Evidências clínicas sugerem que pacientes sob tratamento quimioterápico apresentam alguma forma de dano cognitivo. Isso tem sido observado principalmente em estudos com mulheres submetidas ao tratamento adjuvante do câncer de mama. Devido ao potencial impacto clínico dessa complicação, torna-se necessário um maior número de estudos a respeito dos mecanismos envolvidos na disfunção cognitiva ocasionada por agentes quimioterápicos. Nesse sentido, é fundamental o desenvolvimento de modelos animais que aprimorem o conhecimento dessa possível disfunção. Em nosso estudo, foi avaliado o efeito da ciclofosfamida, agente quimioterápico largamente utilizado em oncologia, em especial na terapia adjuvante do câncer de mama. Foi utilizado um modelo animal com camundongos machos adultos que receberam injeção sistêmica da ciclofosfamida nas doses de 8, 40 ou 200 mg/kg ou controle com solução salina. Os animais foram treinados em tarefa de esquiva inibitória e comportamento em campo aberto, sendo avaliados após um dia ou sete dias do tratamento. Os camundongos tratados com ciclofosfamida nas doses de 40 ou 200 mg/kg um dia antes do teste mostraram significativo dano de retenção de memória. Esses resultados sugerem dano cognitivo agudo. O experimento controle não afetou o comportamento em campo aberto, o que enfraquece a possibilidade de dano por ação na locomoção, na motivação ou na ansiedade. Com base em nosso estudo e ampla revisão bibliográfica, é possível considerar um dano cognitivo agudo após injeção única de ciclofosfamida em modelo de camundongos de memória aversiva. Futuros estudos são necessários para caracterizar os déficits cognitivos induzidos pela quimioterapia em modelos animais e investigar os mecanismos responsáveis pelos diferentes efeitos da ciclofosfamida na memória em diferentes modelos experimentais. / Cognitive dysfunction has been reported following cytotoxic therapy, especially in patients receiving adjuvant treatment for breast cancer. Data on experimental models for the study of the mechanisms involved in cognitive dysfunction are scanty. Therefore, new animal models are needed to better understand the causes of cognitive dysfunction following cytotoxic therapy. We examined the effects of cyclophosphamide, a chemotherapeutic agent widely used in oncology, and important in adjuvant treatment of breast cancer, in an in vivo rodent model. In our experiments, male mice were given a systemic injection of cyclophosphamide (8, 40, 200 mg/kg) or saline solution as control. The animals were trained and tested 1 day and 7 days after the injection, in step-down inhibitory avoidance and open-field behavior. Mice treated with cyclophosphamide at 40 or 200 mg/kg 1 day before test showed significant impairment of 24-hour memory retention. Thus, such results suggest acute cognitive dysfunction. The control experiment did not show impairment in the open field behavior, indicating that drug effects on inhibitory avoidance could not be attributed to drug-induced alterations in locomotion, motivation, or anxiety. Based on our results and literature review, we were able to confirm the occurrence of an acute impairment of cognitive function with a single dose of cyclophosphamide in a mice model of aversive conditioning. Further studies are required to further characterize cognitive deficits induced by cancer chemotherapy in animal models.

