Os tecidos da polpa dentária e vibrissa são dois microambientes celulares que compartilham a mesma origem embrionária. Ambos possuem o seu nicho especifico pós-natal que abrigam células tronco adultas (CTA). O objetivo do trabalho foi investigar a expressão diferencial dos marcadores de células pluripotentes, mesenquimais e neuroepiteliais nas populações de células tronco isoladas das vibrissas (CTV) e polpa de dente (CTPD) de camundongos C57BL-6. Resultados obtidos no presente trabalho, utilizando o método de imunofluorescência, revelaram que as CTA de ambos tecidos expressam um amplo painel de marcadores de pluripotência (Oct4, Nanog e Sox2), mesenquimais (CD73, CD90 e CD105), hematopoiético (CD34), crista neural (CKit), neuronal (Nestina) e epitelial (Integrina α6, LGR5 e LGR6) e indica possível potencial destas células em diversas linhagens celulares. Desta forma, células isoladas destes tecidos podem ser interessantes para serem aplicadas em diversos tratamentos na medicina regenerativa. Portanto, o estudo comparativo da expressão de um amplo painel de marcadores de células tronco em CTV e CTPD pode vir a aumentar o leque de possibilidades de sua utilização na terapia celular. Com isso, as células isoladas de polpa dentária foram submetidas à análise de expressão de marcadores já citados e a outros conhecidamente positivos e específicos para os folículos piloso como Citoqueratina 15 (CK15), LRig1 e Blimp1. Foram realizados ensaios de imunofluorescência, imunohistoquímica, citometria de fluxo e RT-PCR. Os dados obtidos nos permitiram concluir, que as CTA isoladas das ambas as fontes são bastante semelhantes em relação ao seu imunofenótipo, porém as características da sua diferenciação precisam ainda ser analisadas. / The tissues of the dental pulp and vibrissae are two cellular microenvironments that share the same embryonic origin. Both have their postnatal specific niche that keep adult stem cells (ASC). The objective of this study was to investigate the differential expression of pluripotent markers, mesenchymal and neuroepithelial in populations of stem cells isolated from whiskers (WSC) and dental pulp (DPSC) C57BL-6 mice. Results obtained in this study, using immunofluorescence, revealed that the ASC both tissues express a broad panel of pluripotency markers (Oct4, Nanog and Sox2), mesenchymal cells (CD73, CD90 and CD105), hematopoietic (CD34), crest neural (cKIT), neuronal (Nestin) and epithelial (Integrin α6, LGR5 and LGR6) and indicates possible potential of these cells in several cell lines. Thus, isolated cells of these tissues may be interesting for application in various treatments in regenerative medicine. Therefore, the comparative study of the expression of a broad panel of stem cell markers in WSC and DPSC could increase the range of possibilities for their use in cell therapy. Thus, the isolated cells were subjected to the dental pulp marker expression analysis cited above and others known to be positive and specific to hair follicles as Cytokeratin 15 (CK15), and LRig1 Blimp1. Immunofluorescence assays were performed, immunohistochemistry, flow cytometry and RT-PCR. The data allowed us to conclude that the ASC isolated from both sources are quite similar with respect to their immunophenotype, but the characteristics of differentiation remain to be analyzed.

Foram testadas, com o teste não treponêmico VDRL e com o teste treponêmico imunoenzimático de competição, 23.531 amostras de soros, coletados em todas as regiões do Brasil, com o objetivo de verificar o comportamento do teste imunoenzimático treponêmico na triagem de amostras. A prevalência obtida foi de 0,63% com o VDRL e de 0,84% para o teste imunoenzimático. A análise dos dados foi feita comparando-se os resultados dos dois testes com os resultados do teste treponêmico de imunofluorescência indireta (FTA-ABS), considerado como teste de referência. No total, 1120 amostras foram submetidas ao teste FTA-ABS, incluindo todas as que foram reagentes em qualquer um dos testes de triagem e 872 amostras negativas. Amostras com resultados discordantes entre os testes foram submetidas a um teste imunoenzimático do tipo Western blot. Nas amostras por nós estudadas, o teste imunoenzimático apresentou sensibilidade de 89,95% e especificidade de 99,78%, muito superior aos 55,11% de sensibilidade e 97,43% de especificidade que encontramos para o VDRL. Os resultados dos testes detectaram positividade em amostras diferentes portanto, recomendamos utilizar a associação dos dois testes, como método de triagem, quando se trata de populações de baixa prevalência. Resultados preliminares do Western blot sugerem a participação doas proteínas de 43 kD, 17 kD e 15,5 kD na reação de ELISA treponêmico competitivo. / The VDRL, a non treponemal test, and a treponemal competitive ELISA were used to test 23,531 serum samples, collected from conscript men throughout Brazil, with the objective of assessing the performance of the competitive ELISA on the screening of serum samples. The VDRL showed a prevalence of 0.63% contrasting with a 0.84% prevalence showed by the competitive ELISA. The results obtained with the two tests were then compared to those obtained by fluorescent treponemal antibody absorption (FTA-ABS) test which is considered the gold standard method for detection of antibodies for syphilis. A total number of 1,120 samples, which included all that were reagent in at least one of the screening test plus 872 that were negative in both tests, were submitted to the FTA_ABS test. In addition, some of the samples that presented discrepant results between the two tests studied were also submitted to the Western blot test. The results of the screening tests showed an 89.95% sensitivity and a 99.78% specificity for the competitive ELISA, which are much higher than the 55.11% sensitivity and 97.43% specificity presented by the VDRL. Also, the tests detected positivity in different samples. In conclusion, we recommended the use in tandem of both tests as screening for syphilis antibodies in low prevalence populations. In addition, the results of the Western blot seemed to suggest the positivity of the ELISA becoming non reactive after treatment of the patient and that the 43 kD, 17 kD and 15 kD proteins are the main proteins involved in the ELISA competitive reaction.

