Introdução: A lesão de isquemia e reperfusão (I/R) intestinal pode causar danos celular e tecidual local e em órgãos a distância. Alguns fatores podem estar envolvidos nesses processos, tais como: a geração de espécies reativas de oxigênio, mediadores inflamatórios, óxido nítrico (NO) e estresse do retículo endoplasmático (RE). Devido ao envolvimento do estresse oxidativo nas lesões de I/R intestinal, algumas opções terapêuticas com antioxidantes estão sendo estudadas e testadas nas lesões de I/R intestinal. Objetivo: Avaliar o efeito local e sistêmico da glutamina no intestino e fígado de animais submetidos à I/R intestinal. Métodos: Foram utilizados 20 ratos wistar machos divididos em quatro grupos: Sham operated (SO), Glutamina+Sham operated (G+SO), Isquemia e reperfusão intestinal (I/R); Glutamina+Isquemia e reperfusão intestinal (G+I/R). Os animais foram anestesiados e, após, realizada a laparotomia mediana e identificação da artéria mesentérica superior. A artéria foi clampeada por 30 e após esse tempo, os animais foram mantidos por mais 15 minutos em reperfusão intestinal. A glutamina foi administrada por via intraperitoneal, na dose de 25 mg/Kg diluída em 1 mL de solução fisiológica. O tratamento foi realizado uma vez ao dia, durante 48 horas antes da indução da isquemia. Foram realizadas análises séricas para a função de integridade hepática através das enzimas aspartato aminotransferase (AST), alanina aminotransferase (ALT) e fosfatase alcalina (FA) e danos ao DNA pelo ensaio cometa. Realizamos a análise histológica dos tecidos através da coloração de Hematoxilina-Eosina e imunohistoquímica para avaliar a quantidade de células marcadas com os anticorpos monoclonais IL-1β, IL-6, TNF-α e NF-B no intestino e fígado. O homogeneizado do intestino e fígado foram utilizados para a avaliação dos níveis de lipoperoxidação (LPO) através das substâncias que reagem ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), avaliação da atividade das enzimas antioxidantes catalase (CAT), superóxido dismutase (SOD) e glutationa peroxidase (GPx), determinação dos níveis de glutationa (GSH), avaliação dos metabólitos do óxido nítrico (nitritos/nitratos) e para as análises moleculares das proteínas iNOS, NF-B, Nrf2, Keap1, SOD, NQO1, HSP70, GRP78 e ATF-6 por Western Blot. Resultados: O pré-tratamento com glutamina reduziu os níveis de LPO, óxido nítrico, danos ao DNA, bem como as enzimas de integridade hepática. Observamos que a glutamina foi eficaz na preservação da arquitetura tecidual do intestino e fígado dos animais submetidos a I/R intestinal, reduzindo parâmetros como infiltrado inflamatório, perda das vilosidades intestinais e necrose. Constatou-se que a glutamina ativou a via do Nrf2 e as enzimas antioxidantes, reduziu o dano celular, e inibiu o estresse do RE, além de reduzir os mediadores do processo inflamatório. Conclusão: Neste estudo, sugerimos que o pré-tratamento com a glutamina desempenhou um papel protetor tanto no intestino como no fígado dos animais submetidos a I/R intestinal, demonstrado pelas análises estudadas, possivelmente pela sua ação antioxidante e anti-inflamatória. / Background: Injury by intestinal ischemia and reperfusion (I/R) can cause local and cellular damage to tissues and organs at distance. Some factors may be involved in those processes, such as the generation of reactive oxygen species, inflammatory mediators, nitric oxide (NO) and endoplasmic reticulum stress. Due to the involvement of oxidative stress in intestinal I/R lesions, some therapeutic options with antioxidants are being studied and tested in order to reduce these damages. Objective: To evaluate the local and systemic effect of glutamine in the intestine and liver of animals submitted to intestinal I/R. Methods: Twenty male Wistar rats were divided into four groups: Sham operated (SO), Glutamine+Sham operated (G+SO), Intestinal Ischemia and reperfusion (I/R); Glutamine+intestinal ischemia and reperfusion (G+I/R). The animals were anesthetized and after we performed the median laparotomy and identification of the superior mesenteric artery. The artery was clamped for 30 minutes and after that the animals were maintained for another 15 minutes in intestinal reperfusion. Glutamine was administered intraperitoneally at a dose of 25 mg/kg diluted in 1 ml of saline solution. Treatment was performed once daily for 48 hours prior to induction of ischemia. Serum samples for hepatic integrity were collected, and the enzymes aspartate aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT) and alkaline phosphatase (FA) were accessed. DNA damage was evaluated by the comet assay. We performed the histological analysis of the tissues through the staining of Hematoxylin-Eosin and immunohistochemistry, in order to evaluate the amount of cells labeled with the monoclonal antibodies IL-1β, IL-6, TNF-α and NF-B in the intestine and liver. The intestinal and liver homogenates were used to evaluate the levels of lipoperoxidation (LPO) through thiobarbituric acid reactive substances (TBARS), evaluation of the activity of antioxidant enzymes catalase (CAT), superoxide dismutase (SOD) and glutathione peroxidase (GPx), determination of glutathione levels (GSH) and nitric oxide (nitrites/nitrates), and for the molecular analyzes of the iNOS, NF-B, Nrf2, Keap1, SOD, NQO1, HSP70, GRP78 and ATF-6 proteins we performed Western blot analysis. Results: Pretreatment with glutamine reduced levels of LPO, nitric oxide, DNA damage, as well as liver integrity enzymes. We observed that glutamine was effective in preserving the intestinal and liver tissue architecture of animals submitted to intestinal I/R, reducing parameters such as inflammatory infiltrate, loss of intestinal villi and necrosis. It was found that glutamine activated the Nrf2 pathway and antioxidant enzymes, reduced cell damage, and inhibited endoplasmic reticulum stress in addition to reducing mediators of the inflammatory process. Conclusion: In this study, we suggest that pretreatment with glutamine played a protective role in both intestine and liver of animals submitted to intestinal I/R, demonstrated by the present analyzes, possibly for its antioxidant and anti-inflammatory action.

