Dissertação(mestrado) - Universidade Federal do Rio Grande, Programa de Pós-Graduação em Aqüicultura, Instituto de Oceanografia, 2011. / Submitted by Cristiane Silva (cristiane_gomides@hotmail.com) on 2012-08-17T01:12:42Z No. of bitstreams: 2 furg - dissertao maria angelica dos reis garrido pereira.pdf: 911472 bytes, checksum: 983e6452fd9febc8f8a9a026e1fce50b (MD5) furg - dissertao maria angelica dos reis garrido pereira.pdf: 911472 bytes, checksum: 983e6452fd9febc8f8a9a026e1fce50b (MD5) / Approved for entry into archive by Bruna Vieira(bruninha_vieira@ibest.com.br) on 2012-09-22T18:10:17Z (GMT) No. of bitstreams: 2 furg - dissertao maria angelica dos reis garrido pereira.pdf: 911472 bytes, checksum: 983e6452fd9febc8f8a9a026e1fce50b (MD5) furg - dissertao maria angelica dos reis garrido pereira.pdf: 911472 bytes, checksum: 983e6452fd9febc8f8a9a026e1fce50b (MD5) / Made available in DSpace on 2012-09-22T18:10:17Z (GMT). No. of bitstreams: 2 furg - dissertao maria angelica dos reis garrido pereira.pdf: 911472 bytes, checksum: 983e6452fd9febc8f8a9a026e1fce50b (MD5) furg - dissertao maria angelica dos reis garrido pereira.pdf: 911472 bytes, checksum: 983e6452fd9febc8f8a9a026e1fce50b (MD5) Previous issue date: 2011 / O bijupirá (Rachycentron canadum) é um peixe marinho que apresenta bom potencial para seu cultivo. Muitas pesquisas demonstram os efeitos benéficos do probiótico Bacillus spp. na aquicultura, porém não há estudos sobre os efeitos de probióticos em sistemas de recirculação de água (SRA). Este trabalho analisa os efeitos do probiótico Bacillus spp. na performance de larvas de bijupirá criadas em SRA. O experimento foi realizado na Universidade Virginia Tech (EUA). As larvas foram estocadas em dois SRA independentes entre si - tratamento probiótico (TP) e tratamento controle (TC) - na densidade de 15 larvas/L, durante 26 dias após a eclosão. Um dos sistemas (TP) recebeu a adição de probiótico comercial composto por B. subtilis, B. licheniformis e B. pumilus diretamente na água e via alimento vivo, conforme o fabricante. As análises de microbiologia e qualidade de água foram feitas diariamente por medição de parâmetros físico e químicos e plaqueamento em meio de cultura para contagem de Bacillus totais e Vibrio totais. Ao final do experimento foram realizados biometria e contagem total dos animais, teste de resistência ao estresse salino e fixação de larvas para imunohistoquímica do timo para avaliar a expressão dos complexos multirreceptores de antígenos CD3 e CD4 de linfócitos T e morfometria do rim cefálico. A sobrevivência foi similar e de 14,9±2,4% e 15,1±0,9% para TP e TC respectivamente. O peso final foi de 170±10 mg para TP e 160±10 mg TC, não havendo diferença estatística entre os tratamentos. Na microbiologia da água não foram encontradas diferenças significativas entre os tratamentos na contagem de víbrios totais (TP: 3.366±522 UFC/mL; TC: 4.964±902 UFC/mL). Na contagem de Bacillus totais os tratamentos diferiram estatisticamente, sendo maior a concentração no TP pela adição dos Bacillus spp. (901±88 UFC/mL e 61±24 UFC/mL). O teste de estresse por salinidade demonstrou uma maior resistência ao estresse salino pelas larvas do tratamento probiótico. A análise imunohistoquímica mostrou uma maior expressão de CD4 no timo em PT (TP: 43,7 ± 6,16% CD4 células/mm²; TC: 25,4 ± 3,5% CD4 células/mm²), o que pode indicar uma melhor resposta imune contra patógenos. A análise morfométrica do rim cefálico indica que este órgão é maior no TP (TP: 0,97 ± 0,33 milímetros; TC: 0,69 ± 0,22 milímetros), provavelmente devido a um aumento na quantidade de linfócitos B. Estes resultados indicam que o probiótico utilizado em um sistema de recirculação de água é efetivo quanto à imunoestimulação e aumenta a resistência ao estresse salino. / Cobia (Rachycentron canadum) is a marine finfish with good potential for mariculture. The aim of this study was to analyze the effects of probiotic Bacillus spp. on the performance of cobia larvae reared in a recirculating aquaculture system (RAS). Many