Foram avaliados parâmetros de estresse oxidativo em ratos diabéticos induzidos por estreptozotocina submetidos ao teste de natação forçada (STZ) e o efeito do tratamento agudo com insulina (STZ-INS) e/ou clonazepam (STZ-CNZ e STZ-INSCNZ) sobre este modelo animal experimental. O dano oxidativo às proteínas medido como conteúdo de grupamentos carbonilas no plasma foi significativamente maior no grupo STZ em comparação com os grupos STZ tratados e controle. Os níveis plasmáticos de malondialdeído foram significativamente aumentados nos grupos STZ, STZ-INS e STZ-CNZ quando comparados ao grupo controle e significativamente reduzidos nos grupos STZ-INS e STZ-INS-CNZ quando comparados aos ratos STZ, sendo que o grupo STZ-INS-CNZ apresentou níveis de malondialdeído significativamente menores quando comparado com o grupo STZINS. As atividades das enzimas antioxidantes superóxido dismutase, catalase e glutationa peroxidase não apresentaram diferenças significativas entre todos os grupos de animais. Através do ensaio cometa, observou-se que o índice de dano ao DNA foi significativamente maior no grupo STZ quando comparado aos grupos STZ tratados e ao grupo controle. Além disso, observou-se uma reversão no índice de dano do grupo STZ-INS-CZP a níveis iguais aos do grupo controle. Estes resultados mostram que o dano oxidativo a proteínas e a lipídios, assim como o dano ao DNA ocorre neste modelo animal de diabetes/depressão e que o tratamento associado da insulina e do clonazepam é capaz de proteger contra este dano oxidativo neste modelo experimental. / We investigated oxidative stress parameters in streptozotocin-induced diabetic rats submitted to forced swimming test (STZ) and evaluated the effect of insulin (STZ-INS) and/or clonazepam (STZ-CNZ and STZ-INS-CNZ) acute treatment on these animal model. Oxidative damage to proteins measured as carbonyl content in plasma was significantly increased in STZ group compared to STZ treated groups and controls. Malondialdehyde plasma levels were significantly increased in STZ, STZ-CNZ and STZ-INS groups when compared to control group and significantly reduced in STZ-INS and STZ-INS-CNZ groups when compared to STZ rats, being significantly reduced in STZ-INS-CNZ than STZ-INS group. The activities of the antioxidant enzymes catalase, superoxide dismutase and glutathione peroxidase showed no significant differences among all groups of animals. The DNA damage index evaluated by comet assay, was significantly higher in STZ rats when compared to all STZ treated and control groups. Furthermore, it was observed a reversion in damage index at level of controls in STZ-INS-CNZ animals. These findings showed that the protein, lipid and DNA damage occurs in this diabetes/depression animal model and that the associated treatment with insulin and clonazepam is capable to protect against oxidative damage in this experimental model.

OBJETIVO: analisar, por meio de morfometria digital, a reação intimal presente na artéria carótida de suínos submetidos à angioplastia isoladamente e à angioplastia seguida de implante de stent de cromo - cobalto. MATERIAIS E MÉTODOS: em oito suínos sadios foi realizada a angioplastia isolada da artéria carótida comum (ACC) direita e angioplastia com implante de um stent de cromo – cobalto expansível por balão na artéria carótida comum esquerda. Após período de quatro semanas, os animais foram submetidos à eutanásia para a retirada de amostras de tecido arterial e preparo de lâminas histológicas divididas do seguinte modo: grupo 1, segmento médio da artéria carótida comum direita (angioplastia isolada); grupo 2, segmento médio da artéria carótida comum esquerda em localização “intra stent”. As imagens das lâminas foram digitalizadas e analisadas por programa de morfometria digital com cálculo da área luminal, área da camada íntima e área da camada média dos cortes histológicos. A análise estatística foi realizada através da média e desvio padrão das áreas em cada grupo, utilizando-se Teste t de Student. O valor de p<0,05 foi considerado significativo. RESULTADOS: na análise das médias das áreas obtidas, foi encontrada maior hiperplasia em resposta ao implante de stent e diferença estatisticamente significativa quando realizada a comparação entre a área do lúmen (5,841 x 106μm2 X 1,287 x 106μm2), da lâmina elástica interna (6,566 x 106μm2 X 1,287 x 106μm2) e lâmina elástica externa (9,832 x 106μm2 X 4,559 x 106μm2) dos dois grupos (ATP + STENT X ATP; medidas em micrômetros quadrados). Não se observou diferença significativa do ponto de vista estatístico quando se realizou a comparação entre as camadas médias dos dois grupos (3,266 x 106μm2 X 3,271 x 106μm2). CONCLUSÃO: o implante de stent de cromo-cobalto expansível por balão na ACC do suíno gerou um espessamento intimal maior do que aquele produzido apenas pela angioplastia, porém este não foi suficiente para afetar o lúmen arterial. / OBJECTIVE: to analyze, through digital morphometry, the intimal reaction in the carotid artery of pigs submitted to isolated angioplasty and angioplasty followed by implantation of cobalt-chromium stent. MATERIALS AND METHODS: eight healthy pigs had their common carotid artery (CCA) submitted to isolated angioplasty in the right side and angioplasty plus stenting in the left side. Four weeks latter, all animals were submitted to euthanasia for arterial tissue sampling and preparation of histological blades sorted as follows: group 1, middle segment of common right carotid artery (isolated angioplasty); group 2, middle segment of common left carotid artery (intra-stent). Blade images were scanned and analyzed through a digital morphometry program with calculation of luminal, intimal and media layers area in the histological sections. The statistical analysis was performed through mean values and standard deviations of the areas in each group, using the Student’s t-Test. The value of p<0.05 was considered significant. RESULTS: When compare to angioplasty alone, the stent group showed greater hyperplasia in response to implantation regarding the lumen area (5.841 x 106μm2 X 1.287 x 106μm2), the internal elastic lamina area (6.566 x 106μm2 X 1.287 x 106μm2) and the external elastic lamina area (9.832 x 106μm2 X 4.559 x 106μm2). No statistically significant difference was observed when comparing the media layers of both groups (3.266 x 106μm2 X 3.271 x 106μm2). CONCLUSION: angioplasty followed by the implantation of a cobalt-chromium balloon expandable stent in the CCA of the pig creates more intimal thickening than angioplasty alone. Nevertheless intimal thickening was not enough to affect the luminal area thanks to a positive elastic remodeling effect.