Avaliamos a função cardíaca frente a Isquemia e reperfusão, em corações isolados de ratas intactas, com hipotireoidismo (Hipo), hipotireoidismo subclínico (HTS), redução dos níveis de hormônios ovarianos (OO) e a ambas condições (HTS+OO). Na estabilização, a Pressão Desenvolvida pelo Ventrículo Esquerdo (LVDP), Pressão Diastólica Final (EDP) e Pressão de Perfusão não diferiram. Porém, a Primeira Derivada Positiva das Pressões (+dP/dt), Primeira Derivada Negativa das Pressões (-dP/dt) e frequência cardíaca foram menores no grupo Hipo. Na reperfusão, os corações Hipo tiveram EDP, +dP/dt e -dP/dt semelhantes a estabilização. Assim, sugere-se que o HTS, a OO e o HTS + OO não alteraram a recuperação cardíaca após a isquemia. E que o Hipo é resistente à lesão por isquemia, apesar da função cardíaca deprimida. / We evaluate the cardiac function in relation to an ischemia and reperfusion event in hearts isolated from intact rats, With hypothyroidism (Hypo), subclinical hypothyroidism (HTS), decreased levels of ovarian hormones (OO) and both conditions (HTS + OO). At etabilization the Left Ventricle Developed Pressure (LVDP), Final Diastolic Pressure (EDP) and Perfusion Pressure did not differ. However, the First Positive Pressure Derivative (+ dP / dt), First Negative Pressure Derivative (-dP / dt) and heart rate were lower in the Hypo group. On reperfusion the hypothyroid hearts presented EDP, + dP / dt and -dP / dt Similar to stabilization. Thus, it is suggested that HTS, a OO e o HTS + OO Did not change cardiac recovery after ischemia.Is that hipo is resistant to ischemia injury, despite depressed cardiac function.

O escopo dete trabalho é verificar a influência de episódios agudos de hipoxemia e subsequente reoxigenação sobre marcadores inflamatórios e sobre sinalizadores de integridade da função endotelial. / The aim of this study is to verify the effect of acute hipoxemia and subsequente reoxigenation over inflammatory markers and indicators of integrity of the endothelial function.

A técnica de isquemia-reperfusão tem sido utilizada em cirurgias conservadoras do rim como a nefrectomia parcial e em transplantes renais. Para se realizar a isquemia pode-se fazer o bloqueio do fluxo sanguíneo da artéria renal ou o bloqueio simultâneo da artéria e da veia renal. O evento isquêmico acarreta em dano celular ao rim principalmente pelo estresse oxidativo local e a liberação de radicais livres assim como o aumento da resposta inflamatória. Diversos autores verificaram lesão renal após a isquemia-reperfusão, porém, apenas testes funcionais foram realizados até o momento. Os autores que tentaram avaliar a lesão morfológica do rim apenas fizeram a quantificação de escores subjetivos. O nosso objetivo é avaliar por quantificação estereológica o dano causado pela isquemia-reperfusão comparando o clampeamento somente arterial com o clampeamento arteriovenoso. Utilizamos 24 ratos wistar, machos, de quatro meses de idade. Os animais foram divididos em três grupos: o grupo Sham (n=8), o grupo de clampeamento somente da artéria renal (n=8) e o grupo de clampeamento simultâneo da artéria e da veia renal (n=8). Os animais foram submetidos a laparotomia mediana. Os animais do grupo Sham permaneceram os 60 minutos anestesiados mas sem obstrução do fluxo sanguíneo de seus vasos renais. Os animais do grupo de clampeamento arterial foram submetidos à clampeamento de sua arterial renal esquerda por 60 minutos e os animais do grupo de clampeamento arterial e venoso tiveram seus vasos renais esquerdos clampeados simultaneamente e em bloco pelo mesmo tempo. Após os 60 minutos os animais foram suturados e mantidos por 30 dias em caixas próprias sendo mortos por sobredose anestésica após decorrido esse tempo. Os rins foram coletados e mantidos em solução de formalina tamponada e posteriormente processados para análise histológica e estereológica. Foram analisados a densidade volumétrica (Vv) dos glomérulos, o número de glomérulos/mm3(Nv) e o volume glomerular médio (VGM). A Vv e Nv se encontrou reduzida nos rins esquerdos submetidos à isquemia mas foi somente significativa nos animais do grupo de clampeamento arterial e venoso. Mesmo usando o rato como modelo animal experimental, a partir de nossos resultados recomendamos o uso do clampeamento somente arterial nos casos em que mínina lesão ao rim é imperiosa. / The ischemia-reperfusion has been used in renal surgery such as conservative partial nephrectomy and kidney transplantation. To perform ischemia we can block the blood flow of renal artery or simultaneous blockade of the renal artery and vein. The ischemia leads to cellular damage to the kidney mainly by local oxidative stress and releasing free radicals as well as increased inflammatory response. Several authors related renal injury after