Made available in DSpace on 2016-12-23T13:50:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TESEfinal20nov.pdf: 1675526 bytes, checksum: d87e98395556fe1f79698375acf1eb1b (MD5) Previous issue date: 2005-10-14 / Acute diarrhea is one of the main causes of infantile mortality worldwide (WHO), mainly in developing countries. In the present work, the prevalence of Rotavirus (RV), adenovirus (Ad), diarrheogenic E. coli (EPEC, ETEC, EIEC, EHEC, EAEC, DAEC), Salmonella, Shigella, Cryptosporidium spp., Entamoeba histolytica and Giardia lamblia was studied among children up to 3 years old with acute diarrhea. From February 2003 to June 2004, stools samples were obtained prospectly from 253 children with acute diarrhea and 78 without diarrhea attending to the emergency room in a pediatric hospital - Hospital Infantil Nossa Senhora da Glória (HINSG), in Vitória Espírito Santo state, Brazil. Bacterial detection was done in 241 stools samples (12 were excluded because were in use of antimicrobian drugs) and E. coli were isolated in 219 and 68 cases with and without diarrhea, respectively. These cases were submited to serology with policlonal anti-seros (EPEC e EIEC) and hybridization tests (Hybr) to detect virulence genes of EPEC, ETEC, EIEC, EHEC, EAEC e DAEC. RV were studied in 147 cases for immune enzymatic assay (EIARA) and in 230 cases by poliacrylamide gel electrophoresis (PAGE) and Ad, only in 147 cases for immune enzymatic assay (EIARA). Protozoan infection was studied in 88 cases for immune enzymatic assay (EIA). Children with diarrhea were divided in Group I (88 cases = all enteropathogens studied), Group II (147 cases = bacterias, RV e Ad - EIARA) and Group III (230 cases = bacterias and RV - PAGE) and children without diarrhea were Group IV (78 cases = bactérias and RV - PAGE). Enteropathogens were detected in more than 60% in children with acute diarrhea and bacterial infection was the most prevalent: DEC were detected in 41,1%; EPEC in 3,6% (serology) e 9,1% (Hybr); Typical EPEC (0,9%); Atypical EPEC (8,2%); EAEC (9,1%); DAEC (20,6%); EIEC (0,9%); ETEC (4,2%). In stools samples from children without diarrhea, we found Atypical EPEC (10,3%); EAEC (20,6%); DAEC (16,2%); ETEC (1,5%). EHEC was not detected in the studied population. Shigella and Salmonella were detected in 4,6% e 2,9%, respectively, only in children with acute diarrhea. RV were detected in 35,2% (GEPA) and 50% (EIARA); Ad, in 8,2% and E. histolytica, Cryptosporidium spp. and G. lamblia in 8%, 11,4% and 14,8% of cases with diarrhea, respectively. In conclusion, Typical EPEC, EIEC and ETEC were detected only or predominantly in children with acute diarrhea. Atypical EPEC, EAEC and DAEC were not causes of acute diarrhea, except for EAEC in children more than two years old (p = 0,026). RV was the most prevalent agent when the classic enteropathogen DEC (Tipical EPEC, ETEC, EIEC and Shigella e Salmonella) was considered in this study. RV was more frequent in children below 18 months of life and in a period of March, 2003 up September, 2003. Associations among enteropathogens were frequent in the studied population and protozoa were the most of them. Comparing all of protozoa detected, only G. lamblia suggesting being a cause of acute diarrhea, isolately. / A diarréia aguda é uma causa importante de mortalidade infantil, nos países em desenvolvimento (OMS). A prevalência de rotavírus (RV), adenovírus (Ad), categorias diarreiogênicas de E. coli (DEC), Salmonella, Shigella, Cryptosporidium spp., Entamoeba histolytica e Giardia lamblia, foi pesquisada em crianças até 3 anos de idade. De fevereiro de 2003 a junho de 2004, foram obtidas 253 amostras fecais de crianças com diarréia aguda e 78 sem diarréia, atendidas no Hospital Infantil Nossa Senhora da Glória (HINSG), Vitória ES. O estudo das bactérias foi feito em 241 amostras fecais (12 excluídas por uso de antimicrobiano) com isolamento de colônias caracterizadas bioquimicamente como E.coli em 219 e 68 casos com diarréia e sem diarréia, respectivamente. Estes casos foram submetidos à sorologia com anti-soros polivalentes (EPEC e EIEC) e testes de hibridização (Hibr) para pesquisa de genes de virulência para detecção de EPEC, ETEC, EIEC, EHEC, EAEC e DAEC. RV foram pesquisados em 147 casos por ensaio imunoenzimático (EIERA) e em 230, através da eletroforese em gel de poliacrilamida (EGPA), e Ad em 147 casos, por ensaio imunoenzimático (EIERA). Os protozoários foram pesquisados 88 amostras por ensaio Imunoenzimático (EIE). As crianças com diarréia foram divididas em: Grupo I (88 casos = todos os agentes pesquisados), Grupo II (147 casos = bactérias, RV e Ad - EIERA) e Grupo III (230 casos = bactérias e RV - EGPA) e as crianças sem diarréia compuseram o Grupo IV (78 casos = bactérias e RV - EGPA). Mais de 60% das amostras colhidas de crianças com diarréia aguda foram positivas para enteropatógenos, sendo as bactérias, os mais prevalentes, seguidos pelos vírus. DEC foram detectadas em 41,1% dos casos de diarréia aguda: EPEC em 3,6% (sorologia) e 9,1% (Hibr); EPEC típica (0,9 %); EPEC atípica (8,2%); EAEC (9,1%); DAEC (20,6%); EIEC (0,9%); ETEC (4,2%). Nas crianças sem diarréia, detectou-se EPEC (10,3%); EAEC (20,6%); DAEC (16,2%); ETEC (1,5%). EHEC não foi detectada. Nas crianças com diarréia aguda foram detectados Shigella (4,6%), Salmonella (2,9%), RV em 35,2% (EGPA) e 50% (EIERA); Ad (8,2%) e E. histolytica (8%), Cryptosporidium spp. (11,4%) e G. lamblia (14,8%). Concluindo, EPEC típica, EIEC e ETEC foram detectadas apenas ou predominantemente nas crianças com diarréia. EPEC atípica, EAEC e DAEC não estiveram relacionadas com diarréia aguda, exceto EAEC nas crianças acima dos dois anos de idade (p = 0,026). RV foi agente infeccioso mais prevalente considerando somente DEC classicamente patógenas (EPEC típica, ETEC, EIEC, Shigella e Salmonella), nos menores de 18 meses de vida e nos meses de março a setembro de 2003. As associações entre enteropatógenos foram freqüentes, sendo os protozoários, o grupo de enterópatógenos com o maior número de associações. Dos protozoários avaliados, apenas G. lamblia parece ser agente etiológico isolado de diarréia aguda.