A infecção pelo herpesvírus humano tipo 8 (HHV-8) tem sido associada ao sarcoma de Kaposi (SK) iatrogênico, que acomete pacientes imunossuprimidos e/ou transplantados renais. Em populações consideradas saudáveis, a soroprevalência para o HHV-8 varia de 1% a 8%. O presente trabalho buscou: determinar a prevalência e os títulos de anticorpos anti-HHV-8 em pacientes com insuficiência renal crônica (IRC), submetidos ou não à terapia renal substitutiva (TRS) do Hospital do Rim e Hipertensão e Casa da Diálise da UNIFESP e da Santa Casa de Misericórdia de São Paulo e, comparar os resultados obtidos com outras populações da mesma região geográfica, porém de outras categorias de risco para adquirir doenças infecciosas. Soros de 805 pacientes: 295 em hemodiálise, 54 em diálise peritoneal e 456 em acompanhamento ambulatorial, sem TRS, foram testados quanto à presença de anticorpos anti-HHV-8, de fase latente e lítica da replicação viral, por meio de técnicas de imunofluorescência indireta (IFI) LANA e Lítico, padronizadas na Seção de Imunologia do Instituto Adolfo Lutz. Os resultados obtidos foram analisados em relação a dados clínicos, epidemiológicos e laboratoriais usando o teste do qui-quadrado ou exato de Fisher para as variáveis categóricas e os testes de Mann Whitney ou Kruskal Wallis para as variáveis contínuas. Foi encontrada soropositividade ao HHV-8 em 18,0% dos pacientes com IRC, dos quais 18,3% nos pacientes em TRS e 17,7% nos pacientes sem TRS, não havendo diferença significante entre os grupos. As variáveis que estiveram relacionadas à sorologia positiva ao HHV-8 foram: transplante prévio (p<0,001) e doenças sexualmente transmissíveis (p=0,003), com destaque para a sífilis (p=0,021). As demais variáveis não mostraram associação estatística embora tenha havido maior número de amostras HHV-8 soropositivas com o avançar da idade. Em relação ao tipo e ao título de anticorpos detectados, houve mais amostras com sorologia positiva para anticorpos Lítico e maiores títulos de anticorpos LANA. A comparação dos resultados dos pacientes com IRC e outras populações de São Paulo revelou taxa semelhante de prevalência de anticorpos anti-HHV-8 na população com HIV/Aids (20,4%), considerada de alto risco para esta infecção viral. Por outro lado, a prevalência detectada na população com IRC (18,0%) foi inferior às obtidas em pacientes com SK epidêmico (89,3%), SK clássico (100,0%) e SK endêmico (87,5%), e superior a outras populações sem SK: pacientes com deficiência mental e/ou física (1,6%) e profissionais da área da saúde (1,1%). Em todos os grupos analisados houve maior número de amostras com sorologia positiva para HHV-8 de fase lítica, e maiores títulos de anticorpos LANA, exceção feita aos profissionais da área da saúde. Maiores títulos de anticorpos LANA foram detectados nos pacientes com SK. Não foram encontradas outras associações significantes. Os resultados obtidos permitem concluir que os pacientes com IRC têm alta prevalência de anticorpos anti-HHV-8, comparável aos indivíduos com HIV/Aids dessa região geográfica. Ainda, sugerem que se devam acompanhar os pacientes HHV-8 soropositivos com vistas a monitorar os títulos de anticorpos LANA e verificar se estes têm valor prognóstico. Caso isto venha a ser confirmado, sugere-se a introdução da sorologia para o HHV-8 na bateria de exames do pré-transplante renal. / Human herpesvirus 8 (HHV-8) infection is frequently associated with Kaposi\'s sarcoma (KS) in immunodeficient and renal transplanted patients. The HHV-8 seroprevalence in healthy populations varies from 1% to 8%. The present study aimed to determine the HHV-8 seroprevalence and antibodies titers in chronic kidney disease (CKD) patients with or without substitutive kidney therapy (SKT) attended at Hospital do Rim e Hipertensão and Casa da Diálise of UNIFESP, and at Santa Casa de Misericórdia de São Paulo. Secondarly, to compare the serological results with those obtained from populations of the same geographic region, presenting other risk factors for acquiring infectious diseases. Serum samples were collected from 805 CKD patients: 295 under hemodialysis, 54 under peritoneal dialysis, and 456 in ambulatorial assistance without SKT. Latent and Lytic HHV-8 antibodies were searched using indirect immunofluorescence assays that were standardized at Immunology Department of Instituto Adolfo Lutz. Chi-Square test and/or Fisher\'s exact test were performed for comparing categorical variables including epidemiological, clinical and laboratorial data, and HHV-8 serum status. Continuos variables associated with HHV-8 antibodies titers were compared using Mann Whitney or Kruskal Wallis tests. An overall HHV-8-seropositivity of 18.0% was detected in CKD patients: 18.3% in patients under SKT and 17.7% in patients without SKT. Since no difference was detected in HHV-8-seropositivity among patients, they were considered as a unique group for subsequent analysis. A strong association between HHV-8-seropositivity and previous transplant was detected (p<0.001), along with an association with others sexually transmitted diseases (p=0.003), with emphasis for syphilis (p=0.021). In addition, no other data was associated with HHV-8-seropositivity, although higher proportions of HHV-8-seropositivity were detected in samples from elderly persons. In addition, more HHV-8 Lytic antibodies positive samples, and higher titers of LANA antibodies were detected. HHV-8 seroprevalence obtained from CKD patients was similar to the HHV-8 prevalence detected among HIV/Aids patients (20.4%), who were considered a high-risk group for this viral infection. On the other hand, the HHV-8 seroprevalence of CKD patients (18.0%) was lower than the prevalence of patients with epidemic KS (89.3%), classic KS (100.0%) and endemic KS (87.5%), and higher than the patients with mental and/or physical deficiency (1.6%) and health professionals (1.1%). All analyzed groups had more HHV-8-seropositive samples for Lytic antibodies and higher titers of LANA antibodies, with exception for the health professionals. The highest LANA antibodies titers were found among KS patients groups. No other association was found. In conclusion, the obtained results points out CKD patients as a high prevalent population for HHV-8 infection, similar to HIV/Aids patients from the same geographic area. As far, it suggests that HHV-8 seropositive CKD patients should be followed up in order to verify whether LANA antibodies titers have prognostic value. In confirming this hypothesis, it may propose to include the use of HHV-8 serology in the screening testing in kidney pre-transplant.