ischemia-reperfusion, however; only functional tests were carried out to date. The authors attempted to evaluate the morphological lesion of the kidney using subjective scores. Our goal is assess by stereological quantification of the renal parenchyma after ischemia-reperfusion injury comparing arterial only clamping and arteriovenous clamping. We used 24 Wistar rats, males, four months old. The animals were divided into three groups: Sham group (n = 8), the group of clamping of the renal artery (n = 8) and the group of simultaneous clamping of renal artery and vein (n = 8). The animals underwent laparotomy. Sham group animals remained anesthetized for 60 minutes without blood flow obstruction of their renal vessels. The group animals underwent arterial clamping have had his left renal artery clamped for 60 minutes and the animals in the group of arterial and venous clamping had their left renal vessels clamped simultaneously for the same time. After 60 minutes the animals were sutured and kept for 30 days in their own boxes being killed by anesthetic overdose after that. The kidneys were collected and kept in formaldehyde solution and subsequently processed for histological and stereological analysis. We analyzed the volume density (Vv) of the glomeruli, the number of glomeruli/mm3 (Nv) and mean glomerular volume (MGV). The Vv and Nv was reduced in the ischemic left kidney but was only significant in animals of the group of arterial and venous clamping. Even using the rat as experimental animal model, from our results we recommend the use of arterial clamping only in cases where minimum injury to the kidney is imperative.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:06Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-02-22Bitstream added on 2014-06-13T19:40:58Z : No. of bitstreams: 1 francischetti_i_dr_botfm.pdf: 3036523 bytes, checksum: 16d5951b642a829416e73e1b1c9c6644 (MD5) / O uso da circulação extracorpórea desencadeia uma resposta inflamatória sistêmica, que somada às reações em cadeia relacionadas à isquemia-reperfusão de coração e pulmões pode levar a lesões celulares e até falência de órgãos no pós-operatório de cirurgia cardíaca. Vários estudos foram feitos visando melhor entendimento desses processos inflamatórios associados à circulação extracorpórea. Assim, esta revisão abordará os mecanismos de isquemia-reperfusão cardiopulmonar a ativação da cascata inflamatória por esse processo e o papel dos leucócitos na fisiopatologia destas lesões. Serão consideradas as interações de proteínas imunomoduladoras na resposta leucocitária e o bloqueio das mesmas por meio de filtros biológicos, do uso de anticorpos monoclonais e do estímulo à apoptose. / The use of extracorporeal circulation starts a whole body inflammatory response that when added with a chain reactions related to heart and lung ischemia-reperfusion may cause cellular injuries and organ failures in the cardiac surgery pos-operative period. Many studies were made to achieve better comprehension of the inflammatory process that occur with use of extracorporeal circulation. So, this review discusses the ischemia- reperfusion events, their large activated inflammatory cascade as well as the leukocytes role on the pathophysiology of their associated injuries. The interactions of immunomodulatory proteins with the leukocitary response and their blockade through leukocytes filters, the monoclonal antibody use and the apoptosis stimuli will be approached too.

Orientador: Norma Suelei Pinheiro Módolo / Banca: Geraldo Rolim Rodrigues Junior / Banca: Luiz Antonio Vane / Banca: Antonio Argolo Sampaio Filho / Banca: Rodrigo Leal Alves / Resumo: Justificativa e Objetivo: a lesão renal aguda(LRA) determina um aumento na morbidade e na mortalidade de pacientes hospitalizados. O diagnóstico precoce e a realização de medidas de proteção renal são essenciais. Foi observado que o pantoprazol possui efeito similar ao précondicionamento isquêmico em corações de ratos, promovendo efeito protetor. O objetivo deste experimento foi analisar o emprego do pantoprazol na proteção de rins submetidos à lesão de isquemia e reperfusão em ratos sob anestesia geral inalatória com isoflurano. Método: quarenta ratos, Wistar, machos, foram distribuídos aleatoriamente em quatro grupos: PIR (pantoprazol + isquemia artéria renal esquerda), P (pantoprazol), IR (isquemia renal esquerda) e Sham. O tempo de isquemia renal foi de 20 minutos e o de reperfusão, 30 minutos. Anestesia inalatória com isoflurano foi a técnica anestésica realizada. A dose administrada de pantoprazol foi de 192 mcg/kg. Todos os animais foram submetidos à nefrectomia direita e ao final do experimento procedeu-se nefrectomia esquerda, para posterior avaliação histológica e classificação por meio de escala de necrose tubular. Os atributos