Objetivo: Desenvolver um modelo experimental de aneurisma cerebral em artéria de suínos. Secundariamente, avaliar o processo de organização do trombo e de formação de tecido fibrocelular dentro do aneurisma com o tratamento endovascular utilizando molas revestidas (Matrix) comparadas às sem revestimento (GDC). Materiais e Métodos: Em 10 suínos sadios, com peso variando entre 16 e 20 kg, sendo 6 machos e 4 fêmeas, foi realizada a cirurgia de formação de aneurisma nas carótidas bilateralmente, através de arteriotomia e anastomose término-lateral com segmento de veia jugular. O diâmetro médio dos aneurismas era de 3 mm (variação de 2 a 4mm). Procedia-se então ao tratamento endovascular dos aneurismas divididos do seguinte modo: grupo I, embolização do aneurisma da carótida esquerda com mola de platina (GDC); grupo II, embolização do aneurisma da carótida direita com mola de platina revestida com copolímero - PGLA 90/10 (Matrix). Após 14 dias, eram retiradas as lesões e analisadas microscopicamente, comparando-se a formação de trombo recente ou trombo organizado no interior de cada aneurisma. Para isso, foi criada uma escala de caracterização das fases do processo de trombose (Escores de 1 a 4). O Escore 1 era definido como a presença de trombo inicial ou recente; o Escore 2 era categorizado como a presença de leucócitos em diferenciação contendo fibrina e absorção das hemácias e plaquetas, porém intercalados com zonas contendo trombo recente. No Escore 3, observavase a presença de leucócitos em diferenciação contendo fibrina e no Escore 4, a presença de tecido fibrocelular contendo fibras de colágeno. A análise estatística foi realizada de modo pareado, através do Teste de Wilcoxon, sendo os dados processados no programa SPSS 12.0. O nível de significância mínimo adotado foi de 5%. Resultados: Um animal (macho) foi excluído do estudo devido à formação de abscesso cervical, restando, portanto, 9 animais (18 aneurismas para avaliação). Na análise do processo de organização do trombo, utilizou-se a graduação por escores, obtendo-se no grupo I, 88,8% de casos de trombo recente (Escore 1) e 11,1% de casos de trombo em organização ainda contendo coágulo (Escore 2). No grupo II, obteve-se 11,1% de casos com escore 1 , 11,1% com escore 2, 55,5% de casos de trombo organizado com tecido fibrocelular frouxo (Escore 3) e 22,2% de casos de tecido fibrocelular denso contendo colágeno (Escore 4). Houve diferença estatística a favor do grupo II, por meio do Teste de Wilcoxon (p=0,008). Conclusão: O modelo experimental de aneurisma de pequenas dimensões utilizado neste estudo foi adequado e permitiu a realização do tratamento endovascular testando dois tipos de molas. Por meio da análise histológica baseada em escala criada para avaliar a organização do trombo, pôde-se verificar diferença significativa a favor das molas com revestimento de copolímero. / Background and Objectives: To develop an experimental model in a pig that could be used for analysis of patency of cerebral aneurysms is the goal of this study. Adictionaly, it aims to evaluate the degree of thrombosis after embolization with two types of coils: copolymer-coated coils (Matrix) and uncoated platinum coils (GDC). Method: In a total of 10 Large-White pigs, small aneurysms (with a mean diameter of 3 mm) were created in both carotid arteries (6 males and 4 females) weighing 16 to 20 kg (mean: 18 kg). Embolization was performed with GDC platinum coils on the left side and with a coil coated with Matrix polymer on the right side. After 14 days, angiography was performed to confirm exclusion of the aneurysm. Before euthanasia with a lethal dose of potassium chloride, the carotid artery was removed in one piece, including the aneurysm. The specimens were cut into sections, including the mid portion of the aneurysm and the artery above and below the aneurysm, and stained with hematoxylin- eosin for histological analysis. A graduated scale with progressive scores ranging from 1 to 4 was used to evaluate the organization of the thrombus. Score 1 indicated clusters of platelets, white blood cells, and red blood cells; Score 2 showed the presence of differentiating white blood cells containing fibrin and absorption of red blood cells and platelets, interspersed with zones containing a recent thrombus; Score 