Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2015-01-21T20:50:54Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Dissertacao_EstudoMorfologicoImunologico.pdf: 6412438 bytes, checksum: 5197a96b4bdc735c52be042964a21efb (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva (arosa@ufpa.br) on 2015-01-22T13:57:56Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Dissertacao_EstudoMorfologicoImunologico.pdf: 6412438 bytes, checksum: 5197a96b4bdc735c52be042964a21efb (MD5) / Made available in DSpace on 2015-01-22T13:57:56Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Dissertacao_EstudoMorfologicoImunologico.pdf: 6412438 bytes, checksum: 5197a96b4bdc735c52be042964a21efb (MD5) Previous issue date: 2013 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Muitos estudos têm sido realizados para o entendimento da neuropatogênese das encefalites virais a partir de trabalhos experimentais, porém, nenhum estudo experimental foi dedicado à compreensão da neuropatogênese de membros da família Picornaviridae isolados de morcegos na região amazônica. O vírus Juruaçá, um desses agentes, parcialmente caracterizado como membro da família Picornaviridae por Araújo e colaboradores (2006), causou lesões no encéfalo de camundongos neonatos com presença de gliose reativa, apesar de não provocar efeito citopático (ECP) em cultivos primários de células do sistema nervoso central (SNC), sugerindo que este agente viral seja responsável pela morte dos animais devido a uma intensa resposta imune. O objetivo desse trabalho foi investigar a resposta imune no SNC e alterações celulares causadas pelo vírus Juruaçá em camundongos albinos da linhagem BALB/c neonatos a partir de análises histopatológicas, de ativação microglial e da expressão de citocinas, óxido nítrico (NO) e espécies reativas de oxigênio (ROS). Para tanto, foram realizados processamento de amostras para histopatologia, ensaios imunoenzimáticos, imunohistoquímicos e de imunofluorescência, além de testes para quantificação de NO e ROS e análises estatísticas. Nossos resultados demonstraram que o vírus Juruaçá induz lesões por todo o encéfalo, com maior intensidade no parênquima cortical. Os testes imunohistoquímicos demonstraram a presença de antígenos virais e de micróglias reativas distribuídos por todo o encéfalo e região anterior da medula espinhal. Micróglias com aspecto ameboide, demonstrando intensa ativação, foram observadas principalmente no córtex cerebral, bulbo olfatório, núcleo olfatório anterior, prosencéfalo e diencéfalo próximo ao ventrículo lateral. A produção das citocinas anti-inflamatórias (IL-10, IL-4) diminuiu ao longo do tempo, enquanto que as pró-inflamatórias (IL-12, IL-6, IL-1β, TNF-α, IFN-γ) aumentaram significativamente a partir do 8º dia. Os ensaios para detecção de ROS demonstraram grande produção de radicais superóxido desde o 4º dia, já a produção de NO foi sempre menor nos animais infectados. Provavelmente, a ativação das células gliais, principalmente micróglias, e consequente produção de citocinas pró-inflamatórias e ROS promoveram uma ação devastadora sobre as células do SNC, que coincide com a intensificação dos sinais clínicos. Diante do exposto, ficou evidente que os nossos resultados indicam que o vírus Juruaçá é responsável por uma doença de cunho inflamatório que leva a óbito 100% de camundongos neonatos infectados. / Many studies have been conducted to understand the neuropathogenesis of viral encephalitis from experimental work, however, no experimental studies have been devoted to understanding the neuropathogenesis of members of the Picornaviridae family isolated from bats in the Amazon region. The Juruaçá virus, one of these agents, partially characterized as a member of the Picornaviridae family by Araujo et al. (2006), caused lesions in the brain of neonatal mice with reactive gliosis presence, although not cause cytopathic effect (CPE) in primary cultures of central nervous system (CNS) cells, suggesting that this viral agent is responsible for the death of animals due to an intense immune response. The aim of this study was to investigate the immune response in the CNS and cellular changes caused by Juruaçá virus in newborn albino mice of strain BALB/c from histopathological analysis, microglial activation, and expression of cytokines, nitric oxide (NO) and reactive oxygen species (ROS). Thus, we performed sample processing for histopathology, immunosorbent assay, immunohistochemical and immunofluorescence assays, tests to quantify NO and superoxide radicals, and statistical analysis. Our results demonstrated that the Juruaçá virus induces lesions throughout the brain, with greater intensity in the cortical parenchyma. Immunohistochemical tests showed the presence of viral antigens and reactive microglias distributed throughout the brain and anterior spinal cord. Microglias with amoeboid shape, demonstrating intense activation, were observed in the cerebral cortex, olfactory bulb, anterior olfactory nucleus, midbrain and forebrain near the lateral ventricle. The production of anti-inflammatory cytokines (IL-10 and IL-4) decreased over time, whereas pro-inflammatory cytokines (IL -12, IL- 6, IL- 1β, TNF-α and IFN-γ) increased significantly from the 8th day. Assays for ROS detection showed great superoxide radicals production from the 4th day, as NO production was always lower in the infected animals. Probably, activation of glial cells, especially microglias, and subsequent production of proinflammatory cytokines and ROS promoted a devastating action on the cells of the CNS, which coincides with the intensification of clinical signs. In accordance with what has been explained above, became evident that our results indicate that the Juruaçá virus is responsible for a imprint inflammatory disease that leads to death 100% of infected neonates mice.