Submitted by Izabel Franco (izabel-franco@ufscar.br) on 2016-10-05T14:23:20Z No. of bitstreams: 1 DissLGGC.pdf: 1458194 bytes, checksum: 9a831e5e428caa60910456d73cc89db8 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-10-20T16:07:21Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissLGGC.pdf: 1458194 bytes, checksum: 9a831e5e428caa60910456d73cc89db8 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-10-20T16:07:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissLGGC.pdf: 1458194 bytes, checksum: 9a831e5e428caa60910456d73cc89db8 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-20T16:07:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissLGGC.pdf: 1458194 bytes, checksum: 9a831e5e428caa60910456d73cc89db8 (MD5) Previous issue date: 2016-08-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / The neglected diseases are a group of diseases with a higher incidence in poor regions and tropical or subtropical climate. The leishmanioses are listed in this group of diseases, which may present themselves in two ways: tegumentary leishmaniasis or Visceral Leishmaniasis (VL). The VL in the new world has as the etiology Leishmania chagasi, which is transmitted by the bite of the sandfly, especially Lutzomya longipalpis. There are some medications used for the treatment of VL, however, still there are recurrence rates and high mortality. In addition to the severe side effects related to these therapies, as Nephrotoxicity, hepatotoxicity and cardiotoxicity. Not long ago it was developed the amphotericin B encapsulated the Liposomes, associated with mild side effects, however still with an onerous cost, being hard to use in regions devoid of resources. In this work we aim to evaluate the activity of 15 compounds with Schiff bases complexed or not the metals (copper, nickel, zinc and iron), to inhibit promastigotes of Leishmania chagasi in vitro, as well as the cytotoxicity of these front of macrophages and fibroblasts in vitro. For tests with the promastigotas 24 hour incubation was carried out to evaluate the feasibility of resazurin method was used. To evaluate the cytotoxicity of compounds was incubated for 24 or 48 hours, using the colorimetric method with MTT. Of the 15 compounds evaluated, 11 showed good activity in inhibiting the promastigotas in the concentrations tested, the cytotoxicity performed with these 11 compounds. Copper complexes (D1, D2, D3) presented best activities when compared with their respective free ligands. However, they also showed cytotoxicity. The compounds complexed with iron (C1 and C3) also showed activity against the promastigotes, showing no or low cytotoxicity front cells, except the C1 that presented certain toxicity front of macrophages. The Methoxy group was what showed best activity when compared to the other free ligands. Generally the free ligands, without metals, were the ones who presented lower cytotoxicity. / As Doenças Negligenciadas são um grupo de doenças com maior incidência em regiões pobres e de clima tropical ou subtropical, para quais existem pouco investimento das indústrias farmacêuticas na busca por novos fármacos. As Leishmanioses estão listadas nesse grupo de doenças, podendo se apresentar de duas formas: Leishmaniose Tegumentar ou Leishmaniose Visceral (LV). A LV no novo mundo tem como etiologia a Leishmania chagasi, sendo esta transmitida pela picada do Flebotomíneo, principalmente a Lutzomya longipalpis, no Brasil. Alguns medicamentos são utilizados para o tratamento da LV. Contudo, ainda há taxas de recidiva e de letalidade altas. Além disso, apresentam efeitos colaterais severos relacionados a essas terapias, como nefrotoxicidade, hepatotoxicidade e cardiotoxicidade. Dessa forma, nesse trabalho tivemos como objetivo avaliar a atividade de 15 compostos de bases de Schiff complexados ou não a metais (cobre, níquel, zinco e ferro) em inibir promastigotas de Leishmania chagasi in vitro. E ainda, determinar a citotoxicidade destes compostos em macrófagos e fibroblastos, in vitro. Para os ensaios com as promastigotas foi realizado incubação de 24 horas e para avaliação da viabilidade foi utilizado o método da resazurina. Para avaliação da citotoxicidade dos compostos contra macrófagos e fibroblastos, a incubação foi durante 24 ou 48 horas, utilizando o método colorimétrico MTT. Nossos resultados demonstraram que dos 15 compostos avaliados, 11 apresentaram boa atividade em inibir as promastigotas nas concentrações testadas, sendo a citotoxicidade realizadas apenas com estes 11 compostos. Os complexos com cobre (D1, D2, D3) apresentaram melhores atividades quando comparados com seus respectivos ligantes livres. Todavia, estes também apresentaram citotoxicidade contra células avaliadas. Entretanto, os compostos complexados com ferro (C1 e C3) também apresentaram atividade contra as promastigotas, no entanto, apresentaram baixa citotoxicidade frente as células, exceto o C1 que apresentou toxicidade discreta frente a macrófagos. O grupo methoxy foi o que apresentou melhor atividade quando comparado com os outros ligantes livres. Assim, nossos dados sugerem que esses compostos complexados com Fe, principalmente o composto C3, podem ser promissores na busca por compostos para o tratamento da Leishmaniose Visceral. Estudos futuros in vitro, com formas amastigotas, e em animais poderão comprovar sua eficácia em ensaios pré-clínicos.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:47:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3491581 bytes, checksum: 0b4c4a72f2099e984a7157655c0dba92 (MD5) Previous issue date: 2011-09-02 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The present work was characterized as a descriptive study of autochthonous human cases of cutaneous leishmaniasis reported between 2002 and 2010 in the city of Timóteo-Minas Gerais, associated with entomological research in the urban area and detection of Leishmania spp. among samples of sandflies captured. The human cases were characterized by a notification form and a socioeconomic and environmental questionnaire; the entomological survey was conducted with the use of Falcão traps distributed in 35 houses where cases were reported and in 15 with the absence of cases in the urban area of the municipality. The sandflies captured were identified and it was verified the natural infection of the female using PCR/RFLR technique. It was analyzed the seasonal