may indicate p14 abnormalities occur later in carcinogenesis. p16 and p53 expression rates show similar results to previous reports. Future studies should investigate genetic abnormalities in p14 coding sequences and include all types of ovarian epithelial tumors.

Introdução: O câncer de colo uterino é o quarto câncer mais comum no sexo feminino e um importante problema mundial de saúde pública. Recentemente, o uso de biomarcadores para melhorar a sensibilidade e especificidade do rastreamento e diagnóstico desta patologia passou a ter maior importância. Dentre estes, P16 e Ki67 passaram a ser largamente utilizados em imunohistoquímica de amostras preservadas em parafina. Entretanto, não se sabe qual a influência do tempo e temperatura de armazenamento de amostras previamente cortadas. Objetivo: O presente estudo tem por finalidade avaliar a influência do tempo de preparo e temperatura de armazenamento na imunorreatividade para P16 e Ki67 de cortes de amostras cervicais. Métodos: Amostras de blocos de parafina de câncer de colo uterino foram seccionadas e montadas em lâminas, de maneira seriada, no período de 9, 6, 3, 1 mês e tempo zero, sendo armazenadas em -20°C, 4°C e temperatura ambiente (TA). Todas as amostras então foram processadas ao mesmo tempo por imunohistoquímica para detecção de P16 e Ki67, sendo realizada leitura da mesma região do tumor nas diferentes condições. Resultados: Dos 10 casos de câncer de colo uterino, foram analisadas 75 regiões para P16 e Ki67 nas diferentes condições. A expressão de P16 e Ki67 não variou de maneira significativa ao longo do tempo nas diferentes condições de temperatura de armazenamento. Por exemplo, os cortes de 9 meses apresentaram a seguinte expressão quando armazenados a -20°C, 4°C e TA, respectivamente [mediana (p25-75)]: marcador P16 - 200 (160-300), 200 (180-300) e 200 (170-300), o que não foi estatisticamente diferente do corte em tempo zero, 200 (200-300), P=0,210; marcador Ki 67 - 210 (160-270), 210 (160-270) e 210 (145-270), o que também não foi estatisticamente diferente do corte em tempo zero, 240 (180-270), P=0,651. Conclusão: Não há influência significativa do tempo de preparo e temperatura de armazenamento de lâminas com material já cortado para a realização de imunohistoquímica posteriormente, no período de até 9 meses, para P16 e Ki67. Isto permite que, ao processarmos lâminas para HE e/ou outros marcadores, podemos reservar lâminas para posterior processamento com P16 e Ki67 sem prejuízo à imunorreatividade. / Introduction: Cervical cancer is the fourth most common cancer in women and a major public health problem in the world. Recently, the use of biomarkers to improve the sensitivity and specificity of the screening and diagnosis of this pathology has become more important. Among these, P16 and Ki67 became widely used in immunohistochemistry of samples preserved in paraffin. However, the influence of storage time and temperature of previously cut samples is not known. Aim: The aim of this study was to evaluate the influence of preparation time and storage temperature on the immunoreactivity for P16 and Ki67 of cervical specimens. Methods: Cervical cancer paraffin blocks were sectioned and mounted onto glass slides in 9, 6, 3, 1 month and zero time and stored at -20°C, 4°C and room temperature (RT). All slides were then processed at the same time by immunohistochemistry for the detection of P16 and Ki67, and the same tumor region was read under the different conditions. Results: Of the 10 cases of cervical cancer, 75 regions were analyzed for P16 and Ki67 under different conditions. Expression of P16 and Ki67 did not vary significantly over time at different storage temperature conditions. For example, the 9-month slides showed the following expression when stored at -20°C, 4°C and RT, respectively [median (p25-75)]: P16 - 200 (160-300), 200 (180-300) and 200 (170-300), which was not statistically different from zero time cut, 200 (200-300), P = 0.210; Ki 67 - 270 (160-270), 210 (160-270) and 210 (145-270), which was also not statistically different from zero-time cutoff, 240 (180-270), P = 0.651. Conclusion: There is no significant influence of the preparation time and storage temperature of slides of cervical cancer to be processed by immunohistochemistry later, in the period of up to 9 months, for P16 and Ki67. This allows, when processing slides for HE and / or other markers, we can reserve slides for further processing with P16 and Ki67 without impairing immunoreactivity.