Made available in DSpace on 2016-12-23T13:50:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 1 Capa Resumo.pdf: 251988 bytes, checksum: d44ec2a18c4d2d0ca8e66df9332e658c (MD5) Previous issue date: 2005-05-31 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / ApoE-/- knockout mouse is a model for studies of hypercholesterolemia, which is characterized by developing atherosclerotic lesions mainly in great arterial vessels such as the aortic arch, which is a site of baroreceptor nerve endings. In addition, it is known that angiotensin affects the atherosclerotic process and baroreflex sensitivity. Thus, the aim of this study was to evaluate morphological changes in the aortic arch in ApoE-/- mice with renovascular hypertension. Male (12-14 weeks old) C57 and ApoE-/- mice received a clip (0.12mm) on the renal artery to induce renovascular hypertension (C57-HT, N=11; ApoE-HT, N=11) and were compared with age-matched sham mice (C57-Sham, N=11; ApoE-Sham, N=11). After 28 days, mean arterial pressure (MAP) measured in conscious animals was higher in C57-HT and ApoE-HT (128±3 and 126±3 mmHg) than in their respective controls (103±2 and 104±2 mmHg, p<0.05). The animals were euthanized and perfused with a fixative solution at pressure equal to the MAP observed in each animal. The cross section area of the aortic arch was greater in C57-HT and ApoE-HT (0.76±0.05 and 0.73±0.03 mm2) than in their respective controls (0.64±0.02 and 0.63±0.03 mm2, p<0.05). The wall vessel area was also greater in these hypertensive groups (0.18±0.01 and 0.19±0.01 mm2) than in the normotensive groups (0.15±0.01 and 0.17±0.01 mm2, p<0.05). Consequently, the lumen vessel area followed the same results. In conclusion, our data indicate that at least at the early stage of atherosclerosis the remodeling process is not yet observed in the ApoE-/- mouse. Renovascular hypertension by itself leads to a positive remodeling of the aortic arch, which is aggravated by the association with atherosclerosis when compared with the C57 control. / O camundongo knockout para apolipoproteína E (apoE-/-) é um modelo para hipercolesterolemia e aterosclerose, cujas lesões se localizam principalmente nas grandes artérias. Sabe-se também que este processo é afetado pela angiotensina II. Por isto, o objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da aterosclerose e da hipertensão renovascular sobre a morfologia do arco aórtico, um dos sítios das terminações barorreceptoras. Camundongos, machos, 12-14 semanas de idade, C57 e apoE-/- foram submetidos a estenose da artéria renal, para produção da hipertensão 2-rins e 1-clipe (2R1C; n=11 por grupo) e comparados com os respectivos controles (Sham, n=11 por grupo). Após 28 dias, a pressão arterial media (PAM), no animal acordado, foi maior nos grupos C57-2R1C e apoE-2R1C (128±3 e 126±3 mmHg) do que nos seus controles (103±2 e 104±2 mmHg, p<0,01, ANOVA). Em seguida, os animais foram sacrificados e perfundidos, sob pressão equivalente à PAM de cada animal. A área de secção transversa do arco aórtico foi maior no grupo C57-2R1C (0,75±0,05 mm2) do que no grupo C57-Sham (0,65±0,02 mm2, p<0,01, ANOVA), enquanto que no grupo apoE-2R1C verificou-se uma tendência a maiores valores do que nos apoE-Sham (0,73±0,03 vs. 0,68±0,04 mm2) e um aumento significante quando comparado com os C57-Sham (p<0,05, ANOVA). A área de parede vascular também foi maior nos grupos hipertensos (C57: 0,18±0,01 e apoE: 0,19±0,01 mm2) do que nos grupos controles (C57: 0,15±0,01 e apoE: 0,17±0,01 mm2, p<0,05, ANOVA). A área do lúmen apresentou valores que seguiram o mesmo padrão da área de secção transversa. Os dados indicam que a hipertensão 2R1C, por si só, causa um remodelamento positivo (alargamento compensatório) no arco aórtico de camundongos C57. Além de que no estágio inicial da aterosclerose, a associação desta hipertensão agrava o processo de remodelamento de maneira significativa quando comparado com o controle C57.