estudados foram: pressão arterial média (PAM), temperatura retal, os critérios de RIFLE e AKIN, dosagem urinária dos biomarcadores NGAL, KIM-1 e IL-8 e avaliação histológica. A creatinina sérica foi coletada em três momentos: M1, após monitorização; M2, após a reperfusão; e M3, 24 horas após o inicio do experimento. As coletas de urina para dosagem dos biomarcadores ocorreram antes (Urina 1) e após o experimento (Urina 2). Os atributos foram submetidos à análise estatística e as diferenças foram consideradas estatisticamente significativas quando p<0,05. Resultados: diferenças estatisticamente significativas foram observadas entre os grupos com aplicação dos critérios de RIFLE (p=0,007) e AKIN (p-0,003). Os grupos PIR e IR evoluíram com maior incidência de... / Abstract: Background and Objective: acute kidney injury (AKI) determines an increase in morbidity and mortality of hospitalized patients. Early diagnosis and the realization of renal protection measures are essential. It was observed that pantoprazole has effect similar to ischemic preconditioning in rat hearts, promoting protective effect. The objective was to analyze the use of pantoprazole in protecting kidneys subjected to ischemia and reperfusion in rats under inhalation anesthesia with isoflurane. Method: forty rats, Wistar male rats, were randomly divided into four groups: RIP (pantoprazole + left renal ischemia), P (pantoprazole), IR (left renal ischemia) and Sham. Renal ischemia time was 20 minutes and reperfusion 30 minutes. The anesthetic technique performed: inhalation anesthesia with isoflurane. The pantoprazole dose was 192 mcg/kg. All animals underwent right nephrectomy and at the end of the experiment proceeded to left nephrectomy for subsequent histological evaluation and classification through tubular necrosis scale. The parameters were: mean arterial pressure (MAP), rectal temperature, the criteria of RIFLE and AKIN, urinary dosage of biomarkers NGAL, KIM-1 and IL-8 and histological evaluation. Serum creatinine was collected in three moments: M1, after monitoring, M2, and M3 after reperfusion, 24 hours after the beginning of the experiment. The urine samples to test for biomarkers occurred before (Urine 1) and after the experiment (Urine 2). The attributes were subjected to statistical analysis and differences were considered statistically significant when p <0,05. Results: significant differences were observed between the groups with application of RIFLE criteria (p=0.007) and AKIN (p=0.003). The PIR and IR groups evolved with higher incidence of AKI. The NGAL and KIM-1 biomarkers increased in all groups throughout the experiment, but with higher values in the PIR and IR groups. IL-18 revealed no group effect (p=0.38) nor the ... / Doutor

Orientador: Winston Bonetti Yoshida / Banca: Carlos Eli Piccinato / Banca: Marcone Lima Sobreira / Banca: Ana Terezinha Guilaumon / Banca: Valter Castelli / Resumo: O uso da circulação extracorpórea desencadeia uma resposta inflamatória sistêmica, que somada às reações em cadeia relacionadas à isquemia-reperfusão de coração e pulmões pode levar a lesões celulares e até falência de órgãos no pós-operatório de cirurgia cardíaca. Vários estudos foram feitos visando melhor entendimento desses processos inflamatórios associados à circulação extracorpórea. Assim, esta revisão abordará os mecanismos de isquemia-reperfusão cardiopulmonar a ativação da cascata inflamatória por esse processo e o papel dos leucócitos na fisiopatologia destas lesões. Serão consideradas as interações de proteínas imunomoduladoras na resposta leucocitária e o bloqueio das mesmas por meio de filtros biológicos, do uso de anticorpos monoclonais e do estímulo à apoptose. / Abstract: The use of extracorporeal circulation starts a whole body inflammatory response that when added with a chain reactions related to heart and lung ischemia-reperfusion may cause cellular injuries and organ failures in the cardiac surgery pos-operative period. Many studies were made to achieve better comprehension of the inflammatory process that occur with use of extracorporeal circulation. So, this review discusses the ischemia- reperfusion events, their large activated inflammatory cascade as well as the leukocytes role on the pathophysiology of their associated injuries. The interactions of immunomodulatory proteins with the leukocitary response and their blockade through leukocytes filters, the monoclonal antibody use and the apoptosis stimuli will be approached too. / Doutor