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-03-27T14:08:53Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_AvaliacaoInVitro.pdf: 1012726 bytes, checksum: c0d0718db22f5099036b8f129b782f93 (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-04-06T14:17:32Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_AvaliacaoInVitro.pdf: 1012726 bytes, checksum: c0d0718db22f5099036b8f129b782f93 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-06T14:17:32Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_AvaliacaoInVitro.pdf: 1012726 bytes, checksum: c0d0718db22f5099036b8f129b782f93 (MD5) Previous issue date: 2016-10-27 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A dipirona sódica ou metamizol sodium, pertencente à família das pirazolonas, é um dos compostos anti-inflamatórios não esteroidais (AINEs) mais utilizados, inclusive no Brasil, principalmente devido a sua comercialização ser de baixo custo financeiro. Porém, em determinados países a venda deste medicamento é proibida devido a relatos de casos graves de agranulocitose em decorrência do seu uso. Apesar de sua ampla utilização, estudos demonstrando efeitos genotóxicos e citotóxicos da dipirona em células de mamíferos são escassos. Portanto, o presente trabalho pretende avaliar a viabilidade celular, os efeitos genotóxicos, os efeitos citotóxicos (indução de apoptose e necrose) e a produção de espécies reativas de oxigênio (ROS) em linhagem VERO (linhagem renal de macaco verde africano) expostas a dipirona. Nossos resultados demonstraram uma redução significativa na viabilidade das células expostas a dipirona pelo ensaio MTT. Um aumento significativo no índice de dano avaliado pelo teste do cometa também foi observado, indicando o potencial genotóxico da droga. No que diz respeito aos efeitos citotóxicos da dipirona, observou-se um aumento significativo no número de células apoptóticas utilizando-se corantes fluorescentes tanto em 24 quanto em 48 h de tratamento com a droga. Nossos resultados também mostraram que não houve indução significativa na geração de ROS pela droga por meio da técnica do DCFH-DA. Desta forma, demonstrou-se em nosso trabalho, que a dipirona é uma droga genotóxica e citotóxica em linhagem VERO, nas condições avaliadas. / The dipyrone or metamizole belongs to the family of the pyrazolones. It is one of the nonsteroidal anti-inflammatory compounds (NSAIs) most used, Brazil included, mainly due to its low financial cost. However, in some countries the sale of dipyrone is prohibited due to reported severe cases of agranulocytosis as a result of its use. Despite its high usage, studies showing genotoxic and cytotoxic effects of dipyrone in mammalian cells are scarce. Therefore, in the present study we will assess cell viability, genotoxic effects, cytotoxic effects (by apoptosis and necrosis induction) and the induction of reactive oxygen species (ROS) in VERO cells (a cell line obtained from red kidney of green monkey) exposed to dipyrone. Our results showed a significant reduction in viability of cells exposed to dipyrone by the MTT assay. A significant increase in damage index evaluated by comet assay was also observed, which indicate its genotoxic effects. In which concerns the cytotoxic effects of dipyrone, we observed a significant increase in the number of apoptotic cells using fluorescent dyes after 24h and 48 h of treatment with the drug. Ours results also showed that there was no significant difference in the induction of ROS generation after treatment of the cells with the drug assessed by the DCFH-DA technique. Thus, our work showed that dipyrone is both a genotoxic and cytotoxic drug to VERO cells in the assessed conditions.

Submitted by Daniele Amaral (daniee_ni@hotmail.com) on 2016-09-21T20:30:20Z No. of bitstreams: 1 TeseHWK.pdf: 5259387 bytes, checksum: 72d4bd1fcb3174ede9d168165f46252a (MD5) / Approved for entry into archive by Ronildo Prado (ronisp@ufscar.br) on 2016-09-28T19:23:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TeseHWK.pdf: 5259387 bytes, checksum: 72d4bd1fcb3174ede9d168165f46252a (MD5) / Approved for entry into archive by Ronildo Prado (ronisp@ufscar.br) on 2016-09-28T19:23:12Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TeseHWK.pdf: 5259387 bytes, checksum: 72d4bd1fcb3174ede9d168165f46252a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-28T19:28:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TeseHWK.pdf: 5259387 bytes, checksum: 72d4bd1fcb3174ede9d168165f46252a (MD5) Previous issue date: 2015-03-26 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / The present study aimed to evaluate the effect of two different Biosilicate® (P2O5-Na2O-CaO-SiO2 system) presentations - highly porous scaffold and composite material – on a tibial bone defect model in rats. Two studies were performed; the first one aimed at evaluating the effect of highly porous scaffolds on bone regeneration using histopathological analysis, immunohistochemistry and immunoenzymatic assay. In this study, 80 male Wistar rats (12 weeks old and body weight of approximately 300 g) were divided in two groups (control and Biosilicate®) and euthanized after 3, 7, 14 and 21 days post-surgery. The histopathological evaluation revealed that both groups presented similar inflammatory responses after 3 and 7 days. At all time points, the scaffold degradation was observed, mainly in the border of the material, allowing the ingrowth of newly formed bone. The immunohistochemical analysis showed that the Biosilicate® scaffolds induced the synthesis of (i) ciclooxigenase 2 (COX-2), (ii) vascular endothelial growth factor (VEGF) and (iii) runt-related transcription factor 2 (RUNX-2). Additionally, the immunoenzymatic assay indicated that the Biosilicate® group did not presented significant statistical difference in the levels of tumor necrosis factor alpha (TNF-α) in all evaluated periods compared to the control group. In addition, the Biosilicate® group presented a higher concentration of interleukin 4 (IL-4) at day 14 and a lower concentration of interleukin 10 (IL-10) 21 days after the surgery when compared to the control group. The second study aimed at investigating the effects of Biosilicate®/poly lactic-co-glycolic acid (PLGA) composites on the process of bone repair using histopathological, morphometric, immunohistochemical and gene expression (Real-Time PCR, qRT-PCR) analyses. In this study, 80 male Wistar rats were distributed in two groups (Biosilicate® and Biosilicate®/PLGA) and euthanized 3, 7, 14 and 21 days after the material implantation. The main findings showed that the incorporation of PLGA into the Biosilicate® had a significant effect in the material morphological structure, leading to a pH decrease and accelerating the mass loss upon incubation in phosphate buffered saline (PBS). Moreover, the histological evaluation revealed that the Biosilicate®/PLGA group presented a higher material degradation accompanied by a higher bone formation when compared to the plain Biosilicate® after 21 days. The immunohistochemical analysis did not show any difference in the immunolabeling for Runx2, RANKL and OPG between Biosilicate® and Biosilicate®/PLGA. In addition, the qRT-PCR indicated that the Biosilicate®/PLGA induced the osteogenic gene expressions (bone morphogenetic protein 