3 corresponded to the presence of differentiating white blood cells containing fibrin, which characterized a loose fibrocellular tissue; and Score 4 indicated the presence of fibrocellular tissue containing collagen fibers, which characterized an incipient dense fibrocellular tissue The data were described as frequency and percentage using the Wilcoxon test for findings involving thrombosis scores. The data were analyzed using the SPSS 12.0 software, and the minimum significance level was set at 5%. Results: One animal (male) was excluded from the study due to abscess formation near the anastomosis. Therefore, 9 animals (18 aneurysms) were assessed. A score was used for analyzing the organization of the thrombus. In group I, 88.8% had score 1, 11.1% score 2, but no cases showed scores 3 and 4. In group II, 11.1% had score 1, 11.1% score 2, 55.5% score 3, and 22.2% score 4. The Wilcoxon test was applied, revealing a significant difference (p=0.008) between the scores for group I and group II in the course of 14 days. Conclusion: The experimental aneurysm developed in this study was suitable for assessing the patency of small aneurysms (measuring, on average, 3 mm) after coil embolization. The organization of the intra-aneurysmal thrombus after 14 days was verified using the progressive score, which indicated a significant difference between the group treated with the Matrix coil and that treated with GDC.

Introdução: O modelo teórico, no qual perfis extremos de desigualdade coexistem num cenário complexo promovendo desfechos de saúde similares, denominado “similaridades nas desigualdades”, surgiu de evidências em humanos. O objetivo deste trabalho foi propor um modelo animal para refletir o fenômeno "similaridades nas desigualdades". Métodos: As ratas prenhes foram randomizadas pelo peso corporal, mantidas individualmente e no dia 10 de gestação foram divididas em três grupos: Controle (Cont), que recebeu ração padrão à vontade; Restrição Alimentar 50% (R50%), que recebeu 50% do consumo do grupo controle e Dieta Rica em Gordura (RG), que recebeu uma dieta rica em gordura à vontade. Essas dietas foram oferecidas a partir do dia 10 de gestação até o dia 21 de lactação. Em até 24 horas após o nascimento, todos os filhotes foram adotados por outras mães, formando os seguintes grupos: Cont_Cont, R50%_Cont, R50%_R50%, Cont_R50%, RG_Cont, RG_RG, Cont_RG. Peso corporal e consumo alimentar das genitoras, peso ao nascer, peso ao longo da vida e exercício físico voluntário foram comparados entre grupos por Equação de Estimação Generalizada (GEE), usando diferentes modelos estatísticos. ANOVA de duas vias foi usada para avaliar os desfechos de gordura abdominal e medidas bioquímicas. Resultados: O peso corporal das genitoras Cont e RG foi maior, comparado ao peso das genitoras R50%. Além de alguns efeitos isolados da exposição às dietas R50% ou RG durante momentos específicos perinatais (gestação e/ou lactação), o efeito das "similaridades nas desigualdades" foi observado no peso ao nascer (ambos filhotes R50% e RG foram mais leves do que os Cont) e na atividade física (os grupos extremos R50%_Cont e RG_Cont foram igualmente diferentes do grupo de referência Cont_Cont, sendo machos menos ativos e fêmeas mais ativas). O acompanhamento do peso corporal ao longo da vida mostrou que os machos pesaram mais que as fêmeas. Nenhum dos três modelos estatísticos evidenciou diferenças entre grupos no total de gordura abdominal. Conclusão: Este estudo contribui com a idéia de que as desigualdades em saúde estão relacionadas a resultados similares em saúde para ambos os extremos populacionais, e propõe um modelo animal para explorar ainda mais este efeito. / Introduction: We have previously proposed a theoretical model in which extreme unequal social backgrounds coexist in a complex scenario promoting similar health outcomes, named “Similarities in the inequalities”, and had evidence of this effect in humans. Our objective was to propose an animal model to reflect the “Similarities in the inequalities” phenomenon. Methods: Rats were time-mated and randomly allocated to: Control (Adlib), receiving an ad libitum diet of standard laboratory chow, 50% food restricted (FR), receiving 50% of the ad libitum-fed dam’s intake and high fat diet (HF), receiving a