OBJETIVOS: Comparar a expressão placentária de células natural killer deciduais (dNK), e a expressão sérica e placentária de suas citocinas reguladoras em gestações gemelares com pré-eclâmpsia (grupo pré-eclâmpsia, GPE) e sem comorbidades (grupo-controle, GC). MÉTODOS: Estudo transversal do tipo caso-controle, desenvolvido na Clínica Obstétrica do HC-FMUSP no período de julho de 2015 a junho de 2017. Foram obtidas amostras das regiões deciduais placentárias, para avaliação, por meio de técnica de imuno-histoquímica, da expressão de células dNK e suas interleucinas (IL) 10, 12 e 15, em pacientes que contemplaram os critérios de inclusão e concordaram em participar do estudo. Além disso, estas pacientes tiveram amostra sérica colhida no terceiro trimestre para dosagem de IL-10, IL-12 e IL-15 - por meio de kit comercial Milliplex®, que utiliza a tecnologia Luminex® xMAP®, da EMDMillipore (Merck Millipore Co., Alemanha) - e de fatores relacionados à angiogênese, como soluble fms-like tyrosine kinase-1 (sFlt-1) e placental growth factor (PlGF) - por meio de ensaio com imunoanalisador COBAS e411 (Roche Diagnostics, Alemanha). Os valores obtidos para as análises placentárias e séricas foram comparados entre o GPE e o GC, e a significância estatística estabelecida foi p < 0,05. RESULTADOS: Foram selecionadas 30 pacientes, sendo 20 no GC e 10 no GPE. Não se observaram diferenças significativas com relação às características maternas, gestacionais e de desfechos perinatais entre os dois grupos, exceto pela idade gestacional de início do pré-natal, menor no GPE (12,5 vs. 20,0 semanas, p = 0,015). Quanto à avaliação placentária, houve maior expressão de IL-15 no GPE (p = 0,001), e não houve diferença entre os grupos quanto à expressão placentária local de células dNK (p = 0,999), IL-10 (p = 0,063) e IL-12 (p = 0,135). Com relação às interleucinas séricas maternas, demonstrou-se aumento significativo nos níveis de IL-10 (22,7 vs. 11,9 pg/mL, p = 0,024) e IL-15 (15,9 vs. 7,4 pg/mL, p = 0,024) no GPE com relação ao GC, sem diferença entre os grupos para IL-12 (102,5 vs. 61,5 pg/mL, p = 0,373). A dosagem dos fatores relacionados à angiogênese demonstrou maiores níveis séricos maternos de sFlt-1 (15920 vs. 7978 pg/mL, p = 0,009) e da razão sFlt-1/PlGF (88,71 vs. 24,63, p = 0,002), e menores valores de PlGF (193,0 vs. 340,6 pg/mL, p = 0,036) no GPE. CONCLUSÃO: Observou-se maior concentração sérica materna tanto de fatores pró quanto anti-inflamatórios no GPE, quando comparado ao GC. Entretanto, não foram observadas diferenças entre os grupos quanto à expressão placentária de IL-10, importante fator anti-inflamatório. Estes achados podem sugerir que a tentativa sérica materna de equilibrar estas interleucinas não alcançou resposta localmente na placenta, contribuindo para o desenvolvimento da doença no GPE / OBJECTIVES: To compare the placental expression of decidual natural killer cells (dNK) and serum and placental expression of their regulatory cytokines in twin pregnancies with preeclampsia (preeclampsia group, PEG) and uncomplicated twin pregnancies (control group, CG). METHODS: This was a case-control study, developed in a tertiary referral center, from July 2015 to June 2017. Samples of the placental decidual region were obtained and analyzed by immunohistochemistry technique for the expression of dNK cells and interleukins (IL) 10, 12 and 15, in patients who met the inclusion criteria. In addition, maternal serum sample was collected in the third trimester for the dosage of IL-10, IL-12 and IL-15 - by means of a commercial Milliplex® kit using Luminex® xMAP® technology from EMDMillipore (Merck Millipore Co., Germany) - and angiogenesis factors, such as soluble fms-like tyrosine kinase-1 (sFlt-1) and placental growth factor (PlGF) - by COBAS e411 immunoassay (Roche Diagnostics, Germany). The values obtained for the placental analyzes and maternal circulating factors were compared between PEG and CG and the statistical significance was set at p < 0.05. RESULTS: Thirty patients were selected, 20 in CG and 10 in PEG. There were no significant differences in maternal, gestational and perinatal outcomes between the two groups, except for the gestational age at the onset of prenatal care, which was lower in PEG (12.5 vs. 20.0 weeks, p = 0.015). PEG showed strong immunostaining for IL-15 (p = 0.001) when compared to CG, with no difference between the groups concerning the placental expression of dNK (p = 0.999), IL-10 (p = 0.063), and IL -12 (p = 0.135). Relating to maternal circulating interleukins, a significant increase in IL-10 (22.7 vs. 11.9 pg/mL, p = 0.024) and IL-15 (15.9 vs. 7.4 pg/mL, p = 0.024) was observed in PEG, with no difference between the groups for IL-12 (102.5 vs 61.5 pg/mL, p = 0.373). We also demonstrated higher maternal levels of sFlt-1 (15920 vs. 7978 pg/mL, p = 0.009) and sFlt-1/PlGF ratio (88.71 vs. 24.63, p = 0.002) and lower levels of PlGF (193 vs. 340.6 pg/mL, p = 0.036) in PEG. CONCLUSION: A higher maternal serum concentration of both pro- and anti-inflammatory factors was observed in the PEG. However, no difference was found between the groups regarding the placental expression of IL-10, an important anti-inflammatory factor. These findings may suggest that the maternal serum attempt to balance these interleukins did not reach local placental response, which contribute to the development of the disease in the PEG