4, Runtrelated transcription factor 2 and osteocalcin) at 21 day after surgery. The results evidenced by the present studies suggest that both materials (highly porous Biosilicate® scaffolds and Biosilicate®/PLGA composites) were effective in inducing the repair of tibial bone defects in rats, demonstrating that these materials are promising alternatives for treating bone fractures. / O presente estudo teve como objetivo principal avaliar a ação de duas diferentes apresentações (scaffold altamente poroso ou compósito contendo PLGA) de uma vitrocerâmica bioativa do sistema quaternário P2O5-Na2O-CaO-SiO2 (Biosilicato®) sobre o processo de reparação óssea em um modelo de defeito ósseo tibial em ratos. Para isto, foram realizados dois estudos, sendo que o primeiro teve como objetivo avaliar os efeitos dos scaffolds altamente porosos de Biosilicato® sobre o processo de regeneração óssea por meio da avaliação histopatológica, imunohistoquímica e ensaio imunoenzimático. Neste estudo, 80 ratos machos Wistar (12 semanas de idade e peso corporal de aproximadamente 300 g) foram divididos em dois grupos (controle e Biosilicato®) e eutanasiados após 3, 7, 14 e 21 dias do procedimento cirúrgico. A avalição histopatológica revelou que ambos os grupos apresentaram uma resposta inflamatória similar no período de 3 e 7 dias após a cirurgia. Durante todos os períodos experimentais, a degradação dos scaffolds de Biosilicato® foi observada principalmente na região periférica do material, o que possibilitou o desenvolvimento do tecido ósseo neoformado para o interior destes materiais. A Análise imunohistoquímica demonstrou que os scaffolds de Biosilicato® estimularam a síntese da ciclooxigenase 2 (COX-2), fator de crescimento endotelial vascular (VEGF) e fator de transcrição relacionado a runt-2 (Runx2). Além disso, o ensaio imunoenzimático revelou que o grupo Biosilicato® não apresentou diferença estatística significativa nos níveis do fator de necrose tumoral alfa (TNF-α) em todos os períodos avaliados quando comparado ao grupo controle. Ainda, o grupo Biosilicato® apresentou uma maior concentração da interleucina 4 (IL-4) 14 dias e uma menor concentração da interleucina 10 (IL-10) 21 dias após a cirurgia, quando comparado ao grupo controle. O segundo estudo teve como objetivo investigar os efeitos do compósito de Biosilicato® e ácido poli-láctico-co-glicólico (PLGA) sobre o processo de reparo ósseo através das análises histopatológica, morfomética, imunohistoquímica e de expressão gênica (PCR em tempo real, qRT-PCR). Neste estudo, 80 ratos machos Wistar foram distribuídos em dois grupos (Biosilicato® e Biosilicato®/PLGA) e eutanaziados após 3, 7, 14 e 21 dias do processo de implantação dos materiais. Os achados principais mostraram que a incorporação do PLGA na vitrocerâmica Biosilicato® teve um efeito significativo na estrutura morfológica do material, levando a diminuição do pH e acelerando a perda de massa após incubação do material em solução tampão fosfato (PBS). Além disso, a avaliação histológica revelou que o grupo Biosilicato®/PLGA apresentou uma maior degradação do material, acompanhada pela maior formação de osso quando comparado ao grupo somente com Biosilicato® no período de 21 dias. Na analise imunohistoquímica nenhuma diferença na imunomarcação de Runx2, receptor ativador do ligante nuclear fator kappa-B e osteoprotegerina foram observadas entre o grupo Biosilicato® e Biosilicato®/PLGA. Ainda, a análise de qRT-PCR demonstrou que o grupo Biosilicato®/PLGA induziu a expressão de genes osteogênicos (proteína morfogenética óssea 4, fator de transcrição relacionado a runt-2, e osteocalcina) 21 dias após cirurgia. Diante dos resultados encontrados nos dois estudos, é possível concluir que ambos os materiais utilizados neste estudo, scaffold de Biosilicato® altamente poroso e compósito de Biosilicato® e PLGA, foram eficazes em estimular o reparo de um defeito ósseo tibial em ratos, demonstrando serem alternativas promissoras para tratamento de fraturas ósseas.

Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Consumption of food contaminated with strains of Staphylococcus aureus can cause diseases, whose signs and symptoms include gastroenteritis, nausea, vomiting, diarrhea, abdominal pain within one to six hours post-consumption of contaminated food. In this way, rapid methods of detection and identification of S. aureus are essential for food quality control and food safety. At this study, objectived to select peptide that binds to S.aureus, through the technique of Phage Display (PD), for development of fast diagnostic tools, of easy handling and low cost. At this study was used bioppaning for selection of peptides that express on the surface filamentous phage peptides that binds to S. aureus. The phage DNA selected was sequenced and subjected to in silico analysis (BioEdit v7.0.9). The sequences obtained were aligned and clones underwent pre-screening (ELISA) for the evaluation of binding specificity to S. aureus. The titles of input and output in biopanning were constant. Nine valid sequences were obtained after sequencing 40 clones selected after 3 rounds of biopanning. The analysis demonstrated that four clones presented reactivity in bacteria, although tests have demonstrated that the peptides exhibited no specific binding capacity in Staphylococcus aureus. Nevertheless, the peptide H06 showed binding specificity in gram-positive bacteria used in the test of reactivity. Furthermore, the in silico analysis showed that the recombinant peptides share chemical characteristics essential the proteins of the bacterial cells. Although the S. aureus specificity had not been observed, the peptide can be used as a method of detecting contamination of food in gram-positive bacteria. In food contamination, fast screening and identification of bacterial groups, allows establish decisions about the marketing and distribution of foods and may prevent outbreaks of food intoxication and ensure food security. / O consumo de alimentos contaminados com cepas de Staphylococcus aureus pode causar doenças, cujos sinais incluem gastroenterites, náuseas, vômitos, diarreia, dor abdominal intensa dentro de uma a seis horas após o consumo do alimento contaminado. Por esta razão, métodos rápidos de detecção de S.aureus são essenciais para o controle da qualidade e da garantia da segurança alimentar. Assim, o presente estudo teve por objetivo selecionar peptídeos ligantes à S.aureus, por meio da técnica de Phage Display (PD), para desenvolvimento de ferramentas diagnósticas rápidas, de fácil