diet containing 45.0% fat. These diets were provided from day 10 of pregnancy throughout the 21-day of lactation. Within 24 hours after birth, all pups were cross-fostered to other dams, forming the following groups: Adlib_Adlib, FR_Adlib, FR_FR, Adlib_FR, HF_Adlib, HF_HF, Adlib_HF. Dam’s body weight and show consumption, pup’s birth weight, growth and physical activity in running wheels, was compared between groups through GEE, using different statistical models. Twoway ANOVA was used to evaluate abdominal fat and biochemical outcomes. Results: Body weight of Adlib and HF dams was higher compared to FR dams. Apart from some isolated effects of the exposure to the FR or HF diets during specific perinatal times (gestation and/or lactation), the “Similarities in the inequalities” effect was seen in birth weight (both FR and HF pups were smaller than Adlib pups) and physical activity (the extreme groups FR_Adlib and HF_Adlib were similarly different from the reference group Adlib_Adlib, being less active in males and more active in females). Body weight monitoring throughout life showed that males were heavier than females. None of the three statistical models showed differences between groups in total abdominal fat. Conclusion: Our study contributes to the idea that health inequalities are related to similar health outcomes for both populational extremes, and proposes an animal model to further explore this effect.

Resumo não disponível.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:18Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-03-30 / A Mucopolissacaridose tipo I (MPS I) é uma doença de depósito lisossômico autossômica recessiva, causada pela deficiência da enzima alfa-L-iduronidase, responsável pela degradação de dois glicosaminoglicanos: dermatan e heparan sulfatos. Pacientes com MPS I apresentam uma ampla diversidade de manifestações clínicas e, até hoje, não foi possível estabelecer a correlação genótipo-fenótipo. Além disso, somente o acúmulo de glicosaminoglicanos não é suficiente para explicar a heterogeneidade fenotípica. A ampla diversidade de manifestações clínicas é uma característica das doenças de depósito lisossômico, além do acúmulo de metabólitos não diretamente relacionados à deficiência enzimática específica, sugerindo que várias vias bioquímicas e/ou celulares secundárias estejam envolvidas na fisiopatologia destas doenças. Alterações em diversos processos celulares como vias de sinalização, homeostase de Ca2+ intracelular, biossíntese de lipídeos, tráfego intracelular, permeabilização da membrana lisossômica e autofagia já foram identificadas em diferentes doenças de depósito lisossômico. Neste presente estudo, foram avaliados os processos de permeabilização da membrana lisossômica, homeostase de Ca2+ intracelular e autofagia em diferentes tecidos de um modelo animal de MPS I. Em esplenócitos de camundongos com MPS I, foi observada maior quantidade de Ca2+ no retículo endoplasmático e nos lisossomos, e menor quantidade de H+ nos lisossomos, indicando alteração de homeostase iônica nestas células. Foi observada também uma alteração na distribuição de H+ entre os compartimentos celulares, além da presença de cisteíno proteases no citosol, que evidenciam o processo de permeabilização da membrana lisossômica. Além disso, os esplenócitos de camundongos com MPS I apresentaram taxa maior de apoptose, provavelmente ativada pela permeabilização. Em conjunto, essas alterações sugerem que o processo de autofagia também possa estar comprometido neste modelo animal. Em relacao aos marcadores de autofagia, foi observada maior quantidade da proteina Beclina-1 no cerebro dos camundongos com MPS I, indicativo de inducao da autofagia. Nao foram observadas evidencias de acumulo de agregados proteicos pelo bloqueio de autofagia em nenhum dos tecidos estudados (cerebro, figado e baco), pois nao foram encontradas diferencas nas quantidades da proteina p62/SQSTM1. Porem, foi identificada uma isoforma da p62/SQSTM1 de menor tamanho, e a razao entre as isoformas foi diferente entre todos os tecidos, sugerindo que o fluxo de degradacao destas moleculas e tecido-especifico. Alem disso, foram observados baixos niveis de ƒÀ-tubulina nos hepatocitos dos camundongos com MPS I, que provavelmente causam desorganizacao do citoesqueleto e deficiencia no transporte vesicular. Analisados de maneira conjunta, os resultados observados neste presente estudo demonstram que diversas alteracoes bioquimicas e celulares secundarias a deficiencia enzimatica estao envolvidas na fisiopatologia da MPS I, e que essas alteracoes sao tecido-especificas. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-01-26 / Objetivo: O objetivo do presente estudo foi avaliar nos ratos a presença dos Movimentos de Patas e dos Movimentos Periódicos das Patas durante o ciclo sono-vigília, em um modelo animal da SPI, induzido pela lesão do núcleo dopaminérgico A11, com a neurotoxina (6-OHDA), reproduzindo assim a característica fenotípica motora da SPI. Métodos: Foram implantados eletrodos nos ratos para os registros eletrocorticográfico e eletromiográfico. As gravações foram monitoradas durante o período claro e escuro, com a duração de 12 horas cada e, foram avaliadas nos dias 7, 15 e 28 após a injeção da 6-hidroxidopamina (Lesão) ou solução salina tamponada (SHAM). Um grupo controle (CTRL), que não recebeu nenhuma droga, também foi incluído no experimento. As porcentagens de vigília (VIG) foram divididas em segmentos de 4 horas no período escuro. Além disto, as porcentagens de Eficiência do Sono (ES), o Sono de Ondas Lentas (SOL), o Sono Paradoxal (SP), a VIG, os Movimentos das Patas (MP) e os Movimentos Períodicos das Patas (MPP) foram avaliados no período claro e escuro. Resultados: Os resultados demonstraram que, como seriam esperados para um modelo animal da SPI, todos os ratos A11 lesionados apresentavam um aumento no percentual da VIG durante o último bloco do período escuro. O grupo Lesão comparado ao grupo CTRL e SHAM apresentaram um aumento das freqüências dos MP e dos MPP, no período claro, principal período de sono dos ratos. Conclusão: A lesão bilateral nos núcleos A11 em ratos, provoca uma alteração na arquitetura do sono e nos resultados eletromiográficos da musculatura das patas, correspondendo assim com características consistentes encontrada na SPI e no MPP em humanos. / Background: Restless Legs Syndrome (RLS) is a major healthcare burden of increasing prevalence. It has been demonstrated that periodic limb movements in sleep (PLM) can occur as an isolated phenomenon, but they are often associated with RLS and represent the only symptom of this disorder that can be measured electrophysiologically. The aim of this study was to examine the sleep–wake behavior and the presence of PLM in a rat model of RLS induced by lesioning the A11 dopaminergic nuclei with the neurotoxin 6-hydroxydopamine (6-OHDA). Methods: Rats were implanted with electrodes for electrocorticography and electromyography. Sleep recordings were monitored during light and dark periods lasting 12 h each and were evaluated on days 7 (L7 group), 15 (L15 group) and 28 (L28 group) after injection of 6-OHDA or PBS (SHAM group). A control (CTRL) group that did not receive any injection was also included in the experiment. Wakefulness (WK) percentages were generated for 4-h segments of the dark period, yielding the following 3 bins: 7 to 11 pm, 11 pm to 3 am and 3 to 7 pm. Additionally, sleep efficiency, slow wave sleep, paradoxical sleep, WK, limb movements (LM) and PLM percentages were evaluated for the entire 12 h of the light and dark phases. Results: The results demonstrated that all the A11-lesioned rats exhibited an increased percentage of WK during the last block of the dark period, as would be expected for an animal model of RLS. In addition, at all time points after A11 lesioning, groups presented increased frequencies of LM and PLM most during light periods. Conclusions: Thus, this model has characteristics strikingly consistent with PLM in humans, including coexistence with RLS symptoms. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Este trabalho apresenta a continuidade da avaliação farmacológica do derivado Nfenilpiperazínico LASSBio-579 em busca de um novo candidato a antipsicótico de segunda geração. Em estudos anteriores, demonstramos que LASSBio-579 base livre é um potencial candidato a antipsicótico atípico capaz de modular três diferentes sistemas neurotransmissores envolvidos na patofisiologia da esquizofrenia: a neurotransmissão dopaminérgica, serotonérgica e glutamatérgica; entretanto, LASSBio-579 na forma de cloridrato apresenta baixa biodisponibilidade. Neste trabalho avaliamos inicialmente a ação de LASSBio-579.HCl. -ciclodextrina, proposto como alternativa para melhorar a biodisponibilidade. Porém, quando avaliado no modelo de escalada induzida por apomorfina, preditivo de atividade antipsicótica, essa preparação não foi efetiva. Assim, seguimos a avaliação farmacodinâmica com LASSBio-579 base livre, utilizando modelos preditivos de atividade antipsicótica, em camundongos. Neste trabalho foram realizados ainda ensaios in vitro, onde se avaliou a ação de LASSBio-579 sobre a viabilidade celular, captação de glutamato e secreção de proteína S100B, utilizando-se para isso fatias hipocampais de ratos tratadas de forma aguda com LASSBio-579 nas concentrações de 0,1; 1,0; 10 e 20μM. / This study presents the continuity of the pharmacological evaluation of the Nphenilpiperazine derivative LASSBio-579, searching a new second generation antipsychotic compound. In previous studies we have demonstrated that LASSBio- 579 in form of base is a potential atypical antipsychotic able to modulate three different neurotransmitter systems involved in the pathophysiology of schizophrenia: dopaminergic, glutamatergic and serotonergic. However, LASSBio-579 hydrochloride has low bioavailability. In this study we evaluated LASSBio-579.HCl. -cyclodextrin, prepared with the aim of increasing oral bioavailability, in the apomorphine induced climbing in mice, which is a model predictive of antipsychotic activity; and it was not effective. Thus, we continue the study with LASSBio-579 in form of base by testing it in others mice models predictive of antipsychotic activity. In this study, also were made in vitro studies performed in hippocampal acute slices which demonstrated that LASSBio-579 induced a glutamate uptake inhibition and also inhibited the S100B protein secretion.

A fenilcetonúria (PKU) é causada pela deficiência severa da atividade da fenilalanina hidroxilase (PAH), enzima responsável pela conversão de fenilalanina (Phe) em tirosina (Tyr), levando ao aumento dos níveis sanguíneos e teciduais de Phe, bem como de seus metabólitos fenilpiruvato (PPA), fenilactato (PLA) e fenilacetato (PAA). Os pacientes com PKU apresentam disfunção neurológica severa, manifestando convulsões, retardo mental e psicomotor, sintomas que estão associados ao acúmulo desse aminoácido e seus metabólitos. A restrição dietética, que faz parte do tratamento da PKU, nem sempre é mantida pelos pacientes e pode afetar o status antioxidante devido à restrição de nutrientes. Estudos recentes em ratos e com pacientes fenilcetonúricos mostram que o estresse oxidativo (EO) pode estar envolvido na neurofisiopatologia dessa doença, possivelmente devido ao aumento na produção de espécies reativas, e diminuição das defesas antioxidantes. O cérebro, órgão afetado na doença, é extremamente sensível ao EO devido a baixas defesas antioxidantes, alta concentração de ferro e lipídeos insaturados. Aparentemente o fígado não é afetado na PKU, mas é um importante órgão de detoxificação e reservatório de GSH (tripeptídeo antioxidante). O ácido lipoico (AL) é um potente antioxidante facilmente adquirido da dieta, absorvido pelo organismo e tem sido sugerido em estudos para o tratamento e prevenção de EO em modelos de doenças neurodegenerativas. Um estudo recente demonstrou um efeito protetor do AL contra o EO gerado por uma concentração tóxica de Phe em cérebro de ratos jovens. O objetivo do trabalho foi avaliar o efeito do AL na prevenção do EO gerado em um modelo crônico de PKU induzido por injeções diárias de Phe e α-metilfenilalanina (inibidor da PAH). No presente trabalho, o modelo de hiperfenilalaninemia (HPA) causou, no cérebro, aumento de dano a lipídeos, proteínas e DNA; aumento da atividade da superóxido dismutase e diminuição da atividade da catalase, além de mostrar que essas enzimas podem ter um papel importante neste processo, uma vez que suas atividades são afetadas diretamente pela presença de Phe e seus metabólitos. Também foi possível descrever algumas espécies reativas específicas geradas no processo oxidativo envolvido na HPA, como de H2O2, NO• e O2 •-. E ainda, identificou-se que o EO não está restrito ao cérebro e que o fígado pode ter um papel importante em defesa