Orientador: Classius de Oliveira / Coorientador: Cláudia Regina Bonini Domingos / Banca: Antonio Sebben / Banca: Luciana de Souza Ondei / Resumo: Os anfíbios sofrem influência de diversos contamiantes que podem afetar o seu ciclo de vida. O benzo[α]pireno (BaP) é um composto biocumulativo encontrado na atmosfera, água e solo. Para mensurar como o BaP interfe nos anuros Physalaemus cuvieri e Leptodactylus fuscus utilizamos alguns biomarcadores de contaminação, como: os melanomacrófagos hepáticos, que são células com função de detoxificação; mastócitos, com função de proteção em respostas inflamatórias; micronúcleos (MN), fragmentos de DNA resultantes de exposição a agentes tóxicos e também os glóbulos brancos, pois alteração do padrão dos leucócitos indica que o animal não está nas suas condições normais (está sob influência de estresse, poluentes). A princípio foi feita a descrição do fígado das espécies com microscopia de luz e eletrônica de transmissão. Notou-se que o tecido hepático é semelhante entre elas, especialmente a disposição dos hepatócitos em cordão duplo. Para o estudo com o BaP utilizou-se 36 animais de cada espécie divididos em 6 tratamentos. Injetou-se por via cutânea 2mg/kg de BaP diluído em óleo mineral e nos controles apenas óleo mineral (mesma via). Seguiram-se os processos para análise hepática e sanguínea. Com 7d de tratamento, a área de melanina reduziu nas duas espécies e em 13d aumentou em L. fuscus. A diminuição pode estar relacionada ao efeito citotóxico do composto e o aumento, com o ajuste fisiológico. Houve aumento da densidade de mastócitos nas duas espécies e em todos os tratamentos. Essa resposta está relacionada com a função de proteção em respostas inflamatórias. Não houve alteração na frequência dos MN em nenhuma espécie, provavelmente porque as células mais danificadas sofreram morte celular ou perderam a capacidade de entrar em mitose. L. fuscus, em 13d, teve aumento dos neutrófilos devido à sua função em... / Abstract: Amphibians are influenced by several pollutants that may affect their life cycle. Benzo[α]pyrene (BaP) is a bioaccumulative contaminant found in the atmosphere, water and soil. In order to measure how this pollutant acts in the species Physalaemus cuvieri and Leptodactylus fuscus, specific biomarkers were utilized, such as hepatic melanomacrophages, which displays detoxification functions; mast cells, which are protective cells during inflammatory response; micronuclei (MN), DNA fragments resulting from the exposure to toxic agents; white blood cells, due to leukocytes patterns alterations indicating that the organism is not in its normal conditions. Initially, the description of the species liver (6 animals of each species) was performed by means of light and transmission electron microscopy. It was observed that the hepatic tissue is very similar between species. For the BaP study, 36 animals of each species were used, divided in 6 treatments. The treated ones received a subcutaneous injection (2 mg/kg) of BaP, diluted in mineral oil, while control animals received only mineral oil. The following processes were performed for blood and light microscopy analysis: with 7d of treatment, melanin area were reduced in both species, followed by an increased in 13d for the species L. fuscus. This decline may be related to the cytotoxic effect of the compound or the organism physiological adjustment. Mast cells displayed increased density in both species and in all treated groups. This response is linked to the cells' protection function on inflammatory responses. No changes in MN frequency were found for both species, probably because most damaged cells underwent apoptosis or lost the capacity of initializing mitosis. After 13d of treatment, an increase in neutrophils was observed, given its function in inflammatory responses, such as a decrease in eosinophils, due to immune ... / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:58Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-04-30Bitstream added on 2014-06-13T20:29:32Z : No. of bitstreams: 1 oliveira_ja_me_rcla.pdf: 782919 bytes, checksum: 52bf93088b58465e8339d891ad9a3145 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O uso de plantas medicinais é uma prática muito antiga e utilizada pela maioria dos povos em todo o mundo. Lupinus albus (L. albus), conhecido popularmente como tremoço branco, vem sendo usado na medicina popular, em forma de sementes cruas, como regulador de níveis de glicemia e colesterol. Embora descrito na literatura que suas proteínas e alcaloides isolados têm potencial para isto, não se tem qualquer informação científica em relação à eficiência de suas sementes cruas. O objetivo deste trabalho foi avaliar os possíveis efeitos, citotóxicos, genotóxicos e antigenotóxicos, mutagênicos e antimutagênicos, carcinogênicos e anticarcinogênicos e também o potencial imunomodulador do extrato aquoso de sementes cruas de L. albus, por meio de ensaios de micronúcleo em medula óssea, Focos de criptas aberrantes em