manipulação e baixo custo. Neste estudo, foi realizado bioppaning para seleção de peptídeos expressos na superfície de fagos filamentosos que apresentassem peptídeos ligantes a S.aureus. O DNA dos fagos selecionados foi sequenciado e submetido a analise in silico(BioEdit v7.0.9). As sequências obtidas foram alinhadas e os clones foram submetidos à pre-screening (ELISA) para avaliação de especificidade de ligação à S. aureus. Os títulos de entrada e saída obtidos no biopanning foram constantes. Nove sequências válidas foram obtidas após o sequenciamento dos 40 clones selecionados após 3 ciclos de biopanning. A análise de reatividade demonstrou que quatro clones apresentaram reatividade à bactéria, embora os testes de especificidade demonstraram que os peptídeos não exibiram capacidade de ligação específica a S. aureus. Apesar disto, o peptídeo E06 mostrou especificidade de ligação a bactérias do gênero Staphylococcus usadas no teste de reatividade. Além disso, as análises in sílico revelaram que os peptídeos recombinantes compartilham características químicas essenciais a proteínas das bactérias. Embora a especificidade a S.aureus não tenha sido observada, neste estudo o peptídeo pode ser utilizado como um método de detecção a contaminação de alimentos por estafilococos. Nas contaminações de alimentos, a triagem rápida e métodos de identificação de grupos bacterianos permitem estabelecer decisões sobre a comercialização e distribuição e podem prevenir um surto de intoxicação, garantindo a segurança alimentar. / Mestre em Biologia Celular e Estrutural Aplicadas

In cattles, most of pregnancy losses occurs at the beginning of gestation, notably from the 7th to the 16th day of the cycle, a period in which, the embryo depends entirely on the uterine environment to survive and to start their preimplantation growth. During this period, the embryonic death after embryo transfers performed in vitro (TE-IVP) or in vivo (TE-OM) is on average nearly twice as high as that produced by natural mating or artificial insemination (AI). The recipient sensitization against the paternal and maternal MHC molecules of allogeneic embryo might be one of the causes of high rates of pregnancy loss observed after TE. Studies in humans and in various species have pointed that the sensitization with conceptus antigens may affect the reproductive performance facilitating the recognition and the maternal acceptance of allogeneic embryo through induction of cytokyne and immunoregulatory cells in the the uterine microenvironment. The purpose of this study is to determine whether simultaneous or separate administration of paternal and maternal antigens in the uterus of the cows embryo recipientes, during the estrus, increases the expression of genes which can facilitate recognition and development of allogeneic embryos during early pregnancy. Forty-five crossbed cows were evaluated. The animals were divided in four treatments: T0: control; T1: Semen; T2: PBMCs and T3: PBMCs+Semen. The cows were estrus synchronized and received antigens in the uterine body on the estrus day. Uterine biopsies were collected in vivo on D0 for control, and after seven (D7) and fourteen (D14) days after the estrus and administration of antigens in order to evaluate the treatment effect on the uterine environment of the receiving at the moment of the anovoluation procedure would occur in TE-IVP, and during the period in which the bovine embryo would have their preimplantation growth, respectively. The gene expression was evaluated in real time PCR, and then transcribed from FOXP3, IDO, IL-10 and CSF-1 were detected in all RNA samples extracted from uterine biopsies. Semiquantitative analyses of relative gene expression among the control and the treat groups demonstrated that none of the treatments significantly incresed those gene expressions. Furthermore, at D14 all the treatments leaded to a decline in amount CSF-1 transcripts and, further, treatment with both antigens also to a drop in the abundance of IL-10 transcripts. In conclusion, the isolated or simultaneous antigens admnistration in the in the uterus of IVP embryo recipient cows seems not to increase the maternal tolerance to alloantigens embryo nor benefit conditions for their growth and preimplantation development, at least with regard to the effect mediated by FOXP3, IDO, IL- 10 and CSF-1 on D7 and D14 in the estrous cycle. / A maioria das perdas gestacionais em bovinos acontece no início da gestação, particularmente entre os dias 7 e 16, período no qual o embrião é totalmente dependente do ambiente uterino para sobreviver e iniciar seu crescimento pré-implantação. Durante esse período, a mortalidade embrionária após transferência de embriões produzidos in vitro (TEPIV) ou in vivo (TE-OM) é em média quase duas vezes mais elevada do que aquela derivada de embriões originados de monta natural ou inseminação artificial (IA). A sensibilização da receptora contra as moléculas MHC paternas e maternas do embrião alogênico pode ser uma das causas das altas taxas de perdas gestacionais observadas após TE. Estudos realizados em humanos e em várias espécies têm demonstrado que a sensibilização com antígenos do concepto pode ser uma maneira útil de afetar o desempenho reprodutivo facilitando o reconhecimento e a aceitação materna do embrião alogênico através da indução de citocinas e células imunorregulatórias no microambiente uterino. Nesse sentido, o presente estudo teve como foco principal determinar se a administração simultânea ou isolada de antígenos paterno e materno no útero de fêmeas bovinas receptoras de embrião PIV, no dia do estro, aumenta a expressão de genes que podem facilitar o reconhecimento e desenvolvimento do embrião alogênico durante o início da gestação. Para isto, foram utilizadas 45 vacas cruzadas divididas em 4 tratamentos: T0: controle; T1: Sêmen; T2: PBMCs e T3: PBMCs+Sêmen. As fêmeas bovinas foram sincronizadas ao estro e receberam os antígenos no corpo uterino no dia do cio (D0). Biópsias uterinas foram coletadas in vivo no D0, para controle, e 7 (D7) e 14 (D14) dias após o cio e a administração dos antígenos, para avaliar o efeito do tratamento no ambiente uterino da receptora no momento em que ocorreria o procedimento de anovulação em TE-PIV e durante o período no qual o embrião bovino já teria iniciado seu crescimento préimplantação, respectivamente. A expressão gênica foi avaliada por PCR em tempo real e transcritos de FOXP3, IDO, IL-10 e CSF-1 foram detectados em todas as amostras de RNA extraídas das biópsias uterinas. A análise semiquantitativa da expressão gênica relativa entre os grupos controle e tratado mostrou que nenhum dos tratamentos promoveu aumento significativo na expressão desses genes. Além disso, no D14 todos os tratamentos promoveram uma queda na quantidade de transcritos de CSF-1 e, ainda, o tratamento com ambos os antígenos também promoveu uma queda na abundância de transcritos de IL-10. Em conclusão, a administração isolada ou simultânea de ambos os antígenos no útero de vacas receptoras de embrião PIV parece não propiciar aumento da tolerância materna aos aloantígenos do embrião nem condições favoráveis a seu crescimento e desenvolvimento préimplantação, pelo menos no que se refere ao efeito mediado por FOXP3, IDO, IL-10 e CSF-1 no D7 e D14 do ciclo estral. / Mestre em Biologia Celular e Estrutural Aplicadas