Introdução: A endometriose é uma doença com características inflamatórias que atinge as mulheres em idade reprodutiva. A patogênese da endometriose não está esclarecida. Tem sido demonstrada associação entre distúrbios imunológicos e endometriose, como alterações nos macrófagos, células NK, citocinas e nas repostas Th1, Th2 e Th17. As células iNKT, um tipo especial de linfócitos T, tem importante papel na resposta inflamatória como mediadores das repostas Th1, Th2 e Th17. Objetivos: o objetivo principal deste estudo foi comparar as frequências das células iNKT e seus subtipos entre pacientes com endometriose e pacientes sem endometriose. Procuramos também comparar as frequências destas células em ambos os grupos relacionando com alguns os aspectos clínicos e cirúrgicos da doença. Métodos: Realizamos estudo transversal, prospectivo entre fevereiro de 2013 a fevereiro de 2015 que avaliou a porcentagem de células iNKT e os subtipos iNKT CD4+, iNKT CD4+ CCR7+, iNKT CD4+ CD25+, iNKT DN, iNKT DN CCR7+, iNKT DN CD25+, iNKT CD4+ IL6+, iNKT CD4+ IL10+, iNKT CD4+ IL17+, iNKT CD8+ IL6+, iNKT CD8+ IL10+, iNKT CD8+ IL17+, iNKT DN IL6+, iNKT DN IL10+, iNKT DN IL17+ no sangue periférico, por citometria de fluxo, em pacientes com endometriose profunda (n = 47) e sem endometriose (n = 26). As frequências de células iNKT e seus subtipos foram comparadas entre os grupos de acordo com os sintomas, fase do ciclo, estádio da doença e classificação histológica. Resultados: Na avaliação da frequência das células iNKT, iNKT DN e iNKT DN IL17+ foi evidenciada diminuição significativa nas pacientes com endometriose (p=0,010, p=0,020, p=0,050; respectivamente). Além disso, foi observada diminuição significativa nas frequências das células iNKT CD4+ CCR7+ e aumento significativo das células iNKT CD4+ IL-17+ em pacientes com endometriose e dismenorréia severa em comparação a dismenorréia ausente/leve. Nas pacientes com endometriose e dor acíclica severa observou-se diminuição significativa da frequência das células iNKT CD4+ IL17+ em comparação a dor acíclica ausente/leve (p=0,048). Houve diminuição das células iNKT nas pacientes com endometriose em relação ao grupo controle na fase secretora do ciclo menstrual (p=0,030). Na avaliação da fase do ciclo menstrual foi observado na fase proliferativa aumento significativo na frequência das células iNKT CD4+ CD25+ (p=0,022) e diminuição significativa das células iNKT DN (p=0,011) nas pacientes com endometriose. Na fase secretora foi evidenciado diminuição significativa na frequência das células iNKT DN IL17+ (p=0,049) nas pacientes com endometriose. Foi identificado também nas pacientes com endometriose uma diminuição na frequência das células iNKT DN CD25+ na fase secretora em relação a fase proliferativa do ciclo menstrual. Conclusões: As células iNKT e os subtipos iNKT DN e iNKT DN IL17+ se mostraram alteradas nas pacientes com endometriose profunda. Subtipos específicos de células iNKT estão alteradas nas pacientes com endometriose profunda em pacientes com dismenorréia e dor acíclica severas. As fases do ciclo menstrual estão relacionadas a alteração nas frequências das células iNKT e dos subtipos iNKT CD4+ CD25+, iNKT DN, iNKT DN IL17+ e iNKT DN CD25+ nas pacientes com endometriose profunda. Estes resultados sugerem participação das células iNKT no desenvolvimento da endometriose / Introduction: Endometriosis is a disease with inflammatory characteristics that affects women of reproductive age. The pathogenesis of endometriosis is unclear. There has been an association between immune disorders and endometriosis, such as changes in macrophages, NK cells, cytokines, and Th1, Th2 and Th17 responses. iNKT cells, a special type of T lymphocytes, play an important role in the inflammatory response as mediators of the Th1, Th2 and Th17 responses. Objectives: The main objective of this study was to compare the frequencies of iNKT cells and their subtypes between patients with endometriosis and patients without endometriosis. We also compare the frequencies of these cells in both groups relating to some clinical and surgical aspects of the disease. Methods: We performed a prospective cross-sectional study between February 2013 and February 2015, which evaluated the percentage of iNKT cells and iNKT CD4+, iNKT CD4+ CCR7+, iNKT CD4+ CD25+, iNKT DN, iNKT DN CCR7+, iNKT DN CD25+, iNKT CD4+ IL6+ , iNKT CD8+ IL17+, iNKT DN IL6+, iNKT DN IL10+, iNKT DN IL17+ in the peripheral blood, by flow cytometry, in patients with deep endometriosis (n = 47), iNKT CD4+ IL10+, iNKT CD4+ IL17+, iNKT CD8+ ) and without endometriosis (n = 26). The frequencies of iNKT cells and their subtypes were compared between groups according to symptoms, stage of the cycle, stage of the disease and histological classification. Results: iNKT, iNKT DN and iNKT DN IL17+ cells showed significant decrease in patients with endometriosis (p = 0.010, p = 0.020, p = 0.050, respectively). In addition, a significant decrease in iNKT CD4+ CCR7+ cell numbers and a significant increase of iNKT CD4+ IL17+ cells were observed in patients with endometriosis and severe dysmenorrhea compared to absent / mild dysmenorrhea. In patients with endometriosis and severe acyclic pain, there was a significant decrease in the frequency of iNKT CD4+ IL17+ cells compared to absent / mild acyclic pain (p = 0.048). There was a decrease in iNKT cells in patients with endometriosis compared to the control group in the secretory phase of the menstrual cycle (p = 0.030). In the menstrual cycle, a significant increase in iNKT CD4+ CD25+ cells (p = 0.022) and a significant decrease in iNKT DN cells (p = 0.011) was observed in the proliferative phase in patients with endometriosis. In the secretory phase there was a significant decrease in the frequency of iNKT DN IL17 + cells (p = 0.049) in patients with endometriosis. It was also identified in patients with endometriosis a decrease in the frequency of iNKT DN CD25+ cells in the secretory phase in relation to the proliferative phase of the menstrual cycle. Conclusions: iNKT cells and subtypes iNKT DN e iNKT DN IL17+ have been altered in patients with deep endometriosis. Specific subtypes of iNKT cells are altered in patients with deep endometriosis in patients with severe dysmenorrhea and acyclic pain. The phases of the menstrual cycle are related to changes in the frequencies of iNKT cells and subtypes iNKT CD4+ CD25+, iNKT DN, iNKT DN IL17+ and iNKT DN CD25+ in patients with deep endometriosis. These results suggest the participation of iNKT cells in the development of endometriosis