cólon, contagem diferencial de leucócitos, níveis de glicemia e colesterol do soro de camundongos da espécie Mus musculus, bem como determinar e quantificar, por meio de cromatografia gasosa, alcaloides e ácidos graxos desse extrato. Foi avaliado nos camundongos seus efeitos nas concentrações equivalente a 3 sementes/dia (como utilizado na medicina popular) e 9 sementes/dia. A análise fitoquímica do extrato revelou a presença do alcaloide lupanina, dos ácidos graxos oleico, linoleico, palmítico e esteárico. Porém não foi possível observar, por meio de ensaios bioquímicos, os efeitos hipoglicêmicos de L. albus em ambos os protocolos seguidos. Foi observado que os níveis de colesterol apresentaram melhora, para o protocolo com administração da DMH. No ensaio de MN em medula óssea, não foi observado efeito citotóxico, porém foi possível observar efeito genotóxico e mutagênico para o extrato testado na concentração maior no tratamento sub-crônico. Foram também observados efeitos antigenotóxico e... / The use of medicinal plants is a very old practice, used by most of the people around the world. Lupinus albus (L. albus), popularly known as white lupine, has been used in popular medicine in form of raw seeds, as a regulator of blood glucose and cholesterol. Although literature describes that their isolated proteins have the this potential, there is no scientific information regarding the efficiency of their raw seeds. The aim of this study was to evaluate the possible genotoxic, antigenotoxic, mutagenic, antimutagenic, anticarcinogenic and carcinogenic effects, and also the immune modulatory potential of aqueous extract of raw seeds of L. albus, by means of bone marrow micronucleus, aberrant crypt foci in colon, leukocyte counting, blood glucose and serum cholesterol levels of mice Mus musculus, as well as to determine and quantify alkaloids and fatty acids of these extracts, by gas chromatography. The effects of concentrations equivalent to 3 seeds/day (as used in popular medicine) and 9 seeds/day were evaluated in mice. Chemical analysis of the extract showed the presence of the alkaloid lupanine and oleic, linoleic, palmitic and stearic fatty acids. However, according to biochemical assays, it was not possible to observe hypoglycemic effects of L. albus in both followed protocols. It was observed that cholesterol levels showed an improvement in the protocol using DMH. No cytotoxic effects were observed in the MN assay in bone marrow, but genotoxic and mutagenic effects were recorded in highest concentration of the tested extract. Antigenotoxic and antimutagenic effects were also observed, demonstrating a preventive action for the two concentrations tested due to the promotion of harm reduction for pre-extract treatment. When the extract of L. albus was administered simultaneously with DMH, a reduction in damage was... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:22:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 4029.pdf: 2110860 bytes, checksum: d02ac171388080b62d75f4d78539b911 (MD5) Previous issue date: 2011-08-01 / The blood cell composition in their qualitative and quantitative aspects as well as the functional properties of hemoglobin (Hb) shows characteristic of adaptation to the aquatic environment, aiding the understanding of the adaptability of the fish to the environment. The present study aimed to analyze the peripheral blood cells and the structural and functional characterization (in vitro) of hemoglobins of the South American lungfish, Lepidosiren paradoxa and facultative air-breathing fish H. unitaeniatus collected nearby Cuiaba, MT. The hematological variables, blood cell size, plasma ions, glucose and protein concentrations and the osmolality as well as the electrophoretic patterns of Hbs, the Root effect, quantification and the effect of allosteric modulators (IHP, ATP, GTP, 2.3 - BPG and NaCl) of the affinity of Hb to oxygen and Hb affinity in experiments of oxygenation in the blood stripped to and 4oC, 21oC and 40oC. The blood cells of L. paradoxa are exceptionally large and not numerous compared to H. unitaeniatus. The hematocrit and blood pH were similar in the two species. The erythrocyte number was lower in L. paradoxa (52 .103 ± 17 L-1) than in H unitaeniatus (2386 .103 ± 370 L-1). The hematimetric indexes mean corpuscular volume and mean corpuscular Hb were higher in L. paradoxa while the mean corpuscular Hb concentration and Hb concentration were higher in H. unitaeniatus. Among the white blood cells, in L. paradoxa, the lymphocytes (65.00 ± 4.00 %) were the most frequent cells, followed by eosinophils (19.00 ± 3.00 %), neutrophils (12.00 ± 2.00 %), monocytes (2.00 ± 0.60 %) and basophils (1.40 ± 0.40 %). In H. unitaeniatus lymphocytes were also the most frequent cells (85.14 ± 3.21 %) followed by neutrophils (12.00 ± 3.00 %) and monocytes (2.90 ± 1.23 %). In L. paradoxa the Mg+2, glucose and total protein plasma levels were significantly smaller than in H. unitaeniatus. There were no significant differences in