behavior of sandflies considering the variables rainfall, air relative humidity and temperature. To enrich the study, autochthonous human cases of American cutaneous leishmaniasis were analyzed from a quantitative study, to detect clusters of cases according to census sectors, using spatial analysis as a tool. Through the characterization of cases it is suggested the presence of two installed cycles of American cutaneous leishmaniasis in the municipality, one rural and one rural. The transmission cycle of leishmaniasis in the urban area was more evident after the high number of sandflies collected in the urban area and the presence of infected samples with Leishmania braziliensis. Among the captured sandflies Nyssomyia whitmani was the specie most commonly found and also with higher number of samples infected with Leishmania braziliensis, followed by Nyssomyia intermedia and Micropygomyia quinquefer, and both species were also found to be infected with Leishmania braziliensis. In the spatial analysis it was evidenced that the census sectors near to Parque Estadual do Rio Doce are the most affected with the disease, requiring more attention. This profile of the occurrence of the disease suggests the need for reorientation of the strategies adopted for the control and prevention of the disease by the health agencies of the municipality. / O presente trabalho se caracterizou como um estudo descritivo dos casos humanos autóctones de leishmaniose tegumentar americana notificados no município de Timóteo-MG, no período de 2002 a 2010, associado à pesquisa entomológica na área urbana e detecção de Leishmania spp. em amostras de flebotomíneos capturadas. Os casos humanos foram caracterizados através da ficha de notificação e aplicação de questionário socioeconômico e ambiental; o estudo entomológico foi realizado com a utilização de armadilhas Falcão, distribuídas em 35 residências onde houveram casos e 15 com ausência de casos na área urbana do município. Os flebotomíneos capturados foram identificados e verificou-se a infecção natural das fêmeas utilizando a técnica de PCR/RFLR. Foi realizada análise do comportamento sazonal dos flebotomíneos, onde se trabalhou com as variáveis pluviosidade, umidade relativa do ar e temperatura. Em busca de enriquecer o estudo, os casos humanos autóctones de leishmaniose tegumentar americana foram analisados a partir de um estudo quantitativo, para a detecção de conglomerados de casos segundo setores censitários, utilizando como ferramenta a analise espacial. Através da caracterização dos casos é sugerida a presença de dois ciclos de leishmaniose tegumentar americana instalados no município, um rural e outro urbano. O ciclo de transmissão de leishmaniose na área urbana do município ficou mais evidente após o grande número de flebotomíneos coletados na área urbana do município e a presença de amostras infectadas com Leishmania braziliensis. Entre os flebotomíneos capturados Nyssomyia whitmani foi a espécie mais encontrada, e também com maior número de amostras infectadas por Leishmania braziliensis, seguidas por Nyssomyia intermedia e Micropygomyia quinquefer ambas espécies também encontradas com infecção por Leishmania braziliensis. Nas análises espaciais ficou evidenciado que os setores censitários próximos ao Parque Estadual do Rio Doce são os mais afetados com a doença, necessitando de maior atenção. Esse perfil de ocorrência da doença sugere a necessidade de reorientação das estratégias de controle e prevenção adotadas pelos órgãos de saúde do município.

Submitted by MAYARA LÚCIA DEL CISTIA null (mayara_ldc@hotmail.com) on 2016-06-22T17:02:08Z No. of bitstreams: 1 DissertaçãoMestrado2016_MAYARA_LUCIA_DEL_CISTIA.pdf: 6292986 bytes, checksum: 65cf54ead8c847cc5c6ad551395790c9 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-06-23T19:19:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 delcistia_ml_me_arafcf.pdf: 6292986 bytes, checksum: 65cf54ead8c847cc5c6ad551395790c9 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-23T19:19:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 delcistia_ml_me_arafcf.pdf: 6292986 bytes, checksum: 65cf54ead8c847cc5c6ad551395790c9 (MD5) Previous issue date: 2016-05-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / As leishmanioses são um grupo de doenças causadas pelo gênero Leishmania e colocam em risco 350 milhões de pessoas no mundo. Após o sequenciamento do genoma de algumas espécies de Leishmania spp., estudos moleculares de suas formas celulares (amastigotas e promastigotas) trouxeram informações importantes sobre sua biologia e potencial aplicação no aperfeiçoamento ou desenvolvimento de técnicas diagnósticas e terapêuticas. Nesse contexto, este projeto visou avaliar o gene LinJ.36.419 de Leishmania infantum (syn. Leishmania chagasi) e seu produto quanto a potencial aplicação no dsenvolvimento de novas abordagens diagnósticas. Ensaios de PCR quantitativa mostraram que a expressão deste gene é maior em formas amastigotas, estágio responsável pela manifestação da doença, podendo corresponder a um potencial marcador diagnóstico. Um fragmento de 255 aminoácidos da proteína Lc36 foi caracterizado quanto ao seu potencial antigênico utilizando ensaio imunoenzimático (ELISA). Os resultados mostraram especificidade de 74% e sensibilidade de 78% (99% de confiança), com acurácia de 76%, em uma população escolhida randomicamente. Análises adicionais mostraram reação cruzada pouco significativa para soro de cães infectados com Leptospira interrogans e Toxoplasma gondii, e revelaram reação cruzada contra soro de cães infectados por Babesia canis e Ehrlichia canis, todos organismos infecciosos comuns em cães. Análises de bioinformática mostraram que a proteína Lc36 possui um domínio denominado DNA polimerase sigma (COG5260) comum a vários organismos, associado a atividades de replicação, recombinação e reparo de ácidos nucléicos, o qual pode ser responsável pelas reações cruzadas observadas. Dessa forma, outro fragmento (297 aminoácidos) da proteína Lc36, sem a região de domínio conservado, foi expresso para nova caracterização do potencial antigênico com o objetivo de melhorar a especificidade do teste em estudo para aplicação em diagnóstico sorológico de leishmaniose visceral canina. Adicionalmente, bons resultados foram obtidos com ensaios para avaliar a potencial aplicação do gene Lc36 em diagnóstico molecular de leishmaniose