OBJETIVOS: Comparar a expressão placentária de células natural killer deciduais (dNK), e a expressão sérica e placentária de suas citocinas reguladoras em gestações gemelares com pré-eclâmpsia (grupo pré-eclâmpsia, GPE) e sem comorbidades (grupo-controle, GC). MÉTODOS: Estudo transversal do tipo caso-controle, desenvolvido na Clínica Obstétrica do HC-FMUSP no período de julho de 2015 a junho de 2017. Foram obtidas amostras das regiões deciduais placentárias, para avaliação, por meio de técnica de imuno-histoquímica, da expressão de células dNK e suas interleucinas (IL) 10, 12 e 15, em pacientes que contemplaram os critérios de inclusão e concordaram em participar do estudo. Além disso, estas pacientes tiveram amostra sérica colhida no terceiro trimestre para dosagem de IL-10, IL-12 e IL-15 - por meio de kit comercial Milliplex®, que utiliza a tecnologia Luminex® xMAP®, da EMDMillipore (Merck Millipore Co., Alemanha) - e de fatores relacionados à angiogênese, como soluble fms-like tyrosine kinase-1 (sFlt-1) e placental growth factor (PlGF) - por meio de ensaio com imunoanalisador COBAS e411 (Roche Diagnostics, Alemanha). Os valores obtidos para as análises placentárias e séricas foram comparados entre o GPE e o GC, e a significância estatística estabelecida foi p < 0,05. RESULTADOS: Foram selecionadas 30 pacientes, sendo 20 no GC e 10 no GPE. Não se observaram diferenças significativas com relação às características maternas, gestacionais e de desfechos perinatais entre os dois grupos, exceto pela idade gestacional de início do pré-natal, menor no GPE (12,5 vs. 20,0 semanas, p = 0,015). Quanto à avaliação placentária, houve maior expressão de IL-15 no GPE (p = 0,001), e não houve diferença entre os grupos quanto à expressão placentária local de células dNK (p = 0,999), IL-10 (p = 0,063) e IL-12 (p = 0,135). Com relação às interleucinas séricas maternas, demonstrou-se aumento significativo nos níveis de IL-10 (22,7 vs. 11,9 pg/mL, p = 0,024) e IL-15 (15,9 vs. 7,4 pg/mL, p = 0,024) no GPE com relação ao GC, sem diferença entre os grupos para IL-12 (102,5 vs. 61,5 pg/mL, p = 0,373). A dosagem dos fatores relacionados à angiogênese demonstrou maiores níveis séricos maternos de sFlt-1 (15920 vs. 7978 pg/mL, p = 0,009) e da razão sFlt-1/PlGF (88,71 vs. 24,63, p = 0,002), e menores valores de PlGF (193,0 vs. 340,6 pg/mL, p = 0,036) no GPE. CONCLUSÃO: Observou-se maior concentração sérica materna tanto de fatores pró quanto anti-inflamatórios no GPE, quando comparado ao GC. Entretanto, não foram observadas diferenças entre os grupos quanto à expressão placentária de IL-10, importante fator anti-inflamatório. Estes achados podem sugerir que a tentativa sérica materna de equilibrar estas interleucinas não alcançou resposta localmente na placenta, contribuindo para o desenvolvimento da doença no GPE / OBJECTIVES: To compare the placental expression of decidual natural killer cells (dNK) and serum and placental expression of their regulatory cytokines in twin pregnancies with preeclampsia (preeclampsia group, PEG) and uncomplicated twin pregnancies (control group, CG). METHODS: This was a case-control study, developed in a tertiary referral center, from July 2015 to June 2017. Samples of the placental decidual region were obtained and analyzed by immunohistochemistry technique for the expression of dNK cells and interleukins (IL) 10, 12 and 15, in patients who met the inclusion criteria. In addition, maternal serum sample was collected in the third trimester for the dosage of IL-10, IL-12 and IL-15 - by means of a commercial Milliplex® kit using Luminex® xMAP® technology from EMDMillipore (Merck Millipore Co., Germany) - and angiogenesis factors, such as soluble fms-like tyrosine kinase-1 (sFlt-1) and placental growth factor (PlGF) - by COBAS e411 immunoassay (Roche Diagnostics, Germany). The values obtained for the placental analyzes and maternal circulating factors were compared between PEG and CG and the statistical significance was set at p < 0.05. RESULTS: Thirty patients were selected, 20 in CG and 10 in PEG. There were no significant differences in maternal, gestational and perinatal outcomes between the two groups, except for the gestational age at the onset of prenatal care, which was lower in PEG (12.5 vs. 20.0 weeks, p = 0.015). PEG showed strong immunostaining for IL-15 (p = 0.001) when compared to CG, with no difference between the groups concerning the placental expression of dNK (p = 0.999), IL-10 (p = 0.063), and IL -12 (p = 0.135). Relating to maternal circulating interleukins, a significant increase in IL-10 (22.7 vs. 11.9 pg/mL, p = 0.024) and IL-15 (15.9 vs. 7.4 pg/mL, p = 0.024) was observed in PEG, with no difference between the groups for IL-12 (102.5 vs 61.5 pg/mL, p = 0.373). We also demonstrated higher maternal levels of sFlt-1 (15920 vs. 7978 pg/mL, p = 0.009) and sFlt-1/PlGF ratio (88.71 vs. 24.63, p = 0.002) and lower levels of PlGF (193 vs. 340.6 pg/mL, p = 0.036) in PEG. CONCLUSION: A higher maternal serum concentration of both pro- and anti-inflammatory factors was observed in the PEG. However, no difference was found between the groups regarding the placental expression of IL-10, an important anti-inflammatory factor. These findings may suggest that the maternal serum attempt to balance these interleukins did not reach local placental response, which contribute to the development of the disease in the PEG