the levels of K+, Ca+2, Cl- and osmolarity of plasma and between both species. Two Hb components, one major and another minor band was identified in L. paradoxa and another smaller; in H. unitaeniatus 6 anode components being 3 slow components and 3 fast component have been identified at different concentrations. In both species the stripped Hbs in three temperatures and in the presence of modulators, showed normal Bohr effect. In L. paradoxa cooperatively values were near 2.00 indicating cooperatively and absence of effect of Root; in H. unitaeniatus the cooperatively values were near 1.50, indicating low cooperatively and presence of Root effect. The affinity of Hb-oxygen proved be higher as decreased the temperature. The 2.3 - BPG was little effective in modulate the Hb in both species. The IHP ATP, GTP, and NaCl acted as negative modulators, being more effective in the modulation of Hb of H. unitaeniatus. The 2.3 - BPG was not detected in H. unitaeniatus and the ATP was the primary nucleotide intraeritrocitário for the two species being approximately 2 times higher than the GTP. In L. paradoxa was detected small amount IP2, but not in H. unitaeniatus. Our results show marked differences between the blood cells of L. paradoxa and H. unitaeniatus and the ability of adaptation of Hbs to environmental conditions to which they living. / A composição celular do sangue, em sua expressão quantitativa e qualitativa, bem como as propriedades funcionais das hemoglobinas apresenta aspectos característicos de adaptação ao ambiente aquático, auxiliando a compreensão da adaptabilidade dos peixes ao ambiente. O presente estudo teve como objetivo a análise do sangue periférico e a caracterização estrutural e funcional (in vitro) das hemoglobinas do peixe pulmonado Lepidosiren paradoxa e do peixe de respiração aérea facultativa Hoplerythrinus unitaeniatus coletados nos arredores de Cuiabá, MT. Para tanto foram determinadas as variáveis hematológicas, as concentrações plasmática de íons, glicose, proteínas e osmolalidade, a análise biométrica e morfológica das células sanguíneas, o padrão eletroforético das hemoglobinas, o efeito Root, a quantificação e o efeito dos moduladores alostéricos (IHP, ATP, GTP, 2,3 - BPG e NaCl) na modulação da afinidade das hemoglobinas ao oxigênio e a afinidade das hemoglobinas em experimentos de equilíbrio de oxigenação em sangue e stripped à 4oC, 21oC e 40oC. As células sanguíneas de L. paradoxa são excepcionalmente grandes e pouco numerosas comparadas as de H. unitaeniatus. Os valores de hematócrito e pH sanguíneo foram similares nas duas espécies. O número de eritrócitos foi mais baixo em L. paradoxa (52 103 ± 17 L-1) do que em H. unitaeniatus (2386 103 ± 370 L-1). Os índices hematimétricos, volume corpuscular médio e hemoglobina corpuscular média foram maiores em L. paradoxa enquanto que a concentração de hemoglobina corpuscular média e a concentração de hemoglobina foram maiores em H. unitaeniatus. Dentre os leucócitos, em L. paradoxa os linfócitos (65,00 ± 4,00 %) foram os mais freqüentes, seguidos dos eosinófilos (19,00 ± 3,00 %), neutrófilos (12,00 ± 2,00 %), monócitos (2,00 ± 0,60 %) e basófilos (1,40 ± 0,40 %). Em H. unitaeniatus os linfócitos também foram os mais freqüentes (85,14 ± 3,21 %) seguidos dos neutrófilos (12,00 ± 3,00 %) e monócitos (2,90 ± 1,23 %). Em L. paradoxa os níveis plasmáticos de Na+, Mg+2, glicose e proteínas totais foram significativamente menores aos observados em H. unitaeniatus. Não houve diferenças significativas nos valores de K+, Ca+2, Cl- e osmolaridade plasmática entre as duas espécies. O padrão eletroforético em gel de amido para L. paradoxa, mostrou a presença de dois componentes, um maior lento, e outro menor rápido, em H. unitaeniatus foram identificados 6 componentes anódicos com diferentes concentrações, sendo 3 componentes lentos e 3 componentes rápidos. Nas espécies estudadas as hemoglobinas stripped nas três temperaturas e na presença dos moduladores, mostraram efeito Bohr normal. Em L. paradoxa os valores de Hill foram próximos de 2,00 indicando cooperatividade e ausência de efeito Root; em H. unitaeniatus os valores de Hill próximos de 1,50, indicaram baixa cooperatividade e presença de efeito Root. A afinidade das hemoglobinas ao oxigênio mostrou-se maior à medida que se diminuiu a temperatura. O 2,3 - BPG foi pouco efetivo na modulação das hemoglobinas de ambas as espécies, já os moduladores IHP, GTP, ATP e NaCl atuaram como moduladores negativos, sendo a modulação mais efetiva em H. unitaeniatus. Não detectamos 2,3 - BPG e o ATP foi o principal nucleotídeo intra-eritrocitário para as duas espécies sendo aproximadamente 2 vezes superior ao GTP. Em L. paradoxa foi detectado pequena quantidade IP2, em H. unitaeniatus não detectamos a presença de inositóis. Os resultados mostram diferenças marcantes entre as células de L. paradoxa e H. unitaeniatus e a capacidade de adaptação molecular das hemoglobinas destas espécies às condições fisiológicas e ambientais a que estão sujeitas.