Made available in DSpace on 2016-12-23T13:55:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Joaquim Batista Ferreira Filho.pdf: 1895356 bytes, checksum: f5b769a57ed05fde39e5bf2d0a53419b (MD5) Previous issue date: 2012-08-16 / Background: There are few studies in population samples on the prevalence of syphilis in Brazil. Objectives: To determine the seroprevalence of syphilis and to identify factors associated with infection in adult patients treated in units of six health regions of the city of Vitória, Espírito Santo. Methods: Cross-sectional study between September 2010 and December 2011. VDRL and two treponemal tests (immunochromatographic test and IgG ELISA) were performed in 1502 subjects. Demographic data, history of STD and behavioral data were collected for each person. Cases with VDRL 1:8 or above, confirmed by a treponemal test were considered as syphilis. Results: Of 1502 enrolled, 47% were men and 53% women. The mean age was 41.63 &#61617; 14.57 years. The prevalence of syphilis was 0.9% (95% CI: 0.4% - 1.3%). Multivariate analysis showed significant association of syphilis with homosexual or bisexual behavior [OR 6.80 95% CI 1.00 to 46.20], history of STD [OR 16.30 95% CI 3.61 to 73.41], use tattooing [OR 6.21 95% CI 1.49 to 25.84] and cocaine use [OR 6.80 95% CI 1.15 to 40.30]. The prevalence of a positive treponemal test was 10.4% (CI 95% 8.9%-11.9), of which 27 had VDRL positive test with titers less than 1:8. Conclusion: The seroprevalence of syphilis in the studied population is similar to that observed in other samples studied in Brazil and confirmed the main associated risk factors. The high prevalence of treponemal positive tests may be due to serological scar of cured previous infections, but can also be associated with cases of primary or late syphilis, not detected by the VDRL / Introdução: Existem poucos estudos em amostras populacionais sobre a prevalência da sífilis no Brasil. Objetivos: Determinar a soroprevalência de sífilis e identificar fatores associados à infecção em pacientes adultos atendidos nas unidades das seis regiões de saúde do Município de Vitória, Estado do Espírito Santo. Métodos: Estudo transversal realizado entre setembro de 2010 e dezembro de 2011. Foram realizados VDRL e dois testes treponêmicos (teste imunocromatográfico e ELISA IgG) em 1502 pessoas. Foram coletados dados demográficos, história pregressa de DST e dados comportamentais. Foram considerados como sifilis os casos com VDRL com títulos iguais ou maiores que 1:8, confirmados por um teste treponêmico. Resultados: Dos 1502 incluídos no estudo, 47% eram homens e 53%, mulheres. A média da idade foi 41,63&#61617;14,57 anos. A prevalência de sífilis foi de 0,9% (IC 95% 0,4% 1,3%). Análise multivariada mostrou associação significativa da sifilis com comportamento homo ou bissexuall [OR 6,80 IC95% 1,00-46,20], história prévia de DST [OR 16,30 IC95% 3,61-73,41], tatuagem [OR 6,21 IC95% 1,49-25,84] e uso de cocaína [OR 6,80 IC95% 1,15-40,30]. A prevalência de um teste treponêmico positivo foi de 10,4% (IC95% 8,9%-11,9%), dos quais, 27 tiveram VDRL positivo com títulos abaixo de 1:8. Conclusão: A soroprevalência de sífilis na população estudada foi de 0,9% [IC 95% 0,4-1,3], semelhante à observada em outras amostras estudadas no Brasil, confirmando os principais fatores de risco associados; a alta prevalência nos testes treponêmicos positivos pode ser devida a cicatriz sorológica de infecção curada , mas pode também estar associada a casos de sifilis primária ou tardia, não detectados pelo VDRL

Made available in DSpace on 2016-12-23T13:55:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 katia tese 0610.pdf: 741016 bytes, checksum: 8bb9b946b0c9ceb9d03787d372f223af (MD5) Previous issue date: 2006-10-05 / Introduction Leprosy reactions are acute, potentially disabling inflammatory episodes which occur during the chronic course of the disease. The identification of risk factors is essential for a closer monitoring of at-risk patients and for preventing disabilities. Objective To estimate the frequency of inflammatory episodes during MDT and the risk factors they may pose. Methods A cohort study was undertaken, involving 108 patients diagnosed with PB and MB leprosy and observed during MDT. The study was carried out from May 2004 through April 2006, and the patients were monitored at the Health Units of Metropolitan Region of Vitória or at the University Hospital (HUCAM). Clinical and socio-demographic data were obtained through a questionnaire. Patients underwent a dermato-neurological evaluation and had their degree of disability rated (GI). A biopsy of the cutaneous lesions and a baciloscopy were performed, as well as a parasitological examination of faeces. Patients were also tested for HIV. When a leprosy reaction was suspected both the GI and the biopsy were repeated. An attempt was made in establishing a correlation between the reactions and variables such as sex, age, delay of leprosy diagnosis, type of leprosy, neural damage, number of lesions, the number of body segments affected by the disease, GI, baciloscopy, parasitological examination of faeces, and the HIV 1 and 2 test results. Results Leprosy reactions were observed in 20,4% of the 108 MB and PB patients during MDT; RR in 11,1%. ENL in 1, 8% and neuritis in 7, 4%. Both RR and ENL occurred mainly in the first 6 months of MDT, while ENL occurred in all cases in the second semester. Reactions were more common in borderline patients (31,8% of BT, 13,6% of BB and 13,6% of BV). Leprosy reactions were also more common in patients with more than 5 skin lesions and with 2 or more body segments involved. Patients older than 45 had a higher risk of RR, while IB>3 was associated with ENL. No correlation was observed between