visceral por meio do par de oligonucleotídeos RT36 específicos para L.infantum. Os ensaios mostraram que a reação foi capaz de detectar cerca de 5 células do parasita, revelando elevada sensibilidade do teste. Dessa forma, ambos os testes avaliados neste trabalho se mostraram promissores e serão explorados em projetos futuros. / Leishmaniasis are diseases caused by Leishmania genus protozoan and endanger 350 million people worldwide. After genomic sequencing of Leishmania spp., molecular studies of their cycle forms (amastigotes and promastigotes) brought important information, which can contribute to the development of new diagnostic approaches and treatments. In this study we evaluated the potencial application of the Leishmania infantum (syn. Leishmania chagasi) gene Lc.36.4190 and its encoded protein for development of new diagnostic approaches. Quantitative PCR assays showed that the gene is more expressed in intracellular amastigotes, the stage related to the clinical manifestation of these diseases, thus presenting potential to be a diagnostical target. We evaluated antigenic features of a 255 aminoacids fragment of the Lc36 protein using immunoenzimatic assay (ELISA). The results showed specificity of 74% and sensibility of 78% (99% of confidence) and accuracy of 76%, in a randomically chosen population. Additional analysis showed low cross-reaction against Leptospira interrogans and Toxoplasma gondii, and showed cross-reaction against Babesia canis and Ehrlichia canis, all infective organisms common in dogs. Bioinformatics analysis showed that the protein Lc36 contains one DNA polymerase sigma domain (COG5260) found on several organisms, being related to nucleic acid replication, recombination and repair, and might be related to the crossreactions observed. Thus, another fragment (297 aminoacids) of the Lc36 protein, without the conserved domain region, was expressed for a new antigenic characterization to improve the specificity of the canine visceral leishmaniasis serological test. Moreover, good results were obtained on experiments performed to evaluate the potential application of the Lc36 gene on molecular diagnostics using a L. infantum specific pair of primers, RT36. The assays detected approximately 5 parasites, which displays a good sensibility result. Therefore, both serological and molecular tests evaluated in this study are promising and will be explored in future studies.

Submitted by CRISTIANE BECK null (cristiane.beck@unijui.edu.br) on 2016-06-28T00:42:01Z No. of bitstreams: 1 Tese completa biblioteca (1).pdf: 845254 bytes, checksum: 6e900872a3cf5efd5aa8d3ac1ff2985d (MD5) / Rejected by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo a orientação abaixo: O arquivo submetido está sem a ficha catalográfica. A versão submetida por você é considerada a versão final da dissertação/tese, portanto não poderá ocorrer qualquer alteração em seu conteúdo após a aprovação. Corrija esta informação e realize uma nova submissão contendo o arquivo correto. Agradecemos a compreensão. on 2016-06-29T14:40:22Z (GMT) / Submitted by CRISTIANE BECK null (cristiane.beck@unijui.edu.br) on 2016-06-30T16:18:06Z No. of bitstreams: 1 Tese completa biblioteca.pdf: 1543432 bytes, checksum: 57e5b0af047f27b0a54c7540e57780b4 (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2016-06-30T19:32:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 beck_c_dr_bot.pdf: 1543432 bytes, checksum: 57e5b0af047f27b0a54c7540e57780b4 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-30T19:32:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 beck_c_dr_bot.pdf: 1543432 bytes, checksum: 57e5b0af047f27b0a54c7540e57780b4 (MD5) Previous issue date: 2016-06-03 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A Leishmaniose Visceral é uma doença infecciosa, de caráter zoonótico, emergente e de notificação obrigatória. No Brasil tem como agente o protozoário Leishmania infantum chagasi, e o principal reservatório é o cão (Canis familiaris). A transfusão sanguínea é muito utilizada na rotina da clínica, entretanto está associada a transmissão de doenças infecciosas. O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos do tratamento com a luz visível associada a ftalocianina de cloro-alumínio na inativação da Leishmania infantum chagasi em sangue canino, quando inoculados em hamsters (Mesocricetus auratus). Foram preparados 3 grupos experimentais compostos por 6 hamsters cada. O grupo controle recebeu sangue negativo para Leishmania, o grupo doença foi inoculado com sangue parasitado com Leishmania infantum chagasi e o grupo tratamento recebeu sangue parasitado tratado com luz visível associada a ftalocianina de cloro-alumínio. Os animais foram monitorados por 180 dias e então submetidos a avaliação clínica. Em seguida os animais foram anestesiados para a coleta de sangue por meio de punção intracardíaca e procedendo-se assim a eutanásia. O sangue foi colocado em microtubos e o soro separado por centrifugação e acondicionado a -30ºC, até a realização do teste de aglutinação direta. Após procedeu-se a coleta do fígado e baço para a realização da histopatologia. Outra parte destes órgãos e a medula óssea foram acondicionados em tubos livres de DNAse e RNAse, congelados a -30ºC até a realização da PCR e qPCR. Impressões do fígado e baço foram feitas em lâminas para a microscopia para verificar a presença das formas amastigotas do parasita. Após 180 dias os animais não apresentaram sinais clínicos e os exames sorológicos e parasitológicos foram negativos. Quanto ao exame macroscópico, alguns animais apresentaram hepato e esplenomegalia, já na análise histopatológica nenhum tecido analisado demonstrou formas amastigotas do parasita. Na avaliação da PCR o baço e a medula óssea de todos os hamsters, dos grupos doença e tratado, apresentaram amplificação da Leishmania infantum chagasi. Na qPCR ocorreu uma significativa diminuição (P<0,01) na parasitemia quando comparado ao grupo tratado com a luz visível associada a ftalocianina de cloro-alumínio, com o grupo que recebeu sangue parasitado sem tratamento. Com esses resultados é possível concluir que a luz visível associada a ftalocianina de cloro-alumínio reduz a parasitemia da Leishmania infantum chagasi em sangue canino. / Visceral Leishmaniasis is an emerging zoonotic infectious disease that requires mandatory reporting. In Brazil, it is caused by the protozoan