Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciencias Fisicas e Matematicas / Made available in DSpace on 2012-10-17T00:34:51Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2016-01-08T21:46:35Z : No. of bitstreams: 1 108347.pdf: 3010279 bytes, checksum: 91da022de11cfa5e1d38e1cbf288ef18 (MD5) / Neste trabalho foi investigada a microencapsulação da urease na forma de extrato bruto (EE), através do método de coacervação salina, utilizando-se o sistema polimérico quitosana-PVA. A quitosana foi obtida a partir da quitina, que por sua vez foi extraída da casca do camarão e o EE foi extraído das sementes da Cucurbita pepo (abóbora). Os parâmetros do processo de microencapsulação tais como composição e pH da blenda, temperatura e tempo de coagulação, foram ajustados afim de maximizar a atividade enzimática. Através da comparação do perfil de pH, dependência de temperatura e constante de Michaelis-Menten, demonstrou-se que o uso do EE é uma alternativa em relação à utilização da urease padrão (EP). A microscopia eletrônica de varredura comprovou a encapsulação da urease. As determinações das atividades enzimáticas mostraram que a alta concentração salina, utilizada no processo de microencapsulação, não afetou a atividade da enzima. Os ensaios estatísticos mostraram que a enzima se distribui homogeneamente nas cápsulas durante o processo de microencapsulação e que há reprodutibilidade na determinação da atividade enzimática do EE. A urease microencapsulada mostrou uma reusabilidade de 23 vezes e a estabilidade do EE no processo de estocagem foi maior quando comparada com a EP. Ensaios in vitro mostraram que a determinação do teor de uréia em amostras de sangue e urina, usando-se a urease microencapsulada, são coerentes com os resultados obtidos a partir das mesmas amostras, através do método espectrofotométrico, realizado no Laboratório de Análises Clínicas do Hospital Universitário da UFSC.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciencias Fisicas e Matematicas / Made available in DSpace on 2012-10-17T02:43:54Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2016-01-08T22:41:35Z : No. of bitstreams: 1 108761.pdf: 3181670 bytes, checksum: 91220cfa0593f70f84fd08694bcbf168 (MD5) / A hidrólise dos ácidos N,N-dialquilnaftalâmicos, Ia-c, é estudada como modelo não mimético de catálise enzimática determinando-se a constante de velocidade em função do pH a temperatura de 35°C. Na região entre pH= 2,00 e pH= 3,50 a decomposição de Ia-c ocorre intramolecularmente, por meio do ataque do grupamento carboxílico não dissociado sobre o carbono carbonílico da amida, com subseqüente formação do anidrido 1,8-naftálico. Estudos cinéticos do efeito isotópico sugerem a participação da água durante a reação de hidrólise e os parâmetros de ativação, determinados a pH= 3,50, excluem a entropia de reação como fator determinante da alta reatividade do sistema. Cálculos mecânicos quânticos para a minimização de todas as estruturas das espécies envolvidas na coordenada de reação foram realizados com o método AM1, implementado no programa Mopac 6.0. Os resultados, analisados em termos da reação de hidrólise com transferência de próton para a quebra da ligação C-N, indicam que a reação de hidrólise, na qual a transferência de próton ocorre intramolecularmente, é desfavorecida por 22,00 Kcal.mol-1, quando comparada ao mesmo processo onde a transferência é auxiliada por uma molécula de água. As relações geométricas obtidas mostram que a tensão estérica e os fatores orientacionais não são responsáveis pela alta velocidade das reações de ciclização. Uma relação espaço-tempo apropriada justificam a reatividade do modelo estudado; porém, a pré-associação com a molécula de água, e sua participação na transferência de próton, parece ser fundamental para que reações intramoleculares ocorram a velocidades comparáveis as reações enzimáticas.

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:30Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-21Bitstream added on 2015-04-09T12:47:18Z : No. of bitstreams: 1 000811719.pdf: 610346 bytes, checksum: 43ef4062346b4ecd81a0a778e882bcf9 (MD5) / O capitulo 1 deste trabalho descreve o Pré-tratamento do bagaço de cana-de-açúcar e avalia a sua sacarificação enzimática a partir de diferentes extratos enzimáticos dos fungos Penicillium viridicatum RFC3, Trichodermareesei QM9414, Thermoascus aurantiacus CBMAI756 e Thermomyces lanuginosus, obtidos a partir da fermentação estado sólido. Dentre essas fermentações, o melhor resultado individual de eficiência de hidrólise foi obtido com o extrato enzimático do fungo T.aurantiacus, o qual foi então utilizado na sacarificação dos bagaços pré-tratados com espécies reativas de oxigênio. A melhor taxa de sacarificação foi obtida no bagaço pré-tratado com NaClO, que resultou em 19,8% de rendimento, contra 12,2% no bagaço in natura. O capitulo 2 do trabalho descreve a importância do sinergismo e da inibição enzimática, na forma da β-glicosidase, na sacarificação do bagaço. Foi verificado sinergismo entre os extratos enzimáticos dos fungos P.viridicatum e T.reesei e a melhor combinação dos dois extratos foi na proporção 1:1, resultando na liberação de 0,73 mg/mL de glicose. As atividades de β-glicosidases presentes nos extratos enzimáticos foram avaliadas quanto aos efeitos de inibição por glicose. Os parâmetros cinéticos Km e Vmax foram obtidos com a enzima do T. aurantiacus sem inibidor apresentou Vmáx 4,60 μmol/min e Km 0,31 mM e com glicose Vmáx 2,3 μmol/min e Km 0,37 mM. Sem glicose a enzima do P. viridicatum apresentou Vmáx 166,7 μmol/min e Km 0,2mM e com glicose Vmáx 13,8 μmol/min e Km 1,2 mM. A β- glicosidase do T.aurantiacus sofreu inibição não-competitiva, enquanto a enzima do P.viridicatum sofreu inibição mista. Também foram avaliados os efeitos da frutose e da glicose isomerase como supressora do efeito inibidor da glicose. A presença da frutose proporcionou um efeito positivo nas atividades de β-glicosidases desses fungos. A sacarificação do bagaço de cana com a combinação ... / The first chapter of this work describes the pretreatment of sugarcane bagasse cane and evaluates its enzymatic