the remaining variables and the leprosy reactions. Conclusion 1) Leprosy reactions are common complications which may occur anytime during MDT; 2) Particular groups of patients seem to be at a higher risk for reactions and therefore should be more closely monitored: patients older than 45 (RR), clinical forms BT to RR, L to ENL and T to isolated neuritis -, number of skin lesions > 5, 2 to 3 body segments affected and IB 3 (ENL). Key words: leprosy; leprosy reactions; RR, ENL, neuritis, MDT. / Introdução: As reações hansênicas são manifestações inflamatórias agudas que ocorrem frequentemente durante o curso crônico da hanseníase podendo levar a deformidades permanentes. É importante identificar os fatores de riscos envolvidos, de modo a acompanhar os pacientes mais propensos evitando seqüelas. Objetivos: Estimar a freqüência das reações hansênicas durante a PQT e seus possíveis fatores de risco. Metodologia: Foi realizado um estudo de coorte, onde foram incluídos 108 pacientes com diagnóstico de hanseníase PB e MB acompanhados durante a PQT, no período de maio de 2004 a abril de 2006, atendidos nas US da Grande Vitória e no HUCAM. Um questionário específico contendo dados sócio-demográficos e clínicos sobre a hanseníase foi utilizado e os pacientes foram submetidos a exame dermato-neurológico com aferição do grau de incapacidade (GI), biópsia de lesão cutânea, baciloscopia, bem como a realização de exame parasitológico de fezes e sorologia pra HIV. Avaliação do GI e biópsia de pele eram novamente realizados na hipótese diagnóstica de reação hansênica. Tentou-se correlacionar algumas variáveis com a ocorrência de reações como: sexo, idade, tempo de demora no diagnóstico da hanseníase, classificação da hanseníase, comprometimento neural, número de lesões cutâneas, número de segmentos corporais comprometidos, GI, baciloscopia, exame parasitológico de fezes e sorologia para HIV 1 e 2. Resultados: Dos 108 pacientes MB e PB, 20,4% apresentaram estados reacionais durante a PQT. RR ocorreu em 11,1%, ENH em 1,8% e neurite em 7,4%. RR e neurite ocorreram principalmente dentro dos primeiros 6 meses de PQT e o ENH ocorreu em 100% dos casos no segundo semestre. Reações foram mais comuns em pacientes dimorfos (31,8% de DT, 13,6% de DD e 13,6% de DV), seguidos pelos pacientes T (22,7%) e V (18,2%). A ocorrência de reações foi maior nos pacientes com mais de 5 lesões cutâneas e com 2 ou mais segmentos corporais afetados. Pacientes acima de 45 anos tiveram maior risco de RR enquanto IB 3 associou-se a ENH. Não foi observada correlação entre as demais variáveis estudadas e a ocorrência de reação. Conclusões: 1) Os estados reacionais são complicações comuns que podem ocorrer em qualquer momento durante a PQT; 2) Certas categorias de pacientes parecem ter maior risco para desenvolver reações e deveriam ser monitorizados com maior cuidado: idade acima de 45 anos (RR), formas clínicas: DT para RR, V Create PDF with PDF4U. If you wish to remove this line, please click here to purchase the full version para ENH e T para neurite isolada, número de lesões dermatológicas maior que 5, 2 a 3 áreas corporais afetadas e IB 3 (ENH). Palavras-chave: hanseníase; reações hansênicas; RR, ENH, neurite, PQT.

Made available in DSpace on 2016-12-23T13:55:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Jauber.pdf: 957040 bytes, checksum: b33b665e56b60dad68983864cc03c19e (MD5) Previous issue date: 2006-08-31 / In this work, the performance of a cytometry-based methodology to detect anti-L.(L.) amazonensis antibodies was analyzed for the diagnosis for American tegumentar leishmaniasis (ATL). As a first step, we have standardized the methodology which allowed the discrimination between patients with ATL and healthy individuals. Then, we analyzed sera from 69 patients with parasitological diagnosis for ATL (59 from cutaneous and 10 from mucosal leishmaniasis) to evaluate the performance of the methodology in diagnosing ATL. As control, sera from 34 healthy individuals and 50 patients with visceral leishmaniasis (VL), Chagas disease (CD), malária (MAL), hanseniasis (HAN) and sporotrichosis (SPO) were also assessed. Diluted sera samples were first incubated with fixed promastigote and then, with FITC conjugated anti-human IgG diluted at 1:4,000 for flow cytometry analysis. The results were expressed as percentage of positive fluorescent parasites (PPFP) for each individual sample, establishing PPFP = 25% as the cut-off between positive and negatives results. The analysis of the test performance demonstrated sensibility of 99% and specificity of 100%, when only sera from healthy individuals were considered as control. However, a decrease on the specificity (from 100% to 70%) was observed when sera from VL, CD and MAL were evaluated. Due to this cross-reaction, the performance of the test using IgG subclasses was evaluated in the diagnosis of ATL. Concerning IgG subclasses, reactivity was found only for IgG1 and IgG3. The comparative analysis of the test performance using IgG, IgG1 and IgG3 showed sensibility of 96%, 88% and 100% and specificity of 54,5%, 63% and 65% , respectively, when sera from VL, CD and MAL were analyzed. Based on our results we can conclude that this methodology can be used as an alternative tool for the diagnosis of ATL. / O objetivo deste trabalho foi avaliar o desempenho da pesquisa de anticorpos anti-L. (L.) amazonensis, por citometria de fluxo, no diagnóstico da leishmaniose tegumentar americana (LTA). Inicialmente, foi realizada a padronização do método, a partir da qual foram estabelecidas as condições que permitiram discriminar entre a reatividade de IgG de pacientes portadores de LTA e de indivíduos saudáveis. Posteriormente, para avaliar a aplicabilidade e o desempenho da metodologia no diagnóstico