Submitted by Luciana Sebin (lusebin@ufscar.br) on 2016-10-10T19:45:24Z No. of bitstreams: 1 DissKES.pdf: 1491828 bytes, checksum: c6a58b88ab03eb7890e0b182f08a3ab3 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-10-13T20:15:20Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissKES.pdf: 1491828 bytes, checksum: c6a58b88ab03eb7890e0b182f08a3ab3 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-10-13T20:15:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissKES.pdf: 1491828 bytes, checksum: c6a58b88ab03eb7890e0b182f08a3ab3 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-13T20:15:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissKES.pdf: 1491828 bytes, checksum: c6a58b88ab03eb7890e0b182f08a3ab3 (MD5) Previous issue date: 2016-02-16 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Counting the number of leukocytes present in the blood vessels is an important task to understand inflammation mechanisms and to assess the effects of drugs that are being developed for the treatment of inflammatory diseases. In general, leukocyte counting is done by an observer (laboratory technician or specialist) using a sequence of intravital microscopy images obtained from blood vessel of an animal testing. However, this procedure is time-consuming, prone to errors, due to visual fatigue of the observer, and biased, due to inter and intra-observer variability. Thus, the objective of this work was the development of computational technique for the automatic detection of leukocytes in intravital video microscopy images. For this, the detection of leukocytes was performed in two main stages. In stage 1, the phase congruency measure, which is invariant to changes of contrast and lighting images, was used to calculate a blobness measure used to detect circular structures in intravital microscopy images. In stage 2, the circular structures detected in stage 1 were analyzed locally to identify only those corresponding to true leukocytes. The results were evaluated using the precision, recall and F1-measure metrics and the area under the precision-recall curves. Furthermore, the proposed technique was compared with the template matching technique. / Contar o número de leucócitos presentes em vasos sanguíneos é uma tarefa fundamental para entender mecanismos de inflamações e avaliar efeitos de drogas que estão sendo desenvolvidas para o tratamento de doenças inflamatórias. Em geral, a contagem de leucócitos é feita por um observador (técnico laboratorial ou especialista) usando uma sequência de imagens de microscopia intravital, obtidas do vaso sanguíneo de um animal de teste. Entretanto, a tarefa de contagem é demorada, propensa à erros, devido à fadiga visual do observador, e viesada, devido à variabilidade inter e intra-observador. Sendo assim, o objetivo deste trabalho foi o desenvolvimento de uma técnica computacional para a detecção automática de leucócitos em imagens de vídeo de microscopia intravital. Para isso, a detecção dos leucócitos foi realizada em dois principais estágios. No estágio 1, a medida de congruência de fase, que é invariante a mudanças de contraste e iluminação em imagens, foi utilizada para o cálculo de uma medida de blobness usada na detecção de estruturas circulares nas imagens de microscopia intravital. No estágio 2, as estruturas circulares detectadas no estágio 1 foram analisadas localmente a fim de identificar apenas aquelas correspondentes aos leucócitos verdadeiros. Os resultados foram avaliados utilizando as métricas de precisão, revocação e medida-F1 e a área sob as curvas precisão-revocação. Além disso, a técnica proposta foi comparada com a técnica casamento de padrões.

Submitted by LUANA CHIQUETTO PARACATÚ null (luanachiquetto@hotmail.com) on 2016-07-14T18:15:23Z No. of bitstreams: 1 TESE - Luana Chiquetto.pdf: 2823701 bytes, checksum: 584996ba0cd6c6754d03400de9c6de73 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-07-18T20:01:01Z (GMT) No. of bitstreams: 1 paracatu_lc_dr_arafcf.pdf: 2823701 bytes, checksum: 584996ba0cd6c6754d03400de9c6de73 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-18T20:01:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 paracatu_lc_dr_arafcf.pdf: 2823701 bytes, checksum: 584996ba0cd6c6754d03400de9c6de73 (MD5) Previous issue date: 2016-06-17 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Inúmeras patologias têm a sua gênese e/ou progressão relacionadas à produção desregulada de intermediários oxidantes. O complexo multienzimático NADPH oxidase é um dos componentes de maior relevância neste contexto, pois é uma das principais fontes de ânion superóxido no organismo animal. Sendo expresso em inúmeros tecidos, incluindo leucócitos e células do tecido endotelial, o desenvolvimento de inibidores eficientes deste complexo enzimático poderá significar uma nova terapêutica para o tratamento de doenças inflamatórias crônicas. Com objetivo de explorar a relação entre a estrutura molecular, as propriedades químicas e atividades biológicas, utilizamos o éster fenetílico do ácido cafeico (CAPE) como inibidor do complexo enzimático NADPH oxidase e comparamos sua eficácia com o seu precursor ácido cafeico e os derivados, éster fenetílico do ácido cinâmico e o ácido clorogênico, correlacionando-os a respeito a sua hidrofobicidade, propriedades redox e inibição do complexo NADPH oxidase em leucócitos ativados. A hipótese seria de que um aumento da hidrofobicidade provocado pela esterificação do ácido cafeico poderia facilitar o seu acesso à membrana celular e assim alterar seu efeito como possível inibidor de NADPH Oxidase. Os resultados, em ensaios in vitro, mostraram que as alterações na hidrofobicidade não provocaram alterações significativas no potencial de oxidação e potencial antioxidantes dos compostos testados. Quando testados em leucócitos ativados (modelos ex vivo), a esterificação provocou uma melhora significativa na capacidade de inibição do complexo NADPH oxidase. Este potente efeito se propagou às EROs decorrentes de ânion superóxido e produzidas por leucócitos, como peróxido de hidrogênio e ácido hipocloroso, entretanto, sem alterar a capacidade fagocítica dos leucócitos. Os resultados deste estudo mostram que nos ensaios celulares o CAPE foi o composto mais potente em relação ao seu precursor ácido e ácido clorogênico, sendo significativamente mais efetivo na inibição da produção das EROs. Da mesma forma, CAPE foi o inibidor mais eficaz da expressão de TNF-α e IL-10 por Staphylococcus aureus células estimuladas. Em conclusão, a presença do grupo catecol e a maior hidrofobicidade, do CAPE, foram essenciais para os efeitos biológicos, confirmando nossa hipótese. Considerando-se o envolvimento da NADPH-oxidases na génese e progressão de doenças inflamatórias, CAPE deve ser considerada como uma droga anti-inflamatória promissora. / Several diseases have their genesis and / or progression related to unregulated production of oxidants intermediates. The multienzymatic complex NADPH oxidase is one of the most important components in this context because it is a major source of superoxide anion in animal organisms. It is expressed in numerous tissues, including leukocytes and endothelial tissue cells. Developing effective inhibitors of this enzyme complex may indicate a new therapy for the treatment of chronic inflammatory diseases. Several studies have described numerous anti-inflammatory properties attributed to caffeic acid phenethyl ester (CAPE), an active component found in propolis. In order to explore the relationship between the molecular structure, chemical properties and biological activities, we used CAPE to inhibit the enzyme complex NADPH oxidase and compare its efficacy with the its precursor caffeic acid and derivatives, phenethyl ester of cinnamic acid and chlorogenic acid, correlating them with regard to hydrophobicity, redox properties and inhibition of NADPH oxidase complex on activated leukocytes. The hypothesis was that an increase of hydrophobicity caused by the esterification of caffeic acid could facilitate access to cell membranes and thereby alter its effect as a possible inhibitor of NADPH oxidase. The results (in vitro), showed that the changes in hydrophobicity did not provoke significant changes in the oxidation potential and antiradical potency of the tested compounds. But when tested in activated leukocytes (ex vivo), the esterification caused a significant improvement in the ability to inhibit the NADPH oxidase complex. This potent inhibition effect resulted also in the blockage of production of hypochlorous acid, however, without altering the phagocytic ability of leukocytes. The results of this study show that in cellular assays, CAPE was the most potent compound in comparison to caffeic acid and chlorogenic acid, significantly more effective in inhibiting the production of ROS. Likewise, CAPE was the most effective inhibitor of expression of TNF-α and IL-10 in Staphylococcus aureus stimulated cells. In conclusion, the presence of the catechol moiety and the higher hydrophobicity of CAPE were essential for the biological effects. Considering the involvement of NADPH oxidases in the genesis and progression of inflammatory diseases, CAPE should be considered as a promising anti-inflammatory drug.

Orientador: Valdecir Farias Ximenes / Banca: Rodrigo Rezende Kitagawa / Banca: Cibele Bonacorsi / Banca: Saulo Santesso Garrido / Banca: Daniel Rinaldo / Resumo: As proteínas são macromoléculas complexas de alto peso molecular e que desempenham inúmeras funções nas células. Estas funções podem ser comprometidas caso ocorram modificações nas suas estruturas. Fatores físicos e químicos podem provocar estas alterações, inclusive processos oxidativos mediados por espécies reativas de oxigênio. Entre essas modificações destaca-se a formação de proteínas amiloidais que estão relacionadas a diversas doenças como Parkinson e Alzheimer. O ácido hipocloroso (HOCl) e o ácido hipobromoso (HOBr) são oxidantes gerados pela ativação de leucócitos e há abundantes relatos de seus efeitos deletérios sobre proteínas. Nesse contexto, este trabalho teve como objetivo estudar as alterações estruturais e funcionais na proteína lisozima provocadas por sua oxidação através dos ácidos hipo-halosos, HOCl, HOBr e por suas haloaminas, taurina cloramina (Tau-NHCl), taurina bromamina (Tau-NHBr) e taurina dibromamina (Tau-NBr2). A oxidação de lisozima pela adição de Tau-NHBr ou Tau-NBr2 (excesso molar de quatro vezes) causou depleção completa da sua fluorescência intrínseca, entretanto, os ácidos HOCl e HOBr causaram a redução de apenas 40% e 50% respectivamente. Em contraste com o seu precursor, Tau-NHCl, foi incapaz de oxidar a lisozima. As haloaminas foram cerca de duas vezes mais eficazes como inibidores da atividade enzimática do que os seus precursores HOCl e HOBr. Por outro lado, os ácidos foram mais eficazes na promoção da agregação de lisozima, efeito este, evidenciado pelo aumento da turbidez, espalhamento de luz e anisotropia de fluorescência da proteína. Os agregados apresentaram propriedades espectroscópicas que sugeriram a formação de estruturas amiloidais, como foi observado pelo ensaio de Tioflavina T. Em contraste com os ácidos hipo-halosos, as haloaminas foram inibidores parciais da formação de proteínas amiloides. Em conclusão, estes resultados sugerem ... / Abstract: Proteins are complex macromolecules of high molecular weight and performing numerous functions in cells. These functions may be compromised if there are any modifications in their structures. Physical and chemical factors may cause these changes, including oxidative processes mediated by