A raiva é uma doença zoonótica causada por um vírus RNA, envelopado, altamente neurotrópico, da família Rhabdoviridae, gênero Lyssavírus. Esta dissertação identificou e mapeou as lesões ocasionadas pelo vírus da raiva na medula espinhal de bovinos e equinos. Os casos foram obtidos no período entre janeiro de 2013 a novembro de 2014, através de necropsias realizadas pelo Setor de Patologia Veterinária da Universidade Federal do Rio Grande do Sul (SPV-UFRGS) de animais que apresentaram síndrome neurológica. Destes, 33 casos (26 bovinos e sete equinos) foram selecionados com diagnóstico final de raiva, confirmados através do exame histopatológico e imuno-histoquímico (IHQ). Todos os casos foram submetidos ao exame de imunofluorescência direta (IFD), e os negativos a este teste, submetidos à inoculação intracerebral em camundongos (ICC). O material foi processado rotineiramente para histologia e corados com hematoxilina e eosina (HE). O exame de IHQ foi realizado na medula espinhal de todos os animais com anticorpo primário policlonal anti-vírus rábico. A medula espinhal foi subdividida nas porções cervical (C), intumescência cervical (IC), torácica (T), lombar (L), intumescência lombar (IL) e sacral (S) para avaliação. As estatísticas descritivas foram feitas no software IBM SPSS Statistics 18® e um índice de severidade das lesões observadas foi criado, baseado na soma dos graus das lesões e posteriormente dividido pelo número total de animais de cada espécie. O índice agrupou manguitos perivasculares + microgliose + neuroniofagia e analisou separadamente a presença de células gitter e a intensidade de marcação IHQ. Utilizou-se, ainda, o teste exato de Fisher com nível de significância de 5% através do software Epi Info™ 7.1.4 para avaliação do risco relativo entre a presença ou ausência de lesão entre encéfalo e medula espinhal. Todos os casos obtiveram imunomarcação positiva no exame de IHQ (100%). Na IFD dois equinos foram positivos (28,5%). Todos os resultados negativos na IFD foram confirmados na ICC, como negativos. Nos bovinos, a IFD foi positiva em 20 casos (76,9%). Os resultados negativos foram submetidos à ICC, onde cinco casos foram negativos e um positivo. À avaliação da medula espinhal, todos os bovinos e equinos apresentaram lesões histológicas. Nos equinos, as lesões inflamatórias se revelaram discretas nas regiões C, IC; moderada em T, L e S e acentuada na secção de IL. Células gitter estiveram discretamente presentes em C, IC e T; em moderada quantidade nas regiões L e S e acentuada em IL. A marcação IHQ nos fragmentos medulares variou de moderada a acentuada. Nos bovinos as lesões inflamatórias foram moderadas em todos os segmentos medulares. Diferente do observado nos equinos, células gitter foram predominantemente discretas. A marcação IHQ foi acentuada e homogênea em todos os segmentos medulares. Nos equinos observou-se uma maior frequência de lesões a partir do segmento T, no entanto, a marcação IHQ revelou discreta variação entre os segmentos. Na distribuição lesional dos bovinos evidenciou-se variação apenas no quesito malacia, que se mostrou mais frequente nos segmentos L, IL e S. Identificou-se, através do método de Fisher, que a coleta da medula espinhal em equinos possibilita uma chance 3,5 vezes maior na detecção de lesões de raiva quando comparado à análise individual do encéfalo. / Rabies is a zoonotic disease caused by an enveloped ribonucleic acid (RNA) virus, highly neurotropic, from the Rhabdoviridae family, Lyssavirus genus. This thesis identified and mapped the lesions caused by the rabies virus in the spinal cord of cattle and horses. The samples were obtained within the period from January 2013 to November 2014 from necropsies carried out by the Setor de Patologia Veterinária of Universidade Federal do Rio Grande do Sul (SPV-UFRGS). We selected the thirty three animals (26 cattle and seven horses) that presented neurological syndrome and diagnosis of rabies. Samples from the brain and spinal cord were collected and routinely processed for hematoxylin and eosin (HE) and immunohistochemistry (IHC). The IHC was carried out at the spinal cord of all the animals, with a polyclonal anti-rabid virus as primary antibody. The spinal cord was sectioned at the cervical (C), cervical intumescence (CI), thoracic (T), lumbar (L), lumbar intumescence (LI) and sacral (S) portions to be evaluated. The descriptive statistics of this work was performed using the IBM SPSS Statistic 18® software and an index of the severity observed in the lesions was created based on the grades of the lesions and later divided by the total number of animals of each species. The index grouped cuffs of perivascular inflammatory cells, microgliosis and neuronophagia. Then, separately analyzed the presence of gitter cells and their IHC intensity. To evaluate the relative risk between the presence or absence of lesions between the encephalon and the spinal cord the exact Fisher test was carried out with 5% of significance level runned with the Epi Info™ 7.1.4 software. All the cases were positive for the IHC. At the DIF two horses (28.5%) and 20 cattle (76.9%) were positive. To all the samples negative to DIF, the test of inoculation was applied resulting in all horses and five cattle negative, and one cattle positive. Under the HE evaluating of the spinal cord, all the animals presented histologic lesions. In the horses, the inflammatory lesions were discrete in the C and IC sections; moderate in T, L and S; and accentuated in LI. Gitter cells were discretely present in the C, CI and T sections; moderate in L and S; and accentuated in LI. IHC of the spinal cord fragments varied from moderated to accentuate. The inflammatory lesions from cattle samples were moderate in all of the spinal cord sections. Differently from the observed in horses, gitter cells were predominantly discrete. The IHC staining was accentuated and homogenous in all spinal cord sections. In the horses lesions in the T section were frequently observed; however, IHC staining revealed discrete variation between the sections. The lesions distribution from cattle samples highlighted variation only in the issue concerning malacia, which was frequently demonstrated in the L, LI and S sections. The Fisher test identified that the gathering of horses spinal cords allows a 3.5 times higher chance of detection of rabies lesions than when the individual analysis of the brain is made.