studies have demonstrated the beneficial effects of probiotic Bacillus spp. in aquaculture, but there are no studies on the effects of probiotics in RAS, requiring research on their effectiveness, since in open systems the beneficial effects are already known. The trial was conducted at Virginia Tech VSAREC (USA). Larvae were stocked into two independent RAS - probiotic treatment and control - at a density of 15 larvae L-1, for 26 days after hatching. One of the systems (Probiotic treatment) received the addition of a commercial probiotic consisting of Bacillus subtilis, Bacillus licheniformis and Bacillus pumilus directly into the water and by live feed, according to the manufacturer. At the end of the experiment we performed biometrics, larvae counts, stress test and larvae were fixed for morphometric analysis of head kidney and for immunohistochemistry of thymus to evaluate the phenotypic expression of complex antigens CD3 and CD4 in T-lymphocytes. Survival and final weight had no significant difference between groups. The analysis of water microbiology had no significant differences between treatments in total counts of Vibrio, but in the total count of Bacillus treatments differed statistically, with a higher concentration in Probiotic treatment because of the addition of Bacillus spp. in this group. The salinity stress test was expressed by stress sensitivity index (SSI), which demonstrated a greater resistance to salt stress by larvae of probiotic treatment. Immunohistochemical analysis showed a higher expression of CD4 in Probiotic treatment, which may indicate better immune response against pathogens. The morphometric analysis of head kidney indicates that this organ is larger in Probiotic treatment, probably due to an increase in the quantity of B-lymphocytes. These results indicate that Bacillus spp. probiotics used in RAS may stimulate the immune system and increase the general stress resistance of cobia larvae.

Neste trabalho elaboramos um paradigma para estudar os comportamentos de defesa ao contexto de uma derrota social e as estruturas neurais envolvidas nas respostas de defesa do animal derrotado utilizando imunohistoquímica para proteína Fos. Utilizou-se um aparato que consistia de uma caixa moradia ligada a outra caixa por um corredor. Houve uma habituação de 10 dias a esse aparato, com a outra caixa contendo apenas maravalha limpa. No 11º dia o animal foi exposto a um macho agressivo colocado na outra caixa, e derrotado por ele. Vinte e quatro horas após a derrota social, os animais derrotados foram expostos ao ambiente em que ocorreu a derrota. Eles apresentaram comportamentos de defesa tanto durante a derrota social quanto durante a exposição ao contexto. No contexto, os derrotados apresentaram comportamentos de avaliação de risco e os controles exploraram livremente o aparato. Notamos um aumento na expressão de proteína Fos no MEApd na amígdala, no LSr no septo lateral, no circuito sexualmente responsivo do hipotálamo medial, na LHAjd no hipotálamo, e no PMD. / We investigated the neural systems involved in the contextual defense to a social defeat. We established a protocol to observe contextual defensive responses in animals previously defeated by an aggressive conspecific: animals were kept ten days living in a apparatus composed by two cages (room and resident cages). On the 11th day animals were exposed to an aggressive conspecific and defeated by it. On the following day, animals were exposed to the apparatus. These defeated animals presented defensive responses, characterized by risk assessment behaviors. Increased Fos expression was found in MEApd, LSr, elements of the social responsive medial hypothalamic circuit, the juxtadorsal part of the lateral hypothalamic area and the dorsal premammillary nucleus (PDMdm). The data allowed us to outline a putative circuit involved in the expression of contextual defense to social defeat, and indicates that both innate and contextual defense to social threat apparently share the same neural circuits.