A resposta proliferativa das células mononucleares do sangue periférico dos adultos com dermatite atópica mostrou-se diminuída após estímulos com mitógenos (enterotoxinas estafilocócicas A e B, "pokeweed" e fitohemaglutinina) e antígenos (toxóide tetânico e Candida albicans). A correlação positiva dos níveis séricos de interleucina-18, IgE e escore de gravidade da doença sugerem que esta citocina seria um marcador de atividade da dermatite atópica do adulto / A reduced proliferative response of peripheral blood mononuclear cells in adults with atopic dermatitis was detected when stimuli with mitogens (staphylococcal enterotoxins A and B, phytohemaglutinin, pokeweed), and with antigens (tetanus toxoid and Candida albicans) were performed. A positive correlation of interleukin-18, IgE levels and severity scores of the disease suggest that this cytokine could be a marker of disease activity in adult atopic dermatitis

Introdução: Em estudo prospectivo, os efeitos da gastroplastia redutora com reconstrução em Y de Roux sobre a flora bacteriana e produção de citoquinas nas câmaras gástricas proximal e excluída foram estudados. Métodos: pacientes bariátricos (n=37) foram submetidos à avaliação endoscópica em ambos reservatórios gástricos,7,3+-1,4 anos após a gastroplastia. Idade foi de 42,4+-9,9 anos (70,2% sexo feminino), IMC pré-operatório de 53,5+-10,6, e IMC atual de 32,6+-7,8kg/m2. TNFalfa e TGF-beta foram medidos pelo método ELISA em biópsias da mucosa gástrica., assim como cultura quantitativa da secreção gástrica, com pH gástrico e teste respiratório lactulose/hidrogênio.Resultados: Nenhum dos pacientes apresentou queixas sugestivas de supercrescimento bacteriano gastrointestinal. Todavia, contagens elevadas de bactérias e fungos foram identificadas nas duas câmaras, principalmente no estômago proximal. Gram-positivos representaram a maioria dos isolados. O pH foi neutro na câmara proximal, enquanto que também na câmara distal nem sempre conservou-se em níveis esperados. Conclusões: 1)Produção elevadas de TNF-alfa e TGF-beta, com a colonização de aeróbios, anaeróbios e fungos em ambas câmaras gástricas foram identificadas; 2)O pH gástrico como a contagem bacteriana foram maiores no estômago proximal funcionante; 3)Teste respiratório foi positivo para supercrescimento bacteriano em 40,5% dos pacientes,entretanto não foram identificadas manifestações clínicas de supercrescimento bacteriano gastrointestinal. / Background: In a prospective study, the effect of Roux-en-Y gastric bypass (RYGBP) on bacterial flora and cytokines production in the used (proximal pouch) and unused (large bypassed) gastric chamber was analysed. Methods: Bariatric subjects (n=37) were submitted to endoscopic examination of both gastric reservoirs, 7.3 ± 1.4 years after RYGBP. Age was 42.4 ± 9.9 years (70.2% females), preoperative BMI was 53.5 ± 10.6, and current BMI was 32.6 ± 7.8 kg/m2.TNF-alpha and TGF-beta were meausured by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) from gastric mucosal biopsies. Quantitative culture of gastric secretion along with gastric pH and actulose/hydrogen breath test were also investigated.Results: None of the subjects displayed complaints suggestive of GI bacterial overgrowth. Elevated counts of bacteria and fungi were identified in both chambers, mostly in the proximal stomach. Gram-positives represented the majority of the isolates. Gastric pH was neutral in the proximal pouch, whereas the distal chamber mostly but not always onserved the expected acidity. Conclusions: 1)Increased TNF-alpha and TGFbeta production, as aerobes, anaerobes and fungi colonization of both gastric chambers was detected; 2) Gastric pH as well as bacterial count was higher in the functioning proximal stomach; 3) Breath test was positive for bacterial overgrowth in 40.5% of the subjects, however clinical manifestation of GI bacterial overgrowth were not demonstrated

A resposta proliferativa das células mononucleares do sangue periférico dos adultos com dermatite atópica mostrou-se diminuída após estímulos com mitógenos (enterotoxinas estafilocócicas A e B, "pokeweed" e fitohemaglutinina) e antígenos (toxóide tetânico e Candida albicans). A correlação positiva dos níveis séricos de interleucina-18, IgE e escore de gravidade da doença sugerem que esta citocina seria um marcador de atividade da dermatite atópica do adulto / A reduced proliferative response of peripheral blood mononuclear cells in adults with atopic dermatitis was detected when stimuli with mitogens (staphylococcal enterotoxins A and B, phytohemaglutinin, pokeweed), and with antigens (tetanus toxoid and Candida albicans) were performed. A positive correlation of interleukin-18, IgE levels and severity scores of the disease suggest that this cytokine could be a marker of disease activity in adult atopic dermatitis

INTRODUÇÃO: A dermatite atópica (DA) é uma doença cutânea inflamatória, acompanhada por prurido intenso e xerose cutânea. A etiopatogenia da DA é multifatorial, envolvendo fatores genéticos, ambientais e imunológicos, dentre outros. OBJETIVOS: Avaliar a influência das enterotoxinas A e B do Staphylococcus aureus (SEA e SEB) na resposta mediada por células Th17 e Th22 nos indivíduos adultos com DA. MÉTODOS: Foram selecionados 38 pacientes adultos com DA e um grupo controle com 40 indivíduos adultos, pareados por idade e gênero Os métodos utilizados foram: 1) ELISA: dosagem dos níveis séricos de IL-6, IL-17, IL-22 e IL-12p40/IL-23 e em sobrenadantes de culturas de células mononucleares do sangue periférico (PBMC) estimuladas com SEA e SEB; 2) Imuno-histoquímica: análise da expressão de IL-17 em fragmentos de pele; 3) Citometria de fluxo: a) análise das citocinas circulantes em amostras de soro: IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, TNF, IL-17A e IFN-y