da LTA, foram utilizados soros de 69 pacientes com diagnóstico sorológico positivo para LTA, sendo 59 de pacientes com leishmaniose cutânea e 10 com leishmaniose mucosa. Como controles, foram também avaliados 34 soros de indivíduos saudáveis e 50 soros de pacientes portadores de diferentes doenças infecciosas, incluindo leishmaniose visceral (LV), doença de Chagas (DC), malária (MAL), hanseníase (HAN) e esporotricose (ESP). As amostras de soro diluídas foram incubadas com promastigotas fixadas de L. (L.) amazonensis, posteriormente incubadas com anti-IgG humano marcado com FITC diluído 1:4.000 e analisadas no citômetro de fluxo. Os resultados foram expressos como o percentual de parasitos fluorescentes positivos (PPFP) para cada amostra individual, estabelecendo PPFP=25% como ponto de corte entre pacientes com LTA e indivíduos saudáveis. A análise do desempenho do teste mostrou sensibilidade de 99% e especificidade de 100% quando foram avaliados como controles apenas soros de indivíduos saudáveis. Entretanto, a análise do teste com soros de pacientes com LV, DC e MAL mostrou uma alta reatividade cruzada com essas infecções, causando uma queda dos índices de especificidade de 100% para 70%. Devido a essa reatividade cruzada, foi avaliado o desempenho da pesquisa de subclasses de IgG no diagnóstico da LTA. Com relação às subclasses de IgG, foi encontrada reatividade significante apenas para IgG1 e IgG3. A análise comparativa do desempenho da metodologia para a pesquisa de IgG, IgG1 e IgG3 mostrou sensibilidade de 96%, 88% e 100%, e especificidade de 54,5%, 63% e 65%, respectivamente, quando no grupo controle foram incluídos soros de pacientes com LV, DC e MAL. Com base nesses dados, podemos concluir que essa metodologia pode ser utilizada como ferramenta alternativa para o diagnóstico da LTA.

Made available in DSpace on 2016-12-23T13:56:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao mestrado Fabiola KC Ribeiro.pdf: 2704108 bytes, checksum: a71f965869f400f55bf7070f451c11db (MD5) Previous issue date: 2006-09-15 / For many years, it has been thought that a positive culture of Mycobacterium tuberculosis is a definitive diagnostic evidence of tuberculosis (TB). However, the recent use of molecular tools have resulted in increased recognition of crosscontamination events linked, most of the times, to laboratory procedures. Features of cross-contamination include: culture results not consistent with the clinical course of the patient, isolates with unexpected drug resistance, single culture-positive specimen and low colony count on solid medium. Nonetheless, true-positive cultures of specimens from some groups of patients (with preliminary active pulmonary tuberculosis, HIV infection, or under treatment) can also have some of the characteristics outlined above. The evaluation of low-yield growth cultures as a microbiological marker of cross-contamination would be very helpful in confirming or excluding TB cases. In the present study, we assessed whether or not low-yield growth cultures could be considered a cross-contamination marker, using molecular typing methods (RAPET e RFLP). From January 2003 to January 2005, we evaluated 109 low-yield growth cultures (less than 20 colonies) from 97 patients that were processed in 94 different days. The false-positive rate found in this study was of 1,8% and 2,0% per samples and patients, respectively. These results suggest that low-yield growth cultures do not seem to be a considerable marker for crosscontamination, especially in a clinical trial mycobacteriology laboratory or in laboratories working under the good laboratory and clinical practices (GLCP). It has also been shown that the modified RAPET method is rapid (1 to 2 days), reproducible, and valuable in identifying episodes of possible laboratory crosscontamination. / Apesar da importância do diagnóstico clínico, da baciloscopia, e das técnicas inovadoras de biologia molecular, a cultura positiva em meio sólido e/ou líquido continua sendo o padrão-ouro para o diagnóstico definitivo da tuberculose (TB). Entretanto, nos últimos anos, a utilização de métodos moleculares proporcionou um aumento na detecção de episódios de contaminação cruzada que, na maioria das vezes, estão relacionados a procedimentos laboratoriais. Alguns critérios são considerados indicadores de contaminação cruzada: resultado positivo de apenas uma das culturas do paciente, resultado de cultura não compatível com a história clínica do paciente, observação de um padrão inesperado de resistência a drogas na cepa isolada e o crescimento de poucas colônias de M. tuberculosis em meio sólido. No entanto, culturas de pacientes paucibacilíferos, infectados pelo HIV ou em tratamento, também podem apresentar as mesmas características descritas acima. No presente estudo, avaliamos se o crescimento de poucas colônias em meio de cultura sólido pode ser considerado um indicador de contaminação cruzada, utilizando técnicas de tipagem molecular (RAPET e RFLP). De Janeiro de 2003 a Janeiro de 2005, foram avaliadas 109 cepas isoladas de culturas (UFC < 20) provenientes de 97 pacientes e processadas em 94 diferentes dias. O índice de falso-positividade encontrado neste estudo foi de 1,8% e 2,0% por amostras e por pacientes, respectivamente. Estes resultados sugerem que crescimento de poucas colônias em meio sólido não pode ser considerado um marcador de contaminação cruzada, especialmente em laboratórios de micobacteriologia que realizam ensaios clínicos e/ou desenvolvem suas atividades seguindo as normas de Boas Práticas Clínicas e Laboratoriais. Também foi demonstrado que a técnica RAPET modificada é um método rápido (realizado em 1-2 dias), reprodutível e valioso na identificação de possíveis episódios de contaminação cruzada.