Agressões nos períodos críticos do crescimento do sistema nervoso podem modificar os eventos de desenvolvimento. Entre os vários fatores nocivos está a anóxia. O organismo do neonato tem suprimento de energia anaeróbica relativamente rica, foi observado que a acidose ocorre com menor facilidade, propiciam sobrevivência. A proteína de astrócitos, S100<font face=\"Symbol\">b, exerce efeitos parácrinos e autócrinos em neurônios e glia. Sua estimulação promove sobrevivência e proteção neuronal, atuando como fator trófico e neurotrófico. Modelo animal de anóxia neonatal desenvolvido em nosso laboratório, nos revelou ativação neural pela expressão de Fos e alterações comportamentais, o que nos instigou a explorar os efeitos da anóxia nas células da glia no Hipocampo e Núcleo do Trato Solitário. Para sua exposição à anoxia, durante 25 minutos, foi utilizada câmara, saturada com nitrogênio gasoso 100%. Grupos P2 e P7 nas condições: Basal (B), sem estimulo; Sham (S) como controle experimental e Anóxia (A) com falta de oxigênio, foram analisados por S100<font face=\"Symbol\">b-IR com técnicas ABC/DAB e Western blot. Observamos significante diferença de S100<font face=\"Symbol\">b-IR no núcleo do trato solitário, somente no grupo P2 A 2 h em relação ao grupo P2 S 2 h. A reatividade glial de S100<font face=\"Symbol\">b na formação hipocampal (CA1, CA3+CA2 e DG), apresentou diferença significante no grupo anoxia de acordo com o estágio de maturação do animal. A técnica por Western blot em toda a formação hipocampal, apresentou aumento de S100<font face=\"Symbol\">b no grupo A em ambos P2 e P7, a avaliação de um todo foi diferente daquela de áreas especificas. / Attacks to the nervous system at critical growth periods can modify developmental events. Among the various harmful factors at is anoxia. The high anaerobic energy supply to the newborn and a less easily acidosis occurrence provides survival. The astrocyte S100<font face=\"Symbol\">b protein exerts paracrine and autocrine effects on neurons and glia. Its stimulation promotes neuronal survival and protection, as a trophic and neurotrophic factor. An animal model of neonatal anoxia improved in our lab revealed neural activation by Fos expression and behavioral changes, which prompted us to explore the anoxia effects on glial cells in the Hypocampus and Nucleus of Solitary Tract. For their exposure to anoxia, a chamber, saturated with 100% nitrogen gas, for 25 minutes were used. Groups with P2 and P7, conditions: Baseline, without stimulation; Sham as the experimental control, and Anoxia with lack of oxygen, were evaluated by S100<font face=\"Symbol\">b-IR by ABC/DAB and Western blot techniques. The nucleus of solitary tract, significant different S100<font face=\"Symbol\">b-IR observed, only in the P2 A 2 h compared to P2 S 2 h. The glial S100<font face=\"Symbol\">b-IR at the hippocampal formation (CA1, CA2 + CA3 and DG) presented significant difference in the anoxic group according to the maturational stage of the animal. Western blot technique of the entire hippocampal formation, showed increase of S100<font face=\"Symbol\">b at the group A at both P2 and P7, the whole evaluation was different from of that of specific areas.

O HPV tem sido relacionado a diversos tipos de câncer, inclusive o cervical e o retinoblastoma. Este trabalho visa estudar a atividade viral pelo perfil clastogênico e expressão protéica em mulheres e crianças atendidas em Pernambuco. Amostras cervicais, de sangue periférico e retinoblastomas foram analisadas, sendo trinta e quatro mulheres e 7 crianças avaliadas. A detecção viral foi realizada por PCR e o HPV foi detectado em 29 mulheres (85,3%), com o tipo HPV-16 mais frequente. Através da imunoistoquímica e hibridização foi possível detectar o HPV em 6 crianças e as proteínas E1+E4, L1 e E6 foram evidenciadas nos tecidos em diversas regiões do olho, sugerindo atividade viral na amostra. Além disso, danos no material genético de mulheres com HPV foram envidenciados pelo ensaio cometa, sendo encontrada uma diferença estatística significante entre linfócitos em cultura de pacientes HPV-positivas comparadas àquelas HPV-negativas. Os dados trazem questionamentos sobre a presença de HPVs oncogênicos em tumores infantis e sua possível transmissão e mais evidências sobre os danos observados no DNA dos hospedeiros como consequência da presença e atividade virais. / HPV has been linked to several cancers, including cervical and retinoblastoma. This work aims at to verify the viral activity by clastogenic profile and protein expression in women and children served in Pernambuco. Cervical samples, retinoblastomas and peripheral blood were analyzed, being thirty-four women and 7 children evaluated. Viral detection was performed by PCR and HPV was detected in 29 women, being the most frequent HPV-16. Through hybridization and immunohistochemistry analysis was possible to detect HPV in 6 children and E1+E4, L1 and E6 proteins were highlighted in the tissues in various parts of the eye, suggesting viral activity in the sample. In addition, damage to the genetic material of women with HPV have been showed by the Comet assay and found a significant statistical difference between lymphocytes in culture of HPV-positive patients compared to those HPV-negative. The data bring questions about the presence of oncogenic HPV in tumors and its possible transmission and more evidence about the damage observed in the DNA of the host as a result of the presence and viral activity.