Submitted by Cláudia Bueno (claudiamoura18@gmail.com) on 2015-10-26T16:54:27Z No. of bitstreams: 2 Tese - Flávia de Castro Pereira - 2014.pdf: 7274098 bytes, checksum: 2478fc770e9bfbd8ffb6361d038b525d (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-10-27T14:38:45Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Flávia de Castro Pereira - 2014.pdf: 7274098 bytes, checksum: 2478fc770e9bfbd8ffb6361d038b525d (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-27T14:38:45Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Flávia de Castro Pereira - 2014.pdf: 7274098 bytes, checksum: 2478fc770e9bfbd8ffb6361d038b525d (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2014-03-19 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The resistance acquired by some tumor cell lines retricts the use of drugs made of platinum because of Ruthenium compounds have been objects of great attention for presenting antimetastatic properties and low toxicity. Ruthenium compounds form compounds with the most different chemical binders, presenting good behavior and expanding the possibilities offor biological applications. A wide variety of coordination has enabled studies on ruthenium complexes, andseveral oxidation stages (Ru (II), Ru (III), and Ru (IV)) under physiological conditions and the rate of binder substitution. This study ranges the citotoxic activity of ruthenium (III) compound cis- Tetraammine(oxalato)Ruthenium(III) Dithionate - {Cis-[Ru(C2O4)(NH3)4]2(S2O6)} to treat human erythroleukemia (K562) tumor cell lineand the complex of ruthenium (II) coordinated a phosphine ligand and nitrile front tumor lineage S180 through the techniques of assay cell viability, assay kinetics of cell cycle phases, annexin V assay/ propidium iodide, test of mitochondrial membrane potential, test comet and gene expression through real time PCR. Both antiproliferative and cytotoxic activity revealed that K562 cells cultured with ruthenium (III) compound showed meaningful decrease in proliferation. Ruthenium(III) compound induced the IC50 value was of 18.28 μM set againts the cell cycle profiles cells not treated. Flow cytometric analysis indicated a sub-G1 arresting effect of ruthenium compound on K562 cells. Through the cell viability assay through MTT reduction technique, it was found that the complex of ruthenium (II) phosphine coordinated and nitrile presented cytotoxic activity when facing the tumor strain S180 with IC50 17.02±8.21μM and IC50 de 53.73 ± 5.71 μM for lymphocyte. When analyzing the cell cycle of tumor cells S180 treated with complex of ruthenium (II) caused increase in cells in G0/G1 and in S phase decreased. We observed an increase G2 / M. In the analysis of apoptosis assays, the results pointed that the complex ruthenium (II) induced cell death via apoptosis in tumor strain S180 as proved the increase in annexin cells V positive, depolarization of the mitochondrial membrane potential, activation of caspase 3 (Casp3) and 8 (Casp8) and increased expression levels of caspase-3 (Casp3) (mRNA), Bax (mRNA) and Tp53. The results lead to the conclusion that both complexes of ruthenium (II) and (III) induce cytotoxic activity against cell models tested, and that this activity correlates with alterations in cell cycle phases and induction of cell death via apoptosis. / Fármacos à base de cisplatina ainda são os anticancerígenos mais utilizados no mundo. Os compostos de rutênio têm sido objetos de grande atenção devido as suas propriedades antimetastática, baixa toxicidade e vários estados de oxidação (Ru (II), Ru (III) e Ru (IIV)) em condições fisiológicas. O presente trabalho teve como objetivo investigar in vitro os efeitos citotóxico e mecanismo de morte do complexo Ditionato de cis-Tetraamino(oxalato)rutênio(III) na linhagem tumoral de leucemia mielóide crônica (K562) e do complexo de rutênio (II) coordenado a ligante fosfina e nitrila [RuCl(bcn)(bipy)(dppe)]PF6, em linhagem tumoral S180 a partir das técnicas de ensaio de viabilidade celular, ensaio de cinética das fases do ciclo celular, ensaio anexina V/Iodeto de Propídeo, ensaio de potencial de membrana mitocondrial e expressão gênica por PCR em tempo real. Os resultados mostraram que o complexo de rutênio (III) provoca uma significativa redução na proliferação de células K562. O complexo de rutênio (III) induziu uma IC50 =18,28 μM. A análise por citometria de fluxo indicou um efeito sub-G1 dos complexos de rutênio sobre células de K562. O composto provocou um aumento de dano significativo nas células em todas as concentrações testadas em comparação ao controle negativo, o que pode ser associado à citotoxicidade com efeito direto sobre o DNA das células de K562. A partir do ensaio de viabilidade celular pela técnica de redução do MTT, verificou-se que o complexo de rutênio (II) coordenado a fosfina e nitrila apresentou atividade citotóxica frente à linhagem tumoral S180 com IC50 17,02±8,21μM e IC50 de 53,73 ± 5,71 para linfócito. Na análise do ciclo celular de células tumorais S180 tratadas com o complexo de rutênio (II), casou indução de G0/G1, fase S e G2/M. Na análise dos ensaios de apoptose, os resultados demonstraram que o complexo de rutênio (II) induziu morte celular via apoptose na linhagem tumoral S180, como evidenciado pelo aumento no número de células anexina V positivo, despolarização do potencial de membrana mitocondrial, ativação das caspase 3 (Casp3) e 8 (Casp8) e aumento dos níveis de expressão de caspase-3 (Casp3) (mRNA), Bax (mRNA) e Tp53 . A partir dos resultados conclui-se que ambos os complexos de rutênio (II) e (III) induzem atividade citotóxica frente aos modelos de células testadas, sendo que a atividade está correlacionada às alterações nas fases do ciclo celular e indução de morte celular via apoptose.