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Objetivo: Avaliar os efeito da ornitina &#945;-cetoglutarato (OKG) no sangue e tecido intestinal de ratos submetidos à isquemia/reperfusÃo intestinal atravÃs da determinaÃÃo das concentraÃÃes in vivo no sangue e no tecido do intestino delgado, submetido a isquemia/reperfusÃo, de glicose, G 6 PDH, piruvato, acetoacetato, lactato, 3 HBDH, glutationa, T-Bars, mieloperoxidase, CPK e LDH. MÃtodo: Sessenta ratos (Rattus norvergicus albinus, Rodentia Mammalia) foram distribuÃdos aleatoriamente em cinco grupos de 12 animais: Sham 0â (s0â), Sham 30â (s30â), Sham 60â (s60â), Isquemia (i30â), ReperfusÃo (r30â). Estes grupos foram distribuÃdos em subgrupos de acordo com o tempo e com o composto utilizado na gavagem. Todos os animais receberam gavagem de caseinato de cÃlcio ou OKG em dose Ãnica, trinta minutos antes da laparotomia exploradora (LE). Os subgrupos s0âCaCa s30âCaCa, s60âc, i30âCaCa e r30âCaCa receberam apenas caseinato, de cÃlcio. Os subgrupos s0âOKG, s30âOKG, s60âOKG, i30âOKG e r30âOKG receberam OKG na dose de 5g/kg de peso. As amostras foram colhidas em cinco momentos: imediatamente apÃs a LE; apÃs 30 minutos da LE; ApÃs 1h da LE; ApÃs 30 minutos de isquemia; ApÃs 30 minutos de reperfusÃo. A estatÃstica discritiva foi expressa atravÃs da mÃdia, erro e desvio padrÃo, acompanhando-se pelo intervalo de confianÃa da mÃdia a 95% . Para comparar os valores prà e pÃs-procedimentos nas concentraÃÃes das variÃveis estudadas foram empregados os teste âtâ de Student pareado (para variÃncia homogÃnea e heterogÃnea) e ANOVA apÃs anÃlise de normalidade atravÃs do teste Kolmogorov-Smirnov. Quando observou a nÃo normalidade aplicou-se o teste de Kruskal-Wallis. Resultados: Os resultados apontaram um aumento significativo na lactacemia (1.186 + 0,18 versus 0,794 + 0,06, p<0,01) nos animais que receberam OKG em relaÃÃo ao controle nos subgrupos isquemia trinta minutos (i30â). No tecido intestinal reperfundido (r30â) ocorreu reduÃÃo significativa da concentraÃÃo de lactato (0,107 + 0,01 versus 0,266 + 0,02, p<0,05) nos animais recipientes de OKG em relaÃÃo ao animais controle, O piruvato plasmÃtico e tecidual se mostrou significantemente reduzido (0,146 + 0,24 versus 0,156 + 0,17 e 0,094 + 0,02 versus 0,248 + 0,03, p<0,05) apÃs o perÃodo de reperfusÃo de trinta minutos nos animais recipientes da OKG em relaÃÃo aos animais controle. Houve reduÃÃo significativa da concentraÃÃo do acetoacetato no tecido intestinal nos tempos pÃs isquemia e pÃs reperfusÃo dos animais recipientes da OKG (0,57 + 0,01 versus 0,0685 + 0,01 e 0,128 + 0,04 versus 0,156 + 0,03,*p<0,05) quando comparados ao animais nÃo tratados. A glicose 6 PDH apresentou reduÃÃo significativa da sua concentraÃÃo plasmÃtica no tempo isquemia trinta minutos dos animais recipientes da OKG em relaÃÃo aos nÃo tratados ( 0,1442 + 0,048 versus 1,1098 + 0,0796, *p<0,05) , ocorrendo o mesmo na concentraÃÃo tecidual, no pÃs isquemia (0,1002 + 0,02 versus 0,147 + 0,0264, p<0,05). A LDH apresentou elevaÃÃo significativa da sua concentraÃÃo nos animais recipientes da OKG em relaÃÃo ao controle (278,01 + 51,52 versus 132,93 + 12,54, *p<0,05) no grupo isquemia (i30â) . Ocorreu reduÃÃo significativa da CPK no grupo reperfusÃo (r30â) dos animais recipientes da OKG em comparaÃÃo aos animais controle (115,13 + 11,77 versus 166,70+6,23,p<0,05). A glutationa tecidual apresentou elevaÃÃo significativa no sham OKG 30 minutos em relaÃÃo ao nimais controle (59,17 + 2,39 versus 25,09 + 1.53, p<0,05) e reduÃÃo significante no tempo isquemia, tanto nos animais OKG quanto CaCa. Durante o perÃodo de reperfusÃo a glutationa nÃo apresentou alteraÃÃes significativas entre os animais tratados e controle. A OKG influenciou de maneira significativa na reduÃÃo da concentraÃÃo da 3HDBH tecidual no tempo i30â (0,062 + 0,01 versus 0,075 + 0,02,p<0,01) Esta diferenÃa significativa foi mantida no sangue dos animais tratados no grupo reperfusÃo 30âOKG em relaÃÃo aos animais r30âCaCa (0,03 + 0,00 versus 0,0615 + 0,01, p<0,01). A T-bars tecidual apresentou reduÃÃo significante no grupo r30âOKG em comparaÃÃo ao r30âCaCa (0,0522 + 0,03 versus 0,0745 + 0,02, p<0,05), com elevaÃÃo significativa no grupo sham 60âCaCa em relaÃÃo aos animais tratados 0,0937 + 0,02 versus 0,020 + 0,01, p<0,01). A oferta exÃgena da alfa-cetoglutarato nÃo ocasionou nenhuma alteraÃÃo significante nas concentraÃÃes de glicose e mieloperoxidase (MPO) entre os animais do subgrupo experimento quando comparados aos do subgrupo controle. ConclusÃes: Os procedimentos realizados foram suficientes para desencadear alteraÃÃes significativas em alguns metabÃlitos estudados. O modelo de isquemia-reperfusÃo demonstrou efetividade. A oferta exÃgena OKG, em dose Ãnica por gavagem, sugere aumento na atividade prÃ-glicolÃticas aerÃbica a nÃvel tecidual e sistÃmico; proteÃÃo contra lesÃo celular do tecido intestinal, e efeito antioxidante tecidual e sistÃmico durante a lesÃo de isquemia e apÃs a lesÃo de reperfusÃo / Objective: To evaluate the effect of ornithine alpha-ketoglutarate (OKG) in the blood and intestinal tissue