Made available in DSpace on 2016-12-23T13:56:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TESE FINAL PDF VERSAO DOIS.pdf: 1354947 bytes, checksum: 1bc7e4f84a54161e556e8a34e37633c9 (MD5) Previous issue date: 2007-06-14 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O objetivo deste trabalho foi avaliar aspectos da resposta imune celular em pacientes portadores de FD em diferentes estágios da doença. Amostras de sangue periférico de 22 pacientes, portadores de FD, foram coletadas em três fases da doença: fase aguda, Dia 0 (até 48 horas após o início dos sintomas), fase de convalescença, Dia 7 (uma semana após a primeira coleta) e fase pós-cura, Dia 60 (60 dias após a primeira coleta). As células mononucleares do sangue periférico foram marcadas com anticorpos específicos para diferentes populações e subpopulações celulares, e marcadores de ativação, CD25, CD69 e HLA-DR. Os resultados revelaram que os pacientes portadores de FD em todas as fases da doença, mas principalmente na fase aguda, apresentaram menor número de plaquetas. Foi também observado, na fase aguda da doença, um menor número de leucócitos circulantes, com diminuição do número de neutrófilos, monócitos e linfócitos. A análise de subpopulações de linfócitos revelou que a diminuição do número dessas células era devido ao menor número de linfócitos B, T CD4+ e T CD8+. A análise de células NK mostrou que pacientes, na fase aguda da doença, apresentaram um menor número destas células mas, com uma maior porcentagem de células NK na população de linfócitos totais. Com relação ao estado de ativação das células os dados revelaram que, na fase aguda da doença, os pacientes apresentaram maior porcentagem de T CD4+ e T CD8+ expressando CD69, com aumento mais pronunciado em linfócitos T CD8+. Além disso, foi demonstrada uma maior porcentagem de linfócitos T CD4+HLA-DR+ e TCD4+CD25+, na fase aguda da doença e uma maior porcentagem de linfócitos T CD8+HLA-DR+ na fase de convalescença. A análise de associação, entre parâmetros hematológicos e o fenótipo das células mononucleares do sangue periférico com a presença de sinais e sintomas, da doença revelou que pacientes com doença mais grave apresentaram um menor percentual de linfócitos CD8+HLA-DR+ em relação aos pacientes com doença branda. Em relação aos demais parâmetros avaliados, não encontrou-se nenhuma diferença entre os dois grupos avaliados. Em suma, os dados sugerem que a resposta imune do hospedeiro é importante para a eliminação do vírus. Entretanto, estudos adicionais ainda são necessários para avaliar a influência da resposta imune na patogênese da infecção pelo vírus Dengue. / The objective of the present study was to examine the PBMC immunological status of patients with Dengue Fever during different stages of disease. Blood samples from 22 patients with Dengue Fever, were collected at three different stages of the disease: at acute phase, Day 0 (1-2 days after disease onset), convalescent phase, Day 7 (7 days after the first sample) and post-cure phase, Day 60 (60 days after the first sample). Peripheral blood mononuclear cells were stained using fluoresceinlabeled monoclonal antibodies to both PBMC subset markers and the activation markers, such as CD69, CD25 and HLA-DR, and analyzed using flow cytometry. The results have showed lower platelets count compared to control group, on the different stages of Dengue Fever. In acute phase, the white blood cells counts in patients with Dengue Fever were lower, with decreased numbers of monocytes, neutrophils and lymphocytes. The same was observed for absolute numbers of B cells, CD4+ and CD8+ T cells. The results show a lower number of NK cells on acute phase of Dengue Fever, but an increase was observed on percentage of NK cells in total lymphocytes. Concerning the activation status of the peripheral blood cells, our results have demonstrated that the percentage of CD8+ T and CD4+T cells expressing CD69 was significantly higher, and this increased was more evidenced on CD8+ T cells. Moreover was demonstrated a higher percentage of T CD4+HLA-DR+ and CD4+CD25+, on acute phase of the disease and a higher percentage of T CD8+HLA-DR+ on convalescent phase. The association analysis between the hematological parameters and the immunological status of the peripheral blood mononuclear cells with the presence of clinical manifestations of the disease has revealed that severe Dengue Fever patients presented a lower percentage of CD8+HLA-DR+ T lymphocytes, compared with the mild Dengue Fever patients. Therefore, data presented here suggest that host immune response is important to clearance viral. However, additional studies were needed to evaluate the role of immune response in the immunopathological mechanism during Dengue virus infection.