Introdução: Os anticorpos anticitoplasma de neutrófilos (ANCA) são classificados em três padrões observados na imunofluorescência indireta (IFI) utilizando neutrófilos humanos fixados em etanol e formaldeído como substrato. O c-ANCA apresenta forte associação com a enzima neutrofílica proteinase 3 (PR3), enquanto o p-ANCA está fortemente associado à mieloperoxidase (MPO). Na hepatite autoimune (HAI), colangite esclerosante primária (CEP) e doença inflamatória intestinal (DII) é observado outro padrão de IFI classificado como p-ANCA atípico que não apresenta reatividade contra as enzimas PR3 e MPO. Objetivo: Determinação da frequência dos diferentes padrões de ANCAs na CEP com ou sem DII concomitante (CEP/DII+, CEP/DII-), em três subtipos de hepatite autoimune (HAI-1 com anticorpo antimúsculo liso padrão tubular; HAI-2 com anticorpo antimicrossoma de fígado e rim tipo 1; HAI antiantígeno hepático solúvel/fígado e pâncreas, na colangite biliar primária (CBP) e em controles saudáveis. O anticorpo antinúcleo poderia estar presente em todos os subtipos. Os resultados dos ANCAs foram comparados com os do ELISA para verificação de concordância entre os padrões e as reatividades antigênicas. Metodologia: Foram estudados 249 pacientes (42 CEP/DII+; 33 CEP/DII-; 31 HAI-1; 30 HAI-2; 31 HAI-3; 52 CBP; 30 indivíduos saudáveis). As amostras de soro desses pacientes foram processadas pelos ensaios comerciais INOVA: ANCA Etanol, Quanta LiteTM MPO ELISA, Quanta LiteTMPR3 ELISA, Quanta LiteTM FAN HEp-2; e em lâminas com neutrófilos humanos fixados em etanol preparadas in house. Para as análises estatistícas foram utilizados os testes de Fisher com correção de Holm, os testes kappa e de McNemar. Resultados: O p-ANCA esteve presente em 4 (1,6%), o c-ANCA em 3 (1,2%), o p-ANCA atípico em 62 (24,9%), o c-ANCA atípico em dois (0,8%) e o padrão inconclusivo em 14 (5,6%) de 249 amostras testadas. O p-ANCA atípico foi mais frequentemente detectado na CEP/DII+ (52,4%; IC 95% = 37,7-66,6) em relação à CEP/DII- (21,2; IC 95% = 10,4-38,0), p=0,005. Não houve diferença significante na frequência do p-ANCA atípico na CEP/DII- em relação a CBP (15,38%, IC 95% = 7,83-27,89), p=0,501. O p-ANCA atípico foi significantemente mais positivo na HAI-1 (45,2%, IC 95% = 29,15-62,24, p < 0,001) e HAI-3 (32,3%, IC = 18,46-49,97, p=0,012) em comparação a HAI-2 (3,3%, IC 95% = 0-18,09). Não foi detectada diferença entre a HAI-1 e a HAI-3 (p=0,434). Ao considerarmos todos os padrões conjuntamente, persistiram as mesmas diferenças significantes entre a CEP/DII+ versus CEP/ DII- (p=0,037) e entre a HAI-2 versus HAI-1 (p=0,011) e versus HAI-3 (p=0,024). A reatividade do anti-PR3 foi encontrada em 25 das 249 amostras, sendo mais frequente na CEP/DII+ (31,0% IC 95%: 22,94 - 50,88) do que na CEP/ DII- (12,1%, IC 95%: 4,52-29,46, p = 0,025). Anticorpos anti-MPO foram identificados em oito de 249 amostras (3,2%). Das 25 amostras positivas para o anti-PR3 apenas uma apresentou c-ANCA; outras duas amostras positivas para o c-ANCA foram negativas para o anti-PR3. As oito amostras positivas para o anti-MPO não apresentaram reatividade para o p-ANCA e as quatro que tinham esse padrão não foram reativas para o anti-MPO. Entre as 62 amostras reativas para o p-ANCA atípico 49 não apresentaram reatividade para o anti-PR3 e anti-MPO. Das treze amostras positivas para o p-ANCA atípico e que exibiram reatividade ao ELISA, doze apresentaram positividade para o anti-PR3 e uma para o anti-MPO e para o anti-PR3. Conclusões: 1) Do ponto de vista de reatividade dos ANCAs e do anti-PR3 a CEP/DII+ teve comportamento diferente da CEP/ CEP/ DII - que que que que teve comportamento semelhante ao da CBP, o que pode sugerir que a maior frequência do p-ANCA atípico e do anti-PR3 esteja mais associada à DII do que à CEP; 2) Quanto à reatividade dos ANCAs, pacientes com HAI-1 e HAI-3 tiveram características semelhante entre si e diferente do da HAI-2; 3) Não houve concordância entre os resultados da IFI para os padrões c-ANCA e p-ANCA clássicos e os do ELISA anti-PR3 e anti-MPO; 4) A melhor concordância de leitura dos padrões do ANCA foi para o p-ANCA atípico, porque a maioria dos soros com esse padrão não teve reatividade nem para o anti-PR3 nem para o anti-MPO por ELISA; 5) Para doenças do aparelho digestivo (DII, CEP e HAI) é difícil relacionar os padrões do ANCA obtidos na imunofluorescência indireta com a reatividade observada nos ELISAs comerciais / Background: The antineutrophil cytoplasmic antibodies (ANCA) has 3 main subtypes according to the pattern observed by indirect immunofluorescence (IIF) on ethanol and formalin fixed human neutrophils. The cANCA has a strong association to a neutrophil enzyme proteinase 3 (PR3), while the classical pANCA has a strong association to myeloperoxidase (MPO), catepsin G, elastase, lactoferrin, lysozyme. Autoimmune hepatitis (AIH), primary sclerosing cholangitis (PSC) and inflammatory bowel disease (IBD), shows another pattern called atypical pANCA that does not react to the enzymes PR3 and MPO. Aims: Determine the frequency of different types of ANCA in PSC, with or without association to IBD (PSC/IBD+, PSC/IBD-); 3 AIH subtypes (AIH type 1, with antismooth muscle antibody (ASMA) with the tubular pattern and with or without antinuclear antibody (ANA); AIH type 2, with anti-LKM1 antibody; AIH anti-Soluble liver antigen/liver pancreas antigen (anti-SLA/LP), with or without ANA associated); primary biliary cholangites (CBP) and healthy controls. Methods: we studied 249 patients (42 PSC/IBD+; 33 PSC/IBD-; 31 AIH-1; 30 AIH-2; 31 HAI antiSLA/LP; 52 CBP; 30 healthy controls). The serum sample of these patients were processed with the INOVAÒ commercial kits: ANCA Etanol, Quanta