saccharification from different enzymatic extracts of Penicillium viridicatum RFC3, Trichoderma reesei QM9414 , Thermoascus aurantiacus and Thermomyces lanuginosus CBMAI756 obtained from the solid state fermentation. Among these fermentations, the best individual result of hydrolysis efficiency was obtained with the enzymatic extract of the fungus T.aurantiacus, which was then used in the saccharification of bagasse pretreated with reactive oxygen species . The best rate of saccharification was achieved on bagasse pretreated with NaClO resultins in 19.8 % of yield, versus 12.2% in the bagasse in natura. The chapter 2 of this work describes the importance of synergism and inhibition of the enzyme in the form of β - glucosidase in the saccharification of bagasse. Synergism between the enzymatic extracts of fungi P.viridicatum and T.reesei the best combination of the two extracts was observed for the ratio 1:1, resulting in the release of 0.73 mg / mL glucose . The activities of β - glucosidase enzyme present in the extracts were analyzed for the effects of inhibition by glucose. The kinetic parameters Km and Vmax of the β-glucosidase enzyme presented, in case of T. aurantiacus Vmax of 4.60 μmol/min and Km 0.31 mM and with glucose Vmax 2.3 μmol/min and Km 0.37 mM. For the enzyme from P.viridicatum values were Vmax 166.7 μmol/min and Km 0.2 mM and with glucose Vmax 13.8 μmol/min and Km 1.2 mM. The β-glucosidase T.aurantiacus suffered from non-competitive inhibition, while P.viridicatum suffered mixed enzyme inhibition. We also evaluated the effects of fructose and glucose isomerase as suppressing the inhibitory effect of glucose. The presence of fructose resulted in a positive effect on the β - glucosidase activity of these fungi. The saccharification of sugarcane bagasse with the combination of glucose isomerase enzyme ...

Made available in DSpace on 2015-08-20T17:09:52Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-26. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-20T17:26:16Z : No. of bitstreams: 1 000841508_20160426.pdf: 1577360 bytes, checksum: f910ad7dfc28e389bbc2cb39d7f2de0f (MD5) Bitstreams deleted on 2016-05-04T13:08:26Z: 000841508_20160426.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-05-04T13:09:30Z : No. of bitstreams: 1 000841508.pdf: 3356205 bytes, checksum: 3b5f5a833cae5f299c4dce5b2edae0de (MD5) / YacG é uma pequena proteína membro da família dos zinc-fingers, descoberta em E. coli. Sua função biológica está ligada a inibição da atividade de DNA girase e ao metabolismo do stress em procariotos. YacG atua na inibição da atividade de DNA girase por um mecanismo bipartido, a região do domínio zinc-finger atua impedindo a ligação do DNA à subunidade B e a região c-terminal liga-se a subunidade A. Embora a literatura cite YacG como sendo um inibidor de DNA girase, nada foi observado a respeito da atividade de inibição de YacG de E.coli e de outras linhagens de micro-organismos frente a outras DNA topoisomerases e não foi realizado nenhum trabalho envolvendo fragmentos peptídicos desta proteína, e tampouco ensaios de inibição do crescimento celular por estes. Sendo assim YacG de Klebsiella pneumoniae foi obtida por expressão heteróloga e uma série de peptídeos derivados desta foram sintetizados pelo método de fase sólida. Os peptídeo sintéticos foram projetados de forma a manter a região zinc-finger nativa (YacGAG1), substituídos os resíduos de cisteína por serina (YacGAG4), alanina (YacGAG5), histidina (YacGAG6 e YacGAG8) e também sintetizada a sua região c-terminal (YacGAG7). Os ensaios de inibição da atividade de DNA girase pelos peptídeos sintéticos e proteína, mostraram que YacG, YacGAG4, YacGAG5 e YacGAG7 conseguem inibir a atividade desta enzima, ao contrario do fragmento nativo YacGAG1. Por outro lado YacGAG1 conseguiu inibir a atividade de Topoisomerase IIα humana juntamente com os demais peptídeos YacGAG4, YacGAG5 e YacGAG7 e proteína YacG. Os ensaios aqui apresentados corroboram com os dados apresentados na literatura onde a região c-terminal por si só é capaz de inibir a atividade de DNA girase. Os ensaios de anisotropia de fluorescência demonstraram que a interação dos peptídicos sintéticos com DNA girase se dá pela interação destes com... / YacG belongs to zinc-finger's protein family discovered in E. coli. Its biological function is connected to the catalytic inhibition of DNA gyrase and stress metabolism in prokaryotes. This protein inhibits DNA gyrase (gyrase) through a bipartite mechanism where the zinc-finger domain prevents the DNA ligation to the B subunit (GyrB) and the C-terminal bindings to the A subunit (GyrA). Although it is classified as a gyrase inhibitor neither the inhibition activity of YacG from E. coli and other microorganisms against other DNA topoisomerases nor the biological activity of fragments in cellular assays has been evaluated until present. In this study, YacG from Klebsiella pneumoniae was obtained by heterologous expression and derivative peptides from this protein were synthesized by the solid-phase method. The synthetic peptides were designed to keep the native region of zinc-finger (YacGAG1), to substitute cysteines to serines (YacGAG4), to alanine (YacGAG5), to histidine (YacGAG6 and YacGAG8) and also having only the C-terminal region (YacGAG7). The inhibition assays of gyrase by the peptides and the native protein revealed that YacG, YacGAG4, YacGAG4 e YacGAG7 inhibited this enzyme and the human topoisomerase IIα (htopoIIα). However, the same was not observed for the native fragment YacGAG1, which inhibited only the htopoIIα. The results are in agreement with literature showing that solely the C-terminal region is able to inhibit the gyrase. The assays of fluorescence anisotropy indicated that these synthetic peptides interact with GyrA. Besides inhibiting the gyrase and the htopoIIα, these peptides also revealed bacteriostatic activity against gram-negative and gram-positive bacteria. A computational study by applying a molecular dynamics protocol highlighted the importance of residues I47, R46 and W40 from YacG in the process of molecular recognition and interaction with GyrB. The results...