Submitted by Marlene Santos (marlene.bc.ufg@gmail.com) on 2017-09-29T19:13:24Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - William Andrés López Arboleda - 2015.pdf: 1579315 bytes, checksum: 378fd0e65f3b2919d56630143950ed75 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-10-02T13:35:40Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - William Andrés López Arboleda - 2015.pdf: 1579315 bytes, checksum: 378fd0e65f3b2919d56630143950ed75 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-02T13:35:40Z (GMT). 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To evaluate the fungicide sensitivity a cell viability test based on the alamarBlue dye using mycelial growth was standardized. Dose-response curves for fluazinam, procymidone and benomyl were estimated using this test and were compared with dose-response curves estimated by the mycelial growth inhibition on PDA plate and the FRAC (Fungicide Resistance Action Committee) protocol. Despite the differences to assess the fungicide sensitivity between the three methods, the dose-response curves showed similar trends for the three fungicides. The fungicide sensitivity assessment at the four populations showed low sensitivity to benomyl in the Planaltina population. Furthermore, this population presented a principally clonal population structure, with a haplotype represented by 18 out of 20 isolates. Significant population differentiation in all pairwise comparisons of phi, except the comparison between EV_2013-NH, was detected. Five genetically homogeneous groups were inferred by the DAPC analysis. No group was conformed by isolates from the four populations. Only two haplotypes between the two populations from the same sampling location were shared. The hypothesis of random mating was rejected at the four populations; however this hypothesis was not rejected at the two major populations inferred by the DAPC analysis. The screening of mating type locus showed a dominance of Inv+ isolates and a high proportion of Inv+/Inv- isolates (presumable heterokaryons). / Sclerotinia sclerotiorum é um fungo fitopatogênico capaz de colonizar mais de 400 hospedeiras, sendo o agente causal do mofo branco no feijoeiro. Estudos de variabilidade genética associados a características fenotípicas de interesse agronômico, como a sensibilidade a fungicidas, oferecem informações importantes para direcionar estratégias de controle sobre este patógeno. Os objetivos deste trabalho foram avaliar a variabilidade genética, sensibilidade a fungicidas e agressividade de 79 isolados de S. sclerotiorum distribuídos em quatro populações procedentes de culturas de feijoeiro em pivô central. Duas destas populações representaram um único local de coleta em duas épocas diferentes (2000 e 2013). Para avaliar a sensibilidade a fungicidas foi padronizado um teste de viabilidade celular baseado no corante alamarBlue® sobre o crescimento micelial em microplaca de 96 poços. Curvas de dose-resposta para os fungicidas fluazinam, procimidona e benomyl, usando um isolado de S. sclerotiorum, foram estimadas com este método, e comparadas com curvas de dose-resposta obtidas com os métodos de inibição do crescimento em placa e o proposto pelo Fungicide Resistance Action Committee (FRAC). Apesar das diferentes abordagens as curvas dose-resposta mostraram tendências semelhantes para os três fungicidas. A avaliação da sensibilidade a fungicidas nas quatro populações indicou uma alta insensibilidade ao benomyl na população de Planaltina. Por outro lado, a estrutura populacional foi principalmente clonal com um haplótipo representado por 18 dos 20 isolados desta população. Diferenciação populacional significativa foi detectada em todas as comparações par a par do phi, com a exceção da comparação EV-2013-NH. A analise DAPC identificou cinco grupos geneticamente homogêneos. Nenhum dos grupos esteve constituído por isolados das quatro populações. Só dois haplótipos foram compartilhados pelas populações EV_2000 e EV_2013. A hipótese de acasalamento aleatório foi rejeitada nas quatro populações, no entanto não foi rejeitada nas duas maiores populações sugeridas pelo DAPC. O screening do Mating type locus (MAT) mostrou uma prevalência de isolados Inv+ e uma alta proporção de isolados Inv+/Inv-

Submitted by Marlene Santos (marlene.bc.ufg@gmail.com) on 2016-12-20T16:28:52Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Juliana Macêdo Silvestre - 2015.pdf: 815128 bytes, checksum: 3bea2ad6d4ab6f0e783b901523c0d838 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-12-26T14:12:10Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Juliana Macêdo Silvestre - 2015.pdf: 815128 bytes, checksum: 3bea2ad6d4ab6f0e783b901523c0d838 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-26T14:12:10Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Juliana Macêdo Silvestre - 2015.pdf: 815128 bytes, checksum: 3bea2ad6d4ab6f0e783b901523c0d838 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2015-05-29 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The Cerrado is a biome that occupies about 25% of Brazilian territory. The seasonality, hot-humid and cold-dry periods, is one of the most striking features of the Cerrado. Reduced rainfall reduces the availability of water in the surface layers of the soil and increases the evaporative demand of air leading to the formation of litter cooperating in cycling soil nutrients. Another important factor in the Cerrado is the occurrence of fires that influence the dispersion, bloom, sprouting and diversity of certain species of plants. The relationship between seasonality, low fertility of soils and naturally occurring fires has shaped vegetative and reproductive strategies of plants from the Cerrado biome. Ichthyothere terminalis (Spreng.) Blake Asteraceae species occurring in the Cerrado, accumulates large amounts of fructans in the underground organs as reserve carbohydrates. Fructans are fructose polymers which are synthesized by the enzymes 1-SST (sucrose: sucrose fructosyltransferase) and FFT (fructan: fructan fructosyltransferase) and depolymerized by 1-FEH (exohidrolase fructan) and invertase. This study investigated the effect of freezing in the production of the enzymes 1-SST, 1-FEH and Invertase in I. terminalis. The partial characterization of these enzymes was performed. The samples were frozen immediately after collection (EB2) or after 6 hours of transport to the laboratory (EB1). The highest amount of protein was found in EB1 (97.81 μg.mL-1) as compared to EB2 (11,90 μg.mL-1). The results showed that the extraction method was efficient, since there was a significant reduction in reducing sugars and the activity of enzymes 1-SST, 1-FEH and Invertase were detected, mainly in the EB1. Enzymes 1-SST and Invertase showed a pH optimum between pH 6 and 7, while the 1-FEH enzyme had a greater spectrum ranging from pH 5 to 7. The three enzymes had an optimum temperature in the range 40 to 50 (°C). This work represents an important step towards understanding the role of these enzymes in the fructan metabolism in I. terminalis. / O Cerrado é um bioma que ocupa cerca de 25% do território brasileiro. A sazonalidade climática, períodos quente-úmido e frio-seco, é uma das características mais marcantes do Cerrado. A redução pluviométrica diminui a disponibilidade de água nas camadas superficiais do solo e eleva a demanda evaporativa do ar levando a formação de serrapilheira que coopera na ciclagem de nutrientes do solo. Outro fator importante no Cerrado é a ocorrência de queimadas que influenciam na dispersão, floração, rebrota e diversidade de certas espécies de plantas. A relação entre sazonalidade climática, baixa fertilidade dos solos e ocorrência natural de queimadas tem moldado estratégias vegetativas e reprodutivas das plantas do bioma Cerrado. Ichthyothere terminalis(Spreng.) Blake, espécie da família Asteraceae ocorrente no Cerrado, acumula grandes quantidades de frutanos em seus órgãos subterrâneos como carboidratos de reserva. Os frutanos são polímeros de frutose sintetizados pelas enzimas 1-SST (sacarose: sacarose frutosiltransferase) e FFT (frutano:frutano frutosiltransferase) e despolimerizados pela 1-FEH (frutano exohidrolase) e invertase. O presente trabalho objetivou estudar o efeito do tempo de congelamento na produção das enzimas 1-SST, 1-FEH e Invertase em I. terminalis. Além disso, a caracterização parcial destas enzimas foi realizada. As amostras coletadas foram congeladas imediatamente após a coleta (EB2) ou após 6 horas de transporte até o laboratório (EB1). A análise da quantidade de proteína extraída mostrou que EB1 apresentou maior quantidade de proteínas (97,81 μg.mL-1) quando comparada com EB2 (11,90 μg.mL-1). O método de extração foi eficiente, pois houve uma redução significativa em açúcares redutores e a atividade das enzimas 1-SST, 1-FEH e Invertase foram detectadas, principalmente no EB1. As enzimas 1-SST e Invertase apresentaram um pH ótimo entre pH 6 e 7, ao passo que a enzima 1-FEH teve um espectro maior variando de pH 5 a 7. As três enzimas apresentaram uma temperatura ótima na faixa de 40 a 50 (°C). Este trabalho representa um passo importante para o entendimento do papel destas enzimas no metabolismo de frutanos em I. terminalis.