LiteTM MPO ELISA, Quanta LiteTM PR3 ELISA, Quanta LiteTM FAN HEp-2; and human neutrophil slides ethanol fixed in house. Statistical analysis were performed using the Fisher Test, with Holm correction when nedeed, McNemar and Kappa Test. Results: The classical pANCA were present in 1.9% (IC 95%: 0 - 11.07) CBP patients and 7.1% (IC 95%: 1.77 - 19.7) of PSC/IBD+ patients. There were no statistical significance between groups. The atypical pANCA were identified in 62 out of 249 samples (24.9%). It were more frequently detected in PSC/IBD+ (52.4%, IC 95%: 37.72-66.6) then in PSC/IBD- (21.2%, IC 95%: 10.38 - 38.05), p = 0.005. The Fisher test did not show statistical significance between PSC/IBD+ and CBP for atypical pANCA reactivity (21.2%, IC 95%: 10.38-38.05 versus 15.4%, IC 95%: 7.74 - 27.79), p = 0.56. However, there was statistical significance for atypical pANCA between AIH subtypes, p < 0,001. Among AIH subtypes, the atypical pANCA were more frequent in AIH-1 than in AIH-2 (45.2%, IC 95%: 29.15 - 62.24 versus 3.3%, IC 95%: 0 - 18.09, p < 0.001) and more frequent in AIH-3 than in AIH-2 (32.3%, IC 95%: 18.46-49.97 versus.3.3%, IC 95%: 0 - 18.09, p = 0.012). There were no statistical diference between AIH-1 e a AIH-3 (p = 0.434).None of the 30 healthy controls showed the atypical pANCA pattern. The classical cANCA were present in just 3 of 249 patient samples (1.2%), 1 CBP, 1 PSC/IBD+ and 1 AIH-1. The atypical cANCA is rarely described in the literature. We identified just 2 samples with the atypical cANCA of 249 samples (0.8%), one PSC/IBD+ patient and another AIH-2 patient. 14 out of 249 samples (5.6%), showed a positive fluorescence on ethanol fixed slides, even though we couldn\'t define a ANCA pattern because of the ANA interference. However, the Fisher test did not show a statistical significance between the studied groups (among AIH subtypes, p= 0.207 and PSC/IBD+ versus PSC/IBD-, p = 0.945). Antibodies against proteinase-3, that is considered the classical cANCA target, we detected 25 out of 249 samples (10.0%). The anti-PR3 were more frequent in PSC/IBD+ (31.0%, IC 95%: 22.94-50.88) than in PSC/IBD- (12.1%, IC 95%:4.52-29.46), p = 0,025. Antibodies against antimyeloperoxidase, one of the target antigens of the classical pANCA, were identified in 8 out of 249 samples (3.2%). The overall ELISA results, adding the anti-PR3 and anti-MPO, show that this autoantibodies were more frequent in PSC among the other groups, mainly PSC/IBD+ (p= 0.002). It is worth mentioning that PSC/IBD+ 2 patients showed simultaneously anti-PR3 and anti-MPO reactivity. If we consider atypical pANCA as atypical pANCA by IIF and negative ELISA (anti-MPO and anti-PR3), 49 out of 249 samples (19.7%), The Fisher test showed a difference statistical significance in atypical pANCA IIF+/ELISA- between PSC/IBD+ (35.7%, IC 95%: 22.94 - 50.88) and PSC/IBD- (12.1%, IC 95%:4.21 - 27.93), p = 0,018. The Fisher test did not show significant difference between PSC/IBD- and CBP (13.5%, IC 95%: 6.37 - 25.58), p = 1. The same test showed statistical significance reactivity of ANCA IIF+/ELISA- among AIH subtypes (p=0,001), been more frequent in AIH-1 then in AIH-2 (p = 0.001) and among AIH-3 versus AIH-2 (p = 0.025). There was no statistical difference among AIH-1 versus AIH-3, p = 0,426. Conclusion:SC/IBD+ had a different serological pattern compared with PSC/IBD-, since atypical p-ANCA and anti-PR3 antibodies were significantly more frequent in the former. According to the ANCA profile, PSC/IBD- had a similar behavior to PBC which may suggest that atypical p-ANCA and anti-PR3 antibodies are more associated with IBD than with PSC. Patients with ASMA AIH and with anti-SLA/LP had higher frequency of atypical p-ANCA than anti-LKM1 AIH; There was no concordance between the results of indirect immunofluorescence and those of ELISA. Then, the results of ANCA by immunofluorescence are completely observer-dependent

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Os dados obtidos no inquérito comprovaram que a doença não foi erradicada, revelando 35 municípios paraenses prioritários e prevalências acima de 5%. Uma sub-amostra da conjuntiva de escolares clinicamente positivos foi coletada para a confirmação diagnóstica por Imunofluorescência direta (IFD). O presente estudo utilizou 52 amostras crio conservadas obtidas durante o inquérito, para serem analisadas pelos métodos de IFD e de biologia molecular, na identificação laboratorial da Chlamydia trachomatis. Foram encontradas as frequências de 26,92% (14/52) e 49% (24/49) de resultados positivos pelas técnicas de IFD e reação em cadeia da polimerase (nested-PCR), respectivamente. Considerando as 49 amostras analisadas pelas duas metodologias, as sensibilidades para a detecção do agente etiológico, por IFD e PCR foram de 28,57% (14/49) e 48,98% (24/49), respectivamente (p = 0,0127). As duas técnicas juntas confirmaram a infecção em 57,14% (n=28) das amostras, onde 50% (n=14) foram positivas apenas pela PCR, 35,72% (n=10) para ambas as técnicas e 14,28% (n=4) somente pela IFD. A análise de sete sequências nucleotídicas demonstrou homologia para isolados de C. trachomatis genótipo L1. Este estudo é pioneiro no Brasil, pois além de confirmar a presença de C. trachomatis em amostras oculares de escolares clínicamente positivos para tracoma, validou protocolo de obtenção de DNA a partir de lâminas de IFD crioconservadas, demonstrou a maior sensibilidade do método molecular frente à IFD e identificou o genótipo L1 presente nas amostras. / Trachoma as a leading cause of preventable blindness in the world is a neglected disease related to low socioeconomic conditions and locations without basic sanitation. Present mainly in