Orientador: Anita Jocelyne Marsaioli / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Química / Made available in DSpace on 2018-08-25T07:45:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Martins_LucasGelain_D.pdf: 5948717 bytes, checksum: d64f37183bfefec1cedc88b263d32340 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Nesta tese consiste no estudo de interações supramoleculares utilizando diferentes metodologias de Ressonância Magnética Nuclear de hidrogênio (RMN de 1H), tais como ROESY 1D, RMN-DOSY e RMN-STD. Os sistemas supramoleculares foram abordados em dois casos de estudo diferentes. O Capítulo I tem como objeto de estudo interações do fármaco Dapsona com diferentes carreadores de fármacos (ß-CD, SBE-ß-CD e lipossoma de EPC), com a finalidade de encontrar formulações nas quais a Dapsona seja mais solúvel. Os complexos binários e ternário formados foram determinadas por medidas de difusão molecular. Foram observadas as formações dos complexos Dap/ß-CD, Da-/SBE-ß-CD, Dap/EPC e o ternário Dap/ß-CD/EPC, os quais contribuem para o aumento de solubilidade do fármaco. O objeto de estudo apresentado no Capítulo II é a inibição da enzima acetilcolinesterase por dois alcaloides, a Fisostigmina e a Crinina. Para determinação das constantes de dissociação aparentes foram utilizados os crescimentos iniciais das curvas de saturação obtids por RMN-STD para construção das Isotermas de Langmuir. De acordo com os valores de constantes obtidos foi possível concluir que a AchE tem mais afinidade com a Fisostigmina do que com a Crinina / Abstract: This thesis consists of the supramolecular interactions study applying different Nuclear Magnetic Resonance methodologies (1H NMR) such as 1D ROESY, DOSY-NMR and STD-NMR. The supramolecular systems were addressed in two different case studies. In chapter I Dapsone solubility was the case study. To solve the solubility problem the interactions between Dapsone and various drug carriers (ß-CD , SBE-ß-CD and EPC liposome) were characterized in terms of the binary and ternary complexes structure using NMR method, such as 1D ROESY and STD-NMR and apparent association constants were determined by measuring molecular diffusion using DOSY-NMR. Dap/ß-CD, Dap/SBE-ß-CD, Dap/EPC and Dap/ß-CD/EPC complexes were observed and Dapsone water solubility was increased. The case study in Chapter II is the inhibition of acetylcholinesterase by two alkaloids, Physostigmine and Crinina. The apparent dissociation constants were determined using the initial growth saturation curves obtained by STD-NMRto construct the Langmuir isotherms. The constants showed that the AChE has more affinity for the Physostigmine than Crinine / Doutorado / Quimica Organica / Doutor em Quimica

Orientadores : Everson Alves Miranda, Zivko L. Nikolov / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-01T15:51:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Azzoni_AdrianoRodrigues_D.pdf: 7397163 bytes, checksum: 205f126ad771bb30d977324c656157fe (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: A expressão em plantas transgênicas é potencialmente uma das formas mais econômicas de produção em larga escala de peptídeos e proteínas de emprego farmacêutico. Dentre as vantagens estão a capacidade de estocagem da biomolécula por longo período em sementes, o baixo custo de produção e escalonamento (basta aumentar a área plantada) e o pequeno risco de contaminação por agentes patogênicos aos humanos. Contudo, existem poucos trabalhos visando a avaliar o potencial das plantas transgênicas do ponto de vista da recuperação e purificação de biomoléculas (RPB) em larga escala. Neste trabalho foi estudada a recuperação e purificação de aprotinina recombinante, um inibidor de proteases utilizado como fármaco, produzida em sementes de milho transgênico. Mais do que desenvolver metodologias de purificação de uma proteína específica, este trabalho objetivou contribuir com novos conhecimentos sobre a utilização da planta de milho como biorreator. Condições de extração visando a maximização da eficiência de extração da aprotinina recombinante e minimização da extração de impurezas foram estudas. Destes estudos, a condição de extração a pH 3,0 e força iônica de 200 mM foi a que se mostrou mais adequada. A aprotinina recombinante, juntamente com um inibidor de tripsina naturalmente encontrado em sementes de milho (inibidor de tripsina do milho - ITM) foi capturada do extrato aquoso da semente através do uso de cromatografia em resina de agarose com tripsina imobilizada. Duas diferentes rotas cromatográficas foram empregadas para a separação entre os inibidores e purificação final da aprotinina: cromatografia em resina agarose-IDA-Cu2+ e cromatografia em resina SP Sepharose. A confirmação da purificação da aprotinina recombinante foi realizada através de seqüenciamento N-terminal, SDS-PAGE e HPLC, sendo que este último método de análise indicou que purezas tão elevadas quanto 97% foram alcançadas. Uma vez que o ITM também foi purificado, o processo aqui estudado tem como vantagem a possibilidade de sua co-produção. Finalmente, os resultados deste trabalho vem corroborar com pesquisas anteriores que indicam o potencial do uso de plantas como biorreatores / Abstract: Expression in transgenic plants is potentially one of the most economical systems for large-scale production of valuable peptide and protein products. Advantages of the use of plants as bioreactors include the low cost of growing a large amount of biomass, easy scale-up (increase of plant acreage), natural storage organs (seeds and tubers), and the reduced risk on