Made available in DSpace on 2015-09-25T12:18:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Salomao CuryRad Oka.pdf: 1635559 bytes, checksum: c69a9f145da6d86de4f06ad7da5b589a (MD5) Previous issue date: 2011-07-21 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Actinic cheilitis is the main lesion with malignant potential of the lower lip, and it is considered a precursor of squamous cell carcinoma in this region. The objective of this study was to evaluate clinical, histopathological and immunohistochemical expression of Ki67 protein in actinic cheilitis aiming better understanding its biological behavior. This research was of transversal, descriptive, analytical, observational, blinded, quantitative, clinical, histopathological and immunohistochemical kind. Thirty cases of actinic cheilitis were clinically and histologically evaluated using pre-established parameters and subjected to immunohistochemistry by streptavidin-biotin method in order to evaluate the expression of protein Ki67. Data were submitted to Mann-Whitney and Kruskal-Wallis tests. It was verified that the most affected gender was male (86.7%), median age was 52,5 years with standard deviation of ±15.75, the most prevalent occupation was farmer (43.3%) and the most affected skin color was white (76.7%). Almost the entire sample was exposed to the sun (90%), although 53.3% used to wear some kind of protection. The main forms of clinical presentation of these lesions were not ulcerated leukoplakia (43.3%), followed by not ulcerated erythroplakia (33.3%). Regarding the main histomorphological characteristics, it was observed that the hyperkeratosis became more present (43.3%) and there were no cases of carcinoma in situ. Although Ki67 protein has been expressed in all cases analyzed, there was not correlation between this protein immunohistochemical expression index and any other analyzed variable. However, it can be concluded that there were cell proliferative activity in varying degrees in these lesions. / A queilite actínica é a principal lesão com potencial de malignidade do lábio inferior, sendo considerada precursora do carcinoma de células escamosas nessa região. Assim, o objetivo deste trabalho foi realizar uma avaliação clínica, histopatológica e imunohistoquímica da expressão da proteína ki67 em queilites actínicas, com intuito de compreender melhor o seu comportamento biológico. A presente pesquisa se caracterizou como um estudo transversal, descritivo-analítico, observacional, quantitativo, cego, de cunho clínico, histopatológico e imunohistoquímico dos casos diagnosticados como queilite actínica na clínica da LINCCO (Liga Interdisciplinar de Combate ao Câncer Oral) do Departamento de Odontologia, da Universidade Estadual da Paraíba (UEPB). Assim, trinta casos de queilites actínicas foram avaliados clínica e histologicamente, usando parâmetros pré-estabelecidos, e submetidos à análise imunohistoquímica pelo método da estreptoavidina-biotina, a fim de se avaliar a expressão da proteína ki67. Os dados obtidos foram submetidos aos testes Mann-Whitney e de Kruskal-Wallis, tendo como base os níveis de significância de 5% (p<0,05). Foi verificado que o gênero mais acometido foi o masculino (86,7%), a idade média foi de 52,5 anos com desvio padrão de ±15,75, a ocupação profissional mais presente foi a de agricultor (43,3%) e a cor da pele mais acometida foi a leucoderma (76,7%). Da amostra, 90% se expunha ao sol, embora 53,3% usasse algum tipo de proteção. As principais formas de apresentação clínica destas lesões foram leucoplasias não ulceradas (43,3%), seguidas de eritroplasias não ulceradas (33,3%). Com relação às principais características histomorfológicas, pôde-se observar que as hiperceratoses se fizeram mais presentes (43,3%) e que não houve nenhum caso de carcinoma in situ. Embora a proteína Ki67 tenha se expressado em todos os casos analisados, não houve uma correlação estatisticamente significativa do índice de expressão imunohistoquímica desta proteína com nenhuma outra variável analisada. Foi possível concluir que existia atividade proliferativa celular em diversos graus nas referidas lesões.

Células dendríticas (DCs) são centrais na indução da resposta imune e o desvio de sua diferenciação para macrófagos, no microambiente tumoral pode ser um mecanismo de escape do tumor frente à resposta imune. Assim, o objetivo deste projeto foi comparar, entre tecido neoplásico e não-neoplásico, a freqüência de DCs, macrófagos e mastócitos e da produção in situ das citocinas IL-4 e TNF-<font face=\"symbol\">a. Nesta análise observou-se maior quantidade de DCs (CD1a+ ou S100+), macrófagos (CD68+), mastócitos (azul de toluidina+) e células produtoras de TNF-<font face=\"symbol\">a no tumor do que no tecido pulmonar. No tecido pulmonar encontrou-se maior freqüência de células positivas para IL-4, assim como, entre células dissociadas de tecido fresco, observou-se maior freqüência de DCs maduras. Identificou-se também a expressão, por células tumorais ou do estroma pulmonar, do marcador CD83, característico de DCs ativadas, em 10 de 11 pacientes. O sobrenadante de cultura destas células CD83+ inibiu a ativação de linfócitos por DCs alogenêicas, mas esta atividade foi suprimida por anticorpos anti-CD83. / Dendritic cells (DCs) play a crucial role in the immune response and the deviation of its differentiation to macrophages in the tumor microenvironment may be a mechanism of escape of tumor from immune response. Thus, the aim of this project was to compare between affected and non-affected lung, the frequency of DCs, macrophages and mast cells and production in situ of IL-4 and TNF-<font face=\"symbol\">a. In this analysis, we observe higher amount of DCs (CD1a+ and S-100+), macrophages (CD68+), mast cells (toluidine blue+) and cells producing TNF-<font face=\"symbol\">a in the tumor than non-affected lung. In lung, we found higher frequency of cells IL-4+ and in lung digests we observed higher amount of mature DCs. We also identified the expression by tumor or stroma cells the CD83, present in activated DCs, in 10 of 11 patients. The supernatant of such cells CD83+ inhibited the activation of lymphocyte by alogeneic DCs, but this effect was decreased by anti-CD83.