b)avaliação das células T CD4+ mono e polifuncionais secretoras de IL-17, IL-22, TNF, IFN-y, MIP-1beta, e expressão do marcador de ativação celular CD38; c) células Th22 e Tc22 estimuladas com SEA e SEB. RESULTADOS: 1) Através do ELISA, a secreção de IL-22 sérica e em PBMC induzidas por SEA e SEB foi significativamente mais elevada, quando comparada ao grupo controle; 2) houve aumento na expressão de IL-17 em amostras de pele de doentes de DA através da imuno-histoquímica; 3) Através da citometria de fluxo, foram detectados: a) níveis séricos de IL-2, 5, 6, 10, 17A e IFN-y elevados no grupo com DA em relação aos controles; houve diferença significativa nos níveis circulantes de IL-17A nos pacientes com DA moderada e grave; b) na avaliação monofuncional das células T CD4+ sob estímulo de SEA/SEB, houve redução da expressão das citocinas IFN-y, IL-17A, IL-22 ou TNF na DA, quando comparadas ao grupo controle; na análise polifuncional das células T CD4+/CD8+, ocorreu redução da resposta na DA em relação aos controles; nos pacientes atópicos encontramos aumento da resposta em situação basal na dependência de CD38, e redução na resposta frente a SEA/SEB na ausência de CD38; c) encontramos resposta reduzida das células Th22, e elevada de células Tc22 frente aos estímulos SEA e SEB, nos pacientes com DA. CONCLUSÕES: O estudo corrobora o papel patogênico das enterotoxinas estafilocócicas na DA. A ativação crônica com superantígenos estafilocócicos pode contribuir com a alta frequência de células T CD4+ CD38+ polifuncionais, e com a resposta polifuncional anérgica, mediadas por células T CD38- / BACKGROUND: Atopic dermatitis (AD) is an inflammatory skin disease with intense itching and xerosis. AD pathogenesis is multifactorial, involving genetic, environmental, and immunological factors, among others. OBJECTIVES: To evaluate the influence of enterotoxins A and B from Staphylococcus aureus (SEA and SEB) in Th17 and Th22 cell response in adults with AD. METHODS: We evaluated 38 adult patients with AD, and a control group of 40 adults, age and gender matched. Assays: 1) ELISA: evaluation of IL-6, IL-17, IL-12p40/IL-23 and IL-22 serum levels and in supernatants of mononuclear cell cultures from peripheral blood (PBMC), stimulated with SEA/SEB; 2) Immunohistochemistry: analysis of IL-17 expression in skin specimens; 3) Flow cytometry: a) analysis of circulating cytokines in serum samples: IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, TNF, IL-17A and IFN-y b) evaluation of mono and polyfunctional TCD4+ cells that secrete IL-17, IL-22, TNF, IFN-y, MIP-1beta, and expression of the activation marker CD38; c) analysis of Tc22 and Th22 cells stimulated with SEA and SEB. RESULTS: 1) Secretion of IL-22 in the serum and from supernatants of cell cultures from PBMC, stimulated with SEA and SEB were higher in AD patients, when compared to the control group by ELISA; 2) there was an increase of IL-17 expression in skin samples by immunohistochemistry; 3) Flow cytometry showed: a) elevated serum levels of IL-2, 5, 6, 10, 17A and IFN-y in AD, when compared to controls; there was a significant difference in circulating levels of IL-17A in patients with moderate and severe disease; b) monofunctional evaluation of T CD4+ cells under SEA/SEB stimuli showed reduced expression of IFN-y, IL-17A, IL-22 or TNF cytokines in AD, compared to controls; the same was observed for polyfunctional CD4+/CD8+ T cells analysis, exhibiting a diminished response in AD. In atopic patients under basal conditions, there was an augmented CD38- dependent response and reduced pattern to SEA/SEB in the absence of CD38; c) finally, we observed a reduced response of Th22 cells and enhanced Tc22 cells under SEA/SEB stimuli in patients with AD. CONCLUSIONS: This study corroborates the pathogenic role of staphylococcal enterotoxins in AD. Chronic activation with staphylococcal superantigens may contribute to the high frequency of polyfunctional CD4 +CD38+ T cells and with the anergic polyfunctional response mediated by T CD38- T cells

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:18:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 5995.pdf: 2869208 bytes, checksum: 78818b61943b25fd2cc3f8d00a47f406 (MD5) Previous issue date: 2013-06-06 / The anatomical alterations of spine have been researched in experimental and clinical studies. The present study focused the analysis on the three aspects. The scoliosis and the alterations on the metabolic profile of the paravertebral and pectoral muscles (study I), the scoliosis and stretching influence in the plasma citocines concentration (study II) and the status of cardiac autonomic function front the scoliosis implantation (study III). The three studies were performed with male rats, which were divided into different experimental groups, with a total n of 68 animals. For the scoliosis induction were applied a non-invasive model composed by vests made of polyvinyl chloride (PVC). All data were expressed as mean ± epm. For the statistical analysis the Kolmogorov-Smirinov test was applied to investigate the normality of the data, whereas studies I and II were followed by the variance analysis ANOVA and Tukey post hoc (p<0,05), in the study III were used the Student-t test or the sum of rank in the Mann-Whitney test (p<0,05). In the first study were applied vests to the scoliotic group since the initial growth phase (post weaning) until the sixth week of growth, however in the studies II and III the vests application went up to the twelfth week. To the achievement of the first study the rats were divided into 2 experimental groups with n=6: control (C) and scoliotic (S). The outcomes from this study showed a reduction on the relation total protein/DNA, in the glycogen content and in the total weight of the scoliotic