developing countries brings great harm to public coffers in lost productivity and visual impairment. With the creation of the Alliance for the Global Elimination of Trachoma in 1997 (GET2020) the State of Pará, with support from the Ministry of Health of Brazil, held in the 2006 epidemiological survey of trachoma in school 1st to 4th grades of the official network of education in municipalities with the human development index of less than national average, to discover the prevalence of the disease. Data from the survey proved that the disease was not eradicated, revealing 35 priority municipalities in Pará and prevalence above 5%. A sub-sample of the conjunctiva of clinically positive students was collected to confirm the diagnosis by direct immunofluorescence (DIF). The present study used 52 cryopreserved samples obtained during the epidemiological survey to be analyzed by the methods of DIF and molecular biology to laboratorial identification of Chlamydia trachomatis. We found frequencies of 26.92% (14/52) and 49% (24/49) of positive results by DIF techniques and polymerase chain reaction (nested-PCR), respectively. Considering the 49 samples analyzed by two methods, the sensitivities for detection of the etiologic agent, by FAT and PCR were 28.57% (14/49) and 48.98% (24/49), respectively (p = 0,0127). The two techniques together confirmed 57.14% (n = 28) of samples with infection, where 50% (n = 14) were positive only by PCR, 35.72% (n = 10) for both technical and 14, 28% (n = 4) only by the IFD. The nucleotide sequence analysis of seven isolates showed homology to C. trachomatis genotype L1. These studies is a pioneer in Brazil, as well as confirm the presence of C. trachomatis in samples from ocular school clinically positive for trachoma, validated protocol for obtaining DNA from cryopreserved sheets DIF, showed the highest sensitivity of the molecular method front DIF and identified the genotype L1 in the sample of the conjunctiva of clinically positive students.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-05-15T11:40:13Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_AvaliacaoSorologicaMolecular.PDF: 971805 bytes, checksum: 7836f84ab3ed16c96797b58541a7d7cc (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-05-16T20:06:24Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_AvaliacaoSorologicaMolecular.PDF: 971805 bytes, checksum: 7836f84ab3ed16c96797b58541a7d7cc (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-16T20:06:24Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_AvaliacaoSorologicaMolecular.PDF: 971805 bytes, checksum: 7836f84ab3ed16c96797b58541a7d7cc (MD5) Previous issue date: 2016-02-29 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Com o objetivo de analisar a ocorrência de Toxoplasma gondii em búfalos da Ilha de Marajó através de método sorológico e molecular, foram coletadas amostras de sangue e tecido cerebral de 100 búfalos. Os soros sanguíneos foram submetidos à Reação de Imunofluorescência indireta (RIFI), utilizando a diluição 1:64 como ponto de corte para T. gondii, essas amostras foram testadas para detectar a presença de anticorpos IgG anti-T. gondii. Para confirmar a presença do gene B1 de T. gondii no material gênomico de sangue e tecido cerebral, as amostras foram submetidas à amplificação por reação em cadeia pela polimerase (Nested-PCR). Dentre os soros de búfalos testados, 14 (14%) foram reagentes contra o T. gondii pela técnica da RIFI, enquanto que as amostras de sangue e tecido cerebral testados 4 (4%) foram amplificados o DNA de T. gondii pela técnica da PCR, sendo 3 (3%) em amostras de sangue e 1(1%) em amostras de tecido cerebral. Apesar da baixa ocorrência de anticorpos IgG anti-T. gondii em soro de búfalos, pode-se concluir que a infecção por este protozoário encontra-se presente em búfalos criados na Ilha de Marajó, além disso, foi possível a detectar o material genômico do T. gondii, em amostras de sangue e tecido cerebral desses animais, havendo assim, a necessidade de mais pesquisas, utilizando a técnica molecular no diagnóstico da toxoplasmose uma vez que, a detecção do bioagente em búfalos torna ainda mais relevante à importância desses animais na cadeia epidemiológica da toxoplasmose como prováveis fontes de infecção principalmente para o ser humano. / In order to analyze the occurrence of Toxoplasma gondii in buffalo Marajó Island by serological and molecular method, blood samples and brain tissue of 100 buffaloes were collected. Blood sera were tested by indirect immunofluorescence assay (IFA) using a 1:64 dilution as the cutoff point for T. gondii, these samples were tested for the presence of antibodies IgG anti-T. gondii. To confirm the presence of T. gondii B1 gene in genomic material of blood and brain tissue samples were subjected to amplification by polymerase chain reaction (nested PCR). Among the tested sera buffaloes, 14 (14%) were reactive against T. gondii by the IFA technique, while blood samples and brain tissue tested 4- (4%) were amplified DNA by the technique of T. gondii PCR, 3 (3%) in blood samples and 1 (1%) in brain tissue samples. Despite the low occurrence of antibodies anti-T. gondii in serum buffalo, it can be concluded that infection by this parasite is present in buffalo breed in Marajo, moreover, it was possible to detect the genomic material of T. gondii in blood samples and brain tissue these animals, thus there is the need for further research, using the molecular technique for the diagnosis of toxoplasmosis since the detection of the bioagent buffaloes becomes even more relevant to the importance of these animals in the epidemiological cycle of toxoplasmosis as possible sources of infection primarily for the human being.