O presente estudo objetivou analisar o envolvimento diferenciado dos núcleos da rafe nas respostas homeostáticas de ratos machos jovens submetidos a exercício físico. Foram formados os grupos de animais treinados (T) e sedentários (S). Para os animais do grupo T foi adotado o protocolo de natação moderada, por meio do qual os animais foram treinados durante oito semanas consecutivas, apresentando, cada semana, cinco dias de treinamento e dois de descanso. Após o período de treinamento, os animais foram perfundidos transcardiacamente e o encéfalo removido, pós-fixado, crioprotegido e criosecionado em cortes coronais de 40&#61549;m, para processamento com técnicas de imunoperoxidase pelo método ABC contra a proteína Fos, utilizando-se DAB como cromógeno. A análise da ativação neuronal foi efetuada pela expressão da proteína Fos. Os cortes foram analisados em microscopia de campo claro e uma série adjacente foi montada em lâminas gelatinizadas e coradas com tionina, método de Nissl, para controle citoarquitetônico. Durante o experimento, notou-se a adaptação dos animais ao exercício (grupo T), sendo necessária a adição, em sua cauda, de pesos relativos ao peso corpóreo do animal, proporcionando uma adequada seqüência de treinamento. A análise quantitativa evidenciou diferentes densidades de marcação nos diferentes núcleos entre os grupos experimentais. A análise estatística ANOVA e o teste Tuckey evidenciaram diferenças estatísticas entre os grupos, onde os animais do grupo T apresentaram maior ativação de neurônios em relação aos animais do grupo S. O núcleo RPa apresentou o maior número médio de células ativadas, fato evidenciado pela contagem dos neurônios Fos-imunorreativos (Fos-IR), respectivamente, nos grupos T e S: (57,74 e 44,40); seguido pelos núcleos DR (56,67 e 47,15), RMg (42,68 e 36,09), ROb (23,98 e 19,70), MnR (23,89 e 21,19) e PnR (20,18 e 14,07). No núcleo PMnR foi observada, contrariamente aos demais grupos, um maior número médio de células ativadas no grupo S em relação ao grupo T (5,35 e 4,08, respectivamente). Entretanto, estatisticamente, esse dado não é representativo. Assim, de forma inédita, verificou-se a participação diferenciada dos núcleos da rafe nos mecanismos homeostáticos relacionados ao exercício físico em animais treinados. / The aim of this work was to study the distinguished involvement of the raphe nuclei in homeostatic mechanisms of young male rats submitted to physical exercises. Trained (T) and sedentary (S) animals constituted the experimental groups. For animals of group T, the method applied were the moderate swimming protocol, when the animals were trained consecutively for eight weeks (five days training, two days for rest). After the training, the animals were transcardiacally perfused and their brain were removed, post-fixated, cryoprotected and cryosectioned in coronal sections of 40&#61549;m, which were processed with ABC-DAB anti-Fos immunoperoxidase techniques. The analysis of the neuronal activation was observed by the expression of Fos protein. The sections were analyzed in light microscopy and an adjacent series was mounted in gelatinous slides and stained with tionin, Nissl method, for cytoarchitectonical control. Animals of group T adaptation to exercise was observed during the experiment when heaviness, equivalent to the animal’s body weight, was added in their tails, giving an adequate training sequence. The quantitative analysis highlighted different densities of mark in different nuclei between the experimental groups. The statistic analysis ANOVA and Tuckey test presented different densities between experimental groups, in which the T group of animals showed bigger activation of neurons in relation to the S group of animals. The RPa nucleus showed the higher median number of labeled cells, fact evidenced through the counting of Fos-immunoreactive neurons (Fos-IR), respectively, between T and S groups: (57,74 and 44,40); followed by DR (56,67 and 47,15), RMg (42,68 and 36,09), ROb (23,98 and 19,70), MnR (23,89 e 21,19) and PnR (20,18 and 14,07) nuclei. In the PMnR nucleus was observed, against the other groups, higher number of median numbers of labeled cells in the S group in relation to T group (5,35 and 4,08, respectively). Thus, the distinguished raphe nuclei’s participation in homeostatic mechanisms related with physical exercises in trained animals was evidenced for the first time.