Leishmania infantum chagasi, with dogs as main reservoir (Canis familiaris). Blood transfusion is frequently used in clinical routine, however it is associated with the transmission of infectious diseases. The aim of this study was to evaluate the effects of treatment with visible light associated with chloro-aluminium phthalocyanine on the inactivation of Leishmania infantum chagasi in canine blood, when inoculated in hamsters (Mesocricetus auratus). Three experimental groups consisted of six hamsters each. The control group received blood negative for L. infantum chagasi, the diseased group was inoculated with blood infected with L. infantum chagasi, and the treatment group received infected blood previously subjected to therapy with visible light associated with chloroaluminium phthalocyanine. The animals were observed for 180 days and then subjected to clinical evaluation. Then the animals were anesthetized for blood collection through intracardiac puncture and were euthanized. The blood was placed into microtubes and the serum was separated by centrifugation and stored at -30 ° C until the direct agglutination test was performed. After, liver and spleen collection was performed to histopathological examination. Another part of these organs and bone marrow were placed in tubes DNase and RNase free, and frozen at -30°C until the PCR and qPCR were performed. Imprints of liver and spleen were performed on slides for microscopy to verify the presence of amastigotes of the parasites. After 180 days the animals showed no clinical signs and serologic and parasitological tests were negative. During pathological examination, some animals showed hepatomegaly and splenomegaly; under microscopic analysis, any tissue showed amastigote forms of the parasite. In the PCR evaluation of spleen and bone marrow, all hamsters from diseased and treated groups showed amplification of Leishmania infantum chagasi. Results from q-PCR revealed a significant decrease (P <0.01) in the number of parasites in the group inoculated with blood subjected to chloro-aluminium photodynamic therapy, compared to the group inoculated with parasitized blood that had not been subjected to photodynamic therapy. With these results it is possible to conclude that visible light associated with chlorine-aluminum phthalocyanine reduces parasitaemia of Leishmania infantum chagasi in canine blood. / FAPESP: 2014/03353-4

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:03:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PauloRPN_DISSERT.pdf: 1361148 bytes, checksum: 4572b4a963991f34258d766f8d1c322f (MD5) Previous issue date: 2012-04-23 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / Iron is an essential element for many cellular functions, including the immune response against intracellular pathogens. In this study, we aimed evaluate the effect of iron on IRP2, IFN-?, TNF-?, IL-6, IL-10, MIG and IP10 expression in PBMC and assess the effect of the spleen parasite load on the expression of these genes in the spleen of L. infantum naturally infected dogs. Blood sample from 7 DTH+ donor was collected and PBMC was obtained. The cells were cultivated in absence (iron chelator desferroximane, DFO 10 ?M supplemented media) or in presence of iron (hemin 6 mM) for 1 h, followed by stimulation with Leishmania infatum antigen for 4 h. 44 dog spleen samples were obtained and parasite load in this organ was determinate by qPCR. Gene expression was analyzed by qPCR and cytokine production quantified by flow cytometry. In antigen stimulated cells, genes involved in immune response are significantly more expressed in presence of iron. T CD4+ and TCD8+ lymphocytes produces IFN-?, TNF-? and IL-10 possibly in iron dependent pathway. Monocytes antigen stimulated reduced TNF-?, IL-6 and IL-10 production in presence of iron. We found spleen of infected dogs IRP2 expression increases according to parasite load in that organ, while an inverse profile was found for IFN-?, TNF-? e IL-10 expression. These results suggest that T lymphocytes depends on iron to produce IFN-?, TNF-? and IL-10, while iron seems to inhibit cytokine production in monocytes. So, we propose an immunoregulatory mechanism carried out by iron during L. infantum infection in humans and dogs / O ferro ? um elemento essencial para diversas fun??es celulares, incluindo a resposta imune a pat?genos. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito do ferro sobre a express?o dos genes IRP2, IFN-?, TNF-?, IL-6, IL-10, MIG e IP10 em c?lulas mononucleares de sangue perif?rico (CMSP) humano e examinar o efeito da carga parasit?ria espl?nica sobre a express?o destes genes no ba?o de c?es naturalmente infectados por L. infantum. Coletou-se amostras de sangue perif?rico de 7 indiv?duos DTH+ e obteve-se as CMSP. As c?lulas foram cultivadas na aus?ncia (quelante deferoxamina 10 ?M) ou presen?a de ferro (Hemina 6 mM) por 1 hora seguido de estimula??o com ant?geno de Leishmania infantum por 4 horas. Obteve-se o ba?o de 44 c?es e determinouse a carga parasit?ria neste ?rg?o por qPCR. A express?o g?nica foi avaliada por qPCR e a produ??o de citocinas foi quantificada por citometria de fluxo. Encontramos que na presen?a de ferro a express?o de genes envolvidos na resposta imune ? significativamente aumentada em CMSP. Linf?citos T CD4+ e TCD8+ produzem IFN-?, TNF-? e IL-10 possivelmente por uma via dependente de ferro. Em mon?citos a produ??o de TNF-?, IL-6 e IL-10 foram reduzidas em c?lulas estimuladas e cultivadas na presen?a do metal. Foi visto que no ba?o de c?es a express?o de IRP2 aumenta de acordo com a carga parasit?ria, sendo o inverso encontrado para IFN-?, TNF-? e IL-10. Os resultados sugerem que linf?citos T dependem de ferro para produzir IFN-?, TNF-? e IL-10, enquanto em mon?citos o ferro parece ter efeito inibit?rio sobre a produ??o de citocinas, sugerindo um efeito imunomodulat?rio para o ferro em humanos e c?es durante a leishmaniose visceral