ao EO encontrado na doença. As enzimas glutationa peroxidase, glutationa redutase, glicose-6-fosfato desidrogenase e o conteúdo total de GSH foram diminuídos pela HPA em cérebro dos animais e a atividade da glutamato cisteína ligase foi aumentada. Já no fígado, todas as enzimas relacionadas ao metabolismo da GSH foram aumentadas pela HPA. O tratamento com AL foi capaz de prevenir as alterações enzimáticas além de impedir o dano a biomoléculas. O AL também preveniu o aumento da produção de H2O2 e NO• no cérebro dos animais submetidos ao tratamento de HPA. Quanto ao metabolismo da GSH, o AL foi capaz de manter as atividades enzimáticas aos níveis do controle além de restaurar a produção de GSH no cérebro dos animais afetados pela HPA. De acordo com os resultados, é possível que um tratamento com antioxidantes seja eficaz na manutenção da homeostasia redox nos pacientes servindo como uma abordagem terapêutica inovadora e adicional ao tratamento dietético já aplicado aos pacientes de PKU. / Phenylketonuria (PKU) is caused by a severe deficiency of phenylalanine hydroxylase (PAH), the enzyme responsible for the conversion of phenylalanine (Phe) to tyrosine (Tyr), leading to increased blood and tissue levels of Phe and its metabolites phenylpyruvate (PPA), phenylactate (PLA) and phenylacetate (PAA). Patients with PKU have severe neurological dysfunction, characterized by seizures, mental retardation and psychomotor symptoms that are associated with the accumulation of this amino acid and its metabolites. A restrict diet important for PKU treatment, is not always maintained by patients and this can affect the antioxidant status due to nutrient limitation. Recent studies in rats and patients with PKU show that oxidative stress may be involved in the neuropathophysiology of this disease, possibly due to increased production of reactive oxygen species and decreased antioxidant defenses. The brain, organ affected in the disease, is extremely sensitive to oxidative stress due to low antioxidant defenses and high concentrations of Fe and unsaturated lipids. Apparently, the liver is not affected in PKU, but it is an important organ of detoxification and GSH reservoir (tripeptide antioxidant). Lipoic acid (LA) is a potent antioxidant easily acquired from the diet, absorbed by the body and has been suggested for the treatment and prevention of oxidative stress in different neurodegenerative diseases in many studies. A recent study showed a protective effect of LA against the oxidative stress generated by a toxic concentration of Phe in the brain of young rats. The aim of this study was to evaluate the effect of LA in preventing the oxidative stress generated in a chronic model of PKU induced by daily injections of Phe and α-methylphenylalanine (PAH inhibitor) for 7 days. The hyperphenylalaninemia (HPA) model caused in brain an increase of damage to lipids, proteins and DNA; increased superoxide dismutase activity and decreased catalase activity, showing that these enzymes may play an important role in this process, since their activities are directly affected by the presence of Phe and its metabolites. It was also reported some specific reactive species generated in the oxidation process involved in HPA as H2O2 , NO• and O2 • -. In addition, it was found that oxidative stress is not restricted to the brain, and the liver may play an important role in defense to oxidative stress found in the disease. Activities of glutathione peroxidase, glutathione reductase, glucose-6-phosphate dehydrogenase and total content of GSH were decreased by the HPA in the brain of animals and the activity of GCL was increased. In the liver, all enzymes related to GSH metabolism were increased by the HPA. Treatment with LA was able to prevent the enzymatic changes in addition to preventing damage to biomolecules. The overproduction of H2O2 and NO• by HPA model was inhibited by LA treatment. Regarding to GSH metabolism, LA was able to maintain enzyme activities and GSH production at control levels in the brain of animals affected by HPA. According to our results, it is possible that a treatment with antioxidants is effective in maintaining redox homeostasis in patients and may be a novel therapeutic approach additional to dietary treatment already applied to PKU patients.