of rats submitted to intestinal ischemia/reperfusion, using the blood concentrations of glucose, G6PDH, pyruvate, acetoacetate, lactate, 3HBDH, glutathione, T-Bars, myeloperoxydase, CPK and LHD, evaluated in vivo on these tissues. Methods: Sixty rats (Rattus norvergicus albinus, Rodentia Mammalia) were selected and aleatorily distributed in five groups of twelve animals, which were: Sham0â(s0â), Sham30â(s30â), Sham60â(s60â), Isquemia(i30â), ReperfusÃo(r30â). These groups were distributed in subgroups according to the time and the compost used to the âgavagemâ. All de animals received the âgavagemâ with calcium caseinate or okg, only one dosage, thirty minutes before the exploratory laparotomy (EL). The subgroups s0âCa, s30âCa, s60âCa, i30âCa and r30âCa received only calcium caseinate. The subgroups s0âokg, s30âokg, s60âokg, i30âokg and r30âokg received 5g of okg par each kilogram. The samples were taken in five moments: immediately passed the EL; passed 30 minutes of the EL; passed 60 minutes of the EL; passed 30 minutes of the isquemia; passed 30 minutes of the reperfusion. The descriptive statistics were media, error and standard deviation. The values before and after the procedures were compared using the âtâ test (âStudent pareadoâ to homogeny and heterogeny variation) and ANOVA. Then, it was used Kolmogorov-Smirnov to compare the normal results. The results were not normal, it was used the Kruskal-Wallis test. Results: It was shown an improvement on the blood lactate(1.186 + 0,18 versus 0,794 + 0,06, p<0,01) to the animals that received okg from i30â. A reduction on blood lactate lactato (0,107 + 0,01 versus 0,266 + 0,02, p<0,05) was noticed in the group r30â that received okg. It occurred a reduction on plasmatic and tissue pyruvate reduzido (0,146 + 0,24 versus 0,156 + 0,17 and 0,094 + 0,02 versus 0,248 + 0,03, p<0,05) to the group r30â that received okg. The acetoacetate was reduced to both groups, isquemia and reperfusion, that received okg0,57 + 0,01 versus 0,0685 + 0,01 e 0,128 + 0,04 versus 0,156 + 0,03,*p<0,05). The plasmatic glucose was reduced to the group i30â( 0,1442 + 0,048 versus 1,1098 + 0,0796, *p<0,05) treated with okg and the same happened to the tissue glucose after isquemia (0,1002 + 0,02 versus 0,147 + 0,0264, p<0,05). The LDH had an improvement (0,1002 + 0,02 versus 0,147 + 0,0264, p<0,05) to the group i30â treated with okg. CPK was reduced (115,13 + 11,77 versus 166,70+6,23,p<0,05) to the group r30â treated with okg. The tissue glutathione had an improvement to sham okg 30â (59,17 + 2,39 versus 25,09 + 1.53, p<0,05) and a reduction on isquemia period to the animals treated with okg and CaCa . 3HBDH was reduced (0,062 + 0,01 versus 0,075 + 0,02,p<0,01) in the blood and in the tissues from i30â. This difference was kept to animalsâ blood from r30âokg when related to r30âCaCa(0,03 + 0,00 versus 0,0615 + 0,01, p<0,01). There was a reduction on tissue T-BARS to r30âOKG when compared to r30âCaCa(0,0522 + 0,03 versus 0,0745 + 0,02, p<0,05) and an improvement to sham60âCaCa(0,0937 + 0,02 versus 0,020 + 0,01, p<0,01). Glicose and Myeloperoxydase were not affected by the use of okg. All the results were compared to the respective control groups. Conclusion: The used procedures could bring useful results to metabolites in study. The isquemia/reperfusion showed efficiency, offering exogen okg leads to a rising on glicolitic and aerobic activity to tissues and systems. This offer protects yet from the tissue injury and has antioxidant effect during the isquemia/reperfusion injury.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / A obstruÃÃo das artÃrias uterinas promove isquemia e/ou necrose no Ãtero, no entanto nÃo se conhece com que intensidade essas lesÃes ocorrem. Os objetivos deste estudo sÃo: descrever e padronizar uma tÃcnica de ligadura da artÃria uterina (LAU) direita em ratas nÃo grÃvidas e avaliar os efeitos deste modelo em Ãteros e ovÃrios de ratas. Estudo experimental, utilizando 64 ratos, 48 fÃmeas e 16 machos (Rattus norvergicus, variedade albina) maduros, de fertilidade comprovada. As ratas foram alocadas aleatoriamente em 8 grupos, de seis indivÃduos. Quatro grupos foram submetidos à tÃcnica de LAU direita e sacrificados nos dias 1, 7, 14 e 21 apÃs o procedimento. Outros 3 grupos foram acasalados nos dias 1, 7 e 14 apÃs a LAU, e comparados com o grupo controle quanto à fertilidade. ApÃs o sacrifÃcio, eram retirados, para anÃlise histopatolÃgica, os ovÃrios, e os hemi-Ãteros. Realizou-se anÃlise histolÃgica, que avaliou o Ãtero quanto à congestÃo, hemorragia, edema intersticial e perda de coesÃo celular atravÃs de um escore que varia de 0 a 3. Os ovÃrios foram avaliados de acordo com o nÃmero de folÃculos em desenvolvimento e corpos lÃteos. Para a anÃlise estatÃstica foi utilizado o software SPSS (Statistical Package for Social Sciences) versÃo 13.0, p < 0,05 foi considerado estatisticamente significativo. O projeto de pesquisa foi enviado para a ComissÃo de Ãtica em Pesquisa Animal (CEPA) da Universidade Federal do CearÃ, com protocolo de nÃmero 90/08. O modelo da tÃcnica foi realizado em ratas nÃo-grÃvidas utilizando a ligadura na porÃÃo inferior da artÃria uterina direita, mantendo o hemi-Ãtero esquerdo (HUE) como controle. Em nenhum momento dos dias de sacrifÃcio, apÃs a LAU (1, 7, 14 e 21 dias), houve diferenÃa entre os escores histolÃgicos de isquemia dos hemi-Ãteros direitos (HUD) distais e proximais (p > 0,05). Os escores histolÃgicos de isquemia dos hemi-Ãteros direitos no decorrer do tempo aumentaram substancialmente a partir do 7 dia (p=0,003). Da mesma maneira ocorreu com os hemi-Ãteros esquerdos (p=0,001). A Ãnica diferenÃa significativa observada na comparaÃÃo dos escores dos hemi-Ãteros direito e esquerdo ocorreu no 1 dia apÃs LAU (p=0,026), à custa de congestÃo. Os ovÃrios esquerdos nÃo apresentaram alteraÃÃes no nÃmero de folÃculos e de corpos lÃteos apÃs LAU e, os ovÃrios direitos apresentaram nÃmero de folÃculos e corpos lÃteos semelhante ao controle a partir do 21 dia da LAU. A percentagem de ratas grÃvidas que foram submetidas a LAU foi de 44,4%, comparado com 100% das ratas controle que engravidaram (p=0,024). Observou-se ainda uma reduÃÃo na mÃdia do nÃmero de fetos por rata (p=0,029). Pode-se concluir que o modelo estabelecido foi efetivo e de fÃcil reprodutibilidade, bem como as alteraÃÃes histolÃgicas encontradas no Ãtero ocorrem de forma discreta. Em relaÃÃo a funÃÃo ovulatÃria, pode-se dizer que o nÃmero de folÃculos e corpos lÃteos dos ovÃrios direitos, a partir do 21 dia, permaneceram semelhantes aos dos esquerdos (controle). A fertilidade, porÃm, mostrou-se reduzida apÃs o estabelecimento desta tÃcnica. / The obstruction of the uterine arteries promotes ischemia or necrosis in the uterus. However it is not known how strongly these injuries occur. The objectives of this study are to describe and standardize a technique of right uterine artery ligation (UAL) in non-pregnant rats and to evaluate the effects of this model in the uteri and ovaries of female rats. An experimental study using 64 rats, 48 females and 16 males (Rattus norvegicus, albino variety) mature, with proven fertility. The rats were randomly allocated into 8 groups of six individuals. Four groups were subjected to the technique of right UAL and sacrificed on days 1, 7, 14 and 21 after the procedure. Other 3 groups were mated on days 1, 7 and 14 after the UAL, and compared with the control group regarding fertility. After sacrifice, ovaries and the hemi-uteri, were removed for histological analysis wich was carried out histological analysis, which evaluated the uteri and the congestion, hemorrhage, interstitial edema and loss of cell cohesion through a score ranging from 0 to 3. Ovaries were evaluated according to the number of follicles and corpora lutea. For statistical analysis we used SPSS software (Statistical Package for Social Sciences) version 13.0, p <0.05 was considered statistically significant. The research project was submitted to the Ethics Committee on Animal Research (ECAR) Federal University of CearÃ, under the number 90/08. The model of the technique was performed in non-pregnant rats using ligation in the lower portion of the right uterine artery, keeping the left hemi-uteri (LHU) as control. At no time during periods of ischemia established (1, 7, 14 and 21 days) there was any difference between the histological scores of ischemia of the right hemi-uteri (RHU) distal and proximal (p> 0.05). The histological scores of ischemia of the right hemi-uteri over time increased significantly from day 7 (p = 0.003), just as occurred with the left hemi-uteri (p = 0.001). The only significant difference observed when comparing the scores of the right hemi-uteri and left occurred on day 1 after UAL (p = 0.026), due to congestion. The left ovary showed no changes in the number of follicles and corpora lutea after UAL, and the right ovary showed a number of follicles and corpora lutea similar to control from the 21th day of UAL. The percentage of pregnant rats that were subjected to ischemia was 44.4%, compared with 100% of control rats that became pregnant (p = 0.024). There was also a reduction in the average number of fetuses per mother (p = 0.029). It can be concluded that the model established was effective and highly reproducible, and histological changes found in the uteri are mild. As to ovulatory function, one can say that the number of follicles and corpora lutea of the right ovaries, after 21 days, remained similar to the left (control). Fertility, however, was reduced after the establishment of this technique.