Pólipos adenomatosos colorretais são conhecidos como lesões pré-malignas. Mutações germinativas nas enzimas de reparo (MMR) hMLH1, hMSH2 e hMSH6 são causas reconhecidas de câncer colorretal hereditário não polipóide, induzindo um fenótipo mutante caracterizado por instabilidade de microssatélite (MSI). A MSI também é detectada em cânceres colorretais esporádicos. O Cox-2 é uma enzima induzível que regula a síntese de prostaglandina, sendo fortemente manifestada em locais de inflamação, pólipos adenomatosos colorretais e câncer. Objetivos: Avaliar a imunoexpressão do hMLH1, hMSH2 e Cox-2 em pólipos ressecados através da colonoscopia e associar às características clínico-patológicas (idade, sexo, localização, tamanho, histologia e grau de displasia). Métodos: 138 pacientes com pólipos colônicos, 6 com mucosa colônica normal e 23 pacientes com adenocarcinoma colorretal foram incluídos no estudo. Nenhum paciente apresentava histórico familiar de câncer colorretal. Cento e sessenta e sete amostras foram coletadas e imunocoradas para hMLH1, hMSH2 e Cox-2, usando a técnica ABC-imunohistoquímica e amplificação por tiramida biotinilada. Resultados: A média de idade foi 60,2 + 13,8 (variando de 21 a 90 anos de idade) sendo 77 homens (55,8%) e 61 mulheres (44,2%). Adenomas tubulares estavam presentes em 81,4%, tubulo-viloso em 15,9%, serrilhados em 1,8% e vilosos em 0,9%. A maioria dos adenomas localizava-se na região retossigmoideana (63,5%), seguido pelo ascendente em 14,2%, descendente em 8,2%, ceco em 7,5% e o transverso em 6,7%. Displasia de alto grau foi detectada em 46 (40,4%) e de baixo grau em 68 (59,6%) dos adenomas. Perda de imunoexpressão hMLH1 e hMLH2 foi observada em 20% e 15,5% dos adenomas, respectivamente. O Cox-2 foi positivo em 9% dos adenomas e em 40% dos adenocarcinomas. Além disso, a imunoexpressão Cox-2 foi associada à multiplicidade de adenomas no mesmo paciente (p=0,001). Não houve associação entre a imunoexpressão de marcadores e o sexo, idade, localização, tamanho, histologia ou grau de displasia. Conclusões: 1. A perda de imunoexpressão hMLH1 e hMLH2 em adenomas é relativamente freqüente em pacientes sem histórico familiar de câncer colorretal; 2. O Cox-2 é fortemente manifestado em pólipos adenomatosos e adenocarcinomas colorrretais sendo que sua positividade em adenomas pode indicar um risco maior de lesões múltiplas. / Colorectal adenomatous polyps are known as premalignant lesions. Mutations in the mismatch repair (MMR) enzymes hMLH1, hMSH2 and hMSH6 are recognized causes of hereditary nonpolyposis colorectal cancer and act by inducing a mutator phenotype characterized by microsatellite instability (MSI). MSI is also detected in sporadic colorectal cancers. Cox-2 is an inducible enzyme that regulates prostaglandin synthesis and is overexpressed at sites of inflammation, in colorectal adenomatous polyps and cancer. Aims: To evaluate the immunoexpression of hMLH1, hMSH2 and Cox-2 in resected polyps through colonoscopy, and to associate to the clinicopathologic characteristics (age, gender, location, size, histology and grade of dysplasia). Methods: 138 patients with colonic polyps, 6 with normal colonic mucosa and 23 patients with colorectal adenocarcinoma were enrolled in this study. All patients had no familial history of colorectal cancer. The 167 samples were collected and immunostained for hMLH1, hMSH2 and Cox-2 using the ABC-immunohistochemistry technique and amplification by biotinylated tyramide. Results: The mean age was 60.2 + 13.8 (varying from 21 to 90 years-old) where 77 (55.8%) were men and 61 women (44.2%). Tubular adenomas were present in 81.4%, tubulous-villous in 15.9%, serrated in 1.8%, and villous in 0.9%. The majority of the adenomas were located in the retossigmoid region (63.5%), followed by ascendent in 14.2%, descendent in 8.2%, cecum in 7.5% and transverse in 6.7%. High-grade dysplasia was detected in 46 (40.4%) and low-grade dysplasia in 68 (59.6%) of the adenomas. Loss of hMLH1 and hMLH2 immunoexpression was observed in 20% and 15.5% of the adenomas, respectively. Cox-2 was positive in 9% of the adenomas, and in 40% of the adenocarcinomas. Moreover, Cox-2 immunoexpression was associated to the multiplicity of adenomas in the same patient, p=0.001. There was no association between marker immunoexpression and gender, age, location, size, histology or grade of dysplasia. Conclusions: 1. Loss of hMLH1 and hMLH2 immunoexpression in adenomas is relatively frequent in patients without colorectal cancer familial history; 2. Cox-2 is overexpressed in colorectal adenomatous polyps and adenocarcinomas, and its positivity in adenomas may indicate higher risk for multiple lesions.