propagating human or animal pathogens. However, the downstream processing of recombinant proteins produced in plants has not been extensively studied. In this work, we studied the extraction and purification of recombinant aprotinin, a protease inhibitor used as a therapeutic compound, produced in transgenic com seed. More than just studing the recovery and purification of a recombinant protein, the aim of this work was to add new information about the use of transgenic com as bioreactor. Conditions for extraction from transgenic com meal that maximize aprotinin concentration and its fraction of the total soluble protein in the extract were determined as pH 3.0 and 200 mM NaCI. Aprotinin in this extract, together with a native com trypsin inhibitor (CTI) was captured using a trypsin-agarose column. These two inhibitors were separated by using two different approaches: immobilized metal ion affinity chromatography IMAC (agarose-IDA-Cu2+ resin) and cation-exchange chromatography (SP Sepharose resin). The high purity of the recombinant aprotinin was verified by SDSPAGE and N-terminal sequencing. Reverse phase HPLC analysis of the recombinant aprotinin purified by IMAC suggested a purity as greater as 97%. Since CTI was also purified, the recovery and purification process studied has the advantage of possible CTI coproduction. Finally, the work presented here introduces additional information on the recovery and purification of recombinant proteins produced in plants and corroborates with past research on the potential use of plants as bioreactors / Doutorado / Desenvolvimento de Processos Biotecnologicos / Doutor em Engenharia Química

Orientadores: Nelson Horacio Pezoa Garcia, Denise Calil Pereira Jardim / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-03T19:14:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Efraim_Priscilla_M.pdf: 836235 bytes, checksum: 197b6ebcb7737d4d06c3ba707d63337d (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: As sementes de cacau (Theobroma cacao L.) da variedade Forastero são extremamente ricas em compostos fenólicos, que representam em média 15 a 20% de seu peso seco e desengordurado, sendo que 60% pertencem à classe dos flavonóides, compostos apontados atualmente como responsáveis pela prevenção de doenças coronárias, diminuição do colesterol sérico, auxiliadores do sistema imunológico, entre outros. Durante a etapa de fermentação, são perdidos, em média, 70% dos flavonóides devido a importantes reações bioquímicas que ocorrem principalmente pela diminuição do pH, aumento de temperatura (45-50°C) e atuação de certas enzimas presentes no fruto ou produzidas pelos microrganismos que participam desta etapa. Tais reações são, em parte, responsáveis pela redução do amargor e da adstringência melhorando assim o desenvolvimento do sabor do chocolate. Desta forma, o presente trabalho visou modificar a etapa de fermentação de sementes de cacau para a produção de chocolate rico em flavonóides sem prejudicar seu sabor. Para isso, procurou-se inibir as enzimas que são possivelmente as principais responsáveis pela perda dos flavonóides através da adição de inibidores químicos (bissulfito de sódio e sulfato cúprico) na etapa de fermentação. Foram realizados sete experimentos distintos: ensaios A e G (fermentações convencionais com duração de 7 e 3 dias respectivamente); ensaios B, C e F (fermentações por 7 dias, modificadas com adição de 5mg, 10mg e 5mg de bissulfito de sódio/100g de massa de sementes com polpa após 48hs, 48hs e 120hs respectivamente e ensaios D e E (fermentações por 7 dias modificadas com adição de 5mg e 10mg de sulfato de cobre/100g de massa de sementes com polpa após 48 horas do início respectivamente). Os resultados indicaram que, de uma forma geral, todos os tratamentos propostos mantiveram maior teor de compostos fenólicos em relação à fermentação convencional (ensaio A). Quanto aos compostos fenólicos totais, o ensaio D apresentou a maior retenção (62,70%) desde o início da fermentação ao término da secagem, enquanto que no ensaio A foram retidos 36,38% destes compostos. Em relação aos flavan-3-óis e procianidinas, observou-se maior retenção, para monômeros, nos ensaios D (34,27%) e G (33,72%); para dímeros, nos ensaios D (21,83%) e G (21,78%); para trímeros, nos ensaios C (22,85%), D (22,37%) e F (22,38); para quatrâmeros, nos ensaios C (25,84%), D (24,77%) e F (27,21) e para pentâmeros, nos ensaios C (35,24%), D (34,45%) e F (34,16). Observou-se que a maior perda dos compostos fenólicos estudados ocorreu entre o término da fermentação e a secagem. Verificou-se que o residual de Cobre remanescente da adição feita durante a fermentação (ensaios D e E) nos liquors e nos chocolates produzidos foi de 0,23 e 0,36mg de cobre/100g de liquor (ensaios D e E respectivamente) e 0,025 e 0,036mg de cobre/100g de chocolate (ensaios D e E respectivamente), todos valores consideravelmente inferiores ao Limite Máximo Tolerado (LMT) definido pela Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA), correspondente a 3,0mg de cobre/100g de amostra. Os chocolates produzidos a partir dos ensaios B, C, D e E mostraram aceitabilidade sensorial igual ou melhor ao convencional (A), enquanto que os produzidos a partir dos ensaios F e G apresentaram aceitabilidade mediana e incertezas com relação a intenção de compra / Abstract: Cocoa seeds (Theobroma cacao L.) from the Forastero variety are very rich in phenolic compounds which represent 15-20% of the defatted dry weight. The principal compounds are (+)-catechin, (-)-epicatechin and 60% of procyanidins that belong to the flavonoid