Submitted by JACIARA CRISTINA ALMEIDA DO AMARAL (jaciaramaral@ufpa.br) on 2018-05-09T16:37:54Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) DISSERTAÇÃO SILVIA MARIA MACHADO DA ROCHA.pdf: 1171835 bytes, checksum: 4a1062089a3e3193881755deba885339 (MD5) / Approved for entry into archive by JACIARA CRISTINA ALMEIDA DO AMARAL (jaciaramaral@ufpa.br) on 2018-05-09T16:39:13Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) DISSERTAÇÃO SILVIA MARIA MACHADO DA ROCHA.pdf: 1171835 bytes, checksum: 4a1062089a3e3193881755deba885339 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-09T16:39:13Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) DISSERTAÇÃO SILVIA MARIA MACHADO DA ROCHA.pdf: 1171835 bytes, checksum: 4a1062089a3e3193881755deba885339 (MD5) Previous issue date: 2018-02-28 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O câncer do colo do útero (CCU), de grande importância para saúde pública, sendo considerado o 4º tipo de câncer que mais acomete mulheres no mundo, possui como principal fator de risco infecções por papilomavírus humanos (HPVs). Aproximadamente 70% de mulheres com câncer de colo de útero encontram-se em regiões menos desenvolvidas, o que demonstra uma relação socioeconômica. Os papilomavírus pertencem à família Papillomaviridae, que abrangem mais de 40 gêneros, dos quais cinco são compostos de HPVs, com pelo menos 200 espécies já descritas associadas a infecções humanas. Estes vírus são envelopados, esféricos e possuem como genoma DNA de fita dupla. Os HPVs possuem tropismo por células epiteliais e infecções persistentes podem levar a transformações intraepiteliais progressivas com evolução para lesões precursoras do câncer cervical, e por fim câncer. A infecção por HPV é a infecção sexualmente transmissível (IST) mais comum em todo o mundo e a maioria das pessoas sexualmente ativas, homens e mulheres, terá contato com o vírus durante algum momento da vida. No presente estudo foram analisados o perfil citopatológico de pacientes atendidas em uma Unidade de Referência Secundária em Câncer Ginecológico do município de Belém/PA e a atividade do ácido caurenoico contra linhagens de câncer cervical. Para tanto houve a identificação do perfil dos achados microbiológicos e citopatológicos nos exames realizados pelo laboratório da Casa da Mulher, durante o período de um ano, sendo utilizados dados de 2.202 exames preventivos de câncer de colo de útero (PCCU), apresentando fraca correlação entre faixa etária e frequência de achados microbiológicos e alterações patológicas. Já os achados microbiológicos, apresentaram a presença de três espécies: Gardnerella vaginalis (23,48%), Candida sp. (12,44%) e Trichomonas vaginalis (0,68%). A prevalência de anormalidades citológicas correspondeu a 5,72%. As atipias celulares de significado indeterminado a 2,679%, e a proporção total das lesões neoplásicas potencialmente malignas foi de 1,09%. O aumento da cobertura de PCCU na população feminina precisa ser alcançado e a promoção da saúde deve ser efetivada por meio de parcerias intersetoriais, participação popular e responsabilização coletiva pela qualidade de vida. Já a avaliação do efeito genotóxico e mutagênico do ácido caurenoico (AC) em linhagens de câncer cervical foi realizada com a utilização de linhagens HeLa (HPV18-positivo), CaSki (HPV16-positivo) e C33A (HPV-negativo), sendo que o AC mostrou forte correlação positiva com os indicadores de genotoxicidade avaliados. Em concentrações elevadas, inibiu a expressão dos genes E6 e E7 de HPV, que interferem na regulação do ciclo celular. E, mesmo sendo observados efeitos genotóxicos, os ensaios apontaram para possibilidade do uso do AC como matéria-prima de agentes terapêuticos para câncer cervical com presença de HPV, assim como em pesquisas futuras sobre as funções de E6 e E7. / Cervical cancer (CC), which is of great importance for public health, is considered to be the 4th most common type of cancer in the world. Human papillomavirus (HPV) infections are the main risk factor. Approximately 70% of women with CC are in less developed regions, demonstrating a socioeconomic relationship. Papillomavirus belong to the family Papillomaviridae, with more than 40 genera, of which five are composed of HPVs, with at least 200 species already described associated with human infections. These virus are enveloped, spherical and have a double-stranded DNA genome. HPVs have tropism by epithelial cells and persistent infections can lead to progressive intraepithelial transformations with evolution to precursor lesions of cervical cancer, and finally cancer. HPV infection is the most common sexually transmitted infection in the world, and most sexually active people, men and women, will have contact with the virus at some point in their lives. In the present study, the cytopathological profile of patients treated at a Secondary Reference Unit in Gynecological Cancer of the city of Belém / PA and the activity of caurenoic acid against cervical cancer lines were analyzed. The profile of the microbiological and cytopathological findings was verified in the examinations carried out by the Casa da Mulher laboratory during a period of one year, using data from 2,202 cervical cancer preventive exams (PCCU), showing a weak correlation between age range and frequency of microbiological findings and pathological alterations. The microbiological findings were the presence of three species: Gardnerella vaginalis (23.48%), Candida sp. (12.44%) and Trichomonas vaginalis (0.68%). The prevalence of cytologic abnormalities corresponded to 5.72%. Atypia cells of undetermined significance corresponded to 2.679%, and the total proportion of potentially malignant neoplastic lesions was 1.09%. The increase in PCCU coverage in the female population needs to be achieved and health promotion must be effected through intersectoral partnerships, popular participation, and collective accountability for quality of life. On the other hand, the evaluation of the genotoxic and mutagenic effect of caurenoic acid (CA) in cervical cancer lines was performed using HeLa (HPV18-positive), CaSki (HPV16-positive) and C33A (HPV-negative). AC showed a strong positive correlation with the genotoxicity indicators evaluated. At high concentrations, it inhibited the expression of E6 and E7 HPV genes, which interfere with cell cycle regulation. Although genotoxic effects were observed, the assays pointed to the possibility of using CA as feedstock for therapeutic agents against cervical cancer with HPV, as well as future research on E6 and E7 functions.

Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2013-12-02T21:34:00Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Tese_EfeitoVitroVivo.pdf: 5802069 bytes, checksum: 7ec5a54fccb965785920a808771c4c3c (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva(arosa@ufpa.br) on 2013-12-06T16:50:16Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Tese_EfeitoVitroVivo.pdf: 5802069 bytes, checksum: 7ec5a54fccb965785920a808771c4c3c (MD5) / Made available in DSpace on 2013-12-06T16:50:17Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Tese_EfeitoVitroVivo.pdf: 5802069 bytes, checksum: 7ec5a54fccb965785920a808771c4c3c (MD5) Previous issue date: 2013 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / As leishmanioses são um grupo de doenças infecciosas distribuídas mundialmente. A quimioterapia é o tratamento mais eficaz para a doença; apesar do grande número de drogas antileishmania disponíveis, são usualmente tóxicas, caras e requerem um longo período de tratamento. Portanto, torna-se necessária a busca de novas substâncias que sejam capazes de atuar sobre o protozoário sem causar danos ao hospedeiro, que tenham uma via de administração não invasiva e que, ainda, sejam viáveis economicamente. O ácido kójico, ou 5-hidroxi-2-hidroximetil-γ-pirona (HMP), é conhecido por inibir a enzima tirosinase no processo de produção da melanina, sendo extensivamente utilizado em cosméticos e também como tratamento tópico para melasma, não havendo citotoxicidade em humanos; entretanto, o potencial do HMP como agente antileishmania não é conhecido. O presente estudo analisou o efeito deste bioproduto em infecções por L. amazonensis in vitro e in vivo. O HMP promoveu a diminuição do crescimento de promastigotas e amastigotas em 62% (IC₅₀ 34μg/mL) e 79% (IC₅₀ 27,84 μg/mL) in vitro, respectivamente. A análise ultraestrutural de ambas as formas evolutivas tratadas com 50 μg/mL do HMP apresentaram corpos vesiculares no interior da bolsa flagelar, induziu uma intensa vacuolização intracelular bem como alterações mitocondriais. O estudo in vitro também demonstrou que o HMP foi capaz de reverter o efeito inibitório causado pela L. amazonensis no que diz respeito à produção de radicais de oxigênio. A análise histopatológica de lesões proveniente de animais submetidos ao tratamento tópico com o HMP demonstrou que o tecido apresentou um intenso processo de cicatrização. Além disso, fibras colágenas foram encontradas de maneira organizada no local da infecção de animais tratados, com um pequeno infiltrado celular e diminuição do número de parasitos. Tendo em vista a ação seletiva do HMP in vitro, o processo de ativação da célula hospedeira pelo bioproduto e a diminuição do número de parasitos observados durante o tratamento com a pomada, e pelo fato do HMP ser amplamente utilizado como agente antimelasma em humanos, esse metabólito pode ser promissor como tratamento tópico contra a Leishmaniose cutânea e apresentando grande potencial como agente leishmanicida. / Leishmaniasis includes a group of infectious diseases with worldwide distribution. Chemotherapy is one of the most effective treatments for this disease; although a number of anti-leishmanial drugs are available, these drugs are in general toxic, expensive and require long-term treatment. Kojic acid, or 5-hydroxy-2-hydroxymethyl-γ-pyrone (HMP), is well known for effectively inhibiting the tyrosinase enzyme in the process of melanin biosynthesis and is extensively used in cosmetics and as a topical treatment for melasm with no cytotoxicity observed in humans; however its potential as anti-leishmanial agent are unknown. The present study was designed to determine the effect of this bioproduct on L. amazonensis, following in vitro and in vivo infections. HMP (50μg/mL) was found to decrease the growth by 62% (IC₅₀ 34 μg/mL) and 79% (IC₅₀ 27.84 μg/mL) of promastigotes and amastigotes in vitro, respectively. Ultrastructural analysis of both evolutive forms showed that HMP increasing the presence of vesicles bodies into the flagellar pocket, and inducing an intense intracellular vacuolization and swelling of the mitochondrion. In vitro study also demonstrated that HMP is able to reverse ROS inhibitory mechanism promoted by L. amazonensis observed by nitroblue tetrazolium reaction. Histopathologycal analysis of in vivo topical treatment with HMP ointment showed healing process and suppressed ulcer dissemination in animal model. In addition, collagen fibers stained by picrosirus red, were found at the infection site of HMP-treated animals and an absence or low-level cellular infiltrate was observed, as well as a decrease in parasite burden. In view of the in vitro selective action of HMP on leishmania parasites, the activation of host cells and in vivo decrease in parasite burden, observed using HMP ointment, as well as the fact that HMP is widely and safely applied as an antimelasm agent in humans, this compound could be useful for the selective treatment of cutaneous leishmaniasis and may hold great potential as an anti-leishmanial agent.