animals. This study established a homeostatic impairment of the pectoral and paravertebral muscles during the scoliosis induction process. In the second study the animals were distributed into 4 groups with n=8: control (C), stretched (S), scoliotic (SG) and stretched scoliotic (SS). The stretching consisted in 3 series of 30 seconds with 10 seconds of interval among the series. The results revealed an important increase in the concentration of IL-2, IL-6 and e TNF-&#945; in the scoliotic group, whereas the intervention with stretching exercises could achieve a decrease of 4, 9 and 6% respectively on the concentration increase. These results suggest that the proposed model used to induce the scoliosis lead to a muscular disuse and the stretching has showed to be effective to minimize the deriving consequences of this disuse. In the third study the animals were divided into 2 groups again, control group (C, n=12) and scoliosis group (S, n=12). On this study the attention referred to possible alterations in the cardiovascular autonomic control system. Evaluations of heart rate variability, cardiac autonomic tonus and cardiac baroreflex sensitivity. From these results was possible to certify that scoliosis causes an alteration in the autonomic control, being that the scoliotic group presented best sympathetic modulation, greater vagal tone and greater cardiac baroreflex sensitivity. The outcomes suggest that scoliosis promote alterations in the autonomic function of the cardiac system. In general, the results from this study demonstrated that the scoliotic animals have smaller glycogen reserves and lower ratios of total protein/DNA; higher concentration of the citocines IL-2, IL-6 and TNF-&#945;, while the scoliotic and stretched rats have lower concentrations from the same citocines; referring to the autonomic modulation the scoliosis led to a higher total variance, greater sympathetic cardiac modulation, greater vagal tono and best baroreflex sensitivity proving a better condition in the cardiovascular autonomic function through the most part of the evaluated items in the scoliotic rats. / As alterações anatômicas da coluna vertebral têm sido investigadas em estudos clínicos e experimentais. O presente trabalho concentrou suas análises em três vertentes: A escoliose e suas alterações no perfil metabólico da musculatura paravertebral e peitorais (estudo I), as influências da escoliose e do exercício de alongamento sobre a concentração de citocinas plasmáticas (estudo II) e o status da função autonômica cardiovascular frente à implantação da escoliose (estudo III). Os três estudos foram realizados com ratos machos divididos em diferentes grupos experimentais, com n total de 68 animais. Para a implantação da escoliose foi utilizado um modelo não invasivo constituído por um colete de filme de policloreto de vinil (PVC). Os dados foram apresentados em média ±epm. Para a avaliação estatística os dados foram submetidos ao teste de normalidade Kolmogorov-Smirnov, sendo que nos estudos I e II foi seguido da análise de variância ANOVA e post hoc de Tukey (p<0,05), no estudo III teste t-Student ou pela soma dos ranks no teste de Mann-Whitney (p<0,05). No primeiro estudo o grupo escoliótico recebeu a aplicação do colete desde as fases iniciais de crescimento (pós-desmame) até a sexta semana de crescimento, e nos estudos II e III a aplicação do colete foi até a décima segunda semana. Para a realização do primeiro estudo os animais foram distribuídos em 2 grupos experimentais de n=6: controle (C) e escoliótico (E). Os resultados desse estudo revelaram redução na relação proteína total/DNA, no conteúdo de glicogênio e no peso total dos animais escolióticos. Com esse estudo foi constatado comprometimento homeostático de músculos peitorais e paravertebrais durante o processo de indução de escoliose. No segundo estudo os animais foram distribuídos em quatro grupos de n=8: controle (C), alongado (A), escoliótico (E) e escoliótico alongado (EA). O alongamento consistiu de 3 séries de 30 segundos com intervalos de 10 segundos entre as séries. Os resultados revelaram importante aumento das concentrações de IL-2, IL-6 e TNF-&#945; no grupo escoliótico, por outro lado a intervenção com exercício de alongamento foi capaz de reduzir em 4, 9 e 6% respectivamente esse aumento. Esse resultado sugere que a indução de escoliose com o modelo proposto promove desuso muscular e o alongamento se mostrou capaz de minimizar os efeitos decorrentes desse desuso. No terceiro estudo os animais foram divididos novamente em 2 grupos experimentais, grupo controle (C, n=12) e grupo escoliose (E, n=12). Nesse estudo a atenção foi voltada para possíveis alterações no sistema de controle autonômico cardiovascular. Foram realizadas avaliações da variabilidade da frequência cardíaca, do tônus autonômico cardíaco e da sensibilidade barorreflexa cardíaca. Com os resultados foi possível constatar que a escoliose promove uma alteração no controle autonômico, de forma que o grupo escoliótico apresenta maior modulação simpática, maior tônus vagal e maior sensibilidade baroreflexa cardíaca. Os dados sugerem que a escoliose promove alterações na função autonômica do sistema cardiovascular. No geral, os resultados desse trabalho revelam que os animais escolióticos possuem menores reservas glicogênica e menor relação proteína total/DNA; maiores concentrações das citocinas IL-2, IL-6 e TNF-&#945;, ao passo que os ratos escolióticos e alongados possuem menor concentração das mesmas citocinas; quanto a modulação autonômica cardiovascular a escoliose levou a maior variância total maior modulação simpática cardíaca, maior tônus vagal e maior sensibilidade baroreflexa mostrando melhor condição da função autonômica cardiovascular pela maioria dos índices avaliados nos ratos escolióticos.