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:03:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 JoseFlavioVC.pdf: 1066045 bytes, checksum: 95695454c994be62f483dac7ee237cd8 (MD5) Previous issue date: 2005-02-28 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / Canine Visceral Leishmania (CVL) is an important zoonotic disease that has a world wide distribution and has a large impact on public health on the American Continent, especially in Brazil, where the nature of endemic diseases in humans affects a large part of the nation. The influence of the prevalence of CVL in the increased rate of human cases in endemic areas and in the unleashing of epidemic outbreaks shows the need for a more profound understanding, that would generate significant advances in the current measures used to control the reservoirs of sickness that are practiced by the Programa Nacional de Vigil?ncia e Controle da Leishmaniose Visceral. The present work describes and compares the clinical-laboratorial and histopathological findings of twenty-three dogs that were naturally infected by Leishmania chagasi, from endemic areas in metropolitan Natal, Rio Grande do Norte, Brazil. These animals, that were selected and given physical and serological exams (IFI and ELISA rK-39), were classified according to the degree of clinical severity and had blood samples drawn (whole blood and serum) for a complete hemogram and a coagulogram to be done as well as biochemical tests for kidney and liver function. The confirmation of infection by L. chagasi was done after the euthanasia of the animals, through the direct demonstration of the parasite in the impression of the spleen and liver crowned with GIEMSA and through a cultivation by means of NNN/Schneider. According to the clinical evaluation, the animals were classified as asymptomatic (7), oligosymptomatic (7) and polysymptomatic (9). Among the animals that were chosen to be autopsied, there were 2 asymptomatic, 3 oligosymptomatic and 3 polysymptomatic, for the purpose of studying their histopathology, having collected fragments of the spleen, liver, kidneys and skin and were fixed in 10% tamponed formol. The comparison between the average parameters of the clinical-laboratory tested animals in the groups was done through the Student t test (a<0.05). The main clinical signals observed were lymphadenomegaly, alopecy, dermatitis, exfoliation, cutaneous ulcers, onicogriphosis and emaciation. The main clinical-laboratorial alterations established, mainly in the polysymptomatic group, were anemia, hyperproteinemia, hyperglobulinemia, alterations in the albumin/globulin ratio and increased ALT activity. Renal alterations were not verified (urea and creatinine levels were normal). Thrombocytopenia was observed in three clinical groups. However, the other indicators of coagulation function (TAP and TTPA) did not have abnormal variations. There were inflammatory infiltrations and leishmania amastigotes in the skin of polysymptomatic dogs, however, they were not found in the skin of asymptomatic animals. Hypertrophy and hyperplasia of the phagocyte mononuclear system, leishmania amastigote parasites were found in the macrophages, extramedullary hematopoiesis and degenerative alterations were detected in the spleen and liver of 8 of the animals submitted to histopathological exams. In accord with these results, it was demonstrated that the expected alterations in the hematological and biochemical parameters in function of their viscerotropic nature of CVL are mainly observed in the more advanced stages of the disease. The absence of inflammatory infiltration and parasite load in the skin suggest that infected animals without symptoms may have an importance irrelevant to the infectiousness of the vector / A leishmaniose visceral canina (LVC) ? uma importante zoonose de distribui??o mundial com grande impacto em sa?de p?blica no Continente Americano, especialmente no Brasil, onde a natureza end?mica da doen?a humana afeta boa parte do territ?rio nacional. A influ?ncia da preval?ncia da LVC na amplia??o da taxa de casos humanos em ?reas end?micas e no desencadeamento de surtos epid?micos ainda carece de um entendimento mais profundo, o que geraria avan?os significativos nas atuais medidas destinadas ao controle de reservat?rios da doen?a preconizadas pelo Programa Nacional de Vigil?ncia e Controle da Leishmaniose Visceral. O presente trabalho descreveu e comparou os achados cl?nico-laboratoriais e histopatol?gicos de vinte e tr?s c?es infectados naturalmente pela Leishmania chagasi, provenientes de localidades end?micas da ?rea metropolitana de Natal-RN. Estes animais, escolhidos a partir de exame f?sico e sorologia (IFI e ELISA rK-39), foram classificados de acordo com o grau de comprometimento cl?nico e submetidos a coleta de sangue (sangue total e soro) para realiza??o de hemograma completo, provas bioqu?micas de fun??o renal e hep?tica, e coagulograma. A confirma??o da infec??o por L. chagasi foi realizada ap?s a eutan?sia dos animais, pela demonstra??o direta do parasita em impress?o de ba?o e f?gado corado com GIEMSA e atrav?s de cultivo em meio NNN/Schneider. De acordo com a avalia??o cl?nica, os animais foram classificados em assintom?ticos (7), oligossintom?ticos (7) e polissintom?ticos (9). Dentre os animais necropsiados, foram selecionados 2 c?es assintom?ticos, 3 oligossintom?ticos e 3 polissintom?ticos para o estudo histopatol?gico, sendo colhidos fragmentos de ba?o, f?gado rins e pele e fixados em formol a 10% tamponado. A compara??o entre as m?dias dos par?metros cl?nico-laboratoriais testados nos grupos foi realizada atrav?s do teste t de Student (&#945;<0,05). Os principais sinais cl?nicos observados foram linfadenomegalia, alopecia, dermatite esfoliativa, ?lceras cut?neas, onicogrifose e emacia??o. As principais altera??es cl?nico-laboratoriais estabelecidas, principalmente no grupo polissintom?tico, foram anemia, hiperproteinemia, hipoalbuminemia, hiperglobulinemia, altera??es no ?ndice albumina/globulina e aumento da atividade da ALT. Altera??es renais n?o foram verificadas (ur?ia e creatinina normais). Trombocitopenia foi observada no tr?s grupos cl?nicos, contudo, os outros indicadores da fun??o de coagula??o (TAP e TTPA) n?o apresentaram varia??es anormais. Foi observado Infiltrado inflamat?rio e amastigotas de leishmania na pele de c?es polissintom?ticos, por?m n?o na pele de animais assintom?ticos. Hipertrofia e hiperplasia do sistema fagocit?rio mononuclear, macr?fagos parasitados por amastigotas de leishmania, hematopoiese extramedular e altera??es degenerativas foram detectadas no ba?o e f?gado dos 8 animais submetidos a exame histopatol?gicos. De acordo com esses resultados, foi demonstrada que as altera??es esperadas nos par?metros hematol?gicos e bioqu?micos em fun??o da natureza viscerotr?pica da LVC s?o observadas principalmente em est?gios mais avan?ados da doen?a. A aus?ncia de infiltrado inflamat?rio e carga parasit?ria na pele sugerem que animais infectados sem sintomatologia talvez tenham import?ncia irrelevante na infectividade para o vetor