Submitted by GABRIELLI BRIANEZI null (gabrielli.brianezi@hotmail.com) on 2016-02-26T15:36:13Z No. of bitstreams: 1 20160224 Tese Gabrielli Brianezi.pdf: 3073309 bytes, checksum: 8fd0793265926aa1a58aea12aad689a6 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-02-26T20:04:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 brianezi_g_dr_bot.pdf: 3073309 bytes, checksum: 8fd0793265926aa1a58aea12aad689a6 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-26T20:04:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 brianezi_g_dr_bot.pdf: 3073309 bytes, checksum: 8fd0793265926aa1a58aea12aad689a6 (MD5) Previous issue date: 2016-01-26 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A patogênese do melasma, especialmente o papel dos queratinócitos e fibroblastos no desenvolvimento e manutenção da doença não é bem compreendida. Alterações dérmicas como dano estrutural à zona de membrana basal, melanócitos em pêndulo, elastose solar, celularidade, proliferação vascular, além da expressão de mediadores inflamatórios, fatores de crescimento, expressão epitelial de melanocortina e receptores dos hormônios sexuais; sugerem interação entre a unidade epidermo-melânica e a derme na fisiopatologia do melasma. A pigmentação melânica da pele pode ser estimulada por diferentes vias de sinalização, sendo a radiação ultravioleta, citocinas dérmicas e inflamação epidérmica, os modelos mais usuais. Neste estudo, objetivamos comparar a morfologia nuclear e a textura da cromatina entre queratinócitos basais no melasma facial e pele adjacente, investigar a ativação das diferentes vias de estímulo à pigmentação, além do envolvimento da derme, com foco na zona de membrana basal e colágeno, no melasma facial. Para a sua execução, foram coletados pares de biópsias faciais (2mm) de mulheres adultas com melasma e de pele adjacente (<2 cm). Processaram-se para coloração de PAS e picrosirius red; imunofluorescência para p53, p38, IL- 1α, αMSH, MC1R e COX2; imunoistoquímica para Melan-Acontracorada com PAS; Microscopia Eletrônica de Transmissão, além de cultura primária de fibroblastos para real-timePCR array e marcação para SA-β-gal. Foram avaliados: núcleos de queratinócitos da camada basal quanto à morfometria nuclear e textura da cromatina; quantificada a intensidade de fluorescência nos compartimentos da epiderme e derme; avaliadas organelas citoplasmáticas e zona de membrana basal; além do colágeno dérmico e densidade de melanócitos: totais e em pêndulo. Em relação à pele adjacente sem melasma: núcleos de queratinócitos basais da epiderme com melasma facial apresentaram índices morfométricos e textura da cromatina alterados; houve aumento da expressão epitelial de αMSH e MC1R, sem diferença quanto ao p53, p38, IL1α e COX2; houve maior número de organelas citoplasmáticas e melanossomas em estágios de maturação maiores nos queratinócitos e melanócitos; áreas danificadas na zona de membrana basal com presença de microvesículas adjacentes à membrana basal; maior número de melanócitos em pêndulo; colágeno dérmico desestruturado. Entre os fibroblastos, houve maior marcação para SA-β-gal e expressão alterada dos genes COL4A1, IL6, ESR2, DKK3, CCL2, WIF1, WNT3A, HGF, IL1B, MMPs 1-7-9 no melasma. As alterações encontradas nos queratinócitos, na derme e zona de membrana basal, sugerem que o fenótipo do melasma pode resultar de alterações em toda unidade epidermo-melânica, não somente de uma hipertrofia dos melanócitos, as vias inflamatórias da epiderme e dependentes de p53 não se mostraram proeminentes, além de ser identificado um possível papel do processo de reparo/dano da derme e da senescência de fibroblastos na patogênese da doença. / The melasma pathogenesis, specially the role of keratinocytes and fibroblast in the disease development and maintenance are not completely understood. Dermal alterations such as basal membrane structural damage, pendulous melanocytes, solar elastosis, cellularity, vascular proliferation, in addition to the expression of inflammatory mediators, grow factors, epithelial melanocortin and sexual hormones receptors, suggest there is an interaction between the epidermal melanin unit and dermis in melasma physiopathology. The melanin skin pigmentation can be stimulated by different signaling pathways. UVR, dermal cytokines and epidermal inflammation are the most common models. These study aims to compare the nuclear morphology and chromatin texture in basal keratinocytes between melasma and adjacent skin, to investigate the activation of different pigmentation signaling pathways, and the dermal involvement, focusing on basal membrane zone and collagen. Therefore, facial skin biopsies (2 mm) from women were taken from melasma and normal skin (<2 cm apart) and processed for PAS and picrosirius red; immunofluorescence for p53, p38, IL-1α, αMSH, MC1R and COX2, immunohistochemistry for Melan-A counterstaining with PAS, and transmission electronic microscopy. Furthermore, primary fibroblast culture for real-timePCRarray and SA-β-gal staining. The nuclei of basal keratinocytes were evaluated as nuclear morphometry and chromatin texture; the fluorescence intensity was quantified in the epidermis and dermis; cytoplasm organelles and basal membrane zone were evaluated; in addition to dermal collagen and melanocytes density: total and pendulous. Regarding adjacent healthy skin, the melasma skin showed alterations in morphometric index and chromatin texture; there was greater epithelial expression of αMSH and MC1R, but without difference for p53, p38, IL1α and COX2; cytoplasm organelles and melanossomas in higher maturity were in greater number in keratinocytes and melanocytes; there were commoner damaged areas in basal membrane zone, presence of microvesicules adjacent to basal membrane; and higher number of pendulous melanocyte; dermal collagen was less structured. There were greater SA-β-gal staining and altered expression of COL4A1, IL6, ESR2, DKK3, CCL2, WIF1, WNT3A, HGF, IL1B, MMPs 1-7-9 genes in melasma fibroblasts.The alterations presented in keratinocytes, dermis and basal membrane zone suggest the melasma phenotype can result from alteration in entire epidermal melanin unit, not just hypertrophic melanocytes, the epidermal inflammatory pathways and p53 dependents do not show prominence, in addition to the possible role of the repair/ damage process identified at dermis and fibroblast senescence in the melasma pathogenesis. / FAPESP: 12/09233-5 / FAPESP: 12/05004-1