Orientador: Alba Regina Monteiro Souza Brito / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-15T00:26:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ferreira_AndersonLuiz_D.pdf: 1659590 bytes, checksum: a72e12af76082feafe5a240c07b04574 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Apesar da amplitude de possibilidades terapêuticas, ainda não existe um tratamento ideal para as doenças inflamatórias intestinais (DII), com perfil adequado de eficácia e segurança. Por essa razão, é de grande interesse estudar agentes com poucos efeitos colaterais, que preferencialmente façam parte da dieta, no tratamento/prevenção dessas doenças. Neste contexto, surgiu o interesse em estudar uva, fruta com alto teor de flavonóides e fibras dietéticas, ambas benéficas à saúde. Sabe-se que substâncias antioxidantes e ácidos graxos de cadeia curta (AGCC), principalmente o ácido butírico proveniente da fermentação de fibras dietéticas, podem estar envolvidas na prevenção e tratamento de doenças intestinais. O ácido butírico é utilizado como substrato para a reparação do tecido inflamado e inibe fatores pró-inflamatórios; portanto, quantificar a produção desse ácido é imprescindível, dado que quanto maior for sua produção, maior será a eficiência da dieta para a recuperação do tecido. Para tanto, foi realizada uma análise in vitro que demonstrou que a concentração de 0,5 g de Uva foi a que produziu maiores quantidades de butirato na análise por cromatografia de íons. Após a escolha da concentração da fruta, seguiu-se o estudo in vivo utilizando-se a dose de 0,5 g.kg-1. A princípio, verificou-se a ação antioxidante avaliando os níveis de GHS além das atividades das enzimas antioxidantes GSSG-Rd, GSH-Px e SOD em ratos com colite induzida por ácido trinitrobenzenosulfônico (TNBS). Os animais tratados com Uva apresentaram altos níveis de GSH; as atividades da GSSG-Rd, GSH-Px permaneceram próximas às do grupo sem colite. A atividade da SOD, que também foi drasticamente diminuída no grupo TNBS, foi restabelecida no grupo tratado. O Tratamento com Uva foi capaz de exercer efeito antinflamatório intestinal, já que os animais tratados apresentaram menor escore macroscópico da lesão, além de diminuir alguns mediadores pró-inflamatórios, como (COX-2, NF-_B e molécula de adesão intestinal MadCAM-1) e a atividade da MPO. A diminuição do dano cólico pela Uva pode ser explicada, em parte, pela diminuição da produção de interleucinas pró-inflamatórias (IL-6 e IL-12) que funcionam como fatores quimiotáxicos da inflamação. Por outro lado, a Uva aumentou a produção da citocina antinflamatória IL-10, sendo que esse aumento foi maior que os valores normais obtidos para o grupo salina. Conclui-se, que a Uva mostrou habilidade em modular enzimas antioxidantes, além de aumentar a produção de IL-10 o que, provavelmente, reduziu a produção de citocinas pró-inflamatórias e, consequentemente, a expressão de mediadores inflamatórios. / Abstract: Despite the range of therapeutic possibilities, there is still no ideal treatment for inflammatory bowel disease (IBD), with the right profile of efficacy and safety. For this reason, it is of great interest to study agents with little side effect, which preferably form part of the diet and that treats / prevents such diseases. In this context, emerged the interest in studying Grape, fruit with high content of flavonoids and dietary fiber, two compounds that improve the healthy. It is known that antioxidants and short chain fatty acids (SCFA), especially butyric acid, obtained from the fermentation of dietary fiber, may be involved in the prevention and treatment of intestinal diseases. The butyric acid is a substrate for the repair of inflamed tissue and inhibits pro-inflammatory factors; for that reason, to quantify the production of this acid is mandatory, given that the higher the production, the greater the efficiency of the diet for tissue recovery. Therefore, an in vitro analysis showed that the concentration of 0.5 g of Grape was the one that produced the greatest amount of butyrate in the analysis by ion chromatography. After choosing the concentration of the fruit, the next step was an in vivo study where was used the dose 0,5 g.kg-1. At first, was checked the antioxidant action through the analysis of the levels of GSH and the activity of antioxidants enzimas like GSSG-Rd, GSH-Px and SOD in rats with colitis induced by trinitrobenzenosulfonic acid (TNBS). Animals treated with Grape showed high levels of GSH, the activities of GSSG-Rd, GSH-Px remained close to the group without colitis. The activity of SOD, which was also drastically reduced in the TNBS group, was restored in the treated group. The treatment with Grape was able to exert intestinal anti-inflammatory effect, since the treated animals showed lower scores of the lesion and reduced some proinflammatory mediators such as MPO activity, COX-2, NF-_B and the intestinal adhesion molecule MadCAM-1 expression. The decrease in colonic damage can be explained, partially, by the action of the Grape that decreased the production of pro-inflammatory interleukins (IL-6 and IL-12) that act as chemotactic factors of inflammation. On the other hand, the treatment of Grape increased the production of anti-inflammatory cytokine, such as IL-10, and this increase was higher than normal values showed by the saline group. It can be concluded that the Grape