Made available in DSpace on 2016-12-23T13:56:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cristiani Banhos Ferreira.pdf: 3073805 bytes, checksum: bd66eb9b665ae2483dac3dfab5ca111a (MD5) Previous issue date: 2012-08-24 / Introduction: Immunomodulation determined by intestinal nematodes in humans can interfere in the evolution and progression of infectious disorders, among them leprosy. Objective: This study analyses the presence of anti-CD4, anti-CD8, anti-CD20, anti-CD138, anti-TIA-1 and anti-FOXP3 markers in biopsy samples of skin lesions from patients with clinical and histopathological diagnosis of leprosy, with and without helminthiasis, in order to determine their influence on the immune system. Patients and methods: The study conducted a retrospective analysis of medical records of patients diagnosed with leprosy from the Department of Dermatology at the University Hospital Cassiano Antonio Moraes (HUCAM), from january 1995 to january 2010, which, after clinical suspicion of leprosy, underwent skin biopsy with histopathological study, and also had stool tests. The following data was collected from leprosy patients: age, gender, disease s clinical type, histopathological diagnosis, the presence or absence of intestinal helminthes and the species involved. Subsequently the paraffin blocks with the biopsy material from patient s skin lesions were separated for immunohistochemichal study of the markers CD4, CD8, CD20, CD138, TIA-1 and FOXP3. Results: Out of the 53 leprosy patients analyzed, a small predominance of female patients and paucibacillary types was observed. Another finding was the concentration of paucibacillary types among female patients, and multibacillary types among male patients. The patient s median age was 43 years. Although lacking statistical significance, helminthic infections were slightly predominant in multibacillary patients, most frequently caused by Ascaris lumbricoides. The presence of FOXP3+ and CD20+ cells was higher among paucibacillary patients, and CD20+ cells were significantly more frequent in multibacillaty patients with intestinal helminthes, when compared to patients without intestinal helminthes (p=0,005). Conclusion: The study showed a higher frequency of female sex in paucibacillary types leprosy, as well as the small predominance, although without statistical significance, of helminthes in multibacillary patients. However, CD20+ cells were significantly more frequent among multibacillary patients with helminthic infections / A imunomodulação determinada pelos nematóides intestinais no homem pode intervir na evolução e na progressão de outras doenças infecciosas, dentre elas a hanseníase. Objetivo: O estudo analisa a presença dos marcadores anti-CD4, anti-CD8, anti-CD20, anti-CD138, anti-TIA-1 e anti-FOXP3 em amostras de biópsias de lesões de pacientes com o diagnóstico clínico e histopatológico de hanseníase, com e sem helmintíase, a fim de determinar a influência das helmintíases intestinais no sistema imune. Pacientes e métodos: O estudo foi realizado através da análise retrospectiva de prontuários de pacientes atendidos no Serviço de dermatologia do Hospital Universitário Cassiano Antônio Moraes (HUCAM), no período de 01/1995 a 01/2010, com o diagnóstico de hanseníase e que, após a suspeita clínica, foram submetidos à biópsia e ao exame anátomo-patológico de lesão suspeita na pele, e que realizaram exame parasitológico de fezes. Quando identificado um caso de hanseníase, confirmado clinica e histopatologicamente, foram anotados dados referentes ao paciente: idade, sexo, forma clínica da doença, diagnóstico histopatológico, a presença ou ausência de verminose, e a espécie envolvida. Após, foram separados os blocos de parafina das biópsias das lesões cutâneas dos pacientes, os quais posteriormente foram submetidos ao exame imuno-histoquímico para a pesquisa de marcadores CD4, CD8, CD20, CD138, TIA-1 e FOXP3. Resultados: Dos 53 hansenianos analisados, observou-se discreto predomínio do sexo feminino e das formas paucibacilares. Outro achado foi a concentração dos casos paucibacilares nos pacientes do sexo feminino e dos multibacilares no sexo masculino, a mediana de idade foi de 43 anos. Embora sem significância estatística, as verminoses intestinais tiveram ligeiro predomínio nas formas multibacilares, sendo o helminto mais envolvido o Ascaris lumbricoides. As frequências de células FOXP3+ e CD20+ foram maiores entre os hansenianos paucibacilares em relação aos multibacilares, sendo as células CD20+ significativamente mais elevadas nos pacientes multibacilares com helmintos intestinais, quando comparados com os pacientes sem helmintos (p=0,005). Conclusão: O estudo demonstrou frequência significativa do sexo feminino nas formas paucibacilares da hanseníase, além de ligeiro predomínio, embora sem significância estatística, de helmintos nas formas multibacilares da doença com células CD20+, significativamente mais elevadas nos multibacilares com helmintos intestinais