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:58Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-02-21Bitstream added on 2014-06-13T19:57:07Z : No. of bitstreams: 1 seki_mc_me_jabo.pdf: 576519 bytes, checksum: d22961f6b04eb42b3628b080392fb7c3 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O presente trabalho, primeiro estudo sobre clamidiose felina no Brasil, teve o objetivo de pesquisar a presença direta e indireta de Chlamydophila (elis em gatos domésticos provenientes de cinco municípios da região nordeste do estado de São Paulo. Adicionalmente, correlacionar os dados de ficha clínica com os resultados positivos obtidos nos três testes laboratoriais utilizados, ou seja, reação em cadeia pela polimerase (PCR), reação de imunotluorescência indireta (RI FI) e reação de fixação do complemento (RFC). O grupo experimental final foi constituído de 151 animais, dos quais 73 eram provenientes de gatis, 18 de clínica/hospitais veterinários e 60 de abrigos públicos para animais. Das 151 amostras de suabes de conjuntiva submetidas à PCR, em 6,0% (9/151) foi encontrado DNA de C. (elis. Anticorpos anti-Chlamydiaceae foram detectados em 72,1% (106/147) das amostras de soros submetidas à RIFI. Em somente 9,4% (10/106) dos soros positivos à RIFI, foram detectados anticorpos fixadores do complemento, revelando que a RFC, embora específica, apresenta baixa sensibilidade quando utilizada na pesquisa de anticorpos anti-Chlamydiaceae em gatos domésticos. Foi também observado que gatos provenientes de gatis, animais com idade maior que um ano e inferior a seis anos, bem como as fêmeas, estão mais predispostos a soroprevalência para C.felis pela RIFI. Entretanto, tais resultados não foram observados nos animais PCR positivo. Ademais, pode-se verificar uma estreita relação entre as presenças de DNA clamidial e de anticorpos anti-Chlamydiaceae em gatos domésticos brasileiros aos dados das fichas clínica relacionados à doença do trato respiratório superior, a secreção ocular e a conjuntivite. / This work, first study about feline chlamydiosis in Brazil, had the objective to evaluate the direct and indirect presence to Chlamydophila felis in domestic cats coming trom tive cities of northeast of São Paulo state. Additionally, relate informations of clinical records with positives results get in the three laboratories tests used, whatever, complement fixation test (CFT), immunofluorescende assay (IFI) and Polymerase Chain Reaction (PCR). Experimental group had 151 animais, witch 73 coming from catteries, 18 coming trom veterinary clinicallhospital and 60 coming from public animal shelters. From 151 samples of conjunctival swabs submitled to PCR, in 6% (9/151) were detect DNA of C.felis. Anti-Chlamydophila antibodies were detect in 72,1%(106/147) of samples of serum submitted to IFI. In just 9,4% (10/106) of the positive serums in IFI, had complement fixation antibodies, detected by CFT. The CFT, although specific, presented low sensibility when to use to research of anti-Chlamydiaceae antibodies in domestic cats. In cats from catteries, animais between one and six year, and female were more predispose to a presence of antibodies anti-Chlamydophila by IFI. However, these results were not observed in animais PCR positive. Thus, was observed a relationship between the presence of chlamydial DNA and antibodies anti-Chlamydiaceae in Brazilian domestic cats, added with informations of clinical records, like with upper respiratory tract disease, ocular discharge and conjunctivitis.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The aim of this study was to evaluate the natural infection of chickens of extensive breeding of an area considered endemic for spotted fever in the state of Rio Grande do Sul through serological survey, as well as to perform the experimental infection by Rickettsia parkeri these birds. In the first study, 300 blood samples were collected and the sera were tested by indirect immunofluorescence assay (IFA) to identify the presence of anti-Rickettsia spp. antibodies. The occurrence of anti-Rickettsia spp. antibodies observed was 1.33% (4/300), with titers ranging from 64 to 256 for R. parkeri, Rickettsia rickettsii and/or Rickettsia bellii. In the second step, was performed the experimental infection by R. parkeri. 64 chickens were used divided into eight groups which were inoculated with different amounts of the agent by several routes of administration. Group 1 (G1) - inoculated with 2,5 x 105 Vero cells infected with R. parkeri (1 ml) intramuscular (IM); G2 5,0 x 105 Vero cells infected with R. parkeri (2 ml) IM, G3 - 1 ml of inoculum subcutaneously (SC); G4 - 2 ml of inoculum SC; G5 - 1 ml of the inoculum intraperitoneally (IP); G6 - 2 ml of inoculum IP, and G7 and G8 1 ml and 2 ml of culture medium Vero cells IM respectively (negative control groups). The sera of chickens were evaluated at 3, 7, 14 and 21 days post infection (PI) by IFA, to verify the dynamics of antibodies in acute and chronic infection. To identify the multiplication of R. parkeri in tissues during the same period PI, PCR was performed from fragments of spleen and lung of chickens euthanized. Birds of G4 and G3, in order of importance, had the highest average antibody showing the highest levels at seven and 14 days PI. G2, G4 and G6 showed higher mean antibody compared to G1, G3 and G5 respectively, considering the infection dose-dependent. Rickettsial DNA was not detected in the tissues evaluated. The results of both studies suggest that chickens of extensive breeding from endemic area searched do not participate as a reservoir and/or amplifier host in the epidemiology of spotted fever of region and based in the experimental infection, it was verified that birds seroconverted by the challenge by R. parkeri, but no replication of the agent in the tissues analyzed, nor the presence of rickettsemia. / Este estudo teve como objetivo avaliar a infecção natural de galinhas de criação extensiva de uma área considerada endêmica para a febre maculosa no estado do Rio Grande do Sul através de pesquisa sorológica, bem como realizar a infecção experimental por Rickettsia parkeri nessas aves. No primeiro estudo, foram coletadas 300 amostras de sangue e os soros foram testados pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI) para identificar a presença de anticorpos anti-Rickettsia spp. A ocorrência de anticorpos anti-Rickettsia spp. observada foi de 1,33% (4/300), com títulos variando de 64 a 256 para R. parkeri, Rickettsia rickettsii e/ou Rickettsia bellii. Na segunda etapa, foi realizada a infecção experimental por R. parkeri, o qual foram utilizadas 64 galinhas caipiras divididas em oito grupos, onde foram inoculadas diferentes quantidades do agente por diversas vias de administração. Grupo 1 (G1) - inoculado com 2,5 x 105 células Vero infectadas por R. parkeri (1 ml) via intramuscular (IM); G2 5,0 x 105 células Vero infectadas por R. parkeri (2 ml) via IM; G3 - 1 ml do inóculo via subcutânea (SC); G4 - 2 ml de inóculo via SC; G5 - 1 ml do inóculo via intraperitoneal (IP); G6 - 2 ml de inóculo via IP, e o G7 e G8 - 1 e 2 ml de meio de cultivo de células Vero via IM respectivamente (grupos controles negativos). Os soros das aves foram avaliados aos 3, 7, 14 e 21 dias pós infecção (PI) por meio de RIFI, para avaliar a dinâmica de anticorpos em infecção aguda e crônica. Para identificar a multiplicação de R. parkeri nos tecidos, no mesmo período PI, foi realizado o PCR a partir de fragmentos de baço e pulmão colhidos das galinhas eutanasiadas. As aves do G4 e G3, em ordem de importância, apresentaram as maiores médias de anticorpos apresentando os níveis mais elevados aos sete e 14 dias PI. Os grupos G2, G4 e G6 apresentaram médias de anticorpos superiores comparado ao G1, G3 e G5 respectivamente, sendo considerada a infecção dose-dependente. Não foi detectado DNA rickettsial nos tecidos avaliados. Os resultados de ambos os estudos sugerem que as galinhas de criação extensiva da área endêmica pesquisada não participaram como reservatório e/ou hospedeiro amplificador na epidemiologia da febre maculosa na região e baseado na infecção experimental, verificou-se que as aves soroconverteram mediante o desafio por R. parkeri, porém não houve a multiplicação do agente nos tecidos analisados, bem como a presença de rickettsemia.