showed ability to modulate the antioxidant enzymes and increased the production of IL-10. Probably, the increased of the levels of this interleukin resulted in a decrease in the production of proinflammatory cytokines and, consequently, in a decrease the expression of inflammatory mediators. / Doutorado / Fisiologia / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientadores: Desanka Dragosavac, Luis Alberto Magna / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-15T12:28:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Kosour_Carolina_D.pdf: 5835134 bytes, checksum: f6d1efdf0f5f0705f3ba5432ea02cab5 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Introdução: A operação cardíaca com utilização da circulação extracorpórea (CEC) está associada ao desenvolvimento da resposta inflamatória sistêmica e, como conseqüência, à disfunção pulmonar. O uso de ultrafiltração no intra-operatório tem sido proposto para remoção dos mediadores inflamatórios liberados durante a CEC, na tentativa de minimizar a resposta inflamatória. Objetivo: Avaliar o efeito da ultrafiltração nos níveis séricos de interleucinas, fator de necrose tumoral-alfa e na função pulmonar de pacientes submetidos à revascularização do miocárdio. Método: Foi realizado um estudo clínico, prospectivo, randomizado, com 40 pacientes, divididos em dois grupos, em um hospital terciário. Um grupo foi submetido à ultrafiltração (UF) durante a CEC e outro grupo (controle), não. Foram mensurados interleucinas (IL-ip, IL-6, IL-8), fator de necrose tumoral alfa (TNF-a), índices de troca gasosa pulmonar [PaO2/FiO2, D(A-a)O2 e VD/VT] e mecânica ventilatória (Cst e Raw) nos períodos pré-operatório, intra-operatório e dois dias de pós-operatório. As interleucinas e TNF-a foram analisadas também no perfusato, no grupo teste. Resultados: Houve aumento de IL-ip (30 minutos após a CEC e 12 horas após a operação) e IL-6 (24 e 36 horas após a operação) no grupo UF comparado ao grupo controle. Houve aumento de IL-6 em todos os tempos comparados ao tempo inicial, em ambos os grupos. Foi observada diminuição da IL-8 cinco minutos antes da CEC e aumento seis, i2, 24, e 36 horas após operação, além de aumento de TNF-a nos tempos 30 minutos após CEC, 24, 36 e 48 horas após operação. Na análise do líquido ultrafiltrado foi identificada a presença de TNF-a e das demais IL-ip, IL-6, IL-8, somente em traços. Na função pulmonar, houve piora da PaO2/FiO2, D(A-a)O2, VD/VT, cinco minutos antes da CEC, além da diminuição da D(A-a)O2 30 minutos após CEC, seis,i2, 24 e 36 horas após operação. Houve aumento da complacência estática pulmonar (Cst) e queda da resistência de vias aéreas (Raw) cinco minutos antes da CEC, além da queda da Raw seis horas após a operação nos dois grupos. Conclusão: A utilização de ultrafiltração aumentou o nível sérico das IL-i e IL-6, não interferindo na troca gasosa e na mecânica pulmonar de pacientes submetidos à revascularização do miocárdio / Abstract: Introduction: Cardiac surgery with cardiopulmonary bypass (CPB) is associated with the development of systemic inflammatory response and, in consequence, pulmonary dysfunction. The use of ultrafiltration intraoperatively has been proposed to remove inflammatory mediators released during CPB in an attempt to minimize the inflammatory response. Objective: Evaluating the effect of ultrafiltration on the serum levels of interleukin, tumor necrosis factor alpha and pulmonary function in patients undergoing myocardial revascularization. Methods: It was carried out a prospective randomized clinical trial on 40 patients divided into two groups, in a tertiary hospital. One group was submitted to ultrafiltration (UF) during CPB whereas the other group (control), was not. It were mensured interleukins (IL-ip, IL-6, IL-8), tumor necrosis factor alpha (TNF-a), pulmonary gas exchange indexes [PaO2/FiO2, D(A-a)O2 and VD/VT] as well as respiratory mechanics (Cst e Raw) in the preoperative and intraoperative periods and postoperatively. The interleukins and TNF-a were also analyzed in the perfusate in the test group. Results: There was an increase in IL-ip (30 minutes after CPB and 12 hours after surgery) and in IL-6 (24 and 36 hours after surgery) in the UF group by comparison with the control one. There was also an increase in IL-6 at all schedulled times compared to the initial period in both groups. It was noticed a decrease in IL-8 five minutes before CPB and an increase six, i2, 24 and 36 hours after surgery in addition to an increase in TNF- a at the times 30 minutes after CPB, 24, 36 and 48 hours after surgery. On analyzing the ultrafiltrated fluid it was identified the presence of TNF-a and the other IL-ip, IL-6, IL-8 only in traces. Regarding pulmonary function, there was a worsening of PaO2/FiO2, D(A-a)O2, and VD/VT five minutes prior to CPB in addition to a decrease in D(A-a)O2 30 minutes after CPB, six, 12, 24 and 36 hours after surgery. There was an increase in the pulmonary static compliance, and a fall of the airway resistance five minutes before CPB. Also, there was a fall of the airway resistance six hours after surgery in both groups. Conclusion: The use of ultrafiltration has increased the serum levels of IL-1 and IL-6 without interfering with the pulmonary gas exchange and respiratory mechanics in patients undergoing myocardial revascularization / Doutorado / Pesquisa Experimental / Doutor em Cirurgia