class. These compounds are currently been considered responsible for coronary heart disease prevention, lowering the serum cholesterol and helping the immunological system. During the fermentation, 70% of the total phenolic compounds are lost in important biochemical reactions accelerated by the reduction in pH, temperature increase (45-50°C) and action of some enzymes, present in the fruit or produced by the microorganism growing at this stage. These reactions contribute to a reduction in bitterness and astringency, improving the flavor of the chocolate. The objective of this work was to modify the fermentation stage of cocoa seeds to produce flavonoid-rich chocolates without prejudicing its flavor. This was done by the inactivation of enzymes probably responsible for flavonoid degradation, through the addition of chemical inhibitors (sodium bissulfite and cupric sulphate) during the fermentation stage. Seven experiments were carried out: Experiments A and G (conventional fermentations during 7 and 3 days respectively); experiments B, C and F (modified fermentations during 7 days, with the addition of 5mg, 10mg and 5mg of sodium bissulfite/100g of cocoa seeds with pulp after 48hs, 48hs and 120hs since the beginning of fermentation respectively) and experiments D and E (modified fermentations during 7 days, with the addiction of 5mg and 10mg of cupric sulphate/100g of cocoa seeds with the pulp after 48hs and 120hs since the beginning of fermentation respectively). The results showed that all the treatments proposed maintained higher quantities of phenolic compounds as compared with the conventional experiment (A). Considering the total phenolics, experiment D showed the highest retention (62,70%) from the beginning of the fermentation up to the end of the drying stage, while in the experiment A, the retention was 36,38%. Considering the flavan-3-ols and procyanidins, a higher retention of monomers was observed in experiments D (34,27%) and G (33,72%); of dimers in experments D (21,83%) and G (21,78%); of trimers in experiments C (22,85%), D (22,37%) and F (22,38); of tetramers in experiments C (25,84%), D (24,77%) and F (27,21) and of pentamers in experiments C (35,24%), D (34,45%) and F (34,16). It was observed that the greatest loss of the phenolic compounds studied occurred between the end of fermentation and the beginning of the drying stage. It was shown that the copper residue in the liquor and chocolate remaining from the addition during fermentation (experiments D and E) was 0,23 and 0,36mg of copper/100g of liquor (experiments D and E respectively) and 0,025 e 0,036mg of copper /100g of chocolate (experiments D and E respectively). These values are below the Maximum Tolerated Limit (MTL) defined by ANVISA for this metal (3,0mg/100g). The chocolates B, C, D and E showed equal or better sensory acceptance as compared with conventional (A), and F and G chocolates which showed average sensory acceptance and uncertainty with respect to buying intention / Mestrado / Mestre em Tecnologia de Alimentos

O sistema microssomal hepático citocromo P- 450, compreendendo famílias e subfamílias de isoenzimas, atua no metabolismo de um grande número de substratos endógenos e exógenos e desempenha um papel central na biotransformação dos fármacos e na ativação metabólica de compostos carcinogênicos. Muitos fármacos têm a capacidade de aumentar a atividade enzimática do sistema citocromo P - 450. Outros fármacos diminuem a atividade enzimática do sistema. O primeiro fenômeno é denominado de indução enzimática e o segundo é definido como inibição enzimática. A interação medicamentosa envolvendo fármacos anestésicos tem, na alteração do tempo de sono, a principal e mais visível alteração in vivo. No presente trabalho foi estudada a influência da administração prévia de fenilbutazona e de cloranfenicol sobre a anestesia promovida pela associação de xilazina e cetamina em ratos, cães e porcos. A fenilbutazona é um antiinflamatório com propriedades indutoras semelhantes às do fenobarbital, embora em menor intensidade. O cloranfenicol é um antibiótico com reconhecida capacidade inibidora, prolongando a ação de drogas como barbitúricos, fenitoína, varfarina e digoxina. Tanto a fenilbutazona quanto o cloranfenicol são de uso freqüente no exercício da clínica em medicina veterinária. Xilazina é um agonista adrenérgico alfa-2 com propriedades analgésicas, sedativas e miorrelaxantes. A cetamina é um composto de ação cataléptica, analgésica e anestésica que produz uma anestesia denominada de dissociativa. A xilazina e a cetamina são muito utilizadas em associação para promover anestesia em diferentes espécies animais. Nesse estudo foram utilizados 54 ratos Wistar, 18 cães sem raça definida e 18 porcos cruzamento Landrace - Duroc, todos de sexo masculino. Os ratos foram separados em três grupos denominados controle (CTL), fenilbutazona (FBZ) e cloranfenicol (CLF), com 18 animais em cada grupo. Os cães e porcos foram divididos em três grupos, em cada espécie, com seis animais em cada grupo, tendo sido também denominados CTL, FBZ e CLF. No primeiro dia do experimento, os animais dos grupos CTL, FBZ e CLF foram anestesiados, recebendo xilazina, na dose de 20 mg . kg-1 para os ratos e 1 mg . kg-1 para os cães e porcos, e cetamina na dose de 50 mg . kg-1 para os ratos e 1 O mg . kg- 1 para os cães e porcos. Os fármacos foram administrados simultaneamente, na mesma seringa, por via intraperitonial (i.p.) nos ratos e por via intravenosa (i.v.) nos cães e porcos. Foram avaliados e anotados os tempos até a perda do reflexo de endireitamento e até a sua recuperação nos ratos, cães e porcos. Nesta última espécie foi registrado o tempo de retomo à ambulação. A partir do sexto dia, os animais receberam doses diárias de solução fisiológica ou fenilbutazona ou cloranfenicol, durante cinco dias. A fenilbutazona foi administrada na dose de 125 mg . kg-1 para os ratos e na dose de 25 mg . kg-1 para os cães e porcos . O cloranfenicol foi administrado na dose de 100 mg . kg-1 para os ratos e na dose de 50 mg . kg-1 para os cães e porcos. A fenilbutazona e o cloranfenicol foram administrados por via i.p. nos ratos e porcos e por via i.v. nos cães. A solução fisiológica foi administrada nos animais do grupo CTL, por via i. v .