A formação de novos vasos sanguíneos é fundamental para o crescimento tumoral e a disseminação metastática, sendo o fator de crescimento endotelial vascular (VEGF) uma das chaves reguladoras deste processo. O objetivo do presente estudo foi avaliar a expressão imunohistoquímica de VEGF nos hemangiossarcomas e hemangiomas esplênicos, e rever a prevalência das demais afecções esplênicas através da análise retrospectiva do diagnóstico histopatológico de cães submetidos à esplenectomia. Os resultados foram confrontados com os exames laboratoriais, as manifestações clínicas, a presença de arritmias cardíacas e de hemoperitôneo. Participaram do estudo retrospectivo 109 cães atendidos no Serviço de Cirurgia de Pequenos Animais do Hospital Veterinário da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade de São Paulo, entre os anos de 2002 e 2009. A média de idade foi de 10 anos (± 3), não foi observado predileção sexual. Cães sem raça definida foram os mais acometidos, com peso médio de 22 kg (± 13). Cinqüenta e dois por cento (57/109) dos animais foram esplenectomizados devido a afecções não neoplásicas, enquanto que 48% (52/109), por neoplasias esplênicas. Dentre estes, o diagnóstico mais freqüente foi o hemangiossarcoma, acometendo 28 (54%) animais. Os sintomas mais freqüentes foram disorexia, apatia e emese. Cães com neoplasias malignas apresentaram níveis de hematócrito e hemácias significativamente menores que os acometidos por massas benignas. Do mesmo modo, a presença de hemoperitôneo, secundário à ruptura esplênica, correlacionou-se significativamente com a presença de neoplasia maligna. Arritmias cardíacas não foram fatores preditivos para a diferenciação da esplenomegalia. A avaliação imunohistoquímica da expressão tecidual de VEGF foi realizada em 23 hemangiossarcomas e 7 hemangiomas, revelando-se significativamente maior nas neoplasias malignas. Tal resultado sugere que a expressão deste fator pode estar relacionada à proliferação maligna observada nos hemangiossarcomas. / New blood vessel formation is a fundamental event in the process of tumor growth and metastatic dissemination, being the vascular endothelial growth factor (VEGF) one of the key regulators of this process. The aim of this study was evaluate the VEGF immunohistochemical expression in splenic hemangiosarcomas and hemangiomas, and review the prevalence of canine splenic disorders through retrospective analysis of histological diagnosis after splenectomy. The results were confronted with laboratory findings, clinical signs and presence of cardiac arrhythmia and hemoperitoneum. A hundred nine dogs were included in the retrospective study at Veterinary Hospital of School of Veterinary Medicine, University of Sao Paulo, between 2002 and 2009. The average age was 10 year ± 3, without sexual predilection. Mix breeds were the most frequent, and average weigh was 22kg ± 13. Overall, 52% (57/109) of dogs were splenectomized for nonneoplastic disease, although 48% (52/109) were splenectomized for neoplasia. Among these dogs the most common diagnosis was hemangiossarcoma (28 dogs, 54%). Frequently clinical signs included anorexia, lethargy and vomiting. Dogs with malignant neoplasia had significantly lower red blood cells counts and packed cell volume compared with values for dogs with benign masses. Similarly, hemoperitoneum secondary to splenic rupture had a significant correlation with malignant tumor. Cardiac arrhythmia was not useful in differentiating dogs with splenomegaly. Expression of vascular endothelial growth factor was made by immunohistochemical analyses in 23 hemangiosarcomas and 7 hemangiomas being significantly higher in malignant tumor. These data suggest that VEGF expression may contribute to malignant proliferation of hemangiossarcoma.