reactive oxygen species. Among these changes was the formation of amyloid proteins that are related to various diseases such as Parkinson's and Alzheimer's. The hypochlorous acid (HOCl) and hipobromous acid (HOBr) are oxidants generated by the activation of leukocytes and there are abundant reports of their deleterious effects on proteins. In this context this work aimed to study the structural and functional changes in the protein lysozyme caused by their oxidation through hypohalous acids, HOCl, HOBr, and haloamines taurine Chloramine (Tau-NHCl), taurine monobromamine (Tau-NHBr) and taurine dibromamine (Tau-NBr2). The oxidation of lysozyme by addition of Tau-NHBr or Tau-NBr2 (molar excess of four times) caused complete depletion of its intrinsic fluorescence, however, the acids HOCl and HOBr caused a reduction of only 40% and 50% respectively. In contrast to its precursor, Tau-NHCl was unable to oxidise the lysozyme. The haloamines were about twice as effective inhibitors of enzyme activity than their precursors HOCl and HOBr. On the other hand, the acids were more effective in promoting aggregation of lysozyme, this effect, evidenced by increased turbidity, light scattering and fluorescence anisotropy of the protein. The aggregates presented spectroscopic properties that suggested the formation of amyloid structures, as noted by thioflavin t test. In contrast with hypohalous acids, the haloamines were partial formation of protein inhibitors became. In conclusion, these results suggest that HOBr, like their haloamines Tau-NHBr and Tau-NBr2, are selective with regard to oxidation of tryptophan residues in proteins. This particularity directly affects ... / Doutor

Orientador: Maria Aparecida Marin-Morales / Banca: Grasiela Dias de Campos Severi-Aguiar / Banca: Elaine Cristina Mathias da Silva Zacarin / Resumo: O uso de plantas medicinais é uma prática muito antiga e utilizada pela maioria dos povos em todo o mundo. Lupinus albus (L. albus), conhecido popularmente como tremoço branco, vem sendo usado na medicina popular, em forma de sementes cruas, como regulador de níveis de glicemia e colesterol. Embora descrito na literatura que suas proteínas e alcaloides isolados têm potencial para isto, não se tem qualquer informação científica em relação à eficiência de suas sementes cruas. O objetivo deste trabalho foi avaliar os possíveis efeitos, citotóxicos, genotóxicos e antigenotóxicos, mutagênicos e antimutagênicos, carcinogênicos e anticarcinogênicos e também o potencial imunomodulador do extrato aquoso de sementes cruas de L. albus, por meio de ensaios de micronúcleo em medula óssea, Focos de criptas aberrantes em cólon, contagem diferencial de leucócitos, níveis de glicemia e colesterol do soro de camundongos da espécie Mus musculus, bem como determinar e quantificar, por meio de cromatografia gasosa, alcaloides e ácidos graxos desse extrato. Foi avaliado nos camundongos seus efeitos nas concentrações equivalente a 3 sementes/dia (como utilizado na medicina popular) e 9 sementes/dia. A análise fitoquímica do extrato revelou a presença do alcaloide lupanina, dos ácidos graxos oleico, linoleico, palmítico e esteárico. Porém não foi possível observar, por meio de ensaios bioquímicos, os efeitos hipoglicêmicos de L. albus em ambos os protocolos seguidos. Foi observado que os níveis de colesterol apresentaram melhora, para o protocolo com administração da DMH. No ensaio de MN em medula óssea, não foi observado efeito citotóxico, porém foi possível observar efeito genotóxico e mutagênico para o extrato testado na concentração maior no tratamento sub-crônico. Foram também observados efeitos antigenotóxico e... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The use of medicinal plants is a very old practice, used by most of the people around the world. Lupinus albus (L. albus), popularly known as white lupine, has been used in popular medicine in form of raw seeds, as a regulator of blood glucose and cholesterol. Although literature describes that their isolated proteins have the this potential, there is no scientific information regarding the efficiency of their raw seeds. The aim of this study was to evaluate the possible genotoxic, antigenotoxic, mutagenic, antimutagenic, anticarcinogenic and carcinogenic effects, and also the immune modulatory potential of aqueous extract of raw seeds of L. albus, by means of bone marrow micronucleus, aberrant crypt foci in colon, leukocyte counting, blood glucose and serum cholesterol levels of mice Mus musculus, as well as to determine and quantify alkaloids and fatty acids of these extracts, by gas chromatography. The effects of concentrations equivalent to 3 seeds/day (as used in popular medicine) and 9 seeds/day were evaluated in mice. Chemical analysis of the extract showed the presence of the alkaloid lupanine and oleic, linoleic, palmitic and stearic fatty acids. However, according to biochemical assays, it was not possible to observe hypoglycemic effects of L. albus in both followed protocols. It was observed that cholesterol levels showed an improvement in the protocol using DMH. No cytotoxic effects were observed in the MN assay in bone marrow, but genotoxic and mutagenic effects were recorded in highest concentration of the tested extract. Antigenotoxic and antimutagenic effects were also observed, demonstrating a preventive action for the two concentrations tested due to the promotion of harm reduction for pre-extract treatment. When the extract of L. albus was administered simultaneously with DMH, a reduction in damage was... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Ismael Forte Freitas Júnior / Banca: Fabio Santos de Lira / Banca: Wagner Luiz do Prado / Resumo: Objetivo: Analisar a composição corporal, contagem leucocitária e concentração circulante de adipocinas de adolescentes obesos treinados, submetidos a 20 semanas de treinamento concorrente, e não treinados de ambos os gêneros. Metodologia: Amostra composta por 22 adolescentes, com idade média de 12,7 anos (DP=1,68), classificados como obesos. Realizou-se avaliação de composição corporal por meio da antropometria, densitometria óssea e ultrassonografia, além de leucograma completo e análises de concentrações circulantes de adipocinas. A amostra foi distribuída em grupo controle e grupo treinamento, sendo realizada a intervenção por meio do treinamento concorrente com duração de uma hora/aula. Realizou-se as análises estatísticas por meio da Análise descritiva, Teste t de student pareado, Anova fatorial, correlação de Pearson e regressão linear utilizando o programa SPSS, versão 17.0, e a significância de p<0,05. Resultados: Após intervenção houve modificações significativas na composição corporal, entretanto não observou-se alterações nas variáveis sanguíneas. Há correlações entre sexo e percentual de gordura total e no tronco, massa magra total e na região androide, além disso, sexo somado ao treinamento possui relação com massa corporal total, massa de gordura total, tecidos da região androide (massa magra, gordura e tecido), gordura intra-abdominal e monócitos. A concentração de TNF-α correlacionou-se com a idade, peso, massa de gordura, massa magra e gordura subcutânea e ao aplicar as variáveis de composição corporal em uma regressão linear todas as variáveis mantiveram interação com o TNF-α, entretanto, quando ajustado por idade, peso e sexo, apenas a massa de gordura e massa magra. Em relação à contagem leucocitária apenas a IL-6 correlacionou-se com os linfócitos e manteve-se na modelo de regressão. Conclusão: Adolescentes obesos submetidos ao treinamento concorrente... / Abstract: Objective: To analyze the effects of 20 weeks of concurrent training in body composition, concentrations of pro and anti-inflammatory adipokines and leukocyte of obese adolescents of both genders. Methods: The sample consisted of 22 adolescents, with a mean age of 12.7 years (SD = 1.68), classified as obese. Assessment of body composition was performed by means of anthropometry, DEXA and ultrasound, and to assess the concentration of leukocytes and adipokines made biochemical analyzes. The sample was divided into control group and training group. The intervention group was training through the concurrent training, comprising 50 % of the time aerobic exercise and 50 % of the time resistance exercise, during 1 hour/session. Statistical analyzes (descriptive analysis, paired Student t test, Anova factorial, Pearson correlation and linear regression) were performed using SPSS, version 17.0, and statistical significance set at p<0,05. Results: After intervention there were significant changes in body composition, however not observed changes in blood variables. There is correlation between sex and percentage of total and trunk fat and total and android region of lean mass, moreover, the training has added sex ratio with total body mass, total fat mass, android region tissues (lean mass, fat mass and tissue), intra-abdominal fat and monocytes. The concentration of TNF-α correlated with age, weight, fat mass, lean mass and subcutaneous fat and to apply the body composition variables in a linear regression all variables maintained interaction with TNF-α, however, when adjusted for age, weight and sex, only fat mass and lean mass. Regarding the leukocyte count only IL-6 was correlated with cells and remained on the regression model. Conclusion: Obese adolescents submitted to concurrent training presented significant changes in body composition, however, do not change the leukocyte counts. Moreover, body composition variables, particularly fat... / Mestre

Orientadora: Silvana Martinez Baraldi Artoni / Banca: Isabel Cristina Boleli / Banca: Antônio Carlos Alessi / Banca: Joaquim Coutinho Netto / Banca: João José Lachat / Resumo: O objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial de cicatrização de uma fração de proteína extraída do látex da seringueira em diferentes concentrações (0,01% e 0,001%) associada a diferentes biomateriais (Fibracol plusÒ e ácido hialurônico a 1%). Utilizaram-se 36 coelhos albinos da raça Nova Zelândia Branco submetidos à realização de 4 feridas em cada orelha. Dividiu-se o experimento em etapas de acordo com a análise do período pós-operatório (3º, 7º, 14º e 21º dias), sendo utilizados 9 animais para cada etapa. Na primeira etapa (3º dia de pósoperatório), os animais foram numerados aleatoriamente de 1 a 9, sendo que em 3 animais, nas orelhas esquerdas, as feridas foram tratadas com solução salina (T1) e nas orelhas direitas, as feridas foram tratadas com membrana de Fibracol plus® + FrHb1 a 0,01% (T2). Em outros 3 animais, realizaram-se os mesmos procedimentos, diferenciando os tratamentos, onde nas feridas das orelhas esquerdas o tratamento foi com Fibracol plus® (T3) e nas feridas das orelhas direitas Fibracol plus® + FrHb1 a 0,001% (T4). Nos 3 animais restantes, seguiram-se os mesmos procedimentos, inserindo nas feridas das orelhas esquerdas ácido hialurônico a 1% + FrHb1 a 0,01% (T5) e nas feridas das orelhas direitas ácido hialurônico a 1% + FrHb1 a 0,001% (T6). Os animais foram sacrificados no 3º dia de pós-operatório e as feridas foram analisadas macroscopicamente e em seguida separadas para a análise histológica. Estes procedimentos foram repetidos para as etapas de 7, 14 e 21 dias de pós-operatório. Os segmentos de tecidos com as feridas foram fixados em solução de Bouin por 24 horas, e processados rotineiramente, para inclusão em paraplast e posterior avaliação histológica e morfométrica. A morfometria foi realizada por meio do sistema... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this study was to evaluate the potential for healing of a fraction of protein extracted from the latex of rubber trees in different concentrations (0.01% and 0.001%) associated with various biomaterials (Fibracol plus®1 and hyaluronic acid to 1%). There were used 36 New Zealand White rabbits underwent achievement of 4 wounds on each ear. The experiment was divided into stages according to the analysis of the postoperative period (3, 7, 14 and 21 days), and 9 animals used for each step. In the first stage (day 3 post-surgery), animals were randomly numbered from 1 to 9, with 3 animals in the left ear, the wounds were treated with saline (T1) and the right ear, the wounds were treated with membrane of Fibracol plus® + FrHb1 to 0.01% (T2). In 3 other animals, the same procedures were held, differing treatments, where the wounds of the left ear they were treated with Fibracol plus® (T3) and the wounds of the right ears Fibracol Plus® + FrHb1 to 0.001% (T4). In the 3 remaining animals, there was followed by the same procedures, including the ears wounds hyaluronic acid at 1% + FrHb1 to 0.01% (T5) and right ears wounds of hyaluronic acid 1% + FrHb1 a 0.001% (T6). The animals were sacrificed at 3 days postoperatively and the wounds were examined macroscopically and then separated for histological analysis. These procedures were repeated on the steps of 7, 14 and 21 days postoperatively. The segments of the injured tissues were fixed in Bouin solution for 24 hours and routinely processed for inclusion in paraplastic and subsequent histologic and morphometric evaluation. The morphometry was performed using the image analyzing system (Image Pro-PLUS2) and the evaluation of healing was done by enumeration of leukocytes and fibroblasts. The data were subjected to statistical analysis (ANOVA and Tukey test at 5%)... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:06:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000418273-Texto+Completo-0.pdf: 1037092 bytes, checksum: 5a2ba543e2c3ec3378833ba7e8ef063f (MD5) Previous issue date: 2009 / Introduction: Inhaled steroids is considered the most effective and safe medication for control of persistent asthma in adults and children. Patients with severe asthma may present corticosteroid resistance, with different clinical presentations. Mechanisms of steroid resistance have been studied in adult asthmatics over the last decades. However, glucocorticoid (GC) resistance has not been studied in children with asthma. The aim of the present study is to analyze peripheral blood mononuclear cell (PBMC) sensitivity to GCs of children with severe persistent asthma. Methods: Children with persistent asthma (between 6-15 years of age) were divided into three groups (severe, moderate and mild), and compared with healthy children. Lung function tests and skin prick tests were performed in all studied asthmatic children. PBMCs were isolated and cultured in vitro to assess mitogen-induced proliferation as well as cellular sensitivity to dexamethasone. Results: Fifty-seven children with persistent asthma and 18 healthy children were included. Patients with mild asthma showed significantly less proliferation of stimulated T-cells (p<0. 05). Moreover, only subjects with moderate asthma presented with lower lymphocyte proliferation when compared to the control group (p<0. 05). When dexametasone sensitivity was analyzed, there was no difference between patients with asthma and controls. However, subjects with mild asthma showed less sensitivity to dexametasone (p<0. 05) Children with severe asthma presented similar dexametasone sensitivity when compared to controls Conclusions: Children with severe asthma are not resistant to GCs from in vitro PBMC analysis. Our findings suggest that the resistance to GCs in adults with severe asthma might be an acquired process with aging process. / Introdução: O corticóide inalatório é considerado o fármaco mais efetivo e seguro no controle da asma persistente, tanto em adultos quanto em crianças. Pacientes com asma grave podem apresentar resistência ao corticóide, com repercussão clínica variável. Os mecanismos de resistência aos corticóides têm sido estudados há décadas na população adulta. No entanto, resistência aos corticóides em asma não foi estudada em crianças. O objetivo do presente estudo é analisar a sensibilidade ao corticóide das células mononucleares de sangue periférico em crianças com asma persistente grave. Métodos: Crianças com asma persistente (entre 6-15 anos de idade) foram divididas em três grupos (graves, moderados e leves), e comparadas com crianças saudáveis. Testes de função pulmonar e testes cutâneos foram realizados em todas as crianças asmáticas estudadas. Células mononucleares do sangue periférico foram isoladas e cultivadas in vitro e analisada a proliferação mitógeno-induzido, bem como a sensibilidade celular a dexametasona. Resultados: Foram incluídas 57 crianças com asma e 18 crianças no grupo controle. Em relação à proliferação dos linfócitos, pacientes com asma apresentaram menor proliferação celular (p<0,05) quando comparados com o grupo controle. Além disto, em relação à gravidade, somente pacientes com asma moderada apresentaram proliferação menor quando comparados com o grupo controle (p<0,05). No teste de sensibilidade para dexametasona, não houve diferença entre os pacientes com asma e o grupo controle. No entanto, foi observada uma menor sensibilidade dos pacientes com asma leve para dexametasona (p<0,05). Pacientes com asma grave apresentaram sensibilidade a dexametasona semelhante ao grupo controle. Conclusões: Crianças com asma grave não são resistentes ao corticóide em análise in vitro de células mononucleares periféricas. Nossos achados sugerem que a resistência aos corticóides em pacientes com asma grave pode ser um processo adquirido durante a vida.