• nos cães e por via i.p. nos ratos e porcos. No décimo dia foram repetidos os procedimentos e as avaliações do primeiro dia e sacrificados todos os animais. Os fígados dos ratos foram pesados e reunidos em pool por grupo. Os fígados dos cães e porcos foram processados individualmente. Foram preparados microssomas hepáticos (GUENGERICH, 1994) e determinadas a concentração de proteínas hepáticas (LOWRY et a/., 1951), a concentração de citocromo P - 450 (OMURA & SATO, 1964a) e a velocidade de redução de NADPH- citocromo C (PHILLPS & LANGDON, 1962). Os dados foram analisados estatisticamente por ANOVA , teste de Student - Newman- Keuls e teste de Pearson. O nível de significância foi de a= 0,05. Os resultados revelaram que a fenilbutazona diminuiu o tempo de anestesia nos ratos, sem alteração nas outras duas espécies, e o cloranfenicol aumentou o tempo de anestesia nos ratos e cães, mas não nos porcos. A média dos pesos dos fígados dos ratos do grupo FBZ foi mais elevada do que a dos demais grupos. A velocidade de redução de NADPH - citocromo C foi maior no grupo FBZ nas três espécies, indicando uma situação de indução enzimática. Paralelamente, houve uma menor velocidade de redução no grupo CLF nos porcos. Foi verificada correlação inversa entre o tempo de anestesia e a atividade enzimática em ratos e porcos. / The cytochrome P - 450 system, including families and sub-families of isoenzymes, catalyzes the metabolism of a great number of endogenous and exogenous substracts and plays a central role on drug detoxification and carcinogen metabolic activation. Many drugs have the ability of increasing cytochrome P - 450 system enzymatic activity. Others decrease enzymatic activity. The first phenomenon is called enzymatic induction and the second one is defined as enzymatic inhibition. Sleeping time is the most visible in vivo alteration in drug - interaction involving anesthetic agents. lnfluence of previous administration of phenylbutazone and chloramphenicol on xylazine - ketamine anesthesia in rats, dogs and pigs was studied. Beth phenylbutazone and chloramphenicol have been widely used in veterinary practice. Phenylbutazone is an antiinflammatory compound and a phenobarbital-like enzyme inductor but less potent than the barbiturate. Chloramphenicol is an antibiotic with inhibitory properties on the cytochrome P - 450 system increasing the effects of drugs like barbiturates, phenytoin, warfarin and digoxin. Xylazine hydrochloride is an a.2 - adrenergic agonist with analgesic, sedative and muscle relaxant properties. Ketamine hydrochloride is a compound with cataleptic, analgesic and anesthetic properties producing the so called dissociative anesthesia. Xylazine and ketamine have been used in combination to promete anesthesia in different animal species. Fifty four rats were divided into three groups designed as control (CTL), phenylbutazone (PBZ), and chloramphenicol (CHP), with 18 rats in each group. Dogs (n=18) and pigs (n=18) were divided into three groups on each species, called CTL group, PBZ group, and CHP group. Each group was formed by six animais. On the first day of the experiment the animais of CTL, PBZ and CHP groups were anesthetized with xylazine (20 mg. kg-1 i.p., rats; 1 mg . kg-1 i. v., dogs and pigs) and ketamine (50 mg . kg-1 i.p., rats; 10 mg . kg-1 i.v., dogs and pigs). Latency and duration of righting reflex loss were recorded in rats, dogs and pigs. Walking ability was recorded in pigs. From the day six to day 10 the animais of CTL, PBZ and CHP groups were injected with physiologic solution, phenylbutazone (125 mg . kg-1 i.p., rats; 25 mg . kg-1 i. v., dogs; 25 mg . kg-1 i.p., pigs) and chloramphenicol (100 mg . kg-1 i.p., rats; 50 mg . kg-1 i. v. , dogs; 50 mg . kg-1 i.p., pigs). Physiologic solution was administered i. v in dogs and i.p. in rats and pigs of CTL group. The procedures of the first day were repeated on the tenth day and the animais were killed. Rat livers were weighed and pooled by group and experiment. Dog and pig livers were processed individually. Hepatic microssomes were prepared according GUENGERICH (1994). Liver protein concentration was determined by the method described by LOWRY et a/. in 1951. Cytochrome P- 450 concentration was measured according OMURA & SATO ( 1964a). NADPH - cytochrome C reduction reactions were processed as described by PHILLIPS & LANGDON (1962). Data were analyzed by ANOVA, Student- Newman- Keuls and Pearson tests. The levei of significance was established in a.= 0.05. Sleeping time was decreased by phenylbutazone in rats and increased by chloramphenicol in rats and dogs. Livers were heavier in PBZ group than in the other groups. Reduction of NADPH - cytochrome C was increased in PBZ group in ali species, indicating enzymatic induction. The same parameter showed a decrease in CHP group in pigs. There were inverse correlation between sleeping time and enzymatic activity in rats and pigs.