Made available in DSpace on 2016-12-23T13:56:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Aretha.pdf: 947108 bytes, checksum: f5ca682ce13d6abc69dc5e8e029e1235 (MD5) Previous issue date: 2009-04-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Apesar da descoberta da ação leishmanicida dos antimoniais pentavalentes ter sido o fato de maior impacto na terapêutica da leishmaniose visceral (LV), seus efeitos tóxicos e o longo tempo de tratamento ainda limitam seu uso. Como droga de segunda escolha é utilizado o desoxicolato de anfotericina B, um antibiótico com alta atividade anti-Leishmania, sendo seu uso também restrito em virtude de sua alta toxicidade. Portanto, o grande desafio ao longo dos anos tem sido o desenvolvimento de novos medicamentos ou novas formulações de drogas já existentes, bem como a utilização de terapia combinada. Neste sentido, nos propusemos a avaliar o efeito da associação do antimoniato de meglumina e desoxicolato de anfotericina B (DAMB) e da atividade de uma nova formulação de anfotericina B (CAMB) na infecção experimental com L. (L.) chagasi. Os ensaios in vitro foram realizados utilizando macrófagos peritoneais murinos infectados com L. (L.) chagasi tratados com diferentes concentrações das drogas. A atividade das drogas foi determinada pela porcentagem de macrófagos infectados tratados em relação ao controle não tratado. Para avaliar o efeito da combinação foi utilizado o método da Razão Fixada Modificado e para classificar as interações foram utilizados como cuttoffs a média dos &#931;FICs de 0,5 e 4. Os resultados demonstraram que a associação entre o antimoniato de meglumina e DAMB apresentou um efeito aditivo, com &#931;FIC variando entre 0,65 e 1,02 para a CI50. Na análise in vitro da atividade de CAMB utilizamos como controle o DAMB e nossos resultados demonstraram uma atividade semelhante entre as duas drogas, com CI50 de 0,017 e 0,021 µg/mL para CAMB e DAMB respectivamente, no entanto apresentou uma menor citotoxicidade em relação a DAMB. Nos experimentos de infecção in vivo a CAMB não apresentou atividade quando administrada por via oral utilizando as doses de 1 e 5 mg/kg/dia durante 15 dias; enquanto que DAMB administrado por via intraperitoneal mostrou-se altamente eficaz, sugerindo que o uso de doses mais elevadas e vias alternativas de administração da CAMB ainda devem ser avaliadas para confirmar esses achados. / Despite the discovery of action antileishmanial of Pentavalent antimonials have been the fact that a greater impact on the therapeutic of visceral leishmaniasis, toxic effects and long-term treatment still limit their use. As the second drug of choice is the use of deoxycholate amphotericin B, an antibiotic with high anti-Leishmania activity, and its use is also restricted because of its high toxicity. The major challenge is the development of new drugs, or new formulations of standard drugs, and therapeutic regimens like drugs combinations. Thus, we evaluate the effect of association between meglumine antimoniate and anphotericin B desoxycholate and antileishmanial activity of a new formulation (CAMB) of amphotericin B in the experimental infection with Leishmania (Leishmania) chagasi. Peritoneal macrophages from mice infected with L. chagasi treated with different drugs. Drug activity was determined from the percentage of infected cells in drug-treated cultures in relation to nontreated cultures. In vitro drug interactions were assessed using a modified fixed-ratio method and to classify the interactions, means &#931;FICs of 0.5 and 4 were used as cutoffs. The interaction of meglumine antimoniate and DAMB was additive with mean &#8721;FICs of 0,65 to 1.02 at the IC50 level. To analysis in vitro activity of CAMB was used as control DAMB, and the results showed a similar activity between the two drugs, with IC50 of 0,017 and 0,021µg/mL for CAMB and DAMB respectively, however showed a lower cytotoxicity compared to DAMB. However, in vivo infection mice, CAMB showed no efficacy when administered orally at doses of 1 and 5mg/kg/day for 15 consecutive days, while DAMB injected intraperitoneally was highly effective, suggesting that the use of higher doses and alternative routes of administration of CAMB yet to be evaluated to confirm these findings.

Made available in DSpace on 2016-12-23T13:56:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao de Debora Maria Pires Goncalves Barreira.pdf: 7893356 bytes, checksum: 73f7565f4fa0af37c7e9308a6bf8d2dc (MD5) Previous issue date: 2008-12-19 / Noroviruses (NoVs) are a major etiological agent of sporadic acute gastroenteritis worldwide. The aim of this study were to detect, to quantify and to determine the genotype of NoVs from children up to three years old symptomatic (with gastroenteritis) and asymptomatic (without gastroenteritis), in the emergency room of Hospital Infantil Nossa Senhora Glória (HINSG), in Vitória-ES, between February 2003 and June 2004. NoVs were investigated by RT-PCR in a total of 319 fecal specimens from children up to three years old with (n=229) and without (n=90) acute diarrhea. NoVs were quantified by real time RT-PCR, sequenced and genotyped by phylogenetic analysis. NoVs were detected in 17% (40/229) and 13% (12/90) of symptomatic and asymptomatic children, respectively. Five NoVrotavirus A mixed infections were observed in symptomatic children. Out of the 52 positive strains, 51 were grouped as NoV GII and one as GI. Data from sequencing and phylogenetic analyses classified 20 strains into the following genotypes: GII/4 (9/13), GII/3 (1/13), GII/6 (2/13) and GII/14 (1/13) in symptomatic and GII/3 (6/7) and GII/8 (1/7) in asymptomatic children. The median RNA viral loads were 8.39 and 7.15 log10 copies/g of fecal specimens for symptomatic and asymptomatic children, respectively (p=0.011). NoV load was lower when it was present in a mixed infection with rotavirus A (p=0.0005). Vomiting and diarrhea were observed in 97.5% of the positive cases without association with viral load. This study demonstrates a great diversity of NoV strains circulating in this geographic area, and reports GII/8 and GII/14 in the American Continent for the first time. In addition, it confirms GII/4 as the most prevalent genotype in symptomatic children and identified GII/3 in an important frequency, especially in asymptomatic children. Furthermore, preliminary results show that symptomatic patients present a viral load that is significantly greater than asymptomatic children (p=0.011) and suggest