O estabelecimento e perfeito funcionamento da placenta são fatores dependentes da intensa vascularização ocorrida no órgão. Os processos de vasculogênese e angiogênese placentária são modulados por diversos fatores, incluindo o VEGF (fator de crescimento vascular endotelial) e bFGF (fator de crescimento fibroblástico básico). Apesar da importância do VEGF e bFGF durante a vascularização estar estabelecida, vários estudos indicam a participação desses fatores de crescimento como moduladores locais em outras funções fisiológicas, como por exemplo o controle da produção hormonal em tecidos esteroidogênicos. Animais clonados podem apresentar alterações na expressão de determinados genes durante seu desenvolvimento, o que pode alterar a função placentária. Os objetivos deste estudo são determinar a localização tecidual do VEGF, bFGF e seus receptores na placenta bovina e avaliar a influência destes fatores de crescimento sobre a produção de progesterona placentária em bovinos não clonados e clonados. Placentomas de 90, 150 e 210 dias de gestação foram obtidos em abatedouro e placentônios de gestações aos 270 dias provenientes de bovinos clonados e não clonados foram coletados após cesarianas. As amostras foram fixadas em formol tamponado 4%, desidratadas e incluídas em parafina. Cortes foram submetidos a imuno-histoquímica para posterior localização das proteínas do VEGF, bFGF e seus receptores. Sob condições assépticas, as células foram mecanicamente dispersas e cultivadas em placas de 96 cavidades. Os fatores foram adicionados em concentrações de 10 e 50 &#951;g/ml de bFGF e VEGF, respectivamente. Amostras de meio de cultura e as células dos grupos controle, bFGF, VEGF e VEGF mais bFGF foram coletadas 24, 48 e 96 horas após a adição dos fatores. A progesterona foi dosada por radioimunoensaio e o conteúdo protéico pelo método de Lowry. Os dados foram analisados utilizando-se o programa estatístico SAS (Statistical Analysis System), as diferenças estatísticas encontradas foram comparadas pelo teste de variação múltipla de Duncan. O VEGF, bFGF e seus receptores foram localizados em células do epitélio e estroma maternos e fetais e células endoteliais vasculares em bovinos não clonados e clonados. As células placentárias apresentaram diferentes capacidades de síntese de progesterona ao longo da gestação. Aos 90 e 210 dias de gestação o VEGF estimulou a produção de progesterona, enquanto aos 270 dias de gestação o fator inibiu a produção deste hormônio. O bFGF estimulou a produção de progesterona pelas células placentárias aos 90 dias de gestação. A adição dos dois fatores de crescimento conjuntamente determinou um estímulo na produção de progesterona aos 210 dias de gestação. A produção de progesterona pelas células de bovinos clonados foi semelhante àquela observada em células de bovinos não clonados na mesma idade gestacional e os fatores de crescimento não influenciaram essa produção. Conclui-se que o VEGF e bFGF, atuando localmente no tecido placentário, funcionam como moduladores do processo de esteroidogênese, influenciando de maneira tempo-dependente a produção de progesterona deste órgão. / Placental establishment and function are dependent on intense vascularization. Placental vasculogenesis and angiogenesis are modulated by several factors, including VEGF (vascular endothelial growth factor) and bFGF (basic fibroblast growth factor). Although the role of VEGF and bFGF during vascularization is already well established, some studies have indicated the participation of these growth factors as local modulators in other physiological functions, such as control of hormonal production in steroidogenic tissues. Cloned animals may exhibit alterations in gene expression during development modifying placental function. The aims of this study are to determine the tissue localization of VEGF, bFGF and their receptors in the bovine placenta and to evaluate the influence of bFGF and VEGF on placental progesterone production in non-cloned and cloned bovines. Placentomes from days 90, 150 and 210 of pregnancy were obtained at local slaughterhouse and placentomes from cloned and non-cloned gestations at 270 days were obtained after cesarean sections. Samples were fixed in 4% buffered formol solution, dehydrated and included in paraffin. Sections were subimitted to immunohistochemistry for subsequent localization of VEGF, bFGF and their receptors proteins. Under aseptic conditions, cells were mechanically dispersed and then cultivated in a 96-well plate. Growth factors were added at concentrations of 10 and 50 &#951;g/ml for bFGF and VEGF, respectively. Samples of culture medium and cells from control, bFGF, VEGF and bFGF plus VEGF groups were collected 24, 48 and 96 hours after growth factor addition. Progesterone concentrations were assessed by radioimmunoassay and protein content was measured by Lowry?s method. Data were analyzed by SAS (Statistical Analysis System) program, significant differences were compared by Duncan?s range multiple test. VEGF, bFGF and their receptors were localized in maternal and fetal epithelial and stromal cells and vascular endothelial cells during pregnancy in non-cloned animals and in cloned bovine placenta at 270 days of pregnancy. Bovine placental cells were able to produce different amounts of progesterone during pregnancy. Growth factors were able to influence progesterone production in placental cells only after 24 hours in culture. At 90 and 210 days of pregnancy VEGF stimulated progesterone production, while at 270 days of pregnancy the growth factor inhibited production of this hormone. bFGF stimulated progesterone production in placental cells from 90 days of pregnancy. Both growth factors together determined an increase in progesterone production in placental cells from 210 days of pregnancy. Progesterone production in placental cells from cloned cattle is similar when compared with non-cloned placental cells at the same gestational age and growth factors did not influence progesterone production in these cells. VEGF and bFGF, acting locally in the placental tissue, are modulators of the steroidogenic process, influencing in a time-dependent manner the progesterone production in this organ.