O sistema microssomal hepático citocromo P- 450, compreendendo famílias e subfamílias de isoenzimas, atua no metabolismo de um grande número de substratos endógenos e exógenos e desempenha um papel central na biotransformação dos fármacos e na ativação metabólica de compostos carcinogênicos. Muitos fármacos têm a capacidade de aumentar a atividade enzimática do sistema citocromo P - 450. Outros fármacos diminuem a atividade enzimática do sistema. O primeiro fenômeno é denominado de indução enzimática e o segundo é definido como inibição enzimática. A interação medicamentosa envolvendo fármacos anestésicos tem, na alteração do tempo de sono, a principal e mais visível alteração in vivo. No presente trabalho foi estudada a influência da administração prévia de fenilbutazona e de cloranfenicol sobre a anestesia promovida pela associação de xilazina e cetamina em ratos, cães e porcos. A fenilbutazona é um antiinflamatório com propriedades indutoras semelhantes às do fenobarbital, embora em menor intensidade. O cloranfenicol é um antibiótico com reconhecida capacidade inibidora, prolongando a ação de drogas como barbitúricos, fenitoína, varfarina e digoxina. Tanto a fenilbutazona quanto o cloranfenicol são de uso freqüente no exercício da clínica em medicina veterinária. Xilazina é um agonista adrenérgico alfa-2 com propriedades analgésicas, sedativas e miorrelaxantes. A cetamina é um composto de ação cataléptica, analgésica e anestésica que produz uma anestesia denominada de dissociativa. A xilazina e a cetamina são muito utilizadas em associação para promover anestesia em diferentes espécies animais. Nesse estudo foram utilizados 54 ratos Wistar, 18 cães sem raça definida e 18 porcos cruzamento Landrace - Duroc, todos de sexo masculino. Os ratos foram separados em três grupos denominados controle (CTL), fenilbutazona (FBZ) e cloranfenicol (CLF), com 18 animais em cada grupo. Os cães e porcos foram divididos em três grupos, em cada espécie, com seis animais em cada grupo, tendo sido também denominados CTL, FBZ e CLF. No primeiro dia do experimento, os animais dos grupos CTL, FBZ e CLF foram anestesiados, recebendo xilazina, na dose de 20 mg . kg-1 para os ratos e 1 mg . kg-1 para os cães e porcos, e cetamina na dose de 50 mg . kg-1 para os ratos e 1 O mg . kg- 1 para os cães e porcos. Os fármacos foram administrados simultaneamente, na mesma seringa, por via intraperitonial (i.p.) nos ratos e por via intravenosa (i.v.) nos cães e porcos. Foram avaliados e anotados os tempos até a perda do reflexo de endireitamento e até a sua recuperação nos ratos, cães e porcos. Nesta última espécie foi registrado o tempo de retomo à ambulação. A partir do sexto dia, os animais receberam doses diárias de solução fisiológica ou fenilbutazona ou cloranfenicol, durante cinco dias. A fenilbutazona foi administrada na dose de 125 mg . kg-1 para os ratos e na dose de 25 mg . kg-1 para os cães e porcos . O cloranfenicol foi administrado na dose de 100 mg . kg-1 para os ratos e na dose de 50 mg . kg-1 para os cães e porcos. A fenilbutazona e o cloranfenicol foram administrados por via i.p. nos ratos e porcos e por via i.v. nos cães. A solução fisiológica foi administrada nos animais do grupo CTL, por via i. v .• nos cães e por via i.p. nos ratos e porcos. No décimo dia foram repetidos os procedimentos e as avaliações do primeiro dia e sacrificados todos os animais. Os fígados dos ratos foram pesados e reunidos em pool por grupo. Os fígados dos cães e porcos foram processados individualmente. Foram preparados microssomas hepáticos (GUENGERICH, 1994) e determinadas a concentração de proteínas hepáticas (LOWRY et a/., 1951), a concentração de citocromo P - 450 (OMURA & SATO, 1964a) e a velocidade de redução de NADPH- citocromo C (PHILLPS & LANGDON, 1962). Os dados foram analisados estatisticamente por ANOVA , teste de Student - Newman- Keuls e teste de Pearson. O nível de significância foi de a= 0,05. Os resultados revelaram que a fenilbutazona diminuiu o tempo de anestesia nos ratos, sem alteração nas outras duas espécies, e o cloranfenicol aumentou o tempo de anestesia nos ratos e cães, mas não nos porcos. A média dos pesos dos fígados dos ratos do grupo FBZ foi mais elevada do que a dos demais grupos. A velocidade de redução de NADPH - citocromo C foi maior no grupo FBZ nas três espécies, indicando uma situação de indução enzimática. Paralelamente, houve uma menor velocidade de redução no grupo CLF nos porcos. Foi verificada correlação inversa entre o tempo de anestesia e a atividade enzimática em ratos e porcos. / The cytochrome P - 450 system, including families and sub-families of isoenzymes, catalyzes the metabolism of a great number of endogenous and exogenous substracts and plays a central role on drug detoxification and carcinogen metabolic activation. Many drugs have the ability of increasing cytochrome P - 450 system enzymatic activity. Others decrease enzymatic activity. The first phenomenon is called enzymatic induction and the second one is defined as enzymatic inhibition. Sleeping time is the most visible in vivo alteration in drug - interaction involving anesthetic agents. lnfluence of previous administration of phenylbutazone and chloramphenicol on xylazine - ketamine anesthesia in rats, dogs and pigs was studied. Beth phenylbutazone and chloramphenicol have been widely used in veterinary practice. Phenylbutazone is an antiinflammatory compound and a phenobarbital-like enzyme inductor but less potent than the barbiturate. Chloramphenicol is an antibiotic with inhibitory properties on the cytochrome P - 450 system increasing the effects of drugs like barbiturates, phenytoin, warfarin and digoxin. Xylazine hydrochloride is an a.2 - adrenergic agonist with analgesic, sedative