that rotavirus A may have a suppressor effect on NoV replication when mixed infection occurs / Norovírus (NoVs) são importantes agentes etiológicos de gastroenterite aguda em todo o mundo. O objetivo deste estudo foi detectar, quantificar e determinar o genótipo de NoVs em crianças de até três anos de idade, sintomáticas (com gastroenterite aguda) e assintomáticas (sem gastroenterite aguda), atendidas no pronto socorro do Hospital Infantil Nossa Senhora Glória (HINSG), no período de fevereiro de 2003 a junho de 2004, na cidade de Vitória, Espírito Santo, Brasil. NoVs foram pesquisados por RT-PCR em um total de 319 amostras fecais de crianças com (n=229) e sem (n=90) sintomas de gastroenterite. RNA de NoVs foram quantificados por RT-PCR em tempo real, seqüenciados e submetidos a análise filogenética. NoVs foram detectados em 17% (40/229) e em 13% (12/90) de crianças sintomáticas e assintomáticas, respectivamente. Foram observadas cinco infecções mistas de NoV-rotavírus A nas crianças sintomáticas. Os genogrupos de NoVs foram caracterizados como: GII (51/52) e GI (1/52). Seqüenciamento e análises filogenéticas classificaram 20 cepas nos seguintes genótipos: 9 GII/4 (45%), 1 GII/3 (5%), 2 GII/6 (10%) e 1 GII/14 (5%) em crianças sintomáticas e 6 GII/3 (86%) e 1 GII/8 (14%) em crianças assintomáticas. A mediana da concentração de RNA viral foi de 8,39 versus 7,15 log10 cópias/g de fezes para crianças sintomáticas e assintomáticas, respectivamente (p=0,011). A concentração de NoVs foi menor quando presente em infecção mista com rotavirus (p=0,003). Vômito e diarréia foram observados em 97,5% dos casos positivos e não apresentaram associação com concentração viral. Este estudo demonstra uma grande diversidade de cepas de NoVs na área geográfica do estudo, evidencia GII/4 como o genótipo mais prevalente nas crianças sintomáticas e destaca GII/3 em uma importante frequência, especialmente em crianças assintomáticas. Ainda, revela os genótipos GII/8 e GII/14 pela primeira vez no continente americano. Os resultados preliminares mostram uma concentração fecal de NoVs em pacientes sintomáticos significantemente maior do que em pacientes assintomáticos e sugere que os rotavírus A podem ter uma ação supressora na replicação de NoVs quando ocorre em infecção mista

Made available in DSpace on 2016-12-23T13:56:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao de CARLOS GUSTAVO VIEIRA DE MORAIS Mestrado.pdf: 1404624 bytes, checksum: af980fd6a0eace35ef57ef3976406694 (MD5) Previous issue date: 2009-02-16 / Microscopy smear is the primary method for diagnosing pulmonary tuberculosis (TB). The method is fast, inexpensive, and specific for Mycobacterium tuberculosis. However, its sensitivity is relatively low, especially in patients with paucibacillary disease which emphasizes the need for improving and/or development of new methodologies. In this context, the aim of this study was to standardize and assess the accuracy of smear microscopy using polycarbonate membranes after centrifugation of sputum samples by filtration (BacFil System) in TB diagnosis. First, we evaluated the system components and established its operating conditions. Then, to assess the system performance, a total of 450 spontaneous sputum samples from 331 patients suspected of having TB was submitted to direct smear and, after that, digested with NALC and divided into two aliquots. One aliquot was concentrated and submitted to smear microscopy and culture, while the other was treated with a solution containing sodium hypochlorite, ethanol and Triton and filtered through 13mm membranes with 0,8&#956;m pore size in the BacFil System. After filtering, the membranes were transferred to slides, stained and a microscopic semi-quantitative analysis was done. The BacFil System showed a sensitivity of 90,8% (82,7 95,9) compared to 64,4% (53,4 74,3) and 59,5% (43,3 74,4) for the centrifugation method and direct smear, respectively. The method demonstrated a highly significant enhancement in sensitivity, operational safety, low cost and also spares the use of a centrifuge. Although BacFil is a very promising method for early diagnosis of TB, we consider it must be improved and evaluated in a multicentric study (Phase III) before its use in a laboratory routine / A baciloscopia é o principal método para o diagnóstico da Tuberculose (TB), em razão de sua simplicidade, rapidez e baixo custo. Porém sua sensibilidade é baixa, principalmente nas formas paucibacilares da doença o que corrobora a necessidade de aprimoramento ou desenvolvimento de novas metodologias. Diante deste fato, nos propusemos padronizar e avaliar a acurácia do exame de baciloscopia em membrana de policarbonato após concentração de amostras de escarro por filtração (Sistema BacFil), para o diagnóstico da tuberculose pulmonar. Na primeira fase do estudo foram avaliados os componentes do protótipo do sistema e estabelecido suas condições operacionais. Na segunda fase, para avaliação do sistema, um total de 450 amostras de escarro espontâneo de 331 pacientes com suspeita clínica de TB foi submetido à confecção de esfregaços diretos, em seguida, digerido com NALC e dividido em duas alíquotas. Uma alíquota foi concentrada e submetida ao exame de cultura para micobactérias e ao exame de baciloscopia. A segunda alíquota foi tratada com uma solução contendo hipoclorito de sódio, etanol e Triton e em seguida filtrada através de membranas de 13 mm com poros de 0,8&#61549;m pelo Sistema BacFil. Após o procedimento de filtração as membranas foram transferidas para lâminas, coradas e examinadas semi-quantitativamente no microscópio. Ao analisarmos os resultados deste estudo verificamos que o Sistema BacFil proporcionou uma sensibilidade de 90,8% (82,7 95,9) e especificidade de 100% quando comparado ao exame de cultura. Superior as sensibilidades de 64,4% (53,4 74,3) e 59,5% (43,3 74,4) encontrados respectivamente pelos métodos de concentração por centrifugação e esfregaço direto. Ao avaliarmos criticamente a performance deste método constatamos ainda que o mesmo apresenta segurança operacional, elevada acurácia para o diagnóstico, baixo custo econômico e dispensa o uso de centrifuga. Apesar de reunir estas características que o credencie como um método promissor para o diagnóstico rápido da tuberculose, consideramos ainda que este protótipo (BacFil) deva ser aperfeiçoado e submetido a um estudo multicêtrico (Fase III) para validar a sua performance no diagnóstico da tuberculose pulmonar em condições de rotina