Submitted by MARIA FERNANDA ALVES MARTIN null (mariafernanda_bio@hotmail.com) on 2017-07-07T21:17:54Z No. of bitstreams: 1 Alves-Martin_MF_Tese de Doutorado 2017.pdf: 2835852 bytes, checksum: 41eddab14a2ccc5b0f3ac1898bbde518 (MD5) / Approved for entry into archive by Monique Sasaki (sayumi_sasaki@hotmail.com) on 2017-07-13T18:56:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 alves_martin_mf_dr_bot.pdf: 2835852 bytes, checksum: 41eddab14a2ccc5b0f3ac1898bbde518 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-13T18:56:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 alves_martin_mf_dr_bot.pdf: 2835852 bytes, checksum: 41eddab14a2ccc5b0f3ac1898bbde518 (MD5) Previous issue date: 2017-06-26 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A família Trypanosomatidae inclui protozoários flagelados com dois gêneros de importância médica e veterinária: Leishmania, causador das leishmanioses e Trypanosoma, responsáveis pelas tripanossomíases de relevância epidemiológica, ambos com o envolvimento de hospedeiros mamíferos e vetores em seu ciclo de vida. O gato doméstico passou a ser considerado um hospedeiro reservatório de Leishmanias, após comprovação por xenodiagnóstico, da transmissibilidade de formas promastigotas de Leishmania infantum para o vetor flebotomíneo. Devido a inespecificidade dos achados clínicos na Leishmaniose Felina (LF), à semelhança dos aspectos clínicos dessa enfermidade com outras comuns em gatos, e à provável resistência felina a infecção, é possível que, dentro de uma área endêmica para leishmaniose ocorra um percentual elevado de indivíduos infectados, mas sem apresentarem sinais clínicos, e a falta de diagnóstico precoce da LF nessas áreas pode implicar com que o animal continue a representar risco potencial de transmissão de leishmanias aos vetores. Assim sendo, pretendeu-se investigar possíveis associações entre sorologia positiva para L. infantum, com o parasitismo tecidual em sangue, órgãos e células conjuntivais de gatos de região endêmica para LV. Foram incluídos neste estudo 36 gatos adultos, cedidos pelo Centro de Controle de Zoonoses (CCZ) de Bauru - São Paulo, com 31 animais apresentando pelo menos um tipo de alteração clínica. A partir dos diagnósticos sorológicos, verificou-se a positividade em 26 animais, sendo que (66,7%) (24/36) foram reagentes à Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI), (61,1%) (22/36) animais reagentes ao ELISA e 10 animais não foram reagentes (K=0,64). A observação de formas sugestivas de amastigotas se deu em 12 animais (33,3%), quatro animais (11,1%) e 12 animais (33,3%), a partir das técnicas parasitológicas de esfregaço sanguíneo, imprint de órgãos e histoquímica, respectivamente. O diagnóstico molecular foi realizado com a utilização dos primers ITS-1, ITS-2 e HSP70, cuja detecção molecular pela PCR de sangue se deu em 15 animais (41,6%), pela PCR de tecidos em oito animais (22,2%) e pela PCR de suabes em quatro animais (11,1%). A quantificação da carga parasitária pela qPCR de sangue se deu em nove animais (25%) e pela qPCR de tecidos em dois animais (5,5%). Após o sequenciamento genético, foram identificadas três amostras com Trypanosoma theileri, cinco com Leishmania donovani e uma amostra com Leishmania braziliensis. Dessa forma, verificamos que os gatos avaliados, sorologicamente negativos e positivos apresentaram sinais clínicos, presença do parasito em células e DNA parasitário em sangue e/ou tecidos, atuando como reservatórios de Leishmanias na região estudada. A detecção de tripanosomatídeos em amostras biológicas dos gatos do estudo sugere sua participação na manutenção do parasito no ambiente urbano. / Trypanosomatidae family includes flagellate protozoa of two genera of medical and veterinary importance: Leishmania, the causative agent of leishmaniasis and Trypanosoma, responsible for trypanosomiasis of epidemiological relevance, with the involvement of mammalian hosts and vectors in their life cycle. Nowadays, the domestic cat is considered a host reservoir of leishmanias, after proving by xenodiagnosis, the transmissibility of promastigotes of Leishmania infantum to the phlebotomine vector. Due to the lack of specificity of the clinical findings in Feline Leishmaniasis (FL), similar to the clinical aspects of this disease with other common ones in cats, and to the probable feline resistance to infection, it is possible that, within an endemic area for leishmaniasis, a high percentage of individuals with no clinical signs, and lack of early diagnosis of FL in these areas may imply that the animal continues to pose a potential risk of transmission of leishmaniasis to the vectors. Thus, it was intended to investigate possible associations between positive serology for L.infantum, with tissue parasitism in blood, organs and conjunctival cells of cats from endemic region to visceral leishmaniasis. Thirty-six adult cats, assigned by the Zoonoses Control Center (ZCC) of Bauru-SP, with 31 animals presenting at least one type of clinical alteration, were included in this study. From the serological diagnoses, the positivity was verified in 26 animals, and (66.7%) (24/36) were reactive to the Immunofluorescence Antibody Test (IFAT), (61.1%) (22/36) animals reactives to ELISA test and 10 animals were non-reactive (K = 0.64). The observation of suggestive forms of amastigotes occurred in 12 animals (33.3%), four animals (11.1%) and 12 animals (33.3%), by the parasitological techniques of blood smear, imprint of organs and histochemistry, respectively. Molecular diagnosis was performed using the ITS-1, ITS-2 and HSP70 primers, whose molecular detection by blood PCR was done in 15 animals (41.6%), by tissue PCR in eight animals (22.2 %) and by PCR of conjunctival swabs in four animals (11.1%). Quantification of the parasitic load by blood qPCR occurred in nine animals (25%) and in the qPCR of tissues in two animals (5.5%). After the genetic sequencing, three samples were identified as Trypanosoma theileri, five as Leishmania donovani and one as Leishmania braziliensis. In this way, we verified that the evaluated cats, serologically negative and positive, presented clinical signs, presence of the parasite in cells and parasitic DNA in blood and / or tissues, possibly acting as reservoirs of leishmaniasis in the studied region. The detection of trypanosomatids in biological samples of the studied cats suggests their participation in the maintenance of the parasite in the urban environment. / FAPESP: 2014/15807-0