Submitted by Ana Cláudia Cavalcante Espósito null (anaclaudiaesposito@gmail.com) on 2017-07-27T20:34:29Z No. of bitstreams: 1 Ana Cláudia mestrado para depositar.pdf: 2933638 bytes, checksum: 3c192abd021482675fa186f4c4bba9e4 (MD5) / Approved for entry into archive by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br) on 2017-07-31T19:29:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 lemos_acce_me_bot.pdf: 2933638 bytes, checksum: 3c192abd021482675fa186f4c4bba9e4 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-31T19:29:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 lemos_acce_me_bot.pdf: 2933638 bytes, checksum: 3c192abd021482675fa186f4c4bba9e4 (MD5) Previous issue date: 2017-07-20 / Fundo de Apoio à Dermatologia de São Paulo (FUNADERSP) / O melasma é hipermelanose crônica e adquirida decorrente de um complexo processo que envolve hipertrofia melanocítica e disfunção melanogênica. Acomete preferencialmente o sexo feminino e as lesões ocorrem nas áreas fotoexpostas, especialmente a face. Sua patogênese não é bem compreendida e os estudos clássicos avaliam apenas pele acometida e perilesional, mas pouco se sabe do comportamento da pele fotoprotegida, submetida aos mesmos fatores sistêmicos e genéticos. Neste estudo, objetivamos avaliar características histológicas, vias epidérmicas que influem na melanogênese (Wnt e ASIP) e características ultraestruturais da pele com melasma em comparação com a pele sã adjacente e retroauricular. Para a execução deste estudo transversal com controle intra-sujeito, foram coletadas três biópsias cutâneas (punch 3 mm) de onze mulheres com melasma facial. As áreas de coleta foram a pele com melasma, pele sã adjacente (distando no máximo 2 cm do limite da lesão) e pele retroauricular ipsilateral. Os fragmentos provenientes de dez participantes foram corados por hematoxilina-eosina, ácido periódico de Schiff, Fontana-Masson, picrosirius red, azul de toluidina e Verhöff; imunomarcados para CD34 e submetidos à imunofluorescência direta (IFD) de dupla marcação para proteínas Wnt1, WIF-1 e ASIP. Já os três fragmentos de uma das participantes foram processados para Microscopia Eletrônica de Transmissão (MET). Os dados obtidos foram comparados entre as topografias por modelo linear generalizado de efeitos mistos. As participantes eram fototipo III ou IV de Fitzpatrick, com idade média (desvio-padrão) de 42,9 (8,9) anos e apresentavam lesões há 16,7 (7,9) anos. Houve adelgaçamento da camada córnea na pele com melasma e na pele adjacente. Na pele com melasma houve maior compactação da córnea, maior pigmentação melânica epidérmica, maior heterogeneidade do colágeno, elastose solar, maior número de mastócitos, falhas da integridade da zona da membrana basal, melanócitos em pêndulo, bem como maior celularidade e vasos na derme superficial. IFD evidenciou maior intensidade de marcação de Wnt1 na pele com melasma em relação à pele adjacente e maior intensidade na pele retroauricular em relação à pele sã adjacente. Não houve diferença estatística significativa na intensidade de marcação de WIF-1 e ASIP entre as topografias. À MET, houve maior dano estrutural na lâmina lúcida no melasma, bem como maior número de melanossomas maduros e organelas citoplasmáticas nos melanócitos e queratinócitos basais. Tais resultados evidenciam que a pele com melasma apresenta, além da hipertrofia melanocítica, alterações na barreira epidérmica, na derme superior, zona de membrana basal e maior ativação da via Wnt, que diferem da pele fotoexposta adjacente e da retroauricular, configurando um fenótipo individualizado e não somente uma extensão do fotoenvelhecimento ou do envelhecimento intrínseco. / Melasma is a chronic and acquired hypermelanosis resulting from a complex process which involves melanocytic hypertrophy and melanogenic dysfunction. Melasma mainly affects females and lesions occur in the photoexposed areas, especially the face. Its pathogenesis is not well understood, and classical studies evaluate only the affected and perilesional skin, but little is known about the behavior of the non-sun-exposed skin, subjected to the same systemic and genetic factors. In this study, we aimed to evaluate histological features, epidermal pathways that influence melanogenesis (Wnt and ASIP) and ultrastructural characteristics of the skin with melasma in comparison to healthy adjacent and retroauricular skin. For the execution of this cross-sectional study with intrasubject control, three skin biopsies (punch 3 mm) were collected from eleven women with facial melasma. The areas of collection were the skin with melasma, adjacent healthy skin and retroauricular skin. Fragments from ten participants were stained with hematoxylin-eosin, periodic acid from Schiff, Fontana-Masson, picrosirius red, toluidine blue and Verhöff; immunomarked for CD34 and subjected to double-labeled direct immunofluorescence (DIF) for Wnt1, WIF-1 and ASIP proteins. The three fragments of one of the participants were processed for Transmission Electron Microscopy (TEM). The data obtained were compared between topographies by generalized linear model of mixed effects. Participants were Fitzpatrick's phototype III or IV; the mean age (standard deviation) was 42.9 (8.9) years and they had lesions for 16.7 (7.9) years. There was thinning of the corneal layer on the skin with melasma and adjacent skin. In the skin with melasma, there was more corneal compaction, greater epidermal melanic pigmentation, greater collagen heterogeneity, solar elastosis, more mast cells, defects of the basement membrane area, pendulum melanocytes, as well as greater cellularity and vessels in the superficial dermis. DIF showed a greater intensity of Wnt1 marking in the skin with melasma in relation to the adjacent skin, and greater intensity in the retroauricular skin in relation to the adjacent healthy skin. There was no significant statistical difference in the intensity of WIF-1 and ASIP marking between topographies. At TEM, there was more structural damage to the lamina lucida in melasma, as well as more mature melanosomes and cytoplasmic organelles in melanocytes and basal keratinocytes. These results show that melasma skin presents, in addition to melanocytic hypertrophy, alterations in the epidermal barrier, upper dermis, basement membrane zone and greater activation of the Wnt pathway, which differ from adjacent and retroauricular photoexposed skin, forming an individualized phenotype and not only an extension of photoaging or intrinsic aging.