Este estudo teve como objetivo avaliar as alterações do complexo de glicoproteínas associadas à distrofina que conferem estabilidade estrutural aos cardiomiócitos na isquemia miocárdica induzida pelo isoproterenol. Materiais e Métodos: Ratos Wistar machos foram divididos em dois grupos: grupo controle (SAL), injeção subcutânea de salina, e grupo isoproterenol (ISO), injeção subcutânea de isoproterenol (85mg/kg) diluído em água destilada, em dois dias consecutivos separados por intervalo de 24hs. Os ratos foram mortos 24 horas após a segunda injeção de salina ou isoproterenol. Os corações foram rapidamente excisados, lavados em salina gelada, pesados e colocados em formol PBS por 24hs a 4ºC e incluídos em parafina ou Historesina. Para análise morfométrica, os corações foram cortados transversalmente na porção medioventricular, equidistante entre o ápice e a base, e incluídos em parafina. Áreas dos ventrículos direito e esquerdo, espessura de parede livre dos ventrículos e septo interventricular foram medidas. Os corações cortados frontalmente nas metades anterior e posterior e incluídos em Historesina foram utilizados para avaliação das áreas de miocitólise. Porções hemiventriculares foram congeladas para as reações de imunofluorescência com os seguintes marcadores: distrofina, ?-1 integrina, ?-actina sarcomérica, ?-sarcoglicana, ?-distroglicana, merosina laminina, albumina, CD68, CD45, CD4 e eNOS. A apoptose foi avaliada através do método de TUNEL. A função cardíaca, as dimensões das cavidades ventriculares e a mobilidade de parede foram analisadas através da ecocardiografia. A análise estatística foi realizada através do teste t de Student, com nível de significância de 5%. Resultados e Conclusão: Houve diferença significativa no peso do coração, na taxa de crescimento corporal, na área do ventrículo esquerdo e na espessura de parede do ventrículo direito entre os grupos. Não houve diferença estatística significativa na espessura da parede do ventrículo esquerdo e septo, mas observou-se tendência à diminuição. As áreas de miocitólise representaram 26,89%, 36,12%, 28,15% no ventrículo direito, septo e ventrículo esquerdo, respectivamente. A imunofluorescência mostrou que a distrofina foi a estrutura mais sensível ao dano provocado pelo isoproterenol, seguida pela perda completa da actina. A redução na expressão de ?-sarcoglicana, ?-distroglicana, ?-1 integrina e laminina, foram considerados como epifenômenos. A expressão de eNOS estava praticamente ausente nas áreas de miocitólise. A expressão aumentada de eNOS nos pequenos vasos ao redor das áreas de miocitólise sugere uma resposta compensatória à isquemia provocada pelo isoproterenol na tentativa de melhora do fluxo sangüíneo para as áreas de lesão. Foi observada alteração na permeabilidade sarcolemal nos cardiomiócitos dos animais tratados com isoproterenol com acúmulo de albumina no espaço intracelular. Observou-se que os cardiomiócitos e os macrófagos estavam constante e claramente marcados para apoptose nas áreas de miocitólise. Na ecocardiografia, os diâmetros sistólico e diastólico do ventrículo esquerdo foram significativemente maiores no grupo ISO em comparação com os controles. A fração de ejeção não foi diferente entre os grupos. O escore de mobilidade de parede mostrou hipocinesia ou acinesia nos segmentos apicais nos corações do grupo ISO. Essas mudanças, relacionadas à isquemia, podem explicar as graves alterações na integridade estrutural do sarcolema dos cardiomiócitos e a lesão induzida pelo isoproterenol. Mecanismos compensatórios no curto período de nosso experimento poderiam manter a função cardíaca normal apesar das graves alterações morfológicas encontradas. / This study tested the hypothesis that the dystrophin-glycoprotein complex that confers structural stability in cardiomyocytes was affected in the isoproterenol-induced myocardial ischemia. Materials and Methods: Male Wistar rats were divided in control group (SAL), injected subcutaneously with physiological saline, and isoproterenol-treated group (ISO), injected with isoproterenol (85mg/Kg) diluted in distilled water, in two consecutive days, separated by a 24-hour interval. These rats were killed 24 hours after the second injection of isoproterenol or physiological saline. The hearts were rapidly removed, rinsed in ice-cold 0.9% saline solution, weighed, and fixed as a whole in phosphate-buffered for 24 hours at 4oC. For morphometric analysis, the hearts cut into two fragments by a midventricular coronal section and embedded in paraffin. The absolute thicknesses of the septum and left and right ventricular walls and the areas of each ventricular chamber were measured. The hearts for Historesin embedding were frontally cut into anterior and posterior halves for analysis of myocytolytic areas. Hearts frontally cut were frozen for immunofluorescence study using primary antibodies against dystrophin, ?-1 integrin, ?- sarcomeric actin, ?-sarcoglycan, ?-dystroglycan, merosin laminin, albumin, CD68, CD45, CD4 e eNOS. The occurrence of apoptotic cells was evaluated by TUNEL method. The cardiac function, LV dimensions and wall motion segmented score were analyzed by echocardiography. For analysis of differences between the two groups the Student\'s t-test was performed and the level of significance of 5% was chosen to denote difference between means. Results and Conclusion: There was significant difference in the heart weight, in the heart ratio, in the LV area and right ventricular (RV) thicknesses between the two groups. No statistical difference was observed in the thicknesses of the free wall of the LV and septum, although tended to be lower in isoproterenol-treated myocardium. The percentage of myocytolysis in the LV, septum, and RV with myocytolysis in isoproterenol treated rats was: 26.89%, 36.12%, 28.15%, respectively. Immunofluorescence demonstrated that loss of dystrophin was the primary event in the myocytolytic process. Decreased expression of ?-dystroglycan, ?-sarcoglycan, ?-1 integrin and laminin occurred, appearing as epiphenomena. The eNOS expression was almost completely absent in the myocytolytic foci. eNOS expression was enhanced in blood vessels of cardiomyocytes through the entire myocardium of rats given isoproterenol. This is likely a compensatory response to the ischemic insult elicited by isoproterenol administration. In the myocytolytic foci a positive reaction for apoptosis was constantly and clearly noted in cardiomyocytes and macrophages. The echocardiography showed that diastolic and systolic LV dimensions in ISO-group were significantly higher in comparison with control group. The ejection fraction was not different between groups. The wall motion segmented score showed hypokinesis or akinesis in the apical segments in the hearts of ISO-group as compared with controls. These changes, related to ischemic injury, can explain the severe alterations in the structural integrity of the sarcolemma of cardiomyocytes and hence severe and irreversible injury induced by isoproterenol. Compensatory mechanisms in the short time of our experiment could maintain the normal cardiac function in spite of severe myocardial morphological changes.