Submitted by JOÃO LUCAS BRUNO PRATES null (jhonylprates@yahoo.com.br) on 2017-08-30T20:18:59Z No. of bitstreams: 1 Dissertação de mestrado - João Lucas.pdf: 6449742 bytes, checksum: 4da0e1cbddc21aa321ccfa9245fbb63b (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-09-01T13:02:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 prates_jlb_me_araiq.pdf: 6449742 bytes, checksum: 4da0e1cbddc21aa321ccfa9245fbb63b (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-01T13:02:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 prates_jlb_me_araiq.pdf: 6449742 bytes, checksum: 4da0e1cbddc21aa321ccfa9245fbb63b (MD5) Previous issue date: 2017-07-24 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Na presente pesquisa foram sintetizados vários derivados piridínicos objetivando a descoberta de constituintes com atividade antiparasitária potencial. Estes compostos foram planejados a partir do alcaloide (–)-espectalina isolado de Senna spectabilis (Fabaceae), empregando alguns processos usuais da química medicinal como a simplificação molecular, isosterismo clássico e funcional. Deste procedimento experimental, foram sintetizados 18 substâncias, sendo todas obtidas por meio de reações simples, a partir de compostos comerciais. Das substâncias sintéticas produzidas, 14 foram submetidas à avaliação para atividade em Trypanosoma cruzi, visando potenciais antichagásicos, e em Leishmania infantum para identificar potenciais leishmanicidas. Os compostos testados mostraram-se inativos na inibição destes protozoários. Contudo, dois análogos (48 e 52) apresentaram atividade inibitória das cepas de Plasmodium falciparum, com CI50 = 5,0 µM e índice de seletividade bastante interessante (IS >50). / In the present research, several pyridine derivatives were synthesized aiming at the discovery of new constituents with potential antiparasitic activity. All compounds were planned from the (-)-spectaline alkaloid isolated from Senna spectabilis (Fabaceae), employing some usual medicinal chemistry procedures, such as molecular simplification, classical and functional isosterism. From this experimental procedure, 18 compounds were synthesized, and all of these were obtained by means of simple reactions, from commercial compounds. Of the synthetic substances produced, 14 were evaluated for activity in Trypanosoma cruzi, aimed at the search for potential antichagasics, and against Leishmania infantum to identify potential leishmanicidal derivatives. All compounds tested were inactive to the inhibition of these protozoa. However, two analogues (48 and 52) showed inhibitory activity against Plasmodium falciparum strains, with IC50 = 5.0 μM and an interesting selectivity index (IS> 50).

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:32Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-07-06Bitstream added on 2014-06-13T20:38:48Z : No. of bitstreams: 1 carvalho_jlb_me_botfmvz.pdf: 220428 bytes, checksum: f55d9bbbbfb43a44b14dd39304bafe3b (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A estruturação dos serviços de saúde para o desenvolvimento de programas de controle de zoonoses como a raiva e leishmaniose se depara com recomendações sobre a importância de programas de controle populacional de cães, no entanto as normas do Estado de São Paulo para transporte de cães exigem apenas o atestado veterinário, inexistindo controle e registro da entrada de animais importados pelos órgãos oficiais, representando risco da introdução de novas doenças. O presente estudo foi realizado durante a 36ª campanha anual de vacinação anti-rábica de 2004, realizada pela Prefeitura de Botucatu em parceria com a FMVZ/UNESP de Botucatu/SP. O objetivo foi descrever a população de cães com ênfase em sua origem. Foi aplicado um questionário, a 676 proprietários, 4% dos 17.910 cães vacinados, em 20 postos de vacinação, representativos dos 47, distribuídos homogeneamente em cinco regiões da área territorial urbana. Para a escolha dos animais, considerou-se um plano de amostragem sistemática e para definição da amostra foi considerada a taxa de 10% de erro de estimação, com 95% de confiança. Cerca de 10% dos animais são originários de outras cidades, várias com transmissão de leishmaniose visceral, sendo um dos animais originário de outro estado. A maioria destes animais já residia na cidade há mais de um ano. Estes achados reforçam a importância de programas de controle populacional com registro e identificação de cães no estado, a fim de garantir informações para a tomada de decisão e definição de estratégias de contenção de doenças exóticas. / The organization of the health services for development of zoonosis programs control, as rabies and leishmaniasis are based on recommendations about the importance of control population of dogs, however São Paulo stateþs norms to transport dogs requires just the veterinarian authorization, no existing control and register of official agencies on the entrance of imported animals, representing risk of new diseases introduction. The present study was realized during the 36ª anti-rabies campaign on 2004 for the Botucatu city and the FMVZ/UNESP of Botucatu/SP. The objective was to describe the population of dogs emphasing the source, it was applied a questionnaire on 676 owners, 4% of 17,910 vaccinated dogs, in 20 ranks of vaccination, representing from 47, with equal distribution in five regions of the urban area. For selection of the animals, a systematic sample was performed and for sample definition, it was considered the tax of 10% of estimate error, with 95% confidence interval. Around 10% of the animals are from other cities, several had transmission of visceral leishmaniasis. Being one of the animals from another state. The majority of these animals inhabited in this city over than one year. These findings strengthen the importance of programs identification, register and control population of dogs in the state, in order to guarantee information for the decision and definition of strategies to block exotic diseases.