and muscle relaxant properties. Ketamine hydrochloride is a compound with cataleptic, analgesic and anesthetic properties producing the so called dissociative anesthesia. Xylazine and ketamine have been used in combination to promete anesthesia in different animal species. Fifty four rats were divided into three groups designed as control (CTL), phenylbutazone (PBZ), and chloramphenicol (CHP), with 18 rats in each group. Dogs (n=18) and pigs (n=18) were divided into three groups on each species, called CTL group, PBZ group, and CHP group. Each group was formed by six animais. On the first day of the experiment the animais of CTL, PBZ and CHP groups were anesthetized with xylazine (20 mg. kg-1 i.p., rats; 1 mg . kg-1 i. v., dogs and pigs) and ketamine (50 mg . kg-1 i.p., rats; 10 mg . kg-1 i.v., dogs and pigs). Latency and duration of righting reflex loss were recorded in rats, dogs and pigs. Walking ability was recorded in pigs. From the day six to day 10 the animais of CTL, PBZ and CHP groups were injected with physiologic solution, phenylbutazone (125 mg . kg-1 i.p., rats; 25 mg . kg-1 i. v., dogs; 25 mg . kg-1 i.p., pigs) and chloramphenicol (100 mg . kg-1 i.p., rats; 50 mg . kg-1 i. v. , dogs; 50 mg . kg-1 i.p., pigs). Physiologic solution was administered i. v in dogs and i.p. in rats and pigs of CTL group. The procedures of the first day were repeated on the tenth day and the animais were killed. Rat livers were weighed and pooled by group and experiment. Dog and pig livers were processed individually. Hepatic microssomes were prepared according GUENGERICH (1994). Liver protein concentration was determined by the method described by LOWRY et a/. in 1951. Cytochrome P- 450 concentration was measured according OMURA & SATO ( 1964a). NADPH - cytochrome C reduction reactions were processed as described by PHILLIPS & LANGDON (1962). Data were analyzed by ANOVA, Student- Newman- Keuls and Pearson tests. The levei of significance was established in a.= 0.05. Sleeping time was decreased by phenylbutazone in rats and increased by chloramphenicol in rats and dogs. Livers were heavier in PBZ group than in the other groups. Reduction of NADPH - cytochrome C was increased in PBZ group in ali species, indicating enzymatic induction. The same parameter showed a decrease in CHP group in pigs. There were inverse correlation between sleeping time and enzymatic activity in rats and pigs.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:42Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-22Bitstream added on 2014-06-13T19:54:51Z : No. of bitstreams: 1 cavasini_r_me_botfca.pdf: 631530 bytes, checksum: 7ac11972a4a4b51352ba1cf57d004bff (MD5) / Devido à expansão da floricultura brasileira nas últimas duas décadas, a crescente demanda deste setor por produtos de alta qualidade e durabilidade e à carência de estudos relacionados à fisiologia pós-colheita de flores, esse trabalho teve como objetivo estudar a durabilidade pós-colheita de hastes de lisianthus (Eustoma grandiflorum) submetidas ao tratamento com inibidores de etileno (1-Metilciclopropeno -1-MCP e Ácido Salicílico - SA) e diferentes temperaturas de armazenamentos (ambiente a 24 ± 2°C e pré-exposição à câmara fria a 9 ± 2°C por 24 horas). A longevidade foi acompanhada a partir de análises não destrutivas (escala de notas, perda de massa fresca e teor de água absorvido pela haste) e destrutivas (teor de carboidratos solúveis totais, fenóis e proteínas solúveis, e atividade das enzimas peroxidase – POD e polifenoloxidase – PPO). A aplicação de 1000 mg L-1 de ácido salicílico mostrou-se ineficiente, pois as hastes apresentaram sintomas de fitotoxidade, elevada taxa de inclinação do pedúnculo e amarelecimento de pétalas, e redução na turgescência e longevidade das hastes tanto em temperatura ambiente quanto na pré-exposição a câmara fria, além de propiciarem o surgimento de patógenos. A associação entre 1-MCP e câmara fria foi um bom tratamento para aumentar a durabilidade das hastes, que apresentaram melhores características de inclinação do pedúnculo e turgescência. Os teores de carboidratos presente nas hastes sofreram redução durante todo o período experimental independente dos tratamentos pós-colheita e da temperatura de armazenamento, assim como a absorção de água pelas mesmas. Durante o período de avaliações, a atividade enzimática aumentou com a senescência do material, relação direta com a concentração de fenóis que se acumulam nos tecido lesionados... / Due to the expansion of the Brazilian floriculture in the last two decades, the growing demand in this sector for high quality products and durability and the lack of studies on postharvest physiology of flowers, this work aimed to study the postharvest longevity stems of lisianthus (Eustoma grandiflorum) subjected to treatment with inhibitors of ethylene (1-methylcyclopropene 1-MCP and Salicylic Acid - SA) and different storage temperatures (ambient to 24 ± 2° C and pre-exposure chamber at 9 ± 2° C for 24 hours). Longevity was accompanied from non-destructive analysis (grading scale, weight loss and water content absorbed by the stem) and destructive (total soluble carbohydrates, phenols and soluble proteins, and activity of peroxidase - POD and polyphenoloxidase - PPO). The application of 1000 mg L-1 of salicylic acid proved to be inefficient, because the rods showed symptoms of phytotoxicity high rate of bent neck and yellowing of petals, and reduction in swelling and longevity of the rods both in room temperature and in pre-exposure to cold chamber, in addition to propitiate the appearance of pathogens. The association between 1-MCP and cold chamber was a good treatment to increase the durability of... (Complete abstract click electronic access below)