Submitted by Automação e Estatística (sst@bczm.ufrn.br) on 2018-04-11T22:52:49Z No. of bitstreams: 1 AndrezaRochelleDoValeMorais_TESE.pdf: 34716471 bytes, checksum: 74e8c59c9cec74cb97a6e304ef879973 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2018-04-18T21:55:28Z (GMT) No. of bitstreams: 1 AndrezaRochelleDoValeMorais_TESE.pdf: 34716471 bytes, checksum: 74e8c59c9cec74cb97a6e304ef879973 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-18T21:55:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AndrezaRochelleDoValeMorais_TESE.pdf: 34716471 bytes, checksum: 74e8c59c9cec74cb97a6e304ef879973 (MD5) Previous issue date: 2017-10-20 / Visceral leishmaniasis is a neglected tropical disease that can be fatal if left untreated. Amphotericin B (AmB) is effective in the treatment of this disease, but the conventional formulation, Fungizone® has dose-limiting toxicity while the less toxic lipid-based forms such as Ambisome® are expensive. Therefore, the need for new therapeutic systems remains. In this respect, the heating of the Fungizone® formulation (H-AmB), and the development of a microemulsion (ME) containing AmB (MEAmB) are possible solutions. In addition, it is desirable to remove water from microemulsion systems in order to reduce instability due to microbiological contamination and hydrolysis. Therefore, the objective of this work was to develop and to evaluate the activity and toxicity in vitro and in vivo of H-AmB and MEAmB against Leishmania donovani (strain LV9) and, furthermore, to optimize a lyophilized microemulsion system containing AmB. Rheological, size and morphology studies showed that MEAmB presented average droplet sizes of 35 nm, a Newtonian behavior and spherical morphology. Spectroscopic characterization of H-AmB showed the formation of superaggregates, which are less toxic than the other states of aggregation. In-vitro evaluation on both the axenic and intramacrophagic amastigote forms showed that H-AmB and MEAmB showed similar activity to Ambisome®. A high selectivity index of H-AmB and MEAmB was observed compared with unheated Fungizone®. Furthermore, both new formulations showed high activity against AmB-resistant strains compared with Ambisome®. In-vivo experiments designed to evaluate their activity and toxicity did not reveal significant differences in activity between the new and reference formulations. There were no significant differences either in indicators of renal and hepatic toxicity. Therefore, both H-AmB and MEAmB can be used as an alternative for the treatment of LV9, presenting an advantage over AmBisome® in their lower costs of production. Therefore, a complete experimental design was performed in order to optimize the lyophilisation of the microemulsion system. It was observed that microemulsions with smaller droplet sizes were obtained using maltose as a cryoprotectant at a concentration of 5%, with freezing at -80 ° C, and a lyophilization process period of 24 h. Furthermore, it was observed that ME containing AmB showed no significant changes in drug content before and after the lyophilization process. Therefore, in its lyophilized form, the ME can remain stable and avoid degradation due to the presence of water. / A leishmaniose visceral é uma doença tropical negligenciada que pode ser fatal se não tratada. A Anfotericina B (AmB) é eficiente no tratamento desta doença, porém o seu elevado custo ou sua alta toxicidade torna necessário o desenvolvimento de novos sistemas terapêuticos para solucionar tais inconvenientes. Nesse contexto, pode-se utilizar o aquecimento da formulação micelar de AmB aquecida (A-AmB), e o desenvolvimento de uma microemulsão (ME) contendo AmB (MEAmB). Adicionalmente, é desejada a remoção da água desses sistemas microemulsionados a fim de diminuir instabilidades relacionadas à contaminação microbiológica e a hidrólise. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi desenvolver e avaliar a atividade e toxicidade in vitro e in vivo da A-AmB e da MEAmB contra Leishamania donovani (LV9), além de otimizar um sistema microemulsionado liofilizado contendo AmB. Caracterizações da reologia, do tamanho e da morfologia da gotícula mostraram que a MEAmB apresentou tamanhos médios de 35 nm, um comportamento Newtoniano e uma morfologia esférica. A caracterização da A-AmB mostrou a formação de superagregados, que, são menos tóxicos que os outros estados de agregação. Análises in vitro, tanto para a forma amastigota axênica como para a intramacrofágica mostraram que as atividades da A-AmB e da MEAmB foram semelhantes ao do Ambisome®. Além disso, foi observado um alto índice de seletividade da A-AmB e da MEAmB comparada a formulação não aquecida. Adicionalmente, essas duas formulações, quando comparadas ao Ambisome®, mostraram elevada atividade contra cepas AmB resistentes. Essas formulações foram testadas in vivo a fim de avaliar sua atividade e toxicidade. Os resultados não apresentaram diferenças significativas entre as atividades das amostras contendo AmB, e, com relação a toxicidade, não mostraram diferenças expressivas capazes de causar uma disfunção renal ou hepática. Portanto, tanto a A-AmB como a MEAmB podem ser usados como alternativa no tratamento contra LV9, apresentando a vantagem sobre o Ambisome® devido aos menores custos de suas produções. Por conseguinte, a fim de liofilizar o sistema microemulsionado, foi realizado um planejamento experimental completo, no qual o observou-se que MEs com menores tamanhos de gotículas foram obtidos quando utilizado maltose como crioprotetor na concentração de 5 %, com congelamento a – 80 ºC e por um período de liofilização de 24 h. Além disso, foi observado que a ME contendo AmB não teve mudanças significativas quanto ao conteúdo do fármaco, quando comparado o produto antes e após o processo de liofilização. Desta forma, a ME, em sua forma liofilizada, pode manter a estabilidade do sistema perante os danos que poderiam ser causados pela quantidade de água.